Javascript зараз адключаны ў вашым браўзеры. Некаторыя функцыі гэтага сайта не будуць працаваць, калі JavaScript адключаны.
Зарэгіструйцеся з вашымі канкрэтнымі дадзенымі і канкрэтным прэпаратам, які вас цікавіць, і мы супаставім вашу інфармацыю з артыкуламі ў нашай шырокай базе дадзеных і неадкладна адправім вам копію ў фармаце PDF па электроннай пошце.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Стэфанія Стэла, 1,2 Сільвія Рыта Вітале, 1,2 Федэрыка Мартарана, 1,2 Мікеле Масіміна, 1,2 Джуліяна Павоне, 3 Каця Ланцафаме, 3 Себасцьяна Б'янка, 4 К'яра Бароне, 5 Крысціна Гаргон, 6 Марка Фічэра, 6, 7 Лівія Манцэла1,21 Аддзел клінічнай і эксперыментальнай медыцыны cine, Універсітэт Катаніі, Катанія, 95123, Італія;2 Цэнтр эксперыментальнай анкалогіі і гематалогіі, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Катанія, 95123, Італія;3 медыцынскай анкалогіі АОУ паліклініка «Г.Rodolico – San Marco”, Катанія, 95123, Італія;4 Медыцынская генетыка, ARNAS Garibaldi, Катанія, 95123, Італія;5 Medicine Genetics, ASP, Сіракузы, 96100, Італія;6 Дэпартамент біямедыцынскіх і біятэхналагічных навук Універсітэта Катаніі, медыцынская генетыка, Катання, Італія, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Італія Сувязь: Стэфанія Стэла, тэл. +39 095 378 1946, электронная пошта [электронная пошта абаронена];[электронная пошта абаронена] Мэта: мутацыі зародкавай лініі ў BRCA1 і BRCA2 і выяўлены рак малочнай залозы (РМЖ), яечнікаў (РЯ) і іншыя рэчы, звязаныя з пажыццёвай рызыкай рака. Тэставанне гена BRCA з'яўляецца ключом да ацэнкі індывідуальнага рызыкі, а таксама для пошуку метадаў прафілактыкі ў здаровых носьбітаў і адаптацыі лячэння для пацыентаў з ракам. Распаўсюджанасць змяненняў BRCA1 і BRCA2 моцна вар'іруецца ў розных геаграфічных рэгіёнах, і хаця існуюць дадзеныя па BRCA Патагенныя варыянты CA ў сіцылійскіх сем'ях, даследаванняў, накіраваных спецыяльна на насельніцтва ва ўсходняй Сіцыліі, не хапае. Мэтай нашага даследавання было вывучыць частату і распаўсюджванне патагенных змяненняў зародкавай лініі BRCA у кагорце пацыентаў з РМЖ з усходняй Сіцыліі і ацаніць іх сувязь з пэўнымі прыкметамі РМЖ з дапамогай секвенирования наступнага пакалення. Наяўнасць змяненняў карэлюе са ступенню пухліны і індэксам праліферацыі. ВЫНІКІ: У цэлым 35 пацыентаў (9%) мелі патагенны варыянт BRCA, 17 (49%) - BRCA1 і 18 (51%) - BRCA2. Змены BRCA1 пераважаюць у пацыентаў з патройным адмоўным РМЖ, у той час як мутацыі BRCA2 часцей сустракаюцца ў пацыентаў з РМЖ у прасвете. У параўнанні з не-носьбітамі, суб'екты з варыянтамі BRCA1 мелі значна больш высокую ступень ступені пухліны і праліфер. Высновы: Нашы вынікі даюць агляд мутацыйных статусаў BRCA у пацыентаў з РМЖ з усходняй Сіцыліі і пацвярджаюць ролю аналізу NGS у ідэнтыфікацыі пацыентаў са спадчынным РМЖ. У цэлым гэтыя дадзеныя супадаюць з папярэднімі дадзенымі, якія пацвярджаюць скрынінг BRCA для належнай прафілактыкі і лячэння рака ў носьбітаў мутацыі.
Рак малочнай залозы (РМЖ) з'яўляецца найбольш распаўсюджанай злаякаснай пухлінай ва ўсім свеце і самым смяротным ракам у жанчын.1 Біялагічныя асаблівасці, якія вызначаюць прагноз РМЖ і клінічныя паводзіны, былі старанна вывучаны і часткова высветлены з цягам часу. Фактычна, некалькі сурагатных маркераў у цяперашні час выкарыстоўваюцца для класіфікацыі РМЖ на розныя малекулярныя падтыпы. Гэта рэцэптары эстрагену (ER) і/або прогестерона (PgR), ампліфікацыя рэцэптара эпідэрмальнага фактару росту чалавека 2 (HER2). , індэкс праліферацыі Ki-67 і ступень пухліны (G).2 Камбінацыя гэтых зменных ідэнтыфікавала наступныя катэгорыі РМЖ: 1) Лумінальныя пухліны, якія дэманструюць экспрэсію ER і/або PgR, складаюць 75% РМЖ. Гэтыя пухліны былі далей падзелены на Люмінал А, калі Ki-67 быў ніжэй за 20% і HER2 адмоўны, і Люмінал В, калі Ki-67 быў роўны або перавышаў 20% і ў прысутнасці ампліфікацыя HER2, незалежна ад індэкса праліферацыі;2) HER2+ пухліны, якія з'яўляюцца ER і PgR адмоўнымі, але дэманструюць узмацненне HER2. На долю гэтай групы прыходзіцца 10% усіх пухлін малочнай залозы;3) Тройчы адмоўны рак малочнай залозы (TNBC), які не паказвае экспрэсіі ER і PgR і ампліфікацыі HER2, складае каля 15% выпадкаў раку малочнай залозы.2-4
Сярод гэтых падтыпаў РМЖ ступень ступені пухліны і індэкс праліферацыі ўяўляюць сабой папярочныя біямаркеры, якія непасрэдна і незалежна звязаны з агрэсіўнасцю і прагнозам пухліны.5,6
У дадатак да вышэйзгаданых біялагічных асаблівасцяў, роля спадчынных генетычных змяненняў, якія прыводзяць да развіцця РМЖ, становіцца ўсё больш важнай за апошнія некалькі гадоў. Прыкладна 1 з 10 пухлін малочнай залозы ўспадкоўваецца з-за змяненняў зародкавай лініі ў спецыфічных генах. Два буйных эпідэміялагічных даследаванні з удзелам больш чым 180 000 жанчын нядаўна выявілі групу з васьмі генаў (напрыклад, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C і RAD51D), галоўным чынам, адказныя за спадчынны РМЖ. Сярод гэтых генаў BRCA1 і BRCA2 (далей BRCA1/2) паказалі найбольш моцную карэляцыю з развіццём пухлін малочнай залозы.9-12 Фактычна, мутацыі зародкавай лініі BRCA1/2 значна павялічваюць рызыку РМЖ на працягу ўсяго жыцця, а таксама іншых злаякасных пухлін, у тым ліку яечнікаў, прастаты, падстраўнікавай залозы, каларэктальнага і меланомы. Ва ўзросце ад 13 да 80 гадоў сукупная частата РМЖ складае 72% у жанчын з патагенным варыянтам BRCA1 (PV) і 69% у жанчын з BRCA2 PV.14
Характэрна, што ў нядаўняй публікацыі вынікае, што рызыка РМЖ залежыць ад тыпу ПВ. Фактычна, у параўнанні з патагеннымі усечанымі варыянтамі, яркія місенс-варыянты, асабліва ў гене BRCA1, звязаны са зніжэннем рызыкі РМЖ, асабліва ў пажылых жанчын.15
Наяўнасць BRCA1 або BRCA2 PV было звязана з рознымі біялагічнымі і клініка-паталагічнымі асаблівасцямі.16,17 BRCA1-асацыяваныя РМЖ, як правіла, клінічна агрэсіўныя, слаба дыферэнцыраваныя і вельмі праліфератыўныя. Гэтыя пухліны звычайна патройны адмоўныя і маюць ранні ўзрост. Пухліны, якія ўзнікаюць у пацыентаў з мутацыямі BRCA2, звычайна дэманструюць ад сярэдняй да добра дыферэнцыраванай ступені і зменлівыя праліфератыўныя індэксы. Гэтыя пухліны часцей сустракаюцца ў прасвеце B і звычайна сустракаюцца ў пажылых людзей.16-18 Характэрна, што мутацыі ў BRCA1 і BRCA2 павышаюць адчувальнасць да спецыфічных метадаў лячэння, уключаючы солі плаціны і таргетныя прэпараты, такія як інгібітары полі (АДФ-рыбоза) палімеразы (PARPi).19,20
За апошнія некалькі гадоў укараненне секвенирования наступнага пакалення (NGS) у клінічную практыку дазволіла ўсё большай колькасці пацыентаў з РМЖ прайсці малекулярнае тэставанне на сіндромы схільнасці да рака, уключаючы BRCA1/2.21 Адначасова, вызначэння, заснаваныя на дакладных крытэрыях адносна сямейнага анамнезу, дэмаграфічных і клініка-паталагічных характарыстык, каб лепш вызначыць людзей, вартых тэставання BRCA1/2.22,23 У гэтым кантэксце доказы e назапашваецца пры скрынінгу BRCA1/2 у пэўных папуляцыях, падкрэсліваючы адрозненні паміж геаграфічнымі рэгіёнамі.24-27 Хоць ёсць паведамленні аб кагорце РМЖ у заходняй Сіцыліі, даступна менш дадзеных аб скрынінгу BRCA1/2 ва ўсходняй Сіцыліі.28,29
Мы апісваем тут вынікі скрынінга зародкавай лініі BRCA1/2 у пацыентаў з РМЖ з усходняй Сіцыліі, у далейшым карэлюючы наяўнасць мутацый BRCA1 або BRCA2 з асноўнымі клініка-паталагічныя асаблівасцямі гэтых пухлін.
Рэтраспектыўнае даследаванне было праведзена ў «Цэнтры эксперыментальнай анкалогіі і гематалогіі» ў бальніцы Policlinico. Rodolico – San Marco у Катаніі. Са студзеня 2017 г. па сакавік 2021 г. у агульнай складанасці 455 пацыентаў з ракам малочнай залозы і яечнікаў, меланомай, падстраўнікавай залозы або прадсталёвай залозы былі накіраваны ў нашу малекулярна-дыягнастычную лабараторыю для генетычнага тэставання BRCA/2. Гэта даследаванне было праведзена ў адпаведнасці з Decla рацыён Хельсінкі, і ўсе ўдзельнікі далі пісьмовую інфармаваную згоду перад малекулярным аналізам.
Гісталагічныя і біялагічныя характарыстыкі (ER, PgR, статус HER2, Ki-67 і ступень) РМЖ ацэньвалі на аснове біяпсіі або хірургічных узораў з улікам толькі агрэсіўных кампанентаў пухліны. На аснове гэтых характарыстык РМЖ класіфікавалі наступным чынам: прасвет А (ER+ і/або PgR+, HER2-, Ki-67<20%), прасвет B (ER+ і/або PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люмінальны B-HER2+ (ER і/або PgR+, HER2+), HER2+ (ER і PgR-, HER2+) або патройны адмоўны (ER і PgR-, HER2-).
Перад ацэнкай статусу мутацыі BRCA1 і BRCA2 міждысцыплінарная група, у якую ўваходзілі анколаг, генетык і псіхолаг, правяла кансультацыю па генетыцы пухліны для кожнага пацыента, каб вызначыць наяўнасць BRCA1 і/або BRCA1.або асоб з высокай рызыкай ПВ у гене BRCA2. Адбор пацыентаў праводзіўся ў адпаведнасці з рэкамендацыямі Італьянскага таварыства медыцынскай анкалогіі (AIOM) і мясцовымі сіцылійскімі рэкамендацыямі.30,31 Гэтыя крытэрыі ўключаюць: (i) сямейны анамнез вядомых патагенных варыянтаў генаў успрымальнасці (напрыклад, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) самцы з БК;(iii) з BC і OC;(iv) жанчыны з РМЖ <36 гадоў, TNBC <60 гадоў або двухбаковы РМЖ <50 гадоў;(v) асабістая гісторыя хваробы да н.э. <50 гадоў і як мінімум адзін сваяк першай ступені: (а) да н.э. <50 гадоў;(б) немуцинозный і непамежны РЯ любога ўзросту;(в) двухбаковы БК;г) мужчынскі БК;(д) рак падстраўнікавай залозы;(f) рак прастаты;(vi) два ці больш асабістыя анамнезы РМЖ больш за 50 гадоў і сямейны анамнез РМЖ, РЯ або рака падстраўнікавай залозы для сваякоў, якія з'яўляюцца сваякамі першай ступені (уключаючы сваякоў, з якімі яна знаходзіцца ў сваяцтве першай ступені);(vii) Асабістая гісторыя OC і па меншай меры аднаго сваяка першай ступені: (a) да н.э.<50 гадоў;(b) НАК;(в) двухбаковы БК;г) мужчынскі БК;(vii) жанчына з серозным РЯ высокай ступені.
У кожнага пацыента быў атрыманы ўзор перыферычнай крыві аб'ёмам 20 мл і сабраны ў прабіркі з ЭДТА (BD Biosciences). Геномная ДНК была вылучана з 0,7 мл узораў суцэльнай крыві з дапамогай QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Італія) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы і прапушчаная праз флюорометр Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Wal). Там, Масачусэтс, ЗША) Выканайце колькаснае вызначэнне.Узбагачэнне мішэні і падрыхтоўка бібліятэкі выконваюцца Chef-аналізатарам Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, гатовым да загрузкі ў набор рэагентаў Ion AmpliSeq™ Chef DL8 для аўтаматызаванай падрыхтоўкі бібліятэкі ў адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы. Камплект складаецца з двух пулаў праймераў мультыплекснай ПЦР, якія можна выкарыстоўваць для вывучэння ўсіх генаў BRCA1 (NM_007300.3) і BRCA2 (NM_000059.3).B Карацей кажучы, 15 мкл кожнага разведзенага ўзору ДНК (10 нг) дабаўлялі ў пласціны са штрых-кодам для падрыхтоўкі бібліятэкі, а ўсе рэагенты і расходныя матэрыялы загружалі ў прыбор Ion Chef™. Затым аўтаматызаваную падрыхтоўку бібліятэкі і аб'яднанне бібліятэк узораў са штрых-кодам выконвалі на прыборы Ion Chef™. Затым колькасць падрыхтаваных бібліятэк ацэньвалася з дапамогай флуарометра Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Walt вяндліна, Масачусэтс, ЗША) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы. Нарэшце, бібліятэкі аб'ядноўваюцца ў эквімолярных суадносінах у прабірках для ўзораў бібліятэкі Ion Chef™ (прабіркі са штрых-кодам) і загружаюцца ў прыбор Ion Chef™. Секвеніраванне выконвалася з дапамогай прыбора Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) з выкарыстаннем чыпа Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Аналіз быў выкананы Amplicon Suite (SmartSeq srl) і Ion Reporter Software.
Наменклатура ўсіх варыянтаў адпавядала дзеючым рэкамендацыям Кансорцыума варыяцый геному чалавека, даступным у інтэрнэце (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клінічнае значэнне варыянтаў BRCA1/2 вызначалася з дапамогай класіфікацыі Міжнароднага кансорцыума ENIGMA (Сетка на аснове фактычных дадзеных для інтэрпрэтацыі мутантных алеляў зародкавай лініі, https://enigmaconsortium.org/) і кансультацый. розныя базы даных, такія як ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD і UMD. Класіфікацыя ўключае пяць розных катэгорый рызыкі: дабраякасная (катэгорыя I), верагодна дабраякасная (катэгорыя II), варыянт нявызначанай значнасці (VUS, катэгорыя III), верагодная патагенная (катэгорыя IV) і патагенная (катэгорыя V). VarSome таксама прааналізаваў уплыў мутацый на структуру бялку і функцыі, інфарматыўны інструмент з доступам да 30 баз дадзеных.32
Для прысваення патэнцыйнай клінічнай значнасці кожнаму VUS выкарыстоўваліся наступныя алгарытмы вылічальнага прагназавання бялку: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) і Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd). _input.php).Варыянты, класіфікаваныя як клас 1 і 2, лічыліся дзікім тыпам.
Секвеніраванне Сэнгера пацвердзіла наяўнасць кожнага патагеннага варыянту. Карацей кажучы, для кожнага выяўленага варыянту была распрацавана пара спецыфічных праймераў з выкарыстаннем эталонных паслядоўнасцей генаў BRCA1 і BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 і NG_012772.3, NM_000059.3 адпаведна). Такім чынам, мэтавая ПЦР была выканана з наступнай паслядоўнасцю Сэнгера. нцынг.
Пацыенты з адмоўным тэстам на ген BRCA1/2 былі пратэставаны з дапамогай мультыплекснай лігатыўна-залежнай ампліфікацыі зонда (MLPA) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы для ацэнкі наяўнасці вялікіх геномных перабудоў (LGR). Карацей кажучы, узоры ДНК дэнатуруюць і выкарыстоўваюць да 60 спецыфічных для генаў BRCA1 і BRCA2 зондаў, кожны з якіх выяўляе спецыфічную паслядоўнасць ДНК даўжынёй прыкладна 60 нуклеатыдаў.Pro. Прадукты ампліфікацыі, якія складаюцца з унікальнага набору ПЦР-ампліконаў, затым былі прааналізаваны з дапамогай капілярнага электрафарэзу і з дапамогай праграмнага забеспячэння Cofalyser.Net у спалучэнні з адпаведнымі табліцамі Cofalyser для канкрэтных партый (www.mrcholland.com).
Выбраныя клініка-паталагічныя зменныя (гістологіческая ступень і індэкс праліферацыі Ki-67%) былі звязаны з наяўнасцю BRCA1/2 PV, разлічаны з дапамогай праграмнага забеспячэння Prism v. 8.4 з выкарыстаннем дакладнага тэсту Фішэра, пры ўмове, што р-значэнне <0,05 значнае.
У перыяд са студзеня 2017 г. па сакавік 2021 г. 455 пацыентаў прайшлі абследаванне на наяўнасць мутацый гена зародкавай лініі BRCA1/2. Тэставанне на мутацыі было праведзена ў Цэнтры эксперыментальнай анкалогіі і гематалогіі бальніцы Policlinico. У адпаведнасці з рэкамендацыямі Сіцыліі (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Радоліка з Катаніі – Сан-Марка», у цэлым 389 пацыентаў. Былі рак малочнай залозы, 37 — рак яечнікаў, 16 — рак падстраўнікавай залозы, 8 — рак прастаты і 5 — меланома.Размеркаванне пацыентаў па тыпу рака і выніках аналізу паказана на малюнку 1.
На малюнку 1 паказана блок-схема, якая паказвае агляд даследавання. Пацыенты з пухлінамі малочнай залозы, меланомы, падстраўнікавай залозы, прастаты або яечнікаў былі правераны на мутацыі ў генах BRCA1 і BRCA2.
Скарачэнні: ПВ, патагенны варыянт;ВУС, варыянт няпэўнага значэння;WT, паслядоўнасць BRCA1/2 дзікага тыпу.
Мы выбарачна сканцэнтравалі нашы даследаванні на групах хворых на рак малочнай залозы. Сярэдні ўзрост пацыентаў быў 49 гадоў (дыяпазон 23-89) і былі пераважна жанчыны (n = 376, або 97%).
З гэтых суб'ектаў 64 (17%) мелі мутацыі BRCA1/2 і ўсе былі жанчынамі. Трыццаць пяць (9%) мелі PV і 29 (7,5%) мелі VUS. Семнаццаць (48,6%) з 35 патагенных варыянтаў сустракаліся ў BRCA1 і 18 (51,4%) у BRCA2, у той час як 5 VUS адбываліся ў BRCA1 (17,2%) і 24 (82) 0,8%) у BRCA2 (малюнкі 1 і 2). LGR не прысутнічаў у аналізе MLPA.
Малюнак 2. Аналіз мутацый BRCA1 і BRCA2 у 389 пацыентаў з ракам малочнай залозы. (A) Размеркаванне патагенных варыянтаў (PV) (чырвоны), варыянтаў нявызначанай значнасці (VUS) (аранжавы) і WT (сіні) у 389 пацыентаў з ракам малочнай залозы;(B) 389 хворых на рак малочнай залозы Трыццаць пяць (9%) мелі патагенныя варыянты (PV) BRCA1/2. Сярод іх 17 (48,6%) былі носьбітамі BRCA1 PV (цёмна-чырвоныя) і 18 (51,4%) былі носьбітамі BRCA2 (светла-чырвоныя);(C) 29 (7,5%) з 389 суб'ектаў неслі VUS, 5 (17,2%) гены BRCA1 (цёмна-аранжавыя) і 24 (82,8%) гены BRCA2 (светла-аранжавыя).
Скарачэнні: ПВ, патагенны варыянт;ВУС, варыянт няпэўнага значэння;WT, паслядоўнасць BRCA1/2 дзікага тыпу.
Далей мы даследавалі распаўсюджанасць малекулярных падтыпаў РМЖ у пацыентаў з ПВ BRCA1/2. Размеркаванне ўключала 2 (5,7%) люмінальны A, 15 (42,9%) люмінальны B, 3 (8,6%) люмінальны B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ і 13 (37,1%) пацыентаў з TNBC. Сярод BRCA1-станоўчых пацыентаў 5 (29,4) %) мелі прасвет В да н.э., 2 (11,8%) мелі хваробу HER2+ і 10 (58,8%) мелі TNBC. Пухліны без мутацый BRCA1 былі альбо прасветам A, альбо прасветам B-HER2+ (малюнак 3). У падгрупе BRCA2-станоўчых 10 (55,6%) пухлін былі прасветам B, 3 (16,7%) былі прасветам B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC і 2 (11,1%) былі прасветам A (малюнак 3). У гэтай групе не было пухлін HER2+. Такім чынам, мутацыі BRCA1 пераважаюць у пацыентаў з TNBC, у той час як змены BRCA2 пераважаюць у прасвету B.
Малюнак 3. Распаўсюджанасць падтыпаў рака малочнай залозы ў пацыентаў з патагеннымі варыянтамі BRCA1 і BRCA2. Гістаграмы, якія паказваюць размеркаванне BRCA1- (цёмна-чырвоны) і BRCA2- (светла-чырвоны) PV сярод малекулярных падтыпаў пацыентаў з ракам малочнай залозы. Лічбы, пазначаныя ў кожным полі, уяўляюць працэнт пацыентаў з BRCA1 і BRCA2 PV для кожнага падтыпу рака малочнай залозы.
Скарачэнні: ПВ, патагенны варыянт;HER2+, станоўчы рэцэптар эпідэрмальнага фактару росту чалавека 2;TNBC, патройны адмоўны рак малочнай залозы.
Пасля мы ацанілі тып і лакалізацыю гена BRCA1 і BRCA2 PV. У BRCA1 PV мы назіралі 7 адзінкавых нуклеатыдных варыянтаў (SNV), 6 дэлецый, 3 дублікацыі і 1 устаўку. Толькі адна мутацыя (c.5522delG) уяўляе сабой новае адкрыццё. Найбольш распаўсюджаным BRCA1 PV, выяўленым у абодвух суб'ектаў, быў c.5035_5039 delCTAAT. Гэта змяненне ўключае дэлецыю пяці нуклеатыдаў (CTAAT) у экзоне BRCA1 15, што прыводзіць да замены амінакіслоты лейцын на тыразін у кодоне 1679, і з-за зруху рамкі трансляцыі з прадказаным альтэрнатыўным стоп-кодонам прыводзіць да заўчаснага скарачэння бялку. Усе іншыя змены выяўляюцца толькі ў адным выпадку. Характэрна, што адзін з паведамленых PV знаходзіўся ў вобласць кансенсусу ў месцы зрошчвання (c.4357+1G>T) (табліца 1).
Што тычыцца BRCA2 PV, мы назіралі 6 дэлецый, 6 SNV і 2 дублікацыі. Ні адна са знойдзеных змяненняў не з'яўляецца новай. У нашай папуляцыі паўтарыліся тры мутацыі, c.428dup і c.8487+1G>A, якія назіраліся ў 3 суб'ектаў, а затым c.5851_5854delAGTT, атрыманы ў двух выпадках. Змена c.428dup прадугледжвае паўтарэнне C у экзоне 5 BRCA2, паводле прагнозаў, кадуе ўсечаны нефункцыянальны бялок. Мутацыя c.8487+1G>A адбываецца ў інтроннай вобласці інтрона BRCA2 19 (± 1,2) і ўплывае на кансенсусную паслядоўнасць сплайсінгу, што прыводзіць да змены сплайсінгу, што прыводзіць да анамальнага або адсутнага бялку. Патагенны варыянт c.5851_5854delAGTT да 4-нуклеатыднай дэлецыі з пазіцый нуклеатыдаў 5851 да 5854 у кадуючым экзоне 10 гена BRCA2 і прыводзіць да трансляцыйнага зруху рамкі з прагназаваным альтэрнатыўным стоп-кодонам (p.S1951WfsTer). Характэрна, што, як паведамлялася раней, абодва змены c.631G>A і c.7008-2A>T былі выяўлены ў аднаго і таго ж пацыента.34 Першая мутацыя ўключае замену адэназіну (A) у экзоне BRCA2 7 на нуклеатыд, які змяшчае гуанін (G), што прыводзіць да змены валіну на ізалейцын у кодоне 211, ізалейцын. Амінакіслата - гэта амінакіслата з вельмі падобнымі ўласцівасцямі. Гэта змяненне ўплывае на нармальны сплайсінг мРНК. Другі варыянт знаходзіцца ў інтроннай вобласці і прыводзіць да падвойнага А на субтымін (Т) размяшчэнне перад экзонам 13 гена, які кадуе BRCA2. Змена c.7008-2A>T можа генераваць некалькі транскрыптаў рознай даўжыні. Акрамя таго, у групе PV BRCA2 4 з 18 змяненняў (22,2%) былі інтроннымі.
Затым мы адлюстравалі шкодныя мутацыі BRCA1/2 у функцыянальных даменах і бялок-звязваючых абласцях (мал. 4). У гене BRCA1 50% PV былі размешчаны ў кластарнай вобласці рака малочнай залозы (BCCR), у той час як 22% мутацый былі размешчаны ў кластарнай вобласці рака яечнікаў (OCCR) (мал. 4A). У BRCA2 PV 35,7% варыянтаў былі размешчаны ў BCCR. Вобласць CR і 42,8% мутацый былі размешчаны ў OCCR (мал. 4B). Затым мы ацанілі месцазнаходжанне PV у даменах бялкоў BRCA1 і BRCA2. Для бялку BRCA1 мы выявілі тры PV у даменах завесы і спіралі і дзве мутацыі ў дамене BRCT (мал. 4A). Для бялку BRCA2 4 PV супаставілі з паўторам BRC у той час як 3 інтронныя і 3 экзанічныя змены былі выяўленыя ў аліга/алігацукрыд-звязваючых (OB) і вежавых (T) даменах (малюнак 4B).
Малюнак 4. Схематычнае адлюстраванне бялкоў BRCA1 і BRCA2 і лакалізацыя патагенных варыянтаў. На гэтым малюнку паказана размеркаванне патагенных варыянтаў BRCA1 (A) і BRCA2 (B) у хворых на рак малочнай залозы. Экзанічныя мутацыі паказаны сінім колерам, а інтронныя варыянты — аранжавым. Вышыня паласы паказвае колькасць выпадкаў. Паведамляецца пра вавёркі BRCA1 і BRCA2 і іх функцыянальныя вобласці. (A) BR Бялок CA1 утрымлівае петлевы дамен (RING) і паслядоўнасць ядзернай лакалізацыі (NLS), спіральны дамен, кластарны дамен SQ/TQ (SCD) і С-канцавы дамен BRCA1 (BRCT). (B) Бялок BRCA2 змяшчае восем паўтораў BRC, ДНК-звязваючы дамен са спіральным даменам (Shelical), тры складкі, якія звязваюць алігануклеатыды/алігацукрыды (OB), вежу дамен (T) і NLS на баку C. Вобласці, якія называюцца кластарнай вобласцю рака малочнай залозы (BCCR) і кластарнай вобласцю рака яечнікаў (OCCR), паказаны ўнізе.*Уяўляе сабой мутацыі, якія вызначаюць стоп-кодоны.
Затым мы даследавалі клініка-паталагічныя прыкметы РМЖ, якія могуць карэляваць з наяўнасцю BRCA1/2 PV. Былі даступныя поўныя клінічныя запісы для 181 пацыента з адмоўным BRCA1/2 (не носьбітаў) і ўсіх носьбітаў (n = 35). Існавала карэляцыя паміж хуткасцю праліферацыі пухліны і ступенню.
Мы разлічылі размеркаванне Ki-67 на аснове медыяны нашай кагорты (25%, дыяпазон <10-90%). Суб'екты з Ki-67 <25% былі вызначаны як «нізкія Ki-67», у той час як людзі са значэннямі ≥ 25% лічыліся «высокымі Ki-67». Значныя адрозненні Ki-67 (p<0,01) былі знойдзены паміж не-носьбітамі і носьбітамі BRCA1 PV s (мал. 5A).
Малюнак 5. Карэляцыя Ki-67 з размеркаваннем ступені ў жанчын з ракам малочнай залозы з і без PV BRCA1 і BRCA2. (A) Boxplot, які паказвае сярэднія значэнні Ki-67 у 181 пацыента без носьбіта РМЖ у параўнанні з пацыентамі з РМЖ BRCA1 (18) або BRCA2 (17). Значэнні P ніжэй за 0,5 лічыліся статыстычна значнымі. (B) Гістаграма, якая прадстаўляе размеркаванне пацыентаў з РМЖ у групы гісталагічныя ступені (G2 і G3) у адпаведнасці са статусам мутацыі BRCA1 і BRCA2 (суб'екты WT, носьбіты PV BRCA1 і BRCA2).
Сапраўды гэтак жа мы вывучылі, ці карэлюе ступень пухліны з наяўнасцю BRCA1/2 PV. Паколькі G1 BC адсутнічаў у нашай папуляцыі, мы падзялілі пацыентаў на дзве групы (G2 або G3). У адпаведнасці з вынікамі Ki-67, аналіз паказаў статыстычна значную карэляцыю паміж ступенню пухліны і мутацыяй BRCA1 з больш высокай доляй пухлін G3 у носьбітаў BRCA1 у параўнанні з не-носьбітамі (p<0,0) 05) (Малюнак 5B).
Дасягненні ў тэхналогіі секвеніравання ДНК дазволілі беспрэцэдэнтны прагрэс у генетычным тэсціраванні BRCA1/2, што мае вырашальнае значэнне для пацыентаў з сямейнай гісторыяй рака. На сённяшні дзень каля 20 000 варыянтаў BRCA1/2 былі ідэнтыфікаваны і класіфікаваны ў адпаведнасці з Амерыканскім таварыствам медыцынскай генетыкі 35 і сістэмай ENIGMA.35,36 Добра вядома, што спектр мутацый BRCA1/2 вар'іруецца ў шырокіх межах. ly праз геаграфічныя рэгіёны.37 Унутры Італіі ўзровень BRCA1/2 PV вар'іраваўся ад 8% да 37%, дэманструючы вялікую варыябельнасць унутры краіны.38,39 З насельніцтвам амаль 5 мільёнаў, Сіцылія з'яўляецца пятым па велічыні рэгіёнам Італіі з пункту гледжання колькасці жыхароў. Хоць існуюць дадзеныя аб размеркаванні BRCA1/2 на захадзе Сіцыліі, няма шырокіх доказаў ва ўсходняй частцы вострава.
Наша даследаванне з'яўляецца адным з першых паведамленняў аб частаце BRCA1/2 PV ў пацыентаў з РМЖ ва ўсходняй Сіцыліі.28 Мы сканцэнтравалі наш аналіз на РМЖ, паколькі гэта, безумоўна, самае распаўсюджанае захворванне ў нашай кагорце.
Пры тэсціраванні 389 пацыентаў з РМЖ 9% насілі BRCA1/2 PVs, раўнамерна размеркаваныя паміж BRCA1 і BRCA2. Гэтыя вынікі супадаюць з раней апублікаванымі ў італьянскай папуляцыі.28 Цікава, што 3% (13/389) нашай кагорты былі мужчынамі. Гэты ўзровень вышэй, чым чакалася, для мужчынскага рака малочнай залозы (1% усіх РМЖ),40 адлюстроўваючы наш выбар папуляцый на аснове рызыкі мутацыі BRCA1/2. Тым не менш, ні ў аднаго з гэтых мужчын не развіўся BRCA1/2 PV, таму яны былі кандыдатамі для далейшага малекулярнага аналізу, каб выключыць наяўнасць менш распаўсюджаных мутацый, такіх як PALB2, RAD51C і D, сярод іншых. Варыянты нявызначанай значнасці былі знойдзены ў 7% суб'ектаў, у якіх быў відавочны BRCA2 VUS. Нават гэты вынік супадае з раней існуючымі доказамі.28,41,42
Калі мы прааналізавалі размеркаванне малекулярных падтыпаў BC у жанчын-мутантаў BRCA1/2, мы пацвердзілі вядомую сувязь паміж TNBC і BRCA1 PV (58,8%) і паміж прасветам B BC і BRCA2 PV (55,6%).16,43 Пухліны прасвету A і HER2+ у носьбітаў BRCA1 і BRCA2 PV адпавядаюць існуючым літаратурным дадзеным.16,43
Затым мы сканцэнтруемся на тыпе і размяшчэнні BRCA1/2 PV. У нашай кагорце найбольш распаўсюджаным BRCA1 PV быў c.5035_5039delCTAAT. Хоць Incorvaia et al.не апісвалі гэты варыянт у сваёй сіцылійскай кагорце, іншыя аўтары паведамлялі пра яго як пра зародкавую лінію BRCA1 PV.34 Некалькі BRCA1 PV былі знойдзены ў нашай кагорце – напрыклад, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA і c.5266dupC – якія назіраліся на Сіцыліі.28 З іх дзве мутацыі заснавальніка BRCA1 (c.18 1T>G і c.5266dupC) звычайна сустракаюцца ў яўрэяў-ашкеназі ва Усходняй і Цэнтральнай Еўропе (Польшчы, Чэхіі, Славеніі, Аўстрыі, Венгрыі, Беларусі і Германіі), 44,45 і ў Злучаных Штатах і Аргенціне нядаўна быў вызначаны як «рэцыдывавальны варыянт зародкавай лініі» ў італьянскіх пацыентаў з РМЖ і РЯ. Варыянт 34c.514del раней быў ідэнтыфікаваны ў 8 пацыентак з ракам малочнай залозы з поўначы Сіцылія ў Палерма і Месіне. Цікава, што нават Інкарвая і інш.выявілі варыянт c.3253dupA ў некаторых сем'ях у Катаніі. 28 Найбольш рэпрэзентатыўнымі PV BRCA2 з'яўляюцца c.428dup, c.5851_5854delAGTT і інтронічны варыянт c.8487+1G>A, пра якія паведамлялася больш падрабязна 28 у пацыента ў Палерма з c.428dup, назіралася PV c.5851_5854delAGTT у хатніх гаспадарках на паўночным захадзе Сіцыліі, галоўным чынам у рэгіёнах Трапані і Палерма, у той час як c.5851_5854delAGTT PV назіралася ў хатніх гаспадарках на паўночным захадзе Сіцыліі. Варыянт 8487+1G>A часцей сустракаўся ў суб'ектаў з Месіны, Палерма і Кальтанісэты.28 Rebbeck et al.раней апісаў змяненне c.5851_5854delAGTT у Калумбіі.37 Іншы BRCA2 PV, c.631+1G>A, быў знойдзены ў пацыентаў з РБ і РЯ з Сіцыліі (Агрыджэнта, Сіракуза і Рагуза).28 Характэрна, што мы назіралі суіснаванне двух варыянтаў BRCA2 (BRCA2 c.631G>A і c.7008-2A>T ) у таго ж пацыента, які, як мы меркавалі, быў сегрэгаваны ў цыс-рэжыме, як паведамлялася раней.34,46 Гэтыя мутацыі BRCA2 uble сапраўды часта назіраюцца ў італьянскім рэгіёне, і было выяўлена, што яны ўводзяць заўчасныя стоп-кодоны, уплываючы на ​​сплайсінг інфармацыйнай РНК і выклікаючы збой бялку BRCA2.47,48
Мы таксама адлюстравалі BRCA1 і BRCA2 PV ў меркаваных абласцях OCCR і BCCR бялковых даменаў і генаў. Гэтыя вобласці былі апісаны Rebbeck et al.у якасці зон рызыкі развіцця рака яечнікаў і малочнай залозы, адпаведна.49 Аднак доказы адносна сувязі паміж месцазнаходжаннем варыянтаў зародкавай лініі і рызыкай рака малочнай залозы або яечнікаў застаюцца спрэчнымі.28,50-52 У нашай папуляцыі PV BRCA1 былі ў асноўным размешчаны ў вобласці BCCR, у той час як PV BRCA2 пераважна размешчаны ў рэгіёне OCCR. Аднак мы не змаглі знайсці ніякай сувязі паміж меркаваным OCCR і BC. Рэгіёны CR і асаблівасці BC. Гэта можа быць звязана з абмежаванай колькасцю пацыентаў з мутацыямі BRCA1/2. З пункту гледжання бялковага дамена, PV BRCA1 размеркаваны па ўсім бялку, а змены BRCA2 пераважна выяўляюцца ў дамене паўтораў BRC.
Нарэшце, мы суаднеслі клініка-паталагічныя асаблівасці РМЖ з PV BRCA1/2. З-за абмежаванай колькасці ўключаных пацыентаў мы выявілі значную карэляцыю толькі паміж Ki-67 і ступенню пухліны. Хоць ацэнка і інтэрпрэтацыя Ki-67 застаюцца некалькі спрэчнымі, можна сказаць, што высокія паказчыкі праліферацыі звязаны з павышаным рызыкай рэцыдыву захворвання і зніжэннем выжывальнасці. », а «нізкі» Ki-67 складае 20%. Аднак гэты парог не распаўсюджваецца на нашу папуляцыю пацыентаў з мутацыяй BRCA1/2, у якой сярэдняе значэнне Ki-67 складае 25%. Гэтую тэндэнцыю ў высокіх паказчыках Ki-67 можна растлумачыць распаўсюджанасцю ў нашых кагортах прасвету B і TNBC, у якіх прысутнічае некалькі пухлін прасвету A. Аднак некаторыя дадзеныя сведчаць аб тым, што больш высокі ўзровень адсячэння Ki-67 (25–25– 30%) можа лепш стратыфікаваць пацыентаў у адпаведнасці з іх прагнозам. 53, 54. Па выніках нашага аналізу значная карэляцыя не з'яўляецца дзіўнай. Адбываецца паміж высокім Ki-67 і класамі і наяўнасцю BRCA1 PV. Фактычна, пухліны, звязаныя з BRCA1, тыповыя для TNBC і дэманструюць больш агрэсіўныя характарыстыкі. 16, 17
У заключэнне, гэта даследаванне дае справаздачу аб мутацыйным статусе BRCA1/2 у кагорце РМЖ з усходняй Сіцыліі. У цэлым, нашы высновы супадаюць з раней існуючымі дадзенымі, як з пункту гледжання распаўсюджанасці мутацый, так і клініка-паталагічных характарыстык у РМЖ. Дадатковыя даследаванні ў большай колькасці пацыентаў з BRCA1/2-мутантамі РМЖ, такія як выкарыстанне мультигеномного пашыранага мутацыйнага аналізу, апраўданыя для ацэнкі наяўнасці PVs, якія з'яўляюцца выразнымі і радзей, чым BRCA1/2. Гэта дазволіць ідэнтыфікаваць і правільна кіраваць усё большай колькасцю суб'ектаў з падвышанай рызыкай рака з-за генетычных мутацый.
Мы пацвердзілі, што пацыенты падпісалі інфармаваную згоду на ананімную выдачу сваіх узораў пухлін для даследчых мэт. Усе пацыенты падпісалі пісьмовую інфармаваную згоду ў адпаведнасці з Хельсінкскай дэкларацыяй. У адпаведнасці з палітыкай AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco» гэта даследаванне было вызвалена ад этычнага агляду, таму што аналіз BRCA1/2 праводзіўся ў адпаведнасці з клінічнай практыкай, і ўсе пацыенты далі пісьмовую інфармаваную згоду. Пацыенты таксама далі згоду на выкарыстанне іх дадзеных у даследчых мэтах.
Мы дзякуем прафесару Паола Віньеры за яго дапамогу ў лячэнні хворых на рак малочнай залозы ў адпаведнасці з патрабаваннямі Камітэта па этыцы.
Федэрыка Мартарана паведамляе пра ганарары Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Іншыя аўтары заяўляюць аб адсутнасці канфлікту інтарэсаў у гэтай працы.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN ацэньвае захворванне і смяротнасць ад 36 відаў раку ў 185 краінах па ўсім свеце. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660