Nature.com দেখার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন তাতে সীমিত CSS সমর্থন রয়েছে। সর্বোত্তম অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি আপডেট করা ব্রাউজার ব্যবহার করার পরামর্শ দিচ্ছি (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে সামঞ্জস্যতা মোড অক্ষম করুন)। ইতিমধ্যে, অব্যাহত সমর্থন নিশ্চিত করার জন্য, আমরা সাইটটিকে স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই রেন্ডার করব।
অ্যাঙ্গাস্টিফোলিয়াস লুপিন (NLL, Lupinus angustifolius L.) হল একটি শিম জাতীয় উদ্ভিদ যা খাদ্য উৎপাদন এবং মাটির উন্নতির জন্য ব্যবহৃত হয়। বিশ্বব্যাপী ফসল হিসেবে NLL-এর বিস্তার অনেক রোগজীবাণু ছত্রাককে আকৃষ্ট করেছে, যার মধ্যে লুপিন অ্যানথ্রাকনোজ অন্তর্ভুক্ত, যা বিধ্বংসী অ্যানথ্রাকনোজ রোগের কারণ হয়। NLL প্রজননে দুটি অ্যালিল, Lanr1 এবং AnMan, যা বর্ধিত প্রতিরোধ ক্ষমতা প্রদান করে, ব্যবহার করা হয়েছে, তবে অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়া অজানা রয়ে গেছে। এই গবেষণায়, Lanr1 এবং AnMan মার্কারগুলি ইউরোপীয় NLL নমুনাগুলি পরীক্ষা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। একটি নিয়ন্ত্রিত পরিবেশে ভ্যাকসিন পরীক্ষা উভয় প্রতিরোধী দাতাদের কার্যকারিতা নিশ্চিত করেছে। প্রতিনিধিত্বমূলক প্রতিরোধী এবং সংবেদনশীল লাইনে ডিফারেনশিয়াল জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলিং করা হয়েছিল। অ্যাঙ্গাস্টিফোলিয়াস প্রতিরোধ জিন অনটোলজি পদ "GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া", "GO:0055114 রেডক্স প্রক্রিয়া", এবং "GO:0015979 আলোকসংশ্লেষণ" এর অতিরিক্ত প্রকাশের সাথে যুক্ত ছিল। এছাড়াও, Lanr1(83A:476) লাইনে ইনোকুলেশনের পরে উল্লেখযোগ্য ট্রান্সক্রিপ্টোম রিপ্রোগ্রামিং দ্রুত দেখা গেছে, যেখানে অন্যান্য লাইনগুলিতে এই প্রতিক্রিয়ায় প্রায় 42 ঘন্টা বিলম্ব দেখা গেছে। প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়াগুলি TIR-NBS, CC-NBS-LRR এবং NBS-LRR জিন, প্যাথোজেনেসিসে জড়িত 10টি প্রোটিন, লিপিড ট্রান্সফার প্রোটিন, এন্ডোগ্লুকান-1,3-β-গ্লুকোসিডেস, গ্লাইসিন সমৃদ্ধ কোষ প্রাচীর প্রোটিন এবং অক্সিজেনের প্রতিক্রিয়াশীল পথ থেকে জিনের সাথে যুক্ত। 83A:476 এর প্রাথমিক প্রতিক্রিয়া, যার মধ্যে সালোকসংশ্লেষণের সাথে সম্পর্কিত জিনের যত্ন সহকারে দমন অন্তর্ভুক্ত, ছত্রাক জীববিজ্ঞানের উদ্ভিদ বৃদ্ধির পর্যায়ে সফল সুরক্ষার সাথে মিলে যায়, যা ইঙ্গিত দেয় যে একটি প্রভাবক অনাক্রম্যতা ট্রিগার করে। ম্যান্ডেলূপ প্রতিক্রিয়া ধীর হয়ে যায়, যেমন সামগ্রিক অনুভূমিক টানা।
সরু পাতার লুপিন (NLL, Lupinus angustifolius L.) পশ্চিম ভূমধ্যসাগরীয় অঞ্চলে উৎপন্ন একটি উচ্চ প্রোটিনযুক্ত শস্য। বর্তমানে এটি প্রাণী এবং মানুষের খাদ্য ফসল হিসেবে জন্মায়। সিম্বিওটিক নাইট্রোজেন ফিক্সিং ব্যাকটেরিয়া দ্বারা নাইট্রোজেন স্থিরকরণ এবং মাটির গঠনের সামগ্রিক উন্নতির কারণে এটিকে ফসল ঘূর্ণন ব্যবস্থায় সবুজ সার হিসেবেও বিবেচনা করা হয়। গত শতাব্দীতে NLL দ্রুত গৃহপালিতকরণ প্রক্রিয়ার মধ্য দিয়ে গেছে এবং এখনও উচ্চ প্রজনন চাপের মধ্যে রয়েছে3,4,5,6,7,8,9,10,11,12। NLL এর ব্যাপক চাষের সাথে সাথে, রোগজীবাণু ছত্রাকের উত্তরাধিকার নতুন কৃষিক্ষেত্র তৈরি করেছে এবং নতুন ফসল ধ্বংসকারী রোগের সৃষ্টি করেছে। লুপিন চাষী এবং প্রজননকারীদের জন্য সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য ছিল অ্যানথ্রাকনোজের আবির্ভাব, যা রোগজীবাণু ছত্রাক, কোলেটোট্রিচাম লুপিনি (বন্ডার) নিরেনবার্গ, ফেইলার এবং হেজেডর্ন13 দ্বারা সৃষ্ট। লুপিন চাষী এবং প্রজননকারীদের জন্য সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য ছিল অ্যানথ্রাকনোজের আবির্ভাব, যা রোগজীবাণু ছত্রাক, কোলেটোট্রিচাম লুপিনি (বন্ডার) নিরেনবার্গ, ফেইলার এবং হেজেডর্ন13 দ্বারা সৃষ্ট। Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного патогеннымберичам (collection) নিরেনবার্গ, ফিলার এবং হ্যাগেডর্ন১৩. লুপিন চাষি এবং প্রজননকারীদের কাছে সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য ছিল রোগজীবাণু ছত্রাক কোলেটোট্রিচাম লুপিনি (বন্ডার) নিরেনবার্গ, ফেইলার এবং হেজেডর্ন13 দ্বারা সৃষ্ট অ্যানথ্রাকনোজের উত্থান।对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真民和原真華它是由病原真菜Feiler & Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现,它是由病原农民和饲养者来说(Bondar)嵵কেশযুক্ত.1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемого патоимеров и селекционеров (বোন্ডার) নিরেনবার্গ, ফেইলার এবং হ্যাগেডর্ন১৩. লুপিন চাষী এবং প্রজননকারীদের কাছে সবচেয়ে আকর্ষণীয় হল কোলেটোট্রিচাম লুপিনি (বন্ডার) নিরেনবার্গ, ফেইলার এবং হেজেডর্ন১৩ নামক রোগজীবাণু ছত্রাকের কারণে অ্যানথ্রাকনোজের উত্থান।এই রোগের প্রথম রিপোর্ট ব্রাজিল এবং মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র থেকে এসেছিল, যার সাধারণ লক্ষণগুলি যথাক্রমে ১৯১২ এবং ১৯২৯ সালে দেখা গিয়েছিল। তবে, প্রায় ৩০ বছর পর, রোগজীবাণুটিকে কোলেটোট্রিচাম গ্লোওস্পোরিওয়েডস (পেনজ.) পেনজ হিসাবে মনোনীত করা হয়েছিল। & স্যাক., টেলিওমর্ফ গ্লোমেরেলা সিঙ্গুলাটা (স্টোনম্যান) স্পাল্ড। & স্যাক., টেলিওমর্ফ গ্লোমেরেলা সিঙ্গুলাটা (স্টোনম্যান) স্পাল্ড। & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & স্যাক., গ্লোমেরেলা সিঙ্গুলাটা (স্টোনম্যান) স্পাল্ডের টেলিওমর্ফ। এবং স্যাক। এবং স্যাক। & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld in Targeted Morphology. & এইচ. শ্রেঙ্ক,। & এইচ. শ্রেঙ্ক, .এবং এইচ. শ্রেঙ্ক। এবং এইচ. 施伦克,। এবং এইচ. 施伦克,।এবং এইচ. শ্লেঙ্ক, .বিংশ শতাব্দীর মাঝামাঝি সময়ে করা প্রাথমিক রোগের ফেনোটাইপিংয়ে NLL এবং হলুদ লুপিন (L. luteus L.) অ্যাক্সিয়নে কিছু প্রতিরোধ ক্ষমতা দেখা গেছে, কিন্তু পরীক্ষিত সমস্ত সাদা লুপিন (L. albus L.) অ্যাক্সিয়ন অত্যন্ত সংবেদনশীল ছিল15,16। গবেষণায় দেখা গেছে যে অ্যানথ্রাকনোজের বিকাশ বর্ধিত বৃষ্টিপাত (বাতাসের আর্দ্রতা) এবং তাপমাত্রা (12-28°C এর মধ্যে) এর সাথে সম্পর্কিত, যার ফলে উচ্চ তাপমাত্রায় প্রতিরোধের লঙ্ঘন ঘটে17, 18। প্রকৃতপক্ষে, কনিডিয়ার অঙ্কুরোদগম এবং রোগ শুরু হতে প্রয়োজনীয় সময় উচ্চ আর্দ্রতার পরিস্থিতিতে 12°C (16 ঘন্টা) এর তুলনায় 24°C (4 ঘন্টা) এ চারগুণ কম ছিল19। সুতরাং, চলমান বিশ্ব উষ্ণায়নের ফলে অ্যানথ্রাকনোজের বিস্তার ঘটেছে। যাইহোক, ফ্রান্স (1982) এবং ইউক্রেন (1983) এ এই রোগটি আসন্ন হুমকির পূর্বাভাস হিসাবে দেখা গিয়েছিল, কিন্তু দৃশ্যত সেই সময়ে লুপিন শিল্প দ্বারা উপেক্ষা করা হয়েছিল20,21। কয়েক বছর পর, এই বিধ্বংসী রোগটি সারা বিশ্বে ছড়িয়ে পড়ে এবং অস্ট্রেলিয়া, পোল্যান্ড এবং জার্মানির মতো প্রধান লুপিন উৎপাদনকারী দেশগুলিকেও প্রভাবিত করে। 22,23,24। 1990-এর দশকের মাঝামাঝি সময়ে অ্যানথ্রাকনোজের প্রাদুর্ভাবের পর, ব্যাপক স্ক্রিনিংয়ের ফলে NLL19 নমুনায় বেশ কয়েকটি প্রতিরোধী দাতা সনাক্ত করা সম্ভব হয়। অ্যানথ্রাকনোজের প্রতি NLL প্রতিরোধ বিভিন্ন জার্মপ্লাজম উৎসে পাওয়া দুটি পৃথক প্রভাবশালী অ্যালিল দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়: তানজিল এবং ওঙ্গার জাতগুলিতে ল্যানআর1 এবং জাতগুলিতে আনম্যান। মান্দালয় 25, 26। এই অ্যালিলগুলি আণবিক চিহ্নিতকারীগুলিকে পরিপূরক করে যা প্রজনন প্রোগ্রামগুলিতে প্রতিরোধী জার্মপ্লাজম নির্বাচনকে সমর্থন করে 25,26,27,28,29,30। Lanr1 অ্যালিল বহনকারী প্রতিরোধী প্রজনন রেখা 83A:476 কে সংবেদনশীল বন্য রেখা P27255 দিয়ে অতিক্রম করা হয়েছিল যাতে অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের জন্য পৃথকীকরণ করা RIL জনসংখ্যা পাওয়া যায়, যার ফলে Lanr1 লোকাসকে ক্রোমোজোম NLL-1131, 32, 33-তে বরাদ্দ করা সম্ভব হয়েছিল। জিনোমিক কাঠামোর সাথে অ্যানথ্রাকনোজের সাথে ফ্ল্যাঙ্কিং রেজিস্ট্যান্স লোকি থেকে লিঙ্কেজ ম্যাপ মার্কারগুলির সারিবদ্ধকরণ, NLL একই ক্রোমোজোমে (NLL-11) তিনটি অ্যালিলের অবস্থান প্রকাশ করেছে, কিন্তু ভিন্ন অবস্থানে 29,34, 35। যাইহোক, RIL-এর সংখ্যা কম এবং মার্কার এবং সংশ্লিষ্ট অ্যালিলের মধ্যে বৃহৎ জেনেটিক দূরত্বের কারণে, তাদের অন্তর্নিহিত জিন সম্পর্কে কোনও নির্ভরযোগ্য সিদ্ধান্ত নেওয়া যায় না। অন্যদিকে, লুপিনে বিপরীত জেনেটিক্সের ব্যবহার তাদের খুব কম পুনর্জন্ম সম্ভাবনার কারণে কঠিন, যা জেনেটিক ম্যানিপুলেশনকে জটিল করে তোলে37।
83A:476 (Lanr1) এবং Mandelup (AnMan) এর মতো হোমোজাইগাস অবস্থায় কাঙ্ক্ষিত অ্যালিল বহনকারী গৃহপালিত জার্মপ্লাজমের বিকাশ, বন্য জনগোষ্ঠীতে অ্যালিলের বিপরীত সংমিশ্রণের উপস্থিতির মুখে অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের অধ্যয়নের দরজা খুলে দিয়েছে। আণবিক প্রক্রিয়ার সম্ভাবনা। নির্দিষ্ট জিনোটাইপ দ্বারা উত্পন্ন প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ার তুলনা করুন। এই গবেষণায় C. lupini টিকাদানের প্রতি NLL এর প্রাথমিক ট্রান্সক্রিপ্টোম প্রতিক্রিয়া মূল্যায়ন করা হয়েছে। প্রথমে, Lanr1 এবং AnMan অ্যালিল চিহ্নিতকারী আণবিক মার্কার ব্যবহার করে 215টি লাইন সমন্বিত একটি ইউরোপীয় NLL জার্মপ্লাজম প্যানেল পরীক্ষা করা হয়েছিল। এরপর নিয়ন্ত্রিত পরিস্থিতিতে আণবিক মার্কারগুলির জন্য পূর্বে নির্বাচিত 50টি NLL লাইনে অ্যানথ্রাকনোজ ফেনোটাইপিং করা হয়েছিল। এই পরীক্ষাগুলির উপর ভিত্তি করে, দুটি পরিপূরক পদ্ধতি ব্যবহার করে ডিফারেনশিয়াল ডিফেন্স জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলিংয়ের জন্য অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের এবং Lanr1/AnMan অ্যালিলিক রচনায় ভিন্ন চারটি লাইন নির্বাচন করা হয়েছিল: উচ্চ-থ্রুপুট RNA সিকোয়েন্সিং এবং রিয়েল-টাইম PCR কোয়ান্টিফিকেশন।
Lanr1 (Anseq3 এবং Anseq4) এবং AnMan (Anseq4) এবং AnMan (AnManM1) মার্কার সহ NLL জার্মপ্লাজমের একটি সেট (N = 215) স্ক্রিনিং করে দেখা গেছে যে শুধুমাত্র একটি লাইন (95726, Salamanca-b এর কাছাকাছি) সমস্ত মার্কারগুলির জন্য "প্রতিরোধ" অ্যালিলকে প্রশস্ত করে, যেখানে "'সংবেদনশীল' অ্যালিলের উপস্থিতি" 158 (~73.5%) লাইনগুলিতে সমস্ত মার্কারগুলির অনুপাত খুঁজে পেয়েছে। তেরোটি লাইন Lanr1 মার্কারটির দুটি "প্রতিরোধী" অ্যালিল তৈরি করেছে এবং 8টি লাইন Lanr1. মার্কারটির "প্রতিরোধী" অ্যালিল তৈরি করেছে। AnMan মার্কারটির "প্রতিরোধ" অ্যালিল (পরিপূরক সারণী S1)। দুটি লাইন Anseq3 মার্কারটির জন্য ভিন্নতর এবং AnManM1 মার্কারটির জন্য একটি ভিন্নতর ছিল। ৪২টি লাইন (১৯.৫%) Anseq3 এবং Anseq4 অ্যালিলের বিপরীত পর্যায় বহন করে, যা এই দুটি লোকির মধ্যে পুনর্মিলনের উচ্চ ফ্রিকোয়েন্সি নির্দেশ করে। নিয়ন্ত্রিত পরিস্থিতিতে (পরিপূরক সারণী S2) অ্যানথ্রাকনোজ ফেনোটাইপগুলি পরীক্ষিত জিনোটাইপের প্রতিরোধের পরিবর্তনশীলতা প্রকাশ করেছে, যা অ্যানথ্রাকনোজের তীব্রতায় প্রতিফলিত হয়েছিল। গড় স্কোরের পার্থক্য 1.8 (মাঝারি প্রতিরোধী) থেকে 6.9 (সংবেদনশীল) এবং উদ্ভিদের ওজনের পার্থক্য 0.62 (সংবেদনশীল) থেকে 4.45 গ্রাম (প্রতিরোধী) পর্যন্ত ছিল। পরীক্ষার দুটি প্রতিলিপিতে পরিলক্ষিত মানগুলির মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক ছিল (রোগের তীব্রতার স্কোরের জন্য 0.51, উদ্ভিদের ওজনের জন্য P = 0.00017 এবং 0.61, P < 0.0001) এবং এই দুটি পরামিতির মধ্যে (− 0.59 এবং − 0.77, P < 0.0001) একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক ছিল। পরীক্ষার দুটি প্রতিলিপিতে পরিলক্ষিত মানগুলির মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক ছিল (রোগের তীব্রতার স্কোরের জন্য 0.51, উদ্ভিদের ওজনের জন্য P = 0.00017 এবং 0.61, P < 0.0001) এবং এই দুটি পরামিতির মধ্যে (− 0.59 এবং − 0.77, P < 0.0001)। Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 দিন 0,00017 и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,001)। পরীক্ষার দুটি পুনরাবৃত্তিতে পরিলক্ষিত মানগুলির মধ্যে (রোগের তীব্রতার স্কোরের জন্য 0.51, উদ্ভিদের ওজনের জন্য P = 0.00017 এবং 0.61, P < 0.0001), এবং এই দুটি পরামিতির মধ্যে (- 0.59 এবং -0.77, P < 0.0001) 0.0001) একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক পাওয়া গেছে।在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为,P=0.51 0.00017，植物重量为0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77, P < 0.0001)在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 评 分丈 5 ， p = 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p < 0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（- 0.59 和–59 和-59和– ০.৫৯ 和- 0.77, P < 0.0001)। নাম масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001। ডুপ্লিকেট (রোগের তীব্রতা স্কোর 0.51, P = 0.00017 এবং উদ্ভিদের ওজন 0.61, P < 0.0001) এবং এই দুটি পরামিতি (-0.59 এবং -0 .0001) 0.77, P<0.0001 এর মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক ছিল। ).সংবেদনশীল উদ্ভিদের ক্ষেত্রে দেখা যায় এমন সাধারণ লক্ষণগুলির মধ্যে রয়েছে "মেষপালকের ধনুকের" কাঠামোর মতো কাণ্ডের কাঁটা এবং মোচড়, তারপরে কমলা/গোলাপী স্পোরোজয়েট সহ ডিম্বাকৃতির ক্ষত (পরিপূরক চিত্র 1)। Lanr1 (83A:476 এবং Tanjil) এবং AnMan (Mandelup) জিন বহনকারী অস্ট্রেলিয়ান অ্যাসিয়েশনগুলি মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, 0.0331 এবং 0.0036)। "প্রতিরোধী" Lanr1 এবং/অথবা AnMan অ্যালিল বহনকারী কিছু রেখা রোগের লক্ষণ দেখায়।
মজার বিষয় হল, "প্রতিরোধী" মার্কার অ্যালিলের অভাব থাকা কয়েকটি NLL লাইনে উচ্চ স্তরের অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের (Lanr1 বা AnMan জিনোটাইপের তুলনায় তুলনীয় বা উচ্চতর) প্রকাশ পেয়েছে, যেমন বোরেগিন (উভয় প্যারামিটারের জন্য P মান < 0.0001), বোজার (স্কোরের জন্য P মান < 0.0001 এবং উদ্ভিদের ওজনের জন্য 0.001) এবং জনসংখ্যা B-549/79b (স্কোরের জন্য P মান < 0.0001 এবং ওজনের জন্য অ-উল্লেখযোগ্য)। মজার বিষয় হল, "প্রতিরোধী" মার্কার অ্যালিলের অভাব থাকা কয়েকটি NLL লাইনে উচ্চ স্তরের অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের (Lanr1 বা AnMan জিনোটাইপের তুলনায় তুলনীয় বা উচ্চতর) প্রকাশ পেয়েছে, যেমন বোরেগিন (উভয় প্যারামিটারের জন্য P মান < 0.0001), বোজার (স্কোরের জন্য P মান < 0.0001 এবং উদ্ভিদের ওজনের জন্য 0.001) এবং জনসংখ্যা B-549/79b (স্কোরের জন্য P মান < 0.0001 এবং ওজনের জন্য অ-উল্লেখযোগ্য)। Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень уровень увости (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоиех парамеч), ​​বোরজাম 0,0001 দিন এবং 0,001 দিন массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы)। মজার বিষয় হল, 'প্রতিরোধী' মার্কার অ্যালিল না থাকা বেশ কয়েকটি NLL লাইন অ্যানথ্রাকনোজের প্রতি উচ্চ স্তরের প্রতিরোধ দেখিয়েছে (Lanr1 বা AnMan জিনোটাইপের সাথে তুলনীয় বা তার চেয়ে বেশি), যেমন বোরেজিন (উভয় প্যারামিটারের জন্য P মান < 0.0001), বোজার (মূল্যায়নের জন্য P মান < 0.0001 এবং উদ্ভিদের ওজনের জন্য 0.001) এবং জনসংখ্যা B-549/79b (মূল্যায়নের জন্য P মান < 0.0001 এবং ওজনের জন্য উল্লেখযোগ্য নয়)।有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗怗性基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P值<0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不漉。 এটা মজার যে কিছু NLL সিস্টেম যাদের কোন "অ্যান্টিজেনিক" মার্কার নেই তারা উচ্চ অনুভূমিক প্রতিরোধ ক্ষমতা দেখায় (Lanr1 বা AnMan জিনের সমতুল্য বা উচ্চতর), যেমন Boregine (উভয় পরামিতি P < 0.0001), Bojar (P মান < 0.0001, উদ্ভিদের ওজন 0.001) এবং স্ট্রেন B-549/79b (P মান < 0.0001, ওজন উল্লেখযোগ্য নয়)। Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллей «резистентности», показали высокие уровни устоистоисти (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001), Bojar (<значе,010сте значесте) 0,001) এবং популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна)। মজার বিষয় হল, কিছু NLL লাইনে 'প্রতিরোধ' চিহ্নিতকারী অ্যালিল নেই, যেখানে অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের উচ্চ মাত্রা দেখা গেছে (Lanr1 বা AnMan জিনোটাইপের সাথে তুলনীয় বা তার চেয়ে বেশি), যেমন বোরেগিন (উভয় প্যারামিটারের জন্য P মান <0.0001), বোজার (P-মান < 0.0001, উদ্ভিদের ওজন 0.001) এবং জনসংখ্যা B-549/79b (P-মান < 0.0001, ওজন উল্লেখযোগ্য নয়)।এই ঘটনাটি প্রতিরোধের একটি নতুন জেনেটিক উৎসের সম্ভাবনার ইঙ্গিত দেয়, যা মার্কার জিনোটাইপ এবং রোগের ফেনোটাইপের মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্কের অভাবকে ব্যাখ্যা করে (~0.42 থেকে ~0.98 পর্যন্ত P মান)। সুতরাং, কোলমোগোরভ-স্মিরনভ পরীক্ষায় দেখা গেছে যে অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের তথ্য প্রায় স্বাভাবিকভাবে স্কোর (P-মান 0.25 এবং 0.11) এবং উদ্ভিদ ভর (P-মান 0.47 এবং 0.55) এর জন্য বিতরণ করা হয়েছিল, যা আমি অনুমান করি যে Lanr1 এবং AnMan এর চেয়ে বেশি অ্যালিল জড়িত।
অ্যানথ্রাকনোজ রেজিস্ট্যান্স স্ক্রিনিংয়ের ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, ট্রান্সক্রিপ্টোম বিশ্লেষণের জন্য 4টি লাইন নির্বাচন করা হয়েছিল: 83A:476, বোরেজিন, ম্যান্ডেলুপ এবং জনসংখ্যা 22660। এই লাইনগুলি RNA সিকোয়েন্সিং দ্বারা ইনোকুলেশন পরীক্ষায় অ্যানথ্রাক্স প্রতিরোধের জন্য পুনরায় পরীক্ষা করা হয়েছিল, তবে শর্ত থাকে যে সেগুলি পূর্ববর্তী পরীক্ষার মতোই ছিল। স্কোর মানগুলি নিম্নরূপ ছিল: বোরেগিন (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), ম্যান্ডেলুপ (3.82 ± 1.42) এবং জনসংখ্যা 22660 (6.11 ± 1.29)।
Illumina NovaSeq 6000 প্রোটোকল প্রতি নমুনায় গড়ে 40.5 Mread জোড়া অর্জন করেছে (29.7 থেকে 54.4 Mreads) (পরিপূরক সারণী S3)। রেফারেন্স ক্রম অনুসারে সারিবদ্ধকরণের স্কোর 75.5% থেকে 88.6% পর্যন্ত। জৈবিক প্রতিলিপিগুলির মধ্যে পরীক্ষামূলক রূপগুলির মধ্যে পঠন গণনার ডেটার গড় পারস্পরিক সম্পর্ক 0.812 থেকে 0.997 (গড় 0.959) পর্যন্ত ছিল। বিশ্লেষণ করা ৩৫,১৭০টি জিনের মধ্যে, ২৯১৭টিতে কোনও প্রকাশ পাওয়া যায়নি এবং বাকি ৪৭৮৫টি জিন নগণ্য স্তরে প্রকাশিত হয়েছিল (বেস গড় < ৫)। বিশ্লেষণ করা ৩৫,১৭০টি জিনের মধ্যে, ২৯১৭টিতে কোনও প্রকাশ পাওয়া যায়নি এবং বাকি ৪৭৮৫টি জিন নগণ্য স্তরে প্রকাশিত হয়েছিল (বেস গড় < ৫)। Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на незвналяли генов среднее <5)। বিশ্লেষণ করা ৩৫,১৭০টি জিনের মধ্যে, ২৯১৭টিতে কোনও প্রকাশ দেখা যায়নি, এবং বাকি ৪৭৮৫টি জিনকে নগণ্য স্তরে প্রকাশ করা হয়েছিল (বেস গড় <৫)।在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 个基因的表达可以忽略不计ﹰ 5)।৩৫,১৭০ IS 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались ( значение <5)। বিশ্লেষণ করা ৩৫,১৭০টি জিনের মধ্যে ২৯১৭টি প্রকাশ করা হয়নি এবং বাকি ৪৭৮৫টি জিনের প্রকাশ নগণ্য ছিল (বেস গড় <৫)।সুতরাং, পরীক্ষা চলাকালীন প্রকাশিত জিনের সংখ্যা (ভিত্তি গড় ≥ 5) ছিল 27,468 (78.1%) (পরিপূরক সারণী S4)।
প্রথম টাইম পয়েন্ট থেকে, সমস্ত NLL লাইন ট্রান্সক্রিপ্টোম পুনঃপ্রোগ্রাম করে C. lupini (স্ট্রেন Col-08) এর টিকাদানের প্রতিক্রিয়া জানায় (সারণী 1), তবে, লাইনগুলির মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য লক্ষ্য করা গেছে। সুতরাং, প্রতিরোধ রেখা 83A:476 (Lanr1 জিন বহনকারী) প্রথম টাইম পয়েন্টে (6 hpi) উল্লেখযোগ্য ট্রান্সক্রিপ্টোম পুনঃপ্রোগ্রামিং দেখিয়েছে, এই সময়ে অন্যান্য টাইম পয়েন্টের তুলনায় বিচ্ছিন্ন আপ- এবং ডাউন-জিনের সংখ্যা 31-69 গুণ বৃদ্ধি পেয়েছে। এছাড়াও, এই শিখরটি স্বল্পস্থায়ী ছিল, কারণ দ্বিতীয় টাইম পয়েন্টে (12 hpi) মাত্র কয়েকটি জিনের প্রকাশ উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত ছিল। মজার বিষয় হল, বোরেগিন, যা গ্রাফ্ট পরীক্ষায় উচ্চ স্তরের প্রতিরোধ দেখিয়েছিল, পরীক্ষা চলাকালীন এত বিশাল ট্রান্সক্রিপশনাল পুনঃপ্রোগ্রামিংয়ের মধ্য দিয়ে যায়নি। তবে, ডিফারেন্সিয়াললি এক্সপ্রেসড জিনের (DEG) সংখ্যা বোরেগিনের জন্য এবং 12 HPI তে 83A:476 এর জন্য একই ছিল। ম্যান্ডেলুপ এবং জনসংখ্যা ২২৬৬০ উভয়ই শেষ সময় বিন্দুতে (৪৮ লি/সেকেন্ড) DEG-এর সর্বোচ্চ স্তর দেখিয়েছে, যা প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ায় আপেক্ষিক বিলম্বের ইঙ্গিত দেয়।
যেহেতু 83A:476 অন্যান্য সকল লাইনের তুলনায় 6 HPI তে C. lupini-এর প্রতিক্রিয়ায় ব্যাপক ট্রান্সক্রিপ্টোম পুনঃপ্রোগ্রামিং করেছে, এই সময়ে পর্যবেক্ষণ করা DEG-গুলির প্রায় 91% বংশ-নির্দিষ্ট ছিল (চিত্র 1)। তবে, অধ্যয়ন লাইনগুলির মধ্যে প্রাথমিক প্রতিক্রিয়াগুলিতে কিছু ওভারল্যাপ ছিল, কারণ বোরেগিন, ম্যান্ডেলুপ এবং জনসংখ্যা 22660-এ যথাক্রমে 68.5%, 50.9% এবং 52.6% DEG নির্দিষ্ট সময়ে 83A:476-তে পাওয়া DEG-গুলির সাথে ওভারল্যাপ হয়েছিল। তবে, এই DEG-গুলি বর্তমানে 83A:476 ব্যবহার করে সনাক্ত করা সমস্ত DEG-এর একটি ছোট ভগ্নাংশ (0.97–1.70%) ছিল। এছাড়াও, এই সময়ে সমস্ত লাইন থেকে ১১টি DEG সুসংগত ছিল (পরিপূরক সারণী S4-S6), যার মধ্যে রয়েছে উদ্ভিদ প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ার সাধারণ উপাদান: লিপিড ট্রান্সফার প্রোটিন (TanjilG_32225), এন্ডোগ্লুকান-1,3-β-গ্লুকোসাইড এনজাইম (TanjilG_23384), দুটি স্ট্রেস-ইনডুসিবল প্রোটিন যেমন SAM22 (TanjilG_31528 এবং TanjilG_31531), বেসিক ল্যাটেক্স প্রোটিন (TanjilG_32352), এবং দুটি গ্লাইসিন-সমৃদ্ধ স্ট্রাকচারাল কোষ প্রাচীর প্রোটিন (TanjilG_19701 এবং TanjilG_19702)। 83A:476 এবং বোরেগিনের মধ্যে 24 HPI (মোট 16-38% DEG) এবং ম্যান্ডেলুপ এবং জনসংখ্যা 22660 এর মধ্যে 48 HPI (মোট 14-20% DEG) এর মধ্যে ট্রান্সক্রিপ্টোম প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যে তুলনামূলকভাবে উচ্চ ওভারল্যাপ ছিল।
ভেন ডায়াগ্রামে কোলেটোট্রিচাম লুপিনি (পোল্যান্ডের উইয়ারজেনিসের লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত স্ট্রেন কোল-০৮) দিয়ে টিকা দেওয়া সরু-পাতার লুপিন (NLL) লাইনে ডিফারেনশিয়ালি এক্সপ্রেসড জিন (DEG) এর সংখ্যা দেখানো হয়েছে। বিশ্লেষণ করা NLL লাইনগুলি হল: 83A:476 (প্রতিরোধী, Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), বোরেজিন (প্রতিরোধী, জেনেটিক পটভূমি অজানা), ম্যান্ডেলুপ (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, AnMan অ্যালিল বহনকারী) এবং জনসংখ্যা 22660 (খুব সংবেদনশীল)। সংক্ষেপণ hpi টিকা দেওয়ার পরের কয়েক ঘন্টা বোঝায়। গ্রাফটি সহজ করার জন্য শূন্য মানগুলি সরানো হয়েছে।
৬ hpi-তে অতি-প্রকাশিত জিনের সেটটি ক্যানোনিকাল R জিন ডোমেনের উপস্থিতির জন্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (পরিপূরক সারণী S7)। এই গবেষণায় শুধুমাত্র 83A:476-তে NBS-LRR ডোমেন সহ ক্লাসিক রোগ প্রতিরোধী জিনের ট্রান্সক্রিপ্টোম ইন্ডাকশন প্রকাশ পেয়েছে। এই সেটটিতে একটি TIR-NBS-LRR জিন (tanjilg_05042), পাঁচটি CC-NBS-LRR জিন (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, এবং tanjilg_16162), এবং চারটি NBS-LR, Tanjilg_16162), এবং চারটি NBS-LRRE (tanjilg_16162) এবং চারটি NBS-LRR (tanjilg_16162) ছিল। এই সমস্ত জিনের ক্যানোনিকাল ডোমেনগুলি সংরক্ষিত ক্রমগুলিতে সাজানো রয়েছে। NBS-LRR ডোমেন জিন ছাড়াও, 6 hpi তে বেশ কয়েকটি RLL কাইনেস সক্রিয় করা হয়েছিল, যথা বোরেগিনে একটি (TanjilG_19877), ম্যান্ডেলুপে দুটি (TanjilG_07141 এবং TanjilG_19877) এবং 22660 জনসংখ্যায় (TanjilG_09014 এবং TanjilG_10361) এবং 83A 27:476 তে দুটি।
সি. লুপিনি (স্ট্রেন কোল-০৮) টিকা দেওয়ার প্রতিক্রিয়ায় উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত অভিব্যক্তিযুক্ত জিনগুলিকে জিন অন্টোলজি (জিও) সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণের শিকার করা হয়েছিল (পরিপূরক সারণী S8)। সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত জৈবিক প্রক্রিয়া শব্দটি ছিল "GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া" যা 16টির মধ্যে 6টিতে (সময় × রেখা) উচ্চ তাৎপর্য (P মান < 0.001) (চিত্র 2) সহ উপস্থিত হয়েছিল। সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত জৈবিক প্রক্রিয়া শব্দটি ছিল "GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া" যা 16টির মধ্যে 6টিতে (সময় × রেখা) উচ্চ তাৎপর্য (P মান < 0.001) (চিত্র 2) সহ উপস্থিত হয়েছিল। Наиболее часто часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответный отвелвякой», из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2)। সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত জৈবিক প্রক্রিয়া শব্দটি ছিল 'GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া', যা উচ্চ তাৎপর্য (P মান < 0.001) সহ 16টির মধ্যে 6টিতে (সময় × বংশ) সংমিশ্রণে উপস্থিত হয়েছিল (চিত্র 2)।最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间×翇翇程个中, 具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）। সবচেয়ে প্রতিনিধিত্বমূলক জৈবিক প্রক্রিয়া শব্দটি হল "GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া", যা 16টি (时间×线) সংমিশ্রণের মধ্যে 6টিতে দেখা যায়, যার উচ্চ তাৎপর্য রয়েছে (P মান < 0.001) (图2)। Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া», который появленным который появленным комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2)। সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত জৈবিক প্রক্রিয়া শব্দটি ছিল 'GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া', যা 16টির মধ্যে 6টিতে (সময় × রেখা) উচ্চ তাৎপর্য সহ উপস্থিত হয়েছিল (P মান < 0.001) (চিত্র 2)।এই শব্দটি 83A-তে দুটি সময় বিন্দুতে অতিরিক্তভাবে উপস্থাপন করা হয়েছিল: 476 এবং বোরেগিন (6 এবং 24 hpi) এবং ম্যান্ডেলুপ এবং জনসংখ্যা 22660-তে (যথাক্রমে 12 এবং 6 hpi) এক সময়ে। এটি একটি প্রত্যাশিত ফলাফল, যা প্রতিরোধী রেখার অ্যান্টিফাঙ্গাল প্রতিক্রিয়া তুলে ধরে। এছাড়াও, 83A:476 "GO:0055114 রেডক্স প্রক্রিয়া" শব্দটি দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা অক্সিডেটিভ বার্স্টের সাথে সম্পর্কিত জিনগুলিকে দ্রুত প্ররোচিত করে C. lupini-তে প্রতিক্রিয়া জানিয়েছে, যা একটি নির্দিষ্ট প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া নির্দেশ করে, যেখানে বোরেগিন 'GO' শব্দটির সাথে সম্পর্কিত নির্দিষ্ট প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া প্রকাশ করেছে। :0006950 স্ট্রেস রেসপন্স"। পপুলেশন 22660 সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের সাথে জড়িত অনুভূমিক প্রতিরোধ প্রতিক্রিয়া সক্রিয় করে, "GO:0016104 ট্রাইটারপিন জৈব সংশ্লেষণের প্রক্রিয়া" এবং "GO:0006722 ট্রাইটারপিন বিপাকের প্রক্রিয়া" (উভয় পদ একই জিনের সেটের অন্তর্গত) পদগুলির অত্যধিক সংখ্যা তুলে ধরে, GO পদ সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণের ফলাফল বিবেচনা করে, ম্যান্ডেলুপ বিক্রিয়ার স্থিতিশীলতা বোরেজিন এবং জনসংখ্যা 22660 এর মধ্যে ছিল। এছাড়াও, প্রাথমিক বিক্রিয়া 83A:476 (6 hpi) এবং বিলম্বিত বিক্রিয়া ম্যান্ডেলুপ এবং জনসংখ্যা 22660-এ GO:0015979 'সালোকসংশ্লেষণ' এবং অন্যান্য সম্পর্কিত জৈবিক প্রক্রিয়া অন্তর্ভুক্ত রয়েছে।
অ্যানথ্রাক্স লুপিন (১৯৯৯ সালে পোল্যান্ডের উইয়ারঝেনিসের লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত কল-০৮ স্ট্রেন) দিয়ে টিকা দেওয়া সংকীর্ণ-পাতার লুপিন (NLL) এর ট্রান্সক্রিপ্টোম প্রতিক্রিয়ার সময় ডিফারেনশিয়াললি এক্সপ্রেসড জিন অন্টোলজি পদগুলি অত্যন্ত অতিরঞ্জিত। বিশ্লেষণ করা NLL লাইনগুলি ছিল: 83A:476 (প্রতিরোধী, সমজাতীয় Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), বোরেজিন (প্রতিরোধী, অজানা জেনেটিক পটভূমি), ম্যান্ডেলুপ (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, সমজাতীয় AnMan অ্যালিল বহনকারী) এবং জনসংখ্যা 22660 (সংবেদনশীল)।
যেহেতু এই গবেষণার লক্ষ্য ছিল অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধে অবদান রাখে এমন জিন সনাক্ত করা, তাই GO “GO: 0006952 প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়া” এবং “GO: 0055114 Redox প্রক্রিয়া” পদগুলিতে নির্ধারিত জিনগুলিকে কাট-অফ দিয়ে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল কারণ বেসলাইন মানে ≥ 30 কমপক্ষে একটি লাইন সহ। × সময় বিন্দু log2 (ভাঁজ পরিবর্তন) এর পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য মানগুলিকে একত্রিত করে। এই মানদণ্ড পূরণকারী জিনের সংখ্যা ছিল GO:0006952 এর জন্য 65 এবং GO:0055114 এর জন্য 524।
83A:476 দুটি DEG শিখর প্রকাশ করেছে যা GO:0006952 শব্দটি দিয়ে টীকাযুক্ত, প্রথমটি প্রতি ইঞ্চিতে 6 জিন (64 জিন, উপরে এবং নীচের নিয়ন্ত্রণ) এবং দ্বিতীয়টি প্রতি ইঞ্চিতে 24 জিন (15 জিন, কেবল উপরে নিয়ন্ত্রণ)। বোরেগিন আরও দেখিয়েছেন যে GO:0006952 একই সময়ে শীর্ষে পৌঁছেছে, তবে কম DEG (11 এবং 8) এবং অগ্রাধিকারমূলক সক্রিয়করণ সহ। ম্যান্ডেলূপ 12 এবং 48 HPI-তে GO:0006952-এর দুটি শীর্ষ দেখিয়েছে, উভয়ই 12 জিন বহন করে (প্রথমটি সক্রিয় জিন সহ, এবং দ্বিতীয়টি কেবল দমনকারী জিন সহ), যেখানে 6 HPI (13 জিন) তে 22660 জনসংখ্যার বৃদ্ধির শীর্ষ নিয়ন্ত্রণের প্রাধান্য বেশি ছিল। এটি লক্ষ করা উচিত যে এই শিখরগুলিতে GO:0006952 DEG-এর 96.4%-এর একই ধরণের প্রতিক্রিয়া ছিল (উপরে বা নীচে), যা জড়িত জিনের সংখ্যার পার্থক্য থাকা সত্ত্বেও প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়াগুলিতে একটি উল্লেখযোগ্য ওভারল্যাপ নির্দেশ করে। GO:0006952 শব্দটির সাথে সম্পর্কিত ক্রমগুলির বৃহত্তম গ্রুপটি স্টারভেশন স্ট্রেস-অ্যাসোসিয়েটেড মেসেজ প্রোটিন 22 (SAM22-এর মতো) এনকোড করে, যা ক্লাস 10 প্যাথোজেনেসিস-সম্পর্কিত প্রোটিন (PR-10) প্রোটিন ক্লেড এবং কোর প্রোটিন ল্যাটেক্সের অন্তর্গত। অনুরূপ (MLP-এর মতো) প্রোটিন) প্রোটিন (চিত্র 3)। দুটি গ্রুপের প্রকাশের প্রকৃতি এবং প্রতিক্রিয়ার দিকের মধ্যে পার্থক্য ছিল। SAM22-এর মতো প্রোটিন এনকোডিং জিনগুলি প্রাথমিক সময় বিন্দুতে (6 বা 12 hpi) সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং উল্লেখযোগ্য আবেশন দেখিয়েছিল এবং পরীক্ষার শেষে সাধারণত প্রতিক্রিয়াহীন ছিল (48 hpi), যেখানে MLP-এর মতো প্রোটিনগুলি 6 hpi-তে সমন্বয় দেখিয়েছিল। hpi। 83A:476 এবং ম্যান্ডেলুপ 48 hp/in-এ, প্রায় সমস্ত অন্যান্য ডেটা পয়েন্ট প্রতিক্রিয়াশীল ছিল না। এছাড়াও, SAM22-সদৃশ প্রোটিন জিনের এক্সপ্রেশন প্রোফাইলের পার্থক্যগুলি অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের পরিবর্তনশীলতা পর্যবেক্ষণ করে, কারণ বেশি প্রতিরোধী রেখাগুলিতে বেশি সংবেদনশীল জিনের তুলনায় এই জিনগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্ররোচিত করার জন্য বেশি সময় বিন্দু ছিল। আরেকটি LlR18A/B-সদৃশ PR-10 জিন SAM22-সদৃশ প্রোটিন জিনের সাথে খুব অনুরূপ এক্সপ্রেশন প্যাটার্ন দেখিয়েছিল।
জৈবিক প্রক্রিয়া শব্দ "GO:0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া" এর প্রধান উপাদান এবং Lanr1 এবং AnMan অ্যালিলের প্রার্থী জিনের প্রকাশের ধরণগুলি চিহ্নিত করা হয়েছিল। Log2 স্কেল একই সময়ে ইনোকুলেটেড (Colletotrichum lupini, স্ট্রেন Col-08, লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত, Wizhenica, Poland, 1999) এবং নিয়ন্ত্রণ (sham-inoculated) উদ্ভিদের মধ্যে log2 মান (ভাঁজ পরিবর্তন) প্রতিনিধিত্ব করে। নিম্নলিখিত সংকীর্ণ পাতার লুপিন রেখাগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল: 83A:476 (প্রতিরোধী, সমজাতীয় Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), Boregine (প্রতিরোধী, জেনেটিক পটভূমি অজানা), Mandelup (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, সমজাতীয় AnMan অ্যালিল বহনকারী), এবং জনসংখ্যা 22660 (সংবেদনশীল)।
এছাড়াও, RNA-seq প্রার্থী জিন Lanr1 (TanjilG_05042) এবং AnMan (TanjilG_12861) এর এক্সপ্রেশন প্রোফাইল মূল্যায়ন করা হয়েছিল (চিত্র 3)। TanjilG_05042 জিনটি শুধুমাত্র প্রথম টাইম পয়েন্টে (6 hpi) 83A:476 তে একটি উল্লেখযোগ্য প্রতিক্রিয়া (সক্রিয়করণ) দেখিয়েছে, যেখানে TanjilG_12861 ম্যান্ডেলুপে শুধুমাত্র দুটি টাইম পয়েন্টে উল্লেখযোগ্য ছিল: 6 hpi (ডাউন রেগুলেশন) এবং 24 hpi (6 hpi)। সহ।) সামঞ্জস্যযোগ্য)।
GO:0055114 "রেডক্স প্রক্রিয়া" শব্দটিতে সবচেয়ে বেশি প্রকাশিত জিন ছিল সাইটোক্রোম P450 প্রোটিন এবং পেরোক্সিডেস এনকোডিং করা জিন (চিত্র 4)। 6 HPI তে 83A:476 থেকে বিচ্ছিন্ন নমুনাগুলির জন্য, সর্বাধিক বা সর্বনিম্ন log2 (ভাঁজ পরিবর্তন) মান (86.6% জিনের জন্য) সাধারণত ইনোকুলেটেড এবং নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদের মধ্যে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, যা ইনোকুলেটেড লিঙ্গের প্রতি এই জিনোটাইপের উচ্চ প্রতিক্রিয়া তুলে ধরে। 83A:476 সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য GO দেখিয়েছে: 0055114 DEG 6 hpi (503 জিন) এ, যখন বাকি লাইনগুলি 48 hpi (বোরেজিন, 31 জিন; ম্যান্ডেলুপ, 85 জিন; এবং জনসংখ্যা 22660, 78 জিন)) এ। GO:0055114 পরিবারের বেশিরভাগ জিনে, টিকাদানের প্রতি দুই ধরণের প্রতিক্রিয়া (সক্রিয়করণ এবং বাধা) পরিলক্ষিত হয়েছিল। মজার বিষয় হল, ম্যান্ডেলুপে ৪৮ এইচপি-তে GO: 0055114 শব্দটির জন্য ৯৭.৬% পর্যন্ত DEG চিহ্নিত করা হয়েছে। এই পর্যবেক্ষণগুলি থেকে বোঝা যায় যে, উল্লেখযোগ্যভাবে ছোট স্কেল (অর্থাৎ, পরিবর্তিত রেডক্স জিনের সংখ্যা, ৮৫ বনাম ৫০৩) সত্ত্বেও, ম্যান্ডেলুপের অ্যানথ্রাকনোজের প্রতি বিলম্বিত ট্রান্সক্রিপ্টোম প্রতিক্রিয়ার ধরণ ৮৩এ:৪৭৬-এর প্রাথমিক প্রতিক্রিয়ার অনুরূপ। বোরেজিন এবং জনসংখ্যা ২২৬৬০-এ, এই অভিসৃতি যথাক্রমে ৫১.৬% এবং ৭৫.৬%-এ কম।
জৈবিক প্রক্রিয়া "GO:0055114 Redox প্রক্রিয়া" শব্দটির প্রধান উপাদানগুলির প্রকাশের ধরণগুলি প্রকাশিত হয়েছিল। Log2 স্কেল একই সময়ে ইনোকুলেটেড (Colletotrichum lupini, স্ট্রেন Col-08, লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত, Wizhenica, Poland, 1999) এবং নিয়ন্ত্রণ (sham-inoculated) উদ্ভিদের মধ্যে log2 মান (ভাঁজ পরিবর্তন) প্রতিনিধিত্ব করে। নিম্নলিখিত সংকীর্ণ পাতার লুপিন রেখাগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল: 83A:476 (প্রতিরোধী, সমজাতীয় Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), Boregine (প্রতিরোধী, জেনেটিক পটভূমি অজানা), Mandelup (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, সমজাতীয় AnMan অ্যালিল বহনকারী), এবং জনসংখ্যা 22660 (সংবেদনশীল)।
83A:476 C. lupini (স্ট্রেন Col-08) দিয়ে টিকা দেওয়ার প্রতি ট্রান্সক্রিপ্টমিক প্রতিক্রিয়াগুলিতে GO:0015979 "সালোকসংশ্লেষণ" এবং অন্যান্য সম্পর্কিত জৈবিক প্রক্রিয়াগুলির সাথে সম্পর্কিত জিনগুলির সমন্বিত নীরবতাও অন্তর্ভুক্ত ছিল (চিত্র 5)। এই GO:0015979 DEG সেটে 105টি জিন ছিল যা 83A:476 এ 6 hpi তে উল্লেখযোগ্যভাবে দমন করা হয়েছিল। এই উপসেটে, 22660 জনসংখ্যার মধ্যে 37টি জিন 48 HPI তে এবং একই সময়ে 35টি ডাউনরেগুলেটেড ছিল, যার মধ্যে উভয় জিনোটাইপের জন্য সাধারণ 19টি DEG রয়েছে। GO: 0015979 শব্দটির সাথে সম্পর্কিত কোনও DEG কোনও সংমিশ্রণে উল্লেখযোগ্যভাবে সক্রিয় হয়নি (লাইন x সময়)।
জৈবিক প্রক্রিয়া "GO:0015979 সালোকসংশ্লেষণ" শব্দটির প্রধান উপাদানগুলির প্রকাশের ধরণগুলি প্রকাশিত হয়েছিল। Log2 স্কেল একই সময়ে ইনোকুলেটেড (Colletotrichum lupini, স্ট্রেন Col-08, লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত, Wizhenica, Poland, 1999) এবং নিয়ন্ত্রণ (sham-inoculated) উদ্ভিদের মধ্যে log2 মান (ভাঁজ পরিবর্তন) প্রতিনিধিত্ব করে। নিম্নলিখিত সংকীর্ণ পাতার লুপিন রেখাগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল: 83A:476 (প্রতিরোধী, সমজাতীয় Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), Boregine (প্রতিরোধী, জেনেটিক পটভূমি অজানা), Mandelup (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, সমজাতীয় AnMan অ্যালিল বহনকারী), এবং জনসংখ্যা 22660 (সংবেদনশীল)।
ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণের ফলাফলের উপর ভিত্তি করে এবং সম্ভবত প্যাথোজেনিক ছত্রাকের বিরুদ্ধে প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ায় জড়িত থাকার উপর ভিত্তি করে, সাতটি জিনের এই সেটটি রিয়েল-টাইম পিসিআর (পরিপূরক সারণী S9) দ্বারা এক্সপ্রেশন প্রোফাইলের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য নির্বাচিত হয়েছিল।
নিয়ন্ত্রণ (নকল) উদ্ভিদের তুলনায় সমস্ত অধ্যয়নকৃত রেখা এবং সময় বিন্দুতে (পরিপূরক সারণী S10, S11) সম্ভাব্য প্রোটিন জিন TanjilG_10657 উল্লেখযোগ্যভাবে প্ররোচিত হয়েছিল। এছাড়াও, TanjilG_10657 এর এক্সপ্রেশন প্রোফাইল পরীক্ষা চলাকালীন সমস্ত রেখার জন্য ক্রমবর্ধমান প্রবণতা দেখিয়েছে। জনসংখ্যা 22660 টিকাদানের প্রতি TanjilG_10657 এর সর্বোচ্চ সংবেদনশীলতা দেখিয়েছে 114-গুণ সক্রিয়করণ এবং সর্বোচ্চ আপেক্ষিক এক্সপ্রেশন স্তর (4.4 ± 0.4) 24 HPI (চিত্র 6a) এ। PR10 LlR18A প্রোটিন জিন TanjilG_27015 সমস্ত রেখা এবং সময় বিন্দুতে সক্রিয়করণও দেখিয়েছে, বেশিরভাগ ডেটা পয়েন্টে পরিসংখ্যানগত তাৎপর্য রয়েছে (চিত্র 6b)। TanjilG_10657 এর অনুরূপ, TanjilG_27015 এর সর্বোচ্চ আপেক্ষিক প্রকাশের মাত্রা 22660 টিকা দেওয়া জনসংখ্যার মধ্যে 24 HPI (19.5 ± 2.4) এ পরিলক্ষিত হয়েছিল। Boregine 6 hpi (চিত্র 6c) ব্যতীত সমস্ত লাইন এবং সমস্ত সময় বিন্দুতে অ্যাসিড এন্ডোচিটিনেস জিন TanjilG_04706 উল্লেখযোগ্যভাবে আপরেগুলেটেড ছিল। এটি প্রথম সময় বিন্দুতে (6 HPI) 83A:476 (10.5 গুণ) এ দৃঢ়ভাবে প্ররোচিত হয়েছিল এবং অন্যান্য লাইনে (6.6-7.5 গুণ) মাঝারিভাবে বৃদ্ধি পেয়েছিল। পরীক্ষা চলাকালীন, TanjilG_04706 এর প্রকাশ 83A:476 এবং Boregine তে একই স্তরে ছিল, যেখানে Mandelup এবং Population 22660 তে এটি উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, তুলনামূলকভাবে উচ্চ মান (যথাক্রমে 5.9 ± 1.5 এবং 6.2 ± 1.5) এ পৌঁছেছে। এন্ডোগ্লুকান-১,৩-β-গ্লুকোসিডেস-সদৃশ জিন TanjilG_23384 জনসংখ্যা 22660 (চিত্র 6d) ব্যতীত সকল লাইনে প্রথম দুটি সময় বিন্দুতে (6 এবং 12 hpi) উচ্চ সক্রিয়তা দেখিয়েছে। TanjilG_23384 এর সর্বোচ্চ আপেক্ষিক প্রকাশের মাত্রা ম্যান্ডেলুপ (2.7 ± 0.3) এবং 83A:476 (1.5 ± 0.1) তে দ্বিতীয় সময় বিন্দুতে (12 hpi) পরিলক্ষিত হয়েছে। 24 HPI তে, TanjilG_23384 প্রকাশ সমস্ত অধ্যয়নকৃত লাইনে তুলনামূলকভাবে কম ছিল (0.04 ± 0.009 থেকে 0.44 ± 0.12 পর্যন্ত)।
পরিমাণগত পিসিআর দ্বারা প্রকাশিত নির্বাচিত জিনের (ag) এক্সপ্রেশন প্রোফাইল। 6, 12 এবং 24 সংখ্যাগুলি টিকা দেওয়ার কয়েক ঘন্টা পরে প্রতিনিধিত্ব করে। LanDExH7 এবং LanTUB6 জিনগুলি স্বাভাবিকীকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল এবং LanTUB6 আন্তঃ-সিরিজ ক্রমাঙ্কনের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। ত্রুটি বারগুলি তিনটি জৈবিক প্রতিলিপির উপর ভিত্তি করে স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি উপস্থাপন করে, যার প্রতিটি তিনটি প্রযুক্তিগত প্রতিলিপির গড়। টিকা দেওয়া (কোলেটোট্রিচাম লুপিনি, স্ট্রেন কোল-০৮, ১৯৯৯ সালে পোল্যান্ডের উইয়ারজেনিকায় লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত) এবং নিয়ন্ত্রণ (মক-টিকা দেওয়া) উদ্ভিদের মধ্যে প্রকাশের মাত্রার পার্থক্যের পরিসংখ্যানগত তাৎপর্য ডেটা পয়েন্টের উপরে চিহ্নিত করা হয়েছে (*P মান < 0.05, **P মান ≤ 0.01, ***P মান ≤ 0.001)। টিকা দেওয়া (কোলেটোট্রিচাম লুপিনি, স্ট্রেন কোল-০৮, ১৯৯৯ সালে পোল্যান্ডের উইয়ারজেনিকায় লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত) এবং নিয়ন্ত্রণ (মক-টিকা দেওয়া) উদ্ভিদের মধ্যে প্রকাশের মাত্রার পার্থক্যের পরিসংখ্যানগত তাৎপর্য ডেটা পয়েন্টের উপরে চিহ্নিত করা হয়েছে (*P মান < 0.05, **P মান ≤ 0.01, ***P মান ≤ 0.001)। Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, получен 9 получен в. в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,01,05,015) *** পি ≤ ০,০০১)। টিকা দেওয়া (কোলেটোট্রিচাম লুপিনি, স্ট্রেন কোল-০৮, ১৯৯৯ সালে পোল্যান্ডের উইয়ারজেনিসের একটি লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত) এবং নিয়ন্ত্রণ (জাল-টিকা দেওয়া) উদ্ভিদের মধ্যে প্রকাশের মাত্রার পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ডেটা পয়েন্টের উপরে উল্লেখ করা হয়েছে (*P মান < 0.05, **P-মান ≤ 0.01, ***P-মান ≤ 0.001)।接种 (Colletotrichum) লুপিনি,কল-08株,1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据繀上* 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001)।接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 （接片 狴社水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001)। Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученнпывлеюсей) Верженице, Польша, 1999 সালে P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001)। টিকা দেওয়া (কোলেটোট্রিচাম লুপিনি, স্ট্রেন কোল-০৮, ১৯৯৯ সালে পোল্যান্ডের ভার্জেনিসের লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত) এবং নিয়ন্ত্রণ (জাল-টিকা দেওয়া) উদ্ভিদের মধ্যে প্রকাশের মাত্রার পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ডেটা পয়েন্টের উপরে উল্লেখ করা হয়েছে (*P মান < 0.05, **P-মান ≤ 0.01, ***P-মান ≤ 0.001)।বিশ্লেষণ করা NLL লাইনগুলি হল: 83A:476 (প্রতিরোধী, সমজাতীয় Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), ম্যান্ডেলুপ (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, সমজাতীয় AnMan অ্যালিল বহনকারী), বোরেগিন (প্রতিরোধী, অজানা জেনেটিক পটভূমি) এবং জনসংখ্যা 22660 (সংবেদনশীল)।
Lanr1 লোকাসে প্রার্থী জিন TanjilG_05042 RNA-seq গবেষণা থেকে প্রাপ্ত প্রোফাইল থেকে একটি উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন প্রকাশ প্যাটার্ন দেখিয়েছে (চিত্র 6e)। ম্যান্ডেলুপ এবং 22660 জনসংখ্যার মধ্যে (যথাক্রমে 39.7 এবং 11.7 গুণ পর্যন্ত) এই জিনের উল্লেখযোগ্য সক্রিয়তা লক্ষ্য করা গেছে, যার ফলে তুলনামূলকভাবে উচ্চ প্রকাশের মাত্রা দেখা গেছে (যথাক্রমে 1.4 ± 0.14 এবং 7.2 ± 1.3 পর্যন্ত)। 83A:476 এছাড়াও TanjilG_05042 জিনের কিছু আপরেগুলেশন (3.8 গুণ পর্যন্ত) প্রকাশ করেছে, তবে, অর্জিত আপেক্ষিক প্রকাশের মাত্রা (0.044 ± 0.002) ম্যান্ডেলুপ এবং 22660 জনসংখ্যার তুলনায় 30 গুণেরও বেশি কম ছিল। qPCR দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছে যে, নকল-টিকাযুক্ত (নিয়ন্ত্রণ) রূপগুলিতে জিনোটাইপের মধ্যে প্রকাশের মাত্রায় উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখা গেছে, যা 22660 এবং 83A:476 জনসংখ্যার মধ্যে 58 গুণের পার্থক্যে পৌঁছেছে, সেইসাথে 22660 এবং 22660 জনসংখ্যার মধ্যেও। বোরেগিন এবং ম্যান্ডালুপের মধ্যে দ্বিগুণ পার্থক্য অর্জন করা হয়েছে।
83A:476 তে টিকাদানের প্রতিক্রিয়ায় AnMan লোকাসে প্রার্থী জিন, TanjilG_12861 সক্রিয় হয়েছিল এবং 22660 জনসংখ্যার মধ্যে Mandelup নিরপেক্ষ ছিল এবং Boregine-এ হ্রাস পেয়েছিল (চিত্র 6f)। TanjilG_12861 জিনের আপেক্ষিক প্রকাশ টিকাকৃত 83A: 476 (0.14±0.01) তে সর্বোচ্চ ছিল। 17.4 kDa ক্লাস I হিট শক প্রোটিন জিন TanjilG_05080 HSP17.4 সমস্ত অধ্যয়নকৃত স্ট্রেন এবং সময় বিন্দুতে কম আপেক্ষিক প্রকাশের মাত্রা দেখিয়েছে (চিত্র 6g)। 22660 জনসংখ্যার মধ্যে সর্বোচ্চ মান 24 HPI (0.14 ± 0.02, টিকাদানের প্রতিক্রিয়ায় আট গুণ বৃদ্ধি) পরিলক্ষিত হয়েছিল।
জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলের তুলনা (চিত্র ৭) TanjilG_10657 এবং আরও চারটি জিনের মধ্যে উচ্চ পারস্পরিক সম্পর্ক প্রকাশ করেছে: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), এবং TanjilG_04706 (r = 0.79)। এই ধরনের ফলাফল প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ার সময় এই জিনগুলির সহ-নিয়ন্ত্রণ নির্দেশ করতে পারে। TanjilG_12861 এবং TanjilG_23384 জিনগুলি অন্যান্য জিনের তুলনায় কম পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ মান (যথাক্রমে 0.08 থেকে 0.43 এবং -0.19 থেকে 0.28 পর্যন্ত) সহ ভিন্ন এক্সপ্রেশন প্রোফাইল দেখিয়েছে।
পরিমাণগত পিসিআর ব্যবহার করে জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলের মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক সনাক্ত করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত সংকীর্ণ পাতার লুপিন রেখাগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল: 83A:476 (প্রতিরোধী, সমজাতীয় Lanr1 অ্যালিল বহনকারী), ম্যান্ডেলুপ (মাঝারিভাবে প্রতিরোধী, সমজাতীয় AnMan অ্যালিল বহনকারী), বোরেজিন (প্রতিরোধী, জেনেটিক পটভূমি অজানা), এবং জনসংখ্যা 22660 (সংবেদনশীল)। তিনটি সময় বিন্দু গণনা করা হয়েছিল (টিকা দেওয়ার 6, 12 এবং 24 ঘন্টা পরে), যার মধ্যে রয়েছে টিকা দেওয়া (কোলেটোট্রিচাম লুপিনি, স্ট্রেন কোল-08, 1999 সালে পোল্যান্ডের উইয়ারজেনিসের লুপিন ক্ষেত্র থেকে প্রাপ্ত) এবং নিয়ন্ত্রণ (শাম-ইনোকুলেটেড) উদ্ভিদ। স্কেলটি পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক সহগের মান দেখায়।
প্রতি ইঞ্চিতে ৬ হর্সপাওয়ারে প্রাপ্ত তথ্যের উপর ভিত্তি করে, WGCNA প্রাথমিক প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ার উপর ফোকাস করার জন্য ইনোকুলেটেড এবং নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদের তুলনা করে চিহ্নিত ৯৯৮১ DEG-তে সঞ্চালিত হয়েছিল (পরিপূরক সারণী S12)। জিনোটাইপ এবং পরীক্ষামূলক রূপগুলির মধ্যে সম্পর্কযুক্ত (ধনাত্মক বা নেতিবাচক) এক্সপ্রেশন প্রোফাইল সহ বাইশটি জিন মডিউল (ক্লাস্টার) পাওয়া গেছে। গড়ে, জিনের প্রকাশের মাত্রা 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 ক্রমানুসারে হ্রাস পাচ্ছিল (তবে উভয় রূপেই, নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদে এই প্রবণতা আরও শক্তিশালী ছিল)। গড়ে, জিনের প্রকাশের মাত্রা 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 ক্রমানুসারে হ্রাস পাচ্ছিল (তবে উভয় রূপেই, নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদে এই প্রবণতা আরও শক্তিশালী ছিল)। В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 у контрольных растений)। গড়ে, জিনের প্রকাশের মাত্রা 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 এই ক্রমে হ্রাস পেয়েছে (তবে উভয় রূপেই, নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদে এই প্রবণতা আরও শক্তিশালী ছিল)।平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > জনসংখ্যা 22660的顺序下降（然而,在两种变体中,这种趋势在对照植物中更强）।平均 而 言 ， 基因 水平 按 83a: 476 > mandelup > boregine > জনসংখ্যা 22660 的 顺序 下降 在漈，在种 草翭中 更) ... ... ... ... ... ... ... ... В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 контрольных растений)। গড়ে, 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 সিরিজে জিনের প্রকাশের মাত্রা হ্রাস পেয়েছে (তবে, উভয় রূপেই, নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদে এই প্রবণতা আরও শক্তিশালী ছিল)।টিকাদানের ফলে জিনের প্রকাশের উন্নতি ঘটে, বিশেষ করে মডিউল ১৮, ১৯, ১৪, ৬ এবং ১ (প্রভাব অনুসারে অবরোহী ক্রমে), নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (যেমন মডিউল ৯ এবং ২০) অথবা নিরপেক্ষ প্রভাব (যেমন মডিউল ১১, ২২, ৮ এবং ১৩) সহ। GO টার্ম সমৃদ্ধি বিশ্লেষণ (পরিপূরক সারণী S13) সর্বাধিক সক্রিয়করণ সহ ইনোকুলেটেড মডিউল (১৮) এর জন্য "GO: 0006952 প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়া" প্রকাশ করেছে, যার মধ্যে qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 এবং TanjilG_27015) দ্বারা বিশ্লেষণ করা জিনগুলি অন্তর্ভুক্ত রয়েছে, সেইসাথে অনেক ইনোকুলেট সবচেয়ে দমন করা সালোকসংশ্লেষণ মডিউল (9)। মডিউল ১৮ কনসেনট্রেটর (চিত্র ৮) কে TanjilG_26536 জিন হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছে যা PR-10-এর মতো LlR18B প্রোটিনকে এনকোড করছে, এবং মডিউল ৯ কনসেনট্রেটরকে TanjilG_28955 জিন হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছে যা ফটোসিস্টেম II PsbQ প্রোটিনকে এনকোড করছে। মডিউল ২২ (চিত্র ৯) তে একটি প্রার্থী অ্যানথ্রাকনোজ রেজিস্ট্যান্স জিন Lanr1, TanjilG_05042 পাওয়া গেছে এবং এটি "GO:0044260 সেলুলার ম্যাক্রোমলিকুলার মেটাবলিক প্রসেস" এবং "GO:0006355 ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেশন, DNA টেম্পলেটিং" শব্দের সাথে যুক্ত যা TanjilG_01212 হাব বহন করে। জিনটি তাপ চাপ ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর A-4a (HSFA4a) এনকোড করে।
"GO: 0006952 প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া" নামক জৈবিক প্রক্রিয়া পদগুলির অত্যধিক প্রতিনিধিত্বকারী মডিউলগুলির জিন সহ-প্রকাশের ওজনযুক্ত নেটওয়ার্ক বিশ্লেষণ। qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 এবং TanjilG_27015) দ্বারা বিশ্লেষণ করা চারটি জিনকে হাইলাইট করার জন্য লিগেশনকে সরলীকৃত করা হয়েছিল।
"GO: 0006355: ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেশন, DNA টেম্পলেটিং" নামক জৈবিক প্রক্রিয়ার একটি মডিউলের জিন সহ-প্রকাশের ওজনযুক্ত নেটওয়ার্ক বিশ্লেষণ এবং একটি প্রার্থী অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধ জিন Lanr1 TanjilG_05042 বহন করে। TanjilG_05042 জিন এবং কেন্দ্রীয় TanjilG_01212 জিনকে আলাদা করার জন্য বন্ধনকে সরলীকৃত করা হয়েছিল।
অস্ট্রেলিয়ায় সংগৃহীত অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের স্ক্রিনিংয়ে দেখা গেছে যে প্রাথমিকভাবে প্রকাশিত বেশিরভাগ জাতই সংবেদনশীল ছিল; কালিয়া, করোমুপ এবং ম্যান্ডেলুপকে মাঝারি প্রতিরোধী হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে, যেখানে ওঙ্গা, তানজিল এবং 83A:476 কে অত্যন্ত প্রতিরোধী 26,27,31 হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে। একই প্রতিরোধী অ্যালিল ছিল, যা Lanr1 নামে পরিচিত, এবং করোমুপ এবং ম্যান্ডেলুপের একটি ভিন্ন অ্যালিল ছিল, যা AnMan10, 26, 39 নামে পরিচিত, যেখানে কালিয়া একটি ভিন্ন অ্যালিলে পাস করেছে। , Lanr2। জার্মানিতে অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের স্ক্রিনিংয়ের ফলে Lanr1 ছাড়া অন্য একটি প্রার্থী অ্যালিলের সাথে একটি প্রতিরোধী লাইন Bo7212 সনাক্ত করা হয়েছিল, যা LanrBo36 নামে পরিচিত।
আমাদের গবেষণায় পরীক্ষিত জার্মপ্লাজমে Lanr1 অ্যালিলের ফ্রিকোয়েন্সি (প্রায় 6%) খুব কম (প্রায় 6%) প্রকাশ পেয়েছে। এই পর্যবেক্ষণটি Anseq3 এবং Anseq4 মার্কার ব্যবহার করে পূর্ব ইউরোপীয় জার্মপ্লাজম স্ক্রিনিংয়ের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, যা দেখিয়েছে যে Lanr1 অ্যালিল শুধুমাত্র দুটি বেলারুশিয়ান লাইনে উপস্থিত রয়েছে। এটি ইঙ্গিত দেয় যে Lanr1 অ্যালিল এখনও স্থানীয় প্রজনন কর্মসূচিতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় না, অস্ট্রেলিয়ার বিপরীতে, যেখানে এটি মার্কার-সহায়তাপ্রাপ্ত প্রজননের জন্য অন্যতম প্রধান অ্যালিল। অস্ট্রেলিয়ার প্রতিবেদনের তুলনায় ইউরোপীয় ক্ষেত্রের পরিস্থিতিতে Lanr1 অ্যালিল দ্বারা প্রদত্ত প্রতিরোধের স্তর কম থাকার কারণে এটি হতে পারে। এছাড়াও, অস্ট্রেলিয়ার উচ্চ বৃষ্টিপাতের অঞ্চলে অ্যানথ্রাকনোজের গবেষণায় দেখা গেছে যে Lanr1 অ্যালিল দ্বারা মধ্যস্থতা করা প্রতিরোধের প্রতিক্রিয়াগুলি আবহাওয়ার পরিস্থিতিতে কার্যকর নাও হতে পারে যা রোগজীবাণুর বৃদ্ধি এবং দ্রুত বিকাশের পক্ষে 19,42। প্রকৃতপক্ষে, বর্তমান গবেষণায়, Lanr1 অ্যালিল বহনকারী জিনোটাইপগুলিতেও অ্যানথ্রাকনোজের কিছু লক্ষণ দেখা গেছে, যা পরামর্শ দেয় যে C. lupini বিকাশের জন্য সর্বোত্তম পরিস্থিতিতে প্রতিরোধ অদৃশ্য হয়ে যেতে পারে। এছাড়াও, Lanr1 লোকাস থেকে প্রায় 1 সেমি দূরে অবস্থিত Anseq3 এবং Anseq4 মার্কারগুলির উপস্থিতির মিথ্যা ইতিবাচক ব্যাখ্যা 28,30,43 সম্ভব।
আমাদের গবেষণায় দেখা গেছে যে 83A:476, Lanr1 অ্যালিল বহনকারী, প্রথম বিশ্লেষণকৃত সময় বিন্দুতে (6 hpi) বৃহৎ-স্কেল ট্রান্সক্রিপ্টোম রিপ্রোগ্রামিং সহ C. লুপিনি ইনোকুলেশনে সাড়া দেয়, যখন ম্যান্ডেলুপে, AnMan অ্যালিল বহনকারী, ট্রান্সক্রিপ্টোমিক প্রতিক্রিয়া অনেক পরে পরিলক্ষিত হয়। (24 থেকে 48 hp পর্যন্ত)। প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ার এই সাময়িক পরিবর্তনগুলি রোগের লক্ষণগুলির পার্থক্যের সাথে সম্পর্কিত, যা প্রতিরোধের সফল প্রতিক্রিয়ার জন্য প্রাথমিক রোগজীবাণু সনাক্তকরণের গুরুত্ব তুলে ধরে। উদ্ভিদ টিস্যুকে সংক্রামিত করার জন্য, অ্যানথ্রাক্স স্পোরগুলিকে হোস্ট পৃষ্ঠে বেশ কয়েকটি বিকাশমূলক পর্যায়ে যেতে হবে, যার মধ্যে অঙ্কুরোদগম, কোষ বিভাজন এবং একটি অ্যাপ্রেসোরিয়াম গঠন অন্তর্ভুক্ত। একটি উপাঙ্গ হল একটি সংক্রামক কাঠামো যা হোস্টের পৃষ্ঠের সাথে সংযুক্ত থাকে এবং হোস্ট টিস্যুতে প্রবেশকে সহজতর করে। সুতরাং, মটর নির্যাসে C. গ্লোওস্পোরিওয়েডসের স্পোরগুলি 75-90 মিনিটের ইনকিউবেশনের পরে নিউক্লিয়াসের প্রথম বিভাজন, 90-120 মিনিটের পরে একটি জীবাণু নল গঠন এবং 4 ঘন্টা 45 পরে দমন দেখায়। ৩ ঘন্টা ইনকিউবেশনের পর আম সি. গ্লোওস্পোরিওয়েডস ৪০% এরও বেশি কনিডিয়াল অঙ্কুরোদগম এবং ৪ ঘন্টা পরে প্রায় ২০% অ্যাপ্রেসর গঠন দেখিয়েছে। সি. গ্লোওস্পোরিওয়েডসের ভাইরাস-সম্পর্কিত CAP20 জিন অ্যাভোকাডো পৃষ্ঠের মোমে ৩.৫ ঘন্টা ইনকিউবেশনের পর এপিফাইট-গঠনকারী কনিডিয়ায় ট্রান্সক্রিপশনাল কার্যকলাপ দেখিয়েছে যেখানে ৪ ঘন্টা ৪৬ মিনিট পরে CAP20 প্রোটিনের উচ্চ ঘনত্ব ছিল। একইভাবে, সি. ট্রাইফোলিতে মেলানিন জৈব সংশ্লেষণ জিনের কার্যকলাপ ২ ঘন্টা ইনকিউবেশনের সময় প্ররোচিত হয়েছিল এবং তারপরে ১ ঘন্টা পরে অ্যাপ্রেসোরিয়াম তৈরি হয়েছিল। পাতার টিস্যুর গবেষণায় দেখা গেছে যে সি. অ্যাকুটাটাম দিয়ে টিকা দেওয়া স্ট্রবেরিগুলিতে প্রথম দমন ৮ এইচপিআইতে হয়, যেখানে সি. কোকোড দিয়ে টিকা দেওয়া টমেটোগুলিতে প্রথম দমন ৪ এইচপিআই ৪৮,৪৯ এ হয়। কোলেটোট্রিচাম এসপিপি সংক্রামক প্রক্রিয়ার সময় স্কেলের সাথে মূলত সামঞ্জস্যপূর্ণ। 83A:476-এর দ্রুত প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়া এই লাইনে উদ্ভিদ প্রতিরোধ এবং ইফেক্টর-ট্রিগারড ইমিউনিটি (ETI) জিনের জড়িত থাকার ইঙ্গিত দেয়, যেখানে ম্যান্ডেলুপের বিলম্বিত প্রতিক্রিয়াগুলি মাইক্রো-অ্যাসোসিয়েটেড মলিকুলার প্যাটার্ন-ট্রিগারড ইমিউনিটি (MTI) হাইপোথিসিস 50-কে সমর্থন করে। 83A:476 এবং ম্যান্ডেলুপের প্রাথমিক প্রতিক্রিয়াগুলি। বিলম্বিত প্রতিক্রিয়ায় আপ- বা ডাউন-নিয়ন্ত্রিত জিনের মধ্যে আংশিক ওভারল্যাপও এই ধারণাটিকে সমর্থন করে, কারণ ETI-কে প্রায়শই একটি ত্বরিত এবং বর্ধিত MTI প্রতিক্রিয়া হিসাবে বিবেচনা করা হয় যা সংক্রমণের স্থানে প্রোগ্রাম করা কোষের মৃত্যুতে পরিণত হয়, যা অ্যানাফিল্যাকটিক শক 51,52 নামে পরিচিত।
জিন অন্টোলজি GO:0006952 "প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া" শব্দটির সাথে সম্পর্কিত বেশিরভাগ জিন হল স্ট্রেস-প্ররোচিত উপবাস বার্তা 22 প্রোটিন (SAM22 এর অনুরূপ) এবং সাতটি প্রধান ল্যাটেক্স প্রোটিন-লাইক (MLPs) এর 11টি হোমোলোগ। -লাইক প্রোটিন 31, 34, 43 এবং 423 ক্রম সাদৃশ্য দেখিয়েছে। SAM22-লাইক জিনগুলি উল্লেখযোগ্য সক্রিয়তা দেখিয়েছে যা দীর্ঘস্থায়ী হয়েছে, অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের বর্ধিত মাত্রা দেখায় (83A:476 এবং বোরেজিন)। যাইহোক, MLP-লাইক জিনগুলি কেবলমাত্র প্রার্থী প্রতিরোধ অ্যালিল বহনকারী লাইনগুলিতে হ্রাস করা হয়েছিল (83A:476/Lanr1 6 hpi এ এবং Mandelup/AnMan 24 hpi এ)। এটি লক্ষ করা উচিত যে সমস্ত চিহ্নিত SAM22-লাইক হোমোলোগগুলি প্রায় 105 kb বিস্তৃত একটি জিন ক্লাস্টার থেকে উদ্ভূত হয়, যখন MLP-লাইক জিনগুলি জিনোমের পৃথক অঞ্চল থেকে উদ্ভূত হয়। ডায়াপোর্টেটোক্সিকা ইনোকুলেশনের বিরুদ্ধে NLL প্রতিরোধের উপর আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায়ও এই ধরনের SAM22-সদৃশ জিনের সমন্বিত সক্রিয়করণ পাওয়া গেছে, যা পরামর্শ দেয় যে তারা প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়ার অনুভূমিক উপাদানগুলিতে জড়িত। স্যালিসিলিক অ্যাসিড, ছত্রাক প্ররোচক, বা হাইড্রোজেন পারক্সাইড দিয়ে আঘাত বা চিকিত্সার ক্ষেত্রে SAM22-সদৃশ জিনের ইতিবাচক প্রতিক্রিয়ার প্রতিবেদন দ্বারাও এই উপসংহারটি সমর্থিত।
অনেক উদ্ভিদ প্রজাতির ব্যাকটেরিয়া, ভাইরাল এবং রোগজীবাণু ছত্রাক সংক্রমণ সহ বিভিন্ন অজৈবিক এবং জৈবিক চাপের প্রতি MLP-সদৃশ জিন সাড়া দিতে দেখা গেছে। উদ্ভিদ এবং রোগজীবাণুর মধ্যে নির্দিষ্ট মিথস্ক্রিয়ার প্রতিক্রিয়ার দিকগুলি তীব্রভাবে বৃদ্ধি (অর্থাৎ, ভার্টিসিলিয়াম ডালিয়া দ্বারা তুলার আক্রমণের সময়) থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস (অর্থাৎ, আপেল গাছে Alternaria spp দ্বারা সংক্রমণের পরে) পর্যন্ত বিস্তৃত ছিল। 56,57। F. niger সংক্রমণের বিরুদ্ধে অ্যাভোকাডো প্রতিরক্ষার সময় এবং আপেল গাছের সংক্রমণের সময় Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola এবং Alternaria alternata হল আপেল প্যাথোটাইপ 58,59। এছাড়াও, MLP-সদৃশ 423 জিনকে অতিরিক্ত প্রকাশকারী অ্যাপেল ক্যালিতে প্রতিরোধ-সম্পর্কিত জিনের প্রকাশ কম ছিল এবং ছত্রাক সংক্রমণের জন্য বেশি সংবেদনশীল ছিল59। Fusarium oxysporum f এর পরে, MLP-সদৃশ 423 জিনটি প্রতিরোধী সাধারণ শিমের জার্মপ্লাজমেও দমন করা হয়েছিল। cn. শিমের সংক্রমণ ৬০।
আমাদের RNA-seq গবেষণায় চিহ্নিত PR-10 পরিবারের অন্যান্য সদস্যরা হলেন LlR18A এবং LlR18B জিন যা আপরেগুলেশনের প্রতিক্রিয়ায়, সেইসাথে লিপিড ট্রান্সফার প্রোটিন DIR1 এর জন্য আপরেগুলেটেড (1 জিন) বা ডাউনরেগুলেটেড (3 জিন) জিন। এছাড়াও, WGCNA এই মডিউলে LlR18B জিনকে একটি হাব হিসেবে তুলে ধরে, যা টিকা দেওয়ার জন্য অত্যন্ত সংবেদনশীল এবং বেশ কয়েকটি প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়া জিন বহন করে। LlR18A এবং LlR18B জিনগুলি রোগজীবাণু ব্যাকটেরিয়ার প্রতিক্রিয়ায় হলুদ লুপিন পাতায়, সেইসাথে D. টক্সিকা ইনোকুলেশনের পরে NLL কান্ডে প্ররোচিত হয়েছিল, যখন এই জিনগুলির ধানের সমরূপতা, RSOsPR10, দ্রুত একটি ছত্রাক সংক্রমণ দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল যা সম্ভবত জেসমনিক অ্যাসিড সিগন্যালিং পথ53,61, 62-তে জড়িত ছিল। DIR1 জিনটি অ-নির্দিষ্ট লিপিড পরিবহন প্রোটিনগুলিকে এনকোড করে যা সিস্টেমিক অর্জিত প্রতিরোধের (SAR) সূত্রপাতের জন্য প্রয়োজনীয়। প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়ার বিকাশের সাথে সাথে, DIR1 প্রোটিন সংক্রমণের কেন্দ্র থেকে ফ্লোয়েমের মাধ্যমে পরিবহন করা হয় যাতে দূরবর্তী অঙ্গগুলিতে SAR প্ররোচিত হয়। মজার বিষয় হল, TanjilG_02313 DIR1 জিনটি লাইন 84A:476 এবং পপুলেশন 22660-এ প্রথম সময় বিন্দুতে উল্লেখযোগ্যভাবে প্ররোচিত হয়েছিল, কিন্তু অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধ ক্ষমতা শুধুমাত্র লাইন 84A:476-এ সফলভাবে বিকশিত হয়েছিল। এটি NLL-এ DIR1 জিনের কিছু উপ-কার্যক্ষমতা নির্দেশ করতে পারে, কারণ বাকি তিনটি হোমোলোগ শুধুমাত্র 83A:476 লাইনে 6 hpi-তে ইনোকুলেশনে সাড়া দিয়েছিল এবং এই প্রতিক্রিয়াটি নীচের দিকে পরিচালিত হয়েছিল।
আমাদের গবেষণায়, "GO:0055114 Redox প্রক্রিয়া" নামক জৈবিক প্রক্রিয়ার সাথে সম্পর্কিত সবচেয়ে সাধারণ উপাদানগুলি ছিল সাইটোক্রোম P450 প্রোটিন, পেরোক্সিডেস, লিনোলিক অ্যাসিড 9S-/13S-লিপোক্সিজেনেস এবং 1-অ্যামিনোসাইক্লোপ্রোপেন-1-কারবক্সিলিক অ্যাসিড অক্সিডেস। এছাড়াও, আমাদের WGCNA HSFA4a হোমোলগকে Lanr1 রেজিস্ট্যান্স জিন ক্যান্ডিডেট TanjilG_05042 এর মতো একটি হাব বহনকারী মডিউল হিসাবে সংজ্ঞায়িত করে। HSFA4a হল উদ্ভিদে নিউক্লিয়ার ট্রান্সক্রিপশনের রেডক্স-নির্ভর নিয়ন্ত্রণের একটি উপাদান।
সাইটোক্রোম P450 প্রোটিন হল অক্সিডোরেডাক্টেস যা প্রাথমিক এবং গৌণ বিপাকের ক্ষেত্রে NADPH এবং/অথবা O2-নির্ভর হাইড্রোক্সিলেশন বিক্রিয়াকে অনুঘটক করে, যার মধ্যে রয়েছে জেনোবায়োটিকের বিপাক, সেইসাথে হরমোন, ফ্যাটি অ্যাসিড, স্টেরল, কোষ প্রাচীর উপাদান, জৈবপলিমার এবং প্রতিরক্ষামূলক যৌগের জৈব সংশ্লেষণ 69। আমাদের একটি গবেষণায়, উদ্ভিদ সাইটোক্রোম P450 ফাংশনের পরিবর্তনশীলতা -10.6 log2 (ভাঁজ পরিবর্তন) থেকে 5.7 এ হ্রাস পেয়েছে কারণ প্রচুর সংখ্যক পরিবর্তিত হোমোলগ (37) এবং নির্দিষ্ট জিনের মধ্যে প্রতিক্রিয়া প্যাটার্নের পার্থক্য রয়েছে, যা একটি ঊর্ধ্বমুখী পুনর্বিবেচনা প্রতিফলিত করে। । এত বড় প্রোটিন সুপারফ্যামিলিতে NLL জিনের পুটিভেটিভ জৈবিক কার্যকারিতা ব্যাখ্যা করার জন্য শুধুমাত্র RNA-seq ডেটা ব্যবহার করা অত্যন্ত অনুমানমূলক হবে। তবে, এটি লক্ষণীয় যে কিছু সাইটোক্রোম P450 জিন প্যাথোজেনিক ছত্রাক বা ব্যাকটেরিয়ার প্রতিরোধ ক্ষমতা বৃদ্ধির সাথে যুক্ত, যার মধ্যে অ্যালার্জির প্রতিক্রিয়ার অবদান 69,70,71।
তৃতীয় শ্রেণীর পেরোক্সিডেস হল বহুমুখী উদ্ভিদ এনজাইম যা উদ্ভিদের বৃদ্ধি এবং বিকাশের সময় বিস্তৃত বিপাকীয় প্রক্রিয়ায় জড়িত, সেইসাথে লবণাক্ততা, খরা, উচ্চ আলোর তীব্রতা এবং রোগজীবাণু আক্রমণের মতো পরিবেশগত চাপের প্রতিক্রিয়ায়72। পেরোক্সিডেসগুলি অ্যানথ্রাসিসের সাথে বেশ কয়েকটি উদ্ভিদ প্রজাতির মিথস্ক্রিয়ায় জড়িত, যার মধ্যে রয়েছে স্টাইলোস্যান্থেস হিউমিলিস এবং সি. গ্লোওস্পোরিওয়েডস, লেন্স কুলিনারিস এবং সি. ট্রানকাটাম, ফেজোলাস ভালগারিস এবং সি. লিন্ডেমুথিয়ানাম, কুকুমিস স্যাটিভাস এবং সি. ল্যাজেনারিয়াম73,74,75,76। ছত্রাক উদ্ভিদের টিস্যুতে প্রবেশ করার আগে প্রতিক্রিয়া খুব দ্রুত হয়, কখনও কখনও 4 HPI-তেও। পেরোক্সিডেস জিনটি D. টক্সিকা NLL ইনোকুলেশনের প্রতিও প্রতিক্রিয়া জানায়। অক্সিডেটিভ বিস্ফোরণ নিয়ন্ত্রণ বা অক্সিডেটিভ চাপ দূর করার জন্য তাদের সাধারণ কার্যকারিতা ছাড়াও, পেরোক্সিডেসগুলি নির্দিষ্ট যৌগের লিগনিফিকেশন, সাবইউনিট বা ক্রস-লিঙ্কিংয়ের সময় কোষ প্রাচীর শক্তিবৃদ্ধির উপর ভিত্তি করে শারীরিক বাধা তৈরি করে রোগজীবাণু বৃদ্ধিতে হস্তক্ষেপ করতে পারে। সিলিকোতে এই ফাংশনটি TanjilG_03329 জিনকে দায়ী করা যেতে পারে যা একটি পুটিভ লিগনিন-গঠনকারী অ্যানিয়ন পারক্সিডেস এনকোড করে যা আমাদের গবেষণায় 83A:476 প্রতিরোধী লাইনে 6 HPI তে উল্লেখযোগ্যভাবে আপরেগুলেটেড হয়েছিল, কিন্তু অন্যান্য স্ট্রেন এবং সময় বিন্দুতে নয় যা সাড়া দেয়নি।
লিনোলিক অ্যাসিডের 9S-/13S-লিপোক্সিজেনেজ হল লিপিড জৈব সংশ্লেষণের জারণ পথের প্রথম ধাপ78। এই পথের পণ্যগুলির উদ্ভিদ প্রতিরক্ষায় একাধিক কাজ রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে ক্যালোজ এবং পেকটিন জমার গঠনের মাধ্যমে কোষ প্রাচীর শক্তিশালীকরণ এবং প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির উৎপাদনের মাধ্যমে জারণ চাপ নিয়ন্ত্রণ করা79,80,81,82,83। বর্তমান গবেষণায়, লিনোলিক অ্যাসিড 9S-/13S-লিপোক্সিজেনেজের অভিব্যক্তি সমস্ত স্ট্রেইনে পরিবর্তিত হয়েছিল, তবে সংবেদনশীল জনসংখ্যা 22660-এ, বিভিন্ন সময়ে আপরেগুলেশন বিরাজ করেছিল, যখন প্রতিরোধী Lanr1 এবং AnMan অ্যালিল বহনকারী স্ট্রেইনে, এটি এই জিনোটাইপগুলির মধ্যে প্রতিরক্ষামূলক অ্যানথ্রাক্স প্রতিক্রিয়ায় অক্সিলিপিন স্তরের বৈচিত্র্যের উপর জোর দেয়।
লুপিন দিয়ে টিকা দেওয়ার সময় 1-অ্যামিনোসাইক্লোপ্রোপেন-1-কার্বক্সিলেট অক্সিডেস (ACO) হোমোলগ উল্লেখযোগ্যভাবে আপরেগুলেটেড (9 জিন) বা ডাউনরেগুলেটেড (2 জিন) ছিল। দুটি ব্যতিক্রম ছাড়া, এই সমস্ত প্রতিক্রিয়া 83A:476 এ 6 hp এ ঘটেছে। ACO প্রোটিন দ্বারা মধ্যস্থতা করা এনজাইমেটিক বিক্রিয়া হল ইথিলিন উৎপাদনের হার-সীমাবদ্ধ ধাপ এবং তাই এটি অত্যন্ত নিয়ন্ত্রিত84। ইথিলিন হল একটি উদ্ভিদ হরমোন যা উদ্ভিদের বিকাশ এবং অ্যাবায়োটিক এবং জৈবিক চাপের অবস্থার প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণে বিভিন্ন ভূমিকা পালন করে। ACO ট্রান্সক্রিপশনের প্রবর্তন এবং ইথিলিন সংকেত পথের সক্রিয়করণ প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি এবং ফাইটোঅ্যালেক্সিনের উৎপাদন নিয়ন্ত্রণ করে হেমিবায়োট্রফিক ছত্রাক অরিজা অরিজা-এর বিরুদ্ধে ধানের প্রতিরোধ ক্ষমতা বৃদ্ধিতে জড়িত। এই গবেষণায় রিপোর্ট করা 83A:476 লাইনে ACO হোমোলগগুলির উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধির পটভূমিতে, M. oryzae এবং C. lupini88,89 এর মধ্যে পাওয়া একটি খুব অনুরূপ পাতার সংক্রমণ প্রক্রিয়া, NLL অ্যানথ্রাকনোজ ইথিলিনের প্রতিরোধ ক্ষমতা আণবিক পথের একটি সংকেতী কেন্দ্রীয় পদক্ষেপ প্রদানের সম্ভাবনাকে পরিবর্তন করে।
বর্তমান গবেষণায়, 83A:476-এ 6 hpi এবং ম্যান্ডেলুপ এবং 22660 জনসংখ্যার মধ্যে 48 hpi-তে সালোকসংশ্লেষণের সাথে যুক্ত অনেক জিনের বৃহৎ পরিসরে দমন লক্ষ্য করা গেছে। এই পরিবর্তনগুলির ব্যাপ্তি এবং অগ্রগতি স্তরের সমানুপাতিক। এই পরীক্ষায় অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধ লক্ষ্য করা গেছে। সম্প্রতি, উদ্ভিদ-প্যাথোজেন মিথস্ক্রিয়ার বেশ কয়েকটি মডেলে সালোকসংশ্লেষণ-সম্পর্কিত প্রতিলিপিগুলির শক্তিশালী এবং প্রাথমিক দমন রিপোর্ট করা হয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে প্যাথোজেনিক ব্যাকটেরিয়া এবং ছত্রাক। সংক্রমণের প্রতিক্রিয়ায় সালোকসংশ্লেষণের সাথে যুক্ত জিনগুলির তাড়াহুড়ো (কিছু মিথস্ক্রিয়ায় 2 HPI থেকে) এবং বিশ্বব্যাপী দমন প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির স্থাপন এবং অ্যালার্জির প্রতিক্রিয়া মধ্যস্থতা করার জন্য স্যালিসিলিক অ্যাসিড পথের সাথে তাদের মিথস্ক্রিয়ার উপর ভিত্তি করে উদ্ভিদের রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা ট্রিগার করতে পারে 90,94।
উপসংহারে, সবচেয়ে প্রতিরোধী বংশের (83A:476) জন্য প্রস্তাবিত প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া ব্যবস্থার মধ্যে রয়েছে R জিন (সম্ভবত TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) দ্বারা দ্রুত রোগজীবাণু সনাক্তকরণ এবং অ্যালার্জিক প্রতিক্রিয়া-মধ্যস্থতাকারী স্যালিসিলিক অ্যাসিড এবং ইথিলিন সংকেত, যার পরে দীর্ঘ-পরিসরের SAR প্রতিষ্ঠা করা হয়। ক্রিয়াটি DIR-1 প্রোটিন দ্বারা সমর্থিত। এটি লক্ষ করা উচিত যে C. লুপিনি সংক্রমণের জন্য বায়োট্রফিক সময়কাল খুব কম (প্রায় 2 দিন), তারপরে নেক্রোটিক বৃদ্ধি95। এই পর্যায়ের মধ্যে পরিবর্তন নেক্রোসিস এবং ইথিলিন-ইনডুসিবল প্রোটিনের প্রকাশের সাথে যুক্ত হতে পারে যা হোস্ট উদ্ভিদে অতি সংবেদনশীলতা প্রতিক্রিয়ার জন্য ট্রিগার হিসাবে কাজ করে। অতএব, বায়োট্রফিক পর্যায়ে C. লুপিনি সফলভাবে ধরার জন্য সময়সীমা খুবই সংকীর্ণ। 83A:476 এ 6 hpi-তে পর্যবেক্ষণ করা রেডক্স এবং সালোকসংশ্লেষণের সাথে যুক্ত জিনের পুনঃপ্রোগ্রামিং ছত্রাকের হাইফাইয়ের অগ্রগতির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং বায়োট্রফিক পর্যায়ে একটি সফল প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়ার বিকাশের ইঙ্গিত দেয়। ম্যান্ডেলুপ এবং ২২৬৬০ জনসংখ্যার ট্রান্সক্রিপ্টমিক প্রতিক্রিয়াগুলি ছত্রাক ধরার জন্য খুব দেরি হতে পারে এবং নেক্রোটিক বৃদ্ধিতে স্যুইচ করে, তবে, ম্যান্ডেলুপ ২২৬৬০ জনসংখ্যার তুলনায় বেশি কার্যকর হতে পারে কারণ PR-10 প্রোটিনের তুলনামূলকভাবে দ্রুত নিয়ন্ত্রণ অনুভূমিক প্রতিরোধকে উৎসাহিত করে।
ক্যানোনিকাল R জিন দ্বারা পরিচালিত ETI, অ্যানথ্রাকনোজের বিরুদ্ধে শিমের প্রতিরোধের একটি সাধারণ প্রক্রিয়া বলে মনে হয়। সুতরাং, মডেল লেগুম মেডিকাগো ট্রানকাটুলায়, অ্যানথ্রাকনোজের বিরুদ্ধে প্রতিরোধ RCT1 জিন দ্বারা প্রদান করা হয়, যা TIR-NBS-LRR97 উদ্ভিদ R জিন শ্রেণীর সদস্য। এই জিনটি সংবেদনশীল উদ্ভিদে স্থানান্তরিত হলে আলফালফায় বিস্তৃত-বর্ণালী অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধ ক্ষমতা প্রদান করে। সাধারণ শিমে (P. vulgaris), আজ পর্যন্ত দুই ডজনেরও বেশি অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধী জিন সনাক্ত করা হয়েছে। এই জিনগুলির মধ্যে কিছু এমন অঞ্চলে পাওয়া যায় যেখানে কোনও ক্যানোনিকাল R জিন নেই, তবে আরও অনেকগুলি NBS-LRR জিন ক্লাস্টার বহনকারী ক্রোমোজোমের প্রান্তে অবস্থিত, যার মধ্যে TIR-NBS-LRRs99 রয়েছে। জিনোম-ব্যাপী SSR গবেষণায় সাধারণ শিমের অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের সাথে NBS-LRR জিনের সংযোগও নিশ্চিত করা হয়েছে। সাদা লুপিন 101-এ প্রধান অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের লোকাস বহনকারী জিনোমিক অঞ্চলেও ক্যানোনিকাল R জিন পাওয়া গেছে।
আমাদের গবেষণায় দেখা গেছে যে উদ্ভিদ সংক্রমণের প্রাথমিক পর্যায়ে সক্রিয় একটি তাৎক্ষণিক প্রতিরোধ প্রতিক্রিয়া (বিশেষত ১২ এইচপিআই-এর পরে নয়), রোগজীবাণু ছত্রাক কোলেলোট্রিচাম লুপিনি দ্বারা সৃষ্ট অ্যানথ্রাকনোজ থেকে সরু-পাতার লুপিনকে কার্যকরভাবে রক্ষা করে। উচ্চ থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং ব্যবহার করে, আমরা Lanr1 এবং AnMan প্রতিরোধ জিন দ্বারা মধ্যস্থতাকারী NLL উদ্ভিদে অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধ জিনের ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশন প্রোফাইল প্রদর্শন করেছি। সফল প্রতিরক্ষার মধ্যে রয়েছে রোগজীবাণুর সাথে উদ্ভিদের প্রথম যোগাযোগের কয়েক ঘন্টার মধ্যে রেডক্স, সালোকসংশ্লেষণ এবং প্যাথোজেনেসিসে জড়িত প্রোটিনের জন্য জিনগুলি সাবধানতার সাথে ডিজাইন করা। অনুরূপ প্রতিরক্ষামূলক প্রতিক্রিয়া, কিন্তু সময়ের সাথে বিলম্বিত, রোগ থেকে উদ্ভিদকে রক্ষা করার ক্ষেত্রে অনেক কম কার্যকর। Lanr1 জিন দ্বারা মধ্যস্থতাকারী অ্যানথ্রাক্স প্রতিরোধ R জিনের সাধারণ দ্রুত প্রতিক্রিয়া (ইফেক্টর-ট্রিগারড ইমিউনিটি) এর সাথে সাদৃশ্যপূর্ণ, যেখানে AnMan জিন সম্ভবত একটি অনুভূমিক প্রতিক্রিয়া (একটি জীবাণু-সম্পর্কিত আণবিক প্যাটার্ন দ্বারা ট্রিগারড ইমিউনিটি) প্রদান করে, যা একটি মাঝারি স্তরের স্থায়িত্ব প্রদান করে।
অ্যানথ্রাকনোজ মার্কারগুলির জন্য স্ক্রিনিং করার জন্য ব্যবহৃত 215টি NLL লাইনে 74টি জাত, 60টি লাইন ক্রসিং বা প্রজননের মাধ্যমে প্রাপ্ত, 5টি মিউট্যান্ট এবং 76টি বন্য বা আসল জার্মপ্লাজম ছিল। লাইনগুলি 17টি দেশ থেকে এসেছে, প্রধানত পোল্যান্ড (58), স্পেন (47), জার্মানি (27), অস্ট্রেলিয়া (26), রাশিয়া (19), বেলারুশ (7), ইতালি (5) এবং অন্যান্য লাইন। 10টি দেশ থেকে। সেটটিতে রেফারেন্স প্রতিরোধী লাইনও রয়েছে: 83A:476, তানজিল, ল্যানআর1 অ্যালিল বহনকারী ওয়াঙ্গা এবং ম্যান্ডেলুপ অ্যানম্যান অ্যালিল বহনকারী। লাইনগুলি পোল্যান্ডের উইয়াট্রোওয়ের পোজনান প্ল্যান্ট ব্রিডিং লিমিটেড দ্বারা রক্ষণাবেক্ষণ করা ইউরোপীয় লুপিন জেনেটিক রিসোর্স ডেটাবেস থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছে (পরিপূরক সারণী S1)।
নিয়ন্ত্রিত পরিস্থিতিতে (ছবির সময়কাল ১৬ ঘন্টা, দিনের বেলা তাপমাত্রা ২৫° সেলসিয়াস এবং রাতে ১৮° সেলসিয়াস) গাছপালা জন্মানো হয়েছিল। দুটি জৈবিক প্রতিলিপি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রোটোকল অনুসারে DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) ব্যবহার করে তিন সপ্তাহ বয়সী পাতা থেকে DNA বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। বিচ্ছিন্ন DNA-এর গুণমান এবং ঘনত্ব স্পেকট্রোফটোমেট্রিক পদ্ধতি দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)। Anthracnose প্রতিরোধী জিন AnMan (cv. Mandelup থেকে প্রাপ্ত) চিহ্নিতকারী AnManM1 মার্কার এবং Lanr1 (cv. Tanjil থেকে প্রাপ্ত) জিনের পাশে থাকা Anseq3 এবং Anseq4 মার্কার বিশ্লেষণ করা হয়েছিল ১১,২৬,২৮। প্রতিরোধী অ্যালিলের জন্য হোমোজাইগোটগুলিকে "১", সংবেদনশীল - "০" এবং হেটেরোজাইগোটগুলিকে - ০.৫ হিসাবে স্কোর করা হয়েছিল।
AnManM1, AnSeq3 এবং AnSeq4 মার্কার স্ক্রিনিংয়ের ফলাফল এবং চূড়ান্ত ফলো-আপ পরীক্ষার জন্য বীজের প্রাপ্যতার উপর ভিত্তি করে, অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের ফেনোটাইপিংয়ের জন্য 50টি NLL লাইন নির্বাচন করা হয়েছিল। বিশ্লেষণটি কম্পিউটার নিয়ন্ত্রিত গ্রিনহাউসে 14 ঘন্টার ফটোপিরিয়ড সহ 22°C তাপমাত্রা এবং রাতে 19°C তাপমাত্রা সহ একটি ডুপ্লিকেট আকারে করা হয়েছিল। বীজের আবরণ খুব শক্ত হওয়ার কারণে বীজের সুপ্ততা রোধ করতে এবং অভিন্ন অঙ্কুরোদগম নিশ্চিত করতে বীজগুলি আঁচড়ানো হয় (একটি ধারালো ব্লেড দিয়ে ভ্রূণের বিপরীত দিকের বীজের আবরণ কেটে ফেলা হয়)। জীবাণুমুক্ত মাটি (TS-1 REC 085 মিডিয়াম বেসিক, ক্লাসম্যান-ডেইলম্যান পোলস্কা, ওয়ারশ, পোল্যান্ড) সহ টবে (11 × 11 × 21 সেমি) গাছপালা জন্মানো হয়েছিল। ১৯৯৯ সালে বৃহত্তর পোল্যান্ডের ভার্জেনিতসায় (৫২° ২৭′ ৪২″ উত্তর ১৭° ০৪′ ০৫″ পূর্ব) একটি জমিতে জন্মানো সরু-পাতার লুপিন গাছের কাণ্ড থেকে Colletotrichum lupini Col-08 প্রজাতির টিকাদান করা হয়েছিল। একটি এলাকা নিন। স্পোরুলেশন প্ররোচিত করার জন্য আইসোলেটগুলিকে ২০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় কালো আলোতে ২১ দিন ধরে SNA মাধ্যমের মধ্যে কালচার করা হয়েছিল। বপনের চার সপ্তাহ পরে, যখন গাছগুলি ৪-৬ পাতার পর্যায়ে পৌঁছেছিল, তখন প্রতি মিলিতে ০.৫ x ১০৬ কনিডিয়া ঘনত্বে কনিডিয়া সাসপেনশন স্প্রে করে টিকাদান করা হয়েছিল। টিকাদানের পরে, কনিডিয়ার অঙ্কুরোদগম এবং সংক্রমণ প্রক্রিয়া সহজতর করার জন্য গাছগুলিকে প্রায় ৯৮% আর্দ্রতা এবং ২৫° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ২৪ ঘন্টা অন্ধকারে রাখা হয়েছিল। এরপর গাছগুলিকে ১৪ ঘন্টার আলোক-সময়ের মধ্যে ২২°C দিন/১৯°C রাত এবং ৭০% আর্দ্রতায় জন্মানো হয়েছিল। টিকা দেওয়ার ২২ দিন পরে রোগের স্কোর তৈরি করা হয়েছিল এবং কান্ড এবং পাতায় নেক্রোটিক ক্ষতের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতির উপর নির্ভর করে ০ (প্রতিরোধ ক্ষমতা) থেকে ৯ (খুব সংবেদনশীল) পর্যন্ত ছিল। এছাড়াও, স্কোর করার পরে, গাছের ওজন পরিমাপ করা হয়েছিল। মার্কার জিনোটাইপ এবং রোগের ফেনোটাইপের মধ্যে সম্পর্কগুলি পয়েন্ট টু-সিকোয়েন্স পারস্পরিক সম্পর্ক (অ্যানথ্রাকনোজ প্রতিরোধের ফেনোটাইপের বিশ্লেষণের জন্য লাইনের সেটে হেটেরোজাইগাস মার্কারগুলির অনুপস্থিতি) হিসাবে গণনা করা হয়েছিল।