Javascript hazırda brauzerinizdə deaktivdir. Javascript deaktiv edildikdə bu vebsaytın bəzi funksiyaları işləməyəcək.
Xüsusi təfərrüatlarınız və xüsusi maraq doğuran dərmanlarınızla qeydiyyatdan keçin və biz geniş məlumat bazamızdakı məqalələrlə təmin etdiyiniz məlumatı uyğunlaşdıracağıq və dərhal PDF nüsxəsini sizə elektron poçtla göndərəcəyik.
məsələn Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefaniya Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Expertia Barone, 6 Marco Ficherella Lizera12 və C. Tibb, Kataniya Universiteti, Kataniya, 95123, İtaliya; 2 Eksperimental Onkologiya və Hematologiya Mərkəzi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Kataniya, 95123, İtaliya;3 Tibbi Onkologiya, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Kataniya, 95123, İtaliya;4 Tibbi Genetika, ARNAS Garibaldi, Kataniya, 95123, İtaliya;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, İtaliya;6 Biotibbi və Biotexnologiya Elmləri Bölməsi, Kataniya Universiteti, Tibbi Genetika, Kataniya, İtaliya, 95123;7Oasi Tədqiqat İnstitutu-IRCCS, Troina, 94018, İtaliya Kommunikasiyalar: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-poçt [email protected];[email protected] Məqsəd: BRCA1 və BRCA2-də mikrob xətti mutasiyaları və ömür boyu xərçəng riski ilə əlaqəli müəyyən edilmiş döş xərçəngi (BC), yumurtalıq (OC) və digərləri. BRCA geni üçün test fərdi riski qiymətləndirmək, həmçinin sağlam daşıyıcılarda profilaktika üsullarını tapmaq və xərçəng xəstələrində müalicə üsullarını tapmaq üçün açardır. Siciliya ailələrində BRCA patogen variantları mövcuddur, xüsusi olaraq şərq Siciliyadakı populyasiyaları hədəf alan tədqiqatlar yoxdur. Tədqiqatımızın məqsədi şərq Siciliyadan olan BC xəstələrinin bir qrupunda BRCA patogen germline dəyişikliklərinin tezliyini və yayılmasını araşdırmaq və onların spesifik BC-nin mövcudluğu ilə əlaqəsini qiymətləndirmək idi. NƏTİCƏLƏR: Ümumilikdə, 35 xəstə (9%) BRCA patogen variantına malik idi, BRCA1-də 17 (49%) və BRCA2-də 18 (51%). BRCA1 dəyişiklikləri üçlü mənfi BC olan xəstələrdə üstünlük təşkil edir, halbuki BRCA2 mutasiyaları daha çox luminal subyektli, BRCA-1 ilə müqayisədə daha yüksək BRCA variantı olan xəstələrdə müşahidə olunur. və proliferativ indeks.Nəticələr: Bizim tapıntılarımız Siciliyanın şərqindən olan BC xəstələrinin BRCA mutasiya statusu haqqında ümumi məlumat verir və irsi BC olan xəstələrin müəyyən edilməsində NGS analizinin rolunu təsdiqləyir. Ümumiyyətlə, bu məlumatlar mutasiya daşıyıcılarında xərçəngin düzgün qarşısının alınması və müalicəsi üçün BRCA skrininqini dəstəkləyən əvvəlki sübutlarla uyğundur.
Döş xərçəngi (BC) dünyada ən çox görülən bədxassəli xəstəlikdir və qadınlarda ən ölümcül xərçəngdir.1 BC proqnozunu və klinik davranışını müəyyən edən bioloji xüsusiyyətlər geniş şəkildə tədqiq edilmiş və zamanla qismən aydınlaşdırılmışdır. Əslində, hazırda BC-ni müxtəlif molekulyar alt tiplərə təsnif etmək üçün bir neçə surroqat marker istifadə olunur. Onlar estrogen/reseptor reseptorları (reseptorları) və insan faktorlarıdır. və ya 2 (HER2) gücləndirmə, yayılma indeksi Ki-67 və şiş dərəcəsi (G).2 Bu dəyişənlərin kombinasiyası aşağıdakı BC kateqoriyalarını müəyyən etdi: 1) ER və/və ya PgR ifadəsini göstərən lüminal şişlər BC-lərin 75%-ni təşkil edirdi. Bu şişlər Luminal A-ya daha da bölündü, Ki-6 və Ki-6-dan aşağı olduqda, bu şişlər mənfi olduqda, Luminal A və Ki-2-dən aşağı olduqda yayılma indeksindən asılı olmayaraq HER2 gücləndirilməsinin mövcudluğunda və 20%-ə bərabər və ya yuxarı idi;2) ER və PgR mənfi olan, lakin HER2 gücləndirilməsini göstərən HER2+ şişləri. Bu qrup bütün döş şişlərinin 10%-ni təşkil edir;3) ER və PgR ifadəsini və HER2 amplifikasiyasını göstərməyən üçlü mənfi döş xərçəngi (TNBC) döş xərçənginin təxminən 15%-ni təşkil edir.2-4
Bu BC alt tipləri arasında şiş dərəcəsi və proliferasiya indeksi birbaşa və müstəqil olaraq şişin aqressivliyi və proqnozu ilə əlaqəli olan kəsikli biomarkerləri təmsil edir.5,6
Yuxarıda qeyd olunan bioloji xüsusiyyətlərə əlavə olaraq, BC-nin inkişafına səbəb olan irsi genetik dəyişikliklərin rolu son bir neçə ildə getdikcə daha çox əhəmiyyət kəsb edir.7 Təxminən 10 döş şişindən 1-i spesifik genlərdə cücərmə xəttinin dəyişməsi səbəbindən miras alınır.8 180,000-dən çox qadını əhatə edən iki böyük epidemioloji tədqiqat (ABR1, ABR1, 180,000-dən çox qadını əhatə edir. BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C və RAD51D) ilk növbədə irsi BC-dən məsuldur. Bu genlər arasında BRCA1 və BRCA2 (bundan sonra BRCA1/2 adlandırılacaq) döş şişlərinin inkişafı ilə ən güclü korrelyasiya göstərmişdir. yumurtalıq, prostat, mədəaltı vəzi, kolorektal və melanoma daxil olmaqla.
Qeyd etmək lazımdır ki, son nəşrdə BC riskinin PV tipindən asılı olduğu göstərilir. Əslində, patogen kəsilmə variantları ilə müqayisədə, xüsusilə də BRCA1 genində gözə çarpan missense variantları, xüsusilə yaşlı qadınlarda BC riskinin azalması ilə əlaqələndirilir.15
BRCA1 və ya BRCA2 PV-nin olması müxtəlif bioloji və klinikopatoloji xüsusiyyətlərlə əlaqələndirilir.16,17 BRCA1 ilə əlaqəli BC-lər klinik cəhətdən aqressiv, zəif differensial və yüksək proliferativ olurlar. Bu şişlər adətən üçqat mənfi olur və erkən başlanğıc yaşına malikdirlər. və dəyişkən proliferativ indekslər. Bu şişlər B lümenində daha çox rast gəlinir və adətən yaşlı yetkinlərdə baş verir.16-18 Xüsusilə, BRCA1 və BRCA2-dəki mutasiyalar xüsusi müalicələrə, o cümlədən platin duzlarına və poli(ADP-riboza) polimeraza inhibitorları (PARPi) kimi hədəflənmiş dərmanlara həssaslığı artırır.19,22
Son bir neçə il ərzində yeni nəsil ardıcıllığın (NGS) klinik praktikada tətbiqi BC xəstələrinin sayının artmasına BRCA1/2.21 daxil olmaqla, xərçəngə qarşı həssaslıq sindromları üçün molekulyar testlərdən keçməyə imkan verdi. Bu kontekstdə coğrafi bölgələr üzrə fərqləri vurğulayan spesifik populyasiyalarda BRCA1/2 skrininqinə dair sübutlar toplanır.24-27 Qərbi Siciliyada BC kohortu haqqında hesabatlar olsa da, şərq Siciliya əhalisinin BRCA1/2 skrininqinə dair daha az məlumat mövcuddur.28,29
Biz burada BRCA1 və ya BRCA2 mutasiyalarının mövcudluğunu bu şişlərin əsas klinikopatoloji xüsusiyyətləri ilə daha da əlaqələndirərək, Siciliyanın şərqindən olan BC xəstələrində germline BRCA1/2 skrininqinin nəticələrini təsvir edirik.
Kataniyadakı Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco nəzdində “Eksperimental Onkologiya və Hematologiya Mərkəzində” retrospektiv tədqiqat aparılıb. 2017-ci ilin yanvarından 2021-ci ilin martına qədər süd vəzi və yumurtalıq, melanoma, mədəaltı vəzi və ya prostat vəzinin xərçəngi və ya prostat vəzi xərçəngi genetik diaqnostikası üçün 455 xəstə göndərilib2. onun tədqiqatı Helsinki Bəyannaməsinə uyğun olaraq aparılıb və bütün iştirakçılar molekulyar analizdən əvvəl yazılı razılıq veriblər.
BC-nin histoloji və bioloji xüsusiyyətləri (ER, PgR, HER2 statusu, Ki-67 və dərəcə) əsas biopsiya və ya cərrahi nümunələrdə yalnız aqressiv şiş komponentləri nəzərə alınmaqla qiymətləndirilmişdir. Bu xüsusiyyətlərə əsasən, BC-lər aşağıdakı kimi təsnif edilmişdir: luminal A (ER+ və/və ya PgR+, HER2-2, PgR+, HER2-%, B+R, PgR+, PgR+, PgR+, 6<2/0, Pg+0), HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER və/və ya PgR+, HER2+), HER2+ (ER və PgR-, HER2+) və ya üçlü mənfi (ER və PgR-, HER2-).
BRCA1 və BRCA2 mutasiyalarının vəziyyətini qiymətləndirməzdən əvvəl onkoloq, genetik və psixoloq daxil olmaqla multidissiplinar komanda BRCA1 və/və ya BRCA1-in mövcudluğunu müəyyən etmək üçün hər bir xəstə üçün şiş genetikası üzrə məsləhətləşmələr aparmışdır.və ya BRCA2 genində PV riski yüksək olan şəxslər. Xəstə seçimi İtaliya Tibbi Onkologiya Cəmiyyətinin (AIOM) təlimatlarına və yerli Siciliya tövsiyələrinə uyğun olaraq aparılmışdır.30,31 Bu meyarlara aşağıdakılar daxildir: (i) həssaslıq genlərində məlum patogen variantların ailə tarixi (məsələn, BRCA1, BRCA2, EN);(ii) BC olan kişilər;(iii) BC və OC olanlar;(iv) BC <36 yaş, TNBC <60 yaş və ya ikitərəfli BC <50 yaş olan qadınlar;(v) BC <50 il və ən azı bir birinci dərəcəli qohumun şəxsi xəstəlik tarixi: (a) BC <50 il;(b) istənilən yaşda qeyri-musinoz və qeyri-sərhəd OK;(c) ikitərəfli BC;(d) kişi BC;(e) mədəaltı vəzi xərçəngi;(f) prostat xərçəngi;(vi) iki və ya daha çox şəxsi tarixdə BC > 50 yaş və ailədə BC, OK və ya bir-biri ilə birinci dərəcəli qohum olan qohumlar üçün mədəaltı vəzi xərçəngi (o cümlədən onun birinci dərəcəli qohum olduğu qohumlar);(vii) OK-nin şəxsi tarixi və ən azı bir birinci dərəcə qohumu: (a) BC <50 yaş;(b) NOC;(c) ikitərəfli BC;(d) kişi BC;(vii) yüksək dərəcəli seroz OC olan qadın.
Hər bir xəstədən 20 mL periferik qan nümunəsi alınmış və EDTA borularına (BD Biosciences) yığılmışdır. Genomik DNT istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq QIAsymphony DSP DNT Midi dəsti İzolyasiya Kitindən (QIAGEN, Hilden, İtaliya) istifadə edərək 0,7 mL tam qan nümunələrindən təcrid edilmişdir (Qubit. , Waltham, MA, USA) Kəmiyyəti təyin edin.Hədəfin zənginləşdirilməsi və kitabxananın hazırlanması istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq avtomatlaşdırılmış kitabxana hazırlamaq üçün Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Dəstinə yüklənməyə hazır olan Oncomine™ BRCA Research Assay Chef tərəfindən həyata keçirilir. Dəst bütün BRCA1 və (NMCA_05.03) öyrənmək üçün istifadə oluna bilən iki multipleks PCR primer hovuzundan ibarətdir. genlər.Qısaca, hər bir seyreltilmiş nümunə DNT-dən 15 µL (10 ng) kitabxananın hazırlanması üçün ştrix kodlu lövhələrə əlavə edildi və bütün reagentlər və istehlak materialları Ion Chef™ alətinə yükləndi. Daha sonra Ion Chef™ alətində avtomatlaşdırılmış kitabxananın hazırlanması və ştrix kodlu nümunə kitabxanasının birləşdirilməsi həyata keçirildi. tific, Waltham, MA, ABŞ) istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq. Nəhayət, kitabxanalar Ion Chef™ kitabxana nümunə borularında (ştrix kodlu borular) ekvimolyar nisbətlərdə birləşdirilir və Ion Chef™ alətinə yüklənir. Ardıcıllıq Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientifrmo5 (Thermo Fisher Scientifrmo) Thermo Fisher (Thermo Fisher Scientifrmo5) aləti ilə həyata keçirilib. Fisher Scientific).Məlumatların təhlili Amplicon Suite (SmartSeq srl) və Ion Reporter Software tərəfindən həyata keçirilib.
Bütün variant nomenklaturası İnsan Genomunun Dəyişikliyi Konsorsiumunun onlayn (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) mövcud təlimatlarına əməl etdi. BRCA1/2 variantlarının klinik əhəmiyyəti Beynəlxalq Konsorsium ENIGMA (Sübüdlərə əsaslanan Germline Şəbəkəsinin Interpreting All Consultium, https://present.consult.consultium) təsnifatından istifadə etməklə müəyyən edilmişdir. ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD və UMD kimi müxtəlif verilənlər bazalarını əhatə edir. Təsnifat beş fərqli risk kateqoriyasını ehtiva edir: xoşxassəli (I kateqoriya), ehtimal ki, xoşxassəli (II kateqoriya), qeyri-müəyyən əhəmiyyətə malik variant (VUS, III kateqoriya), ehtimal patogen (IV kateqoriya) və V kateqoriyalı zülalların təhlili aləti, həmçinin mutasiya edilmiş zülal strukturuna V-kateqoriyasının analizi. 30 verilənlər bazasına giriş imkanı ilə.32
Hər bir VUS-a potensial klinik əhəmiyyət təyin etmək üçün aşağıdakı hesablama zülal proqnozlaşdırma alqoritmlərindən istifadə edilmişdir: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/http:///genetics.bwh.harvard.edu/http://pph2hd.Gv. u/agvgd_input.php).1 və 2-ci sinif kimi təsnif edilən variantlar vəhşi tip hesab olunurdu.
Sanger ardıcıllığı hər bir patogen variantın mövcudluğunu təsdiqlədi. Qısaca olaraq, BRCA1 və BRCA2 gen istinad ardıcıllığından (NG_005905.2, NM_007294.3 və NG_012772.3, NM_030-a hörmətlə yerinə yetirildi, PC5 tərəfindən yerinə yetirildi) istifadə edilməklə, aşkar edilmiş hər bir variant üçün bir cüt xüsusi primerlər hazırlanmışdır. ger sıralaması.
BRCA1/2 geni üçün mənfi olan xəstələr istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq çoxlu liqasiyadan asılı zond gücləndirilməsi (MLPA) ilə sınaqdan keçirilmişdir. Qısaca olaraq, DNT nümunələri denatürasiya olunur və 60-a qədər BRCA1 və BRCA2 geninin təqribən hər birində spesifik nüsxələrin aşkarlanması üçün istifadə olunur. PCR amplikonlarının unikal dəstindən ibarət olan uzunluq. Zond gücləndirmə məhsulları daha sonra kapilyar elektroforez və müvafiq partiyaya aid Cofalyser cədvəlləri (www.mrcholland.com) ilə birlikdə Cofalyser.Net proqramı ilə təhlil edildi.
Seçilmiş klinikopatoloji dəyişənlər (histoloji dərəcə və Ki-67% proliferasiya indeksi) BRCA1/2 PV-nin mövcudluğu ilə əlaqələndirilmişdir, Prism proqram təminatı v. 8.4-dən istifadə etməklə hesablanmış, Fisherin dəqiq testindən istifadə edərək p-dəyərinin <0.05 əhəmiyyətli olduğunu fərz etməklə hesablanmışdır.
2017-ci ilin yanvarından 2021-ci ilin martına qədər 455 xəstə rüşeym xətti BRCA1/2 mutasiyaları üçün yoxlanılıb. Mutasiya testi Policlinico Xəstəxanasının Eksperimental Onkologiya və Hematologiya Mərkəzində aparılıb. Siciliya təlimatına uyğun olaraq (http://www.gurs.regione. Gennaio 2020), Rodolico of Catania – San Marco” ümumilikdə 389 xəstə Döş xərçəngi, 37 yumurtalıq xərçəngi, 16 mədəaltı vəzi xərçəngi, 8 prostat xərçəngi və 5 melanoma var.Xəstələrin xərçəng növünə görə bölgüsü və analiz nəticələri Şəkil 1-də göstərilmişdir.
Şəkil 1 tədqiqatın icmalını göstərən axın cədvəlini göstərir. Döş, melanoma, mədəaltı vəzi, prostat və ya yumurtalıq şişləri olan xəstələr BRCA1 və BRCA2 genlərində mutasiyalar üçün sınaqdan keçirilmişdir.
İxtisarlar: PVs, patogen variant;VUS, qeyri-müəyyən əhəmiyyətin variantı;WT, vəhşi tipli BRCA1/2 ardıcıllığı.
Biz tədqiqatlarımızı seçmə şəkildə döş xərçəngi kohortlarına yönəltdik. Xəstələrin orta yaşı 49 (aralıq 23-89) idi və əsasən qadınlar (n=376 və ya 97%) idi.
Bu subyektlərdən 64-ü (17%) BRCA1/2 mutasiyasına malik idi və hamısı qadın idi. Otuz beşində (9%) PV, 29-da (7.5%) VUS var idi. 35 patogen variantdan on yeddisi (48.6%) BRCA1-də, 18-i (51.4%) BRCA2-də, 18-i (51.4%) BRCA2-də, 582-si isə BRCA2-də (%18). BRCA2-də (Şəkil 1 və 2). LGR MLPA analizində mövcud deyildi.
Şəkil 2. 389 döş xərçəngi xəstəsində BRCA1 və BRCA2 mutasiyalarının təhlili.(A) 389 süd vəzi xərçəngi xəstəsində patogen variantların (PV) (qırmızı), qeyri-müəyyən əhəmiyyətə malik variantların (VUS) (narıncı) və WT (mavi) paylanması;(B) 389 döş xərçəngi xəstəsi Otuz beşində (9%) BRCA1/2 patogen variantları (PV) var idi. Onların 17-si (48.6%) BRCA1 PV daşıyıcısı (tünd qırmızı) və 18-i (51.4%) BRCA2 daşıyıcısı (açıq qırmızı) idi;(C) 389 subyektdən 29-u (7.5%) VUS, 5-i (17.2%) BRCA1 geni (tünd narıncı) və 24-ü (82.8%) BRCA2 geni (açıq narıncı) daşımışdır.
İxtisarlar: PVs, patogen variant;VUS, qeyri-müəyyən əhəmiyyətin variantı;WT, vəhşi tipli BRCA1/2 ardıcıllığı.
Biz daha sonra BRCA1/2 PV olan xəstələrdə BC molekulyar alt tiplərinin yayılmasını araşdırdıq. Paylanmaya 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ və 13 (37%) HER2+ və 13 (37%) TAA11g pozitiv xəstə (37%) daxil idi. 9.4%-də luminal B BC, 2-də (11.8%) HER2+ xəstəliyi, 10-da (58.8%) TNBC var idi. BRCA1 mutasiyaları olmayan şişlər ya luminal A, ya da luminal B-HER2+ idi (Şəkil 3). BRCA2-müsbət yarımqrupda 10 luminal (%) luminal (%), B-10.6.5 idi. B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC və 2 (11,1%) luminal A idi (Şəkil 3 ).Bu qrupda HER2+ şişləri mövcud deyildi. Beləliklə, BRCA1 mutasiyaları TNBC xəstələrində, BRCA2 dəyişiklikləri isə lümen B fərdlərində üstünlük təşkil edir.
Şəkil 3 BRCA1 və BRCA2-də patogen variantları olan xəstələrdə döş xərçəngi alt növlərinin yayılması. Döş xərçəngi xəstələrinin molekulyar alt tipləri arasında BRCA1- (tünd qırmızı) və BRCA2- (açıq qırmızı) PV-lərin paylanmasını göstərən histoqramlar. Hər qutuda bildirilən rəqəmlər BRCA1 və BRCA2 alt tipləri üçün döş xərçəngi olan xəstələrin faizini təmsil edir.
İxtisarlar: PVs, patogen variant;HER2+, insan epidermal böyümə faktoru reseptoru 2 müsbət;TNBC, üçlü mənfi döş xərçəngi.
Sonradan biz BRCA1 və BRCA2 PV-lərinin növünü və gen lokalizasiyasını qiymətləndirdik. BRCA1 PV-də biz 7 tək nukleotid variantı (SNV), 6 silinmə, 3 dublikasiya və 1 daxiletmə müşahidə etdik. Yalnız bir mutasiya (c.5522delG) BRCA1-də yeni kəşfi təmsil edir. delCTAAT.Bu dəyişiklik BRCA1 ekson 15-də beş nukleotidin (CTAAT) silinməsini əhatə edir, nəticədə 1679-cu kodonda amin turşusu leysini tirozinlə əvəz edir və proqnozlaşdırılan alternativ dayandırma kodonu ilə tərcümə çərçivəsinin dəyişməsi səbəbindən vaxtından əvvəl PV-də yalnız bir zülalın kəsilməsinin aşkar edilmədiyi bildirilir. birləşmə sahəsinin konsensus bölgəsi (c.4357+1G>T) (Cədvəl 1).
BRCA2 PV ilə bağlı biz 6 delesiya, 6 SNV və 2 dublikasiya müşahidə etdik. Tapılan dəyişikliklərin heç biri yeni deyil. Üç mutasiya populyasiyamızda təkrarlandı, c.428dup və c.8487+1G>A, 3 subyektdə müşahidə edildi, ardınca c.5851_5854delTTp-nin iki təkrarlanması c.5851_5854del AG2-də təkrarlandı. BRCA2-nin 5-ci ekzonunda, kəsilmiş, qeyri-funksional zülalın kodlaşdırılması proqnozlaşdırılır. C.8487+1G>A mutasiya BRCA2 intron 19-un intronik bölgəsində baş verir (± 1,2) və splicing konsensus ardıcıllığına təsir edir, nəticədə anormal splicing və ya anormal patoloji c.5TT51-a səbəb olur. BRCA2 geninin kodlaşdırma ekson 10-da 5851-dən 5854-ə qədər olan nukleotid mövqelərindən 4-nukleotidin silinməsi ilə əlaqədardır və proqnozlaşdırılan alternativ dayanma kodonu (p.S1951WfsTer) ilə translyasiya çərçivəsinin dəyişməsi ilə nəticələnir. Qeyd olunduğu kimi, daha əvvəl bildirildiyi kimi, hər iki dəyişiklik c>01G> və c>07.A-da aşkar edilmişdir. 4 Birinci mutasiya BRCA2 ekson 7-də adenozinin (A) 211-ci kodonda valinin izolösinlə dəyişməsi ilə nəticələnən guanin (G) tərkibli nukleotidlə əvəz olunmasını nəzərdə tutur, izolösin Amin turşusu çox oxşar xüsusiyyətlərə malik amin turşusudur. Bu dəyişiklik normal mRNT-yə təsir edir və ikincisi A-da ikiqat subonik birləşmiş bölgədə yerləşir. BRCA2-ni kodlayan genin 13-də. c.7008-2A>T dəyişikliyi müxtəlif uzunluqlu çoxsaylı transkriptlər yarada bilər. Bundan başqa, BRCA2 PV-lər qrupunda 18 dəyişiklikdən 4-ü (22.2%) intronik idi.
Daha sonra funksional domenlərdə və zülal bağlayan bölgələrdə BRCA1/2 zərərli mutasiyaların xəritəsini çəkdik (Şəkil 4). BRCA1 genində PV-lərin 50%-i döş xərçəngi klaster bölgəsində (BCCR), mutasiyaların 22%-i isə yumurtalıq xərçəngi klaster bölgəsində (OCCR) yerləşirdi (Şəkil 4. PVBRCA3-ün variantı, PVBR 4A7-də yerləşir). CR bölgəsi və mutasiyaların 42,8%-i OCCR-də yerləşmişdir (Şəkil 4B). Sonra, biz BRCA1 və BRCA2 zülal domenləri daxilində PV-nin yerini qiymətləndirdik. BRCA1 zülalı üçün biz döngə və qıvrımlı rulon domenlərində üç PV tapdıq və BRCT domenində iki mutasiya tapdıq (Şəkil 4B). Oliqo/oliqosaxarid bağlayan (OB) və qala (T) domenlərində 3 intronik və 3 ekzonik dəyişiklik aşkar edilmişdir (Şəkil 4B).
Şəkil 4 BRCA1 və BRCA2 zülallarının sxematik təsviri və patogen variantların lokalizasiyası. Bu rəqəm döş xərçəngi xəstələrində BRCA1 (A) və BRCA2 (B) patogen variantlarının paylanmasını göstərir. Ekzonik mutasiyalar mavi, intronik variantlar isə narıncı rəngdə göstərilmişdir. Çubuğun hündürlüyü halların sayını və onların BRCABR zülalının (BRCA21) bildirilmiş funksiyasını göstərir. zülal bir döngə domeni (RING) və nüvə lokalizasiya ardıcıllığını (NLS), qıvrımlı bir domen, bir SQ/TQ klaster domeni (SCD) və BRCA1 C-terminal domeni (BRCT) ehtiva edir.(B) BRCA2 zülalında səkkiz BRC təkrarı, bir DNT-ni bağlayan domen (helikal domen) var, üç qatlı domen (helikal-qatlanma) qüllə domeni (T) və C tərəfində NLS. Aşağıda Döş Xərçəngi Klaster Regionu (BCCR) və Yumurtalıq Xərçəngi Bölgəsi (OCCR) adlanan ərazilər göstərilir.*Stop kodonlarını təyin edən mutasiyaları təmsil edir.
Daha sonra BRCA1/2 PV-nin mövcudluğu ilə əlaqələndirilə bilən BC klinikopatoloji xüsusiyyətlərini araşdırdıq. 181 BRCA1/2-mənfi xəstə (daşıyıcı olmayan) və bütün daşıyıcı (n = 35) üçün tam klinik qeydlər mövcud idi. Şişin yayılma sürəti və dərəcəsi arasında korrelyasiya var idi.
Biz Ki-67-nin paylanmasını kohortumuzun mediana əsasən hesabladıq (25%, diapazon <10-90%). Ki-67 < 25% olan subyektlər “aşağı Ki-67” olaraq təyin olundu, ≥ 25% dəyərə malik şəxslər isə “yüksək Ki-67” hesab edildi. daşıyıcılar (şək. 5A).
Şəkil 5 BRCA1 və BRCA2 PV-ləri olan və olmayan döş xərçəngi qadınlarda dərəcə paylanması ilə Ki-67-nin korrelyasiyası.(A) BRCA1 (18) və ya BRCA2 (17) PV xəstələrinə qarşı 181 daşıyıcı olmayan BC xəstəsində median Ki-67 dəyərlərini göstərən qutu grafiği. BRCA1 və BRCA2 mutasiya vəziyyətinə uyğun olaraq histoloji dərəcə qrupları (G2 və G3) (WT subyektləri, BRCA1 və BRCA2 PV daşıyıcıları).
Eyni şəkildə, biz şiş dərəcəsinin BRCA1/2 PV-nin olması ilə korrelyasiya olub-olmadığını araşdırdıq. G1 BC populyasiyamızda olmadığı üçün xəstələri iki qrupa (G2 və ya G3) ayırdıq. Ki-67 nəticələrinə uyğun olaraq, təhlil şiş dərəcəsi ilə BRCA1-in yüksək mutasiyaya uğramış avtomobili ilə müqayisədə GBR1 proportlu olmayan avtomobillər arasında statistik əhəmiyyətli korrelyasiya aşkarladı. riers (p<0.005) (Şəkil 5B).
DNT sıralama texnologiyasındakı irəliləyişlər BRCA1/2 genetik testlərində görünməmiş irəliləyişlərə imkan verdi və bu, ailədə xərçəng tarixi olan xəstələr üçün mühüm nəticələrə səbəb oldu. Bu günə qədər təxminən 20.000 BRCA1/2 variantı Amerika Tibbi Genetika Cəmiyyəti 35 və EN5CA3BR mutasiya sisteminə uyğun olaraq təsnif edilmiş və təsnif edilmişdir. coğrafi bölgələr arasında geniş şəkildə dəyişir.37 İtaliya daxilində BRCA1/2 PV-lərin nisbəti geniş ölkədaxili dəyişkənlik nümayiş etdirərək 8%-dən 37%-ə qədər dəyişdi.38,39 Demək olar ki, 5 milyon əhalisi olan Siciliya sakinlərin sayına görə İtaliyanın beşinci ən böyük bölgəsidir. Baxmayaraq ki, BRCA-nın şərqdə paylanmasına dair məlumatlar mövcud deyil12. adanın bir hissəsi.
Tədqiqatımız Siciliyanın şərqində BC xəstələrində BRCA1/2 PV tezliyi ilə bağlı ilk hesabatlardan biridir.28 Biz təhlilimizi BC-yə yönəltdik, çünki bu, bizim kohortumuzda ən çox yayılmış xəstəlikdir.
Eramızdan əvvəl 389 xəstəni sınaqdan keçirərkən, 9% BRCA1/2 PV-ləri daşıdı, BRCA1 və BRCA2 arasında bərabər paylandı. Bu nəticələr İtaliya populyasiyasında əvvəllər bildirilənlərə uyğundur.28 Maraqlıdır ki, kohortumuzun 3%-i (13/389) kişi idi. Bu nisbət bizim kişilərin döş xərçəngi növlərinə əsaslanaraq gözləniləndən daha yüksəkdir (BCCA 14/21), mutasiya riski.Lakin, bu kişilərin heç biri BRCA1/2 PV inkişaf etdirmədi, ona görə də onlar başqaları arasında PALB2, RAD51C və D kimi daha az yayılmış mutasiyaların mövcudluğunu istisna etmək üçün əlavə molekulyar analiz üçün namizəd idilər. Qeyri-müəyyən əhəmiyyətə malik variantlar BRCA2 VUS-un olduğu subyektlərin 7%-də əldə edilmişdir.
BRCA1 / 2 mutant qadınlardakı BC molekulyar altlıqların paylanmasını təhlil etdikdə, TNBC və BRCA1 PV (58.8%) və BRCA2 və BRCA2 PV daşıyıcıları arasındakı tanınmış dərnəkləri təsdiqlədik. 16,43
Biz daha sonra BRCA1/2 PV-nin növünə və yerinə diqqət yetiririk. Bizim kohortumuzda ən çox yayılmış BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT idi. Baxmayaraq ki, Incorvaia et al.Siciliya kohortunda bu variantı təsvir etməmişdir, digər müəlliflər onu rüşeym xətti BRCA1 PV kimi bildirmişlər.34 Bizim kohortumuzda bir neçə BRCA1 PV aşkar edilmişdir – məsələn, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA və c.5266dupC – bunlar SBR118-də iki mutasiya aşkar edilmişdir. >G və c.5266dupC) adətən Şərqi və Mərkəzi Avropanın Aşkenazi yəhudilərində (Polşa, Çexiya), Sloveniya, Avstriya, Macarıstan, Belarusiya və Alman ), 44,45 və ABŞ və Argentinada bu yaxınlarda “təkrarlanan cücərmə xətti variantı” kimi müəyyən edilmişdir. Siciliya Palermo və Messina. Maraqlıdır ki, hətta Incorvaia et al.Kataniyadakı bəzi ailələrdə c.3253dupA variantını tapdı.28 Ən çox təmsil olunan BRCA2 PV-ləri c.428dup, c.5851_5854delAGTT və intronik variant c.8487+1G>A-dır, bunlar daha ətraflı şəkildə 28 Palermodakı bir xəstədə c.425845-də c.425848 evində müşahidə edilmişdir. Siciliyanın şimal-qərbində, əsasən Trapani və Palermo bölgələrində, halbuki c.5851_5854delAGTT PV Siciliyanın şimal-qərbindəki ev təsərrüfatlarında müşahidə edilmişdir. 8487+1G>A variantı Messina, Palermo və Kaltanissettadan olan subyektlərdə daha çox yayılmışdır.28 Rebbeck et al.daha əvvəl Kolumbiyada c.5851_5854delAGTT dəyişikliyini təsvir etmişdi.37 Başqa bir BRCA2 PV, c.631+1G>A, Siciliyadan (Agrigento, Siracusa və Ragusa) BC və OC xəstələrində aşkar edilmişdir.28 Qeyd etmək lazımdır ki, biz iki BRCA2 və c.1AG variantının birgə mövcudluğunu müşahidə etdik (BRCA2 c.-1G>06). daha əvvəl bildirildiyi kimi cis rejimində ayrıldığını güman etdiyimiz eyni xəstədə.34,46 Bu BRCA2 uble mutasiyaları həqiqətən də İtaliya bölgəsində tez-tez müşahidə olunur və messencer RNT-nin birləşdirilməsinə təsir edən və BRCA2 zülalının uğursuzluğuna səbəb olan vaxtından əvvəl dayandırma kodonlarını təqdim etdiyi aşkar edilmişdir.47,48
Biz həmçinin zülal domenlərinin və genlərinin ehtimal olunan OCCR və BCCR bölgələrində BRCA1 və BRCA2 PV-lərinin xəritəsini çəkdik. Bu bölgələr Rebbeck və digərləri tərəfindən təsvir edilmişdir.müvafiq olaraq yumurtalıq və döş xərçəngi inkişafı üçün risk sahələri kimi.49 Bununla belə, rüşeym xətti variantlarının yeri ilə döş və ya yumurtalıq xərçəngi riski arasında əlaqə ilə bağlı sübutlar mübahisəli olaraq qalır.28,50-52 Bizim əhalimizdə BRCA1 PV-lər əsasən BCCR bölgəsində yerləşirdi, halbuki biz BRCA2-dən əvvəlki PVX bölgələrində heç bir yer tapmadıq. ehtimal olunan OCCR və BCCR bölgələri və BC xüsusiyyətləri arasında əlaqə. Bu, BRCA1/2 mutasiyaları olan xəstələrin məhdud sayı ilə əlaqədar ola bilər. Protein sahəsi baxımından, BRCA1 PV-ləri bütün protein boyunca paylanır və BRCA2 dəyişiklikləri BRC təkrar domenində üstünlük təşkil edir.
Nəhayət, biz BC klinikopatoloji xüsusiyyətlərini BRCA1/2 PV ilə əlaqələndirdik. Daxil olan xəstələrin məhdud sayına görə biz yalnız Ki-67 ilə şiş dərəcəsi arasında əhəmiyyətli korrelyasiya tapdıq. Ki-67-nin qiymətləndirilməsi və şərhi bir qədər mübahisəli olsa da, yüksək proliferativ nisbətlərin xəstəliyin təkrarlanma riskinin artması və azalma tarixi ilə əlaqəli olduğu şübhəsizdir. yüksək” və “aşağı” Ki-67 20% təşkil edir. Bununla belə, bu həddi Ki-67-nin median dəyəri 25% olan BRCA1/2 mutasiya xəstəsi populyasiyamıza şamil edilmir. Ki-67-nin yüksək dərəcələrindəki bu tendensiya, luminal B və TNBC kohortlarımızda yayılma ilə izah edilə bilər, bunlardan bəziləri A-H6-nın daha yüksək olduğunu göstərir. 7 cutoff (25-30%) xəstələri proqnozlarına görə daha yaxşı təbəqələşdirə bilər.53,54 Təhlillərimizin nəticələrinə görə, əhəmiyyətli korrelyasiya təəccüblü deyil. Yüksək Ki-67 və dərəcələri və BRCA1 PV-nin mövcudluğu arasında baş verir. Əslində, BRCA1 ilə əlaqəli şişlər TNBC üçün xarakterikdir və daha çox aqressiv xüsusiyyətlər nümayiş etdirir17.
Nəticə olaraq, bu tədqiqat Siciliyanın şərqindən bir BC kohortunda BRCA1/2-nin mutasiya statusu haqqında hesabat təqdim edir. Ümumiyyətlə, tapıntılarımız həm mutasiyaların yayılması, həm də BC-də klinikopatoloji xüsusiyyətlər baxımından əvvəlcədən mövcud sübutlarla uyğundur. BRCA1/2-mutant BCgeninin mövcudluğunun genişlənməsi kimi qiymətləndirilmiş multipl PV xəstələrinin varlığını qiymətləndirmək üçün daha çox tədqiqatlar. s ki, BRCA1/2-dən fərqli və daha az rast gəlinir. Bu, genetik mutasiyalar səbəbindən artan xərçəng riski altında olan subyektlərin sayını müəyyən etməyə və düzgün idarə etməyə imkan verəcək.
Biz xəstələrin tədqiqat məqsədləri üçün şiş nümunələrinin anonim şəkildə buraxılması üçün məlumatlı razılıq imzaladığını təsdiqlədik. Bütün xəstələr Helsinki Bəyannaməsinə uyğun olaraq yazılı məlumatlı razılıq imzaladılar. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” siyasətinə əsasən, bu tədqiqat etik baxışdan azad edildi, çünki bütün xəstələrə BRCA1/2 tərəfindən məlumatlı təhlillər verilmişdir. s həmçinin onların məlumatlarının tədqiqat məqsədləri üçün istifadəsinə razılıq verirlər.
Prof. Paolo Viqneriyə Etika Komitəsinin tələbi ilə döş xərçəngi xəstələrinin qayğısına qaldığı üçün təşəkkür edirik.
Federica Martorana, Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer şirkətlərindən qonorar haqqında məlumat verir. Digər müəlliflər bu işdə maraqların toqquşmasını bəyan etmirlər.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Qlobal Xərçəng Statistikası 2020: GLOBOCAN dünyanın 185 ölkəsində 36 xərçəng xəstəliyinin tezliyini və ölümünü təxmin edir. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.ca3632: