Javascript je trenutno onemogućen u vašem pretraživaču. Neke funkcije ove web stranice neće raditi kada je JavaScript onemogućen.
Registrirajte se sa svojim specifičnim podacima i određenim lijekom koji vas zanima i mi ćemo uskladiti informacije koje nam date sa člancima u našoj opsežnoj bazi podataka i odmah vam poslati PDF kopiju e-poštom.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6 Marco Fichera, 1 odsjek Medicina Li, 2. cine, University of Catania, Catania, 95123, Italija;2 Centar za eksperimentalnu onkologiju i hematologiju, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italija;3 Medicinska onkologija, AOU Poliklinika “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italija;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italija;5 Medicinska genetika, ASP, Sirakuza, 96100, Italija;6 Odsjek za biomedicinske i biotehnološke nauke, Univerzitet u Kataniji, medicinska genetika, Katanija, Italija, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italija Komunikacije: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected];[zaštićeno e-poštom] Svrha: Mutacije zametne linije u BRCA1 i BRCA2 i utvrđeni rak dojke (BC), jajnika (OC) i drugi povezani sa doživotnim rizikom od raka. Testiranje na BRCA gen je ključno za procjenu individualnog rizika, kao i za pronalaženje metoda prevencije kod zdravih nositelja i prilagođavanje tretmana kod pacijenata oboljelih od raka. Iako postoje široki geografski podaci o vBRCA2 u svim regijama vBRCA2. BRCA patogene varijante u sicilijanskim porodicama, nedostaju studije koje su posebno ciljane na populacije u istočnoj Siciliji. Cilj naše studije bio je istražiti incidencu i distribuciju BRCA patogenih promjena zametne linije u kohorti pacijenata s BC sa istočne Sicilije i procijeniti njihovu povezanost sa specifičnim karakteristikama prisutnosti BC-a u progeneraciji tumora sa sljedećim karakteristikama prisutnosti BC-a. REZULTATI: Sveukupno, 35 pacijenata (9%) imalo je BRCA patogenu varijantu, 17 (49%) u BRCA1 i 18 (51%) u BRCA2. BRCA1 promjene su preovlađujuće kod trostruko negativnih pacijenata sa BC, dok su BRCA2 mutacije češće kod luminalnih pacijenata sa tumorima bez BC-a i BRCA1 pacijenata. životni indeks. Zaključci: Naši nalazi pružaju pregled statusa mutacije BRCA kod pacijenata sa BC sa istočne Sicilije i potvrđuju ulogu NGS analize u identifikaciji pacijenata sa naslednim BC. Sveukupno, ovi podaci su u skladu sa prethodnim dokazima koji podržavaju BRCA skrining za pravilnu prevenciju i lečenje raka kod nosilaca mutacije.
Rak dojke (BC) je najčešći malignitet u svijetu i najsmrtonosniji rak kod žena.1 Biološke karakteristike koje određuju BC prognozu i kliničko ponašanje su opširno proučavane i djelimično razjašnjene tokom vremena. Zapravo, nekoliko surogat markera se trenutno koristi za klasificiranje BC u različite molekularne podtipove. To su receptor za BC u različitim molekularnim podtipovima. ifikaciju, indeks proliferacije Ki-67 i tumorski grad (G).2 Kombinacija ovih varijabli identificirala je sljedeće kategorije BC: 1) Luminalni tumori, koji pokazuju ekspresiju ER i/ili PgR, činili su 75% BC. Ovi tumori su dalje podijeljeni na Luminalni A, kada je Ki-67 bio ispod 20% i na Luminalni B, kada je Ki-67 bio negativan, i na Lumin B iznad ili HER2 bio je jednak, ili HER2 negativan, 2 amplifikacija, bez obzira na indeks proliferacije;2) HER2+ tumori koji su ER i PgR negativni, ali pokazuju pojačanje HER2. Ova grupa čini 10% svih tumora dojke;3) Trostruko negativni karcinom dojke (TNBC), koji ne pokazuje ekspresiju ER i PgR i pojačanje HER2, čini oko 15% karcinoma dojke.2-4
Među ovim podtipovima BC, stepen tumora i indeks proliferacije predstavljaju presečne biomarkere koji su direktno i nezavisno povezani sa agresivnošću i prognozom tumora.5,6
Pored gore navedenih bioloških karakteristika, uloga naslijeđenih genetskih promjena koje dovode do razvoja BC-a je postala sve važnija u posljednjih nekoliko godina.7 Otprilike 1 od 10 tumora dojke naslijeđuje se zbog promjena u zametnoj liniji u specifičnim genima.8 Dvije velike epidemiološke studije koje su uključivale više od 180 000 žena nedavno su identificirale gen, ATM1, BCA1 (ATM ARD grupa žena). 1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C i RAD51D) prvenstveno odgovorni za nasledni BC. Među ovim genima, BRCA1 i BRCA2 (u daljem tekstu BRCA1/2) pokazali su najjaču korelaciju sa nastankom tumora dojke.9-12 U stvari, kao i druge maligne mutacije BRCA, rizik za životni vek BRCA 1BC značajno povećavaju rizik za život. uključujući jajnike, prostatu, gušteraču, kolorektalni i melanom. Od 13 do 80 godina, kumulativna incidencija BC je 72% kod žena sa BRCA1 patogenom varijantom (PV) i 69% kod žena sa BRCA2 PV.14
Primjetno, nedavna publikacija sugerira da rizik od BC ovisi o vrsti PV. Zapravo, u poređenju s patogenim varijantama skraćenja, očigledne missense varijante, posebno u BRCA1 genu, povezane su sa smanjenim rizikom od BC, posebno kod starijih žena.15
Prisustvo BRCA1 ili BRCA2 PV je povezano s različitim biološkim i kliničko-patološkim karakteristikama.16,17 BRCA1-povezani BC imaju tendenciju da budu klinički agresivni, slabo diferencirani i visoko proliferativni. Ovi tumori su obično trostruko negativni i imaju ranu dob početka. životni indeksi. Ovi tumori su češći u lumenu B i obično se javljaju kod starijih odraslih osoba.16-18 Posebno, mutacije u BRCA1 i BRCA2 povećavaju osjetljivost na specifične tretmane, uključujući soli platine i ciljane lijekove kao što su inhibitori poli(ADP-riboze) polimeraze (PARPi).19,20
Tokom proteklih nekoliko godina, implementacija sekvenciranja sljedeće generacije (NGS) u kliničkoj praksi omogućila je sve većem broju pacijenata s BC da se podvrgnu molekularnom testiranju na sindrome osjetljivosti na rak, uključujući BRCA1/2.21 Istovremeno, definicije zasnovane na preciznim kriterijima u vezi sa porodičnom anamnezom, demografskim i kliničkopatološkim karakteristikama vrijednim boljeg identifikacije2 u ovom kontekstu2/2 BR CA su dokazi za identifikaciju2 BRCA. akumuliranje na BRCA1/2 skriningu u određenim populacijama, naglašavajući razlike između geografskih regiona.24–27 Iako postoje izvještaji o BC kohorti na zapadnoj Siciliji, manje podataka je dostupno o BRCA1/2 skriningu u populaciji istočne Sicilije.28,29
Ovdje opisujemo rezultate BRCA1/2 skrininga zametne linije kod pacijenata s BC sa istočne Sicilije, dalje povezujući prisustvo BRCA1 ili BRCA2 mutacija sa glavnim kliničko-patološkim karakteristikama ovih tumora.
Retrospektivna studija je sprovedena u “Centru za eksperimentalnu onkologiju i hematologiju” u bolnici Policlinico. Rodolico – San Marco u Kataniji. Od januara 2017. do marta 2021. godine, ukupno 455 pacijenata sa dojkama i jajnicima, melanomom, pankreasom ili porođajnim genom. u skladu sa Helsinškom deklaracijom, a svi učesnici su dali pismeni informirani pristanak prije molekularne analize.
Histološke i biološke karakteristike (ER, PgR, HER2 status, Ki-67 i stepen) BC procijenjene su na biopsiji jezgre ili hirurškim uzorcima, uzimajući u obzir samo agresivne komponente tumora. Na osnovu ovih karakteristika, BC su klasificirani na sljedeći način: luminalni A (ER+ i/ili PgR+, HER2-, ili %), Ki-Rg, Pg 6. Ki-67≥20%), luminalni B-HER2+ (ER i/ili PgR+, HER2+), HER2+ (ER i PgR-, HER2+) ili trostruko negativni (ER i PgR-, HER2-).
Prije procjene statusa mutacije BRCA1 i BRCA2, multidisciplinarni tim koji uključuje onkologa, genetičara i psihologa obavio je konzultacije o tumorskoj genetici za svakog pacijenta kako bi utvrdio prisustvo BRCA1 i/ili BRCA1.ili osobe sa visokim rizikom od PV u BRCA2 genu. Odabir pacijenata je obavljen u skladu sa smjernicama Italijanskog društva za medicinsku onkologiju (AIOM) i lokalnim preporukama Sicilije.30,31 Ovi kriteriji uključuju: (i) porodičnu anamnezu poznatih patogenih varijanti gena osjetljivosti (npr. BRCA1, BR53,2);(ii) mužjaci sa BC;(iii) one sa BC i OC;(iv) žene sa BC <36 godina, TNBC <60 godina ili bilateralnom BC <50 godina;(v) lična anamneza BC <50 godina i najmanje jedan srodnik u prvom stepenu: (a) BC < 50 godina;(b) ne-mucinozni i negranični OC bilo koje dobi;(c) bilateralni BC;(d) mužjak BC;(e) rak pankreasa;(f) rak prostate;(vi) dvije ili više osobne anamneze BC > 50 godina i porodična anamneza BC, OC ili karcinoma pankreasa za rođake koji su jedni drugima u srodstvu u prvom stepenu (uključujući rođake s kojima je ona u prvom stepenu);(vii) Lična istorija OC i najmanje jednog srodnika u prvom stepenu: (a) pne <50 godina;(b) NOC;(c) bilateralni BC;(d) mužjak BC;(vii) ženka sa seroznim OC visokog stepena.
Uzorak periferne krvi od 20 mL je dobijen od svakog pacijenta i sakupljen u EDTA epruvete (BD Biosciences). Genomska DNK je izolirana iz uzoraka pune krvi od 0,7 mL korištenjem QIAsymphony DSP DNA Midi kita za izolaciju (QIAGEN, Hilden, Italija) prema uputama proizvođača i propuštena kroz mjerni uređaj za izolaciju od 0,7 mL. šunka, MA, SAD) Izvršite kvantifikaciju.Ciljno obogaćivanje i pripremu biblioteke vrši Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, spreman za učitavanje u komplet Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 za automatsku pripremu biblioteke u skladu sa uputstvima proizvođača. Komplet se sastoji od dva multipleks PCR skupa prajmera koji se mogu koristiti za proučavanje svih BRCA1 (NM_0070) prajmerskih grupa BRCA1 (NM_00700NM_930). ukratko, 15 µL svakog razrijeđenog uzorka DNK (10 ng) je dodano na pločice sa bar kodom za pripremu biblioteke i svi reagensi i potrošni materijali su stavljeni na Ion Chef™ instrument. Automatska priprema biblioteke i objedinjavanje biblioteke uzoraka sa bar kodom su zatim izvedeni na instrumentu Ion Chef™. Waltham, MA, SAD) prema uputstvima proizvođača. Konačno, biblioteke se kombinuju u ekvimolarnim omjerima u epruvetama za uzorke Ion Chef™ biblioteke (epruvete sa bar kodom) i učitavaju se na Ion Chef™ instrument. Sekvenciranje je izvedeno korištenjem Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) instrumenta (Thermo Fisher Scientific) koristeći Scientific Chip S11 (Thermo Fisher Scientific). fic). Analizu podataka izvršili su Amplicon Suite (SmartSeq srl) i Ion Reporter Software.
Sve varijante nomenklature su slijedile trenutne smjernice Konzorcijuma za varijacije ljudskog genoma, dostupne na internetu (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Klinički značaj BRCA1/2 varijanti definiran je korištenjem klasifikacije Međunarodnog konzorcija ENIGMA (Evidence-Based Consortium, Evidence-Based Network for Interpretinge All Consulting). baze podataka kao što su ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD i UMD. Klasifikacija uključuje pet različitih kategorija rizika: benigni (kategorija I), vjerovatno benigni (kategorija II), varijanta neizvjesnog značaja (VUS, kategorija III), vjerovatno patogena (kategorija IV), i analiza proteinske strukture Vca na patogenu strukturu i Vca. informativni alat sa pristupom do 30 baza podataka.32
Da bi se svakom VUS-u dodijelio potencijalni klinički značaj, korišteni su sljedeći algoritmi za proračunsko predviđanje proteina: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph.gdvgdgvgvgv2/) i Align. d_input.php). Varijante klasifikovane kao klasa 1 i 2 smatrane su divljim tipom.
Sanger sekvenciranje je potvrdilo prisustvo svake patogene varijante. Ukratko, par specifičnih prajmera je dizajniran za svaku otkrivenu varijantu korištenjem referentnih sekvenci gena BRCA1 i BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 i NG_012772.3, NM_9CR je nakon toga izvršio Sanger, odnosno ref.). sekvenciranje.
Pacijenti koji su bili negativni na BRCA1/2 gen testirani su amplifikacijom sonde zavisne od multipleksne ligacije (MLPA) prema uputama proizvođača kako bi se procijenilo prisustvo velikih genomskih rearanžmana (LGR). Ukratko, uzorci DNK su denaturirani i do 60 BRCA1 i BRCA2 gena korišćeno je u DNA specifičnim sekvencama. proizvodi amplifikacije, koji se sastoje od jedinstvenog seta PCR amplikona, zatim su analizirani kapilarnom elektroforezom i softverom Cofalyser.Net u vezi sa odgovarajućim tabelama Cofalyser specifičnim za serije (www.mrcholland.com).
Odabrane kliničkopatološke varijable (histološki stupanj i Ki-67% indeks proliferacije) bile su povezane sa prisustvom BRCA1/2 PV, izračunato korištenjem softvera Prism v. 8.4 korištenjem Fisherovog egzaktnog testa uz pretpostavku da je p-vrijednost <0,05 značajna.
Između januara 2017. i marta 2021. godine, 455 pacijenata je testirano na mutacije BRCA1/2 zametne linije. Testiranje mutacija obavljeno je u Centru za eksperimentalnu onkologiju i hematologiju bolnice Policlinico.Prema Sicilijanskim smjernicama (http://www.gurs.regione.hdiceps.com.ua/diceps.com). 10 Gennaio 2020), Rodolico of Catania – San Marco” ukupno, 389 pacijenata Bilo je karcinoma dojke, 37 raka jajnika, 16 karcinoma gušterače, 8 raka prostate i 5 melanoma.Distribucija pacijenata prema tipu raka i rezultatima analize prikazana je na slici 1.
Slika 1 prikazuje dijagram toka koji prikazuje pregled studije. Pacijenti sa tumorima dojke, melanoma, pankreasa, prostate ili jajnika testirani su na mutacije u BRCA1 i BRCA2 genima.
Skraćenice: PVs, patogena varijanta;VUS, varijanta neizvjesnog značaja;WT, BRCA1/2 sekvenca divljeg tipa.
Selektivno smo fokusirali naše studije na kohorte raka dojke. Pacijentkinje su imale medijan starosti od 49 godina (raspon 23-89) i bile su pretežno žene (n=376, ili 97%).
Od ovih ispitanika, 64 (17%) je imalo BRCA1/2 mutacije i svi su bili ženskog pola. Trideset pet (9%) je imalo PV, a 29 (7,5%) imalo je VUS. Sedamnaest (48,6%) od 35 patogenih varijanti pojavilo se u BRCA1 i 18 (51,4%) dok se pojavilo u BRCA1 (5BRCA27 %) (2) .8%) u BRCA2 (Slike 1 i 2). LGR nije bio prisutan u MLPA analizi.
Slika 2. Analiza BRCA1 i BRCA2 mutacija kod 389 pacijenata sa karcinomom dojke. (A) Distribucija patogenih varijanti (PV) (crvena), varijanti neizvjesnog značaja (VUS) (narandžasta) i WT (plava) kod 389 pacijenata s karcinomom dojke;(B) 389 pacijenata sa karcinomom dojke Trideset pet (9%) je imalo BRCA1/2 patogene varijante (PV). Među njima, 17 (48,6%) su bili nosioci BRCA1 PV (tamnocrveni) i 18 (51,4%) nosioci BRCA2 (svetlocrveni);(C) 29 (7,5%) od 389 ispitanika imalo je VUS, 5 (17,2%) BRCA1 gena (tamno narandžaste) i 24 (82,8%) BRCA2 gena (svetlo narandžaste).
Skraćenice: PVs, patogena varijanta;VUS, varijanta neizvjesnog značaja;WT, BRCA1/2 sekvenca divljeg tipa.
Zatim smo istražili prevalenciju molekularnih podtipova BC kod pacijenata sa BRCA1/2 PV. Distribucija je uključivala 2 (5,7%) luminalnog A, 15 (42,9%) luminalnog B, 3 (8,6%) luminalnog B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ i 13 (5,7%) HER2+ i 13 (37,1%) luminalnih pacijenata (37.1A mob.br.9%). %) je imalo luminalni B BC, 2 (11,8%) je imalo HER2+ bolest, a 10 (58,8%) je imalo TNBC. Tumori bez BRCA1 mutacija bili su ili luminalni A ili luminalni B-HER2+ (Slika 3). U BRCA2-pozitivnoj podgrupi, 10 (55,6%) su bili luminalni B-tumori (55,6%) (55,6%) luminalni B-3. 16,7%) TNBC i 2 (11,1%) su bili luminalni A (Slika 3). U ovoj grupi nisu bili prisutni HER2+ tumori. Dakle, BRCA1 mutacije su preovlađujuće kod pacijenata sa TNBC, dok su BRCA2 promjene predominantne kod osoba sa lumenom B.
Slika 3 Prevalencija podtipova raka dojke kod pacijenata sa patogenim varijantama u BRCA1 i BRCA2. Histogrami koji pokazuju distribuciju BRCA1- (tamno crvena) i BRCA2- (svetlocrvena) PV među molekularnim podtipovima pacijenata sa karcinomom dojke. Brojevi prijavljeni u svakoj kutiji predstavljaju procenat pacijenata sa brBRCABRCA podtip raka dojke.
Skraćenice: PVs, patogena varijanta;HER2+, pozitivan receptor 2 humanog epidermalnog faktora rasta;TNBC, trostruko negativan rak dojke.
Nakon toga, procijenili smo tip i lokalizaciju gena BRCA1 i BRCA2 PV-a. U BRCA1 PV-u, uočili smo 7 pojedinačnih varijanti nukleotida (SNV), 6 delecija, 3 duplikacije i 1 inserciju. Samo jedna mutacija (c.5522delG) predstavlja najčešće novo otkriće kod oba subjekta c35. 9delCTAAT.Ova promjena uključuje deleciju pet nukleotida (CTAAT) u BRCA1 eksonu 15, što rezultira zamjenom aminokiseline leucinom tirozinom na kodonu 1679, a zbog translacijskog pomaka okvira sa predviđenim alternativnim stop kodonom koji je doveo do preranog skraćivanja proteina, nije otkriveno samo jedno odstranjivanje proteina. Konsenzus regiona mesta spajanja (c.4357+1G>T) (Tabela 1).
Što se tiče BRCA2 PV, primijetili smo 6 delecija, 6 SNV-a i 2 duplikacije. Nijedna od pronađenih promjena nije nova. Tri mutacije su se ponovile u našoj populaciji, c.428dup i c.8487+1G>A uočene kod 3 subjekta, nakon čega slijedi c.5851_584. ponavljanje C u eksonu 5 BRCA2, za koje je predviđeno da kodira skraćeni, nefunkcionalni protein. Mutacija c.8487+1G>A se javlja u introničnoj regiji BRCA2 introna 19 (± 1,2) i utiče na konsenzus sekvence spajanja, što rezultira izmijenjenom stazom spajanja c.8487+1G>A koja rezultira abnormalnim proteinom c. mrav je zbog delecije od 4 nukleotida sa nukleotidnih pozicija 5851 do 5854 u kodirajućem egzonu 10 gena BRCA2 i rezultira translacijskim pomakom okvira sa predviđenim alternativnim stop kodonom (p.S1951WfsTer). Primjetno, kao što je ranije objavljeno, oba c.A80 su otkrili isti c.A80. pacijent.34 Prva mutacija uključuje zamjenu adenozina (A) u BRCA2 eksonu 7 sa nukleotidom koji sadrži gvanin (G), što rezultira promjenom valina u izoleucin na kodonu 211, izoleucin Aminokiselina je aminokiselina s vrlo sličnim svojstvima. Ova promjena utječe na varijaciju normalne mRNA u dvostruko lociranoj regiji. mine (T) supstitucija prije eksona 13 gena koji kodira BRCA2. Promjena c.7008-2A>T može generirati više transkripata različite dužine. Nadalje, u grupi BRCA2 PV, 4 od 18 promjena (22,2%) su bile intronične.
Zatim smo mapirali BRCA1/2 štetne mutacije u funkcionalnim domenima i regionima koji se vezuju za proteine ​​(slika 4). U BRCA1 genu, 50% PV je bilo locirano u regionu klastera raka dojke (BCCR), dok je 22% mutacija bilo locirano u regionu klastera karcinoma jajnika (OCCR) (Slika 3BRCA5% PVvarianta, na slici 3BRCA5% PVvari). BCCR region i 42,8% mutacija su locirani u OCCR (slika 4B). Zatim smo procijenili lokaciju PV unutar BRCA1 i BRCA2 proteinskih domena. Za BRCA1 protein, pronašli smo tri PV u domenima petlje i zavojnice, i dvije mutacije u domenu BRCT4BRA od BRCT-a za BRCA2 (sl. BRCA4Vma protein). domena ponavljanja, dok su 3 intronske i 3 egzonske promjene otkrivene u domenima koji se vezuju za oligo/oligosaharide (OB) i tower (T) (slika 4B).
Slika 4 Šematski prikaz BRCA1 i BRCA2 proteina i lokalizacija patogenih varijanti. Ova slika prikazuje distribuciju patogenih varijanti BRCA1 (A) i BRCA2 (B) kod pacijenata sa karcinomom dojke. Egzonske mutacije su prikazane plavom bojom, dok su introničke varijante prikazane narandžastom. BRCA1 protein sadrži domen petlje (RING) i sekvencu nuklearne lokalizacije (NLS), domenu coiled-coil, domenu SQ/TQ klastera (SCD) i BRCA1 C-terminalnu domenu (BRCT). vezujući (OB) nabori, toranj domen (T) i NLS na strani C. Područja koja se nazivaju region klastera raka dojke (BCCR) i region klastera raka jajnika (OCCR) su prikazani na dnu.* Predstavlja mutacije koje određuju stop kodone.
Zatim smo istražili kliničko-patološke karakteristike BC koje bi mogle korelirati sa prisustvom BRCA1/2 PV. Potpuni klinički zapisi bili su dostupni za 181 BRCA1/2-negativnog pacijenta (koji nisu nosioci) i sve nosioce (n = 35). Postojala je korelacija između stope proliferacije tumora i stepena.
Izračunali smo distribuciju Ki-67 na osnovu medijane naše kohorte (25%, raspon <10-90%). Subjekti sa Ki-67 < 25% su definisani kao „nizak Ki-67″, dok su pojedinci sa vrednostima ≥ 25% smatrani „visokim Ki-67″. Značajne razlike Ki-67″. (slika 5A).
Slika 5 Korelacija Ki-67 sa distribucijom stepena kod žena sa karcinomom dojke sa i bez BRCA1 i BRCA2 PVs. (A) Okvirni dijagram koji prikazuje srednje vrednosti Ki-67 kod 181 pacijenata sa BC koji nisu nosioci u odnosu na BRCA1 (18) ili BRCA2 (17) PV pacijenata. P vrednosti su smatrane za B BC statistički značajne pacijentkinje sa karcinomom. histološke grupe (G2 i G3) prema statusu mutacije BRCA1 i BRCA2 (WT subjekti, BRCA1 i BRCA2 PV nosioci).
Isto tako, ispitali smo da li je stepen tumora u korelaciji sa prisustvom BRCA1/2 PV. Pošto je G1 BC bio odsutan u našoj populaciji, podelili smo pacijente u dve grupe (G2 ili G3). U skladu sa rezultatima Ki-67, analiza je otkrila statistički značajnu korelaciju između stepena tumora i BRCA1 BC mutacije (u poređenju sa višom mutacijom tumora Gp pro-portri u Gp ne-carrior mutaciji). 0,005) (Slika 5B).
Napredak u tehnologiji sekvenciranja DNK omogućio je neviđeni napredak u BRCA1/2 genetskom testiranju, sa ključnim implikacijama za pacijente sa porodičnom istorijom raka. Do danas je identifikovano i klasifikovano oko 20.000 BRCA1/2 varijanti prema Američkom društvu za medicinsku genetiku 35 i ENIGta mu/136 sistemu dobro poznat. Unutar Italije, stopa BRCA1/2 PV se kretala od 8% do 37%, pokazujući široku varijabilnost unutar zemlje.38,39 Sa populacijom od skoro 5 miliona, Sicilija je peta po veličini regija u Italiji u smislu broja stanovnika. na dijelu ostrva.
Naša studija je jedan od prvih izvještaja o incidenci BRCA1/2 PV kod pacijenata sa BC-om na istočnoj Siciliji.28 Našu analizu smo fokusirali na BC, jer je ovo daleko najčešća bolest u našoj kohorti.
Prilikom testiranja 389 pacijenata sa BC-om, 9% je imalo BRCA1/2 PV, ravnomjerno raspoređene između BRCA1 i BRCA2. Ovi rezultati su u skladu s onima koji su prethodno prijavljeni u italijanskoj populaciji.28 Zanimljivo je da su 3% (13/389) naše kohorte bili muškarci. Ova stopa je viša od očekivane za muške karcinoma dojke/BC2 na osnovu selekcije muške populacije (1% CA1 od svih CA1 populacije). Međutim, nijedan od ovih muškaraca nije razvio BRCA1/2 PV, tako da su bili kandidati za dalju molekularnu analizu kako bi se isključilo prisustvo rjeđih mutacija kao što su PALB2, RAD51C i D, između ostalih. Varijante neizvjesnog značaja pronađene su kod 7% ispitanika kod kojih je BRCA2 VUS bio evidentan. Čak je i ovaj prethodni rezultat konzistentan.428.
Kada smo analizirali distribuciju BC molekularnih podtipova kod BRCA1/2 mutantnih žena, potvrdili smo poznate povezanosti između TNBC i BRCA1 PV (58,8%) i između luminalnog B BC i BRCA2 PV (55,6%).16,43 Luminalni A i HER2+ tumori u BRCA1/2+ tumorima u BRCA1 i BRCA1 PV su konzistentni podaci iz literature za PV1,64BR.
Zatim se fokusiramo na tip i lokaciju BRCA1/2 PV. U našoj kohorti, najčešći BRCA1 PV je bio c.5035_5039delCTAAT. Iako Incorvaia et al.nisu opisali ovu varijantu u svojoj sicilijanskoj kohorti, drugi autori su je prijavili kao zametnu liniju BRCA1 PV.34 Nekoliko BRCA1 PV je pronađeno u našoj kohorti – npr. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA i c.5266dupC – c.5266dupC – od kojih su pronađene dvije, od kojih su dvije,1.BR.2. 181T>G i c.5266dupC) se obično nalaze u Aškenazi Jevrejima istočne i srednje Evrope (Poljska, Češka), slovenačka, austrijska, mađarska, bjeloruska i njemačka), 44,45 i, u Sjedinjenim Državama i Argentini, nedavno je definirana kao “ponavljajuća varijanta zametne linije” i44 OC kod pacijenata s rakom istočne Italije. pacijenata sa sjeverne Sicilije u Palermu i Messini. Zanimljivo je da su čak i Incorvaia et al.pronašao varijantu c.3253dupA u nekim porodicama u Kataniji.28 Najreprezentativniji BRCA2 PV-ovi su c.428dup, c.5851_5854delAGTT i intronička varijanta c.8487+1G>A, koje su opisane detaljnije 28 kod pacijenta u Palermu,428d PV je bilo c. ed u domaćinstvima na sjeverozapadu Sicilije, uglavnom u regijama Trapani i Palermo, dok je c.5851_5854delAGTT PV uočen u domaćinstvima na sjeverozapadu Sicilije. Varijanta 8487+1G>A bila je češća kod subjekata iz Messine, Palerma, i Caltanisbetta.prethodno je opisana promjena c.5851_5854delAGTT u Kolumbiji.37 Još ​​jedan BRCA2 PV, c.631+1G>A, pronađen je kod pacijenata sa BC i OC sa Sicilije (Agrigento, Siracusa i Ragusa).28 Primetno je da smo uočili koegzistenciju dvije varijante BRCA22>c.30A2>c. ) kod istog pacijenta, za kojeg smo pretpostavili da je segregiran u cis modu, kao što je ranije objavljeno.34,46 Ove BRCA2 uble mutacije su zaista često uočene u italijanskoj regiji i otkriveno je da uvode preuranjene stop kodone, utičući na spajanje glasničke RNK i uzrokujući neuspjeh BRCA2 proteina.47,44
Također smo mapirali BRCA1 i BRCA2 PV u navodnim OCCR i BCCR regionima proteinskih domena i gena. Ove regije su opisali Rebbeck et al.kao rizična područja za razvoj karcinoma jajnika i raka dojke, respektivno.49 Međutim, dokazi o povezanosti između lokacije varijanti zametne linije i rizika od raka dojke ili jajnika ostaju kontroverzni.28,50-52 U našoj populaciji, BRCA1 PV-ovi su bili pretežno locirani u BCCR regiji, dok su BRCA2 PV-ovi bili locirani između bilo koje od BRCA2 PV-a koje smo ikada mogli pronaći u regiji koja nije bila locirana u regiji. navodne OCCR i BCCR regije i karakteristike BC. Ovo može biti zbog ograničenog broja pacijenata sa BRCA1/2 mutacijama. Iz perspektive proteinskog domena, BRCA1 PV su raspoređeni duž cijelog proteina, a BRCA2 promjene se prvenstveno nalaze u domenu ponavljanja BRC.
Konačno, doveli smo u korelaciju kliničko-patološke karakteristike BC sa BRCA1/2 PV. Zbog ograničenog broja uključenih pacijenata, pronašli smo samo značajnu korelaciju između Ki-67 i stepena tumora. Iako je procjena i tumačenje Ki-67 donekle kontroverzna, sigurno je da su visoke stope proliferacije povezane s ponovnim pojavljivanjem, povećanjem rizika od preživljenja i smanjenim rizikom od preživljenja. a "niski" Ki-67 je 20%. Međutim, ovaj prag se ne odnosi na našu populaciju pacijenata s mutacijom BRCA1/2, koja ima srednju vrijednost Ki-67 od 25%. Ovaj trend u visokim stopama Ki-67 može se objasniti prevalencijom u našim luminalnim B i TNBC kohortama, od kojih je nekoliko prisutnih luminalnih A-How tumora, čini se da je bilo prisutnih luminalnih A-5 tumora, koji sugeriraju da su neki od luminalnih A-5 tumora bili prisutni –3 koji su bili veći od Ki-6 tumora. 0%) može bolje stratificirati pacijente prema njihovoj prognozi.53,54 Prema rezultatima naše analize, značajna korelacija nije iznenađujuća. Javlja se između visokog Ki-67 i stupnjeva i prisustva BRCA1 PV. Zapravo, tumori povezani s BRCA1 tipični su za TNBC i pokazuju agresivnije karakteristike.16,17
U zaključku, ova studija pruža izvještaj o mutacijskom statusu BRCA1/2 u BC kohorti sa istočne Sicilije. Sveukupno, naši nalazi su u skladu s postojećim dokazima, kako u pogledu prevalencije mutacija tako i kliničkopatoloških karakteristika u BC. Više studija u većim populacijama BRCA1/2-mutantnih pacijenata, kao što je proširena analiza prisutnosti mutantnih mutantnih BC pacijenata, je proširena analiza prisustva mutantnog BC-a PV koji su različiti i rjeđi od BRCA1/2. Ovo će omogućiti identifikaciju i pravilno upravljanje sve većim brojem subjekata s povećanim rizikom od raka zbog genetskih mutacija.
Potvrdili smo da su pacijenti potpisali informirani pristanak da anonimno daju svoje uzorke tumora u svrhu istraživanja. Svi pacijenti su potpisali pismeni informirani pristanak prema Helsinškoj deklaraciji. Prema politici AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, ova studija je izuzeta od etičkog pregleda jer je BRCA1consoentna analiza također obavljena u skladu s kliničkom praksom BRCA1/2. korištenje njihovih podataka u istraživačke svrhe.
Zahvaljujemo prof. Paolu Vigneriju na njegovoj pomoći u njezi pacijenata sa karcinomom dojke na zahtjev Etičkog odbora.
Federica Martorana prijavljuje honorare od Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Ostali autori izjavljuju da nema sukoba interesa u ovom radu.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Globalna statistika raka 2020: GLOBOCAN procjenjuje učestalost i smrtnost od 36 karcinoma u 185 zemalja širom svijeta. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.3216ca: