Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን፡ እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት ለሲኤስኤስ የተገደበ ድጋፍ አለው። ለምርጥ ተሞክሮ የተሻሻለ አሳሽ (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በInternet Explorer ውስጥ እንዲያጠፉት እንመክራለን) እስከዚያው ድረስ ቀጣይ ድጋፍን ለማረጋገጥ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን።
የተቦረቦረ የሲሊካ ቅንጣቶች በሶል-ጄል ዘዴ ተዘጋጅተዋል አንዳንድ ማሻሻያዎች የማክሮፖረስ ቅንጣቶችን ለማግኘት.እነዚህ ቅንጣቶች በተገላቢጦሽ የመደመር መቆራረጥ ሰንሰለት ማስተላለፊያ (RAFT) ፖሊመሬዜሽን ከ N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) እና styrene የ N-phenylmaleimiderror ፖሊትሪኔሬር ማይዝግ ብረትን (የአምድ-የማይዝግ ብረትን) (አምድ-የማይዝግ ብረትን) (የአምድ-አምድ-የማይዝግ ብረትን) (አምድ-የማይዝግ ብረትን) ለማዘጋጀት። 100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በቆሻሻ ማሸጊያዎች ተጭነዋል።የተገመገመ የፒኤምፒ አምድ መለያየት የፔፕታይድ ድብልቅ አምስት peptides (ጊሊ-ታይር ፣ ግላይ-ሉ-ታይር ፣ ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ ፣ ታይር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ ፣ ሌቺን ኤንኬፋሊን አልበም ኦቭ ኦቭ ፒፕታይን) እና ኦፕቲቲን አልበም ኦፕቲረም ኦቭ ኦፕቲረም)። ኢማል ኢሌሌሽን ሁኔታዎች፣ የፔፕታይድ ድብልቅ የንድፈ ሐሳብ ጠፍጣፋ ብዛት እስከ 280,000 ፕሌትስ/ሜ² ይደርሳል።የዳበረውን አምድ የመለየት አፈጻጸምን ከንግድ አሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር በማነፃፀር የPMP አምድ መለያየት አፈጻጸም በመለያየት ቅልጥፍና እና አፈታት ከንግድ አምድ የላቀ እንደነበር ተስተውሏል።
ከቅርብ ዓመታት ወዲህ የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ በገቢያ ድርሻ ላይ በከፍተኛ ደረጃ እየጨመረ በመምጣቱ ዓለም አቀፍ ገበያ እየሆነ መጥቷል ። በባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ 1 ፣ 2 ፣ 3 ፈንጂ እድገት ፣ የፔፕታይድ እና ፕሮቲኖች ትንተና በጣም ተፈላጊ ነው ። ከተገመተው peptide በተጨማሪ ፣ የተፈለገውን የፔፕታይድ ውህደት በሚፈጠርበት ጊዜ በርካታ ቆሻሻዎች የሚፈልጓቸውን የፔፕታይድ ውህደቶች በፔፕታይድ ውህድ ጊዜ ውስጥ ስለሚገኙ የፕሮቲን ፕሮቲን ፕሮቲን ንፅህናን ይፈልጋል። ፈሳሾች, ቲሹዎች እና ሴሎች በአንድ ናሙና ውስጥ ሊገኙ በሚችሉ በርካታ ዝርያዎች ምክንያት እጅግ በጣም ፈታኝ ስራ ነው ምንም እንኳን የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ለፔፕታይድ እና ለፕሮቲን ቅደም ተከተል ውጤታማ መሳሪያ ቢሆንም, እንደነዚህ ያሉ ናሙናዎች በአንድ ማለፊያ ውስጥ በጅምላ ስፔክትሮሜትር ውስጥ ከተከተቡ መለያየቱ ተስማሚ አይሆንም.ይህን ችግር LC ቀድሞ በመተግበር ፈሳሽ ክሮሞግራፊን በመተግበር ሊቀንስ ይችላል. ስፔክትሮሜትር በተወሰነው ጊዜ 4,5,6. በተጨማሪም በፈሳሽ ደረጃ መለያየት ወቅት, ትንታኔዎች በጠባብ ክልሎች ውስጥ ሊተኩሩ ይችላሉ, በዚህም እነዚህን ትንታኔዎች በማተኮር እና MS የማወቅ ችሎታን ማሻሻል.
የተገለበጠ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-LC) የፔፕታይድ ድብልቆችን ለማጣራት እና ለመለየት በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል octadecyl-modified silica (ODS) እንደ ቋሚ ደረጃ11,12,13.ሆኖም, የ RP የማይንቀሳቀስ ደረጃዎች በፔፕታይድ እና ፕሮቲኖች ውስብስብ ተፈጥሮአቸው, 4 ልዩ በሆነ የአምፊሊ 5 መዋቅር ምክንያት አጥጋቢ መለያየትን አያቀርቡም. የፔፕቲዶችን እና ፕሮቲኖችን ከፖላር እና ከፖላር ባልሆኑ አካላት ጋር ለመተንተን እና ከእነዚህ ትንታኔዎች ጋር እንዲቆዩ ያስፈልጋል16. ቅልቅል ሁነታ chromatography, መልቲ ሞዳል መስተጋብር ያቀርባል, peptides, ፕሮቲኖች, እና ሌሎች ውስብስብ ድብልቆች መካከል መለያየት RP-LC አማራጭ ሊሆን ይችላል. ብዙ ድብልቅ-ሁነታ ቋሚ ደረጃዎች 1 ፕሮቲን ተዘጋጅቷል እና separpt ክፍሎች 1 ፕሮቲን ተዘጋጅቷል. 8,19,20,21.ድብልቅ ሁነታ የማይንቀሳቀስ ደረጃዎች (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, የዋልታ intercalation / RPLC) ሁለቱም የዋልታ እና ያልሆኑ የዋልታ ቡድኖች ፊት ምክንያት peptide እና ፕሮቲን መለያየት ተስማሚ ናቸው22,23,24,25,26,27,28 .በተመሳሳይ ዋልታ እና ዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች22,23,24,25,26,27,28 .በተመሳሳይ ፖሊላር ፖሊሪንግ ፖላር ስቴሽን የሚመርጡ ቡድኖች. የዋልታ እና የዋልታ ላልሆኑ ተንታኞች የመለየት ችሎታ የሚወሰነው በአናላይት እና በማይንቀሳቀስ ደረጃ መካከል ባለው መስተጋብር ላይ ነው።የመልቲሞዳል ግንኙነቶች 29, 30, 31, 32. በቅርብ ጊዜ, Zhang et al.30 dodecyl-terminated polyamine stationary phase አዘጋጅቶ በተሳካ ሁኔታ ሃይድሮካርቦኖችን፣ ፀረ-ጭንቀቶችን፣ ፍሌቮኖይድን፣ ኑክሊዮሲዶችን፣ ኢስትሮጅንን እና ሌሎች በርካታ ትንታኔዎችን አዘጋጀ።የዋልታ ኢንተርካሌተር ሁለቱም የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች ስላሉት በሃይድሮፎቢክ እና በሃይድሮፊሊክ-አዕማድ የተደረደሩ፣ 8 አምድ የተደረደሩ ካርቦን ዳይሬክተሮች (አምድድድድድ) የንግድ እንቅስቃሴ ያላቸው peptides እና ፕሮቲኖችን ለመለየት ሊያገለግል ይችላል። ly በንግድ ስም Ascentis Express RP-Amide አምዶች ይገኛል ነገር ግን እነዚህ አምዶች አሚን 33ን ለመተንተን ብቻ ያገለግላሉ።
አሁን ባለው ጥናት ውስጥ የፖላ-የተከተተ የማይንቀሳቀስ ደረጃ (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ተዘጋጅቶ የተገመገመው የ peptides እና trypsin digestive HSA መለያየት ነው።የቋሚ ደረጃው የተዘጋጀው በሚከተለው ስልት ነው።በቀድሞው ህትመታችን ላይ በተሰጠው አሰራር መሰረት የፖስት ሲሊካ ቅንጣቶች ተዘጋጅተዋል። ስርዓተ ክወና፣ የውሃ አሴቲክ አሲድ ትልቅ መጠን ያለው የሲሊካ ቅንጣቶችን ለማዘጋጀት ተስተካክሏል ። ሁለተኛ ፣ አዲስ ሊጋንድ ፣ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate ፣ የተቀናበረ እና የሲሊካ ቅንጣቶችን ለማሰራጨት ጥቅም ላይ ይውላል የዋልታ የተከተተ የማይንቀሳቀስ ደረጃ። የተገኘው የማይንቀሳቀስ ደረጃ ወደ አይዝጌ ብረት የታሸገ ነው × 1.0 ሚሜ የታሸገው የአምድ ብረት አምድ (1.8 opting) ነው። በአምዱ ውስጥ አንድ ወጥ የሆነ አልጋ መፈጠሩን ለማረጋገጥ በሜካኒካዊ ንዝረት። አምስት peptides ያቀፈ የፔፕታይድ ድብልቆች የታሸገ አምድ መለያየትን ይገምግሙ።(ግሊ-ታይር፣ ግሊ-ሊው-ታይር፣ ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ፣ ታይር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ፣ ሌኡሲን ኤንኬፋሊን) እና ትራይፕሲን የሰዎች የሴረም አልቡሚን (HAS) መፍጨት። የ HSA peptide ድብልቅ እና ትራይፕሲን መፈጨት ከፒ.ፒ.ኤም.ፒ. ጋር ሲነፃፀሩ በጥሩ ጥራት እና ውጤታማነት ከፒ.ፒ.ፒ. ሁለቱም peptides እና ፕሮቲኖች በ PMP አምድ ላይ በደንብ መፍትሄ እና ቀልጣፋ ሆነው ተስተውለዋል, ይህም ከ Ascentis Express RP-Amide አምድ የበለጠ ውጤታማ ነበር.
ፒኢጂ (ፖሊኢትይሊን ግላይኮል)፣ ዩሪያ፣ አሴቲክ አሲድ፣ ትሪሜቶክሲ ኦርቶሲሊኬት (TMOS)፣ ትሪሜቲል ክሎሮሲላን (TMCS)፣ ትራይፕሲን፣ የሰው ሴረም አልቡሚን (ኤችኤስኤ)፣ አሚዮኒየም ክሎራይድ፣ ዩሪያ፣ ሄክሳኔ ሜቲልዲሲላዛኔ (ኤችኤምዲኤስ)፣ ሜታክሪሎይል ክሎራይድ (ኤምሲ)፣ ስቴሪድኦክሳይድ (ኤም.ሲ.ሲ.) የ HPLC ደረጃ አሴቶኒትሪል (ACN)፣ ሜታኖል፣ 2-ፕሮፓኖል እና አሴቶን ከሲግማ-አልድሪች (ሴንት ሉዊስ፣ MO፣ ዩኤስኤ) የተገዛ።
የዩሪያ (8 ግ) ፣ ፖሊ polyethylene glycol (8 ግ) እና 8 ሚሊ 0.01 ኤን አሴቲክ አሲድ ድብልቅ ለ 10 ደቂቃዎች ተወስዷል ፣ ከዚያም 24 ሚሊ TM ኤምኦኤስ በበረዶ-ቀዝቃዛ ሁኔታዎች ውስጥ ተጨምሯል ። የምላሽ ድብልቅ በ 40 ° ሴ ለ 6 ሰአታት ይሞቃል እና ከዚያም በ 120 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ በማይዝግ ብረት ውስጥ ለ 8 ሰአታት በደረቅ ውሃ ውስጥ ይሞቃል ። 0 ° ሴ ለ 12 ሰአታት. የደረቀው ለስላሳ ክብደት በምድጃ ውስጥ ለስላሳ መሬት እና በ 550 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 12 ሰአታት ተሞልቷል. ሶስት ስብስቦች ተዘጋጅተው በንጥል መጠን, በቀዳዳ መጠን እና በንጣፍ ስፋት ላይ እንደገና መራባትን ይመረምራሉ.
የሲሊካ ቅንጣቶችን በቅድመ-የተሰራ ሊጋንድ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (ፒሲኤምፒ) በማሻሻል ራዲያል ፖሊሜራይዜሽን ከስታይሪን ጋር በመሆን የዋልታ ቡድን የያዘ ውህድ ተዘጋጅቷል።ለድምር እና ፖሊቲሪሬን ሰንሰለቶች የማይንቀሳቀስ ደረጃ.የዝግጅቱ ሂደት ከዚህ በታች ተብራርቷል.
N-phenylmaleimide (200 mg) እና methyl vinyl isocyanate (100 mg) በደረቅ ቶሉኢን ውስጥ ይሟሟቸዋል፣ እና 0.1 ሚሊ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ወደ ምላሽ ፍላሽ ተጨምሯል phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer, እና የደረቀ vinyl isocyanate copolymer 0.1 ml. በ 40 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 3 ሰዓታት የሚሆን ምድጃ.
የደረቁ የሲሊካ ቅንጣቶች (2 ግ) በደረቅ ቶሉኢን (100 ሚሊ ሊት) ውስጥ ተበታትነው በ 500 ሚሊ ሊትር ክብ የታችኛው ጠርሙስ ውስጥ ለ 10 ደቂቃ ተጨምረዋል ። ፒኤምሲፒ (10 mg) በ toluene ውስጥ ተፈትቷል እና ወደ ምላሽ ፍላሽ ጠብታ በመውደቅ ፈንገስ ውስጥ ተጨምሯል ። ድብልቁ በ 180 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተጣርቶ በ 100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተጨምሯል ። 3 ሰአታት.ከዚያም ከPMCP-Boded የሲሊካ ቅንጣቶች (100 ግራም) በቶሉይን (200 ሚሊ ሊትር) እና 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) በ 100 µL የዲቡቲልቲን ዲላራሬት እንደ ማነቃቂያ ውስጥ ተጨምረዋል. ድብልቁ በ 50 ° ሴ እና በ 8 ሰአታት ውስጥ በ 5 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተጣብቋል.
ስታይሬን (1 ሚሊ ሊትር), ቤንዞይል ፐሮክሳይድ BPO (0.5 ml), እና TEMPO-PMCP-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች (1.5 ግራም) በቶሉሊን ውስጥ ተበታትነው በናይትሮጅን ተጠርገዋል.
ናሙናዎቹ ከ 10-3 ቶር ያነሰ የቀረውን ግፊት ለማግኘት በ 393 ኪ ለ 1 ሰአት በጋዝ ተወስደዋል.የ N2 መጠን በ P / P0 = 0.99 በተመጣጣኝ ግፊት ላይ የተገጠመውን የጠቅላላውን ቀዳዳ መጠን ለመወሰን ጥቅም ላይ ይውላል. ባዶ እና ligand-bonded silica ቅንጣቶች ሞርፎሎጂ በፍተሻ, በጃፓን ቶኪዮ ማይክሮስኮፒ ቴክኖሎጅ (የጃፓን ኤችአይዲ ማይክሮስኮፕ) ናሙና በኤሌክትሮን, የጃፓን ኤችአይዲ ማይክሮስኮሪ ቴክኖሎጅ ተመርምሯል. ligand-boded silica particles) ተጣባቂ የካርቦን ቴፕ በመጠቀም በአሉሚኒየም አምድ ላይ ተቀምጠዋል።ወርቅ በ Q150T sputter coater በመጠቀም ናሙናዎች ላይ ተለጥፏል እና 5 nm Au ንብርብር በናሙናዎቹ ላይ ተቀምጧል ይህ ዝቅተኛ ቮልቴጅን በመጠቀም የሂደቱን ቅልጥፍና ያሻሽላል እና ጥሩ እህል, ቀዝቃዛ sputtering ያቀርባል.A Thermol element, MA1 ትንተና ጥቅም ላይ የዋለው ፍላሽ ኤሌመንት ዩኤስኤኤ1 ትንታኔ ነው. .A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ቅንጣት መጠን analyzer ቅንጣት መጠን ስርጭት ለማግኘት ጥቅም ላይ ውሏል ራቁታቸውን ሲሊካ ቅንጣቶች እና ligand-የተሳሰረ ሲሊካ ቅንጣቶች (5 mg እያንዳንዳቸው) isopropanol 5 mL ውስጥ ተበተኑ ነበር, sonicated ለ 10 ደቂቃ, vortexed ለ 5 ኦፕቲሜትር ትንተና ላይ ተደረገ, እና. ከ 30 እስከ 800 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ባለው የሙቀት መጠን 5 ° ሴ በደቂቃ.
በመስታወት የተደረደሩ አይዝጌ ብረት ጠባብ-ቦርሳ አምዶች የመጠን (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የዝቃጭ ማሸጊያ ዘዴን በመጠቀም የታሸጉ ናቸው፣ ይህም በማጣቀሻ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለውን ተመሳሳይ አሰራር በመተግበር ነው።31. አይዝጌ ብረት አምድ (በመስታወት የተሸፈነ፣ 100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 1 µm ፍርግር የያዘ መውጫ ፊቲንግ ከስሉሪ ፓከር (Alltech Deerfield, IL, USA) ጋር ተገናኝቷል። 150 ሚሊ ግራም የጽህፈት መሳሪያ በማገድ ወደ ሚቴን 2 mL ማከማቻ በማገድ የጽህፈት መሳሪያ ያዘጋጁ። slurry solvent እንዲሁም propelling solvent.የ 100 MP ግፊቶችን ለ 10 ደቂቃዎች, 80 MP ለ 15 ደቂቃዎች እና 60 MP ለ 30 ደቂቃዎች በመጫን ዓምዱን በቅደም ተከተል ይሙሉ. በማሸግ ወቅት, ሜካኒካል ንዝረት በሁለት የጂሲ አምድ ሻከርስ (Alltech, Deerfield, IL, USA) የአምዱ ዩኒፎርም ላይ ያለውን ጫና ለማረጋገጥ እና ቀስ በቀስ እንዲለቀቅ ለማድረግ. ዓምዱን ከስሉሪ ማሸጊያ ክፍል ያላቅቁት እና አፈፃፀሙን ለመፈተሽ ሌላ ተስማሚ ከመግቢያው እና ከ LC ስርዓት ጋር ያገናኙ።
LC ፓምፕ (10AD ሺማድዙ፣ ጃፓን)፣ ኢንጀክተር (ቫልኮ (ዩኤስኤ) C14 W.05) ከ50nL መርፌ ሉፕ ጋር፣ membrane degasser (Shimadzu DGU-14A)፣ UV-VIS capillary window ተገንብቷል ልዩ µLC መሣሪያ መፈለጊያ (UV-2075) እና በመስታወት የተደረደሩ አጭር የአዕማድ ጠባብ ጠባብ ቱቦዎች። ከታሸጉ በኋላ ካፒላሪዎች (50 μm id 365 እና የዩኒየን ካፒላሪዎችን የሚቀንሱ (50 μm) በ1/16 ኢንች በመቀነሻ ዩኒየኑ ውስጥ ተጭነዋል።መረጃ አሰባሰብ እና ክሮማቶግራፊ ሂደት የተከናወነው Multichro 2000 ሶፍትዌር በመጠቀም ነው። በ254 nm ኦሪቴይት ክትትል ለ UVginance ውሂብ፣ ኤምኤኤምኤምፕተን ዳታ በ CHromat ተፈተሸ።
አልቡሚን ከሰው ሴረም ፣ ሊዮፊላይዝድ ዱቄት ፣ ≥ 96% (አጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ) 3 mg ከትራይፕሲን (1.5 mg) ፣ 4.0 M ዩሪያ (1 ሚሊ ሊትር) እና 0.2 ሜ አሚዮኒየም ባይካርቦኔት (1 ሚሊ ሊትር) ጋር ተቀላቅሏል። መፍትሄው ለ 10 ደቂቃዎች ተነሳ እና በ 37 ዲግሪ ሴንቲግሬድ የሙቀት መጠን በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ይቀመጣል ፣ ከዚያም በ 37 ° ሴ. መፍትሄውን ይለውጡ እና ከ 4 ° ሴ በታች ያከማቹ.
የፔፕታይድ ድብልቆችን እና የ HSA ትራይፕሲን መፈጨትን መለየት በ PMP አምዶች ላይ በተናጠል ተገምግመዋል።
የ SEM ምስሎች ባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በ ligand-የተገናኙ የሲሊካ ቅንጣቶች በ FIG ውስጥ ይታያሉ.2. የቀድሞዎቹ ጥናቶች (ሀ, ለ, ለ, ለ) በተቃራኒ የሊጂንድስ-ተኮር የሲሊኪኪ ቅንጣቶች (ሐ, መ) ያላቸው ብልጭታዎች ናቸው.
በባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች (A፣ B) እና ligand-የተሳሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (ሲ፣ ዲ) የኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ ምስሎችን በመቃኘት ላይ።
ባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች እና ligand-የተሳሰረ ሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣት መጠን ማከፋፈያዎች ምስል 3 (A) ላይ ይታያሉ.ድምጽ ላይ የተመሠረተ ቅንጣት መጠን ስርጭት ኩርባዎች ኬሚካል ማሻሻያ በኋላ ሲሊካ ቅንጣቶች መጠን ጨምሯል (የበለስ. 3A) . የሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣት መጠን ስርጭት ውሂብ የአሁኑ ጥናት እና ቀዳሚው ጥናት ክፍል 5 ጋር ሲነጻጸር, ሠንጠረዥ 1 ላይ የተመሠረተ ነው. 3.36 μm፣ ካለፈው ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር ማስታወቂያ(0.5) ዋጋ 3.05 μm (የ polystyrene-bound silica particles) ቀደም ሲል የተጠና ነው።ይህ ማለት የሲሊካ ቅንጣቶችን ከስታይሪን ጋር መተግበር የፖሊቲሪኔን ንብርብር (0.97 µm) በሲሊካ ወለል ላይ ብቻ አስቀምጧል፣ በ PMP ደረጃ የንብርብሩ ውፍረት 1.38 µm ነበር።
የተራቆቱ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊንጋድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣቢ መጠን ስርጭት (A) እና ቀዳዳ መጠን ስርጭት (B)።
የአሁኑ ጥናት የሲሊካ ቅንጣቶች ስፋት ፣ ቀዳዳ መጠን እና የገጽታ ስፋት በሰንጠረዥ 1 (ለ) ውስጥ ተሰጥቷል ። የ PSD መገለጫዎች ባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች እና ligand-የተገናኙ ሲሊካ ቅንጣቶች በስእል 3 (B) ይታያሉ። ውጤቶቹ ከቀደምት ጥናታችን ጋር ይነፃፀራሉ። በሰንጠረዥ 1 (ለ) ላይ እንደሚታየው የዳግም መጠን በ 69 በኬሚካላዊ ማሻሻያ ይቀንሳል, እና የክርን ለውጥ በስእል 3 (ለ) ይታያል.በተመሳሳይ የሲሊካ ቅንጣቶች ቀዳዳ መጠን ከ 0.67 ወደ 0.58 ሴ.ሜ 3 / ሰ ከኬሚካላዊ ማስተካከያ በኋላ ይቀንሳል. በአሁኑ ጊዜ የተጠናውን የሲሊካ የተወሰነ ገጽ ስፋት 111 m2 የሚያጠናቅቅ ነው. ሰ) በሰንጠረዥ 1 (ለ) ላይ እንደሚታየው የሲሊካ ቅንጣቶች የቦታ ስፋት (m2 / g) እንዲሁም ከኬሚካል ማስተካከያ በኋላ ከ 116 m2 / g ወደ 105 m2 / g ቀንሷል.
የቋሚ ደረጃ ኤለሜንታል ትንተና ውጤቶች በሰንጠረዥ 2. የካርቦን ጭነት የአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ 6.35% ነው, ይህም ካለፈው ጥናት የካርቦን ጭነት ያነሰ ነው (polystyrene bonded silica ቅንጣቶች, 7.93% 35 እና 10.21%, በቅደም ተከተል) 42. የካርቦን ጭነት የወቅቱ ዝቅተኛ ነው, ምክንያቱም የዝግጅቱ ዝቅተኛነት ዝቅተኛ ነው, ምክንያቱም SP. እንደ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) እና 4-hydroxy-TEMPO ያሉ ጅማቶች ጥቅም ላይ ውለዋል. የናይትሮጅን ክብደት መቶኛ የአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ 2.21% ነው, 0.1735 እና 0.85% ጋር ሲነጻጸር 0.1735 ጋር ሲነጻጸር. 4) እና (5) በቅደም ተከተል 2.7% እና 2.9% ሲሆኑ የመጨረሻው ምርት (6) የካርቦን ጭነት 6.35% ነበር, በሰንጠረዥ 2. የክብደት መቀነስ በ PMP የማይንቀሳቀስ ደረጃ ላይ እንደሚታየው, እና የ TGA ጥምዝ በስእል 4. የ TGA ጥምዝ የ 8.6% የክብደት መቀነስን ያሳያል, ነገር ግን ከካርቦን ጭነት ጋር ብቻ ነው, ነገር ግን በ N 3 ላይ ያለው ስምምነት ጥሩ ነው. እና ኤች.
የ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand የሲሊካ ቅንጣቶች ላይ ላዩን ማሻሻያ ተመርጧል ምክንያቱም ይህ የዋልታ phenylmaleimide ቡድኖች እና vinylisocyanate ቡድኖች አሉት.Vinyl isocyanate ቡድኖች styrene ጋር ተጨማሪ ምላሽ ይችላሉ ሕያው አክራሪ polymerization.ሁለተኛው ምክንያት ከጣቢያው ጋር መጠነኛ መስተጋብር ያለው እና Analy መካከል ያለውን መካከለኛ መስተጋብር ያለው ቡድን እና Analy መካከል ጠንካራ ግንኙነት የለም ጀምሮ ጣቢያ. የ nylmaleimide moiety በመደበኛ ፒኤች ላይ ምንም ምናባዊ ክፍያ የለውም ። የቋሚ ደረጃው ፖላሪቲ በጥሩ የ styrene መጠን እና የነፃ ራዲካል ፖሊሜራይዜሽን ምላሽ ጊዜ ቁጥጥር ሊደረግበት ይችላል ። የምላሹ የመጨረሻ እርምጃ (ነፃ-ራዲካል ፖሊሜራይዜሽን) ወሳኝ ነው እናም የቋሚውን ክፍል ፖላሪቲ ሊለውጥ ይችላል። የማይንቀሳቀስ ደረጃ እና በተገላቢጦሽ.ኤስፒዎች በተለያየ የስታይን ክምችት የሚዘጋጁ የተለያዩ የካርቦን ጭነቶች አሏቸው።እንደገና እነዚህን ቋሚ ደረጃዎች ወደ አይዝጌ ብረት አምዶች ይጫኑ እና የክሮማቶግራፊያዊ አፈፃፀማቸውን ያረጋግጡ (ምርጫ፣ መፍታት፣ ኤን እሴት፣ ወዘተ.) በእነዚህ ሙከራዎች ላይ በመመርኮዝ የ PMP ቋሚ ደረጃን ለማዘጋጀት የተመቻቸ ፎርሙላ ተመርጧል ቁጥጥር የሚደረግበት ዋልታነት እና ጥሩ ትንተና።
አምስት የፔፕታይድ ድብልቆች (ጊሊ-ታይር, ግሊ-ሊ-ታይር, ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ, ቲር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ, ሉሲን ኢንኬፋሊን) እንዲሁም የሞባይል ደረጃን በመጠቀም የ PMP አምድ በመጠቀም ይገመገማሉ;60/40(v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA) በ 80 μL/min የፍሰት ፍጥነት።በጥሩ መለዮ ሁኔታዎች፣የቲዎሬቲካል የሰሌዳ ቁጥር (N) በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 20,000 ± 100 (200,000 ፕሌትስ/ኤምፒ ለ 3 ክሮም ሜፒ እሴት) ይሰጣል። አተግራሞች በስእል 5A. ፈጣን ትንታኔ በፒኤምፒ አምድ ላይ በከፍተኛ ፍሰት ፍጥነት (700 μL/ደቂቃ)፣ አምስት peptides በአንድ ደቂቃ ውስጥ ተፈትተዋል፣ N እሴቶች በጣም ጥሩ፣ 13,500 ± 330 በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ)፣ ከ 135,000 ፕሌትስ / ሜትር ጋር ይዛመዳል። ሚሜ መታወቂያ) በሦስት የተለያዩ የፒኤምፒ የጽህፈት መሳሪያዎች ተጨምቀው እንደገና መባዛትን ለመፈተሽ ለእያንዳንዱ አምድ የትንታኔ ትኩረት የተመዘገበው እጅግ በጣም ጥሩውን የብርሃን ሁኔታዎችን እና የቲዎሬቲካል ሳህኖችን ቁጥር በመጠቀም ነው N እና የማቆያ ጊዜ በእያንዳንዱ አምድ ላይ ተመሳሳይ የሙከራ ድብልቅን ለመለየት።
በ PMP አምድ (B) እና Ascentis Express RP-Amide አምድ (A) ላይ የ peptide ድብልቅን መለየት;የሞባይል ደረጃ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP አምድ ልኬቶች (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ);የትንታኔው የውህዶች ቅደም ተከተል-1 (ግሊ-ታይር) ፣ 2 (ግሊ-ሉ-ታይር) ፣ 3 (ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ) ፣ 4 (ታይር-ኢሌ-ግላይ-ሰር-አርግ) እና 5 (ሌይሲን) አሲድ ኢንኬፋሊን))።
የፒኤምፒ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የሂውማን ሴረም አልበሚን ትራይፕቲክ መፈጨት በከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ለመለየት ተገምግሟል።በስእል 6 ላይ ያለው ክሮማቶግራም ናሙናው በደንብ የተለያየ እና ጥራት ያለው መሆኑን ያሳያል።ኤችኤስኤ መፍጫዎቹ በ100 µL/ደቂቃ ፍሰት መጠን በ TFA 3% እና ሞባይል ፎስ 70/1. ክሮማቶግራም (ምስል 6) ፣ የ HSA መፍጨት ከ 17 peptides ጋር በሚዛመዱ 17 ጫፎች ተከፍሏል ። በ HSA መፍጨት ውስጥ ያለው የእያንዳንዱ ጫፍ መለያየት ውጤታማነት ይሰላል እና እሴቶቹ በሰንጠረዥ 5 ውስጥ ተሰጥተዋል።
የ HSA (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) tryptic diest በ PMP አምድ ላይ ተለያይቷል;የፍሰት መጠን (100 µL/ደቂቃ)፣ የሞባይል ደረጃ 60/40 አሴቶኒትሪል/ውሃ ከ0.1% TFA ጋር።
ኤል የአምዱ ርዝመት ነው ፣ η የሞባይል ደረጃ viscosity ነው ፣ ΔP የአምድ የኋላ ግፊት ነው ፣ እና u የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት ነው። የቀደመው ጥናታችን Ref.34.በላይኛው ባለ ቀዳዳ ቅንጣቶች የታሸገው የዓምዱ መተላለፊያ ነው፡ 1.7 × 10-15 ለ 1.3 μm ቅንጣቶች፣ 3.1 × 10-15 ለ 1.7 μm ቅንጣቶች፣ 5.2 × 10-15 እና 2.5 × 1μm particles ለ 2.5 × 1μm particles 43.ስለዚህ, የ PMP ደረጃ መተላለፍ ከ 5 μm ኮር-ሼል ቅንጣቶች ጋር ተመሳሳይ ነው.
Wx በክሎሮፎርም የታሸገው የዓምድ ክብደት፣ Wy በሜታኖል የታሸገው የዓምድ ክብደት፣ እና ρ የሟሟ መጠን ነው። ቀደም ብለን ያጠናናቸው ሬአ አምዶች 31 በቅደም ተከተል 0.63 እና 0.55 ናቸው.ይህ ማለት የዩሪያ ሊጋንድ መኖሩ የቋሚውን ክፍል ቅልጥፍና ይቀንሳል ማለት ነው. የማይቆሙ ደረጃዎች C18 ሊጋንዳዎች ከሲሊካ ቅንጣቶች ጋር እንደ መስመራዊ ሰንሰለቶች ተያይዘዋል ፣ በ polystyrene-አይነት ቋሚ ደረጃዎች ፣ በአንጻራዊነት ወፍራም ፖሊመር ንብርብር በዙሪያው ይመሰረታል ። በተለመደው ሙከራ ፣ የአምዱ porosity እንደሚከተለው ይሰላል ።
ምስል 7A, B የ PMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) እና Ascentis Express RP-Amide አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ተመሳሳይ የብርሃን ሁኔታዎችን (ማለትም 60/40 ACN/H2O እና 0.1% TFA) ያሳያል።) የቫን ዲምተር ሴራ.የተመረጡት የፔፕታይድ ድብልቆች (ጊሊ-ታይር፣ ግላይ-ሌው-ታይር፣ ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ፣ ታይር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ፣ ሉሲን ኢንኬፋሊን) በ20 µL ውስጥ ተዘጋጅተዋል/ የሁለቱም አምዶች ዝቅተኛው የፍሰት መጠን 800 µL/ደቂቃ ነው። ዝቅተኛው የHETPm መጠን 800 µL/ደቂቃ ነው። is Express RP-Amide አምድ 2.6 µm እና 3.9 µm እንደቅደም ተከተላቸው።የHETP እሴቶች እንደሚያመለክቱት የፒኤምፒ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የመለየት ቅልጥፍና በንግድ ከሚገኘው Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) በንግድ ከሚገኘው Ascentis Express RP-Amide አምድ የቫን 7 ዋጋ መቀነስ ያሳያል (Fig. ከቀደምት ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር ጉልህ አይደለም የ PMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ሲነፃፀር ከፍ ያለ የመለየት ውጤታማነት በአሁኑ ሥራ34 ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውሉ ጥቃቅን ቅርፅ, መጠን እና ውስብስብ የአምድ ማሸግ ሂደቶች ላይ የተመሰረተ ነው.
(A) ቫን ዴምተር ሴራ (HETP ከሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት) በፒኤምፒ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በ60/40 ACN/H2O ከ 0.1% TFA ጋር።(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) Ascentis Express RP-Amide/0 in column (CN6 mmH0) በመጠቀም የተገኘ 0.1% TFA
ከፍተኛ አፈፃፀም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ ሰው ሰራሽ የፔፕታይድ ድብልቆችን እና ትራይፕሲን መፈጨትን ለመለየት የሚያስችል የዋልታ-የተከተተ የ polystyrene የማይንቀሳቀስ ደረጃ ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። ቅንጣቶች ፣ የማይንቀሳቀስ ደረጃ ቁጥጥር የሚደረግበት ውህደት እና ውስብስብ አምድ ማሸግ ከከፍተኛ መለያየት ውጤታማነት በተጨማሪ ዝቅተኛ የአምድ የኋላ ግፊት በከፍተኛ ፍሰት መጠን የዚህ የማይንቀሳቀስ ደረጃ ሌላው ጥቅም ነው። ፒኤምፒ አምዶች ጥሩ የመራባት ችሎታን ያሳያሉ እና የፔፕታይድ ድብልቅን እና የተለያዩ ፕሮቲኖችን ትራይፕሲን መፈጨትን ለመተንተን ሊያገለግሉ ይችላሉ። chromatography.በወደፊቱ ጊዜ, የ PMP አምዶች ፕሮቲኖችን እና ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን ለመለየት ይገመገማሉ.
ፊልድ፣ JK፣ Euerby፣ MR፣ Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ስለ Peptide መለያየት ሲስተምስ በተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ ላይ የተደረገ ጥናት ክፍል አንድ፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ልማት.J.Chromatography.1603፣ 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)።
ጎሜዝ, ቢ እና ሌሎች የተሻሻለ ንቁ peptides ተላላፊ በሽታዎችን ለማከም የተነደፈ.ባዮቴክኖሎጂ.Advanced.36 (2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. ሠራሽ ቴራፒዩቲክ peptides: ሳይንስ እና ገበያ. የመድሃኒት ግኝት.15 (1-2) ዛሬ, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.12.109.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
ሊዩ፣ ደብሊው እና ሌሎች የላቀ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-ማስ ስፔክትሮሜትሪ በስፋት የታለሙ ሜታቦሎሚክስ እና ፕሮቲሞሚክስን ማካተት ያስችላል።አኑስ.ቺም.አክታ 1069፣ 89-97 (2019)።
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC በመድኃኒት ልማት ውስጥ ያለው ሚና.J.ሴፕቴምበር Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት የ ultrahigh pressure ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች.J.ሴፕቴምበር Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. እጅግ በጣም ከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በመድሃኒት ልማት ውስጥ ማመልከቻ.Chromatography.1119(1-2)፣ 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)።
ጉ, ኤች እና ሌሎች ሞኖሊቲክ ማክሮፖረስ ሃይድሮጅልስ ከዘይት-ውሃ ውስጥ ከፍተኛ የውስጥ ክፍል emulsion ለ enteroviruses ቅልጥፍና ለማጣራት.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና በፕሮቲዮቲክስ.ጄ.Chromatography.A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የቲራፔቲክ peptides እና ፕሮቲኖች መለያየት ላይ ብቅ ያሉ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች።ፋርማሲ.ባዮሜዲካል ሳይንስ.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም የተለያዩ የፒኤች እሴቶችን በመጠቀም የ peptides ሁለት-ልኬት መለያየት የመጀመሪያ እና ሁለተኛ መለያየት።ሴፕቴምበር 28 (14), 1694-1703 (2005).
ፌሌቲ፣ ኤስ እና ሌሎች በC18 ንኡስ-2 μm ሙሉ እና ላዩን ባለ ቀዳዳ ቅንጣቶች የታሸጉ ከፍተኛ ቅልጥፍና ያላቸው ክሮማቶግራፊያዊ አምዶች የጅምላ ማስተላለፊያ ባህሪያት እና የእንቅስቃሴ አፈጻጸም ተመርምሯል።ሴፕቴምበር Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.የቅርብ ጊዜ አዝማሚያዎች እና የትንታኔ ፈተናዎች የዕፅዋት ባዮአክቲቭ peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15)፣ 3425–3444
ሙለር፣ ጄቢ እና ሌሎች የሕይወት መንግሥት ፕሮቲዮሚክ መልክአ ምድር ተፈጥሮ 582(7813)፣ 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)።
DeLuca, C. et al. ቴራፒዩቲካል peptides በዝግጅት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ወደ ታች ማቀነባበር. ሞለኪውል (ባሴል, ስዊዘርላንድ) 26 (15), 4688 (2021).
ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች አተገባበር።Chromatography.A 1218(49), 8813-8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands ለድብልቅ ሁነታ ፕሮቲን ክሮማቶግራፊ፡ መርህ፣ ባህሪ እና ዲዛይን።ባዮቴክኖሎጂ.144 (1), 3-11 (2009).