አንዳንድ የ LC መላ መፈለጊያ ርእሶች በ LC ልምምድ ውስጥ ችግሮች ስላሉ ምንም እንኳን የመሳሪያ ቴክኖሎጂ ከጊዜ ወደ ጊዜ እየተሻሻለ ሲመጣ ጊዜ ያለፈበት አይደለም.በ LC ስርዓት ውስጥ ችግሮች ሊፈጠሩ የሚችሉባቸው እና ወደ ደካማ ጫፍ የሚደርሱባቸው ብዙ መንገዶች አሉ.ከከፍተኛ ቅርጽ ጋር የተያያዙ ጉዳዮች ሲከሰቱ, ለእነዚህ ውጤቶች ሊሆኑ የሚችሉ ምክንያቶች አጭር ዝርዝር የመላ ፍለጋ ልምዳችንን ለማቃለል ይረዳል.
ይህንን “LC መላ መፈለጊያ” አምድ መፃፍ እና በየወሩ ስለ አርእስቶች ማሰብ አስደሳች ነበር ፣ ምክንያቱም አንዳንድ ርዕሰ ጉዳዮች ከቅጥነት አይወጡም ። በክሮማቶግራፊ መስክ ምርምር አንዳንድ ርዕሶች ወይም ሀሳቦች በአዲስ እና የተሻሉ ሀሳቦች በመተካታቸው ጊዜ ያለፈባቸው ይሆናሉ። ብዙ የ LC መላ ፍለጋ ክፍሎችን በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) ላይ ተጽዕኖ በሚያሳድሩ ወቅታዊ አዝማሚያዎች ላይ አተኩረዋል (ለምሳሌ ፣ በማቆየት ላይ የሚኖረውን ጫና ተፅእኖ በተመለከተ ያለን አንፃራዊ ንፅፅር [2] አዲስ እድገቶች) የ LC ውጤቶችን ትርጓሜ እና በዘመናዊ የ LC መሣሪያዎች እንዴት መላ መፈለግ እንደሚቻል ። በዚህ ወር ክፍል ውስጥ ፣ በታህሳስ 2 ውስጥ በ 1 ሞት ላይ ያተኮረውን ተከታታይ ፣ ሕይወት በ 2 እና በሞት ላይ ያተኮረ ነው ። ting — ለማንኛውም መላ ፈላጊ ጠቃሚ የሆኑ ንጥረ ነገሮች፣ የምንጠቀመው የስርአቱ እድሜ ምንም ይሁን ምን አስፈላጊ ናቸው።የዚህ ተከታታይ ዋና ርዕስ ከ LCGC ታዋቂው “LC መላ ፍለጋ መመሪያ” ግድግዳ ገበታ (4) ጋር በብዙ የላቦራቶሪዎች ውስጥ ከተሰቀለው ጋር በእጅጉ ይዛመዳል።ለዚህ ተከታታይ ሶስተኛው ክፍል ከከፍተኛው ቅርፅ ወይም ጫፍ ባህሪያት ጋር በተያያዙ ጉዳዮች ላይ ማተኮርን መርጫለሁ። በአንድ መጣጥፍ ውስጥ በዝርዝር ፣ስለዚህ በዚህ ርዕስ ላይ በዚህ የመጀመሪያ ክፍል ፣ እኔ ብዙ ጊዜ የማያቸው በአንዳንድ ላይ አተኩራለሁ ። ወጣት እና አዛውንት የ LC ተጠቃሚዎች በዚህ አስፈላጊ ርዕስ ላይ አንዳንድ ጠቃሚ ምክሮችን እና ማሳሰቢያዎችን እንደሚያገኙ ተስፋ አደርጋለሁ።
የመላ መፈለጊያ ጥያቄዎችን "በማንኛውም ይቻላል" በማለት መልስ እየሰጠሁ እራሴን አግኝቻለሁ። ይህ ምላሽ ለመተርጎም አስቸጋሪ የሆኑትን ምልከታዎች ግምት ውስጥ በማስገባት ቀላል ሊመስል ይችላል ነገር ግን ብዙ ጊዜ ተገቢ ሆኖ አግኝቼዋለሁ። ብዙ ሊሆኑ የሚችሉ ምክንያቶች ደካማ ጫፍ ቅርፅ፣ ችግሩ ምን ሊሆን እንደሚችል ግምት ውስጥ በማስገባት አእምሮን ክፍት ማድረግ አስፈላጊ ነው ፣ እና የመላ ፍለጋ ጥረታችንን ለመጀመር ፣ በእነዚያ በጣም አስፈላጊ ሊሆኑ በሚችሉት አማራጮች ላይ በማተኮር ቅድሚያ መስጠት መቻል አስፈላጊ ነው ።
በማንኛውም የመላ መፈለጊያ መልመጃ ውስጥ ቁልፍ እርምጃ - ግን ደረጃው ዝቅተኛ ነው ብዬ የማስበው - አንድ ችግር መፈታት ያለበት መሆኑን መገንዘብ ነው ። ብዙውን ጊዜ ችግር እንዳለ መገንዘብ በመሳሪያው ላይ የሚደርሰው ነገር በንድፈ-ሀሳብ ፣ በተጨባጭ ዕውቀት እና በተሞክሮ (5) የተቀረፀው ከምንጠብቀው ነገር የተለየ መሆኑን መገንዘብ ነው። ጠርዝ, ጅራት, ወዘተ), ግን ደግሞ ወደ ስፋቱ. ለትክክለኛው ከፍተኛ ቅርጽ የምንጠብቀው ነገር ቀላል ነው. ጽንሰ-ሐሳብ (6) የመማሪያ መጽሃፉን በጥሩ ሁኔታ ይደግፋል, በአብዛኛዎቹ ሁኔታዎች, የ chromatographic ጫፎች የተመጣጠነ እና ከጋውሲያን ስርጭት ቅርጽ ጋር የሚጣጣሙ መሆን አለባቸው, በስእል 1 ሀ. ከጫፍ ስፋቶች የምንጠብቀው በዚህ ርዕስ ላይ አንዳንድ ውስብስብ ጉዳዮችን እናሳያለን. ሊታዩ የሚችሉ ብልሽቶች-በሌላ አነጋገር ነገሮች ሊበላሹ የሚችሉ አንዳንድ መንገዶች። በቀሪው ክፍል ውስጥ፣ ወደ እነዚህ የቅርጽ ዓይነቶች ሊመሩ የሚችሉ የተወሰኑ የሁኔታዎች ምሳሌዎችን በመወያየት ጊዜ እናጠፋለን።
አንዳንድ ጊዜ ቁንጮዎች በ chromatogram ውስጥ ሙሉ በሙሉ እንዲገለሉ በሚጠበቁበት ቦታ ላይ አይታዩም.ከላይ ያለው የግድግዳ ሠንጠረዥ የሚያሳየው የጫፍ አለመኖር (ናሙናው በእውነቱ የዒላማ ትንታኔን የያዘው በማጎሪያው ላይ ሲሆን ይህም ጠቋሚው ከድምፅ በላይ ለማየት በቂ እንዲሆን ማድረግ) ብዙውን ጊዜ ከአንዳንድ የመሳሪያዎች ችግር ወይም የተሳሳተ የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ ሁኔታዎች (በምንም መልኩ ከታየ).ቁንጮዎች ፣ ብዙውን ጊዜ በጣም “ደካማ”) ። በዚህ ምድብ ውስጥ ሊሆኑ የሚችሉ ችግሮች እና መፍትሄዎች አጭር ዝርዝር በሰንጠረዥ I ውስጥ ይገኛል።
ከላይ እንደተገለፀው ትኩረት ከመስጠትዎ በፊት እና ለማስተካከል ከመሞከርዎ በፊት ምን ያህል ጫፍን ማስፋፋት መታገስ እንዳለበት ጥያቄው ወደፊት በሚከተለው ርዕስ ውስጥ የምወያይበት ውስብስብ ርዕሰ ጉዳይ ነው.የእኔ ተሞክሮ ጉልህ የሆነ ጫፍን ማስፋት ብዙውን ጊዜ በከፍታ ቅርፅ ላይ ከፍተኛ ለውጥ ሲኖር እና ከፍተኛ ጅራት ከቅድመ-ጫፍ ወይም ከመከፋፈል የበለጠ የተለመደ ነው.ነገር ግን በስም የተመጣጠነ ቁንጮዎችም ሊፈጠሩ ይችላሉ: በተለያዩ ምክንያቶች ሊሰፋ ይችላል, ይህም በተለያዩ ምክንያቶች ሊሰፋ ይችላል.
እነዚህ ጉዳዮች እያንዳንዳቸው ቀደም ባሉት የችግር መፈለጊያ LC እትሞች ላይ በዝርዝር ተብራርተዋል, እና በእነዚህ ርዕሰ ጉዳዮች ላይ ፍላጎት ያላቸው አንባቢዎች ለእነዚህ ጉዳዮች ዋና መንስኤዎች እና መፍትሄዎች መረጃ ለማግኘት ከዚህ ቀደም ጽሁፎችን መመልከት ይችላሉ.ተጨማሪ ዝርዝሮች.
ጫፍ ጅራት፣ ጫፍ ፊት ለፊት እና መለያየት ሁሉም በኬሚካላዊ ወይም ፊዚካዊ ክስተቶች ሊከሰቱ ይችላሉ፣ እና ለእነዚህ ችግሮች መፍትሄ ሊሆኑ የሚችሉ ዝርዝር ጉዳዮች ከኬሚካላዊ ወይም የአካል ችግር ጋር እየተገናኘን እንዳለን ይለያያል። ብዙ ጊዜ በ chromatogram ውስጥ ያሉትን የተለያዩ ጫፎች በማነፃፀር ጥፋተኛው የትኛው እንደሆነ ጠቃሚ ፍንጮችን ማግኘት ትችላለህ። ቁንጮዎች ተጎድተዋል, ነገር ግን የተቀረው ጥሩ ይመስላል, መንስኤው በአብዛኛው ኬሚካል ነው.
የፒክ ጅራት ኬሚካላዊ ምክንያቶች እዚህ ላይ በአጭሩ ለመወያየት በጣም ውስብስብ ናቸው. ፍላጎት ያለው አንባቢ በቅርብ ጊዜ ወደ "LC መላ መፈለጊያ" እትም ለበለጠ ጥልቅ ውይይት (10) ይጠቀሳል. ሆኖም ግን, ለመሞከር ቀላል ነገር የተወጋውን ትንታኔ ብዛት መቀነስ እና የከፍተኛው ቅርፅ መሻሻል አለመኖሩን ይመልከቱ. እንደዚያ ከሆነ, ይህ ጥሩ ፍንጭ ነው, ችግሩ ከመጠን በላይ መጫን አለበት, ችግሩ ከመጠን በላይ መጫን አለበት. sses, ወይም የ chromatographic ሁኔታዎች መቀየር አለባቸው ስለዚህ ጥሩ ከፍተኛ ቅርጾች ትልቅ ብዛት በመርፌ እንኳ ማግኘት ይቻላል.
ለከፍተኛ ጅራት ብዙ ሊሆኑ የሚችሉ አካላዊ ምክንያቶችም አሉ ። ስለ እድሎች ዝርዝር ውይይት የሚፈልጉ አንባቢዎች ወደ ሌላ የቅርብ ጊዜ እትም “LC መላ መፈለጊያ” (11) ይጠቀሳሉ ። በጣም ከተለመዱት የፒክ ጅራት አካላዊ መንስኤዎች አንዱ በመርፌ እና በማወቂያ (12) መካከል ባለው ነጥብ ላይ ደካማ ግንኙነት ነው ። እጅግ በጣም ጥሩ ምሳሌ በስእል 1 ዲ ላይ ታይቷል ፣ በዚህ ቫልቭ ውስጥ ከተሰራን ከጥቂት ሳምንታት በፊት በኔ ሲስተም ውስጥ አልተጠቀምንበትም ነበር። ከማይዝግ ብረት የተሰራ ካፊላሪ ላይ ከተቀረጸው ፌሩል ጋር ትንሽ የድምጽ መርፌ ዑደት ከመጀመሪያዎቹ የመላ መፈለጊያ ሙከራዎች በኋላ፣ በመርፌ ቫልቭ ስታተር ውስጥ ያለው የወደብ ጥልቀት ከለመድነው የበለጠ ጥልቀት ያለው መሆኑን ተገነዘብን፣ ይህም ከወደቡ ግርጌ ላይ ትልቅ የሞተ ድምጽ አስከትሏል።
በስእል 1 ላይ እንደሚታየው ፒክ ግንባሮች በአካላዊ ወይም በኬሚካላዊ ችግሮች ሊከሰቱ ይችላሉ ። የመሪነት ጠርዝ የተለመደ አካላዊ መንስኤ የአምዱ ቅንጣት አልጋ በደንብ ያልታሸገ ነው ፣ ወይም ቅንጣቶች በጊዜ ሂደት እንደገና የተደራጁ መሆናቸው ነው ። በዚህ አካላዊ ክስተት እንደ ከፍተኛ ጅራት ፣ ይህንን ለማስተካከል በጣም ጥሩው መንገድ አምዱን በመተካት እና በሂደት ላይ ነን። በጥሩ ሁኔታ (መስመራዊ) ሁኔታዎች ፣ በቋሚው ደረጃ የተያዘው የትንታኔ መጠን (ስለዚህ ፣ የማቆየት ሁኔታ) በአምዱ ውስጥ ካለው የትንታኔው ትኩረት ጋር በቀጥታ ይዛመዳል። Chromatographically ይህ ማለት በአምዱ ውስጥ የተወጋው የትንታኔ ብዛት ይጨምራል ፣ ጫፉ ይረዝማል ፣ ግን አይሰፋም ። ይህ ግንኙነት የሚፈርስ ከሆነ የማቆየት ባህሪው ሰፊ ሲሆን ፣ ግንኙነቱም ሰፊ ሲሆን ፣ ግንኙነቱም ሰፊ ይሆናል ed. በተጨማሪም ቀጥተኛ ያልሆኑ ቅርጾች የክሮማቶግራፊክ ጫፎችን ቅርፅ ይወስናሉ, ይህም የመሪነት ወይም ተከታይ ጠርዞችን ያስከትላል. በጅምላ ከመጠን በላይ መጫን ከፍተኛ ጅራት እንደሚያስከትል (10), በመስመር ላይ ባልሆነ ማቆየት ምክንያት የሚመጣ ከፍተኛ መጠን በመርፌ የተወጋ አናላይት ክብደትን በመቀነስ ሊታወቅ ይችላል. የከፍተኛው ቅርፅ ከተሻሻለ, ይህ ዘዴ ከ chromat ባህሪው መብለጥ የለበትም.
አንዳንድ ጊዜ በስእል 1 ረ ላይ እንደሚታየው “የተከፋፈለ” ከፍተኛ የሚመስለውን እናስተውላለን። ይህንን ችግር ለመፍታት የመጀመሪያው እርምጃ የከፍተኛው ቅርፅ ከፊል አብሮ-ኢሉሽን (ማለትም ሁለት የተለያዩ ነገር ግን በቅርበት የማይታዩ ውህዶች መኖራቸውን) ወይም አለመሆኑን መወሰን ነው።በእርግጥ ሁለት የተለያዩ ተንታኞች አንድ ላይ እየተቃረበ የሚወጡ ከሆነ ነገሩን የማሻሻል ጉዳይ ነው (ለምሳሌ ፣ የፕላስቲን ብዛትን ወይም ተዛማጅነት ያላቸውን አፈፃፀም)። ance ከራሱ አምድ ጋር ምንም ግንኙነት የለውም።ብዙውን ጊዜ ለዚህ ውሳኔ በጣም አስፈላጊው ፍንጭ በ chromatogram ውስጥ ያሉት ሁሉም ጫፎች የተከፋፈሉ ቅርጾችን ያሳያሉ ወይ አንድ ወይም ሁለት ብቻ።አንድ ወይም ሁለት ብቻ ከሆነ ምናልባት አብሮ የሚነሳ ጉዳይ ሊሆን ይችላል።ሁሉም ጫፎች ከተከፋፈሉ፣ ምናልባት አካላዊ ጉዳይ ነው፣ ምናልባትም ከአምዱ ጋር የተያያዘ ነው።
ከአምዱ አካላዊ ባህሪያት ጋር የተያያዙ የተከፋፈሉ ጫፎች አብዛኛውን ጊዜ በከፊል የታገዱ የመግቢያ ወይም መውጫ ፍሪቶች ወይም በአምዱ ውስጥ ያሉ ቅንጣቶችን እንደገና በማደራጀት የሞባይል ደረጃ ከሞባይል ደረጃ በበለጠ ፍጥነት እንዲፈስ በመፍቀድ የአምድ ቻናል ምስረታ በተወሰኑ አካባቢዎች .በሌሎች ክልሎች (11) ።ሆኖም ግን, በእኔ ልምድ, ይህ ብዙውን ጊዜ የረጅም ጊዜ መፍትሄ ሳይሆን የአጭር ጊዜ ነው.ይህ ብዙውን ጊዜ በዘመናዊ አምዶች ውስጥ ገዳይ ነው ቅንጣቶች በአምዱ ውስጥ እንደገና ከተጣመሩ በዚህ ጊዜ, ዓምዱን መተካት እና መቀጠል ጥሩ ነው.
በስእል 1ጂ ላይ ያለው ጫፍ ፣በራሴ ላብራቶሪ ውስጥ ከታየው የቅርብ ጊዜ ምሳሌ ፣ ብዙውን ጊዜ ምልክቱ በጣም ከፍተኛ ከመሆኑ የተነሳ የምላሽ ወሰን ከፍተኛ ደረጃ ላይ እንደደረሰ ያሳያል።ለኦፕቲካል absorbance መመርመሪያዎች (UV-vis በዚህ ጉዳይ ላይ) የትንታኔው ትኩረት በጣም ከፍተኛ በሚሆንበት ጊዜ ተንታኙ በፈላጊው ፍሰት ሴል ውስጥ የሚያልፈውን አብዛኛው ብርሃን ይቀበላል ፣ ይህም በጣም ትንሽ ብርሃንን በመተው ፣ የተለያዩ ሁኔታዎች በኤሌክትሮክሳይድ ላይ ተጽዕኖ ያሳድራሉ ። እንደ ተዘዋዋሪ ብርሃን እና “ጨለማ ጅረት”፣ ምልክቱን በጣም “ደብዝዛዥ” በመልክ እና ከአናላይት ትኩረት የጸዳ ያደርገዋል።ይህ በሚሆንበት ጊዜ ብዙውን ጊዜ ችግሩ በቀላሉ ሊፈታ የሚችለው የትንታኔውን የክትባት መጠን በመቀነስ - የመርፌን መጠን በመቀነስ, ናሙናውን በማሟሟት ወይም ሁለቱንም.
በክሮማቶግራፊ ትምህርት ቤት የመርማሪ ምልክትን እንጠቀማለን (በክሮማቶግራም ውስጥ ያለው y-ዘንግ) በናሙናው ውስጥ ያለውን የትንታኔ ትኩረት አመላካች ነው ። ስለዚህ ክሮሞግራም ከዜሮ በታች ምልክት ያለው ምልክት ማየት እንግዳ ይመስላል ፣ ምክንያቱም ቀላል ትርጓሜ ይህ አሉታዊ የትንታኔ ትኩረትን ያሳያል - ይህ በእርግጥ በአካል የማይቻል ነው ። በእኔ ልምድ ፣ ብዙውን ጊዜ ቫቪስ ሲጠቀሙ አሉታዊ ምልክቶች ይታያሉ።
በዚህ ሁኔታ ፣ አሉታዊ ጫፍ በቀላሉ ከአምዱ የሚወጣው ሞለኪውሎች ከከፍተኛው በፊት እና በኋላ ከሞባይል ደረጃው ያነሰ ብርሃንን ይቀበላሉ ማለት ነው ። ይህ ሊከሰት ይችላል ፣ ለምሳሌ ፣ በአንጻራዊ ሁኔታ ዝቅተኛ የመለየት የሞገድ ርዝመት (<230 nm) እና የሞባይል ደረጃ ተጨማሪዎች በእነዚህ የሞገድ ርዝመቶች ውስጥ አብዛኛውን ብርሃን የሚወስዱ። እንደነዚህ ያሉ ተጨማሪዎች እንደ ሞባይል ፋዝ ሟሟት ያሉ ንጥረ ነገሮችን ሊጠቀሙ ይችላሉ። የመለኪያ ከርቭን ለማዘጋጀት እና ትክክለኛ የቁጥር መረጃን ለማግኘት ፣ ስለዚህ እነሱን ለማስወገድ ምንም መሠረታዊ ምክንያት የለም (ይህ ዘዴ አንዳንድ ጊዜ “ተዘዋዋሪ የዩቪ ማወቂያ” ተብሎ ይጠራል) (13) ሆኖም ግን ፣ በአጠቃላይ አሉታዊ ጫፎችን ለማስወገድ በእውነት ከፈለግን ፣ የመምጠጥን ማወቂያን በተመለከተ ፣ በጣም ጥሩው መፍትሄ የተለየ የመፈለጊያ ሞገድ ርዝመትን መጠቀም ወይም ተንቀሳቃሽ የብርሃን ቀረፃውን በትንሹ እንዲስብ ለማድረግ እና ተንቀሳቃሽ የብርሃን ደረጃውን እንዲወስድ እና ተንቀሳቃሽ የብርሃን ደረጃውን እንዲወስድ በማድረግ ደረጃውን እንዲወስድ ማድረግ ነው። ተንታኞች።
በናሙናው ውስጥ ካለው አናላይት ውጭ ያሉ ክፍሎች እንደ ሟሟ ማትሪክስ ካሉ የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃዎች ሪፍራክቲቭ ኢንዴክስ የተለየ በሚሆንበት ጊዜ የማጣቀሻ ኢንዴክስ (RI) ማወቂያን በሚጠቀሙበት ጊዜ አሉታዊ ጫፎች ሊታዩ ይችላሉ ። ይህ እንዲሁ በ UV-vis ማወቂያ ይከሰታል ፣ ግን ይህ ውጤት ከ RI ፍለጋ አንፃር የመቀነስ አዝማሚያ ይኖረዋል። ደረጃ.
በክፍል ሶስት ስለ LC መላ መፈለጊያ መሰረታዊ ርዕስ ላይ፣ የታየው የከፍታ ቅርፅ ከሚጠበቀው ወይም ከመደበኛው ጫፍ ቅርፅ የሚለይባቸውን ሁኔታዎች ተወያይቻለሁ።ለእንደዚህ አይነት ችግሮች ውጤታማ የሆነ መላ መፈለግ የሚጀምረው በሚጠበቀው የከፍታ ቅርጾች እውቀት ነው (በንድፈ ሀሳብ ወይም ቀደም ሲል ባለው የነባር ዘዴዎች ልምድ ላይ በመመስረት) ስለዚህ ከእነዚህ የሚጠበቁ ልዩነቶች ግልጽ ናቸው።የፒክ ቅርጽ ችግሮች ብዙ የተለያዩ ሊሆኑ የሚችሉ ምክንያቶች አሉ (በጣም ሰፊ፣ ጅራታ ማድረግ፣ በዚህ ጉዳይ ላይ መዘርዘር፣ ብዙ ጊዜ በዝርዝር አወራለሁ፣ ወዘተ.) በዚህ ጉዳይ ላይ በዝርዝር አወራለሁ። ዝርዝሮች መላ መፈለጊያ ለመጀመር ጥሩ ቦታ ይሰጣሉ ነገርግን ሁሉንም አማራጮች አያያዙም።በተጨማሪ ጥልቀት ያላቸው መንስኤዎች እና መፍትሄዎች ዝርዝር የሚፈልጉ አንባቢዎች የኤል ሲጂሲ “LC መላ መፈለጊያ መመሪያ” የግድግዳ ሠንጠረዥን መመልከት ይችላሉ።
(4) LCGC “LC መላ መፈለጊያ መመሪያ” የግድግዳ ገበታ።https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021)።
(6) ሀ. Felinger፣ የመረጃ ትንተና እና የሲግናል ሂደት በ Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998)፣ ገጽ. 43-96።
(8) ዋሃብ ኤምኤፍ፣ ዳስጉፕታ ፒኬ፣ ካድጆ ኤኤፍ እና አርምስትሮንግ DW፣ Anal.Chim.Journal.Rev.907፣ 31–44 (2016)።https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043።