„Nikad nemojte sumnjati da mala grupa promišljenih, posvećenih građana može promijeniti svijet.Zapravo, to je jedino tamo.”
Cureusova misija je da promijeni dugogodišnji model medicinskog izdavaštva, u kojem podnošenje istraživanja može biti skupo, složeno i dugotrajno.
Plazma/prp bogata trombocitima, regeneracija tkiva, aktivacija trombocita, proliferativna terapija glukoze, trombociti, proliferativna terapija
Citirajte ovaj članak kao: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17. maja 2022.) Utjecaj glukoze na broj i volumen trombocita: implikacije za regenerativnu medicinu.Lijek 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plazma bogata trombocitima (PRP) i otopine hipertonične glukoze se obično koriste za injekcije u regenerativnoj medicini, ponekad zajedno.Utjecaj hipertonične glukoze na lizu i aktivaciju trombocita nije ranije prijavljen.Ispitivali smo učinak povišenih koncentracija glukoze na broj trombocita i eritrocita, kao i na volumen ćelija u PRP i punoj krvi (WB).Brzo djelomično smanjenje broja trombocita dogodilo se sa svim mješavinama glukoze pomiješanim s PRP ili punom krvlju, što je u skladu s djelomičnom lizom. Nakon prve minute, broj trombocita je ostao stabilan, što ukazuje na brzu akomodaciju rezidualnih trombocita do ekstremne (>2000 mOsm) hipertoničnosti. Nakon prve minute, broj trombocita je ostao stabilan, što ukazuje na brzu akomodaciju rezidualnih trombocita do ekstremne (>2000 mOsm) hipertoničnosti. Nakon prve minute broj trombocita ostaje stabilan, što ukazuje na bistruju akkomodaciju konačnog trombocita do ekstremnog (>2000 mOsm) hipertonusa. Nakon prve minute, broj trombocita je ostao stabilan, što ukazuje na brzu akomodaciju rezidualnih trombocita do ekstremne (>2000 mOsm) hipertoničnosti.第一分钟后,血小板计数保持稳定,表明残余血小板迅速适应极競（> 200 m2000 mOsm）高渗状态. Nakon prve minute, broj trombocita ostaje stabilan, što ukazuje na brzu adaptaciju konačnog trombocita u ekstremalnom (>2000 mOsm) giperosmolarnom stanju. Nakon prve minute, broj trombocita je ostao stabilan, što ukazuje na brzu adaptaciju rezidualnih trombocita u ekstremno (>2000 mOsm) hiperosmolarno stanje.Koncentracije glukoze od 25% i više rezultirale su značajnim povećanjem srednjeg volumena trombocita (MPV), što ukazuje na ranu fazu aktivacije trombocita.Potrebne su daljnje studije kako bi se utvrdilo dolazi li do lize ili aktivacije trombocita i da li samo hipertonična injekcija glukoze ili u kombinaciji s PRP-om može pružiti dodatnu kliničku korist.
Pedesetih godina prošlog stoljeća američki kirurg George Hackett otkrio je da može trajno ublažiti bolove u zglobovima i leđima kod mnogih pacijenata ubrizgavanjem proliferativnog rastvora u tetive i ligamente.Njegovi eksperimenti na zečevima pokazali su da je tretman, koji je nazvao proliferativna terapija, uzrokovao povećanje i jačanje tetiva.Histološke studije su potvrdile da se novi kolagen proizvodi tokom ovog procesa [1].
Tokom prvih nekoliko decenija isprobano je mnogo različitih rješenja za distribuciju.Do 1990-ih, većina praktičara smatrala je visoke koncentracije glukoze najsigurnijim i najefikasnijim metodom.Međutim, mehanizam djelovanja ostaje nejasan.
Nekoliko kliničkih studija sprovedeno je u 20. veku nakon Hackettovog rada.Međutim, 2000-ih došlo je do ponovnog interesa i nekoliko uspješnih kliničkih ispitivanja proliferativne terapije je završeno za liječenje bola u donjem dijelu leđa [2], osteoartritisa koljena [3] i lateralnog epikondilitisa [4].
Regeneracija tkiva zahtijeva učešće matičnih ćelija.Stoga, visoke koncentracije glukoze moraju na neki način inducirati migraciju, replikaciju i diferencijaciju matičnih stanica.Pretpostavljamo da trombociti mogu djelovati kao glasnici i da visoke koncentracije glukoze mogu uzrokovati da trombociti otpuštaju citokine i faktore rasta, čime potiču regenerativne procese, posebno migraciju matičnih stanica u područja visoke koncentracije glukoze.
Aktivacija trombocita uvijek prethodi povećanju intracelularnog kalcija [5].Liu et al.2008. godine su pokazali da visoki nivoi glukoze povećavaju aktivnost kanala kanonskog tipa 6 (TRPC6) prolaznog receptorskog potencijala u plazma membrani, što dovodi do priliva jona kalcijuma u trombocite [6].Druga studija je pokazala da izlaganje marginalne zone mikrotubula jonima kalcija uzrokuje opuštanje, širenje i deformaciju marginalne zone, što zauzvrat uzrokuje promjenu oblika od diska do sfernog, što rezultira srednjim volumenom trombocita (MPV) [7].
Naša hipoteza u ovoj studiji je da izloženost trombocita visokim koncentracijama glukoze utiče na marginalnu zonu mikrotubula i unutarćelijsko okruženje, što dovodi do povećanja MPV.
Svi učesnici su potpisali formular za informirani pristanak nakon što su objašnjeni detalji studije i prije primanja uzoraka.U ovoj studiji korišćeni su samo uzorci PRP sa hematokritom većim od 2% kako bi se za poređenje mogli uključiti broj eritrocita (eritrocita) i srednji korpuskularni volumen crvenih krvnih zrnaca (MCV).
Istraživanje je provedeno u četiri faze, prva faza je bila PRP, a preostale faze puna krv (tabela 1).Kao što je prethodno opisano [8], sve relativne centrifugalne sile (RCF, g-sila) su izračunate iz srednje tačke (Rmid, u cm) krvnog stupca u centrifugalnom špricu.Odlučili smo koristiti MPV kao marker senzibilizacije trombocita i broj trombocita kao indikator potencijalne lize trombocita, a oba se mogu lako izmjeriti na standardnim hematološkim analizatorima.
U prvoj fazi, 47 dobrovoljaca dalo je uzorke krvi – jednu epruvetu etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i jedan uzorak pune krvi PRP (antikoagulansiran natrijum citratom (NaCl, 3%)) (tabela 1).Odmah stavite klackalicu u cijev.Kompletna krvna slika (CBC) je rađena na uzorcima EDTA u tri primjerka, a uzorci NaCl su analizirani u tri primjerka za analizu CBC, a zatim je pripremljen PRP različitim metodama opisanim gore [8].Svi PRP uzorci pripremljeni su centrifugiranjem na 900–1000 g.Miješajte svaki PRP uzorak na vorteks mikseru 5-10 sekundi, a zatim podijelite pet alikvota od 0,5 ml u epruvete.
Da bi se procijenio učinak izloženosti trombocitima na povišene koncentracije glukoze, jednake količine (0,5 ml) od 0%, 5%, 12,5%, 25% i 50% glukoze u vodi pomiješane su s uzorcima trombocita da bi se dobilo 0%, 2,5% 6,25%, 12,5% i 25% mješavine glukoze za tubes sha i 1 minutu.TAC svake mješavine je analiziran u tri primjerka nakon 15 minuta.Broj trombocita (PLT), broj eritrocita, MCV i MPV su usredsređeni za svaku epruvetu, a srednji broj trombocita, broj eritrocita, MCV i MPV su izračunati za sve uzorke PRP.
Nakon što je završena prva faza prikupljanja podataka, primijetili smo značajno povećanje volumena trombocita u PRP trombocitima nakon dodavanja D50W.PRP trombociti ne predstavljaju nužno sve trombocite u krvi, a PRP medij se razlikuje od WB medija.Stoga smo odlučili provesti drugu fazu ispitivanja efekta dodavanja D50W punoj krvi.
Za drugi krug, odabrali smo veličinu uzorka od 30 na osnovu rezultata iz prve serije, kao što je opisano u odjeljku Analiza.U ovoj seriji uzorke krvi dalo je 20 volontera (Tabela 1).Puna krv (1,8 ml) je izvučena u špric od 3 ml i antikoagulirana sa 0,2 ml 40% NaCl.Cijeli špric za krv miješan je pet sekundi vorteks mikserom i CBC je analiziran u tri primjerka.Nakon analize, antikoagulirana krv je dodana u 2 ml 50% glukoze u špricu od 5 ml (konačna koncentracija glukoze je bila približno 25% (D25) i stavljena u epruvetu za mućkanje na 30 minuta. Nakon 30 minuta, D25/CBC u WB špricevima je analiziran u tri primjerka, broj eritrocita i prosječni broj MPV, prosječni broj trombocita i PV LT, broj eritrocita, MCV i MPV izračunati su za svaki uzorak prije i nakon dodavanja glukoze.
Budući da su trombociti u punoj krvi obično izloženi hipertoničnoj glukozi tijekom proliferativne terapije glukozom zbog minimalno invazivne injekcije, a nije uobičajeno kombinirati PRP s hipertoničnom glukozom neposredno prije injekcije, odlučili smo da proučavamo hipertonu glukozu u kombinaciji sa WB u Odjeljku 1. Korak 3 i 4.U svakoj fazi, 20 dobrovoljaca doniralo je 7-8 ml ACD-A (kiselina koja sadrži trinatrijum citrat (22,0 g/l), limunsku kiselinu (8,0 g/l) i glukozu (24,5 g/l), rastvor dekstroze citrata) za antikoagulanse u krvi (Tabela 1).Samo mješavine glukoze veće od 12,5% korištene su da bi se odredio postotak praga povezan s povećanjem MPV-a.U trećoj fazi, 1 ml krvi se stavlja u epruvetu.Zatim miješajte krv na vorteks mikseru 10 sekundi dodavanjem 1 ml 30% glukoze, 40% glukoze ili 50% glukoze u epruvetu kako biste dobili konačnu koncentraciju glukoze od 15%, 20% i 25%, respektivno.Uzorci krvi glukoze su analizirani na CBC odmah nakon miješanja i ponavljani svake dvije minute tokom 30 minuta.
Tokom početnog miješanja, dodavanjem 1:1 hipertonične glukoze i WB ili PRP-a trombociti izlažu koncentracijama iznad 25% na nekoliko sekundi.U četvrtom koraku, da bismo procijenili učinak hipertonične glukoze s minimalnim početnim vršnim koncentracijama i testirali gornju granicu učinka glukoze, dodali smo samo malu količinu krvi u D25W ili D50W.Stavite 1 ml D25W ili D50W u epruvetu i dodajte 0,2 ml WB uz vorteksiranje uzorka 10 sekundi.U ovim slučajevima, krv je bila izložena glukozi u koncentraciji približno 20% iznad konačne koncentracije, umjesto 50% iznad konačne koncentracije kao u fazi 3, što je rezultiralo konačnim koncentracijama glukoze od 20,8% i 41,6%.Mješoviti uzorci su analizirani u istom vremenskom intervalu kao u koraku 3.
U prvom koraku svake serije razblaženja glukoze, uzeto je 30 uzoraka jer je to bila odgovarajuća veličina uzorka za pilot studiju [9].Na kraju svake faze (uključujući prvu fazu), procijenite adekvatnost veličine uzorka koristeći formulu koja se koristi za određivanje veličine uzorka potrebne za procjenu srednje vrijednosti varijable kontinuiranog ishoda u jednoj populaciji.Formula n = Z2 x SD2 /E2.U ovoj jednadžbi, Z je Z-score, SD je standardna devijacija, a E je željena greška [10].Naša alfa je 0,05, što odgovara Z vrijednosti od 1,96, a očekujemo grešku od 5 (u procentima).Stoga rješavamo za n = (1.962 x SD2)/52.Rezultati su pokazali da je veličina uzorka potrebna za svaku fazu bila manja od stvarno prikupljenog broja.
Tokom perioda 1, 3 i 4 koristeći više od jedne koncentracije glukoze, analiziran je efekat različitih koncentracija glukoze poređenjem frakcijske promjene između vremena 0 i svakog sljedećeg vremena (faza 1 na 15 minuta, period 3 na 15 minuta).i četiri na 15 sekundi, zatim svaka dva minuta.) Stope promjena za svaki vremenski period su upoređene korištenjem Mann-Whitney U-testa jer podaci nisu pratili normalnu distribuciju kako je utvrđeno Shapiro-Wilkovim testom normalnosti.Budući da je 1-na-1 analiza nekoliko grupa (pet) izvršena u prvom, trećem i četvrtom koraku (ukupno pet), izvršena je Bonferronijeva korekcija kako bi se željena alfa vrijednost podesila na ≤0,01, ali ne ≤0,05.
Smanjenje broja trombocita sa svim koncentracijama hipertonične dekstroze i povećanje MPV u PRP trombocitima pri >12,5% koncentracije dekstroze: PRP broj trombocita je porastao od jednog do pet puta koncentracije u odnosu na početnu punu krv, varirajući u zavisnosti od metode (nije prikazano). Smanjenje broja trombocita sa svim koncentracijama hipertonične dekstroze i povećanje MPV-a u PRP trombocitima pri >12,5% koncentracije dekstroze: broj PRP trombocita je porastao od jednog do pet puta koncentracije u odnosu na početnu punu krv, u zavisnosti od metode (nije prikazano). Umanjivanje količine trombocita pri svim koncentracijama hipertonične dekstroze i povećanje MPV-a u trombocitama PRP pri koncentracijama dekstroza > 12,5%: broj trombocita PRP se povećao u 1-5 razmaka u odnosu na ishodnu celularnu krvlju, u zavisnosti od metode (nepokazano). Smanjen broj trombocita kod svih hipertoničnih koncentracija dekstroze i povećan MPV u PRP trombocitima pri >12,5% koncentracije dekstroze: PRP broj trombocita se povećao 1-5 puta u odnosu na početnu punu krv, ovisno o metodi (nije prikazano). ).在> 12,5% 的 葡萄糖 浓度 下, 所有 浓度 的 高渗 葡萄糖 降低 血小板 计数, PRP 血小板 中 mpv 增加: 与 基线 全 血 相比, PRP 血小板 计数 从 浓度 的 1 倍 上升 到 5 倍, 因 方法 而异 (未 描述). Pri >12,5% koncentracije glukoze, visoka koncentracija glukoze smanjuje krvnu sliku, PRP krvi MPV se povećava: u poređenju sa 与基线全血, PRP krvna slika se povećava od 1 do 5 puta od koncentracije (nije opisano). Koncentracija glikoze >12,5% svih koncentracija hipertonične glikoze smanjila je broj trombocita, a MPV povisio trombocite PRP: broj trombocita PRP povećava se od 1- do 5-kratnih koncentracija u odnosu na ishodničku koncentraciju cijele krvi, u zavisnosti od metode (nije opisano). Pri koncentracijama glukoze >12,5%, sve hipertenzivne koncentracije glukoze smanjile su broj trombocita i povećale MPV u PRP trombocitima: broj PRP trombocita se povećao 1 do 5 puta u odnosu na početne koncentracije u cijeloj krvi, ovisno o metodi (kao što je opisano).Slika 1 pokazuje da se broj trombocita smanjio za gotovo 75% nakon razrjeđivanja u vodi i za 20-30% nakon 15 minuta razrjeđivanja s različitim koncentracijama glukoze u odnosu na početnu PRP i razrjeđenje 1:1 prilagođeno za volumen (1-k1 s korekcijom volumena).k -1 uzgoj).1 uzgoj).
Broj ćelija u svakom razblaženju izražava se kao deo prvobitnog broja pre razblaženja.
MPV se minimalno smanjio tijekom proizvodnje PRP-a, bez daljnje promjene u koncentracijama razrjeđenja na 12,5% u vodi ili glukozi (uključujući 25% PRP mješavine glukoze) i povećao se za više od 20% nakon razrjeđivanja u 50% otopini glukoze (Sl. 2).).Nasuprot tome, eritrociti nisu pokazali značajnu promjenu volumena pri bilo kojem razrjeđivanju osim H2O.
Prosječna zapremina ćelija u svakom razblaženju izražena je kao procenat prvobitne zapremine pre razblaženja.
Slično, ali manje izraženo smanjenje broja trombocita i povećanje CVR uočeno je u BC izloženom 50% glukoze (da se formulira sa 25% glukoze).Tabela 2 poredi brojeve ćelija i zapremine ćelija u punoj krvi razblaženoj u 50% dekstroze sa PRP podacima faze 1 razblaženim u 50% dekstroze.Promjene u broju eritrocita i RBC MCV nisu bile očigledne i nisu bile u fokusu naše pažnje.
SD = standardna devijacija, MD = srednja razlika između grupa, SE = standardna devijacija srednje razlike, RBC = eritrociti, PLT = trombociti, PRP = plazma bogata trombocitima, WB = puna krv
Nakon dodavanja D50W u WB, procenat gubitka trombocita prilagođen razblaženju bio je 7,7% (310±73 naspram 286±96) u poređenju sa 17,8% za PRP razblaživanje u D50W (664±348 naspram 544±277).MPV WB povećao se za 16,8% (sa 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6), dok je MPV PRP povećan za 26% (9,2 ± 0,8 naspram 11,6 ± 0,7). Iako su srednje razlike u smanjenju broja trombocita i povećanju MPV bile značajno veće kod PRP-a, promjene u smanjenju broja trombocita unutar WB bile su skoro značajne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) i povećanje MPV je bilo značajno (10,1 ± 0,5 do 11,6 ± 0,8 p). Iako su srednje razlike u smanjenju broja trombocita i povećanju MPV bile značajno veće kod PRP-a, promjene u smanjenju broja trombocita unutar WB bile su skoro značajne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) i povećanje MPV je bilo značajno (10,1 ± 0,5 do 11,6 ± 0,8 p).Iako su srednje razlike u smanjenju broja trombocita i povećanju CVR bile značajno veće kod PRP, promjene u padu broja trombocita unutar WB bile su gotovo značajne (310 ± 73 do 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).povećanje MPV je značajno (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). povećanje MPV je bilo značajno (sa 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着蛴大，但WB 台叕杀尡几乎是显着的 (310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%)；p = .06) 001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 叅 叆 大的 几乎 是 显着 的 (((310 ± 73 %) 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增加是. ± 0,6 (+16,8) p < .001).Promjena u smanjenju broja trombocita unutar WB bila je skoro značajna (sa 310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), iako je PRP imao značajno veće srednje razlike u padu broja trombocita i povećanju MPV-a.a povećanje MPV je bilo značajno.(od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) r < 0,001). (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Konačna koncentracija od 20% glukoze bila je potrebna da bi se uočila značajna promjena MPV-a, ali je promjena MPV-a bila izraženija pri konačnoj koncentraciji od 25%.Gubitak trombocita se stabilizirao nakon početnog pada.Primijetili smo početno oštro smanjenje CVR-a, međutim, CVR se brzo obnovio pri konačnoj koncentraciji glukoze od 25%, što je bilo značajno više od nivoa CVR uočenih pri konačnim koncentracijama glukoze od 20% i 15% (Slika 3 i lijevo od Tabele 3; zasjenjeni okviri).označavaju p-vrijednosti ≤ alfa sa Bonferronijevom korekcijom od 0,01).Došlo je i do početnog oštrog pada broja PLT, uočenog u početnoj fazi od 0-15 s, a zatim je ostao stabilan (od 15 s do 30 min; lijevo od tabele 4).
Dodavanje različitih koncentracija glukoze u punoj krvi rezultiralo je početnim brzim smanjenjem MPV-a nakon čega je uslijedio oporavak zavisan od koncentracije od više od 20%.Legenda pokazuje koncentraciju glukoze nakon razrjeđivanja.D15, D20 i D25 izvedeni su u razblaženju 1:1.D21 i D41 su izvedeni u razblaženju 1:5.
Tabela 4 pokazuje promjenu broja trombocita kada se razrijedi u hipertoničnoj glukozi.Uočili smo odnos ovisan o dozi između trenutnog pada PLT brojeva pri razblaženju 1:1 i pri razblaženju 1:5.Upoređujući razblaženja 1:1 kao jednu grupu sa razblaženjima 1:5, grupa 1:1 imala je trenutno smanjenje broja trombocita manje od grupe 1:5 66±48,000 (23%) naspram 99±69,000 (37%)., p = 0,014) u grupi 1:5.Nakon početnog pada na prvoj tački mjerenja, broj trombocita kao postotak glukoze se stabilizirao (slika 4).
Kada se puna krv doda glukozi u omjeru 1:1, broj trombocita se smanjuje za oko 25%.Međutim, kada je puna krv dodana u omjeru 1:5, smanjenje je bilo mnogo veće – oko 50%.
41% glukoze je povećalo MPV brže i dramatičnije od 25% ili 21%.Rezultati MPV-a su prikazani na slici 3. Kod svih ostalih razrjeđenja, nije uočeno trenutno početno smanjenje MPV-a nakon dodavanja 50% glukoze.Kada se koristi 25% glukoze (koncentracija glukoze 20,8% u konačnom razrjeđivanju), promjena MPV je bila uporediva sa promjenom u 20% glukoze u razrjeđenju 1:1 (slika 3).Iako su promjene u MPV u početku bile veće pri mješovitoj koncentraciji od 41% nego pri 25%, razlika u MPV između 41% i 25% nakon 16 minuta više nije bila značajna (Tabela 3, desno).Takođe je zanimljivo da je 25% glukoze povećalo MPV efikasnije od 20,8%.
Ova in vitro studija je djelimično potvrdila našu hipotezu. Pokazao je potencijalnu djelomičnu lizu trombocita primjenom dekstroze, brzu akomodaciju trombocita do ekstremne hipertoničnosti i značajan porast MPV-a kao odgovor na >25% koncentracije hipertonične dekstroze. Pokazao je potencijalnu djelomičnu lizu trombocita primjenom dekstroze, brzu akomodaciju trombocita do ekstremne hipertoničnosti i značajan porast MPV-a kao odgovor na >25% koncentracije hipertonične dekstroze. On je pokazao potencijalnu djeličnu lizu trombocitov primesju dekstroze, akkomodaciju trombocita do ekstremnog gipertonusa i značajno povećanje MPV-a u odgovoru na hipertonsku koncentraciju dekstroza > 25%. Pokazao je potencijalnu delimičnu lizu trombocita sa dekstrozom, brzu akomodaciju trombocita do ekstremne hipertoničnosti i značajno povećanje MPV-a kao odgovor na hipertonične nivoe dekstroze >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应昊应极% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡 萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适受 适 受 鞁应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。. Pokazuje potencijalnu djeličnu lizu trombocitova smjesa s glikozom, prilagođavanje trombocita u ekstremalnom hipertonusu i značajno povećanje MPV-a u odgovoru na koncentraciju hipertonične glikoze > 25%. Pokazuje potencijalnu djelomičnu lizu trombocita mješavinama glukoze, brzu adaptaciju trombocita na ekstremnu hipertoničnost i značajno povećanje MPV-a kao odgovor na hipertoničnu glukozu >25%.Početno povećanje bilo je maksimalno pri 41,6% izloženosti glukozi, ali se povećanje MPV približilo 25% izloženosti glukozi otprilike 20 minuta nakon izlaganja.
Na koncentraciju trombocita utječe glukoza.Primijetili smo da se količina PLT smanjuje pri svim razrjeđenjima glukoze.Oštar pad broja trombocita u H2O (0%) razblaženjima PRP serije može biti povezan sa osmotskom lizom.Alternativno, ovo bi mogao biti artefakt uzrokovan nakupljanjem trombocita, ali to je u suprotnosti s nedostatkom promjene MPV-a pri ovom razrjeđivanju.Ovaj nalaz znači da su neki trombociti vrlo osjetljivi na hipoosmolarnost.
U svim razrjeđenjima glukoze 1:1, količina PLT se smanjila za 20-30%, čak i za D5W (hipotoničan na 252 mOsm), što može ukazivati ​​na specifičan neosmotski učinak glukoze, budući da su i PLT i MPV ostali nepromijenjeni pri trostrukom povećanju koncentracije.glukoze.od D5W do D25W.Zapravo, koncentracije PLT-a su imale tendenciju blagog povećanja s povećanjem osmolarnosti.
Smanjenje PLT između razrjeđenja 1:1 i 1:5 znači da učinak rastvaranja ovisi o početnoj i konačnoj koncentraciji glukoze.Kada bi to ovisilo samo o početnoj koncentraciji, onda bi se očekivalo vidjeti razliku u smanjenju PLT između koncentracija 1:1.Ali mi to ne radimo.Ako efekat lize zavisi samo od konačne koncentracije glukoze, onda ne očekujemo veliku razliku između 20% razblaženja 1:1 i 20,8% razblaženja 1:5.A ipak smo to uradili.
Ako dođe do gubitka trombocita zbog lize trombocita, nastaje djelomični lizat, nakon čega se citokini i faktori rasta oslobađaju u ekstracelularno okruženje.Nekoliko studija je pokazalo da je lizat trombocita skoro jednako efikasan kao i PRP kao rastvor za proliferaciju [11].Sam PRP se pokazao kao efikasno rješenje za liječenje proliferacije [12-14].
Neaktivni trombociti cirkuliraju u obliku diska ojačanog s nekoliko unutrašnjih struktura.Tokom aktivacije poprimaju sferičniji oblik ili oblik amebe, što rezultira povećanjem volumena.Povećanje volumena zahtijeva povećanje površine, što je rezultat ekstruzije sistema otvorenih tubula (OCS) i dodavanja egzocitnih granula na membranu.Ostaje da se utvrdi da li povećanje MPV-a izazvano hipertoničnom glukozom uključuje jedan ili oba ova mehanizma, ali ako je potonji, onda bi povećanje MPV-a ukazivalo na degranulaciju.
Ova studija je pokazala da je izlaganje visokim koncentracijama glukoze na PRP-u ili trombocitima cijele krvi rezultiralo povećanjem MPV-a unutar 15 minuta s koncentracijom glukoze od 25% odnosno 41,6%.
Povećanje MPV-a trombocita može biti posljedica dilatacije zapleta okolnih mikrotubula kao odgovora na priliv kalcija.Liu et al.Pokazalo se da glukoza posreduje u prilivu kalcija kroz kanal TRPC6 trombocita [6].Naša hipoteza je da glukoza inducira relaksaciju zapleta mikrotubula, što dovodi do povećanja MPV i senzibilizacije i/ili aktivacije trombocita.Međutim, sudeći po našim rezultatima, ovo je samo dio priče.U našim testovima nijedna koncentracija ispod D25W nije rezultirala povećanjem MPV-a.S obzirom da nismo testirali izloženost koncentracijama glukoze između 12,5% i 25%, naši rezultati prve faze sugeriraju da može postojati prag u ovom rasponu koncentracija glukoze koji dovodi do povećanja MPV-a.Dalje testiranje u fazama 3 i 4 pokazalo je da se čini da je 20-25% glukoze prag za to, ali ostaje nejasno zašto.
Također smo primijetili ~9% smanjenje MPV nakon centrifugiranja.Nije jasno da li je ovo smanjenje MPV-a posljedica većih i gušćih trombocita zarobljenih u sloju eritrocita centrifuge.Ovo zapažanje može biti važno za kliničare jer može implicirati da su PRP trombociti manji i manje gusti podskup WB trombocita.
U prethodnoj studiji smo pokazali da je priprema PRP ručnim metodama jeftina [8].Ako glukoza senzibilizira trombocite tkiva ili PRP, čineći ih osjetljivijim na aktivaciju, ili ako se PRP proizvodi s djelomičnim svojstvima lizata, to može poboljšati regeneraciju i smanjiti potrebu za terapijom.Stoga, kombinacija PRP-a i visoko koncentrirane glukoze može biti isplativija od PRP-a ili same glukoze.
Naša studija ima nekoliko nedostataka.Prvo, koristimo PRP dobiven nekoliko različitih metoda.To može dovesti do konfliktnih rezultata.Drugo, nismo bili u mogućnosti da izvršimo biohemijsku analizu nijednog od naših uzoraka kako bismo preciznije utvrdili da li je došlo do aktivacije trombocita.Željeli bismo izmjeriti P-selektin, trombocitni faktor 4, monocitne agregate trombocita ili druge markere aktivacije trombocita kako bismo bolje razumjeli stepen ili prisustvo degranulacije alfa granula, ali to je izvan okvira ove studije.Treće, elektronskim mikroskopijom ili drugim metodama nismo bili u mogućnosti potvrditi da je povećanje MPV-a u trombocitima izloženim glukozi posljedica efekta na zapetljavanje mikrotubula.
Mješavine WB ili PRP sa 25% glukoze povećale su MPV, signalizirajući početak aktivacije trombocita, iako ova studija nije pokazala progresiju agregacije ili degranulacije.Hipertonična smjesa glukoze rezultirala je gubitkom trombocita, što je vjerovatno predstavljalo litički efekat.Djelomična aktivacija ili liza trombocita može uzrokovati regeneraciju tkiva nakon injekcije trombocita.Nije jasno do kakvih kliničkih posljedica ove promjene mogu dovesti.Dalja istraživanja su pokazala preciznija mjerenja aktivacije ili lize i procijenila različite kliničke efekte mješavine hipertonične glukoze s WB ili PRP.
Terapija proliferacijom glukoze je jednostavna i jeftina regenerativna terapija koja se brzo širi i podržava klinička istraživanja.Ova studija sugerira fiziološki mehanizam koji bi nam, ako se potvrdi, mogao pomoći da razumijemo dio regenerativnog mehanizma proliferativne terapije.
Biomedicinska i zdravstvena informatika na Univerzitetu Misuri, Medicinski fakultet u Kanzas Sitiju, Kanzas Siti, SAD
Ljudi: Svi učesnici u ovoj studiji su dali ili nisu dali pristanak.Međunarodno društvo za ćelijsku medicinu izdalo je ICMS-2017-003 odobrenje.Sljedeći protokol je odobren za dalju upotrebu od strane Institucionalnog odbora za reviziju Međunarodnog društva za ćelijsku medicinu: Naslov: Proračun prinosa lijeka u plazmi bogate trombocitima na osnovu osnovnog broja trombocita CBC.Subjekti životinja: Svi autori su potvrdili da u ovoj studiji nisu uključene životinje ili tkiva.Sukobi interesa: U skladu sa ICMJE Uniform Disclosure Form, svi autori izjavljuju sljedeće: Podaci o plaćanju/usluzi: Svi autori izjavljuju da nisu dobili finansijsku podršku od bilo koje organizacije za podneseni rad.Finansijski odnosi: Svi autori izjavljuju da trenutno ili u protekle tri godine nemaju finansijske odnose ni sa jednom organizacijom koja bi mogla biti zainteresovana za prijavljen rad.Drugi odnosi: Svi autori izjavljuju da ne postoje drugi odnosi ili aktivnosti koje mogu uticati na poslani rad.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K i dr.(17. maja 2022.) Utjecaj glukoze na broj i volumen trombocita: implikacije za regenerativnu medicinu.Lijek 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al.Ovo je članak otvorenog pristupa koji se distribuira pod uslovima licence Creative Commons Attribution CC-BY 4.0.Dozvoljena je neograničena upotreba, distribucija i reprodukcija u bilo kom mediju, pod uslovom da se navede originalni autor i izvor.