Nature.com saytına daxil olduğunuz üçün təşəkkür edirik. İstifadə etdiyiniz brauzer versiyasında CSS üçün məhdud dəstək var. Ən yaxşı təcrübə üçün sizə yenilənmiş brauzerdən istifadə etməyi (və ya Internet Explorer-də uyğunluq rejimini söndürməyi) tövsiyə edirik. Bu arada, davamlı dəstəyi təmin etmək üçün saytı üslub və JavaScript olmadan göstərəcəyik.
Məsaməli silisium hissəcikləri makroməsaməli hissəcikləri əldə etmək üçün bəzi modifikasiyalarla sol-gel üsulu ilə hazırlanmışdır. Bu hissəciklər N-fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PMI) və stirol ilə reversiv əlavə parçalanma zənciri transferi (RAFT) ilə polimerləşmə yolu ilə əldə edilmişdir. polad sütunlar (100 × 1,8 mm id) məhlulu qablaşdırma ilə qablaşdırıldı. Beş peptiddən (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Ser-Arg) və chromographic albumes en digalseminuces, digalsinuces) ibarət peptid qarışığının qiymətləndirilmiş PMP sütun ayrılması. (HAS)-da).Optimal elüsyon şəraitində peptid qarışığının nəzəri boşqab sayı 280.000 plitə/m² qədər yüksəkdir. Hazırlanmış sütunun ayırma performansını kommersiya Ascentis Express RP-Amide sütunu ilə müqayisə etdikdə, PMP sütununun ayırma performansının ayırma səmərəliliyi və rezolyutsiya baxımından kommersiya sütunundan daha üstün olduğu müşahidə edilmişdir.
Son illərdə biofarmasevtika sənayesi bazar payının əhəmiyyətli dərəcədə artması ilə genişlənən qlobal bazara çevrilmişdir.Biofarmasevtika sənayesinin 1,2,3 sürətlə böyüməsi ilə peptidlərin və zülalların təhlili çox arzu edilir. Hədəf peptidlə yanaşı, peptid sintezi zamanı bir sıra çirklər əmələ gəlir, beləliklə, peptidlərin sintezi və xromatoqrafiya xarakterinin əldə edilməsi arzuolunandır. Bədən mayelərində, toxumalarında və hüceyrələrində zülalların sayının müəyyən edilməsi tək bir nümunədə çox sayda potensial aşkar edilə bilən növlərin olması səbəbindən son dərəcə çətin bir işdir. Kütləvi spektrometriya peptid və zülal ardıcıllığı üçün təsirli bir vasitə olsa da, belə nümunələr kütləvi spektrometrə bir keçiddə yeridilərsə, ayrılma ideal olmayacaqdır. müəyyən vaxtda kütlə spektrometrinə daxil olan litlər4,5,6.Bundan əlavə, maye fazanın ayrılması zamanı analitlər dar bölgələrə fokuslana bilər, bununla da bu analitlər konsentrasiya edilir və MS-nin aşkarlanması həssaslığı yaxşılaşdırılır.Maye xromatoqrafiyası (LC) son onillikdə əhəmiyyətli dərəcədə irəliləmiş və proteomik analizdə məşhur texnikaya çevrilmişdir,8,9170.
Ters fazalı maye xromatoqrafiyası (RP-LC) stasionar faza kimi oktadesillə modifikasiya olunmuş silisium (ODS) istifadə edərək peptid qarışıqlarının təmizlənməsi və ayrılması üçün geniş istifadə olunur11,12,13. Bununla belə, RP stasionar fazaları kompleks və stasionar quruluşa görə14 xüsusi dizayn edilmiş peptidlərin və zülalların qənaətbəxş ayrılmasını təmin etmir. s bu analitlərlə qarşılıqlı əlaqədə olmaq və onları saxlamaq üçün qütblü və qeyri-qütb hissələri olan peptidləri və zülalları təhlil etmək tələb olunur16. Multimodal qarşılıqlı təsirləri təmin edən qarışıq rejimli xromatoqrafiya peptidlərin, zülalların və digər mürəkkəb qarışıqların ayrılması üçün RP-LC-yə alternativ ola bilər. 17,18,19,20,21. Qarışıq rejimli stasionar fazalar (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) həm qütb, həm də qeyri-qütb qruplarının mövcudluğuna görə peptid və zülalların ayrılması üçün əlverişlidir22,23,24,25,26,27,28 . qütblü və qeyri-qütblü analitlər üçün güc və unikal seçicilik, çünki ayrılma analit və stasionar faza arasındakı qarşılıqlı təsirdən asılıdır.Multimodal qarşılıqlı əlaqə 29, 30, 31, 32. Son zamanlarda Zhang et al.30 dodesillə bitən poliamin stasionar fazasını hazırladı və karbohidrogenləri, antidepresanları, flavonoidləri, nukleozidləri, estrogenləri və bir sıra digər analitikləri uğurla ayırdı. Qütb interkalator həm qütb, həm də qeyri-polyar qruplara malikdir, ona görə də həm hidrofobik, həm də hidrofobik, hidrofobiklənmiş kolonlu mofidlərə malik peptidləri və zülalları ayırmaq üçün istifadə edilə bilər. C18 sütunları) ticarət adı altında Ascentis Express RP-Amide sütunları altında mövcuddur, lakin bu sütunlar yalnız amin 33-ün təhlili üçün istifadə olunur.
Cari tədqiqatda, HSA-nın peptidləri və tripsin həzmlərinin ayrılması üçün qütblə gömülü stasionar faza (N-fenilmaleimidlə gömülmüş polistirol) hazırlanmış və qiymətləndirilmişdir. Stasionar faza aşağıdakı strategiyadan istifadə etməklə hazırlanmışdır. Məsaməli silisium hissəcikləri əvvəlki nəşrimizdə verilmiş prosedura uyğun olaraq, bəzi modifikasiyalı polietolol, polietol ilə nisbəti ilə hazırlanmışdır. ), TMOS, su sirkə turşusu böyük məsamə ölçüsünə malik silisium hissəciklərini hazırlamaq üçün tənzimləndi. İkincisi, yeni bir liqand, fenilmaleimid-metil vinil izosiyanat sintez edildi və qütbdə yerləşdirilmiş stasionar faza hazırlamaq üçün silisium hissəciklərini törətmək üçün istifadə edildi. Nəticə stasionar fazadan istifadə edərək optimallaşdırıldı. ing scheme.The sütun qablaşdırma mexaniki vibrasiya ilə kömək edir sütun daxilində homojen yataq formalaşır təmin etmək üçün. Beş peptid ibarət peptid qarışıqların qablaşdırılmış sütun ayrılması qiymətləndirin;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) və tripsin həzm insan serum albumin (HAS). HSA-nın peptid qarışığı və tripsin həzminin yaxşı həlli ilə ayrılması müşahidə edildi. Ascentis Express RP-Amide sütunundan daha səmərəli olan PMP sütununda həm peptidlərin, həm də zülalların yaxşı həll olunduğu və effektiv olduğu müşahidə edildi.
PEG (polietilen qlikol), karbamid, sirkə turşusu, trimetoksi ortosilikat (TMOS), trimetil xlorosilan (TMCS), tripsin, insan zərdabında albumin (HSA), ammonium xlorid, karbamid, heksan metildisilazan (HMDS), metakridi (Methacryne), StTEH-M4y, Benzoil Peroksid (BPO), HPLC Dərəcəli Asetonitril (ACN), Metanol, 2-Propanol və Aseton Sigma-Aldrichdən (Sent-Luis, MO, ABŞ) alınıb.
Karbamid (8 q), polietilen qlikol (8 q) və 8 mL 0,01 N sirkə turşusunun qarışığı 10 dəqiqə qarışdırıldı və sonra buz kimi soyuq şəraitdə 24 mL TMOS əlavə edildi. Reaksiya qarışığı 6 saat 40 ° C-də qızdırıldı və sonra 120 ° C-də susuz poladda 8 saat qaynadıldı. qalıq material 70°C-də 12 saat qurudulmuşdur. Qurudulmuş yumşaq kütlə sobada hamar üyüdülmüş və 12 saat ərzində 550°C-də kalsine edilmişdir. Hissəcik ölçüsü, məsamə ölçüsü və səth sahəsində təkrar istehsal qabiliyyətini yoxlamaq üçün üç partiya hazırlanmış və xarakterizə edilmişdir.
Əvvəlcədən sintez edilmiş fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PCMP) ilə silisium hissəciklərinin səthi modifikasiyası və ardınca stirol ilə radial polimerləşmə yolu ilə qütblü qrup tərkibli birləşmə hazırlanmışdır.Aqreqatlar və polistirol zəncirləri üçün stasionar mərhələ. Hazırlıq prosesi aşağıda təsvir edilmişdir.
N-fenilmaleimid (200 mq) və metil vinil izosiyanat (100 mq) quru toluolda həll edildi və fenilmaleimid-metil vinil qarışığı hazırlamaq üçün reaksiya qabına 0,1 mL 2,2′-azoizobutironitril (AIBN) əlavə edildi (CP30C-də istilikdə kopolimerləşdirildi). saat, süzülür və sobada 40°C-də 3 saat qurudulur.
Qurudulmuş silisium hissəcikləri (2 q) quru toluolda (100 ml) səpildi, qarışdırıldı və 10 dəqiqə ərzində 500 mL dəyirmi dibli kolbada sonikləşdirildi. PMCP (10 mq) toluolda həll edildi və damcı huni vasitəsilə reaksiya şüşəsinə əlavə edildi. Qarışıq 1 saat ərzində yuyuldu və 8°C-də süzüldü, süzüldü və 8°C-də süzüldü. 60°C-də 3 saat saxlanılır. Sonra PMCP ilə bağlanmış silisium hissəcikləri (100 q) toluolda (200 ml) həll edildi və katalizator kimi 100 µL dibutiltin dilauratın iştirakı ilə 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) əlavə edildi. 3 saat.
Stirol (1 ml), benzoil peroksid BPO (0,5 mL) və TEMPO-PMCP ilə birləşdirilmiş silisium hissəcikləri (1,5 q) toluolda səpələnmiş və azotla təmizlənmişdir. Stirolun polimerləşməsi 100°C-də 12 saat ərzində həyata keçirilmişdir. Nəticədə məhsul metillə qurudularaq bütün gecə yuyulmuşdur. Mən Şəkil 1-də göstərilmişdir.
Nümunələr 10-3 Torr-dan az qalıq təzyiq əldə etmək üçün 1 saat ərzində 393 K temperaturda qazsızlaşdırılmışdır. P/P0 = 0,99 nisbi təzyiqdə adsorbsiya edilmiş N2 miqdarı ümumi məsamə həcmini müəyyən etmək üçün istifadə edilmişdir. Çılpaq və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin morfologiyası (Yüksək Texnologiya, Yaponiyanın mikrotexniki müayinəsi ilə tədqiq edilmişdir). təmizlənmiş nümunələr (çılpaq silisium və liqandla bağlanmış silisium hissəcikləri) yapışan karbon lentindən istifadə edərək alüminium sütuna yerləşdirildi. Q150T püskürtmə örtüyünün köməyi ilə nümunələrin üzərinə qızıl örtüldü və nümunələrin üzərinə 5 nm Au təbəqəsi qoyuldu. Bu, aşağı gərginliklərdən istifadə etməklə prosesin səmərəliliyini yaxşılaşdırır və incə qranullar təmin edir. Elementar analiz üçün 1112 element analizatorundan istifadə edilmişdir. Hissəcik ölçüsünün paylanmasını əldə etmək üçün Malvern (Worcestershire, Böyük Britaniya) Mastersizer 2000 hissəcik ölçüsü analizatorundan istifadə edilmişdir. Çılpaq silisium hissəcikləri və liqandla bağlanmış silisium hissəcikləri (hər biri 5 mq) 5 mL izopropanolda dispers edilmiş, minalanmış və optikal yerləşdirilmiş, kükürdlənmiş, kükürdlənmiş, süzülmüş Mastersizer. Thermogravimetrik analiz 30 ilə 800 °C temperatur diapazonunda dəqiqədə 5 °C sürətlə aparılmışdır.
Şüşə astarlı paslanmayan poladdan dar deşikli sütunlar (100 × 1,8 mm id) Ref.31. Paslanmayan polad sütun (şüşə astarlı, 100 × 1,8 mm id) 1 µm fritdən ibarət çıxış fitinqi ilə məhlul qablaşdırıcıya (Alltech Deerfield, IL, ABŞ) qoşuldu. məhlul həlledicisi, eləcə də hərəkətverici həlledici kimi. 10 dəqiqə ərzində 100 MP, 15 dəqiqə ərzində 80 MP və 30 dəqiqə ərzində 60 MP təzyiq tətbiq edərək sütunu ardıcıl olaraq doldurun. Qablaşdırma zamanı iki GC sütun çalkalayıcısı (Alltech, Deerfield, IL) ilə mexaniki vibrasiya tətbiq edildi. sütun daxilində hər hansı zədənin qarşısını almaq üçün yavaş-yavaş təzyiq edin. Sütunu məhlulun qablaşdırma qurğusundan ayırın və onun işini yoxlamaq üçün girişə və LC sisteminə başqa fitinq qoşun.
LC nasosu (10AD Shimadzu, Yaponiya), 50 nL enjeksiyon döngəsi, membran deqazatoru (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapilyar pəncərəsi olan injektor (Valco (ABŞ) C14 W.05), xüsusi µLC cihaz detektoru (UV-2075) və şüşəni qısaltmaq üçün sütunları çox darlaşdıran və əlavə olaraq birləşdirən mikro lentləri azaltmaq üçün hazırlanmışdır. Qablaşdırmadan sonra kapilyarlar (50 μm id 365 və azaldıcı birləşmə kapilyarları (50 μm) azaldıcı birləşmənin 1/16″ çıxışına quraşdırıldı. Məlumatların toplanması və xromatoqrafik emal Multichro 2000 proqram təminatından istifadə edilərək həyata keçirildi. 254 mkm id 365 və azaldıcı birləşmə kapilyarları (50 μm) monitorinqi U. Analitik analizlər üçün analiz edildi. (Northampton, MA).
İnsan zərdabından albumin, liyofilləşdirilmiş toz, ≥ 96% (agaroz gel elektroforezi) 3 mq tripsin (1,5 mq), 4,0 M karbamid (1 mL) və 0,2 M ammonium bikarbonat (1 mL) ilə qarışdırılır. Məhlul 10 dəqiqə qarışdırılır və sonra 10 dəqiqə qarışdırılır və sonra 7 °L m3 su banyosunda saxlanılır. 0,1% TFA. Məhlulu süzün və 4 °C-dən aşağı temperaturda saxlayın.
Peptid qarışıqlarının və HSA tripsin həzmlərinin ayrılması PMP sütunlarında ayrıca qiymətləndirilir. HSA-nın peptid qarışığının və tripsin həzminin PMP sütunu ilə ayrılmasını yoxlayın və nəticələri Ascentis Express RP-Amide sütunu ilə müqayisə edin. Nəzəri boşqab nömrəsi aşağıdakı kimi hesablanır:
Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin SEM şəkilləri ŞEKİL-də göstərilmişdir.2 .Çılpaq silisium hissəciklərinin (A, B) SEM təsvirləri göstərir ki, əvvəlki tədqiqatlarımızdan fərqli olaraq, bu hissəciklər sferikdir, burada hissəciklər uzunsov və ya qeyri-müntəzəm simmetriyaya malikdirlər. ca hissəcikləri.
Çılpaq silisium hissəciklərinin (A, B) və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin (C, D) skan edilən elektron mikroskop şəkilləri.
Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin hissəcik ölçüsü paylamaları Şəkil 3(A)-da göstərilmişdir. Həcmə əsaslanan hissəcik ölçüsü paylanması əyriləri silisium hissəciklərinin ölçüsünün kimyəvi modifikasiyadan sonra artdığını göstərdi (Şəkil 3A). Silisium hissəciklərinin hissəcik ölçüsü paylanması məlumatları cari tədqiqatdan və əvvəlki tədqiqatdan T-yə əsaslanan hissəciyin ölçüsüdür. Ad(0,5) dəyəri 3,05 μm (polistirollə bağlanmış silisium hissəcikləri) olan əvvəlki tədqiqatımızla müqayisədə PMP 3,36 μm-dir34. PEG, sidik cövhəri, TMOS və sirkə turşusunun müxtəlif nisbətlərinə görə bu partiya əvvəlki araşdırmamızla müqayisədə daha dar hissəcik ölçüsü paylanmasına malik idi. silisium hissəciklərinin fazasını əvvəllər tədqiq etmişik. Bu o deməkdir ki, silisium hissəciklərinin stirol ilə səthi funksionallaşması yalnız silisium səthində polistirol qatını (0,97 µm) çökdürdü, halbuki PMP fazasında təbəqənin qalınlığı 1,38 µm idi.
Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlı silisium hissəciklərinin hissəcik ölçüsünün paylanması (A) və məsamə ölçüsünün paylanması (B).
Cari tədqiqatın məsamə ölçüsü, məsamə həcmi və silisium hissəciklərinin səth sahəsi Cədvəl 1(B)-də verilmişdir. Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin PSD profilləri Şəkil 3(B)-də göstərilmişdir. Nəticələr bizim əvvəlki tədqiqatımızla müqayisə edilə bilər. Cədvəl 1(B)-də göstərildiyi kimi kimyəvi modifikasiyadan sonra məsamələrin ölçüsü 69 azalır və əyrinin dəyişməsi Şəkil 3(B)-də göstərilmişdir. Eynilə, kimyəvi modifikasiyadan sonra silisium hissəciklərinin məsamə həcmi 0,67-dən 0,58 sm3/g-ə qədər azalmışdır. Hal-hazırda tədqiq edilmiş hissəciklərin xüsusi səth sahəsi 16 m2-dir. (124 m2/q).
Stasionar fazanın elementar təhlilinin nəticələri Cədvəl 2-də göstərilmişdir. Cari stasionar fazanın karbon yükü 6,35% təşkil edir ki, bu da bizim əvvəlki tədqiqatımızın karbon yükündən azdır (polistirollə birləşdirilmiş silisium hissəcikləri, müvafiq olaraq 7,93%35 və 10,21%) 42. SP-də cari yüklənmə, SP-də cari yüklənmə azdır. stirol, fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PCMP) və 4-hidroksi-TEMPO kimi bəzi qütb liqandlarından istifadə edilmişdir. Cari stasionar fazanın azot çəkisi 2,21%, 0,1735 və 0,85% azotla müqayisədə, əvvəlki tədqiqatlardakı stansiyaya nisbətən daha yüksəkdir. fenilmaleimid.Eyni şəkildə (4) və (5) məhsulların karbon yükləri müvafiq olaraq 2,7% və 2,9%, son məhsulun (6) karbon yükü isə 6,35%, Cədvəl 2-də göstərildiyi kimi. Çəki itkisi PMP stasionar fazası ilə yoxlanılıb və TGA əyrisi Şəkil 6-da çəki itkisinin yaxşı olduğunu göstərir. karbon yükü (6,35%), çünki liqandlarda təkcə C deyil, həm də N, O və H var.
Fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat liqandı silisium hissəciklərinin səthinin modifikasiyası üçün seçilmişdir, çünki o, qütb fenilmaleimid qruplarına və vinilizosiyanat qruplarına malikdir. faza, çünki fenilmaleimid hissəsinin normal pH-da virtual yükü yoxdur. Stasionar fazanın polaritesi stirolun optimal miqdarı və sərbəst radikal polimerləşmənin reaksiya müddəti ilə idarə oluna bilər. Reaksiyanın son mərhələsi (sərbəst radikal polimerləşmə) kritikdir və stasionar fazanın polaritesini dəyişə bilər. reaksiya vaxtı stasionar fazanın karbon yüklənməsini artırdı və əksinə. Müxtəlif konsentrasiyalarda stirol ilə hazırlanmış SP-lər müxtəlif karbon yüklərinə malikdir. Yenə də bu stasionar fazaları paslanmayan polad sütunlara yükləyin və onların xromatoqrafik göstəricilərini yoxlayın (seçmə qabiliyyəti, ayırdetmə qabiliyyəti, N dəyəri və s.).
Beş peptid qarışığı (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) həmçinin mobil fazadan istifadə edərək PMP sütunundan istifadə etməklə qiymətləndirilmişdir;60/40 (v/v) asetonitril/su (0,1% TFA) 80 μL/dəq axın sürətində. Optimal elüsyon şəraitində hər bir sütun üçün nəzəri boşqab nömrəsi (N) (100 × 1,8 mm id) 20.000 ± 100-dür (200.000 ± 100). romatoqramlar Şəkil 5A-da göstərilmişdir. Yüksək axın sürətində (700 μL/dəq) bir PMP sütununda sürətli analiz, bir dəqiqə ərzində beş peptid çıxarıldı, N dəyərləri çox yaxşı idi, hər sütunda 13,500 ± 330 (100 × 1,8 mm id), uyğun gəlir (135,000 mkL/dəq). 00 × 1,8 mm id) təkrar istehsal qabiliyyətini yoxlamaq üçün üç müxtəlif PMP stasionar fazası ilə doludur. Hər bir sütun üçün analitin konsentrasiyası optimal elüsiya şərtlərindən və nəzəri boşqabların sayı N və hər bir sütunda eyni sınaq qarışığını ayırmaq üçün saxlama müddətindən istifadə etməklə qeydə alınmışdır. PMP sütunları üçün təkrar istehsal məlumatları Cədvəl 4-də çox aşağı uyğunluq nisbətləri ilə PMP sütununda göstərilmişdir. Cədvəl 3.
PMP sütununda (B) və Ascentis Express RP-Amid sütununda (A) peptid qarışığının ayrılması;mobil faza 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP sütun ölçüləri (100 × 1,8 mm id);Analitik birləşmələrin elüsyon sırası: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) və 5 (leucine) acid enkephalin)).
PMP sütunu (100 × 1.8 mm id) yüksək performanslı maye xromatoqrafiyada insan serum albumininin triptik həzmlərinin ayrılması üçün qiymətləndirilmişdir. Şəkil 6-dakı xromatoqram nümunənin yaxşı ayrıldığını və ayırdetmə qabiliyyətinin çox yaxşı olduğunu göstərir. HSA həzmləri 100 µL/aset/dəq, mobil faza ase.100ni, mobil fazadan istifadə edərək təhlil edilmişdir. .Xromatoqramda (Şəkil 6) göstərildiyi kimi, HSA həzmi 17 peptidə uyğun gələn 17 zirvəyə bölünmüşdür. HSA həzmində hər bir pikin ayrılma səmərəliliyi hesablanmış və dəyərlər Cədvəl 5-də verilmişdir.
HSA-nın triptik həzmi (100 × 1.8 mm id) PMP sütununda ayrıldı;axın sürəti (100 µL/dəq), mobil faza 60/40 asetonitril/0,1% TFA ilə su.
burada L sütunun uzunluğu, η mobil fazanın özlülüyü, ΔP sütunun arxa təzyiqi və u mobil fazanın xətti sürətidir. PMP sütununun keçiriciliyi 2,5 × 10-14 m2, axın sürəti 25 μL/dəq və sütunun 60/40 v/v AC0me-i istifadə edilmişdir. id) əvvəlki tədqiqatımıza bənzəyirdi Ref.34. Səthi məsaməli hissəciklərlə dolu sütunun keçiriciliyi: 1,3 μm hissəciklər üçün 1,7 × 10-15, 1,7 μm hissəciklər üçün 3,1 × 10-15, 5,2 × 10-15 μm hissəciklər üçün və 5,2 × 10-15 μ2.-15 m hissəciklər üçün. 5 μm hissəciklər 43. Buna görə də, PMP fazasının keçiriciliyi 5 μm nüvəli qabıq hissəciklərinin keçiriciliyinə bənzəyir.
burada Wx xloroformla dolu sütunun çəkisi, Wy metanolla dolu sütunun çəkisi, ρ isə həlledicinin sıxlığıdır. Metanol (ρ = 0,7866) və xloroformun (ρ = 1,484) sıxlıqları. SILICA-1301-in ümumi məsaməliliyi (MMCLES-1301) 4 və C18-karbamid sütunları 31 əvvəllər tədqiq etdiyimiz müvafiq olaraq 0,63 və 0,55 idi. Bu o deməkdir ki, karbamid liqandlarının olması stasionar fazanın keçiriciliyini azaldır. Digər tərəfdən, PMP sütununun ümumi məsaməliliyi (100 × 1,8 mm-dən daha aşağıdır). -birləşdirilmiş silisium hissəcikləri, çünki C18 tipli stasionar fazalarda C18 liqandları silisium hissəciklərinə xətti zəncir kimi bağlanır, polistirol tipli stasionar fazalarda isə onun ətrafında nisbətən qalın A polimer təbəqəsi əmələ gəlir. Tipik bir təcrübədə sütun məsaməliliyi aşağıdakı kimi hesablanır:
Şəkil 7A, B eyni elüsiya şərtlərindən (yəni, 60/40 ACN/H2O və 0,1% TFA) istifadə edərək PMP sütununu (100 × 1,8 mm id) və Ascentis Express RP-Amide sütununu (100 × 1,8 mm id) göstərir.) Van Deemter sahəsi.Seçilmiş peptid qarışıqları (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/Hər iki sütun üçün minimum axın sürəti 800 µL/dəqdir. Ekspres RP-Amide sütunu müvafiq olaraq 2,6 µm və 3,9 µm idi. HETP dəyərləri PMP sütununun (100 × 1,8 mm id) ayırma səmərəliliyinin kommersiyada mövcud Ascentis Express RP-Amide sütunundan (100 × 1,8 mm id) daha yaxşı olduğunu göstərir (100 × 1,8 mm id). əvvəlki tədqiqatımızla müqayisədə əhəmiyyətli deyil. Ascentis Express RP-Amide sütunu ilə müqayisədə PMP sütununun (100 × 1,8 mm id) daha yüksək ayırma səmərəliliyi cari işdə istifadə edilən hissəciklərin forması, ölçüsü və mürəkkəb sütun qablaşdırma prosedurlarının təkmilləşdirilməsinə əsaslanır34.
(A) 0,1% TFA ilə 60/40 ACN/H2O-da PMP sütunundan (100 × 1,8 mm id) istifadə edilməklə əldə edilmiş van Deemter qrafiki (HTP-yə qarşı mobil faza xətti sürəti).(B) van Deemter qrafiki (HETP-yə qarşı mobil faza xətti sürəti) Ekspres RP-10-də RP-16 sütunu ilə əldə edilmiş 60/40 ACN/H2O. 0/40 ACN/H2O, 0,1% TFA ilə.
Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyada insan zərdab albuminin (HAS) sintetik peptid qarışıqlarının və tripsin həzmlərinin ayrılması üçün qütblü polistirol stasionar faza hazırlanmış və qiymətləndirilmişdir. Peptid qarışıqları üçün PMP sütunlarının xromatoqrafik performansı ayırma səmərəliliyi və həlli baxımından əladır. Təkmilləşdirilmiş ayırma performansı PMP-nin müxtəlifliyi, polar hissəciklərin ölçüsü və ölçüsü ilə əlaqədardır. ca hissəcikləri, stasionar fazanın idarə olunan sintezi və mürəkkəb sütun qablaşdırması. Yüksək ayırma səmərəliliyinə əlavə olaraq, yüksək axın sürətlərində sütunun arxa təzyiqinin aşağı olması bu stasionar fazanın digər üstünlüyüdür. PMP sütunları yaxşı təkrarlanma qabiliyyətinə malikdir və peptid qarışıqlarının təhlili və müxtəlif zülalların tripsin həzmində istifadə edilə bilər. hromatography.Gələcəkdə PMP sütunları da zülalların və monoklonal antikorların ayrılması üçün qiymətləndiriləcəkdir.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Peptid Separation Systems on Reversed Phase Xromatography by Hisse I: A Column Characterization Protocol.J.Xromatoqrafiya.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.İnfeksion xəstəliklərin müalicəsi üçün nəzərdə tutulmuş təkmilləşdirilmiş aktiv peptidlər.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetik terapevtik peptidlər: elm və bazar.dərman kəşfi.15 (1-2) bu gün, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.209 (1010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Xromatoqrafiya.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Qabaqcıl maye xromatoqrafiya-kütləvi spektrometriya geniş hədəflənmiş metabolomikanın və proteomikanın birləşməsinə imkan verir.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Dərman inkişafında UHPLC-nin rolu.J.Sentyabr Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Sürətli ayrılmalar üçün ultra yüksək təzyiqli maye xromatoqrafiyasının əsas və praktiki aspektləri.J.Sentyabr Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelicheff, P. Dərman inkişafında ultra yüksək performanslı maye xromatoqrafiyasının tətbiqi.J.Xromatoqrafiya.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. və başqaları. Enterovirusların səmərəli təmizlənməsi üçün suda neft yüksək daxili fazalı emulsiyalardan hazırlanmış monolitik makroməsaməli hidrogellər.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Proteomikada maye xromatoqrafiyanın rolu.J.Xromatoqrafiya.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Terapevtik peptidlərin və zülalların tərs fazalı maye xromatoqrafiya ayırmalarında yaranan tendensiyalar: nəzəriyyə və tətbiqlər.J.Aptek.Biotibbi Elm.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Birinci və ikinci ayırma ölçülərində müxtəlif pH dəyərlərindən istifadə edərək RP-RP-HPLC sistemindən istifadə edərək peptidlərin iki ölçülü ayrılması.J.Sentyabr Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. və başqaları. C18 sub-2 μm tam və səthi məsaməli hissəciklərlə dolu yüksək effektiv xromatoqrafik sütunların kütlə ötürmə xüsusiyyətləri və kinetik performansı tədqiq edilmişdir.J.Sentyabr Elmi.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. və başqaları. Bitki bioaktiv peptidlərinin təcrid edilməsi, identifikasiyası və təsdiqində son tendensiyalar və analitik problemlər.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s002168-02 (s002168-0).
Mueller, JB et al.The proteomik landşaft of the life of the Kingdom.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Preparativ maye xromatoqrafiyası ilə terapevtik peptidlərin aşağı emalı. Molekul (Bazel, İsveçrə) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Qarışıq rejimli xromatoqrafiya və onun biopolimerlərə tətbiqi.J.Xromatoqrafiya.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Qarışıq rejimli protein xromatoqrafiyası üçün liqandlar: prinsip, xarakteristikası və dizaynı.J.Biotexnologiya.144(1), 3-11 (2009).