„Никога не се съмнявайте, че малка група мислещи, отдадени граждани могат да променят света.Всъщност той е единственият там.”
Мисията на Cureus е да промени дългогодишния модел на медицинско публикуване, при който представянето на изследвания може да бъде скъпо, сложно и отнема много време.
Богата на тромбоцити плазма/prp, тъканна регенерация, активиране на тромбоцитите, глюкозо-пролиферативна терапия, тромбоцити, пролиферативна терапия
Цитирайте тази статия като: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 май 2022 г.) Ефектът на глюкозата върху броя и обема на тромбоцитите: последици за регенеративната медицина.Лек 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Богатата на тромбоцити плазма (PRP) и хипертоничните разтвори на глюкоза обикновено се използват за инжектиране в регенеративната медицина, понякога заедно.Ефектът на хипертоничната глюкоза върху лизиса и активирането на тромбоцитите не е докладван досега.Тествахме ефекта от повишените концентрации на глюкоза върху броя на тромбоцитите и еритроцитите, както и клетъчните обеми в PRP и цяла кръв (WB).Наблюдава се бързо частично намаляване на броя на тромбоцитите при всички глюкозни смеси, смесени с PRP или цяла кръв, в съответствие с частичен лизис. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което предполага бързо настаняване на остатъчните тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което предполага бързо настаняване на остатъчните тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност. След първите минути броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бързото аккомодиране на окончателните тромбоцити до екстремален (>2000 mOsm) хипертонус. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бързо настаняване на остатъчните тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 След първите минути броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бързото адаптиране на окончателните тромбоцити към екстремалното (>2000 mOsm) хиперосмолярно състояние. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бърза адаптация на остатъчните тромбоцити към екстремно (>2000 mOsm) хиперосмоларно състояние.Концентрации на глюкоза от 25% и повече водят до значително увеличение на средния обем на тромбоцитите (MPV), което показва ранен стадий на активиране на тромбоцитите.Необходими са допълнителни проучвания, за да се определи дали настъпва лизис или активиране на тромбоцитите и дали инжектирането на хипертонична глюкоза самостоятелно или в комбинация с PRP може да осигури допълнителна клинична полза.
През 50-те години на миналия век американският хирург Джордж Хакет открива, че може трайно да облекчи болките в ставите и гърба при много пациенти чрез инжектиране на пролиферативен разтвор в сухожилията и връзките.Неговите експерименти върху зайци показват, че лечението, което той нарича пролиферативна терапия, кара сухожилията да се уголемяват и укрепват.Хистологичните изследвания потвърждават, че по време на този процес се произвежда нов колаген [1].
През първите няколко десетилетия бяха изпробвани много различни решения за разпространение.До 90-те години на миналия век повечето практикуващи смятаха високите концентрации на глюкоза за най-безопасния и ефективен метод.Механизмът на действие обаче остава неясен.
Малко клинични проучвания са проведени през 20-ти век след работата на Hackett.Въпреки това, през 2000-те имаше подновен интерес и бяха завършени няколко успешни клинични изпитвания на пролиферативна терапия за лечение на болки в кръста [2], остеоартрит на коляното [3] и латерален епикондилит [4].
Регенерацията на тъканите изисква участието на стволови клетки.Следователно високите концентрации на глюкоза трябва по някакъв начин да предизвикат миграция, репликация и диференциация на стволови клетки.Ние предполагаме, че тромбоцитите могат да действат като пратеници и че високите концентрации на глюкоза могат да накарат тромбоцитите да отделят цитокини и растежни фактори, като по този начин насърчават регенеративните процеси, особено миграцията на стволови клетки към области с високи концентрации на глюкоза.
Активирането на тромбоцитите винаги предшества повишаването на вътреклетъчния калций [5].Liu и др.през 2008 г. показаха, че високите нива на глюкоза повишават активността на преходните рецепторни потенциални канонични канали тип 6 (TRPC6) в плазмената мембрана, което води до приток на калциеви йони в тромбоцитите [6].Друго проучване показа, че излагането на маргиналната зона на микротубулите на калциеви йони причинява релаксация, разширяване и деформация на маргиналната зона, което от своя страна причинява промяна във формата от дискова към сферична, което води до среден обем на тромбоцитите (MPV) [7].
Нашата хипотеза в това проучване е, че излагането на тромбоцитите на високи концентрации на глюкоза засяга маргиналната зона на микротубулите и вътреклетъчната среда, което води до увеличаване на MPV.
Всички участници подписаха формуляр за информирано съгласие, след като бяха обяснени подробностите за изследването и преди да получат пробите.В това проучване са използвани само PRP проби с хематокрит над 2%, така че броят на еритроцитите (еритроцитите) и средният корпускуларен обем на червените кръвни клетки (MCV) могат да бъдат включени за сравнение.
Изследването е проведено в четири фази, първата фаза е PRP, а останалите фази са цяла кръв (Таблица 1).Както беше описано по-рано [8], всички относителни центробежни сили (RCF, g-сила) бяха изчислени от средната точка (Rmid, в cm) на кръвния стълб в центробежната спринцовка.Избрахме да използваме MPV като маркер за сенсибилизация на тромбоцитите и броя на тромбоцитите като индикатор за потенциален лизис на тромбоцитите, като и двата могат лесно да бъдат измерени на стандартни хематологични анализатори.
В първата фаза 47 доброволци дариха кръвни проби - една епруветка с етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) и една PRP цяла кръвна проба (антикоагулирана с натриев цитрат (NaCl, 3%)) (Таблица 1).Веднага поставете кобилицата в тръбата.Пълна кръвна картина (CBC) беше извършена на EDTA проби в три екземпляра, а NaCl пробите бяха анализирани в три екземпляра за CBC анализ и след това PRP беше приготвен по различни методи, описани по-горе [8].Всички PRP проби се приготвят чрез центрофугиране при 900–1000 g.Смесете всяка PRP проба на вортекс миксер за 5–10 секунди, след което разделете пет аликвотни части от 0,5 ml в епруветки.
За да се оцени ефектът от експозицията на тромбоцитите върху повишените концентрации на глюкоза, равни количества (0,5 ml) от 0%, 5%, 12,5%, 25% и 50% глюкоза във вода се смесват с проби от тромбоцити, за да се получат 0%, 2,5% 6,25%, 12,5% ​​и 25% концентрации на глюкозната смес и се смесват епруветките в шейкър за епруветки за 15 минути.TAC на всяка смес се анализира трикратно след 15 минути.Броят на тромбоцитите (PLT), броят на червените кръвни клетки, MCV и MPV бяха осреднени за всяка епруветка и средният брой на тромбоцитите, броят на червените кръвни клетки, MCV и MPV бяха изчислени за всички PRP проби.
След приключване на първата фаза на събиране на данни, забелязахме значително увеличение на обема на тромбоцитите в PRP тромбоцитите след добавянето на D50W.PRP тромбоцитите не представляват непременно всички тромбоцити в кръвта и PRP средата се различава от WB средата.Затова решихме да проведем втора фаза на изпитване на ефекта от добавянето на D50W към цяла кръв.
За втория кръг избрахме размер на извадката от 30 въз основа на резултатите от първата серия, както е описано в раздела за анализ.В тази серия 20 доброволци дариха кръвни проби (Таблица 1).Цялата кръв (1.8 ml) се изтегля в спринцовка от 3 ml и се антикоагулира с 0.2 ml 40% NaCl.Спринцовката с цяла кръв се смесва за пет секунди с вортекс миксер и CBC се анализира трикратно.След анализа антикоагулирана кръв се добавя към 2 ml 50% глюкоза в спринцовка от 5 ml (крайната концентрация на глюкоза е приблизително 25% (D25) и се поставя в епруветка за разклащане за 30 минути. След 30 минути D25/CBC в WB спринцовки се анализират трикратно. Броят на тромбоцитите, броят на червените кръвни клетки, MCV и MPV на спринцовка са осреднени и средното PLT , броят на червените кръвни клетки, MCV и MPV бяха изчислени за всяка проба преди и след добавяне на глюкоза.
Тъй като тромбоцитите в цяла кръв обикновено са изложени на хипертонична глюкоза по време на пролиферативна глюкозна терапия поради минимално инвазивно инжектиране и не е обичайно да се комбинира PRP с хипертонична глюкоза точно преди инжектирането, ние решихме да изследваме хипертонична глюкоза в комбинация с WB в раздел 1. Стъпка три и четири.На всеки етап 20 доброволци даряват 7-8 ml ACD-A (киселина, съдържаща тринатриев цитрат (22,0 g/l), лимонена киселина (8,0 g/l) и глюкоза (24,5 g/l), разтвор на декстроза цитрат) за кръвни антикоагуланти (Таблица 1).Само смеси от глюкоза над 12,5% са използвани за определяне на праговия процент, свързан с повишаване на MPV.На третия етап 1 ml кръв се поставя в епруветка.След това разбъркайте кръвта на вортекс миксер за 10 секунди, като добавите 1 ml 30% глюкоза, 40% глюкоза или 50% глюкоза към епруветката, за да получите крайна концентрация на глюкоза съответно 15%, 20% и 25%.Кръвните проби с глюкоза се анализират за CBC веднага след смесването и се повтарят на всеки две минути в продължение на 30 минути.
По време на първоначалното смесване добавянето на 1:1 хипертонична глюкоза и WB или PRP излага тромбоцитите на концентрации над 25% за няколко секунди.В четвъртата стъпка, за да оценим ефекта на хипертоничната глюкоза с минимални първоначални пикови концентрации и да тестваме горната граница на ефекта на глюкозата, добавихме само малко количество кръв към D25W или D50W.Поставете 1 ml D25W или D50W в епруветка и добавете 0,2 ml WB, като разбърквате пробата на вортекс за 10 секунди.В тези случаи кръвта е била изложена на глюкоза в концентрация приблизително 20% над крайната концентрация, а не 50% над крайната концентрация, както във фаза 3, което води до крайни концентрации на глюкоза от 20,8% и 41,6%.Смесените проби бяха анализирани в същия интервал от време, както в стъпка 3.
В първата стъпка от всяка серия от разреждане на глюкоза бяха взети 30 проби, тъй като това беше подходящият размер на пробата за пилотното проучване [9].В края на всяка фаза (включително първата фаза) оценете адекватността на размера на извадката, като използвате формулата, използвана за определяне на размера на извадката, необходим за оценка на средната стойност на непрекъснатата променлива на резултата в една популация.Формула n = Z2 x SD2 /E2.В това уравнение Z е Z-резултатът, SD е стандартното отклонение и E е желаната грешка [10].Нашата алфа е 0,05, което съответства на Z стойност от 1,96 и очакваме грешка от 5 (в проценти).Следователно решаваме за n = (1,962 x SD2)/52.Резултатите показват, че размерът на извадката, необходим за всеки етап, е по-малък от действително събрания брой.
По време на периоди 1, 3 и 4, използвайки повече от една концентрация на глюкоза, ефектът от различните концентрации на глюкоза беше анализиран чрез сравняване на частичната промяна между време 0 и всяко следващо време (фаза 1 на 15 минути, период 3 на 15 минути).и четири на 15 секунди, след това на всеки две минути.) Скоростите на промяна за всеки период от време бяха сравнени с помощта на U-теста на Mann-Whitney, тъй като данните не следват нормално разпределение, както е определено от теста за нормалност на Shapiro-Wilk.Тъй като беше извършен анализ 1 към 1 на няколко групи (пет) в първата, третата и четвъртата стъпка (общо пет), беше извършена корекция на Bonferroni, за да се коригира желаната алфа стойност до ≤0,01, но не и ≤0,05.
Намаляване на броя на тромбоцитите при всички концентрации на хипертонична декстроза и повишаване на MPV в PRP тромбоцитите при >12,5% концентрация на декстроза: PRP броят на тромбоцитите се повишава от един до пет пъти концентрацията в сравнение с изходното ниво на цяла кръв, варирайки според метода (не е показано). Намаляване на броя на тромбоцитите при всички концентрации на хипертонична декстроза и повишаване на MPV в PRP тромбоцитите при >12,5% концентрация на декстроза: PRP броят на тромбоцитите се повиши от една до пет пъти концентрация в сравнение с изходната цяла кръв, варирайки според метода (не е показано). Увеличение на количеството на тромбоцитите при всички концентрации на хипертонична декстроза и увеличаване на MPV в тромбоцитите на PRP при концентрация на декстроза > 12,5%: броят на тромбоцитите на PRP се увеличи с 1-5 пъти в сравнение с изходната целна кръв, в зависимост от метода (не е показано). Намален брой на тромбоцитите при всички хипертонични концентрации на декстроза и повишен MPV в PRP тромбоцитите при >12,5% концентрация на декстроза: PRP броят на тромбоцитите се увеличава 1-5 пъти в сравнение с изходното ниво на цяла кръв, в зависимост от метода (не е показано). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV 增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 При >12,5% концентрация на глюкоза, високата концентрация на глюкоза намалява кръвната картина, PRP MPV в кръвта се увеличава: в сравнение с 与基线全血, PRP кръвната картина се увеличава от 1 до 5 пъти в сравнение с концентрацията (неописана). При концентрация на глюкоза >12,5% всички концентрации на хипертонична глюкоза намаляват броя на тромбоцитите, а MPV се повишава в тромбоцитите PRP: броят на тромбоцитите PRP се увеличава от 1- до 5-кратни концентрации в сравнение с изходните концентрации на клетъчната кръв, в зависимост от метода (не е описано). При концентрации на глюкоза >12,5%, всички хипертонични концентрации на глюкоза намаляват броя на тромбоцитите и повишават MPV в PRP тромбоцитите: PRP броят на тромбоцитите се повишава от 1 до 5 пъти в сравнение с изходните концентрации в цяла кръв, в зависимост от метода (както е описано).Фигура 1 показва, че броят на тромбоцитите е намалял с почти 75% след разреждане във вода и с 20-30% след 15 минути разреждане с различни концентрации на глюкоза в сравнение с изходния PRP и разреждане 1:1, коригирано за обем (1- k1 с корекция на обема).k -1 отглеждане).1 отглеждане).
Броят на клетките във всяко разреждане се изразява като част от първоначалния брой преди разреждането.
MPV намалява минимално по време на производството на PRP, без допълнителна промяна в концентрациите на разреждане до 12,5% във вода или глюкоза (включително 25% PRP глюкозни смеси) и се повишава с повече от 20% след разреждане в 50% разтвор на глюкоза (фиг. .2).).Обратно, еритроцитите не показват значителна промяна в обема при каквото и да е разреждане, различно от H2O.
Средният обем на клетките във всяко разреждане се изразява като процент от първоначалния обем преди разреждането.
Подобно, но по-слабо изразено намаляване на броя на тромбоцитите и повишаване на CVR са наблюдавани при BC, изложени на 50% глюкоза (за формулиране с 25% глюкоза).Таблица 2 сравнява броя на клетките и клетъчните обеми в цяла кръв, разредена в 50% декстроза, с PRP данни от фаза 1, разредена в 50% декстроза.Промените в броя на червените кръвни клетки и MCV на червените кръвни клетки не бяха очевидни и не бяха във фокуса на нашето внимание.
SD = стандартно отклонение, MD = средна разлика между групите, SE = стандартно отклонение на средната разлика, RBC = еритроцити, PLT = тромбоцити, PRP = богата на тромбоцити плазма, WB = цяла кръв
След добавяне на D50W към WB, процентната загуба на тромбоцити, коригирана спрямо разреждането, е 7,7% (310±73 спрямо 286±96) в сравнение със 17,8% за PRP разреждане в D50W (664±348 спрямо 544±277).MPV WB се повишава с 16,8% (от 10,1 ± 0,5 на 11,8 ± 0,6), докато MPV PRP се повишава с 26% (9,2 ± 0,8 спрямо 11,6 ± 0,7). Въпреки че средните разлики както в намаляването на броя на тромбоцитите, така и в увеличението на MPV са значително по-големи с PRP, промените в намаляването на броя на тромбоцитите в WB са почти значителни (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = .06) и увеличението на MPV е значително (10.1 ± 0.5 до 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001). Въпреки че средните разлики както в намаляването на броя на тромбоцитите, така и в увеличението на MPV са значително по-големи с PRP, промените в намаляването на броя на тромбоцитите в WB са почти значителни (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = .06) и увеличението на MPV е значително (10.1 ± 0.5 до 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001).Въпреки че средните разлики както в намаляването на броя на тромбоцитите, така и в увеличението на CVR са значително по-големи с PRP, промените в намаляването на броя на тромбоцитите в WB са почти значителни (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличението на MPV беше значително (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). увеличението на MPV е значително (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和 MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和MPV 的增加是显着的＄(10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < . 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的＄ (10,1 ± 0,5 到11,8) ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Промяната в намаляването на броя на тромбоцитите в WB е почти значима (от 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), въпреки че PRP има значително по-големи средни разлики в намаляването на броя на тромбоцитите и увеличението на MPV.и увеличението на MPV беше значително.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Необходима е крайна концентрация от 20% глюкоза, за да се види значителна промяна в MPV, но промяната в MPV е по-изразена при крайна концентрация от 25%.Загубата на тромбоцити се стабилизира след първоначалния спад.Отбелязахме първоначално рязко намаляване на CVR, но CVR бързо се възстанови при 25% крайна концентрация на глюкоза, което беше значително по-високо от нивата на CVR, наблюдавани при крайни концентрации на глюкоза от 20% и 15% (фиг. 3 и вляво от таблица 3; защриховани полета).посочете p-стойности ​​≤ алфа с корекция на Bonferroni от 0,01).Имаше също първоначален рязък спад в броя на PLT, наблюдаван в началната фаза от 0-15 s, и след това остана стабилен (от 15 s до 30 min; вляво от таблица 4).
Добавянето на различни концентрации на глюкоза към цяла кръв доведе до първоначално бързо намаляване на MPV, последвано от зависимо от концентрацията възстановяване от повече от 20%.Легендата показва концентрацията на глюкоза след разреждане.D15, D20 и D25 бяха проведени в разреждане 1:1.D21 и D41 бяха проведени при разреждане 1:5.
Таблица 4 показва промяната в броя на тромбоцитите при разреждане в хипертонична глюкоза.Наблюдавахме зависима от дозата връзка между незабавния спад в числата на PLT при разреждане 1:1 и при разреждане 1:5.Сравнявайки разрежданията 1:1 като отделна група с разрежданията 1:5, групата 1:1 има незабавно намаляване на броя на тромбоцитите по-малко от групата 1:5 66±48 000 (23%) спрямо 99±69 000 (37%)., p = 0,014) в групата 1:5.След първоначален спад в първата точка на измерване, броят на тромбоцитите като процент от глюкозата се стабилизира (фиг. 4).
Когато цяла кръв се добави към глюкоза в съотношение 1:1, броят на тромбоцитите се намалява с около 25%.Въпреки това, когато се добави цяла кръв в съотношение 1:5, намалението беше много по-голямо – около 50%.
41% глюкоза повишава MPV по-бързо и по-драматично от 25% или 21%.Резултатите от MPV са показани на Фигура 3. При всички други разреждания не се наблюдава незабавно първоначално намаляване на MPV след добавяне на 50% глюкоза.При използване на 25% глюкоза (концентрация на глюкоза 20,8% при крайното разреждане), промяната в MPV е сравнима с промяната в 20% глюкоза при разреждане 1:1 (фиг. 3).Въпреки че промените в MPV първоначално са били по-големи при 41% смесена концентрация, отколкото при 25%, разликата в MPV между 41% и 25% след 16 минути вече не е значима (Таблица 3, вдясно).Интересно е също, че 25% глюкоза повишава MPV по-ефективно от 20,8%.
Това in vitro изследване частично потвърди нашата хипотеза. Той показва потенциален частичен лизис на тромбоцитите чрез примес на декстроза, бързо настаняване на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително повишаване на MPV в отговор на > 25% концентрации на хипертонична декстроза. Той показва потенциален частичен лизис на тромбоцитите чрез примес на декстроза, бързо настаняване на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително повишаване на MPV в отговор на > 25% концентрации на хипертонична декстроза. Той показа потенциален частичен лизис на тромбоцитите примеси декстроза, бърза аккомодация на тромбоцитите до екстремален хипертонус и значително повишаване на MPV в отговор на хипертонична концентрация на декстроза > 25%. Той показа потенциален частичен лизис на тромбоцитите с декстроза, бързо настаняване на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително увеличение на MPV в отговор на хипертонични нива на декстроза >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及 响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。 Той показва потенциален частичен лизис на тромбоцитовите смеси с глюкоза, бърза адаптация на тромбоцитите към екстремалния хипертонус и значително увеличение на MPV в отговор на концентрацията на хипертонична глюкоза > 25%. Той показва потенциален частичен лизис на тромбоцитите от глюкозни смеси, бърза адаптация на тромбоцитите към екстремна хипертоничност и значително увеличение на MPV в отговор на хипертонична глюкоза >25%.Първоначалното увеличение е максимално при 41,6% експозиция на глюкоза, но увеличението на MPV се доближава до 25% експозиция на глюкоза приблизително 20 минути след експозицията.
Концентрацията на тромбоцитите се влияе от глюкозата.Забелязахме, че количеството на PLT намалява при всички разреждания на глюкоза.Рязък спад в броя на тромбоцитите в разрежданията на H2O (0%) от серията PRP може да бъде свързан с осмотичен лизис.Алтернативно, това може да е артефакт, причинен от слепването на тромбоцитите, но това е в контраст с липсата на промяна на MPV при това разреждане.Това откритие означава, че някои тромбоцити са много чувствителни към хипоосмоларитет.
Във всички 1:1 разреждания на глюкоза, количеството на PLT намалява с 20-30%, дори с D5W (хипотонично при 252 mOsm), което може да показва специфичен неосмотичен ефект на глюкозата, тъй като както PLT, така и MPV остават непроменени при трикратно увеличение на концентрацията.глюкоза.от D5W до D25W.Всъщност концентрациите на PLT имат тенденция да се повишават леко с увеличаване на осмоларитета.
Намаляването на PLT между разрежданията 1:1 и 1:5 означава, че ефектът на разтваряне зависи от началната и крайната концентрация на глюкоза.Ако зависеше само от първоначалната концентрация, тогава човек би очаквал да види разлика в намаляването на PLT между концентрациите 1:1.Но ние не го правим.Ако лизиращият ефект зависи само от крайната концентрация на глюкоза, тогава не очакваме голяма разлика между 20% разреждане 1:1 и 20,8% разреждане 1:5.И все пак го направихме.
Ако възникне загуба на тромбоцити поради лизис на тромбоцитите, се образува частичен лизат, след което цитокини и растежни фактори се освобождават в извънклетъчната среда.Няколко проучвания показват, че тромбоцитният лизат е почти толкова ефективен, колкото PRP като разтвор за пролиферация [11].Доказано е, че самият PRP е ефективно решение за лечение на пролиферация [12-14].
Неактивните тромбоцити циркулират под формата на диск, подсилен с няколко вътрешни структури.По време на активирането те придобиват по-сферична или форма на амеба, което води до увеличаване на обема.Увеличаването на обема изисква увеличаване на повърхността, което е резултат от екструзията на отворената тубулна система (OCS) и добавянето на екзоцитни гранули към мембраната.Остава да се определи дали повишаването на MPV, предизвикано от хипертонична глюкоза, включва един или и двата от тези механизми, но ако последният, тогава увеличението на MPV би означавало дегранулация.
Това проучване показа, че излагането на високи концентрации на глюкоза върху PRP или тромбоцити в цяла кръв води до повишаване на MPV в рамките на 15 минути с концентрация на глюкоза съответно 25% и 41,6%.
Увеличаването на MPV на тромбоцитите може да се дължи на дилатация на околните микротубулни възли в отговор на притока на калций.Liu и др.Доказано е, че глюкозата медиира притока на калций през TRPC6 канала на тромбоцитите [6].Нашата хипотеза е, че глюкозата индуцира релаксация на микротубулните възли, което води до повишаване на MPV и сенсибилизация и/или активиране на тромбоцитите.Въпреки това, съдейки по нашите резултати, това е само част от историята.При нашите тестове никоя концентрация под D25W не доведе до повишаване на MPV.Като се има предвид, че не сме тествали експозиция на концентрации на глюкоза между 12,5% ​​и 25%, нашите резултати от фаза 1 предполагат, че може да има праг в този диапазон от концентрации на глюкоза, който води до повишаване на MPV.Допълнителни тестове в етапи 3 и 4 показаха, че 20-25% глюкоза изглежда е прагът за това, но остава неясно защо.
Ние също така наблюдавахме ~9% намаление на MPV след центрофугиране.Не е ясно дали това намаление на MPV се дължи на по-големи и по-плътни тромбоцити, уловени в слоя червени кръвни клетки на центрофугата.Това наблюдение може да е важно за клиницистите, тъй като може да означава, че PRP тромбоцитите са по-малка и по-малко плътна подгрупа на WB тромбоцитите.
В предишно проучване ние показахме, че подготовката на PRP чрез ръчни методи е евтина [8].Ако глюкозата сенсибилизира тъканните тромбоцити или PRP, което ги прави по-податливи на активиране, или ако PRP се произвежда с частични свойства на лизат, това може да подобри регенерацията и да намали нуждата от терапия.Следователно комбинацията от PRP и висококонцентрирана глюкоза може да бъде по-рентабилна от PRP или глюкоза самостоятелно.
Нашето проучване има няколко недостатъка.Първо, използваме PRP, получен от няколко различни метода.Това може да доведе до противоречиви резултати.Второ, не успяхме да извършим биохимичен анализ на нито една от нашите проби, за да определим по-точно дали е настъпило активиране на тромбоцитите.Бихме искали да измерим Р-селектин, тромбоцитен фактор 4, моноцитни тромбоцитни агрегати или други маркери за активиране на тромбоцитите, за да разберем по-добре степента или наличието на дегранулация на алфа гранули, но това е извън обхвата на това изследване.Трето, не успяхме да потвърдим чрез електронна микроскопия или други методи, че увеличението на MPV в тромбоцитите, изложени на глюкоза, се дължи на ефекта върху заплитанията на микротубулите.
Смеси от WB или PRP с 25% глюкоза повишават MPV, сигнализирайки за началото на активиране на тромбоцитите, въпреки че това проучване не демонстрира прогресиране на агрегация или дегранулация.Хипертоничната глюкозна смес води до загуба на тромбоцити, което вероятно представлява литичен ефект.Частичното активиране или лизиране на тромбоцитите може да причини регенерация на тъкан след инжектиране на тромбоцити.Не е ясно до какви клинични последствия могат да доведат тези промени.Допълнителни проучвания показват по-точни измервания на активиране или лизис и оценяват различните клинични ефекти на хипертонични глюкозни смеси с WB или PRP.
Глюкозопролиферативната терапия е проста и евтина регенеративна терапия, която бързо се разширява и подкрепя клиничните изследвания.Това проучване предполага физиологичен механизъм, който, ако бъде потвърден, може да ни помогне да разберем част от регенеративния механизъм на пролиферативната терапия.
Биомедицинска и здравна информатика в Университета на Мисури, Медицинско училище в Канзас Сити, Канзас Сити, САЩ
Човешки субекти: Всички участници в това проучване са дали или не са дали съгласие.Международното общество за клетъчна медицина издаде одобрение ICMS-2017-003.Следният протокол е одобрен за по-нататъшна употреба от Институционалния съвет за преглед на Международното общество за клетъчна медицина: Заглавие: Изчисляване на добива на лекарство в богата на тромбоцити плазма въз основа на изходния брой на тромбоцитите в CBC.Субекти на животни: Всички автори потвърдиха, че в това изследване не са включени животни или тъкани.Конфликти на интереси: В съответствие с единния формуляр за разкриване на информация на ICMJE, всички автори декларират следното: Информация за плащане/услуга: Всички автори декларират, че не са получили финансова подкрепа от никоя организация за изпратената работа.Финансови взаимоотношения: Всички автори декларират, че в момента или през последните три години нямат финансови взаимоотношения с никоя организация, която може да се интересува от изпратената работа.Други взаимоотношения: Всички автори декларират, че няма други взаимоотношения или дейности, които могат да повлияят на изпратената работа.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al.(17 май 2022 г.) Ефектът на глюкозата върху броя и обема на тромбоцитите: последици за регенеративната медицина.Лек 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Харисън и др.Това е статия със свободен достъп, разпространявана съгласно условията на Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Разрешено е неограничено използване, разпространение и възпроизвеждане във всеки носител, при условие че са посочени оригиналният автор и източник.