В момента Javascript е деактивиран във вашия браузър. Някои функции на този уебсайт няма да работят, когато JavaScript е деактивиран.
Регистрирайте се с вашите конкретни данни и конкретно лекарство, което ви интересува, и ние ще съпоставим предоставената от вас информация със статии в нашата обширна база данни и незабавно ще ви изпратим PDF копие по имейл.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Стефания Стела, 1,2 Силвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Микеле Масимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланцафаме, 3 Себастиано Бианка, 4 Киара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера, 6, 7 Ливия Манзела1,21 Отдел за клинична и експериментална медицина cine, University of Catania, Catania, 95123, Италия;2 Център за експериментална онкология и хематология, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco“, Catania, 95123, Италия;3 Медицинска онкология, АОУ Поликлиника „Г.Rodolico – San Marco”, Катания, 95123, Италия;4 Медицинска генетика, ARNAS Garibaldi, Катания, 95123, Италия;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Италия;6 Департамент по биомедицински и биотехнологични науки, Университет на Катания, Медицинска генетика, Катания, Италия, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Италия Комуникации: Стефания Стела, тел. +39 095 378 1946, имейл [имейл защитен];[имейл защитен] Цел: Мутации на зародишната линия в BRCA1 и BRCA2 и установен рак на гърдата (BC), яйчници (OC) и други, свързани с доживотен риск от рак. Тестването на BRCA гена е ключово за оценка на индивидуалния риск, както и за намиране на методи за превенция при здрави носители и приспособяване на лечението при пациенти с рак. Разпространението на промените в BRCA1 и BRCA2 варира значително в различните географски региони и въпреки че съществуват данни за BR CA патогенни варианти в сицилиански семейства, липсват проучвания, специално насочени към популациите в източна Сицилия. Целта на нашето проучване беше да изследваме честотата и разпространението на BRCA патогенни промени в зародишната линия в група от пациенти с РМЖ от източна Сицилия и да оценим връзката им със специфични черти на РМЖ, използвайки секвениране от следващо поколение. Наличието на промени, свързани със степента на тумора и индекса на пролиферация. РЕЗУЛТАТИ: Като цяло 35 пациенти (9%) са имали BRCA патогенен вариант, 17 (49%) в BRCA1 и 18 (51%) в BRCA2. BRCA1 промените са преобладаващи при тройно отрицателни пациенти с РМЖ, докато BRCA2 мутациите са по-чести при пациенти с лумен РМЖ. В сравнение с неносителите, субектите с BRCA1 варианти са имали значително по-висока степен на тумор и пролифер Заключения: Нашите констатации предоставят общ преглед на мутационния статус на BRCA при пациенти с РМЖ от източна Сицилия и потвърждават ролята на NGS анализа при идентифицирането на пациенти с наследствен РМЖ. Като цяло тези данни са в съответствие с предишни доказателства в подкрепа на скрининга на BRCA за правилна профилактика и лечение на рак при носители на мутация.
Ракът на гърдата (РМЖ) е най-разпространеното злокачествено заболяване в световен мащаб и най-смъртоносният рак при жените.1 Биологичните особености, които определят прогнозата и клиничното поведение на РМЖ, са обстойно проучени и частично изяснени с течение на времето. Всъщност в момента се използват няколко сурогатни маркера за класифициране на РМЖ в различни молекулни подтипове. Те са естроген (ER) и/или прогестеронов рецептор (PgR), амплификация на рецептор 2 на човешки епидермален растежен фактор (HER2). , индекс на пролиферация Ki-67 и степен на тумор (G).2 Комбинацията от тези променливи идентифицира следните категории BC: 1) Луминални тумори, показващи експресия на ER и/или PgR, представляват 75% от BCs. Тези тумори бяха допълнително разделени на Luminal A, когато Ki-67 е под 20% и HER2 отрицателен, и Luminal B, когато Ki-67 е равен или над 20% и в присъствието на HER2 амплификация, независимо от индекса на пролиферация;2) HER2+ тумори, които са ER и PgR отрицателни, но показват HER2 амплификация. Тази група представлява 10% от всички тумори на гърдата;3) Тройно негативният рак на гърдата (TNBC), който не показва експресия на ER и PgR и амплификация на HER2, представлява около 15% от раковите заболявания на гърдата.2-4
Сред тези подтипове BC, степента на тумора и индексът на пролиферация представляват биомаркери в напречно сечение, които са пряко и независимо свързани с агресивността и прогнозата на тумора.5,6
В допълнение към гореспоменатите биологични характеристики, ролята на наследствените генетични промени, водещи до развитието на РМЖ, става все по-важна през последните няколко години.7 Около 1 от 10 тумора на гърдата се унаследяват поради промени в зародишната линия в специфични гени.8 Две големи епидемиологични проучвания, включващи повече от 180 000 жени, наскоро идентифицираха група от осем гена (т.е. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C и RAD51D), основно отговорни за наследствения РМЖ. Сред тези гени, BRCA1 и BRCA2 (наричани по-нататък BRCA1/2) показват най-силна връзка с развитието на тумори на гърдата.9-12 Всъщност мутациите на зародишната линия BRCA1/2 значително повишават риска от РМЖ през целия живот, както и други злокачествени заболявания, включително овариални, простата, панкреас, колоректален и меланом. От 13 до 80 години кумулативната честота на РМЖ е 72% при жени с BRCA1 патогенен вариант (PV) и 69% при жени с BRCA2 PV.14
Трябва да се отбележи, че скорошна публикация предполага, че рискът от РМЖ зависи от вида на PV. Всъщност, в сравнение с патогенните варианти на отрязване, ярките миссенс варианти, особено в гена BRCA1, са свързани с намален риск от РМЖ, особено при по-възрастни жени.15
Наличието на BRCA1 или BRCA2 PV се свързва с различни биологични и клинико-патологични характеристики.16,17 Свързаните с BRCA1 БК са склонни да бъдат клинично агресивни, слабо диференцирани и силно пролиферативни. Тези тумори обикновено са тройно отрицателни и имат ранна възраст на поява. Туморите, които се появяват при пациенти с мутация на BRCA2, обикновено показват умерени до добре диференцирани степени и променливи пролиферативни индекси. Тези тумори са по-чести в лумен В и обикновено се срещат при по-възрастни хора.16-18 По-специално, мутациите в BRCA1 и BRCA2 повишават чувствителността към специфични лечения, включително соли на платина и таргетни лекарства като инхибитори на поли(ADP-рибоза) полимераза (PARPi).19,20
През последните няколко години прилагането на секвениране от следващо поколение (NGS) в клиничната практика даде възможност на все по-голям брой пациенти с РМЖ да преминат молекулярно изследване за синдроми на предразположеност към рак, включително BRCA1/2.21 Едновременно с това дефиниции, базирани на точни критерии по отношение на фамилната история, демографски и клинико-патологични характеристики, за по-добро идентифициране на лица, заслужаващи тестване за BRCA1/2.22,23 В този контекст доказателствата e се натрупва при скрининг на BRCA1/2 в специфични популации, подчертавайки разликите между географските региони.24–27 Въпреки че има доклади за кохортата на BC в западна Сицилия, има по-малко данни за скрининга на BRCA1/2 в популацията на източна Сицилия.28,29
Тук описваме резултатите от скрининга на зародишна линия BRCA1/2 при пациенти с РБК от източна Сицилия, като допълнително корелираме наличието на BRCA1 или BRCA2 мутации с основните клинико-патологични характеристики на тези тумори.
Беше проведено ретроспективно проучване в „Центъра за експериментална онкология и хематология“ в болница Policlinico.Rodolico – San Marco в Катания. От януари 2017 г. до март 2021 г. общо 455 пациенти с рак на гърдата и яйчниците, меланом, панкреас или простата бяха насочени към нашата лаборатория за молекулярна диагностика за BRCA/2 генетично изследване. Това проучване беше проведено в съответствие с Decla дажба на Хелзинки и всички участници предоставиха писмено информирано съгласие преди молекулярния анализ.
Хистологичните и биологични характеристики (ER, PgR, HER2 статус, Ki-67 и степен) на РМЖ са оценени върху биопсични или хирургични проби, като се вземат предвид само агресивните туморни компоненти. Въз основа на тези характеристики, РМЖ са класифицирани както следва: луминал А (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67<20%), луминал В (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), лумен B-HER2+ (ER и/или PgR+, HER2+), HER2+ (ER и PgR-, HER2+) или тройно отрицателен (ER и PgR-, HER2-).
Преди оценка на статуса на мутация на BRCA1 и BRCA2, мултидисциплинарен екип, включващ онколог, генетик и психолог, проведе консултация с туморна генетика за всеки пациент, за да определи наличието на BRCA1 и/или BRCA1.или индивиди с висок риск от PV в гена BRCA2. Изборът на пациенти е извършен съгласно насоките на Италианското дружество по медицинска онкология (AIOM) и местните сицилиански препоръки.30,31 Тези критерии включват: (i) фамилна анамнеза за известни патогенни варианти в гените за чувствителност (напр. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) мъжки с BC;(iii) тези с BC и OC;(iv) жени с РМЖ <36 години, TNBC <60 години или двустранен РМЖ <50 години;(v) лична медицинска история на BC <50 години и поне един роднина от първа степен: (a) BC < 50 години;(b) немуцинозен и неграничен OC на всяка възраст;(в) двустранен BC;(d) мъжки BC;(e) рак на панкреаса;(f) рак на простатата;(vi) две или повече лична анамнеза за РМЖ > 50 години и фамилна анамнеза за РМЖ, ОК или рак на панкреаса за роднини, които са роднини от първа степен един на друг (включително роднини, с които тя е роднина от първа степен);(vii) Лична история на OC и поне един роднина от първа степен: (a) пр. н. е. <50 години;б) НОК;(в) двустранен BC;(d) мъжки BC;(vii) жена с високостепенен серозен РЯ.
20 mL периферна кръвна проба беше взета от всеки пациент и събрана в EDTA епруветки (BD Biosciences). Геномна ДНК беше изолирана от 0,7 mL проби от цяла кръв с помощта на QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Италия) в съответствие с инструкциите на производителя и премина през Qubit® 3.0 флуорометър (Thermo Fisher Scientific, Wal там, Масачузетс, САЩ) Извършете количествено определяне.Обогатяването на целите и подготовката на библиотеката се извършват от Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, готови за зареждане в комплекта Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 за автоматизирана подготовка на библиотеката съгласно инструкциите на производителя. Комплектът се състои от два мултиплексни PCR праймерни пула, които могат да се използват за изследване на всички BRCA1 (NM_007300.3) и BRCA2 (NM_000059.3) гени.B накратко, 15 µL от всяка разредена ДНК проба (10 ng) се добавя към баркодирани плаки за подготовка на библиотеката и всички реактиви и консумативи се зареждат в инструмента Ion Chef™. След това автоматизираната подготовка на библиотеката и обединяването на библиотеката с баркодирани проби се извършват на инструмента Ion Chef™. След това броят на подготвените библиотеки се оценява с Qubit® 3.0 флуорометър (Thermo Fisher Scientific, Walt шунка, Масачузетс, САЩ) съгласно инструкциите на производителя. Накрая, библиотеките се комбинират в еквимоларни съотношения в епруветки за проби от библиотеки Ion Chef™ (епруветки с баркод) и се зареждат в инструмента Ion Chef™. Секвенирането е извършено с помощта на инструмент Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific), използващ чип Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). анализът е извършен от Amplicon Suite (SmartSeq srl) и Ion Reporter Software.
Номенклатурата на всички варианти следва настоящите насоки на Консорциума за вариация на човешкия геном, достъпен онлайн (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клиничното значение на вариантите на BRCA1/2 беше определено с помощта на класификацията на Международния консорциум ENIGMA (мрежа, базирана на доказателства за интерпретиране на мутантни алели на зародишната линия, https://enigmaconsortium.org/) и консултации различни бази данни като ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD и UMD. Класификацията включва пет отделни рискови категории: доброкачествени (категория I), вероятно доброкачествени (категория II), вариант с несигурно значение (VUS, категория III), вероятно патогенни (категория IV) и патогенни (категория V). VarSome анализира и ефекта на мутациите върху протеиновата структура и функция, информативен инструмент с достъп до 30 бази данни.32
За да се определи потенциално клинично значение на всеки VUS, бяха използвани следните изчислителни алгоритми за прогнозиране на протеини: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) и Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd _input.php).Варианти, класифицирани като клас 1 и 2, се считат за див тип.
Секвенирането на Sanger потвърди наличието на всеки патогенен вариант. Накратко, двойка специфични праймери беше проектирана за всеки открит вариант чрез използване на BRCA1 и BRCA2 генни референтни последователности (NG_005905.2, NM_007294.3 и NG_012772.3, NM_000059.3, съответно). Следователно беше извършена насочена PCR, последвана от последователност на Sanger ncing.
Пациентите с отрицателен тест за гена BRCA1/2 бяха тествани чрез амплификация на проба, зависима от мултиплексно лигиране (MLPA) съгласно инструкциите на производителя, за да се оцени наличието на големи геномни пренареждания (LGR). Накратко, ДНК пробите се денатурират и се използват до 60 BRCA1 и BRCA2 ген-специфични сонди, всяка от които открива специфична ДНК последователност с дължина приблизително 60 нуклеотида.Pro. продуктите за амплификация, състоящи се от уникален набор от PCR ампликони, след това бяха анализирани чрез капилярна електрофореза и от софтуера Cofalyser.Net във връзка с подходящите специфични за партидите таблици Cofalyser (www.mrcholland.com).
Избрани клинико-патологични променливи (хистологична степен и Ki-67% индекс на пролиферация) бяха свързани с наличието на BRCA1/2 PV, изчислени с помощта на софтуера Prism v. 8.4, използвайки точния тест на Fisher, приемайки, че p-стойността <0,05 е значима.
Между януари 2017 г. и март 2021 г. 455 пациенти бяха изследвани за мутации на зародишна линия BRCA1/2. Изследването на мутациите беше извършено в Центъра за експериментална онкология и хематология на болница Policlinico. Съгласно сицилианското ръководство (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Родолико от Катания – Сан Марко“ като цяло, 389 пациенти Имаше рак на гърдата, 37 рак на яйчниците, 16 рак на панкреаса, 8 рак на простатата и 5 меланома.Разпределението на пациентите според вида на рака и резултатите от анализа е показано на фигура 1.
Фигура 1 показва диаграма, показваща общ преглед на изследването. Пациенти с тумори на гърдата, меланом, панкреас, простата или яйчници са тествани за мутации в гените BRCA1 и BRCA2.
Съкращения: PVs, патогенен вариант;VUS, вариант с несигурно значение;WT, див тип BRCA1/2 последователност.
Ние селективно фокусирахме нашите проучвания върху кохорти от рак на гърдата. Пациентите имаха средна възраст 49 години (диапазон 23-89) и бяха предимно жени (n=376, или 97%).
От тези субекти 64 (17%) са имали BRCA1/2 мутации и всички са били жени. Тридесет и пет (9%) са имали PV и 29 (7,5%) са имали VUS. Седемнадесет (48,6%) от 35-те патогенни варианта са възникнали в BRCA1 и 18 (51,4%) в BRCA2, докато 5 VUS са се появили в BRCA1 (17,2%) и 24 (82) .8%) в BRCA2 (Фигури 1 и 2). LGR не присъства в анализа на MLPA.
Фигура 2. Анализ на BRCA1 и BRCA2 мутации при 389 пациенти с рак на гърдата. (A) Разпределение на патогенни варианти (PV) (червено), варианти с несигурно значение (VUS) (оранжево) и WT (синьо) при 389 пациенти с рак на гърдата;(B) 389 пациенти с рак на гърдата. Тридесет и пет (9%) са имали BRCA1/2 патогенни варианти (PV). Сред тях 17 (48,6%) са носители на BRCA1 PV (тъмночервени) и 18 (51,4%) са носители на BRCA2 (светлочервени);(C) 29 (7,5%) от 389 субекта са носители на VUS, 5 (17,2%) BRCA1 гени (тъмно оранжеви) и 24 (82,8%) BRCA2 гени (светло оранжеви).
Съкращения: PVs, патогенен вариант;VUS, вариант с несигурно значение;WT, див тип BRCA1/2 последователност.
След това изследвахме разпространението на молекулярните подтипове на BC при пациенти с BRCA1/2 PV. Разпределението включваше 2 (5,7%) луминален A, 15 (42,9%) луменален B, 3 (8,6%) луменален B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ и 13 (37,1%) пациенти с TNBC. Сред BRCA1-позитивните пациенти, 5 (29,4) %) са имали лумен B BC, 2 (11,8%) са имали HER2+ заболяване и 10 (58,8%) са имали TNBC. Туморите без BRCA1 мутации са били или луминален A, или луменален B-HER2+ (Фигура 3). В BRCA2-позитивната подгрупа 10 (55,6%) тумори са били луминален B, 3 (16,7%) са били луминален B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC и 2 (11,1%) са лумен А (Фигура 3). В тази група не присъстват HER2+ тумори. По този начин мутациите на BRCA1 преобладават при пациенти с TNBC, докато измененията на BRCA2 са преобладаващи в лумен B индивиди.
Фигура 3 Разпространение на подтипове рак на гърдата при пациенти с патогенни варианти на BRCA1 и BRCA2. Хистограми, показващи разпределението на BRCA1- (тъмночервено) и BRCA2- (светлочервено) PV сред молекулярни подтипове на пациенти с рак на гърдата. Числата, докладвани във всяко поле, представляват процента пациенти с BRCA1 и BRCA2 PV за всеки подтип рак на гърдата.
Съкращения: PVs, патогенен вариант;HER2+, човешки епидермален растежен фактор 2 положителен рецептор;TNBC, тройно отрицателен рак на гърдата.
Впоследствие оценихме типа и генната локализация на BRCA1 и BRCA2 PV. В BRCA1 PV наблюдавахме 7 единични нуклеотидни варианта (SNV), 6 делеции, 3 дублирания и 1 вмъкване. Само една мутация (c.5522delG) представлява ново откритие. Най-често срещаният BRCA1 PV, открит и при двата субекта, беше c.5035_5039 delCTAAT. Тази промяна включва делеция на пет нуклеотида (CTAAT) в BRCA1 екзон 15, което води до заместване на аминокиселината левцин с тирозин при кодон 1679 и поради транслационно изместване на рамката с предвиден алтернативен стоп кодон води до преждевременно съкращаване на протеини. Всички други промени се откриват само в един случай. За отбелязване е, че един от докладваните PVs е локализиран в консенсусен регион на мястото на снаждане (c.4357+1G>T) (Таблица 1).
По отношение на BRCA2 PV наблюдавахме 6 делеции, 6 SNV и 2 дублирания. Нито една от откритите промени не е нова. Три мутации се повтарят в нашата популация, c.428dup и c.8487+1G>A, наблюдавани при 3 субекта, последвани от c.5851_5854delAGTT, извлечено в два случая. Промяната на c.428dup включва повторение на C в екзон 5 на BRCA2, за който се предполага, че кодира съкратен, нефункционален протеин. Мутацията c.8487+1G>A възниква в интронната област на BRCA2 интрон 19 (± 1,2) и засяга консенсусната последователност на сплайсинг, което води до променен сплайсинг, водещ до анормален или липсващ протеин. Патогенният вариант c.5851_5854delAGTT се дължи до 4-нуклеотидна делеция от нуклеотидни позиции 5851 до 5854 в кодиращия екзон 10 на гена BRCA2 и води до транслационно изместване на рамката с предвиден алтернативен стоп кодон (p.S1951WfsTer). По-специално, както беше съобщено по-рано, и двете промени c.631G>A и c.7008-2A>T бяха открити при един и същ пациент.34 Първата мутация включва заместването на аденозин (A) в BRCA2 екзон 7 с нуклеотид, съдържащ гуанин (G), което води до промяна на валин в изолевцин при кодон 211, изолевцин Аминокиселината е аминокиселина с много сходни свойства. Тази промяна засяга нормалния сплайсинг на иРНК. Вторият вариант е разположен в интронична област и води до двойно А към субтимин (Т) институция преди екзон 13 на гена, кодиращ BRCA2. Промяната c.7008-2A>T може да генерира множество транскрипти с различна дължина. Освен това, в групата на BRCA2 PV, 4 от 18 промени (22,2%) са интронични.
След това картографирахме вредни мутации на BRCA1/2 във функционални домени и протеин-свързващи региони (фиг. 4). В гена BRCA1 50% от PVs бяха локализирани в клъстерната област на рак на гърдата (BCCR), докато 22% от мутациите бяха локализирани в клъстерната област на рак на яйчниците (OCCR) (фиг. 4A). В BRCA2 PV 35,7% от вариантите бяха разположени в BCCR CR регионът и 42,8% от мутациите бяха локализирани в OCCR (фиг. 4B). След това оценихме местоположението на PV в протеиновите домейни BRCA1 и BRCA2. За протеина BRCA1 открихме три PV в домейните на примката и навитата намотка и две мутации в домейна BRCT (фиг. 4A). За протеина BRCA2, 4 PV, картографирани към повторението на BRC домейн, докато 3 интронични и 3 екзонични промени бяха открити в олиго/олигозахарид-свързващи (OB) и кула (T) домейни (Фигура 4B).
Фигура 4 Схематично представяне на протеини BRCA1 и BRCA2 и локализация на патогенни варианти. Тази фигура показва разпределението на патогенни варианти на BRCA1 (A) и BRCA2 (B) при пациенти с рак на гърдата. Екзоничните мутации са показани в синьо, докато интроничните варианти са показани в оранжево. Височината на лентата представлява броя на случаите. Отчетени са протеините BRCA1 и BRCA2 и техните функционални домейни. (A) BR CA1 протеинът съдържа бримков домейн (RING) и ядрена локализационна последователност (NLS), навита спирала домейн, SQ/TQ клъстерен домен (SCD) и BRCA1 C-терминален домен (BRCT). (B) BRCA2 протеинът съдържа осем BRC повторения, ДНК-свързващ домен със спирален домен (Helical), три олигонуклеотидни/олигозахарид-свързващи (OB) гънки, кула домейн (T) и NLS от страната C. Областите, наречени клъстерен регион на рак на гърдата (BCCR) и клъстерен регион на рак на яйчниците (OCCR), са показани в долната част.*Представлява мутации, които определят стоп кодони.
След това изследвахме клинико-патологичните характеристики на РМЖ, които биха могли да корелират с наличието на BRCA1/2 PV. Бяха налични пълни клинични записи за 181 BRCA1/2-отрицателни пациенти (не-носители) и всички носители (n = 35). Имаше корелация между скоростта на туморна пролиферация и степента.
Изчислихме разпределението на Ki-67 въз основа на медианата на нашата кохорта (25%, диапазон <10-90%). Субектите с Ki-67 < 25% бяха определени като „ниски Ki-67″, докато индивидите със стойности ≥ 25% бяха считани за „високи Ki-67″. Бяха открити значителни Ki-67 разлики (p<0,01) между неносители и BRCA1 PV носител s (фиг. 5A).
Фигура 5 Корелация на Ki-67 с разпределение на степента при жени с рак на гърдата с и без BRCA1 и BRCA2 PVs. (A) Boxplot, показващ средните стойности на Ki-67 при 181 пациенти без носител на РМЖ спрямо пациенти с BRCA1 (18) или BRCA2 (17) PV. P стойности под 0,5 се считат за статистически значими. (B) Хистограма, представяща разпределението на пациенти с РМЖ с рак в групи за хистологична степен (G2 и G3) според мутационния статус на BRCA1 и BRCA2 (субекти на WT, носители на PV на BRCA1 и BRCA2).
По същия начин проучихме дали степента на тумора корелира с наличието на BRCA1/2 PV. Тъй като G1 BC отсъстваше в нашата популация, ние разделихме пациентите на две групи (G2 или G3). В съответствие с резултатите от Ki-67, анализът разкри статистически значима корелация между степента на тумора и BRCA1 мутацията, с по-висок дял на G3 тумори при носители на BRCA1 в сравнение с неносители (p<0,0 05) (Фигура 5B).
Напредъкът в технологията за секвениране на ДНК даде възможност за безпрецедентен напредък в генетичното тестване на BRCA1/2, с решаващи последици за пациенти с фамилна анамнеза за рак. Към днешна дата приблизително 20 000 варианта на BRCA1/2 са идентифицирани и класифицирани според Американското дружество по медицинска генетика 35 и системата ENIGMA.35,36 Добре известно е, че мутационният спектър на BRCA1/2 варира в широки граници в различни географски региони.37 В рамките на Италия процентът на BRCA1/2 PVs варира от 8% до 37%, показвайки широка променливост в рамките на страната.38,39 С население от почти 5 милиона, Сицилия е петият по големина регион в Италия по отношение на броя на жителите. Въпреки че съществуват данни за разпространението на BRCA1/2 в западна Сицилия, няма обширни доказателства в източната част на острова.
Нашето проучване е един от първите доклади за честотата на BRCA1/2 PV при пациенти с РМЖ в източна Сицилия.28 Фокусирахме нашия анализ върху РМЖ, тъй като това е най-често срещаното заболяване в нашата кохорта.
При тестване на 389 пациенти с BC, 9% са носили BRCA1/2 PVs, равномерно разпределени между BRCA1 и BRCA2. Тези резултати са в съответствие с тези, докладвани по-рано в италианската популация.28 Интересното е, че 3% (13/389) от нашата кохорта са мъже. Този процент е по-висок от очаквания за мъжки рак на гърдата (1% от всички BCs),40 отразявайки нашата селекция от популации въз основа на риска от BRCA1/2 мутация. Въпреки това, нито един от тези мъже не е развил BRCA1/2 PV, така че те са били кандидати за допълнителен молекулярен анализ, за ​​да се изключи наличието на по-рядко срещани мутации като PALB2, RAD51C и D, наред с други. Варианти с несигурна значимост са извлечени при 7% от субектите, при които BRCA2 VUS е очевиден. Дори този резултат е в съответствие с предварително съществуващите доказателства.28,41,42
Когато анализирахме разпределението на BC молекулни подтипове при BRCA1/2 мутантни жени, ние потвърдихме известни асоциации между TNBC и BRCA1 PV (58,8%) и между лумен B BC и BRCA2 PV (55,6%).16,43 Луминалните A и HER2+ тумори в BRCA1 и BRCA2 PV носители са в съответствие със съществуващите литературни данни.16,43
След това се фокусираме върху типа и местоположението на BRCA1/2 PV. В нашата кохорта най-често срещаният BRCA1 PV беше c.5035_5039delCTAAT. Въпреки че Incorvaia et al.не са описали този вариант в тяхната сицилианска кохорта, други автори го съобщават като зародишна линия BRCA1 PV.34 Няколко BRCA1 PVs са открити в нашата кохорта – напр. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA и c.5266dupC – които са наблюдавани в Сицилия.28 От тях две BRCA1 мутации на основателя (c.18 1T>G и c.5266dupC) се срещат често при ашкеназки евреи от Източна и Централна Европа (Полша, Чехия), Словения, Австрия, Унгария, Беларус и Германия), 44,45 и в Съединените щати и Аржентина наскоро беше определен като „рецидивиращ вариант на зародишна линия“ при италиански пациенти с РМЖ и РЯ. Вариантът 34c.514del беше идентифициран преди това при 8 пациенти с рак на гърдата от северните Сицилия в Палермо и Месина. Интересното е, че дори Incorvaia et al.откриха варианта c.3253dupA в някои семейства в Катания.28 Най-представителните BRCA2 PVs са c.428dup, c.5851_5854delAGTT и интроничният вариант c.8487+1G>A, които са докладвани по-подробно 28 при пациент в Палермо с c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV се наблюдава в домакинствата в северозападна Сицилия, главно в регионите Трапани и Палермо, докато c.5851_5854delAGTT PV се наблюдава в домакинствата в северозападна Сицилия. Вариантът 8487+1G>A е по-често срещан при субекти от Месина, Палермо и Калтанисета.28 Rebbeck et al.по-рано описа промяната c.5851_5854delAGTT в Колумбия.37 Друг BRCA2 PV, c.631+1G>A, е открит при пациенти с BC и OC от Сицилия (Агридженто, Сиракуза и Рагуза).28 По-специално, ние наблюдавахме съвместното съществуване на два варианта BRCA2 (BRCA2 c.631G>A и c.7008-2A>T ) при същия пациент, за който предположихме, че е сегрегиран в цис режим, както беше съобщено по-рано по този начин.34,46 Тези BRCA2 uble мутации наистина се наблюдават често в италианския регион и е установено, че въвеждат преждевременни стоп кодони, засягащи сплайсинга на информационната РНК и причинявайки неуспех на протеина BRCA2.47,48
Ние също картографирахме BRCA1 и BRCA2 PV в предполагаеми OCCR и BCCR региони на протеинови домени и гени. Тези региони бяха описани от Rebbeck et al.като рискови зони за развитие съответно на рак на яйчниците и гърдата.49 Въпреки това, доказателствата относно връзката между местоположението на вариантите на зародишната линия и риска от рак на гърдата или яйчниците остават противоречиви.28,50-52 В нашата популация BRCA1 PVs са предимно разположени в BCCR региона, докато BRCA2 PVs са предимно разположени в OCCR региона. Въпреки това не успяхме да намерим връзка между предполагаемите OCCR и BC CR региони и характеристики на BC. Това може да се дължи на ограничения брой пациенти с BRCA1/2 мутации. От гледна точка на протеиновия домейн, BRCA1 PVs са разпределени по протежение на целия протеин, а BRCA2 измененията се откриват за предпочитане в BRC повтарящия се домейн.
И накрая, ние корелирахме клинико-патологичните характеристики на РМЖ с BRCA1/2 PV. Поради ограничения брой включени пациенти, открихме само значителна корелация между Ki-67 и степента на тумора. Въпреки че оценката и интерпретацията на Ki-67 остават донякъде противоречиви, сигурно е, че високите нива на пролиферация са свързани с повишен риск от рецидив на заболяването и намалена преживяемост. Към днешна дата границата за разграничаване между „висока ” и „нисък” Ki-67 е 20%. Въпреки това, този праг не се отнася за нашата популация пациенти с BRCA1/2 мутация, която има средна стойност на Ki-67 от 25%. Тази тенденция при високи нива на Ki-67 може да се обясни с разпространението в нашите кохорти на луминал B и TNBC, от които са налице малко тумори на луминал A. Въпреки това, някои доказателства изглежда предполагат, че по-висока граница на Ki-67 (25– 30%) може по-добре да стратифицира пациентите според тяхната прогноза. 53, 54 От резултатите от нашия анализ значителна корелация не е изненадваща. Среща се между високо Ki-67 и степени и наличието на BRCA1 PV. Всъщност свързаните с BRCA1 тумори са типични за TNBC и проявяват по-агресивни характеристики. 16, 17
В заключение, това проучване предоставя доклад за мутационния статус на BRCA1/2 в кохорта от BC от източна Сицилия. Като цяло, нашите констатации са в съответствие с предварително съществуващите доказателства, както по отношение на разпространението на мутациите, така и по отношение на клинико-патологичните характеристики при BC. Повече проучвания в по-големи популации от BRCA1/2-мутантни пациенти с BC, като например използването на мултигеномно разширен мутационен анализ, са оправдани за оценка на присъствието на PVs, които са различни и по-редки от BRCA1/2. Това ще позволи идентифицирането и правилното управление на нарастващия брой субекти с повишен риск от рак поради генетични мутации.
Ние потвърдихме, че пациентите са подписали информирано съгласие за освобождаване на своите проби от тумори анонимно за изследователски цели. Всички пациенти са подписали писмено информирано съгласие съгласно Декларацията от Хелзинки. Съгласно политиката на AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“, това проучване е освободено от етичен преглед, тъй като анализът BRCA1/2 е извършен съгласно клиничната практика и всички пациенти са дали писмено информирано съгласие. Пациентите също така се съгласяват да използването на техните данни за изследователски цели.
Благодарим на проф. Паоло Винери за съдействието му в грижите за пациенти с рак на гърдата, както беше поискано от Комисията по етика.
Федерика Марторана съобщава за хонорари от Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Другите автори декларират липса на конфликт на интереси в тази работа.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN оценява заболеваемостта и смъртността от 36 вида рак в 185 страни по света. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660