አንዳንድ የ LC መላ መፈለጊያ ርእሶች በ LC ልምምድ ውስጥ ችግሮች ስላሉ ምንም እንኳን የመሳሪያ ቴክኖሎጂ ከጊዜ ወደ ጊዜ እየተሻሻለ ሲመጣ ጊዜ ያለፈበት አይደለም.በ LC ስርዓት ውስጥ ችግሮች ሊፈጠሩ የሚችሉባቸው እና ወደ ደካማ ጫፍ የሚደርሱባቸው ብዙ መንገዶች አሉ.ከከፍተኛ ቅርጽ ጋር የተያያዙ ጉዳዮች ሲከሰቱ, ለእነዚህ ውጤቶች ሊሆኑ የሚችሉ ምክንያቶች አጭር ዝርዝር የመላ ፍለጋ ልምዳችንን ለማቃለል ይረዳል.
ይህንን “LC መላ መፈለጊያ” አምድ መፃፍ እና በየወሩ ስለ ርዕሰ ጉዳዮች ማሰብ አስደሳች ነበር ፣ ምክንያቱም አንዳንድ ርዕሰ ጉዳዮች ከቅጥነት ወጥተው አያውቁም። ባለፉት ጥቂት አመታት፣ በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (ኤልሲ) ላይ ተጽዕኖ በሚያሳድሩ ወቅታዊ አዝማሚያዎች ላይ በርካታ የ LC መላ መፈለጊያ ክፍሎችን አተኩሬያለሁ (ለምሳሌ፣ በማቆየት ላይ የሚኖረውን ጫና የመረዳታችን አንፃራዊ ንፅፅር [2] አዲስ ግስጋሴዎች) የ LC ውጤቶች አተረጓጎም እና በዘመናዊ የ LC መሣሪያዎች መላ መፈለግ እንደሚቻል በዚህ ወር ክፍል ውስጥ ፣ ህይወቴን በታህሳስ 2 ውስጥ የጀመርኩትን ተከታታይ 1 ላይ ነው ። እና ሞት” የ LC መላ ፍለጋ ርዕሰ ጉዳዮች - ለማንኛውም መላ ፈላጊ ጠቃሚ የሆኑ ንጥረ ነገሮች እኛ የምንጠቀመው የስርአቱ እድሜ ምንም ይሁን ምን አስፈላጊ ናቸው።የዚህ ተከታታይ ዋና ርዕስ ከ LCGC ታዋቂው “LC መላ ፍለጋ መመሪያ” ግድግዳ ቻርት (4) ጋር በብዙ ላቦራቶሪዎች ውስጥ ከተሰቀለው ጋር በእጅጉ ይዛመዳል።ለዚህ ተከታታዮች ሶስተኛው ክፍል፣ ከጫፍ ቅርጽ ጋር በተያያዙ ጉዳዮች ላይ ማተኮርን መርጫለሁ፣ ከግድግዳ ቅርጽ ወይም ከተለያዩ ምክንያቶች 4 ከፍተኛ ምክንያቶች። ደካማ ጫፍ ቅርፅ! እነዚህን ሁሉ ጉዳዮች በአንድ ጽሑፍ ውስጥ በዝርዝር ልንመለከታቸው አንችልም, ስለዚህ በዚህ ርዕስ ላይ በዚህ የመጀመሪያ ክፍል ውስጥ, በአብዛኛው በማያቸው ላይ አተኩራለሁ. ወጣት እና አዛውንት የ LC ተጠቃሚዎች በዚህ አስፈላጊ ርዕስ ላይ አንዳንድ ጠቃሚ ምክሮችን እና ማሳሰቢያዎችን እንደሚያገኙ ተስፋ አደርጋለሁ.
የመላ መፈለጊያ ጥያቄዎችን "በማንኛውም ይቻላል" በማለት መልስ እየሰጠሁ እራሴን አግኝቻለሁ። ይህ ምላሽ ለመተርጎም አስቸጋሪ የሆኑትን ምልከታዎች ግምት ውስጥ በማስገባት ቀላል ሊመስል ይችላል ነገር ግን ብዙ ጊዜ ተገቢ ሆኖ አግኝቼዋለሁ። ብዙ ሊሆኑ የሚችሉ ምክንያቶች ደካማ ጫፍ ቅርፅ፣ ችግሩ ምን ሊሆን እንደሚችል ግምት ውስጥ በማስገባት አእምሮን ክፍት ማድረግ አስፈላጊ ነው ፣ እና የመላ ፍለጋ ጥረታችንን ለመጀመር ፣ በእነዚያ በጣም አስፈላጊ ሊሆኑ በሚችሉት አማራጮች ላይ በማተኮር ቅድሚያ መስጠት መቻል አስፈላጊ ነው ።
በማንኛውም የመላ መፈለጊያ መልመጃ ውስጥ ቁልፍ እርምጃ - ግን ደረጃው ዝቅተኛ ነው ብዬ የማስበው - አንድ ችግር መፈታት ያለበት መሆኑን መገንዘብ ነው ። ብዙውን ጊዜ ችግር እንዳለ መገንዘብ በመሳሪያው ላይ የሚደርሰው ነገር በንድፈ-ሀሳብ ፣ በተጨባጭ እውቀት እና በተሞክሮ (5) የተቀረፀው ከምንጠብቀው ነገር የተለየ መሆኑን መገንዘብ ነው። ለስላሳ ፣ መሪ ጠርዝ ፣ ጅራት ፣ ወዘተ) ፣ ግን ደግሞ ወደ ስፋቱ ። ለትክክለኛው ከፍተኛ ቅርፅ የምንጠብቀው ነገር ቀላል ነው ። ጽንሰ-ሀሳብ (6) የመማሪያ መጽሃፉን በጥሩ ሁኔታ ይደግፋል ፣ በአብዛኛዎቹ ጉዳዮች ፣ chromatographic ጫፎች በምስል 1 ሀ ላይ እንደሚታየው ከ Gaussian ስርጭት ቅርፅ ጋር መስማማት አለባቸው። ምስል 1 ሊታዩ የሚችሉ ሌሎች አማራጮችን ያሳያል-በሌላ አነጋገር አንዳንድ ነገሮች ሊሳሳቱ የሚችሉባቸው መንገዶች ናቸው.በቀሪው ክፍል ውስጥ, ወደ እነዚህ የቅርጽ ዓይነቶች ሊመሩ ስለሚችሉ ሁኔታዎች የተወሰኑ ምሳሌዎችን ለመወያየት ጊዜ እናጠፋለን.
አንዳንድ ጊዜ ቁንጮዎች በ chromatogram ውስጥ ሙሉ በሙሉ እንዲገለሉ በሚጠበቁበት ቦታ ላይ አይታዩም.ከላይ ያለው የግድግዳ ሠንጠረዥ የሚያሳየው የጫፍ አለመኖር (ናሙናው በእውነቱ የዒላማ ትንታኔን የያዘው በማጎሪያው ላይ ሲሆን ይህም ጠቋሚው ከድምፅ በላይ ለማየት በቂ እንዲሆን ማድረግ) ብዙውን ጊዜ ከአንዳንድ የመሳሪያዎች ችግር ወይም የተሳሳተ የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ ሁኔታዎች (በምንም መልኩ ከታየ). ቁንጮዎች ፣ ብዙውን ጊዜ በጣም “ደካማ”) ። በዚህ ምድብ ውስጥ ሊሆኑ የሚችሉ ችግሮች እና መፍትሄዎች አጭር ዝርዝር በሰንጠረዥ I ውስጥ ይገኛል።
ከላይ እንደተገለፀው ትኩረት ከመስጠትዎ በፊት እና ለማስተካከል ከመሞከርዎ በፊት ምን ያህል ጫፍን ማስፋፋት መታገስ እንዳለበት ጥያቄው ወደፊት በሚከተለው ርዕስ ውስጥ የምወያይበት ውስብስብ ርዕሰ ጉዳይ ነው.የእኔ ተሞክሮ ጉልህ የሆነ ጫፍን ማስፋት ብዙውን ጊዜ በከፍታ ቅርፅ ላይ ከፍተኛ ለውጥ ይታያል, እና የጫፍ ጅራት ከቅድመ-ጫፍ ወይም ከመከፋፈል የበለጠ የተለመደ ነው.ነገር ግን በስም የተመጣጠነ ቁንጮዎችም ሊፈጠሩ ይችላሉ: በተለያዩ ምክንያቶች ሊሰፋ ይችላል.
እነዚህ ጉዳዮች እያንዳንዳቸው ቀደም ባሉት የችግር መፈለጊያ LC እትሞች ላይ በዝርዝር ተብራርተዋል, እና በእነዚህ ርዕሰ ጉዳዮች ላይ ፍላጎት ያላቸው አንባቢዎች ለእነዚህ ጉዳዮች ዋና መንስኤዎች እና መፍትሄዎች መረጃ ለማግኘት ከዚህ ቀደም ጽሁፎችን መመልከት ይችላሉ. ተጨማሪ ዝርዝሮች.
ጫፍ ጅራት፣ ጫፍ ፊት ለፊት እና መለያየት ሁሉም በኬሚካላዊ ወይም በአካላዊ ክስተቶች ሊከሰቱ ይችላሉ፣ እና ለነዚህ ችግሮች መፍትሄ ሊሆኑ የሚችሉ ዝርዝር ጉዳዮች ከኬሚካላዊ ወይም የአካል ችግር ጋር እየተገናኘን እንዳለን ይለያያል። ብዙ ጊዜ በ chromatogram ውስጥ ያሉትን የተለያዩ ጫፎች በማነፃፀር ጥፋተኛው የትኛው እንደሆነ ጠቃሚ ፍንጮችን ማግኘት ትችላለህ። አንድ ወይም ጥቂት ጫፎች ብቻ ተጎድተዋል, የተቀረው ግን ጥሩ ይመስላል, መንስኤው በአብዛኛው ኬሚካል ነው.
የከፍተኛ ጅራት ኬሚካላዊ ምክንያቶች እዚህ ላይ በአጭሩ ለመወያየት በጣም ውስብስብ ናቸው. ፍላጎት ያለው አንባቢ በቅርብ ጊዜ ወደ "LC መላ ፍለጋ" ለበለጠ ጥልቅ ውይይት (10) ይጠቀሳል. ነገር ግን, ለመሞከር ቀላል ነገር የተወጋውን ትንታኔ ብዛት መቀነስ እና የከፍተኛው ቅርፅ መሻሻል አለመኖሩን ይመልከቱ. እንደዚያ ከሆነ, ይህ ጥሩ ፍንጭ ነው, ችግሩ ከመጠን በላይ መጫን አለበት. ትናንሽ ተንታኞች ወይም ክሮሞቶግራፊ ሁኔታዎች መለወጥ አለባቸው ስለዚህ ጥሩ የከፍታ ቅርፆች ከትላልቅ ሰዎች ጋር በመርፌ እንኳን ማግኘት ይችላሉ።
ለከፍተኛ ጅራት ብዙ ሊሆኑ የሚችሉ አካላዊ ምክንያቶችም አሉ ። ስለ እድሎች ዝርዝር ውይይት የሚፈልጉ አንባቢዎች ወደ ሌላ የቅርብ ጊዜ እትም “LC መላ መፈለጊያ” (11) ይጠቀሳሉ ። በጣም ከተለመዱት የፒክ ጅራቶች አካላዊ መንስኤዎች አንዱ በመርፌ እና በማወቂያ (12) መካከል ባለ ቦታ ላይ ደካማ ግንኙነት ነው ። እጅግ በጣም ጥሩ ምሳሌ በስእል 1 ዲ ላይ ይታያል ፣ በዚህ ቫልቭ ውስጥ ከተሰራን ከጥቂት ሳምንታት በፊት በኔ ስርዓት ውስጥ አልተጠቀምንበትም። በፊት, እና ትንሽ የድምጽ መርፌ ዑደት ወደ አይዝጌ ብረት capillary ላይ የተቀረጸው ነበር ferrule ጋር አንድ ትንሽ የድምጽ መርፌ ቀለበት ተጭኗል አንዳንድ የመጀመሪያ መላ ፍለጋ ሙከራዎች በኋላ, እኛ በመርፌ ቫልቭ stator ውስጥ ወደብ ጥልቀት እኛ ከለመድነው ይልቅ በጣም ጥልቅ ነበር መሆኑን ተገነዘብኩ, ወደ ወደቡ ግርጌ ላይ ትልቅ የሞተ መጠን ምክንያት. ወደብ.
በስእል 1 ላይ እንደሚታየው ፒክ ግንባሮች በአካላዊ ወይም በኬሚካላዊ ችግሮች ሊከሰቱ ይችላሉ ። የመሪነት ጠርዝ የተለመደ አካላዊ መንስኤ የአምዱ ቅንጣት አልጋ በደንብ ያልታሸገ ነው ፣ ወይም ቅንጣቶች በጊዜ ሂደት እንደገና የተደራጁ መሆናቸው ነው ። በዚህ አካላዊ ክስተት የተነሳ ከፍተኛ ጅራት እንደሚከሰት ፣ ይህንን ለማስተካከል በጣም ጥሩው መንገድ አምዱን በመተካት እና በሂደት ላይ ነን። "መስመራዊ ያልሆኑ" የማቆያ ሁኔታዎች.በጥሩ (መስመራዊ) ሁኔታዎች ውስጥ, በቋሚ ደረጃ የተያዘው የትንታኔ መጠን (ስለዚህ, የማቆያ ፋክተር) በአምዱ ውስጥ ካለው የትንታኔ ክምችት ጋር በቀጥታ የተያያዘ ነው. Chromatographically, ይህ ማለት በአምዱ ውስጥ የተጨመረው የትንታኔው ብዛት እየጨመረ ሲሄድ, ጫፉ እየጨመረ ይሄዳል, ግንኙነቱ የማይቋረጥ ሲሆን ግንኙነቱ ሰፊ አይሆንም. ቁመት ብቻ ነው ነገር ግን ብዙ ብዛት ሲወጋ ደግሞ እየሰፋ ይሄዳል። በተጨማሪም መደበኛ ያልሆኑ ቅርጾች የክሮሞቶግራፊ ጫፎችን ቅርፅ ይወስናሉ ፣ ይህም መሪ ወይም ተከታይ ጠርዞችን ያስከትላል ። እንደ ጅምላ ጭነት ከፍተኛ ጅራት (10) ከመጠን በላይ መጫን ፣ በመስመር ላይ ባልሆነ ማቆየት ምክንያት የሚመራው ከፍተኛው በመርፌ የተወጋውን አናላይት ብዛት በመቀነስ ፣ መርፌው ከተሰየመበት የክብደት መጠን በመቀነስ ፣ የመርፌ ቅርጹ እንዲሻሻል ካልተደረገ ፣ የመርፌ ቅርጹ እንዲሻሻል ካልተደረገ ፣ የመርፌ ቅርጹ እንዲሻሻል መደረግ የለበትም። ጠርዝ፣ ወይም ይህን ባህሪ ለመቀነስ የክሮማቶግራፊያዊ ሁኔታዎች መቀየር አለባቸው።
አንዳንድ ጊዜ በስእል 1 ረ ላይ እንደሚታየው “የተከፋፈለ” የሚመስለውን እናስተውላለን።ይህንን ችግር ለመፍታት የመጀመሪያው እርምጃ የከፍተኛው ቅርፅ ከፊል አብሮ-ኢሉሽን (ማለትም ሁለት የተለዩ ነገር ግን በቅርበት የሚቃጠሉ ውህዶች መኖራቸውን) ወይም አለመሆኑን መወሰን ነው።በእርግጥ ሁለት የተለያዩ ተንታኞች አንድ ላይ እየተቃረበ የሚወጡ ከሆነ ጉዳዩ የእነርሱን ቅልጥፍና የማሻሻል ጉዳይ ነው (ለምሳሌ ፣ የፕላስቲን ብዛትን ወይም አፕሊኬሽንን በመጨመር)። ከአካላዊ አፈጻጸም ጋር የተያያዘው ከራሱ ዓምዱ ጋር ምንም ግንኙነት የለውም.ብዙውን ጊዜ ለዚህ ውሳኔ በጣም አስፈላጊው ፍንጭ በ chromatogram ውስጥ ያሉት ሁሉም ጫፎች የተከፋፈሉ ቅርጾችን ያሳያሉ ወይም አንድ ወይም ሁለት ብቻ ናቸው.አንድ ወይም ሁለት ብቻ ከሆነ, ምናልባት የጋራ-elution ጉዳይ ነው; ሁሉም ጫፎች ከተከፋፈሉ፣ ምናልባት አካላዊ ጉዳይ ነው፣ ምናልባትም ከአምዱ ጋር የተያያዘ ነው።
ከአምዱ አካላዊ ባህሪያት ጋር የተያያዙ የተከፋፈሉ ጫፎች አብዛኛውን ጊዜ በከፊል የታገዱ የመግቢያ ወይም መውጫ ፍሪቶች ወይም በአምዱ ውስጥ ያሉ ቅንጣቶችን እንደገና በማደራጀት የሞባይል ደረጃ ከሞባይል ደረጃ በበለጠ ፍጥነት እንዲፈስ በመፍቀድ የአምድ ቻናል ምስረታ በተወሰኑ አካባቢዎች .በሌሎች ክልሎች (11) ። ሆኖም ግን, በእኔ ልምድ, ይህ ብዙውን ጊዜ የረጅም ጊዜ መፍትሄ ሳይሆን የአጭር ጊዜ ነው.ይህ ብዙውን ጊዜ በዘመናዊ አምዶች ውስጥ ገዳይ ነው ቅንጣቶች በአምዱ ውስጥ እንደገና ከተጣመሩ በዚህ ጊዜ, ዓምዱን መተካት እና መቀጠል ጥሩ ነው.
በስእል 1ጂ ላይ ያለው ጫፍ፣በራሴ ላብራቶሪ ውስጥ ከታየው የቅርብ ጊዜ ሁኔታም ብዙውን ጊዜ ምልክቱ በጣም ከፍተኛ ከመሆኑ የተነሳ የምላሽ ወሰን ከፍተኛ ደረጃ ላይ መድረሱን ያሳያል።ለኦፕቲካል መምጠጥ ዳሳሾች (UV-vis በዚህ ጉዳይ ላይ) የትንታኔው ትኩረት በጣም ከፍተኛ በሚሆንበት ጊዜ ተንታኙ በፈላጊው ፍሰት ሴል ውስጥ የሚያልፈውን አብዛኛው ብርሃን ይቀበላል ፣ይህም በጣም ትንሽ ብርሃንን በመተው በተለያዩ ሁኔታዎች ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል። የጩኸት ምንጮች፣ እንደ የተሳሳተ ብርሃን እና “ጨለማ ጅረት”፣ ምልክቱን በጣም “ደብዝዛዥ” በመልክ እና ከአናላይት ትኩረት ውጭ ያደርገዋል። ይህ በሚሆንበት ጊዜ ብዙውን ጊዜ ችግሩ በቀላሉ ሊፈታ የሚችለው የትንታኔውን የክትባት መጠን በመቀነስ - የመርፌን መጠን በመቀነስ, ናሙናውን በማሟሟት ወይም ሁለቱንም.
በክሮማቶግራፊ ትምህርት ቤት የመርማሪ ምልክትን እንጠቀማለን (በክሮማቶግራም ውስጥ ያለው y-ዘንግ) በናሙናው ውስጥ ያለውን የትንታኔ ትኩረት አመላካች ነው ። ስለዚህ ክሮሞግራም ከዜሮ በታች ምልክት ያለው ምልክት ማየት እንግዳ ይመስላል ፣ ምክንያቱም ቀላል ትርጓሜ ይህ አሉታዊ የትንታኔ ትኩረትን ያሳያል - ይህ በእርግጥ በአካል የማይቻል ነው ። በእኔ ልምድ ፣ ብዙውን ጊዜ ቫቪስ ሲጠቀሙ አሉታዊ ምልክቶች ይታያሉ።
በዚህ ሁኔታ አሉታዊ ጫፍ በቀላሉ ከአምዱ የሚወጡት ሞለኪውሎች ከከፍተኛው በፊት እና በኋላ ከሞባይል ደረጃው ያነሰ ብርሃንን ይቀበላሉ ማለት ነው ። ይህ ሊከሰት ይችላል ፣ ለምሳሌ በአንጻራዊ ሁኔታ ዝቅተኛ የመለየት የሞገድ ርዝመት (<230 nm) እና የሞባይል ደረጃ ተጨማሪዎች በእነዚህ የሞገድ ርዝመቶች ውስጥ አብዛኛውን ብርሃን የሚወስዱ። እንደነዚህ ያሉ ተጨማሪዎች እንደ የሞባይል ደረጃ ሜታኖልታ ያሉ ንጥረ ነገሮች ሊሆኑ ይችላሉ። የመለኪያ ጥምዝ ለማዘጋጀት እና ትክክለኛ የቁጥር መረጃን ለማግኘት አሉታዊ ጫፎችን በትክክል መጠቀም ይችላል ፣ ስለሆነም እነሱን ለማስወገድ ምንም መሰረታዊ ምክንያት የለም (ይህ ዘዴ አንዳንድ ጊዜ “ተዘዋዋሪ የዩቪ ማወቂያ” ተብሎ ይጠራል) (13) ። ሆኖም ፣ በአጠቃላይ አሉታዊ ጫፎችን ለማስወገድ በእውነት ከፈለግን ፣ የመምጠጥ ሁኔታን በሚታወቅበት ጊዜ ፣ ​​​​ምርጡ መፍትሄ የሞባይልን የመምጠጥ ደረጃን በመጠቀም ፣ የተንቀሳቃሽ ስልክ ስብጥርን የበለጠ መለወጥ ወይም ሞገድ የበለጠ መለወጥ ነው። ከትንታኔዎች ያነሰ ብርሃን እንዲወስዱ የሞባይል ደረጃ።
በናሙናው ውስጥ ካለው አናላይት ውጭ ያሉ ክፍሎች እንደ ሟሟ ማትሪክስ ካሉ የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃዎች የማጣቀሻ ኢንዴክስ የተለየ በሚሆንበት ጊዜ የማጣቀሻ ኢንዴክስ (RI) ማወቂያን በሚጠቀሙበት ጊዜ አሉታዊ ጫፎች ሊታዩ ይችላሉ ። ይህ እንዲሁ በ UV-vis ማወቂያ ይከሰታል ፣ ግን ይህ ተፅእኖ ከ RI ፍለጋ አንፃር የመቀነስ አዝማሚያ ይኖረዋል ። በሁለቱም ሁኔታዎች የንድፍ ማትሪክስ ናሙና በትንሹ ሊቀንስ ይችላል። ወደ ተንቀሳቃሽ ደረጃው.
በክፍል ሶስት ስለ LC መላ መፈለጊያ መሰረታዊ ርዕስ ላይ፣ የታየው የከፍታ ቅርጽ ከሚጠበቀው ወይም ከመደበኛው ጫፍ ቅርፅ የሚለይባቸውን ሁኔታዎች ተወያይቻለሁ።ለእንደዚህ አይነት ችግሮች ውጤታማ መላ መፈለግ የሚጀምረው የሚጠበቁትን ከፍተኛ ቅርጾችን በማወቅ ነው (በንድፈ ሀሳብ ወይም ቀደም ባሉት ዘዴዎች ልምድ ባለው እውቀት ላይ በመመስረት) ስለሆነም ከእነዚህ የሚጠበቁ ልዩነቶች ግልጽ ናቸው። ብዙ ጊዜ እነዚህን ዝርዝሮች ማወቅ መላ መፈለግ ለመጀመር ጥሩ ቦታ ይሰጣል ነገር ግን ሁሉንም አማራጮች አይይዝም።ለበለጠ ጥልቀት መንስኤዎች እና መፍትሄዎች ዝርዝር ፍላጎት ያላቸው አንባቢዎች የኤል ሲጂሲ “LC መላ ፍለጋ መመሪያ” የግድግዳ ሠንጠረዥን መመልከት ይችላሉ።
(4) LCGC “LC መላ መፈለጊያ መመሪያ” የግድግዳ ገበታ።https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021)።
(6) ሀ. Felinger፣ የመረጃ ትንተና እና የሲግናል ሂደት በ Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998)፣ ገጽ. 43-96።
(8) ዋሃብ ኤምኤፍ፣ ዳስጉፕታ ፒኬ፣ ካድጆ ኤኤፍ እና አርምስትሮንግ DW፣ Anal.Chim.Journal.Rev. 907፣ 31–44 (2016)።https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043።