«Ніколі не сумнявайцеся, што невялікая група ўдумлівых, адданых сваёй справе грамадзян можа змяніць свет. Насамрэч, яны адзіныя, хто там ёсць».
Місія Cureus — змяніць даўнюю мадэль публікацыі медыцынскіх прац, пры якой прадстаўленне даследаванняў можа быць дарагім, складаным і працаёмкім.
Плазма, узбагачаная трамбацытамі/PRP, рэгенерацыя тканін, актывацыя трамбацытаў, глюкозапраліфератыўная тэрапія, трамбацыты, праліфератыўная тэрапія
Цытуйце гэты артыкул як: Harrison TE, Bowler J, Reeves K і інш. (17 мая 2022 г.) Уплыў глюкозы на колькасць і аб'ём трамбацытаў: наступствы для рэгенератыўнай медыцыны. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Плазма, узбагачаная трамбацытамі (PRP), і гіпертанічныя растворы глюкозы звычайна выкарыстоўваюцца для ін'екцый у рэгенератыўнай медыцыне, часам разам. Уплыў гіпертанічнай глюкозы на лізіс і актывацыю трамбацытаў раней не паведамляўся. Мы праверылі ўплыў падвышанай канцэнтрацыі глюкозы на колькасць трамбацытаў і эрытрацытаў, а таксама на аб'ём клетак у PRP і цэльнай крыві (WB). Хуткае частковае зніжэнне колькасці трамбацытаў назіралася пры змешванні ўсіх сумесяў глюкозы з PRP або цэльнай крывёю, што адпавядае частковаму лізісу. Пасля першай хвіліны колькасць трамбацытаў заставалася стабільнай, што сведчыць аб хуткай адаптацыі рэшткаў трамбацытаў да экстрэмальнага (>2000 мОсм) гіпертонусу. Пасля першай хвіліны колькасць трамбацытаў заставалася стабільнай, што сведчыць аб хуткай адаптацыі рэшткаў трамбацытаў да экстрэмальнага (>2000 мОсм) гіпертонусу. Пасля першай хвіліны колькасць трамбацытаў заставалася стабільным, што сведчыць аб хуткай акамадацыі канчаткова трамбацытаў да экстрэмальнага (>2000 мОсм) гіпертануса. Пасля першай хвіліны колькасць трамбацытаў заставалася стабільнай, што сведчыць аб хуткай адаптацыі рэшткаў трамбацытаў да экстрэмальнага (>2000 мОсм) гіпертанусу.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 мОсм）高渗状态。 Пасля першай хвіліны колькасць трамбацытаў заставалася стабільным, што сведчыць аб хуткай адаптацыі канчаткова трамбацытаў да экстрэмальнага (>2000 мОсм) гиперосмолярному стану. Пасля першай хвіліны колькасць трамбацытаў заставалася стабільнай, што сведчыць аб хуткай адаптацыі рэшткаў трамбацытаў да экстрэмальнага (>2000 мОсм) гіперасмалярнага стану.Канцэнтрацыя глюкозы 25% і вышэй прывяла да значнага павелічэння сярэдняга аб'ёму трамбацытаў (САТ), што сведчыць аб ранняй стадыі актывацыі трамбацытаў. Неабходныя далейшыя даследаванні, каб вызначыць, ці адбываецца лізіс або актывацыя трамбацытаў, і ці можа гіпертанічная ін'екцыя глюкозы асобна або ў спалучэнні з PRP забяспечыць дадатковую клінічную карысць.
У 1950-х гадах амерыканскі хірург Джордж Хакет выявіў, што можа назаўсёды палегчыць боль у суставах і спіне ў многіх пацыентаў, уводзячы праліфератыўны раствор у сухажыллі і звязкі. Яго эксперыменты на трусах паказалі, што лячэнне, якое ён назваў праліфератыўнай тэрапіяй, прыводзіць да павелічэння і ўмацавання сухажылляў. Гісталагічныя даследаванні пацвердзілі, што падчас гэтага працэсу выпрацоўваецца новы калаген [1].
На працягу першых некалькіх дзесяцігоддзяў было выпрабавана мноства розных рашэнняў для размеркавання. Да 1990-х гадоў большасць лекараў лічылі высокія канцэнтрацыі глюкозы найбольш бяспечным і эфектыўным метадам. Аднак механізм дзеяння застаецца незразумелым.
У XX стагоддзі пасля працы Хакета было праведзена няшмат клінічных даследаванняў. Аднак у 2000-х гадах цікавасць аднавілася, і было праведзена некалькі паспяховых клінічных выпрабаванняў праліфератыўнай тэрапіі для лячэння болю ў паясніцы [2], астэаартрозу каленнага сустава [3] і латэральнага эпікандзіліту [4].
Рэгенерацыя тканін патрабуе ўдзелу ствалавых клетак. Такім чынам, высокія канцэнтрацыі глюкозы павінны нейкім чынам выклікаць міграцыю, рэплікацыю і дыферэнцыяцыю ствалавых клетак. Мы выказваем гіпотэзу, што трамбацыты могуць выступаць у якасці пасланнікаў, і што высокія канцэнтрацыі глюкозы могуць прымушаць трамбацыты вызваляць цытакіны і фактары росту, тым самым спрыяючы рэгенератыўным працэсам, асабліва міграцыі ствалавых клетак у зоны з высокай канцэнтрацыяй глюкозы.
Актывацыя трамбацытаў заўсёды папярэднічае павелічэнню ўнутрыклеткавага кальцыя [5]. Лю і інш. у 2008 годзе паказалі, што высокі ўзровень глюкозы павялічвае актыўнасць каналаў TRPC6 (кананічны патэнцыял пераходных рэцэптараў) у плазматычнай мембране, што прыводзіць да паступлення іонаў кальцыя ў трамбацыты [6]. Іншае даследаванне паказала, што ўздзеянне іонаў кальцыя на маргінальную зону мікратрубачак выклікае рэлаксацыю, пашырэнне і дэфармацыю маргінальнай зоны, што, у сваю чаргу, выклікае змену формы з дыска на сферычную, што прыводзіць да сярэдняга аб'ёму трамбацытаў (СОБТ) [7].
Наша гіпотэза ў гэтым даследаванні заключаецца ў тым, што ўздзеянне высокіх канцэнтрацый глюкозы на трамбацыты ўплывае на маргінальную зону мікратрубачак і ўнутрыклеткавае асяроддзе, што прыводзіць да павелічэння MPV.
Усе ўдзельнікі падпісалі форму інфармаванай згоды пасля тлумачэння падрабязнасцей даследавання і перад атрыманнем узораў. У гэтым даследаванні выкарыстоўваліся толькі ўзоры PRP з гематакрытам больш за 2%, каб для параўнання можна было ўключыць колькасць эрытрацытаў і сярэдні аб'ём эрытрацытаў (MCV).
Даследаванне праводзілася ў чатыры фазы, першай фазай была PRP, а астатнімі фазамі — цэльная кроў (табліца 1). Як апісана раней [8], усе адносныя цэнтрабежныя сілы (RCF, g-сіла) былі разлічаны з сярэдзіны (Rmid, у см) слупа крыві ў цэнтрабежным шпрыцы. Мы вырашылі выкарыстоўваць MPV у якасці маркера сенсібілізацыі трамбацытаў, а колькасць трамбацытаў — у якасці індыкатара патэнцыйнага лізісу трамбацытаў, бо абодва з іх можна лёгка вымераць на стандартных гематалагічных аналізатарах.
На першым этапе 47 валанцёраў здалі ўзоры крыві — адну прабірку з этылендыамінтэтраацэтавай кіслатой (ЭДТА) і адзін узор цэльнай крыві з PRP (антыкаагулянтам з цытратам натрыю (NaCl, 3%)) (табліца 1). Неадкладна змясціце качалку ў прабірку. Агульны аналіз крыві (ААК) быў праведзены на ўзорах ЭДТА ў трох паўторах, а ўзоры NaCl былі прааналізаваны ў трох паўторах для аналізу ААК, а затым PRP была падрыхтавана рознымі метадамі, апісанымі вышэй [8]. Усе ўзоры PRP былі падрыхтаваны шляхам цэнтрыфугавання пры 900–1000 g. Змяшайце кожны ўзор PRP на віхравым змяшальніку на працягу 5–10 секунд, затым падзяліце пяць аліквот па 0,5 мл на прабіркі.
Каб ацаніць уплыў уздзеяння трамбацытаў на павышаную канцэнтрацыю глюкозы, роўныя колькасці (0,5 мл) 0%, 5%, 12,5%, 25% і 50% глюкозы ў вадзе змешвалі з узорамі трамбацытаў для атрымання канцэнтрацый сумесі глюкозы 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% і 25% і змешвалі прабіркі на шейкеры для прабірак на працягу 15 хвілін. Праз 15 хвілін TAC кожнай сумесі аналізавалі ў трох паўторах. Для кожнай прабіркі ўсреднялі колькасць трамбацытаў (PLT), колькасць эрытрацытаў, MCV і MPV, а для ўсіх узораў PRP разлічвалі сярэднюю колькасць трамбацытаў, колькасць эрытрацытаў, MCV і MPV.
Пасля завяршэння першага этапу збору дадзеных мы заўважылі значнае павелічэнне аб'ёму трамбацытаў у трамбацытах PRP пасля дадання D50W. Трамбацыты PRP не абавязкова прадстаўляюць усе трамбацыты ў крыві, і асяроддзе PRP адрозніваецца ад асяроддзя WB. Таму мы вырашылі правесці другі этап выпрабаванняў эфекту дадання D50W да цэльнай крыві.
Для другога раўнда мы выбралі памер выбаркі з 30 чалавек на аснове вынікаў першай серыі, як апісана ў раздзеле "Аналіз". У гэтай серыі 20 валанцёраў здалі ўзоры крыві (табліца 1). Цэльную кроў (1,8 мл) набіралі ў шпрыц аб'ёмам 3 мл і дадавалі антыкаагулянт з 0,2 мл 40% NaCl. Змест шпрыца з цэльнай крывёю змешвалі на працягу пяці секунд з дапамогай віхравага змяшальніка, і агульны аналіз крыві аналізавалі ў трох паўторах. Пасля аналізу антыкаагулянтную кроў дадавалі да 2 мл 50% глюкозы ў шпрыцы аб'ёмам 5 мл (канчатковая канцэнтрацыя глюкозы складала прыблізна 25% (D25)) і змяшчалі ў прабірку для страсення на 30 хвілін. Праз 30 хвілін D25/Агульны аналіз крыві ў шпрыцах з вільготным кровазваротам аналізавалі ў трох паўторах. Колькасць трамбацытаў, колькасць эрытрацытаў, сярэдні аб'ём вымярэнняў (MCV) і максімальны аб'ём вымярэнняў (MPV) на шпрыц былі ўсреднены, і сярэднія значэнні PLT, колькасць эрытрацытаў, MCV і MPV былі разлічаны для кожнага ўзору да і пасля дадання глюкозы.
Паколькі трамбацыты ў цэльнай крыві звычайна падвяргаюцца ўздзеянню гіпертанічнай глюкозы падчас праліфератыўнай глюкозатэрапіі з-за мінімальна інвазіўных ін'екцый, і не з'яўляецца распаўсюджанай з'явай спалучаць PRP з гіпертанічнай глюкозай непасрэдна перад ін'екцыяй, мы вырашылі вывучыць гіпертанічную глюкозу ў спалучэнні з WB у раздзеле 1. Этапы трэці і чацвёрты. На кожным этапе 20 добраахвотнікаў здавалі 7-8 мл ACD-A (кіслата, якая змяшчае цытрат натрыю (22,0 г/л), цытрынавую кіслату (8,0 г/л) і глюкозу (24,5 г/л), раствор цытрату дэкстрозы) для ўвядзення антыкаагулянтаў крыві (табліца 1). Для вызначэння парогавага працэнта, звязанага з павелічэннем MPV, выкарыстоўваліся толькі сумесі глюкозы больш за 12,5%. На трэцім этапе 1 мл крыві змяшчаюць у прабірку. Затым кроў змешвалі на віхравым змяшальніку на працягу 10 секунд, дадаючы ў прабірку 1 мл 30% глюкозы, 40% глюкозы або 50% глюкозы, каб атрымаць канчатковую канцэнтрацыю глюкозы 15%, 20% і 25% адпаведна. Узоры крыві з глюкозай аналізавалі на агульны аналіз крыві адразу пасля змешвання і паўтаралі кожныя дзве хвіліны на працягу 30 хвілін.
Падчас пачатковага змешвання даданне гіпертанічнай глюкозы і WB або PRP у суадносінах 1:1 падвяргае трамбацыты ўздзеянню канцэнтрацый вышэй за 25% на працягу некалькіх секунд. На чацвёртым этапе, каб ацаніць уплыў гіпертанічнай глюкозы з мінімальнымі пачатковымі пікавымі канцэнтрацыямі і праверыць верхнюю мяжу ўплыву глюкозы, мы дадалі толькі невялікую колькасць крыві ў D25W або D50W. Змясціце 1 мл D25W або D50W у прабірку і дадайце 0,2 мл WB, адначасова перамешваючы ўзор на віхравой мешалцы на працягу 10 секунд. У гэтых выпадках кроў падвяргалася ўздзеянню глюкозы ў канцэнтрацыі прыблізна на 20% вышэй за канчатковую канцэнтрацыю, а не на 50% вышэй за канчатковую канцэнтрацыю, як у этапе 3, што прывяло да канчатковых канцэнтрацый глюкозы 20,8% і 41,6%. Змешаныя ўзоры былі прааналізаваны ў той жа інтэрвал часу, што і ў этапе 3.
На першым этапе кожнай серыі развядзення глюкозы было ўзята 30 узораў, бо гэта быў адпаведны памер выбаркі для пілотнага даследавання [9]. У канцы кожнага этапу (уключаючы першы этап) ацэньвайце адэкватнасць памеру выбаркі, выкарыстоўваючы формулу, якая выкарыстоўваецца для вызначэння памеру выбаркі, неабходнага для ацэнкі сярэдняга значэння бесперапыннай зменнай выніку ў адной папуляцыі. Формула n = Z2 x SD2 /E2. У гэтым ураўненні Z - гэта Z-паказчык, SD - стандартнае адхіленне, а E - жаданая памылка [10]. Наша альфа роўная 0,05, што адпавядае значэнню Z 1,96, і мы чакаем памылкі 5 (у працэнтах). Такім чынам, мы вырашаем для n = (1,962 x SD2)/52. Вынікі паказалі, што памер выбаркі, неабходны для кожнага этапу, быў меншым за фактычна сабраную колькасць.
На працягу перыядаў 1, 3 і 4, пры выкарыстанні больш чым адной канцэнтрацыі глюкозы, уплыў розных канцэнтрацый глюкозы аналізаваўся шляхам параўнання дробавай змены паміж часам 0 і кожным наступным часам (фаза 1 праз 15 хвілін, перыяд 3 праз 15 хвілін і чатыры праз 15 секунд, затым кожныя дзве хвіліны.) Хуткасці змяненняў для кожнага перыяду часу параўноўваліся з дапамогай U-крытэрыя Манна-Уітні, паколькі дадзеныя не адпавядалі нармальнаму размеркаванню, вызначанаму крытэрыем нармальнасці Шапіра-Уілка. Паколькі на першым, трэцім і чацвёртым этапах (усяго пяць) быў праведзены аналіз 1 да 1 некалькіх груп (пяці), была праведзена карэкцыя Банфероні, каб адрэгуляваць патрэбнае значэнне альфа да ≤0,01, але не ≤0,05.
Зніжэнне колькасці трамбацытаў пры ўсіх канцэнтрацыях гіпертанічнай дэкстрозы і павелічэнне MPV у трамбацытах PRP пры канцэнтрацыі дэкстрозы >12,5%: колькасць трамбацытаў PRP павялічылася ад аднаго да пяці разоў у параўнанні з зыходнай канцэнтрацыяй цэльнай крыві, у залежнасці ад метаду (не паказана). Зніжэнне колькасці трамбацытаў пры ўсіх канцэнтрацыях гіпертанічнай дэкстрозы і павелічэнне MPV у трамбацытах PRP пры канцэнтрацыі дэкстрозы >12,5%: колькасць трамбацытаў PRP павялічылася ад аднаго да пяці разоў у параўнанні з зыходнай канцэнтрацыяй цэльнай крыві, у залежнасці ад метаду (не паказана). Памяншэнне колькасці трамбацытаў пры ўсіх канцэнтрацыях гіпертанічнай дэкстрозы і павышэнне MPV ў трамбацытах PRP пры канцэнтрацыі дэкстрозы > 12,5%: колькасць трамбацытаў PRP павялічылася ў 1-5 раз у параўнанні з зыходнай цельнай крывёю, у залежнасці ад метаду (не паказана). Зніжэнне колькасці трамбацытаў пры ўсіх гіпертанічных канцэнтрацыях дэкстрозы і павышэнне MPV у трамбацытах PRP пры канцэнтрацыі дэкстрозы >12,5%: колькасць трамбацытаў PRP павялічылася ў 1-5 разоў у параўнанні з зыходным узроўнем цэльнай крыві, у залежнасці ад метаду (не паказана). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Пры канцэнтрацыі глюкозы >12,5% ​​высокая канцэнтрацыя глюкозы зніжае колькасць крыві, павялічваецца MPV крыві пасля прыёму PRP: у параўнанні з 与基线全血 колькасць крыві пасля прыёму PRP павялічваецца ў 1-5 разоў у параўнанні з канцэнтрацыяй (не апісана). Пры канцэнтрацыі глюкозы >12,5% усе канцэнтрацыі гіпертанічнай глюкозы зніжалі колькасць трамбацытаў, а MPV павялічвалі ў трамбацытах PRP: колькасць трамбацытаў PRP павялічвалася ад 1- да 5-кратных канцэнтрацый у параўнанні з зыходнымі канцэнтрацыямі цэльнай крыві, у залежнасці ад метаду (неапісана ). Пры канцэнтрацыях глюкозы >12,5% усе гіпертанічныя канцэнтрацыі глюкозы зніжалі колькасць трамбацытаў і павялічвалі MPV у трамбацытах, атрыманых у выніку прыёму PRP: колькасць трамбацытаў у выніку прыёму PRP павялічвалася ў 1-5 разоў у параўнанні з зыходнымі канцэнтрацыямі ў цэльнай крыві ў залежнасці ад метаду (як апісана).На малюнку 1 паказана, што колькасць трамбацытаў знізілася амаль на 75% пасля развядзення ў вадзе і на 20-30% пасля 15 хвілін развядзення рознымі канцэнтрацыямі глюкозы ў параўнанні з базавым узроўнем PRP і развядзеннем 1:1 з карэкцыяй па аб'ёме (1-k1 з карэкцыяй на аб'ём). k -1 развядзенне).1 развядзенне).
Колькасць клетак у кожным развядзенні выражаецца ў выглядзе долі ад зыходнай колькасці да развядзення.
MPV мінімальна зніжаўся падчас вытворчасці PRP без далейшага змянення канцэнтрацый развядзення да 12,5% у вадзе або глюкозе (у тым ліку 25% сумесі PRP з глюкозай) і павялічваўся больш чым на 20% пасля развядзення ў 50% растворы глюкозы (мал. 2). У адрозненне ад гэтага, эрытрацыты не паказалі істотных змен аб'ёму пры любым развядзенні, акрамя H2O.
Сярэдні аб'ём клетак у кожным развядзенні выражаецца ў працэнтах ад першапачатковага аб'ёму да развядзення.
Падобнае, але менш выяўленае зніжэнне колькасці трамбацытаў і павелічэнне CVR назіраліся ў BC, якая падвяргалася ўздзеянню 50% глюкозы (для падрыхтоўкі прэпарата з 25% глюкозай). У табліцы 2 параўноўваюцца колькасць і аб'ём клетак у цэльнай крыві, разведзенай у 50% дэкстрозе, з дадзенымі фазы 1 PRP, разведзенай у 50% дэкстрозе. Змены колькасці эрытрацытаў і MCV эрытрацытаў не былі відавочнымі і не былі ў цэнтры нашай увагі.
SD = стандартнае адхіленне, MD = сярэдняя розніца паміж групамі, SE = стандартнае адхіленне сярэдняй розніцы, RBC = эрытрацыты, PLT = трамбацыты, PRP = плазма, узбагачаная трамбацытамі, WB = цэльная кроў
Пасля дадання D50W да WB працэнт страты трамбацытаў з улікам развядзення склаў 7,7% (310±73 супраць 286±96) у параўнанні з 17,8% для развядзення PRP у D50W (664±348 супраць 544±277). MPV WB павялічыўся на 16,8% (з 10,1±0,5 да 11,8±0,6), у той час як MPV PRP павялічыўся на 26% (9,2±0,8 супраць 11,6±0,7). Нягледзячы на ​​тое, што сярэднія адрозненні як у зніжэнні колькасці трамбацытаў, так і ў павелічэнні MPV былі значна большымі пры PRP, змены ў зніжэнні колькасці трамбацытаў у межах WB былі амаль значнымі (з 310 ± 73 да 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а павелічэнне MPV было значным (з 10,1 ± 0,5 да 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Нягледзячы на ​​тое, што сярэднія адрозненні як у зніжэнні колькасці трамбацытаў, так і ў павелічэнні MPV былі значна большымі пры PRP, змены ў зніжэнні колькасці трамбацытаў у межах WB былі амаль значнымі (з 310 ± 73 да 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а павелічэнне MPV было значным (з 10,1 ± 0,5 да 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Нягледзячы на ​​тое, што сярэднія адрозненні як у зніжэнні колькасці трамбацытаў, так і ў павелічэнні CVR былі значна большымі пры PRP, змены ў зніжэнні колькасці трамбацытаў у межах WB былі амаль значнымі (з 310 ± 73 да 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).павелічэнне MPV было значным (ад 10,1 ± 0,5 да 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). павелічэнне MPV было значным (з 10,1 ± 0,5 да 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的＄(310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增加是显着的＄(10,1) ± 0,5 ± 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Змяненне зніжэння колькасці трамбацытаў у межах СБ было амаль значным (з 310 ± 73 да 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), хоць PRP мела значна большыя сярэднія адрозненні ў зніжэнні колькасці трамбацытаў і павелічэнні MPV, і павелічэнне MPV было значным.(ад 10,1 ± 0,5 да 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (ад 10,1 ± 0,5 да 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Для значнага змянення MPV патрабавалася канчатковая канцэнтрацыя глюкозы 20%, але змяненне MPV было больш выяўленым пры канчатковай канцэнтрацыі 25%. Страта трамбацытаў стабілізавалася пасля першапачатковага зніжэння. Мы адзначылі пачатковае рэзкае зніжэнне CVR, аднак CVR хутка аднавіўся пры канчатковай канцэнтрацыі глюкозы 25%, што было значна вышэй за ўзроўні CVR, якія назіраліся пры канчатковых канцэнтрацыях глюкозы 20% і 15% (мал. 3 і злева ад табліцы 3; заштрыхаваныя рамкі). Пазначаныя значэнні p ≤ альфа з папраўкай Банфероні 0,01). Таксама назіралася пачатковае рэзкае зніжэнне колькасці PLT, якое назіралася ў пачатковай фазе 0-15 с, а затым заставалася стабільным (ад 15 с да 30 хвілін; злева ад табліцы 4).
Даданне розных канцэнтрацый глюкозы да цэльнай крыві прывяло да першапачатковага хуткага зніжэння MPV, а затым да аднаўлення ў залежнасці ад канцэнтрацыі больш чым на 20%. Легенда паказвае канцэнтрацыю глюкозы пасля развядзення. D15, D20 і D25 праводзіліся ў развядзенні 1:1. D21 і D41 праводзіліся ў развядзенні 1:5.
У табліцы 4 паказана змяненне колькасці трамбацытаў пры развядзенні ў гіпертанічнай вадзе глюкозы. Мы назіралі дозазалежную залежнасць паміж неадкладным зніжэннем колькасці PLT пры развядзенні 1:1 і пры развядзенні 1:5. Параўноўваючы развядзенні 1:1 як адну групу з развядзеннямі 1:5, у групе 1:1 неадкладнае зніжэнне колькасці трамбацытаў было меншым, чым у групе 1:5: 66±48 000 (23%) у параўнанні з 99±69 000 (37%), p = 0,014) у групе 1:5. Пасля першапачатковага зніжэння ў першай кропцы вымярэння колькасць трамбацытаў у працэнтах ад глюкозы стабілізавалася (мал. 4).
Калі цэльную кроў дадаваць да глюкозы ў суадносінах 1:1, колькасць трамбацытаў зніжаецца прыкладна на 25%. Аднак, калі цэльную кроў дадаваць у суадносінах 1:5, зніжэнне было значна большым — каля 50%.
41% глюкоза павялічвала MPV хутчэй і больш значна, чым 25% або 21% Вынікі MPV паказаны на малюнку 3. Ва ўсіх астатніх развядзеннях не назіралася неадкладнага пачатковага зніжэння MPV пасля дадання 50% глюкозы. Пры выкарыстанні 25% глюкозы (канцэнтрацыя глюкозы 20,8% пры канчатковым развядзенні) змена MPV была параўнальная са зменай 20% глюкозы пры развядзенні 1:1 (мал. 3). Нягледзячы на ​​тое, што змены MPV першапачаткова былі большымі пры 41% змешанай канцэнтрацыі, чым пры 25%, розніца ў MPV паміж 41% і 25% праз 16 хвілін ужо не была значнай (табліца 3, справа). Цікава таксама, што 25% глюкоза павялічвала MPV больш эфектыўна, чым 20,8%.
Гэта даследаванне in vitro часткова пацвердзіла нашу гіпотэзу. Ён паказаў патэнцыйны частковы лізіс трамбацытаў пры даданні дэкстрозы, хуткую адаптацыю трамбацытаў да экстрэмальнай гіпертанічнасці і значнае павышэнне MPV у адказ на канцэнтрацыі гіпертанічнай дэкстрозы > 25%. Ён паказаў патэнцыйны частковы лізіс трамбацытаў пры даданні дэкстрозы, хуткую адаптацыю трамбацытаў да экстрэмальнай гіпертанічнасці і значнае павышэнне MPV у адказ на канцэнтрацыі гіпертанічнай дэкстрозы > 25%. Ён паказаў патэнцыяльны частковы лізіс трамбацытаў прымесі дэкстрозы, быструю аккамадацыю трамбацытаў да экстрэмальнага гіпертануса і значнае павышэнне MPV у адказ на гіпертанічную канцэнтрацыю дэкстрозы > 25%. Ён паказаў патэнцыйны частковы лізіс трамбацытаў дэкстрозай, хуткую акамадацыю трамбацытаў да экстрэмальнай гіпертанусу і значнае павелічэнне MPV у адказ на гіпертанічны ўзровень дэкстрозы >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Ён паказвае магчымы частковы лізіс трамбацытаў сумесямі з глюкозай, хуткую адаптацыю трамбацытаў да экстрэмальнага гіпертонусу і значнае павышэнне MPV у адказ на канцэнтрацыю гіпертанічнага глюкозы > 25%. Гэта паказвае патэнцыйны частковы лізіс трамбацытаў сумесямі глюкозы, хуткую адаптацыю трамбацытаў да экстрэмальнай гіпертанусу і значнае павелічэнне MPV у адказ на гіпертанічную глюкозу >25%.Пачатковае павелічэнне было максімальным пры ўздзеянні глюкозы 41,6%, але павелічэнне MPV наблізілася да 25% уздзеяння глюкозы прыблізна праз 20 хвілін пасля ўздзеяння.
Канцэнтрацыя трамбацытаў залежыць ад глюкозы. Мы заўважылі, што колькасць PLT змяншалася пры ўсіх развядзеннях глюкозы. Рэзкае падзенне колькасці трамбацытаў у развядзеннях H2O (0%) серыі PRP можа быць звязана з асматычным лізісам. Акрамя таго, гэта можа быць артэфактам, выкліканым зліпаннем трамбацытаў, але гэта кантрастуе з адсутнасцю змены MPV пры гэтым развядзенні. Гэта адкрыццё азначае, што некаторыя трамбацыты вельмі адчувальныя да гіпаасмалярнасці.
Ва ўсіх развядзеннях глюкозы 1:1 колькасць PLT змяншалася на 20-30%, нават да D5W (гіпатанічны пры 252 мОсм), што можа сведчыць пра спецыфічны неасматычны эфект глюкозы, паколькі як PLT, так і MPV заставаліся нязменнымі пры трохразовым павелічэнні канцэнтрацыі глюкозы ад D5W да D25W. Фактычна, канцэнтрацыі PLT мелі тэндэнцыю да нязначнага павелічэння з павелічэннем асмалярнасці.
Зніжэнне PLT паміж развядзеннямі 1:1 і 1:5 азначае, што эфект растварэння залежыць ад пачатковай і канчатковай канцэнтрацыі глюкозы. Калі б ён залежаў толькі ад пачатковай канцэнтрацыі, то можна было б чакаць розніцы ў зніжэнні PLT паміж канцэнтрацыямі 1:1. Але мы гэтага не чакаем. Калі эфект лізісу залежыць толькі ад канчатковай канцэнтрацыі глюкозы, то мы не чакаем вялікай розніцы паміж 20% развядзеннем 1:1 і 20,8% развядзеннем 1:5. І ўсё ж нам гэта ўдалося.
Калі страта трамбацытаў адбываецца з-за лізісу трамбацытаў, утвараецца частковы лізат, пасля чаго цытакіны і фактары росту вызваляюцца ў пазаклеткавае асяроддзе. Некалькі даследаванняў паказалі, што лізат трамбацытаў амаль гэтак жа эфектыўны, як і PRP, у якасці раствора для праліферацыі [11]. Сама PRP паказала сябе як эфектыўны раствор для лячэння праліферацыі [12-14].
Неактыўныя трамбацыты цыркулююць у выглядзе дыска, узмоцненага некалькімі ўнутранымі структурамі. Падчас актывацыі яны прымаюць больш сферычную або амёбападобную форму, што прыводзіць да павелічэння аб'ёму. Павелічэнне аб'ёму патрабуе павелічэння плошчы паверхні, што з'яўляецца вынікам экструзіі сістэмы адкрытых канальцаў (OCS) і дадання экзацытных гранул да мембраны. Застаецца вызначыць, ці звязана павелічэнне MPV, выкліканае гіпертанічнай глюкозай, з адным ці абодвума гэтымі механізмамі, але калі апошні, то павелічэнне MPV будзе сведчыць аб дэгрануляцыі.
Гэта даследаванне паказала, што ўздзеянне высокіх канцэнтрацый глюкозы на PRP або трамбацыты цэльнай крыві прывяло да павелічэння MPV на працягу 15 хвілін з канцэнтрацыяй глюкозы 25% і 41,6% адпаведна.
Павелічэнне MPV трамбацытаў можа быць выклікана пашырэннем навакольных клубкоў мікратрубачак у адказ на прыток кальцыя. Лю і інш. Было паказана, што глюкоза апасродкуе прыток кальцыя праз канал TRPC6 трамбацытаў [6]. Наша гіпотэза заключаецца ў тым, што глюкоза выклікае расслабленне клубкоў мікратрубачак, што прыводзіць да павелічэння MPV і сенсібілізацыі і/або актывацыі трамбацытаў. Аднак, мяркуючы па нашых выніках, гэта толькі частка гісторыі. У нашых тэстах ніводная канцэнтрацыя ніжэй за D25W не прыводзіла да павелічэння MPV. Улічваючы, што мы не тэставалі ўздзеянне канцэнтрацый глюкозы ад 12,5% да 25%, вынікі нашай фазы 1 сведчаць аб тым, што ў гэтым дыяпазоне канцэнтрацый глюкозы можа існаваць парог, які прыводзіць да павелічэння MPV. Далейшае тэставанне на этапах 3 і 4 паказала, што 20-25% глюкозы, відаць, з'яўляецца парогам для гэтага, але застаецца незразумелым, чаму.
Мы таксама назіралі зніжэнне MPV прыкладна на 9% пасля цэнтрыфугавання. Незразумела, ці звязана гэта зніжэнне MPV з больш буйнымі і шчыльнымі трамбацытамі, якія затрымаліся ў пласце эрытрацытаў цэнтрыфугі. Гэта назіранне можа быць важным для клініцыстаў, бо яно можа азначаць, што трамбацыты PRP з'яўляюцца меншай і менш шчыльнай падгрупай трамбацытаў WB.
У папярэднім даследаванні мы паказалі, што падрыхтоўка PRP ручным метадам з'яўляецца нядорагай [8]. Калі глюкоза сенсібілізуе тканкавыя трамбацыты або PRP, робячы іх больш успрымальнымі да актывацыі, або калі PRP вырабляецца з частковымі ўласцівасцямі лізату, гэта можа палепшыць рэгенерацыю і знізіць неабходнасць тэрапіі. Такім чынам, спалучэнне PRP і высокаканцэнтраванай глюкозы можа быць больш эканамічна эфектыўным, чым толькі PRP або глюкоза.
Наша даследаванне мае некалькі недахопаў. Па-першае, мы выкарыстоўваем PRP, атрыманую некалькімі рознымі метадамі. Гэта можа прывесці да супярэчлівых вынікаў. Па-другое, мы не змаглі правесці біяхімічны аналіз ніводнага з нашых узораў, каб больш дакладна вызначыць, ці адбылася актывацыя трамбацытаў. Мы хацелі б вымераць P-селекцін, трамбацытарны фактар ​​4, манацытарныя агрэгаты трамбацытаў або іншыя маркеры актывацыі трамбацытаў, каб лепш зразумець ступень або наяўнасць дэгрануляцыі альфа-гранул, але гэта выходзіць за рамкі гэтага даследавання. Па-трэцяе, мы не змаглі пацвердзіць з дапамогай электроннай мікраскапіі або іншых метадаў, што павелічэнне MPV у трамбацытах, якія падвергліся ўздзеянню глюкозы, было абумоўлена ўздзеяннем на клубкі мікратрубачак.
Сумесі WB або PRP з 25% глюкозы павялічвалі MPV, сігналізуючы пра пачатак актывацыі трамбацытаў, хоць гэта даследаванне не прадэманстравала прагрэсавання агрэгацыі або дэгрануляцыі. Гіпертанічная сумесь глюкозы прывяла да страты трамбацытаў, што, магчыма, з'яўляецца літычным эфектам. Частковая актывацыя або лізіс трамбацытаў можа выклікаць рэгенерацыю тканін пасля ін'екцыі трамбацытаў. Незразумела, да якіх клінічных наступстваў могуць прывесці гэтыя змены. Далейшыя даследаванні прадэманстравалі больш дакладныя вымярэнні актывацыі або лізісу і ацанілі розныя клінічныя эфекты гіпертанічных сумесяў глюкозы з WB або PRP.
Глюкозапаліфератыўная тэрапія — гэта простая і недарагая рэгенератыўная тэрапія, якая хутка пашыраецца і падтрымлівае клінічныя даследаванні. Гэта даследаванне прапануе фізіялагічны механізм, які, калі будзе пацверджаны, можа дапамагчы нам зразумець частку рэгенератыўнага механізму праліфератыўнай тэрапіі.
Біямедыцынская і медыцынская інфарматыка ва Універсітэце Місуры, Медыцынская школа Канзас-Сіці, Канзас-Сіці, ЗША
Удзельнікі даследавання: Усе ўдзельнікі гэтага даследавання далі або не далі згоду. Міжнароднае таварыства клетачнай медыцыны выдала дазвол ICMS-2017-003. Наступны пратакол быў ухвалены для далейшага выкарыстання Інстытуцыйным аглядным саветам Міжнароднага таварыства клетачнай медыцыны: Назва: Разлік выхаду лекаў з плазмы, узбагачанай трамбацытамі, на аснове базавай колькасці трамбацытаў у агульным аналізе крыві. Удзельнікі даследавання: Усе аўтары пацвердзілі, што ў гэтым даследаванні не ўдзельнічалі жывёлы або тканіны. Канфлікт інтарэсаў: У адпаведнасці з Адзінай формай раскрыцця інфармацыі ICMJE ўсе аўтары заяўляюць наступнае: Інфармацыя аб аплаце/паслугах: Усе аўтары заяўляюць, што яны не атрымлівалі фінансавай падтрымкі ад якой-небудзь арганізацыі за прадстаўленую працу. Фінансавыя адносіны: Усе аўтары заяўляюць, што ў цяперашні час або на працягу апошніх трох гадоў яны не маюць фінансавых адносін ні з якой арганізацыяй, якая можа быць зацікаўлена ў прадстаўленай працы. Іншыя адносіны: Усе аўтары заяўляюць, што няма іншых адносін або дзейнасці, якія могуць паўплываць на прадстаўленую працу.
Харысан Т.Е., Боўлер Дж., Рыўз К. і інш. (17 мая 2022 г.) Уплыў глюкозы на колькасць і аб'ём трамбацытаў: наступствы для рэгенератыўнай медыцыны. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Аўтарскае права 2022 Harrison et al. Гэты артыкул знаходзіцца ў адкрытым доступе і распаўсюджваецца ў адпаведнасці з умовамі ліцэнзіі Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Дазволена неабмежаванае выкарыстанне, распаўсюджванне і прайграванне на любым носьбіце пры ўмове ўказання арыгінальнага аўтара і крыніцы.