Javascript معطل حاليًا في متصفحك. لن تعمل بعض ميزات هذا الموقع عند تعطيل javascript.
قم بالتسجيل مع التفاصيل الخاصة بك والأدوية المحددة التي تهمك وسنطابق المعلومات التي تقدمها مع المقالات الموجودة في قاعدة البيانات الشاملة الخاصة بنا وسنرسل إليك على الفور نسخة بتنسيق PDF عبر البريد الإلكتروني.
作者 Stella S و Vitale SR و Martorana F و Massimino M و Pavone G و Lanzafame K و Bianca S و Barone C و Gorgone C و Fichera M و Manzella L
ستيفانيا ستيلا ، 1،2 سيلفيا ريتا فيتالي ، 1،2 فيديريكا مارتورانا ، 1،2 ميشيل ماسيمينو ، 1،2 جوليانا بافوني ، 3 كاتيا لانزافام ، 3 سيباستيانو بيانكا ، 4 كيارا بارون ، 5 كريستينا جورجون ، 6 ماركو فيشيرا ، 6 ، 7 ليفيا مانزيلا ، 1،21 قسم الطب السريري والتجريبي ، جامعة هيمانيا ، 95 ology، AOU Policlinico "G.Rodolico - San Marco" ، كاتانيا ، 95123 ، إيطاليا ؛3 طب الأورام ، AOU Policlinico “G.Rodolico - San Marco "، كاتانيا ، 95123 ، إيطاليا ؛4 علم الوراثة الطبية ، ARNAS Garibaldi ، كاتانيا ، 95123 ، إيطاليا ؛5 الطب الوراثي ، ASP ، سيراكيوز ، 96100 ، إيطاليا ؛6 قسم علوم الطب الحيوي والتكنولوجيا الحيوية ، جامعة كاتانيا ، علم الوراثة الطبية ، كاتانيا ، إيطاليا ، 95123 ؛7Oasi Research Institute-IRCCS، Troina، 94018، Italy الاتصالات: Stefania Stella، tel +39095378 1946، email [email protected] ؛[البريد الإلكتروني محمي] الغرض: طفرات السلالة الجرثومية في BRCA1 و BRCA2 وسرطان الثدي الثابت (BC) والمبيض (OC) وغير ذلك من العوامل المرتبطة بخطر الإصابة بالسرطان مدى الحياة. يعد اختبار جين BRCA أمرًا أساسيًا لتقييم المخاطر الفردية ، وكذلك لإيجاد طرق الوقاية في ناقلات صحية وعلاجات مخصصة لمرضى السرطان. هناك نقص في الدراسات التي تستهدف السكان في شرق صقلية على وجه التحديد ، وكان الهدف من دراستنا هو التحقيق في حدوث وتوزيع BRCA التغيرات في السلالة الجرثومية المسببة للأمراض BRCA في مجموعة من مرضى BC من شرق صقلية ولتقييم ارتباطهم بسمات معينة قبل الميلاد باستخدام تسلسل الجيل التالي. ) في BRCA2 ، تنتشر تعديلات BRCA1 في مرضى BCA2 السلبية الثلاثية ، في حين أن طفرات BRCA2 أكثر شيوعًا في مرضى BC اللومينيين. فحص RCA للوقاية والعلاج المناسبين من السرطان في ناقلات الطفرات.
سرطان الثدي (BC) هو الورم الخبيث الأكثر شيوعًا في جميع أنحاء العالم والسرطان الأكثر فتكًا عند النساء .1 تمت دراسة السمات البيولوجية التي تحدد تشخيص BC والسلوك السريري على نطاق واسع وتوضيحها جزئيًا بمرور الوقت ، وفي الواقع ، تُستخدم حاليًا العديد من العلامات البديلة لتصنيف BC إلى أنواع فرعية جزيئية مختلفة ، وهي هرمون الاستروجين (ER) و / أو مستقبلات هرمون البروجسترون (2) ، ومستقبلات هرمون البروجسترون (2). أو الصف (G) .2 حددت مجموعة هذه المتغيرات فئات BC التالية: 1) الأورام اللمعية ، التي تظهر تعبير ER و / أو PgR ، تمثل 75 ٪ من BCs. تم تقسيم هذه الأورام أيضًا إلى Luminal A ، عندما كان Ki-67 أقل من 20 ٪ و HER2 سالبًا ، و Luminal B ، عندما كان Ki-67 مساويًا أو أعلى من مؤشر HER2 ، وبغض النظر عن انتشار HER2 ؛2) أورام HER2 + سلبية ER و PgR ولكنها تظهر تضخيم HER2. تمثل هذه المجموعة 10٪ من جميع أورام الثدي.3) سرطان الثدي الثلاثي السلبي (TNBC) ، الذي لا يظهر تعبير ER و PgR وتضخيم HER2 ، يمثل حوالي 15٪ من سرطانات الثدي.
من بين هذه الأنواع الفرعية قبل الميلاد ، تمثل درجة الورم ومؤشر الانتشار مؤشرات حيوية مقطعية مرتبطة بشكل مباشر ومستقل مع عدوانية الورم والتنبؤ به.
بالإضافة إلى السمات البيولوجية المذكورة أعلاه ، فإن دور التعديلات الجينية الموروثة التي تؤدي إلى تطور BC أصبح مهمًا بشكل متزايد خلال السنوات القليلة الماضية .7 يتم توريث حوالي 1 من كل 10 أورام ثدي بسبب تغيرات في السلالة الجرثومية في جينات معينة. من بين هذه الجينات ، أظهر BRCA1 و BRCA2 (المشار إليهما فيما يلي بـ BCA1 / 2) أقوى ارتباط في تطور أورام الثدي من 9-12 عامًا ، طفرات السلالة الجرثومية BRCA1 / 2 تزيد بشكل كبير من خطر الإصابة بـ BCA1 / 2 بالإضافة إلى الأورام الخبيثة الأخرى ، بما في ذلك المبيض والبروستاتا والبنكرياس واللون. النساء المصابات بمتغير ممرض BRCA1 (PV) و 69٪ لدى النساء المصابات بـ BRCA2 PV.14
والجدير بالذكر أن منشورًا حديثًا يشير إلى أن مخاطر BC تعتمد على نوع PV. في الواقع ، بالمقارنة مع متغيرات الاقتطاع المسببة للأمراض ، ترتبط المتغيرات الخاطئة الصارخة ، خاصة في جين BRCA1 ، بانخفاض خطر الإصابة بـ BC ، خاصة عند النساء الأكبر سنًا.
ارتبط وجود BRCA1 أو BRCA2 PV بخصائص بيولوجية وإكلينيكية مختلفة. .16-18 على وجه الخصوص ، تزيد الطفرات في BRCA1 و BRCA2 من الحساسية تجاه علاجات معينة ، بما في ذلك أملاح البلاتين والأدوية المستهدفة مثل مثبطات بوليميريز بولي (ADP-ribose) (PARPi).
على مدى السنوات القليلة الماضية ، مكّن تنفيذ تسلسل الجيل التالي (NGS) في الممارسة السريرية عددًا متزايدًا من مرضى BC من الخضوع للاختبار الجزيئي لمتلازمات قابلية الإصابة بالسرطان ، بما في ذلك BRCA1 / 2.21 في الوقت نفسه ، تسليط الضوء على التعريفات المستندة إلى معايير دقيقة فيما يتعلق بتاريخ العائلة والخصائص الديموغرافية والمرضية لتحديد الأفراد الذين يستحقون اختبار BRCA1 / 2 بشكل أفضل. .24-27 على الرغم من وجود تقارير عن مجموعة كولومبيا البريطانية في غرب صقلية ، تتوفر بيانات أقل عن فحص BRCA1 / 2 في سكان صقلية الشرقية.
نصف هنا نتائج فحص السلالة الجرثومية BRCA1 / 2 في مرضى BC من شرق صقلية ، مما يزيد من ربط وجود طفرات BRCA1 أو BRCA2 بالسمات الإكلينيكية الرئيسية لهذه الأورام.
أجريت دراسة بأثر رجعي في "مركز الأورام التجريبي وعلم الدم" في مستشفى بوليكلينكو. رودوليو - سان ماركو في كاتانيا. من يناير 2017 إلى مارس 2021 ، تم إحالة ما مجموع قدم Sinki ، وجميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة قبل التحليل الجزيئي.
تم تقييم الخصائص النسيجية والبيولوجية (ER ، PgR ، HER2 ، Ki-67 ، والدرجة) من BC على خزعة أساسية أو عينات جراحية ، مع الأخذ في الاعتبار مكونات الورم العدوانية فقط ، واستناداً إلى هذه الخصائص ، تم تصنيف BCs على النحو التالي: اللمعة A (ER + و / أو PgR + ، HER2- ، Ki-67 <20٪) ، اللمعة أو B2-g + ، Ki-67 <20٪) ، Luminal B2-g + ، HER2 + (ER و / أو PgR + ، HER2 +) ، HER2 + (ER و PgR- ، HER2 +) أو ثلاثي سلبي (ER و PgR- ، HER2-).
قبل تقييم حالة طفرة BRCA1 و BRCA2 ، أجرى فريق متعدد التخصصات بما في ذلك اختصاصي الأورام ، وعلم الوراثة ، وطبيب نفساني استشارة في علم الوراثة الورمية لكل مريض لتحديد وجود BRCA1 و / أو BRCA1.أو الأفراد المعرضين لخطر الإصابة بالفطريات الكهروضوئية في جين BRCA2. تم إجراء اختيار المريض وفقًا لإرشادات الجمعية الإيطالية لعلم الأورام الطبية (AIOM) والتوصيات المحلية الصقلية 30،31 تشمل هذه المعايير: (1) تاريخ العائلة من المتغيرات المسببة للأمراض المعروفة في جينات القابلية للإصابة (على سبيل المثال ، BRCA1 ، BRCA2 ، TP53 ، PTEN) ؛(2) الذكور مع BC ؛(3) أولئك الذين لديهم BC و OC ؛(4) النساء اللواتي يعانين من BC <36 سنة ، TNBC <60 سنة ، أو ثنائي BC <50 سنة ؛(5) التاريخ الطبي الشخصي قبل الميلاد <50 سنة وقريب واحد على الأقل من الدرجة الأولى: (أ) قبل الميلاد <50 سنة ؛(ب) OC غير المخاطي وغير الحدودي من أي عمر ؛(ج) ثنائي قبل الميلاد ؛(د) ذكر ق.(هـ) سرطان البنكرياس ؛(و) سرطان البروستاتا ؛(6) تاريخان أو أكثر من التاريخ الشخصي قبل الميلاد> 50 عامًا والتاريخ العائلي لسرطان BC أو OC أو سرطان البنكرياس للأقارب الذين هم أقارب من الدرجة الأولى لبعضهم البعض (بما في ذلك الأقارب الذين تربطهم أقارب من الدرجة الأولى) ؛(7) التاريخ الشخصي لـ OC وقريب واحد على الأقل من الدرجة الأولى: (أ) BC <50 سنة ؛(ب) شهادة عدم الممانعة ؛(ج) ثنائي قبل الميلاد ؛(د) ذكر ق.(vii) أنثى ذات OC مصلي عالي الدرجة.
تم الحصول على عينة دم محيطية 20 مل من كل مريض وتم جمعها في أنابيب EDTA (BD Biosciences). تم عزل الحمض النووي الجيني من عينات دم كاملة 0.7 مل باستخدام مجموعة QIAsymphony DSP DNA Midi Kit (QIAGEN ، Hilden ، إيطاليا) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة وتمريرها من خلال مقياس التألق Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific ، Waltham.يتم إجراء الإثراء المستهدف وإعداد المكتبة بواسطة طاهِ Oncomine ™ BRCA Research Assay Chef ، وهو جاهز للتحميل في مجموعة Ion AmpliSeq ™ Chef Reagents DL8 لتحضير المكتبة آليًا وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تتكون المجموعة من مجموعتين من مجمعات PCR الأولية متعددة الإرسال التي يمكن استخدامها لدراسة جميع عينات BRCA1 (NM_0070000.3) و BRCA2 (15.BRCA2). تم إضافة) إلى لوحات الباركود لإعداد المكتبة وتم تحميل جميع الكواشف والمواد الاستهلاكية على أداة Ion Chef ™. ثم تم إجراء التحضير الآلي للمكتبة وتجميع مكتبة العينات ذات الرمز الشريطي على أداة Ion Chef ™ ، ثم تم تقييم عدد المكتبات المعدة بواسطة مقياس التألق Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific ، أنابيب عينة MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مجمعة وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. ) وتحميلها على أداة Ion Chef ™. تم إجراء التسلسل باستخدام أداة Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) باستخدام Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). تم إجراء تحليل البيانات بواسطة Amplicon Suite (SmartSeq srl) وبرنامج Ion Reporter.
اتبعت جميع التسميات المتغيرة الإرشادات الحالية لاتحاد تنوع الجينوم البشري ، المتاح عبر الإنترنت (HGVS ، http://www.hgvs.org/mutnomen). تم تحديد الأهمية السريرية لمتغيرات BRCA1 / 2 باستخدام تصنيف الاتحاد الدولي ENIGMA (الشبكة المستندة إلى الأدلة لتفسير Germline Mutant Alleles ، https://enigmaconsortX) ، IARC_LOVD و UMD يشتمل التصنيف على خمس فئات مخاطر متميزة: حميدة (الفئة الأولى) ، من المحتمل أن تكون حميدة (الفئة الثانية) ، متغير ذو أهمية غير مؤكدة (VUS ، الفئة الثالثة) ، مسببة للأمراض (الفئة الرابعة) ، ومسببة للأمراض (الفئة الخامسة) ، حللت VarSome أيضًا تأثير الطفرات على بنية البروتين ووظيفته ، وهي أداة إعلامية مع إمكانية الوصول إلى 30 قاعدة بيانات.
لتعيين أهمية سريرية محتملة لكل VUS ، تم استخدام خوارزميات التنبؤ الحسابية التالية للبروتين: MUTATION TASTER ، 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php) ، POLYPHEN-2 (http: // /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) و (http://u-gvag.edu/pph2/) php). تم اعتبار المتغيرات المصنفة في الفئة 1 و 2 من النوع البري.
أكد تسلسل سانجر وجود كل متغير ممرض ، باختصار ، تم تصميم زوج من البادئات المحددة لكل متغير تم اكتشافه باستخدام التسلسل المرجعي للجين BRCA1 و BRCA2 (NG_005905.2 ، NM_007294.3 و NG_012772.3 ، NM_000059.3 ، على التوالي) ، لذلك تم إجراء تسلسل PCR المستهدف.
تم اختبار المرضى الذين تم اختبارهم بشكل سلبي على جين BRCA1 / 2 عن طريق تضخيم المجس المعتمد على الربط المتعدد (MLPA) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة لتقييم وجود إعادة ترتيب جينومية كبيرة (LGR). ثم تم تحليلها عن طريق الرحلان الكهربي الشعري وبرنامج Cofalyser.Net جنبًا إلى جنب مع جداول Cofalyser الخاصة بالدفعة المناسبة (www.mrcholland.com).
ارتبطت المتغيرات الإكلينيكية المختارة (الدرجة النسيجية ومؤشر انتشار Ki-67٪) بوجود BRCA1 / 2 PV ، محسوبة باستخدام برنامج Prism v. 8.4 باستخدام اختبار فيشر الدقيق بافتراض أن قيمة p <0.05 لتكون مهمة.
بين يناير 2017 ومارس 2021 ، تم فحص 455 مريضًا بحثًا عن طفرات السلالة الجرثومية BRCA1 / 2. تم إجراء اختبار الطفرة في مركز مستشفى بوليكلينيكو للأورام التجريبية وأمراض الدم ، وفقًا للمبادئ التوجيهية الصقلية (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm ، N. ، 37 سرطان مبيض، 16 سرطان بنكرياس، 8 سرطان البروستاتا و 5 سرطان الجلد.يوضح الشكل 1 توزيع المرضى حسب نوع السرطان ونتائج التحليل.
يوضح الشكل 1 مخطط تدفق يوضح نظرة عامة على الدراسة. تم اختبار المرضى الذين يعانون من أورام الثدي أو سرطان الجلد أو البنكرياس أو البروستاتا أو المبيض بحثًا عن طفرات في جينات BRCA1 و BRCA2.
الاختصارات: PVs ، المتغير المسببة للأمراض ؛VUS ، متغير ذو دلالة غير مؤكدة ؛WT ، تسلسل من النوع البري BRCA1 / 2.
ركزنا دراساتنا بشكل انتقائي على مجموعات سرطان الثدي ، وكان متوسط ​​عمر المرضى 49 عامًا (النطاق 23-89) وكان معظمهم من الإناث (العدد = 376 ، أو 97٪).
من بين هؤلاء الأشخاص ، كان 64 (17٪) لديهم طفرات BRCA1 / 2 وكانوا جميعًا إناثًا ، وخمسة وثلاثون (9٪) لديهم PV و 29 (7.5٪) لديهم VUS. حدث سبعة عشر (48.6٪) من 35 نوعًا من المتغيرات المسببة للأمراض في BRCA1 و 18 (51.4٪) في BRCA2 ، بينما حدث 5 VUS في BRCA1 (17.2٪) و 24 (الشكل 1). تحليل السلطة الفلسطينية.
الشكل 2. تحليل طفرات BRCA1 و BRCA2 في 389 مريض بسرطان الثدي (أ) توزيع المتغيرات المسببة للأمراض (PV) (الأحمر) ، المتغيرات ذات الأهمية غير المؤكدة (VUS) (البرتقالية) ، و WT (الأزرق) في 389 مريض بسرطان الثدي ؛(ب) 389 مريضًا بسرطان الثدي خمسة وثلاثون (9٪) لديهم متغيرات مسببة للأمراض من BRCA1 / 2 ، من بينهم 17 (48.6٪) حاملات BRCA1 PV (أحمر غامق) و 18 (51.4٪) حاملات BRCA2 (أحمر فاتح) ؛(C) 29 (7.5٪) من 389 شخصًا يحملون VUS ، 5 ​​(17.2٪) جينات BRCA1 (برتقالي داكن) و 24 (82.8٪) جينات BRCA2 (برتقالي فاتح).
الاختصارات: PVs ، المتغير المسببة للأمراض ؛VUS ، متغير ذو دلالة غير مؤكدة ؛WT ، تسلسل من النوع البري BRCA1 / 2.
قمنا بعد ذلك بالتحقيق في انتشار الأنواع الفرعية الجزيئية BC في المرضى الذين يعانون من BRCA1 / 2 PV ، وشمل التوزيع 2 (5.7 ٪) اللمعة A ، 15 (42.9 ٪) اللمعة B ، 3 (8.6 ٪) Luminal B-HER2 + ، 2 (5.7 ٪) HER2 + و 13 (37.1 ٪) من مرضى TNBC. كان لدى 58.8٪ من الورم TNBC ، وكانت الأورام التي لا تحتوي على طفرات BRCA1 إما اللمعية A أو اللمعية B-HER2 + (الشكل 3) ، وفي المجموعة الفرعية الإيجابية BRCA2 ، كانت الأورام 10 (55.6٪) من اللمعية B ، 3 (16.7٪) كانت اللمعية B-HER2 + ، 3 (16.7٪) TNBC و 2 (11.1٪) وهكذا كانت المجموعة 2 (11.1٪). تنتشر طفرات RCA1 في مرضى TNBC ، في حين أن تعديلات BRCA2 هي السائدة في أفراد التجويف B.
الشكل 3 انتشار الأنواع الفرعية لسرطان الثدي في المرضى الذين يعانون من متغيرات مسببة للأمراض في BRCA1 و BRCA2. الرسوم البيانية توضح توزيع BRCA1- (أحمر غامق) و BRCA2- (أحمر فاتح) PVs بين الأنواع الفرعية الجزيئية لمرضى سرطان الثدي. تمثل الأرقام المبلغ عنها داخل كل مربع النسبة المئوية للمرضى الذين يعانون من BRCA1 و BRCA2 PV لكل نوع فرعي من سرطان الثدي.
الاختصارات: PVs ، المتغير المسببة للأمراض ؛HER2 + ، مستقبل عامل نمو البشرة البشري 2 إيجابي ؛TNBC ، سرطان الثدي الثلاثي السلبي.
بعد ذلك ، قمنا بتقييم نوع وتوطين الجينات لـ BRCA1 و BRCA2 PV. في BRCA1 PV ، لاحظنا 7 متغيرات نيوكليوتيد مفردة (SNVs) ، 6 عمليات حذف ، 3 ازدواج وإدخال واحد ، طفرة واحدة فقط (c.5522delG) تمثل اكتشافًا جديدًا. ) في BRCA1 exon 15 ، مما أدى إلى استبدال ليسين الأحماض الأمينية بالتيروزين في الكودون 1679 ، وبسبب تغيير إطار الترجمة مع كودون إيقاف بديل متوقع يؤدي إلى اقتطاع بروتين سابق لأوانه ، تم الكشف عن جميع التغييرات الأخرى في حالة واحدة فقط ، وتجدر الإشارة إلى أن واحدة من PVs المبلغ عنها كانت موجودة في منطقة توافق موقع لصق (c.4357 + 1G).
فيما يتعلق بـ BRCA2 PV ، لاحظنا 6 عمليات حذف و 6 SNV و 2 تكرار. لم يتم العثور على أي من التغييرات التي تم العثور عليها جديدة ، تكررت ثلاث طفرات في مجتمعنا ، c.428dup و c.8487 + 1G> A تمت ملاحظتها في 3 موضوعات ، تليها c.5851_5854delAGTT تم استردادها في حالتين. .8487 + 1G> تحدث طفرة في المنطقة intron من BRCA2 intron 19 (± 1،2) وتؤثر على تسلسل توافق الربط ، مما يؤدي إلى التضفير المتغير مما يؤدي إلى بروتين غير طبيعي أو غائب. كودون التوقف البديل المتوقع (p.S1951WfsTer) بشكل ملحوظ ، كما ورد سابقًا ، تم اكتشاف كلا التعديلين c.631G> A و c.7008-2A> T في نفس المريض .34 الطفرة الأولى تتضمن استبدال الأدينوزين (A) في BRCA2 exon 7 بغوانين (G) المحتوي على النيوكليوتيد مما يؤدي إلى تغيير حمض أميني مشابه في الكود إلى 211. يؤثر على الربط الطبيعي للـ mRNA. يقع المتغير الثاني في منطقة intronic وينتج عنه استبدال مزدوج من A إلى thymine (T) قبل exon 13 من الجين المشفر BRCA2 ، وقد ينتج تغيير c.7008-2A> T نسخًا متعددة بأطوال مختلفة ، علاوة على ذلك ، في مجموعة BRCA2 PVs ، كانت 4 من أصل 18 تغييرًا (22.2٪).
قمنا بعد ذلك بتعيين الطفرات الضارة BRCA1 / 2 في المجالات الوظيفية ومناطق ربط البروتين (الشكل 4). في جين BRCA1 ، كانت نسبة 50 ٪ من الخلايا الكهروضوئية في منطقة كتلة سرطان الثدي (BCCR) ، بينما كانت 22 ٪ من الطفرات موجودة في منطقة كتلة سرطان المبيض (OCCR) (الشكل 4A). R (الشكل 4 ب) بعد ذلك ، قمنا بتقييم موقع PV داخل مجالات البروتين BRCA1 و BRCA2. بالنسبة لبروتين BRCA1 ، وجدنا ثلاثة PVs في مجالات الحلقة والملف الملفوف ، وطفرتين في مجال BRCT (الشكل 4 أ). ونطاقات البرج (T) (الشكل 4 ب).
الشكل 4 تمثيل تخطيطي لبروتينات BRCA1 و BRCA2 وتوطين المتغيرات المسببة للأمراض هذا الشكل يوضح توزيع المتغيرات المسببة للأمراض BRCA1 (A) و BRCA2 (B) في مرضى سرطان الثدي ، وتظهر الطفرات الخارجية باللون الأزرق ، بينما تظهر المتغيرات intronic باللون البرتقالي ، ويمثل ارتفاع الشريط عدد الحالات المبلغ عنها ، والمجالات الوظيفية BRCA1 و BRCA2. وتسلسل التوطين النووي (NLS) ، ومجال الملف الملفوف ، ومجال الكتلة SQ / TQ (SCD) ، والمجال الطرفي BRCA1 C (BRCT). (ب) يحتوي بروتين BRCA2 على ثمانية مكررات BRC ، ومجال ربط الحمض النووي مع مجال حلزوني (حلزوني) ، وثلاثة طيات قليلة النوكليوتيد / أليغوساكاريد). منطقة مجموعة سرطان الثدي (BCCR) ومنطقة مجموعة سرطان المبيض (OCCR) موضحة في الأسفل. * تمثل الطفرات التي تحدد أكواد الإيقاف.
قمنا بعد ذلك بالتحقيق في السمات السريرية المرضية في كولومبيا البريطانية والتي قد ترتبط بوجود BRCA1 / 2 PV. كانت السجلات السريرية الكاملة متاحة لـ 181 مريضًا سلبيًا من BRCA1 / 2 (غير حاملين) وجميع الناقلين (ن = 35) ، وكان هناك ارتباط بين معدل انتشار الورم ودرجته.
حسبنا توزيع Ki-67 استنادًا إلى متوسط ​​مجموعتنا (25٪ ، النطاق <10-90٪). تم تعريف الموضوعات التي تحتوي على Ki-67 <25٪ على أنها "منخفضة Ki-67 ، بينما اعتبر الأفراد ذوو القيم ≥ 25٪" مرتفع Ki-67. تم العثور على اختلافات كبيرة Ki-67 (P <0.01) بين الناقلات غير الحاملة لـ PVA1 (P <0.01).
الشكل 5 ارتباط Ki-67 مع توزيع الدرجات في النساء المصابات بسرطان الثدي مع وبدون BRCA1 و BRCA2 PVs. (أ) Boxplot يظهر قيم Ki-67 الوسيطة في 181 مريضًا غير ناقل قبل الميلاد مقابل BRCA1 (18) أو BRCA2 (17) مرضى PV اعتبرت قيم P أقل من 0.5 ذات دلالة إحصائية. الحالة (مواضيع WT ، ناقلات BRCA1 و BRCA2 PVs).
وبالمثل ، قمنا بفحص ما إذا كانت درجة الورم مرتبطة بوجود BRCA1 / 2 PV. نظرًا لأن G1 BC كان غائبًا في مجتمعنا ، قمنا بتقسيم المرضى إلى مجموعتين (G2 أو G3) ، تمشيا مع نتائج Ki-67 ، كشف التحليل عن وجود علاقة ذات دلالة إحصائية بين درجة الورم وطفرة BRCA1 ، مع نسبة أعلى من ناقلات الأورام غير G3 في الشكل BRCA5.
مكّن التقدم في تكنولوجيا تسلسل الحمض النووي من تحقيق تقدم غير مسبوق في الاختبار الجيني BRCA1 / 2 ، مع آثار حاسمة على المرضى الذين لديهم تاريخ عائلي للإصابة بالسرطان. حتى الآن ، تم تحديد وتصنيف ما يقرب من 20.000 BRCA1 / 2 متغيرًا وفقًا للجمعية الأمريكية لعلم الوراثة الطبية 35 ونظام ENIGMA. ٪ ، مما يُظهر تباينًا واسعًا داخل البلد .38،39 يبلغ عدد سكانها ما يقرب من 5 ملايين ، صقلية هي خامس أكبر منطقة في إيطاليا من حيث عدد السكان. على الرغم من وجود بيانات حول توزيع BRCA1 / 2 في غرب صقلية ، لا يوجد دليل واسع في الجزء الشرقي من الجزيرة.
دراستنا هي واحدة من التقارير الأولى عن حدوث BRCA1 / 2 PV في مرضى BC في شرق صقلية .28 ركزنا تحليلنا على BC ، حيث أن هذا هو المرض الأكثر شيوعًا في مجموعتنا.
عند اختبار 389 مريضًا قبل الميلاد ، كان 9٪ منهم يحملون BRCA1 / 2 PVs ، موزعة بالتساوي بين BRCA1 و BRCA2. تتوافق هذه النتائج مع تلك التي تم الإبلاغ عنها سابقًا في السكان الإيطاليين. 28 ومن المثير للاهتمام ، أن 3٪ (13/389) من مجموعتنا كانوا من الذكور ، وهذا المعدل أعلى من المتوقع لسرطان الثدي عند الذكور (1٪ من جميع BCS) ، مما يعكس اختيارنا لهذه المجموعات السكانية بناءً على طفرة BRCA1 ، ومع ذلك ، فإن PVA1 لم يتم تطويرها على الإطلاق. كانوا مرشحين لمزيد من التحليل الجزيئي لاستبعاد وجود طفرات أقل شيوعًا مثل PALB2 و RAD51C و D ، من بين أمور أخرى. تم استرداد المتغيرات ذات الأهمية غير المؤكدة في 7 ٪ من الموضوعات التي كان فيها BRCA2 VUS واضحًا ، حتى هذه النتيجة تتوافق مع الأدلة الموجودة مسبقًا.
عندما قمنا بتحليل توزيع الأنواع الفرعية الجزيئية BC في النساء المتحولات BRCA1 / 2 ، أكدنا الارتباطات المعروفة بين TNBC و BRCA1 PV (58.8 ٪) وبين اللمعة B BC و BRCA2 PV (55.6 ٪) .16،43 الأورام اللمعية A و HER2 + في ناقلات الأدب BRCA1 و BRCA2 PV متوافقة مع البيانات الحالية.
ثم نركز على نوع وموقع BRCA1 / 2 PV. في مجموعتنا ، كان BRCA1 PV الأكثر شيوعًا هو c.5035_5039delCTAAT ، على الرغم من Incorvaia et al.لم يصف هذا المتغير في مجموعة صقلية ، فقد أبلغ مؤلفون آخرون أنه سلالة جرثومية BRCA1 PV.34 تم العثور على العديد من BRCA1 PVs في مجموعتنا - على سبيل المثال c.181T> G و c.514del و c.3253dupA و c.5266dupC - والتي لوحظت في صقلية. يهود أوروبا الشرقية والوسطى (بولندا ، التشيك) ​​، السلوفينية ، النمساوية ، المجرية ، البيلاروسية والألمانية) ، 44،45 ، وفي الولايات المتحدة والأرجنتين ، تم تعريفهم مؤخرًا على أنهم "متغير جرثومي متكرر" في المرضى الإيطاليين الذين يعانون من BC و OC. تم تحديد متغير 34c.514del مسبقًا في 8 مرضى سرطان الثدي من شمال صقلية في باليرمو وميسينا.وجدت متغير c.3253dupA في بعض العائلات في كاتانيا .28 أكثر أنواع BRCA2 PVs تمثيلا هي c.428dup ، c.5851_5854delAGTT والمتغير intronic c.8487 + 1G> A ، والتي تم الإبلاغ عنها بمزيد من التفصيل 28 في مريض في باليرمو مع c.428dup ، c.5851_5Terno شمال غرب المناطق تمت ملاحظتها بشكل رئيسي في المناطق الشمالية الغربية. ، بينما لوحظ c.5851_5854delAGTT PV في المنازل في شمال غرب صقلية ، كان البديل 8487 + 1G> أكثر شيوعًا في مواضيع ميسينا وباليرمو وكالتانيسيتا.وصفت سابقًا تغيير c.5851_5854delAGTT في كولومبيا. 37 تم العثور على BRCA2 PV آخر ، حوالي 631 + 1G> A ، في مرضى BC و OC من صقلية (Agrigento و Siracusa و Ragusa). ، كما تم الإبلاغ سابقًا مثل هذا .34،46 هذه الطفرات BRCA2 uble يتم ملاحظتها بشكل متكرر بالفعل في المنطقة الإيطالية وقد تم العثور عليها لإدخال أكواد الإيقاف المبكرة ، مما يؤثر على تضفير الحمض النووي الريبي المرسال وتسبب في فشل بروتين BRCA2.
قمنا أيضًا بتعيين BRCA1 و BRCA2 PVs في مناطق OCCR و BCCR المفترضة لنطاقات وجينات البروتين. تم وصف هذه المناطق بواسطة Rebbeck et al.كمناطق خطر للإصابة بسرطان المبيض والثدي ، على التوالي .49 ومع ذلك ، فإن الدليل المتعلق بالعلاقة بين موقع متغيرات السلالة الجرثومية وخطر الإصابة بسرطان الثدي أو المبيض لا يزال مثيرًا للجدل. من المرضى الذين يعانون من طفرات BRCA1 / 2. من منظور مجال البروتين ، يتم توزيع BRCA1 PVs على طول البروتين بأكمله ، ويتم العثور على تعديلات BRCA2 بشكل تفضيلي في مجال تكرار BRC.
أخيرًا ، قمنا بربط السمات السريرية المرضية في BC مع BRCA1 / 2 PV. نظرًا للعدد المحدود من المرضى المشمولين ، وجدنا فقط ارتباطًا مهمًا بين Ki-67 ودرجة الورم. على الرغم من أن تقييم وتفسير Ki-67 لا يزال مثيرًا للجدل إلى حد ما ، فمن المؤكد أن معدلات التكاثر العالية مرتبطة بزيادة خطر تكرار المرض وانخفاض معدل البقاء على قيد الحياة. القديم لا ينطبق على مجموعة مرضى طفرة BRCA1 / 2 لدينا ، والتي تبلغ متوسط ​​قيمة Ki-67 بنسبة 25٪ ، ويمكن تفسير هذا الاتجاه في معدلات Ki-67 المرتفعة من خلال الانتشار في مجموعات Buminal B و TNBC ، والتي كان هناك عدد قليل من أورام Luminal A. الشعور بالغبطة ليس مفاجئًا ، يحدث بين مستويات Ki-67 العالية والدرجات ووجود BRCA1 PV. في الواقع ، الأورام المرتبطة بـ BRCA1 هي نموذجية لـ TNBC وتظهر ميزات أكثر عدوانية.
في الختام ، تقدم هذه الدراسة تقريرًا عن الحالة الطفرية لـ BRCA1 / 2 في مجموعة BC من شرق صقلية. بشكل عام ، تتوافق نتائجنا مع الأدلة الموجودة مسبقًا ، سواء من حيث انتشار الطفرات والميزات السريرية المرضية في كولومبيا البريطانية. مزيد من الدراسات في مجموعات أكبر من مرضى BRCA1 / 2-mutant BC ، مثل استخدام تحليل الطفرات الموسعة متعددة الجينات ، سوف يكون له ما يبرره أقل من وجود تحليل الطفرات BRCA المتكرر. والإدارة السليمة للعدد المتزايد من الأشخاص المعرضين لخطر الإصابة بالسرطان بسبب الطفرات الجينية.
أكدنا أن المرضى وقعوا موافقة مستنيرة للإفراج عن عينات الورم الخاصة بهم بشكل مجهول لأغراض البحث. وقع جميع المرضى موافقة مستنيرة مكتوبة وفقًا لإعلان هلسنكي. وفقًا لسياسة AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco" ، تم استثناء هذه الدراسة من المراجعة الأخلاقية لأن تحليل BRCA1 / 2 تم إجراؤه وفقًا للممارسة السريرية وأعطى جميع المرضى أيضًا موافقة مستنيرة على استخدام البحث.
نشكر البروفيسور باولو فينيري على مساعدته في رعاية مرضى سرطان الثدي بناءً على طلب لجنة الأخلاقيات.
أبلغت Federica Martorana عن تكريم من Istituto Gentili و Eli Lilly و Novartis و Pfizer. أعلن المؤلفون الآخرون عدم وجود تضارب في المصالح في هذا العمل.
1. Sung H ، Ferlay J ، Siegel RL ، et al. إحصائيات السرطان العالمية 2020: يقدر GLOBOCAN حدوث ووفيات 36 سرطانًا في 185 دولة حول العالم. CA Cancer J Clin.2021 ؛ 71 (3): 209-249.doi: 10.3322 / caac.21660