Dankie dat jy Nature.com besoek het. Die blaaierweergawe wat jy gebruik het beperkte ondersteuning vir CSS. Vir die beste ervaring, beveel ons aan dat jy 'n opgedateerde blaaier gebruik (of versoenbaarheidsmodus in Internet Explorer afskakel). Intussen, om volgehoue ​​ondersteuning te verseker, sal ons die werf sonder style en JavaScript vertoon.
Poreuse silika deeltjies is voorberei deur 'n sol-gel metode met 'n paar modifikasies om makroporeuse deeltjies te verkry. Hierdie deeltjies is gederivatiseer deur omkeerbare addisie fragmentering ketting oordrag (RAFT) polimerisasie met N-fenylmaleïmied-metielvinielisosianaat (PMI) en stireen om N-fenielmaleïmied fase te berei om N-fenielmaleïmied-fase-interkalasie (PMP) stasie-boor-staal-staal (PMP) stasielose polistireen-fase-interkalasie (PMP) te berei. 1.8 mm id) is verpak deur suspensieverpakking. Geëvalueerde PMP-kolomskeiding van 'n peptiedmengsel bestaande uit vyf peptiede (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkefalien) chromatografiese toestande van die menslike serlupsie (US, chromatografiese toestande en chromatografiese werkverrigting van die mens (US). teoretiese plaattelling van die peptiedmengsel is so hoog as 280 000 plate/m². In vergelyking van die skeidingsprestasie van die ontwikkelde kolom met die kommersiële Ascentis Express RP-Amide-kolom, is waargeneem dat die skeidingsprestasie van die PMP-kolom beter was as die kommersiële kolom in terme van skeidingsdoeltreffendheid en resolusie.
In onlangse jare het die biofarmaseutiese industrie 'n groeiende globale mark geword met 'n aansienlike toename in markaandeel.Met die plofbare groei van die biofarmaseutiese industrie1,2,3 is die ontleding van peptiede en proteïene hoogs gewens. Benewens die teikenpeptied word verskeie onsuiwerhede tydens peptiedsintese gegenereer, wat dus die gewenste chromatografiese suiwering van proteïene en vloeistowwe vereis om chromatografiese proteïen-analise van weefsel te verkry. s en selle is 'n uiters uitdagende taak as gevolg van die groot aantal potensieel waarneembare spesies in 'n enkele monster.Alhoewel massaspektrometrie 'n doeltreffende hulpmiddel vir peptied- en proteïenvolgordebepaling is, as sulke monsters in een pas in die massaspektrometer ingespuit word, sal die skeiding nie ideaal wees nie.Hierdie probleem kan versag word deur die implementering van die vloeibare analise en ontleding van die massaspektrometer, wat die massa-ontleding van die vloeibare chromate sal verminder. op 'n gegewe tydstip4,5,6.Daarbenewens kan analiete tydens vloeistoffaseskeiding in nou streke gefokus word, waardeur hierdie analiete gekonsentreer word en MS-deteksie sensitiwiteit verbeter.Vloeistofchromatografie (LC) het aansienlik gevorder oor die afgelope dekade en het 'n gewilde tegniek in proteomiese analise7,8,9,10 geword.
Omgekeerde-fase vloeistofchromatografie (RP-LC) word wyd gebruik vir die suiwering en skeiding van peptiedmengsels deur gebruik te maak van oktadecyl-gemodifiseerde silika (ODS) as die stasionêre fase11,12,13. RP-stasionêre fases verskaf egter nie bevredigende skeiding van peptiede en proteïene nie as gevolg van hul komplekse aard struktuur en 14,1 stasie-fiele fase struktuur,14,1 stasie is spesiaal ontwerp vir peptied. om peptiede en proteïene met polêre en nie-polêre dele te ontleed om met hierdie analiete te reageer en te behou16. Gemengde-modus chromatografie, wat multimodale interaksies verskaf, kan 'n alternatief vir RP-LC vir die skeiding van peptiede, proteïene en ander komplekse mengsels wees. 9,20,21. Gemengde-modus-stasionêre fases (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polêre interkalasie/RPLC) is geskik vir peptied- en proteïenskeidings as gevolg van die teenwoordigheid van beide polêre en nie-polêre groepe22,23,24,25,26,27,28 .Soortgelyke, geskei- en polêre bindingsgroepe toon unieke en polêre bindingskrag polêre en nie-polêre analiete, aangesien skeiding afhang van die interaksie tussen analiet en stasionêre fase.Multimodale interaksies 29, 30, 31, 32. Onlangs het Zhang et al.30 het 'n dodesiel-getermineerde poliamien-stasionêre fase voorberei en koolwaterstowwe, antidepressante, flavonoïede, nukleosiede, estrogene en verskeie ander analiete suksesvol geskei. Die polêre interkalator het beide polêre en nie-polêre groepe, dus kan dit gebruik word om peptiede en proteïene te skei wat beide hidrofobiese en hidrofiele-kolom-emmede (bv. ) is kommersieel beskikbaar onder die handelsnaam Ascentis Express RP-Amide-kolomme, maar hierdie kolomme word slegs vir die ontleding van amien 33 gebruik.
In die huidige studie is 'n polêr ingebedde stasionêre fase (N-fenielmaleïmied-ingebedde polistireen) voorberei en geëvalueer vir die skeiding van peptiede en tripsienverteerders van HSA. Die stilstaande fase is voorberei deur die volgende strategie te gebruik. Poreuse silikadeeltjies is voorberei volgens die prosedure wat in ons vorige publikasie gegee is, met 'n paar modifikasies, (Die verhouding van protokolle, EG en die protokol van EG, EG). , is waterasynsuur aangepas om silikadeeltjies met groot poriegrootte voor te berei. Tweedens is 'n nuwe ligand, fenielmaleïmied-metielvinielisosianaat, gesintetiseer en gebruik om silikapartikels te derivatiseer om 'n polêre ingebedde stilstaande fase voor te berei. Die resulterende stilstaande fase is in 'n vlekvrye staalkolom gepak met behulp van die 180 mm-kolom met behulp van geoptimaliseerde pakking (180 mm). meganiese vibrasie om te verseker dat 'n homogene bed binne die kolom gevorm word. Evalueer gepakte kolomskeiding van peptiedmengsels wat uit vyf peptiede bestaan;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) en Trypsienvertering van menslike serumalbumien (HAS). Daar is waargeneem dat die peptiedmengsel en tripsienvertering van HSA skei met goeie resolusie en doeltreffendheid. en proteïene is waargeneem om goed opgelos en doeltreffend te wees op die PMP-kolom, wat meer doeltreffend was as die Ascentis Express RP-Amide-kolom.
PEG (poliëtileenglikol), ureum, asynsuur, trimetoksi-ortosilikaat (TMOS), trimetielchlorosilaan (TMCS), trypsien, menslike serumalbumien (HSA), ammoniumchloried, ureum, heksaan metieldisilazaan (HMDS), metakriloielchloried (MC, hidroksied, sterien, 4-teen, steurstof, steurstof, karbonaat), trile (ACN), metanol, 2-propanol en asetoon gekoop van Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, VSA).
'n Mengsel van ureum (8 g), poliëtileenglikol (8 g) en 8 ml 0,01 N asynsuur is vir 10 minute geroer, en dan is 24 ml TMOS onder yskoue toestande daarby gevoeg. Die reaksiemengsel is vir 6 uur by 40°C verhit en daarna by 120 ure in 'n waterafgekoelde materiaal is die staalresidu vir 8 uur gedroog. d by 70°C vir 12 uur. Die gedroogde sagte massa is glad gemaal in 'n oond en vir 12 uur by 550°C gekalsineer. Drie bondels is voorberei en gekarakteriseer om reproduceerbaarheid in deeltjiegrootte, porieëgrootte en oppervlakarea te ondersoek.
Deur oppervlakmodifikasie van silikapartikels met vooraf gesintetiseerde ligand fenielmaleïmied-metielvinielisosianaat (PCMP) gevolg deur radiale polimerisasie met stireen, is 'n polêre groep-bevattende verbinding voorberei.Stasionêre fase vir aggregate en polistireenkettings. Die voorbereidingsproses word hieronder beskryf.
N-fenielmaleïmied (200 mg) en metielvinielisosianaat (100 mg) is in droë tolueen opgelos, en 0,1 ml 2,2'-azoisobutyronitrile (AIBN) is by die reaksiefles gevoeg om fenielmaleïmied-metielvinielisosianaat-kopolimeer vir 3 uur gefiltreer en 0,0 uur gefiltreer. d in oond by 40°C vir 3 uur.
Gedroogde silika-deeltjies (2 g) is in droë tolueen (100 ml) gedispergeer, geroer en gesoniceer in 'n 500 ml rondbodemfles vir 10 min. PMCP (10 mg) is opgelos in tolueen en druppelsgewys by die reaksiefles gevoeg via 'n druppeltregter. °C vir 3 uur. Daarna is PMCP-gebonde silika-deeltjies (100 g) in tolueen (200 ml) opgelos en 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) is bygevoeg in die teenwoordigheid van 100 µL dibutieltindilauraat as 'n katalisator. Die mengsel is by 50°C vir 3 uur geroer, gefiltreer en gedroog vir 3 uur.
Styreen (1 mL), benzoylperoksied BPO (0.5 mL), en TEMPO-PMCP-gehegte silika-deeltjies (1.5 g) is in tolueen gedispergeer en met stikstof gespoel. Die polimerisasie van styreen is vir 12 uur by 100°C uitgevoer. Die gevolglike produk is met etanol gewas en oornag in metanol gewas. Die reaksieskema1 is oornag gedroog.
Die monsters is vir 1 uur by 393 K ontgas om 'n resdruk van minder as 10-3 Torr te verkry. Die hoeveelheid N2 wat by 'n relatiewe druk van P/P0 = 0.99 geadsorbeer is, is gebruik om die totale porievolume te bepaal. Die morfologie van kaal en ligand-gebonde silikapartikels is ondersoek met skandeerelektronenmikroskopies (High-monster, Japan en Japan). ed silika-deeltjies) is op 'n aluminiumkolom geplaas deur gebruik te maak van kleefkoolstofband. Goud is op die monsters geplaat met 'n Q150T-verstuiverbedekking, en 'n 5 nm Au-laag is op die monsters neergelê. Dit verbeter prosesdoeltreffendheid deur lae spannings te gebruik en verskaf fynkorrel, koue sputtering.A Thermo Electron (Waltham analise) is gebruik vir element, MAWaltham, 1 Flash-element, MAWaltham analise (1, MAW1). orcestershire, VK) Mastersizer 2000 deeltjiegrootte-analiseerder is gebruik om die deeltjiegrootteverspreiding te verkry.Naakte silikadeeltjies en ligandgebonde silikadeeltjies (5 mg elk) is in 5 mL isopropanol gedispergeer, vir 10 minute gesoniceer, vir 5 minute gevorteks, en op die Meester-pergraveerbank van 'n 5 minute gedraai en op die optiese pergravisatorbank van °C 5 minute geplaas. 'n temperatuurreeks van 30 tot 800 °C.
Glas-gevoerde vlekvrye staal smalboor kolomme met afmetings (100 × 1.8 mm id) is gepak deur gebruik te maak van die suspensie pakking metode, met die toepassing van dieselfde prosedure wat in Verw.31. 'n Vlekvrye staalkolom (met glas uitgevoer, 100 × 1.8 mm id) met 'n uitlaatstuk wat 'n 1 µm-frit bevat, is aan 'n suspensiepakker (Alltech Deerfield, IL, VSA) gekoppel. Berei 'n stilstaande-fase-suspensie voor deur 150 mg stilstaande fase van die oplosmiddel in die oplosmiddel op te skort en metanol as die stoor-metanol in die kolom te suspendeer. as die voortstuwingsoplosmiddel.Vul die kolom opeenvolgend deur drukke van 100 MP vir 10 minute, 80 MP vir 15 minute, en 60 MP vir 30 minute toe te pas.Dis tydens die pakking, is meganiese vibrasie toegepas met twee GC-kolomskuders (Alltech, Deerfield, IL, VSA) om eenvormige pakking van die kolom te verseker en die pakking van die kolom stadigaan te koppel en te verhoed dat die skade stadig van die kolom losgemaak word. die flodderverpakkingseenheid en koppel nog 'n toebehore aan die inlaat en aan die LC-stelsel om sy werkverrigting na te gaan.
'n LC-pomp (10AD Shimadzu, Japan), inspuiter (Valco (VSA) C14 W.05) met 50nL inspuitlus, membraanontgasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapillêre venster is gebou. Spesiale µLC toestel detektor (UV-2075) en verbind die buise met 'n baie kort buise-effek en min. bandverbreding.Na verpakking is kapillêre (50 μm id 365 en reduserende unie-kapillêre (50 μm) by die 1/16″-uitlaat van die reducerende unie geïnstalleer. Data-insameling en chromatografiese verwerking is gedoen met behulp van Multichro 2000-sagteware. Monitering by 254-data is geabsorbeer deur 254 geabsorbeer. (Northampton, MA).
Albumien van menslike serum, gevriesdroogde poeier, ≥ 96% (agarosegelelektroforese) 3 mg gemeng met tripsien (1.5 mg), 4.0 M ureum (1 ml) en 0.2 M ammoniumbikarbonaat (1 ml). Die oplossing is vir 10 minute geroer en in 'n waterbad van 1 ml 7°C gehou vir 100°C vir 100 ml. TFA. Filtreer die oplossing en stoor onder 4 °C.
Skeiding van peptiedmengsels en HSA tripsienverteerders is afsonderlik op PMP-kolomme geëvalueer. Gaan die skeiding van die peptiedmengsel en tripsienverteringsmiddel van HSA deur die PMP-kolom na en vergelyk die resultate met die Ascentis Express RP-Amide-kolom. Die teoretiese plaatnommer word soos volg bereken:
SEM-beelde van kaal silika-deeltjies en ligand-gebonde silika-deeltjies word in FIG.2 .SEM-beelde van kaal silika-deeltjies (A, B) toon dat, in teenstelling met ons vorige studies, hierdie deeltjies sferies is waarin die deeltjies verleng is of onreëlmatige simmetrie het. Die oppervlak van die ligand-gebonde silika-deeltjies (C, D) is gladder as dié van die kaal silika-deeltjies tot die oppervlak van die silika-bedekking van die silika-bedekking van die silika-deeltjies.
Skandeer elektronmikroskoop beelde van kaal silika deeltjies (A, B) en ligand-gebonde silika deeltjies (C, D).
Die deeltjiegrootteverspreidings van kaal silikadeeltjies en ligandgebonde silikadeeltjies word in Figuur 3(A) getoon.Volumegebaseerde deeltjiegrootteverspreidingskurwes het getoon dat die grootte van die silikadeeltjies na chemiese modifikasie toegeneem het (Fig. 3A). Die deeltjiegrootteverspreidingsdata van die silikadeeltjies van die huidige studie en die vorige studie word vergelyk in P, (A d, is partikelgrootte) en die vorige studie word vergelyk in P, (A d. 3.36 μm, in vergelyking met ons vorige studie met ad(0.5) waarde van 3.05 μm (polistireengebonde silikadeeltjies)34.Hierdie bondel het 'n nouer deeltjiegrootteverspreiding in vergelyking met ons vorige studie gehad as gevolg van die variërende verhoudings van PEG, ureum, TMOS en asynsuur-deeltjies in die reaksiemengsel wat effens gebonde is. fase wat ons voorheen bestudeer het. Dit beteken dat oppervlakfunksionalisasie van silika-deeltjies met stireen slegs 'n polistireenlaag (0.97 µm) op die silika-oppervlak neergelê het, terwyl die laagdikte in die PMP-fase 1.38 µm was.
Deeltjiegrootteverspreiding (A) en poriegrootteverspreiding (B) van kaal silikadeeltjies en ligandgebonde silikadeeltjies.
Die poriegrootte, porievolume en oppervlakarea van die silika-deeltjies van die huidige studie word in Tabel 1(B) gegee. Die PSD-profiele van kaal silika-deeltjies en ligand-gebonde silika-deeltjies word in Figuur 3(B) getoon. Die resultate is vergelykbaar met ons vorige studie. Die poriegroottes van die kaal en ligand-gebonde silika-deeltjies dui aan watter porie10-grootte respektiewelik 2410 afneem. 69 na chemiese modifikasie, soos in Tabel 1(B) getoon, en die verandering van die kromme word in Fig. 3(B) getoon. Net so het die porievolume van die silikapartikels afgeneem van 0.67 tot 0.58 cm3/g na chemiese modifikasie. Die spesifieke oppervlakarea van die tans bestudeerde silikapartikels is vergelykbaar met 1,46 in m2 en 146 in die vorige studie. in staat 1(B), het die oppervlakte (m2/g) van die silika-deeltjies ook afgeneem van 116 m2/g tot 105 m2/g na chemiese modifikasie.
Die resultate van elementêre analise van die stilstaande fase word in Tabel 2 getoon. Die koolstoflading van die huidige stilstaande fase is 6.35%, wat laer is as die koolstoflading van ons vorige studie (polistireengebonde silikadeeltjies, 7.93%35 en 10.21%, onderskeidelik) 42. Die koolstoflading van die huidige stilstaande fase is lae voorbereiding van die huidige stasionêre fase, want die SP is lae voorbereiding van die huidige stilstaande fase, aangesien die polêre en polêre voorbereiding van die huidige stilstaande fase fenielmaleïmied-metielvinielisosianaat (PCMP) en 4-hidroksi-TEMPO is gebruik.Die stikstofgewig persent van die huidige stilstaande fase is 2,21%, in vergelyking met 0,1735 en 0,85% volgens gewig stikstof in vorige studies, onderskeidelik. s van produkte (4) en (5) was onderskeidelik 2,7% en 2,9%, terwyl die koolstoflading van die finale produk (6) 6,35% was, soos in Tabel 2 getoon. Die gewigsverlies is nagegaan met PMP-stasionêre fase, en die TGA-kromme word in Figuur 4 getoon. maar ook N, O en H.
Die fenielmaleïmied-metielvinielisosianaatligand is gekies vir oppervlakmodifikasie van silikapartikels omdat dit polêre fenielmaleïmiedgroepe en vinielisosianaatgroepe het. Vinielisosianaatgroepe kan verder reageer met stireen deur lewende radikale polimerisasie. Die tweede rede is om 'n groep in te voeg wat 'n matige en geen sterk interaksie tussen die analitiese fase en die elektrostatiese fase het, aangesien die analitiese fase en die analitiese fase nie ylmaleimied-deel het geen virtuele lading by normale pH nie.Die polariteit van die stilstaande fase kan beheer word deur die optimale hoeveelheid stireen en die reaksietyd van vrye radikale polimerisasie. Die laaste stap van die reaksie (vry-radikaal polimerisasie) is krities en kan die polariteit van die stilstaande fase verander.Elementanalise is uitgevoer om die koolstoflading van hierdie stilstaande fases te kontroleer en die verhoogde koolstofreaksie van die stasionêre fases en die verhoogde koolstof-reaksie van die stasionêre fases en visis was. versa.SP's wat met verskillende konsentrasies stireen voorberei is, het verskillende koolstofladings.Laai weereens hierdie stilstaande fases in vlekvrye staalkolomme en kontroleer hul chromatografiese werkverrigting (selektiwiteit, resolusie, N-waarde, ens.).Op grond van hierdie eksperimente is 'n geoptimaliseerde formulering gekies om die PMP-stasionêre fase voor te berei om beheerde polariteit en goeie analietretensie te verseker.
Vyf peptiedmengsels (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkefalien) is ook geëvalueer deur gebruik te maak van 'n PMP-kolom wat 'n mobiele fase gebruik;60/40 (v/v) asetonitriel/water (0,1% TFA) teen 'n vloeitempo van 80 μL/min. Onder optimale elueringstoestande is die teoretiese plaatgetal (N) per kolom (100 × 1,8 mm id) 20 000 ± 100 (200 000 vlakke van die MP-plate/m²T-plate en die N-plate 3) chromatogramme word in Figuur 5A getoon. Vinnige analise op 'n PMP-kolom teen 'n hoë vloeitempo (700 μL/min), vyf peptiede is binne een minuut geëlueer, N-waardes was baie goed, 13 500 ± 330 per kolom (100 × 1,8 mm id), stem ooreen met 5 plaatgroottes, 0,5 m, identies. (100 × 1.8 mm id) is gepak met drie verskillende lotte PMP-stasionêre fase om reproduceerbaarheid te kontroleer. Die analietkonsentrasie vir elke kolom is aangeteken deur gebruik te maak van die optimale elueringstoestande en die aantal teoretiese plate N en retensietyd om dieselfde toetsmengsel op elke kolom te skei. Die reproduseerbaarheidsdata vir die PMP-kolomme word in Tabel 4 getoon, die goed-lae reproduseerbare waarde van die PMP3-kolom, die korreleerbaarheid van TRS. .
Skeiding van peptiedmengsel op PMP-kolom (B) en Ascentis Express RP-Amide-kolom (A);mobiele fase 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP kolom afmetings (100 × 1,8 mm id);analities Die elueringsvolgorde van die verbindings: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) en 5 (leusien) suur enkefalien)).
'n PMP-kolom (100 × 1.8 mm id) is geëvalueer vir die skeiding van triptiese vertering van menslike serumalbumien in hoëwerkverrigting vloeistofchromatografie. Die chromatogram in Figuur 6 toon dat die monster goed geskei is en die resolusie baie goed is. HSA vertering is ontleed deur gebruik te maak van 'n vloeitempo van 100 µL/70 min. waterfase 100 µL/70 min. Soos getoon in die chromatogram (Figuur 6), is die HSA-vertering verdeel in 17 pieke wat ooreenstem met 17 peptiede. Die skeidingsdoeltreffendheid van elke piek in die HSA-vertering is bereken en die waardes word in Tabel 5 gegee.
'n Tryptiese vertering van HSA (100 × 1.8 mm id) is op 'n PMP-kolom geskei;vloeitempo (100 µL/min), mobiele fase 60/40 asetonitril/water met 0.1% TFA.
waar L die kolomlengte is, η die viskositeit van die mobiele fase is, ΔP die kolom-terugdruk is, en u die lineêre snelheid van die mobiele fase is. Die deurlaatbaarheid van die PMP-kolom was 2,5 × 10-14 m2, die vloeitempo was 25 μL/min, en 60/40 v/v PMP/1me-kolom is gebruik. was soortgelyk aan dié van ons vorige studie Verw.34.Die deurlaatbaarheid van die kolom gepak met oppervlakkig poreuse deeltjies is: 1.7 × 10-15 vir 1.3 μm deeltjies, 3.1 × 10-15 vir 1.7 μm deeltjies, 5.2 × 10-15 en 2-5 m vir 5.2 μm deeltjies. μm deeltjies 43. Daarom is die deurlaatbaarheid van die PMP-fase soortgelyk aan dié van 5 μm kern-dop deeltjies.
waar Wx die gewig is van die kolom gepak met chloroform, Wy is die gewig van die kolom wat met metanol gepak is, en ρ is die digtheid van die oplosmiddel.Digthede van metanol (ρ = 0,7866) en chloroform (ρ = 1,484).Die totale porositeit van SILICA PARTICLES-C3 1008 kolomme-C31-mm1-kolomme (C31-mm1) en kolomme. s 31 wat ons voorheen bestudeer het, was onderskeidelik 0.63 en 0.55. Dit beteken dat die teenwoordigheid van ureumligande die deurlaatbaarheid van die stilstaande fase verminder. Aan die ander kant is die totale porositeit van die PMP-kolom (100 × 1.8 mm id) 0.60. Die deurlaatbaarheid van PMP-kolomme-gepak is laer as die C1-kolomme-gepak in C1-kolomme-tipe as C1-kolomme. êre fases is die C18-ligande as lineêre kettings aan die silikapartikels geheg, terwyl in polistireentipe stilstaande fases die A relatief dik polimeerlaag daarom gevorm word.In 'n tipiese eksperiment word die kolomporositeit bereken as:
Figuur 7A,B toon die PMP-kolom (100 × 1.8 mm id) en Ascentis Express RP-Amide-kolom (100 × 1.8 mm id) met dieselfde elueringstoestande (dws 60/40 ACN/H2O en 0.1% TFA).) van die van Deemter plot.Geselekteerde peptiedmengsels (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) is voorberei in 20 µL/ Die minimum vloeitempo vir beide kolomme is 800 µL/min. Die minimum vloeitempo is die (MP 8 sent) en µl optimum waardes vir die kolom (MP 0 sent) is Express RP-Amide-kolom was onderskeidelik 2.6 µm en 3.9 µm. Die HETP-waardes dui aan dat die skeidingsdoeltreffendheid van die PMP-kolom (100 × 1.8 mm id) baie beter is as die kommersieel beskikbare Ascentis Express RP-Amide-kolom (100 × 1.8 mm id) in vergelyking met die toenemende vloei in Fig. na ons vorige studie.Die hoër skeidingsdoeltreffendheid van die PMP-kolom (100 × 1,8 mm id) in vergelyking met die Ascentis Express RP-Amide-kolom is gebaseer op verbeterings in deeltjievorm, -grootte en komplekse kolompakkingsprosedures wat in die huidige werk gebruik word34.
(A) van Deemter plot (HETP versus mobiele fase lineêre snelheid) verkry deur gebruik te maak van 'n PMP kolom (100 × 1.8 mm id) in 60/40 ACN/H2O met 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobiele fase lineêre snelheid) verkry deur gebruik te maak van 'n Ascentis Express RP-Amide 4 in 00 mm/2 in 000 mm kolom (A100 mm 2) met 0,1% TFA.
'n Polêr-ingebedde polistireen-stasionêre fase is voorberei en geëvalueer vir die skeiding van sintetiese peptiedmengsels en tripsienverteerders van menslike serumalbumien (HAS) in hoëwerkverrigting vloeistofchromatografie. Die chromatografiese werkverrigting van PMP-kolomme vir peptiedmengsels is uitstekend in skeidingsdoeltreffendheid en resolusie. deeltjies, beheerde sintese van die stilstaande fase, en komplekse kolompakking. Benewens hoë skeidingsdoeltreffendheid, is lae kolomterugdruk by hoë vloeitempo's nog 'n voordeel van hierdie stilstaande fase.PMP-kolomme vertoon goeie reproduseerbaarheid en kan gebruik word vir die ontleding van peptiedmengsels en tripsienvertering van verskeie proteïene. Ons beoog om hierdie kolom te gebruik vir die skeiding van natuurlike produkte, bioaktiewe plantprodukte, in medisinale verbindings, in vloeibare, natuurlike produkte, in medisinale, vloeibare, natuurlike produkte. , PMP-kolomme sal ook geëvalueer word vir die skeiding van proteïene en monoklonale teenliggaampies.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Navorsing oor peptideskeidingstelsels deur omgekeerde fasechromatografie Deel I: Ontwikkeling van 'n Kolomkarakteriseringsprotokol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Verbeterde aktiewe peptiede wat ontwerp is vir die behandeling van aansteeklike siektes.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetiese terapeutiese peptiede: wetenskap en die mark.geneesmiddelontdekking.15 (1-2) vandag, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.120109 (120.09).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Gevorderde vloeistofchromatografie-massaspektrometrie maak die inkorporering van breë geteikende metabolomika en proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019) moontlik.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Die rol van UHPLC in geneesmiddelontwikkeling.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamentele en praktiese aspekte van ultrahoë druk vloeistofchromatografie vir vinnige skeidings.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Toepassing van ultrahoëprestasie vloeistofchromatografie in geneesmiddelontwikkeling.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolitiese makroporeuse hidrogels berei uit olie-in-water hoë interne fase emulsies vir doeltreffende suiwering van enterovirusse.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Die rol van vloeistofchromatografie in proteomika.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Ontluikende tendense in omgekeerde-fase vloeistofchromatografie skeidings van terapeutiese peptiede en proteïene: teorie en toepassings.J.Apteek.Biomediese Wetenskap.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Tweedimensionele skeiding van peptiede met behulp van 'n RP-RP-HPLC-stelsel wat verskillende pH-waardes in die eerste en tweede skeidingsdimensies gebruik.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Die massa-oordrageienskappe en kinetiese werkverrigting van hoë-doeltreffendheid chromatografiese kolomme gepak met C18 sub-2 μm volledig en oppervlakkig poreuse deeltjies is ondersoek.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Onlangse neigings en analitiese uitdagings in die isolasie, identifikasie en validering van plant bioaktiewe peptiede.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-028-018-00218-00216-018-018-018.
Mueller, JB et al.Die proteomiese landskap van die koninkryk van die lewe.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Stroomaf verwerking van terapeutiese peptiede deur preparatiewe vloeistofchromatografie.Molecule (Basel, Switserland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Gemengde-modus chromatografie en die toepassing daarvan op biopolimere.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligande vir gemengde-modus proteïenchromatografie: beginsel, karakterisering en ontwerp.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).