Nature.com পরিদর্শন করার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ৷ আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন তাতে CSS-এর জন্য সীমিত সমর্থন রয়েছে৷ সেরা অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি আপডেট করা ব্রাউজার ব্যবহার করার পরামর্শ দিচ্ছি (অথবা Internet Explorer-এ সামঞ্জস্য মোড বন্ধ করুন)৷ ইতিমধ্যে, অব্যাহত সমর্থন নিশ্চিত করতে, আমরা স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই সাইটটি প্রদর্শন করব৷
ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণাগুলি ম্যাক্রোপোরাস কণা প্রাপ্ত করার জন্য কিছু পরিবর্তন সহ একটি সল-জেল পদ্ধতি দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল৷ এই কণাগুলিকে এন-ফেনাইলমেলেইমাইড-মিথাইলভিনাইলাইসোসায়ানেট (পিএমআই) এবং স্টাইরিনের সাথে এন-ফেনাইলমেলেইমাইড-মিথাইলভিনাইলাইসোসায়ানেট (পিএমআই) এবং স্টাইরিন প্রস্তুত করার জন্য এন-ফেনাইল্যালবোনারিম স্টেশানের ফেজ এন-ফেন্যালবোরোমা (পলিমারী) প্রস্তুত করে। পুনরায় স্টেইনলেস স্টীল কলামগুলি (100 × 1.8 মিমি আইডি) স্লারি প্যাকিং দ্বারা প্যাক করা হয়েছিল৷ পাঁচটি পেপটাইড সমন্বিত একটি পেপটাইড মিশ্রণের মূল্যায়ন করা পিএমপি কলাম পৃথকীকরণ (গ্লাই-টাইর, গ্লাই-লিউ-টাইর, গ্লাই-গ্লাই-টাইর-আর্গ, লেইরোগ্রাফি, লেইরোগ্রাফি, লেইরোগ্রাফ) ic কর্মক্ষমতা) এবং হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (HAS) এর ট্রিপসিন হজম। সর্বোত্তম নির্গত অবস্থার অধীনে, পেপটাইড মিশ্রণের তাত্ত্বিক প্লেট গণনা 280,000 প্লেট/m² এর মতো বেশি। বাণিজ্যিক অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস RP-অ্যামাইড কলামের সাথে বাণিজ্যিক কলামের পারফরম্যান্স পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে, এটি সুপার কলামের পারফরম্যান্স ছিল বিচ্ছেদ দক্ষতা এবং রেজোলিউশন শর্তাবলী.
সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, বায়োফার্মাসিউটিক্যাল শিল্প বাজার শেয়ারের যথেষ্ট বৃদ্ধির সাথে একটি সম্প্রসারিত বিশ্ব বাজারে পরিণত হয়েছে৷ বায়োফার্মাসিউটিক্যাল শিল্পের বিস্ফোরক বৃদ্ধির সাথে 1,2,3, পেপটাইড এবং প্রোটিনের বিশ্লেষণ অত্যন্ত আকাঙ্খিত৷ লক্ষ্য পেপটাইড ছাড়াও, পেপটাইডের সংশ্লেষণের সময় বেশ কিছু অমেধ্য উত্পন্ন হয়, পেপটাইডের সংশ্লেষণের প্রক্রিয়াকরণের জন্য কাঙ্খিত বিশুদ্ধতার। শরীরের তরল, টিস্যু এবং কোষে প্রোটিনের বিশ্লেষণ এবং বৈশিষ্ট্য একটি একক নমুনায় বিপুল সংখ্যক সম্ভাব্য শনাক্তযোগ্য প্রজাতির কারণে একটি অত্যন্ত চ্যালেঞ্জিং কাজ। যদিও ভর স্পেকট্রোমেট্রি পেপটাইড এবং প্রোটিন সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য একটি কার্যকরী হাতিয়ার, যদি এই জাতীয় নমুনাগুলিকে ইনজেকশন দেওয়া হয় তবে একটি ভর পরিমাপের মাধ্যমে এই সমস্যাটি বাস্তবায়ন করা সম্ভব হবে না। এমএস বিশ্লেষণের পূর্বে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (এলসি) বিচ্ছেদ, যা একটি নির্দিষ্ট সময়ে ভর স্পেকট্রোমিটারে প্রবেশকারী বিশ্লেষকের সংখ্যা কমিয়ে দেবে 4,5,6। উপরন্তু, তরল ফেজ বিভাজনের সময়, বিশ্লেষকগুলি সংকীর্ণ অঞ্চলে ফোকাস করা যেতে পারে, যার ফলে এই বিশ্লেষণগুলিকে কেন্দ্রীভূত করে এবং এলসিএমএস সনাক্তকরণের উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নতি করে। গত এক দশকে এবং প্রোটোমিক বিশ্লেষণের একটি জনপ্রিয় কৌশল হয়ে উঠেছে7,8,9,10।
রিভার্সড-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (RP-LC) স্থির ফেজ 11,12,13 হিসাবে অক্টাডেসিল-মোডিফাইড সিলিকা (ODS) ব্যবহার করে পেপটাইড মিশ্রণের পরিশোধন এবং পৃথকীকরণের জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। তবে, RP স্থির পর্যায়গুলি সন্তোষজনক বিভাজন প্রদান করে না। পূর্বে, বিশেষভাবে ডিজাইন করা স্থির পর্যায়গুলির প্রয়োজন হয় পেপটাইড এবং প্রোটিন বিশ্লেষণ করার জন্য পোলার এবং নন-পোলার ময়েটিগুলির সাথে এই বিশ্লেষণগুলির সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করতে এবং ধরে রাখতে৷ এই পর্যায়গুলির সাথে প্যাকগুলি পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছে17,18,19,20,21। মিশ্র-মোড স্থির পর্যায়গুলি (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, পোলার ইন্টারক্যালেশন/RPLC) উভয় পোলার এবং অ-মেরু গ্রুপের উপস্থিতির কারণে পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের জন্য উপযুক্ত। সমযোজী বন্ধনযুক্ত পোলার গোষ্ঠীর সাথে স্থির পর্যায়গুলি ক্যালেটিং ভাল বিচ্ছেদ শক্তি এবং মেরু এবং অ-মেরু বিশ্লেষকদের জন্য অনন্য নির্বাচনীতা দেখায়, কারণ বিচ্ছেদ বিশ্লেষক এবং স্থির পর্যায়ের মধ্যে মিথস্ক্রিয়া উপর নির্ভর করে।মাল্টিমোডাল মিথস্ক্রিয়া 29, 30, 31, 32। সম্প্রতি, ঝাং এট আল।30 একটি ডোডেসিল-সমাপ্ত পলিমাইন স্থির পর্যায় প্রস্তুত করেছে এবং সফলভাবে হাইড্রোকার্বন, অ্যান্টিডিপ্রেসেন্টস, ফ্ল্যাভোনয়েডস, নিউক্লিওসাইডস, ইস্ট্রোজেন এবং অন্যান্য বেশ কয়েকটি বিশ্লেষক পৃথক করেছে। পোলার ইন্টারক্যালেটরটিতে পোলার এবং নন-পোলার উভয় গ্রুপ রয়েছে, তাই এটি পেপটাইড এবং প্রোটিনকে আলাদা করতে ব্যবহার করা যেতে পারে যা কো-হাইড্রোকার্বন এবং কো-হাইড্রোমেনসিড উভয়ই প্রোটিন। যেমন, অ্যামাইড-এম্বেডেড C18 কলাম) বাণিজ্যিকভাবে Ascentis Express RP-Amide কলামের অধীনে পাওয়া যায়, কিন্তু এই কলামগুলি শুধুমাত্র অ্যামাইন 33-এর বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়।
বর্তমান গবেষণায়, HSA-এর পেপটাইড এবং ট্রিপসিন ডাইজেস্ট আলাদা করার জন্য একটি পোলার-এমবেডেড স্থির পর্যায় (N-phenylmaleimide-এম্বেডেড পলিস্টাইরিন) প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং মূল্যায়ন করা হয়েছিল৷ নিশ্চল পর্যায়টি নিম্নলিখিত কৌশলটি ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল৷ ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণাগুলি আমাদের পূর্ববর্তী প্রকাশনায় দেওয়া পদ্ধতি অনুসারে প্রস্তুত করা হয়েছিল। (PEG), TMOS, জলের অ্যাসিটিক অ্যাসিডকে বড় ছিদ্রের আকার সহ সিলিকা কণা প্রস্তুত করার জন্য সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। দ্বিতীয়ত, একটি নতুন লিগ্যান্ড, ফেনাইলমেলিমাইড-মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট, সংশ্লেষিত হয়েছিল এবং একটি পোলার এমবেডেড স্থির ফেজ প্রস্তুত করতে সিলিকা কণাগুলিকে ডেরিভেটাইজ করতে ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ স্থির ফেজটি 1 মিমি 1 মিমি প্যাকেজবিহীন (1 মিমি 1 মিমি) প্যাকেটবিহীন অবস্থায় তৈরি করা হয়েছিল। অপ্টিমাইজ করা প্যাকিং স্কিম। কলাম প্যাকিংকে যান্ত্রিক কম্পনের সাহায্যে নিশ্চিত করা হয় যে কলামের মধ্যে একটি সমজাতীয় বিছানা তৈরি হয়েছে। পাঁচটি পেপটাইড সমন্বিত পেপটাইড মিশ্রণের প্যাকড কলাম বিচ্ছেদ মূল্যায়ন করুন;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) এবং হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (HAS) এর ট্রিপসিন ডাইজেস্ট। HSA-এর পেপটাইড মিশ্রণ এবং ট্রিপসিন ডাইজেস্ট ভাল রেজোলিউশনের সাথে আলাদা করতে দেখা গেছে। -অ্যামাইড কলাম। উভয় পেপটাইড এবং প্রোটিনই পিএমপি কলামে ভালভাবে সমাধান এবং দক্ষ হতে পরিলক্ষিত হয়েছে, যা অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলামের চেয়ে বেশি কার্যকর ছিল।
পিইজি (পলিথিন গ্লাইকোল), ইউরিয়া, অ্যাসিটিক অ্যাসিড, ট্রাইমেথক্সি অর্থোসিলিকেট (টিএমওএস), ট্রাইমিথাইল ক্লোরোসিলেন (টিএমসিএস), ট্রাইপসিন, হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (এইচএসএ), অ্যামোনিয়াম ক্লোরাইড, ইউরিয়া, হেক্সেন মেথাইলডিসিলাজেন (এইচএমডিএস), মেথাক্রিলয়ল ক্লোরাইড, বেন-এমসি-4-এমসিপি-এক্সাইড, পেরি-অ্যাক্সাইড। (BPO), HPLC গ্রেড অ্যাসিটোনিট্রিল (ACN), মিথানল, 2-প্রোপ্যানল, এবং অ্যাসিটোন সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, এমও, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে কেনা।
ইউরিয়া (8 গ্রাম), পলিথিন গ্লাইকোল (8 গ্রাম), এবং 8 মিলি 0.01 এন অ্যাসিটিক অ্যাসিডের মিশ্রণ 10 মিনিটের জন্য নাড়াচাড়া করা হয়েছিল, এবং তারপর 24 মিলি TMOS বরফ-ঠান্ডা অবস্থায় এতে যোগ করা হয়েছিল। প্রতিক্রিয়া মিশ্রণটি 40 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 6 ঘন্টার জন্য গরম করা হয়েছিল এবং তারপরে 120 ডিগ্রি সেলসিয়াস জলে 120 ডিগ্রি সেলসিয়াস জলে অটোমেটিক বন্ধ করা হয়েছিল। অবশিষ্ট উপাদানটি 70°C তাপমাত্রায় 12 ঘন্টার জন্য শুকানো হয়েছিল৷ শুকনো নরম ভর একটি ওভেনে মসৃণ স্থল ছিল এবং 12 ঘন্টার জন্য 550°C তাপমাত্রায় ক্যালসাইন করা হয়েছিল৷ কণার আকার, ছিদ্রের আকার এবং পৃষ্ঠের ক্ষেত্রে প্রজননযোগ্যতা পরীক্ষা করার জন্য তিনটি ব্যাচ প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং চিহ্নিত করা হয়েছিল৷
প্রাক-সংশ্লেষিত লিগ্যান্ড ফিনাইলমেলেইমাইড-মিথাইলভিনাইলিসোসায়ানেট (PCMP) সহ সিলিকা কণাগুলির পৃষ্ঠের পরিবর্তনের মাধ্যমে এবং স্টাইরিনের সাথে রেডিয়াল পলিমারাইজেশন দ্বারা, একটি পোলার গ্রুপ-যুক্ত যৌগ প্রস্তুত করা হয়েছিল।সমষ্টি এবং পলিস্টাইরিন চেইনগুলির জন্য নিশ্চল পর্যায়। প্রস্তুতির প্রক্রিয়া নীচে বর্ণিত হয়েছে।
N-phenylmaleimide (200 mg) এবং মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট (100 mg) শুকনো টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল, এবং 2,2′-অ্যাজোআইসোবিউটিরোনিট্রিল (AIBN) এর 0.1 মিলি প্রতিক্রিয়া ফ্লাস্কে ফেনাইলম্যালেইমাইড-মিথাইল-মিথাইল-মিথাইল-মিথাইল-মিথাইল-মিথাইল-পি-6-এ হিট-মিথাইল-মিথাইল-পি-6-এ-পি-পি-পি-পি-পি-পি-পি-এ-কে প্রস্তুত করার জন্য প্রতিক্রিয়া ফ্লাস্কে যোগ করা হয়েছিল। 3 ঘন্টার জন্য 0°C, ফিল্টার করে 40°C তাপমাত্রায় একটি ওভেনে 3 ঘন্টার জন্য শুকিয়ে নিন।
শুকনো সিলিকা কণাগুলি (2 গ্রাম) শুকনো টলুইনে (100 মিলি) ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল, 10 মিনিটের জন্য 500 মিলি বৃত্তাকার নীচের ফ্লাস্কে আলোড়িত এবং সোনিকেট করা হয়েছিল। পিএমসিপি (10 মিলিগ্রাম) টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং ড্রপিং ফানেলের মাধ্যমে প্রতিক্রিয়া ফ্লাস্কে ড্রপওয়াইজ যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটি 80 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় 80 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডের জন্য ফ্লাস্কে দ্রবীভূত করা হয়েছিল। অ্যাসিটোন এবং 60 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় 3 ঘন্টার জন্য শুকানো হয়। তারপরে, পিএমসিপি-বন্ডেড সিলিকা কণা (100 গ্রাম) টলুইনে (200 মিলি) দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং 4-হাইড্রক্সি-টেম্পো (2 মিলি) 100 μL ডিবুটিল্টিন ডাইলাউরেটের উপস্থিতিতে যোগ করা হয়েছিল। 50 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 3 ঘন্টার জন্য শুকানো হয়।
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), এবং TEMPO-PMCP-সংযুক্ত সিলিকা কণা (1.5 গ্রাম) টলুইনে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং নাইট্রোজেন দিয়ে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। স্টাইরিনের পলিমারাইজেশন 100 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে 12 ঘন্টার জন্য করা হয়েছিল। ফলে সারা রাত 6 ডিগ্রি সেলসিয়াসের সাথে বিক্রিয়া হয়েছিল এবং 60 ডিগ্রি সেলসিয়াসের সাথে ড্রাইভ হয়েছিল। চিত্র 1 এ দেখানো হয়েছে।
10-3 টরের কম অবশিষ্ট চাপ পেতে নমুনাগুলি 393 কে-তে 1 ঘন্টার জন্য ডিগ্যাস করা হয়েছিল৷ P/P0 = 0.99 এর আপেক্ষিক চাপে N2 শোষণের পরিমাণ মোট ছিদ্রের পরিমাণ নির্ণয় করতে ব্যবহৃত হয়েছিল৷ খালি এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার আকারবিদ্যা, উচ্চ স্ক্যান্স, স্ক্রু, স্ক্রিন, স্কাই, স্ক্রিন, হাইকোর্টের সাথে পরীক্ষা করা হয়েছিল। জাপান) শুকনো নমুনাগুলি (বেয়ার সিলিকা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণা) আঠালো কার্বন টেপ ব্যবহার করে একটি অ্যালুমিনিয়াম কলামে স্থাপন করা হয়েছিল৷ একটি Q150T স্পুটার কোটার ব্যবহার করে নমুনাগুলিতে সোনার প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল, এবং নমুনাগুলিতে একটি 5 nm Au স্তর জমা করা হয়েছিল৷ এটি কম সূক্ষ্ম ভোল্টার ব্যবহার করে প্রক্রিয়াটি উন্নত করে এবং সূক্ষ্ম ভোল্টার প্রদান করে৷ ron (Waltham, MA, USA) ফ্ল্যাশ EA1112 মৌলিক বিশ্লেষক মৌলিক বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 পার্টিকেল সাইজ বিশ্লেষক কণা আকারের বন্টন পাওয়ার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। নগ্ন সিলিকা কণা এবং প্রতিটি m5-এর মধ্যে সিলিকা কণা (m5-mL) ছিল। আইসোপ্রোপ্যানল, 10 মিনিটের জন্য সোনিকেড, 5 মিনিটের জন্য ঘূর্ণায়মান, এবং মাস্টারসাইজারের অপটিক্যাল বেঞ্চে স্থাপন করা হয়। 30 থেকে 800 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রার পরিসরে প্রতি মিনিটে 5 °C হারে থার্মোগ্রাভিমেট্রিক বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
গ্লাস-রেখাযুক্ত স্টেইনলেস স্টীল সরু-বোর কলামের মাত্রা (100 × 1.8 মিমি আইডি) স্লারি প্যাকিং পদ্ধতি ব্যবহার করে প্যাক করা হয়েছিল, রেফ-এ ব্যবহৃত একই পদ্ধতি প্রয়োগ করে।31.একটি স্টেইনলেস স্টিল কলাম (গ্লাস-রেখাযুক্ত, 100 × 1.8 মিমি আইডি) একটি আউটলেট ফিটিং সহ একটি 1 µm ফ্রিট একটি স্লারি প্যাকারের সাথে সংযুক্ত ছিল (অলটেক ডিয়ারফিল্ড, আইএল, ইউএসএ)। একটি স্থির ফেজ স্লারি প্রস্তুত করুন এবং 150 মিলিমিটার থেকে 150 মিলিমিটার স্টোরেজের মধ্যে 1 µm মিলিমিটার স্টোরেজ সাসপেন্ড করে একটি স্থির ফেজ স্লারি তৈরি করুন। .মিথানল স্লারি দ্রাবকের পাশাপাশি প্রপেলিং দ্রাবক হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল৷ 10 মিনিটের জন্য 100 MP, 15 মিনিটের জন্য 80 MP এবং 30 মিনিটের জন্য 60 MP চাপ প্রয়োগ করে কলামটি ক্রমানুসারে পূরণ করুন৷ প্যাকিংয়ের সময়, যান্ত্রিক কম্পন প্রয়োগ করা হয়েছিল দুটি GC ফিল্ড, ইউএসএআইএল কলাম নিশ্চিত করার জন্য, ইউএসএআইএল কলামের জন্য। কলাম। স্লারি প্যাকারটি বন্ধ করুন এবং কলামের মধ্যে কোনো ক্ষতি রোধ করতে ধীরে ধীরে চাপ ছেড়ে দিন। স্লারি প্যাকিং ইউনিট থেকে কলামটি সংযোগ বিচ্ছিন্ন করুন এবং এর কার্যকারিতা পরীক্ষা করতে ইনলেট এবং এলসি সিস্টেমের সাথে আরেকটি ফিটিং সংযোগ করুন।
একটি LC পাম্প (10AD Shimadzu, জাপান), 50nL ইনজেকশন লুপ সহ ইনজেক্টর (Valco (USA) C14 W.05), মেমব্রেন ডিগ্যাসার (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS কৈশিক উইন্ডো তৈরি করা হয়েছিল বিশেষ µLC ডিভাইস সনাক্তকারী (UV-2075 এবং মাইক্রোকলিনের সাথে সংযুক্ত করা হয়েছে)। অতিরিক্ত কলাম ব্যান্ড প্রসারিত করার প্রভাবকে ইমাইজ করুন৷ প্যাকেজিংয়ের পরে, কৈশিকগুলি (50 μm id 365 এবং reducing union capillaries (50 μm) হ্রাসকারী ইউনিয়নের 1/16″ আউটলেটে ইনস্টল করা হয়েছিল৷ ডেটা সংগ্রহ এবং ক্রোমাটোগ্রাফিক প্রক্রিয়াকরণ করা হয়েছিল Multichro 200m 2004 সফ্টওয়্যারের জন্য অ্যানাভিউ 200 মিলিমিটার পরীক্ষা করা হয়েছিল৷ ক্রোমাটোগ্রাফিক ডেটা OriginPro8 (Northampton, MA) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
হিউম্যান সিরাম থেকে অ্যালবুমিন, লাইওফিলাইজড পাউডার, ≥ 96% (অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস) 3 মিলিগ্রাম ট্রিপসিন (1.5 মিলিগ্রাম), 4.0 এম ইউরিয়া (1 মিলি), এবং 0.2 এম অ্যামোনিয়াম বাইকার্বোনেট (1 মিলি)। দ্রবণটি 10 ​​মিনিটের জন্য নাড়াচাড়া করা হয়েছিল এবং তারপরে 3 মিলিমিটার জলে 3 ° সেন্টিগ্রেড জলে 1 মিলিমিটার তাপমাত্রায় রাখা হয়েছিল। 0.1% TFA. সমাধানটি ফিল্টার করুন এবং 4 °C এর নিচে সংরক্ষণ করুন।
পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA ট্রিপসিন ডাইজেস্টের পৃথকীকরণ PMP কলামে আলাদাভাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। PMP কলাম দ্বারা HSA-এর পেপটাইড মিশ্রণ এবং ট্রিপসিন ডাইজেস্টের পৃথকীকরণ পরীক্ষা করুন এবং ফলাফলগুলিকে Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করুন। তাত্ত্বিক প্লেট নম্বর অনুসরণ করে:
বেয়ার সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার SEM চিত্রগুলি FIG এ দেখানো হয়েছে।2 .বেয়ার সিলিকা কণার SEM চিত্রগুলি (A, B) দেখায় যে, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার বিপরীতে, এই কণাগুলি গোলাকার যেখানে কণাগুলি দীর্ঘায়িত বা অনিয়মিত প্রতিসাম্য রয়েছে৷ লিগ্যান্ড-বন্ধযুক্ত সিলিকা কণাগুলির (C, D) পৃষ্ঠতলের তুলনায় মসৃণ সিলিকার অংশের বেয়ারে সিলিকা, যার কারণে বেয়ার সিলিকা কণার উপরিভাগ বেয়ার সিলিকা কণা হতে পারে৷ ica কণা।
খালি সিলিকা কণা (A, B) এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার (C, D) ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের ছবি স্ক্যান করা হচ্ছে।
বেয়ার সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার কণার আকার বন্টন চিত্র 3(A) এ দেখানো হয়েছে। ভলিউম-ভিত্তিক কণার আকার বন্টন বক্ররেখা দেখায় যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণার আকার বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 3A)। কণার আকার বন্টন ডেটা সিলিকা কণার পূর্ববর্তী অধ্যয়ন-এ বর্তমান অধ্যয়ন-এ Tbasic কণা এবং Tbasic কণার তুলনা করা হয়। পিএমপি-এর le সাইজ, d(0.5), 3.36 μm, বিজ্ঞাপন (0.5) মান 3.05 μm (পলিস্টাইরিন-বাউন্ড সিলিকা কণা) 34 এর সাথে আমাদের পূর্ববর্তী অধ্যয়নের তুলনায়। এই ব্যাচে আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় একটি সংকীর্ণ কণার আকার বন্টন ছিল কারণ পিইজি এবং পিইজিএক্সের আকারের অ্যাসিডের প্রতিক্রিয়া, অংশে পিইজিএক্সেটিক অ্যাসিড। এমপি ফেজ পলিস্টাইরিন-বাউন্ড সিলিকা কণা ফেজের তুলনায় কিছুটা বড়। এর মানে হল যে স্টাইরিনের সাথে সিলিকা কণার সারফেস ফাংশনালাইজেশন শুধুমাত্র সিলিকা পৃষ্ঠে একটি পলিস্টাইরিন লেয়ার (0.97 µm) জমা করে, যেখানে PMP ফেজে লেয়ারের বেধ ছিল 1.38 µm।
বেয়ার সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বাউন্ড সিলিকা কণার কণার আকার বিতরণ (A) এবং ছিদ্র আকার বিতরণ (B)।
বর্তমান গবেষণার সিলিকা কণার ছিদ্রের আকার, ছিদ্রের আয়তন এবং পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল সারণী 1(B) এ দেওয়া হয়েছে। বেয়ার সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার PSD প্রোফাইল চিত্র 3(B) তে দেখানো হয়েছে। ফলাফলগুলি আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে তুলনীয়। বেয়ার এবং লিগ্যান্ড-বাউন্ডেড সিলিকা কণার ছিদ্রের আকার নির্দেশ করে যে pore এবং 410 কণা, যা pore 2010। রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে পুনরায় আকার 69 দ্বারা হ্রাস পায়, যেমনটি সারণী 1(বি) তে দেখানো হয়েছে, এবং বক্ররেখার পরিবর্তন চিত্র 3(বি) এ দেখানো হয়েছে। একইভাবে, রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণার ছিদ্রের পরিমাণ 0.67 থেকে 0.58 cm3/g কমে গেছে। সিলিকার নির্দিষ্ট পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল যা বর্তমানে আমাদের পূর্ববর্তী অধ্যয়নযোগ্য অংশটি 6/1g 1/g-এর অধ্যয়নযোগ্য। 24 m2/g)। সারণি 1(B) তে দেখানো হয়েছে, রাসায়নিক পরিবর্তনের পর সিলিকা কণার পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল (m2/g) 116 m2/g থেকে কমে 105 m2/g হয়েছে।
স্থির পর্যায়ের মৌলিক বিশ্লেষণের ফলাফলগুলি সারণি 2-এ দেখানো হয়েছে। বর্তমান স্থির পর্যায়ের কার্বন লোডিং হল 6.35%, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার কার্বন লোডিং থেকে কম (পলিস্টাইরিন বন্ডেড সিলিকা কণা, যথাক্রমে 7.93%35 এবং 10.21%) কারণ বর্তমান স্টেশনে কার্বন লোডিং 42-এ কার্বন লোডিং কম। স্টাইরিন ছাড়াও, কিছু পোলার লিগান্ড যেমন phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) এবং 4-hydroxy-TEMPO ব্যবহার করা হয়েছিল৷ বর্তমান স্থির পর্যায়ে নাইট্রোজেনের ওজন শতাংশ 2.21%, 0.1735 এবং 0.85% এর তুলনায়, পূর্ববর্তী গবেষণায় এই নাইট্রোজেনের ওজন যথাক্রমে উচ্চতর স্টেশনে নাইট্রোজেনের শতাংশ। ফেনাইলমেলেইমাইডের কারণে ফেজ। একইভাবে, পণ্যের কার্বন লোডিং (4) এবং (5) ছিল যথাক্রমে 2.7% এবং 2.9%, যখন চূড়ান্ত পণ্য (6) এর কার্বন লোডিং ছিল 6.35%, সারণি 2-এ দেখানো হিসাবে। ওজন হ্রাস PMP স্থির ফেজ দিয়ে পরীক্ষা করা হয়েছিল, এবং TGA 4-এর ওজন হ্রাসের বক্রতা TGA 4%-এ দেখানো হয়েছে। , যা কার্বন লোডিং (6.35%) এর সাথে ভাল চুক্তিতে রয়েছে কারণ লিগ্যান্ডগুলিতে কেবল C নয়, N, O এবং Hও রয়েছে।
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand কে সিলিকা কণার পৃষ্ঠের পরিবর্তনের জন্য বেছে নেওয়া হয়েছিল কারণ এতে পোলার ফেনাইলম্যালিমাইড গ্রুপ এবং ভিনিলাইসোসায়ানেট গ্রুপ রয়েছে। ভিনাইল আইসোসায়ানেট গ্রুপগুলি আরও জীবন্ত র্যাডিকাল পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে স্টাইরিনের সাথে প্রতিক্রিয়া করতে পারে। দ্বিতীয় কারণ হল একটি গ্রুপ সন্নিবেশ করা যা একটি শক্তিশালী ইলেক্ট্রোয়ান এবং ইলেক্ট্রোয়ান স্টেশানের মধ্যে ইন্টারঅ্যাকশন নেই। ary ফেজ, যেহেতু phenylmaleimide moiety স্বাভাবিক pH এ কোন ভার্চুয়াল চার্জ নেই। স্থির পর্যায়ের পোলারিটি স্টাইরিনের সর্বোত্তম পরিমাণ এবং মুক্ত র‌্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশনের প্রতিক্রিয়া সময় দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হতে পারে। প্রতিক্রিয়ার শেষ ধাপ (ফ্রি-র্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশন) গুরুত্বপূর্ণ এবং এই স্থির স্টেশনের মেরুতা পরিবর্তন করতে পারে। টি লক্ষ্য করা গেছে যে স্টাইরিনের পরিমাণ বৃদ্ধি এবং প্রতিক্রিয়া সময় স্থির পর্যায়ের কার্বন লোডিং বৃদ্ধি করেছে এবং তদ্বিপরীত। স্টাইরিনের বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে প্রস্তুত SP-তে বিভিন্ন কার্বন লোডিং আছে। আবার, এই স্থির পর্যায়গুলিকে স্টেইনলেস স্টীল কলামগুলিতে লোড করুন এবং তাদের ক্রোমাটোগ্রাফিক কর্মক্ষমতা পরীক্ষা করুন (নির্বাচন, রেজোলিউশন, বাছাই করা, বাছাই করা, বাছাই করা, বাছাই করা, বাছাই করা, ইত্যাদির উপর পরীক্ষা করা হয়েছে। PMP নিশ্চল ফেজ নিয়ন্ত্রিত পোলারিটি এবং ভাল বিশ্লেষক ধারণ নিশ্চিত করতে।
পাঁচটি পেপটাইড মিশ্রণ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) এছাড়াও একটি মোবাইল ফেজ ব্যবহার করে একটি PMP কলাম ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল;80 μL/মিনিট প্রবাহ হারে 60/40 (v/v) অ্যাসিটোনিট্রিল/জল (0.1% TFA)। সর্বোত্তম বিলুপ্তির অবস্থার অধীনে, তাত্ত্বিক প্লেট নম্বর (N) প্রতি কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) হল 20,000 ± 0,002 টি প্ল্যাটের জন্য 20,000 ± 0,003 s/1002 টি প্ল্যাটের মান। PMP কলাম এবং ক্রোমাটোগ্রামগুলি চিত্র 5A-তে দেখানো হয়েছে। একটি PMP কলামে দ্রুত বিশ্লেষণ উচ্চ প্রবাহ হারে (700 μL/মিনিট), পাঁচটি পেপটাইড এক মিনিটের মধ্যে নির্গত হয়েছিল, N মানগুলি খুব ভাল ছিল, 13,500 ± 330 প্রতি কলামে (1080 × 1080 মিমি, কর্পোনটেস থেকে 100 মিমি) m (চিত্র 5B)। পুনরুত্পাদনযোগ্যতা পরীক্ষা করার জন্য তিনটি অভিন্ন আকারের কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) তিনটি ভিন্ন লট পিএমপি স্থির ফেজ দিয়ে প্যাক করা হয়েছিল। প্রতিটি কলামের জন্য বিশ্লেষক ঘনত্ব সর্বোত্তম ইলুশন শর্ত এবং তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা ব্যবহার করে রেকর্ড করা হয়েছিল এবং প্রতিটি পিএমপি কোলম ধারণ ক্ষমতার জন্য একই ডেটার কোম্পানী পরীক্ষার জন্য আলাদা করা হয়েছিল। সারণি 4-এ lumns দেখানো হয়েছে। PMP কলামের পুনরুত্পাদনযোগ্যতা খুব কম %RSD মানের সাথে ভালোভাবে সম্পর্কযুক্ত, যেমনটি সারণি 3 এ দেখানো হয়েছে।
PMP কলাম (B) এবং Ascentis Express RP-Amide কলাম (A) তে পেপটাইড মিশ্রণের পৃথকীকরণ;মোবাইল ফেজ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP কলামের মাত্রা (100 × 1.8 মিমি আইডি);বিশ্লেষণাত্মক যৌগগুলির নির্গমনের ক্রম: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) এবং 5 (leucine) অ্যাসিড এনকেফালিন))।
একটি PMP কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে মানব সিরাম অ্যালবুমিনের ট্রিপটিক ডাইজেস্ট আলাদা করার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল৷ চিত্র 6-এর ক্রোমাটোগ্রাম দেখায় যে নমুনাটি ভালভাবে আলাদা করা হয়েছে এবং রেজোলিউশনটি খুব ভাল৷ HSA হজমের বিশ্লেষণ করা হয়েছিল একটি মোবাইল 3/0 মিটার 0/0 টন ফ্লো রেট ব্যবহার করে। rile/water এবং 0.1% TFA। ক্রোমাটোগ্রামে দেখানো হয়েছে (চিত্র 6), HSA হজমকে 17টি পেপটাইডের সাথে সঙ্গতিপূর্ণ 17টি শিখরে বিভক্ত করা হয়েছে। HSA ডাইজেস্টে প্রতিটি পিকের বিচ্ছেদ কার্যকারিতা গণনা করা হয়েছে এবং মানগুলি T টেবিলে 5 দেওয়া হয়েছে।
এইচএসএ (100 × 1.8 মিমি আইডি) এর একটি ট্রিপটিক ডাইজেস্ট একটি পিএমপি কলামে আলাদা করা হয়েছিল;প্রবাহের হার (100 μL/মিনিট), মোবাইল ফেজ 60/40 অ্যাসিটোনিট্রিল/জল 0.1% TFA সহ।
যেখানে L হল কলামের দৈর্ঘ্য, η হল মোবাইল ফেজের সান্দ্রতা, ΔP হল কলামের পিছনের চাপ, এবং u হল মোবাইল ফেজের রৈখিক বেগ৷ PMP কলামের ব্যাপ্তিযোগ্যতা ছিল 2.5 × 10-14 m2, প্রবাহের হার ছিল 25 μL/min, এবং 60/40MP AC/40MP-এর ব্যাপ্তিযোগ্যতা 0 × 1.8 মিমি আইডি) আমাদের পূর্ববর্তী অধ্যয়নের অনুরূপ ছিল Ref.34. উপরিভাগে ছিদ্রযুক্ত কণা দিয়ে প্যাক করা কলামের ব্যাপ্তিযোগ্যতা হল: 1.3 μm কণার জন্য 1.7 × 10-15, 1.7 μm কণার জন্য 3.1 × 10-15 এবং 1.2 × 51 × 251 কণার জন্য .6 μm কণা 5 μm কণার জন্য 43. অতএব, PMP পর্বের ব্যাপ্তিযোগ্যতা 5 μm কোর-শেল কণার অনুরূপ।
যেখানে Wx হল ক্লোরোফর্ম দিয়ে বস্তাবন্দী কলামের ওজন, Wy হল মিথানল দিয়ে প্যাক করা কলামের ওজন, এবং ρ হল দ্রাবকের ঘনত্ব। মিথানল (ρ = 0.7866) এবং ক্লোরোফর্মের ঘনত্ব (ρ = 1.484)। SIIDS18 মিমি এর মোট পোরোসিটি। ) 34 এবং C18-ইউরিয়া কলাম 31 যা আমরা পূর্বে অধ্যয়ন করেছি যথাক্রমে 0.63 এবং 0.55। এর মানে হল যে ইউরিয়া লিগান্ডের উপস্থিতি স্থির পর্যায়ের ব্যাপ্তিযোগ্যতা হ্রাস করে। অন্যদিকে, PMP কলামের মোট ছিদ্রতা (100 × 1.8) প্রতি পিএনএস-এর কোলামের তুলনায় কম। C18-বন্ডেড সিলিকা কণা দ্বারা পরিপূর্ণ কারণ C18-টাইপ স্থির পর্যায়গুলিতে C18 লিগ্যান্ডগুলি রৈখিক চেইন হিসাবে সিলিকা কণাগুলির সাথে সংযুক্ত থাকে, যখন পলিস্টাইরিন-টাইপ স্থির পর্যায়গুলিতে, একটি অপেক্ষাকৃত পুরু পলিমার স্তর এটির চারপাশে গঠিত হয়৷ একটি সাধারণ পরীক্ষায়, কলামের ছিদ্র হিসাবে গণনা করা হয়:
চিত্র 7A,B পিএমপি কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) এবং অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস RP-অ্যামাইড কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) একই ইলুশন অবস্থা ব্যবহার করে (যেমন, 60/40 ACN/H2O এবং 0.1% TFA) দেখায়।) ভ্যান ডিমটার প্লটের।নির্বাচিত পেপটাইড মিশ্রণগুলি (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ উভয় কলামের জন্য সর্বনিম্ন প্রবাহের হার 800 µminL/মিনিটের মান 800 µtpl/মিনিট. L/min) PMP কলাম এবং Ascentis Express RP-Amide কলামের জন্য যথাক্রমে 2.6 µm এবং 3.9 µm ছিল। HETP মানগুলি নির্দেশ করে যে PMP কলামের বিচ্ছেদ দক্ষতা (100 × 1.8 মিমি আইডি) বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ RP-0 মিমি × RP-0 1 মিমি এক্সপ্রেসাইডের তুলনায় অনেক ভালো। .চিত্র 7(A) এর ভ্যান ডিমটার প্লট দেখায় যে ক্রমবর্ধমান প্রবাহের সাথে N মান হ্রাস আমাদের পূর্ববর্তী অধ্যয়নের তুলনায় উল্লেখযোগ্য নয়৷ Ascentis Express RP-Amide কলামের তুলনায় PMP কলামের উচ্চ বিচ্ছেদ দক্ষতা (100 × 1.8 mm id) কণার উন্নতির উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে, কণার আকারের জটিলতা এবং বর্তমান পদ্ধতির আকারে জটিলতা, প্যাকেল কলামের আকার ব্যবহার করা হয়েছে৷
(A) ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজ রৈখিক বেগ) একটি PMP কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) ব্যবহার করে 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O-তে প্রাপ্ত। .8 মিমি আইডি) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O-এ।
একটি পোলার-এমবেডেড পলিস্টাইরিন স্থির পর্যায় প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (HAS)-এর সিন্থেটিক পেপটাইড মিশ্রণ এবং ট্রিপসিন ডাইজেস্ট আলাদা করার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল। s, যেমন সিলিকা কণার কণার আকার এবং ছিদ্রের আকার, স্থির পর্যায়ের নিয়ন্ত্রিত সংশ্লেষণ, এবং জটিল কলাম প্যাকিং। উচ্চ বিচ্ছেদ দক্ষতার পাশাপাশি, উচ্চ প্রবাহ হারে কম কলামের পিছনের চাপ এই স্থির পর্যায়ের আরেকটি সুবিধা। পিএমপি কলামগুলি ভাল প্রজননযোগ্যতা প্রদর্শন করে এবং বিভিন্ন প্রোটিন এবং পেপ্টেনসিস এবং পেপ্টেনসিস ট্রায়ালের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে প্রাকৃতিক পণ্য, ঔষধি গাছ থেকে বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ এবং ছত্রাকের নির্যাস পৃথক করার জন্য এই কলামটি ব্যবহার করুন। ভবিষ্যতে, PMP কলামগুলি প্রোটিন এবং মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডিগুলির পৃথকীকরণের জন্যও মূল্যায়ন করা হবে।
ফিল্ড, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি পার্ট I দ্বারা পেপটাইড সেপারেশন সিস্টেমের উপর গবেষণা: একটি কলাম ক্যারেক্টারাইজেশন প্রোটোকলের বিকাশ।ক্রোমাটোগ্রাফি.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)।
Gomez, B. et al. সংক্রামক রোগের চিকিৎসার জন্য ডিজাইন করা উন্নত সক্রিয় পেপটাইড। Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. সিনথেটিক থেরাপিউটিক পেপটাইডস: Science and the market.drug discovery.15 (1-2) Today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009 (0.2009)।
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.ক্রোমাটোগ্রাফি।এ 1261, 78-90 (2012)।
লিউ, ডব্লিউ. এট আল. অ্যাডভান্সড লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি বিস্তৃতভাবে লক্ষ্যযুক্ত বিপাকবিদ্যা এবং প্রোটিওমিক্স.আনুস.চিম.অ্যাক্টা 1069, 89–97 (2019) এর অন্তর্ভুক্তি সক্ষম করে৷
Chesnut, SM & Salisbury, JJ ড্রাগ উন্নয়নে UHPLC এর ভূমিকা.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007)।
Wu, N. & Clausen, AM দ্রুত বিচ্ছেদের জন্য অতি উচ্চ চাপের তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক এবং ব্যবহারিক দিক।Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)।
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ড্রাগ ডেভেলপমেন্টে আল্ট্রা-হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির প্রয়োগ।ক্রোমাটোগ্রাফি.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)।
গু, এইচ. এট আল. মনোলিথিক ম্যাক্রোপোরাস হাইড্রোজেলগুলি এন্টারোভাইরাসগুলির দক্ষ পরিশোধনের জন্য অয়েল-ইন-ওয়াটার উচ্চ অভ্যন্তরীণ ফেজ ইমালসন থেকে প্রস্তুত।401, 126051 (2020)।
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA প্রোটিওমিক্সে তরল ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা. জে.ক্রোমাটোগ্রাফি.এ 1053(1-2), 27-36 (2004)।
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. থেরাপিউটিক পেপটাইড এবং প্রোটিনের বিপরীত-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি বিভাজনে উদীয়মান প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ।ফার্মেসি.বায়োমেডিক্যাল সায়েন্স.আনুস.69, 9-27 (2012)।
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC প্রথম এবং দ্বিতীয় বিচ্ছেদ মাত্রায় বিভিন্ন pH মান ব্যবহার করে একটি RP-RP-HPLC সিস্টেম ব্যবহার করে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক বিচ্ছেদ।Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005)।
Feletti, S. et al. C18 সাব-2 μm সম্পূর্ণরূপে এবং অতিমাত্রায় ছিদ্রযুক্ত কণার সাথে প্যাকযুক্ত উচ্চ-দক্ষ ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামগুলির ভর স্থানান্তর বৈশিষ্ট্য এবং গতিশীল কর্মক্ষমতা তদন্ত করা হয়েছিল।Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)।
Piovesana, S. et al. সাম্প্রতিক প্রবণতা এবং উদ্ভিদের জৈব সক্রিয় পেপটাইডস.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s018261001007/s0182018-এর বিচ্ছিন্নতা, সনাক্তকরণ এবং বৈধতার বিশ্লেষণমূলক চ্যালেঞ্জ।
Mueller, JB et al. জীবনের রাজ্যের প্রোটিওমিক ল্যান্ডস্কেপ। Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)।
DeLuca, C. et al. প্রস্তুতিমূলক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা থেরাপিউটিক পেপটাইডের ডাউনস্ট্রিম প্রক্রিয়াকরণ। অণু (বাসেল, সুইজারল্যান্ড) 26(15), 4688(2021)।
Yang, Y. & Geng, X. মিক্সড-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং বায়োপলিমারে এর প্রয়োগ।ক্রোমাটোগ্রাফি।এ 1218(49), 8813–8825 (2011)।
মিক্সড-মোড প্রোটিন ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য ঝাও, জি, ডং, এক্স-ওয়াই এবং সান, ওয়াই লিগ্যান্ডস: নীতি, চরিত্রায়ন, এবং নকশা।বায়োটেকনোলজি.144(1), 3-11 (2009)।