Hvala vam što ste posjetili Nature.com. Verzija pretraživača koju koristite ima ograničenu podršku za CSS. Za najbolje iskustvo, preporučujemo da koristite ažurirani pretraživač (ili isključite način kompatibilnosti u Internet Exploreru). U međuvremenu, kako bismo osigurali kontinuiranu podršku, prikazat ćemo stranicu bez stilova i JavaScripta.
Porozne čestice silicijum dioksida pripremljene su sol-gel metodom sa nekim modifikacijama da bi se dobile makroporozne čestice. Ove čestice su derivatizovane polimerizacijom reverzibilnog adicionog prenosa fragmentacije lanca (RAFT) sa N-fenilmaleimid-metilvinilizocijanatom (PMI) i stirenom da bi se dobilo N-fenilmaleimid-metilvinilizocijanatom (PMI) i stirenom da se dobije N-interkanilmaleinska stanica. čelične kolone (100 × 1,8 mm id) pakovane su kašastim pakovanjem. Ocijenjeno odvajanje PMP kolone peptidne mješavine koja se sastoji od pet peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Argch i performanse digestije humanog entofalbuma, entophase albumin) (HAS). Pod optimalnim uslovima elucije, teoretski broj ploča peptidne mešavine je čak 280 000 ploča/m². Upoređujući performanse separacije razvijene kolone sa komercijalnom Ascentis Express RP-Amide kolonom, uočeno je da je učinak odvajanja PMP kolone bio bolji u odnosu na komercijalnu kolonu u smislu efikasnosti separ.
Poslednjih godina, biofarmaceutska industrija je postala globalno tržište u ekspanziji sa značajnim povećanjem tržišnog udela. Sa eksplozivnim rastom biofarmaceutske industrije1,2,3, analiza peptida i proteina je veoma poželjna. Pored ciljnog peptida, tokom sinteze peptida nastaje i nekoliko nečistoća. proteina u tjelesnim tečnostima, tkivima i ćelijama je izuzetno izazovan zadatak zbog velikog broja potencijalno detektabilnih vrsta u jednom uzorku. Iako je masena spektrometrija efikasan alat za sekvenciranje peptida i proteina, ako se takvi uzorci ubrizgavaju u maseni spektrometar u jednom prolazu, razdvajanje neće biti idealno. Ovaj problem koji će se smanjiti pomoću tečne hromatografije prethodnom analizom MSpariranja može se ublažiti. testovi ulaze u maseni spektrometar u datom trenutku4,5,6. Osim toga, tokom razdvajanja tečne faze, analiti se mogu fokusirati u uskim područjima, čime se koncentrišu ovi analiti i poboljšava osjetljivost detekcije MS. Tečna hromatografija (LC) je značajno napredovala u protekloj deceniji i postala je popularna tehnika u proteomskoj analizi,8,9,17.
Obrnuta fazna tečna kromatografija (RP-LC) široko se koristi za pročišćavanje i odvajanje peptidnih mješavina (ODS) kao stacionarni faza 11.12.S-a ne pružaju zadovoljavajuće odvajanje peptida i proteina zbog njihove složene prirode 14,15. Posebne stacionarne faze potrebne su za analizu ze peptidi i proteini s polarnim i ne-polarnim mozgovama za interakciju i zadržavanje hromatografije na modu, koji pružaju multimodalne interakcije, koji se pripremaju za odvajanje peptida, i ostale kompleksne mješavine. , 18,19,20,21.Mixed-modus stacionarnih faza (vosak / RPLC, Polarni interkalacija / RPLC) pogodni su za peptid i proteine, zbog prisustva polarnih i ne-polarnih grupa22,23,24,25,26,27,28. Sporna interkalizirajuće polarne grupe pokazuju dobro odvojeno moć i jedinstvenu selektivnost za polarne i ne- Polarni analizi, kao razdvajanje ovisi o interakciji između analita i stacionarne faze.Multimodalne interakcije 29, 30, 31, 32. Nedavno su Zhang et al.30 je pripremio stacionarnu poliaminsku fazu sa dodecil-terminacijom i uspješno odvojio ugljovodonike, antidepresive, flavonoide, nukleozide, estrogene i nekoliko drugih analita. Polarni interkalator ima i polarne i nepolarne grupe, tako da se može koristiti za odvajanje peptida i proteina koji imaju i hidrofobni i emocionalno-embeddirani stupac. ed C18 kolone) su komercijalno dostupne pod trgovačkim nazivom Ascentis Express RP-Amide kolone, ali se ove kolone koriste samo za analizu amina 33.
U trenutnoj studiji, polarno ugrađena stacionarna faza (N-fenilmaleimid ugrađen polistiren) je pripremljena i procijenjena za odvajanje peptida i tripsina digestije HSA. Stacionarna faza je pripremljena prema sljedećoj strategiji. Porozne čestice silicijum dioksida pripremljene su prema proceduri datoj u našoj prethodnoj publikaciji sa nekim modifikacijama preparata protolycoethylene g potolycoetil ureco (protolycoethylene g). ), TMOS, vodena octena kiselina je podešena za pripremu čestica silicijevog dioksida s velikom veličinom pora. Drugo, novi ligand, fenilmaleimid-metil vinil izocijanat, je sintetiziran i korišten za derivatizaciju čestica silicijevog dioksida za pripremu polarno ugrađene stacionarne faze. Rezultirajuća stacionarna faza je upakovana u kolonu bez stainless čelika i kolonu. pakovanje je potpomognuto mehaničkim vibracijama kako bi se osiguralo formiranje homogenog sloja unutar kolone. Procijeniti razdvajanje upakovane kolone peptidnih mješavina koje se sastoje od pet peptida;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) i tripsin digestiju humanog serumskog albumina (HAS). Primećeno je da se mešavina peptida i digestija tripsina HSA razdvaja sa dobrom rezolucijom i efikasnošću. Uočeno je da su i peptidi i proteini dobro razdvojeni i efikasni na PMP koloni, koja je bila efikasnija od Ascentis Express RP-Amid kolone.
PEG (polietilen glikol), urea, octena kiselina, trimetoksi ortosilikat (TMOS), trimetil hlorosilan (TMCS), tripsin, humani serumski albumin (HSA), amonijum hlorid, urea, heksan metildisilazan (HMDS), metakriloil hlorosilin (benzoil hlorosilin, benzoil hlorosilin, benzoil hlorid, benzoil-Hlorid) BPO), acetonitril kvaliteta HPLC (ACN), metanol, 2-propanol i aceton kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD).
Smjesa uree (8 g), polietilen glikola (8 g) i 8 mL 0,01 N octene kiseline miješana je 10 minuta, a zatim je dodato 24 mL TMOS u ledeno hladnim uslovima. Reakciona smjesa je zagrijavana na 40°C 6 sati, a zatim na 120°C, reakciona smjesa je zagrijana na 40°C tokom 6 sati, a zatim na 120°C bez vode. materijal je sušen na 70°C 12 sati. Osušena meka masa je glatko mljevena u pećnici i kalcinirana na 550°C 12 sati. Pripremljene su tri serije i okarakterisane da se ispita ponovljivost veličine čestica, veličine pora i površine.
Površinskom modifikacijom čestica silicijevog dioksida prethodno sintetizovanim ligandom fenilmaleimid-metilvinilizocijanatom (PCMP) praćenom radijalnom polimerizacijom sa stirenom, pripremljeno je jedinjenje koje sadrži polarne grupe.Stacionarna faza za agregate i polistirenske lance. Proces pripreme je opisan u nastavku.
N-fenilmaleimid (200 mg) i metil vinil izocijanat (100 mg) rastvoreni su u suvom toluenu, i 0,1 mL 2,2′-azoizobutironitrila (AIBN) je dodato u reakcionu tikvicu da bi se pripremila smeša fenilmaleimid-metil PM°C je zagrejana na 6°Ciomer PM°C. 3 sata, filtrira i suši u rerni na 40°C 3 sata.
Osušene čestice silicijum dioksida (2 g) su dispergovane u suvom toluenu (100 mL), mešane i sonikirane u tikvici sa okruglim dnom od 500 mL tokom 10 min. PMCP (10 mg) je rastvoren u toluenu i dodan ukapavanjem u reakcionu tikvicu preko levka za kap. 0°C tokom 3 sata. Zatim su PMCP-vezane čestice silicijum dioksida (100 g) rastvorene u toluenu (200 ml) i dodat je 4-hidroksi-TEMPO (2 mL) u prisustvu 100 µL dibutilkalaj dilaurata kao katalizatora. Smeša je mešana na 5°C 30°C sati.
Stiren (1 mL), benzoil peroksid BPO (0,5 mL) i TEMPO-PMCP-vezane čestice silicijum dioksida (1,5 g) su dispergirane u toluenu i pročišćene dušikom. Polimerizacija stirena je izvedena na 100°C tokom 12 sati. prikazano na slici 1.
Uzorci su degazirani na 393 K tokom 1 sata da bi se dobio rezidualni pritisak manji od 10-3 Torr. Količina N2 adsorbovanog pri relativnom pritisku od P/P0 = 0,99 je korišćena za određivanje ukupnog volumena pora. Morfologija golih i ligandom vezanih čestica silicijum dioksida je ispitana uz pomoć mikroskopičnog skeniranja Japana (Toploochinolog Technologies). Uzorci (goli silicijum dioksid i čestice silicijum-dioksida vezane za ligand) postavljeni su na aluminijumsku kolonu koristeći lepljivu karbonsku traku. Zlato je naneseno na uzorke pomoću Q150T raspršivača, a na uzorke je nanesen sloj Au od 5 nm. Ovo poboljšava efikasnost procesa korišćenjem niskih napona i obezbeđuje fino zrno, element za hladno raspršivanje, MA1Atron Fleš1mo2. Al analizator je korišten za elementarnu analizu. Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 analizator veličine čestica korišten je za dobivanje raspodjele veličine čestica. Čestice gole silicijevog dioksida i čestice silicijum-dioksida vezane za ligand (svaka po 5 mg) su dispergirane u 5 mL izopropanola, i stavljene na ultrazvuk u trajanju od 5 min. zer.Termogravimetrijska analiza je vršena brzinom od 5 °C u minuti u temperaturnom rasponu od 30 do 800 °C.
Stupovi od nehrđajućeg čelika obloženi staklom uskog provrta dimenzija (100 × 1,8 mm id) su pakirani primjenom metode pakiranja suspenzije, primjenom istog postupka kao u Ref.31. Stupa od nehrđajućeg čelika (obložena staklom, 100 × 1,8 mm id) sa izlaznom armaturom koja sadrži fritu od 1 µm spojena je na paker za suspenziju (Alltech Deerfield, IL, SAD). Pripremite suspenziju stacionarne faze suspenzijom 150 mg stacionarne faze u menoj koloni od 1,2 m tanola i pošaljite je u kolonu od 1,2 m tanola. kao otapalo za pogon. Napunite kolonu uzastopno primjenom pritisaka od 100 MP u trajanju od 10 minuta, 80 MP u trajanju od 15 minuta i 60 MP u trajanju od 30 minuta. Tokom pakiranja, mehanička vibracija je primijenjena sa dva GC tresla za kolone (Alltech, Deerfield, IL, USA) kako bi se osiguralo da se kolona ujednačilo oštećuje. kolonu iz jedinice za pakovanje suspenzije i spojite drugu armaturu na ulaz i na LC sistem kako biste provjerili njegove performanse.
Konstruisana je LC pumpa (10AD Shimadzu, Japan), injektor (Valco (SAD) C14 W.05) sa petljom za ubrizgavanje od 50nL, membranski degazer (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapilarni prozor. Nakon pakovanja, kapilare (50 μm id 365 i redukcione spojne kapilare (50 μm) su instalirane na 1/16″ izlaz redukcionog spoja. Prikupljanje podataka i hromatografska obrada obavljeni su korišćenjem Multichro 2000 softvera. Praćenje je obavljeno pomoću softvera Multichro 2000. Analiza apsorpcije podataka na ultraljubičastim analizatorima. ginPro8 (Northampton, MA).
Albumin iz humanog seruma, liofiliziranog praha, ≥ 96% (elektroforeza agaroznog gela) 3 mg pomiješanog sa tripsinom (1,5 mg), 4,0 M uree (1 mL) i 0,2 M amonijum bikarbonata (1 mL). Rastvor je miješan 10 minuta u vodenoj kupelji, a zatim držan na 6°C u 1 mL vodenoj kupelji (1 mL). 0,1% TFA. Filtrirajte rastvor i čuvajte na temperaturi ispod 4 °C.
Odvajanje mješavine peptida i HSA tripsina procijenjeno je odvojeno na PMP kolonama. Provjerite razdvajanje mješavine peptida i tripsina digestije HSA pomoću PMP kolone i uporedite rezultate sa Ascentis Express RP-Amide kolonom. Teoretski broj ploče izračunava se na sljedeći način:
SEM slike golih čestica silicijum dioksida i čestica silicijum-dioksida vezanih za ligand su prikazane na Sl.2 .SEM slike golih čestica silicijum dioksida (A, B) pokazuju da su, za razliku od naših prethodnih studija, ove čestice sferične u kojima su čestice izdužene ili imaju nepravilnu simetriju. Površina čestica silicijum dioksida vezanih ligandom (C, D) je glatkija od površine golog silicijum-dioksida čiji je sloj čestica silicijum dioksida zbog površine sloja čestica silicijum dioksida. les.
Skenirajući elektronski mikroskop slike golih čestica silicijum dioksida (A, B) i čestica silicijum-dioksida vezanih ligandom (C, D).
Raspodjela veličine čestica golih čestica silicijum dioksida i čestica silicijum dioksida vezanih ligandom prikazane su na slici 3(A). Krivulje raspodjele veličine čestica zasnovane na zapremini pokazale su da se veličina čestica silicijum dioksida povećala nakon hemijske modifikacije (slika 3A). Podaci o raspodjeli veličine čestica čestica silicijevog dioksida iz trenutne studije su upoređeni u tabeli veličine 5 i prethodne studije veličine. PMP je 3,36 μm, u poređenju sa našom prethodnom studijom sa ad(0,5) vrijednošću od 3,05 μm (čestice silicijevog dioksida vezane za polistiren)34. Ova šarža je imala užu distribuciju veličine čestica u odnosu na našu prethodnu studiju zbog različitih omjera PEG, uree, TMOS i octene kiseline. Vezana faza čestica silicijevog dioksida koju smo prethodno proučavali. To znači da je površinska funkcionalizacija čestica silicijevog dioksida stirenom nanijela samo sloj polistirena (0,97 µm) na površinu silicijevog dioksida, dok je u PMP fazi debljina sloja bila 1,38 µm.
Raspodjela veličine čestica (A) i raspodjela veličine pora (B) golih čestica silicijevog dioksida i čestica silicijum-dioksida vezanih za ligand.
Veličina pora, zapremina pora i površina čestica silicijum dioksida iz tekuće studije dati su u tabeli 1(B). PSD profili golih čestica silicijum dioksida i čestica silicijum-dioksida vezanih za ligand su prikazani na slici 3(B). Rezultati su uporedivi sa našim prethodnim istraživanjem. s za 69 nakon kemijske modifikacije, kao što je prikazano u tabeli 1(B), a promjena krivulje prikazana je na slici 3(B). Slično, volumen pora čestica silicijum dioksida se smanjio sa 0,67 na 0,58 cm3/g nakon kemijske modifikacije. Kao što je prikazano u Tabeli 1(B), površina (m2/g) čestica silicijum dioksida takođe se smanjila sa 116 m2/g na 105 m2/g nakon hemijske modifikacije.
Rezultati elementarne analize stacionarne faze prikazani su u Tabeli 2. Opterećenje ugljikom trenutne stacionarne faze je 6,35%, što je niže od opterećenja ugljikom iz naše prethodne studije (čestice silicijevog dioksida vezane za polistiren, 7,93%35 i 10,21%, respektivno) 42. Budući da je opterećenje ugljikom trenutne stacionarne faze nisko, u polarnoj fazi je dodavanje ugljika u polarnu fazu nisko. kao što su fenilmaleimid-metilvinilizocijanat (PCMP) i 4-hidroksi-TEMPO su korišteni. Procenat težine azota u trenutnoj stacionarnoj fazi je 2,21%, u poređenju sa 0,1735 i 0,85% masenog postotka azota u prethodnim studijama, respektivno. To znači da je težinski postotak azota u trenutnoj stanici ugljika, odnosno 0,85% masenog udjela u azotnoj stanici, veći zbog phenimilarnog opterećenja. Produkti (4) i (5) bili su 2,7% i 2,9%, respektivno, dok je opterećenje ugljikom konačnog proizvoda (6) bilo 6,35%, kao što je prikazano u tabeli 2. Gubitak težine je provjeren stacionarnom fazom PMP, a TGA kriva je prikazana na slici 4. TGA kriva pokazuje gubitak težine od 8,6%, što se također ne slaže samo sa opterećenjem ugljika od 8,6%, ali 5% ugljika. , i H.
Fenilmaleimid-metilvinilizocijanatni ligand je izabran za površinsku modifikaciju čestica silicijum dioksida jer ima polarne fenilmaleimidne grupe i vinilizocijanatne grupe. Vinil izocijanatne grupe mogu dalje da reaguju sa stirenom živom radikalnom polimerizacijom. Drugi razlog je da se ubaci grupa koja ima umerenu interakciju analne faze i jake analne faze i jake interakcije. fenilmaleimidni dio nema virtualni naboj pri normalnom pH. Polaritet stacionarne faze može se kontrolirati optimalnom količinom stirena i vremenom reakcije polimerizacije slobodnih radikala. Posljednji korak reakcije (slobodno-radikalna polimerizacija) je kritičan i može promijeniti polaritet stacionarne faze. Elementarna analiza je obavljena kako bi se provjerilo vrijeme povećanja količine ugljika u fazi ugljika. opterećenje ugljikom u stacionarnoj fazi i obrnuto. SP pripremljeni s različitim koncentracijama stirena imaju različita opterećenja ugljikom. Opet, ubacite ove stacionarne faze u kolone od nehrđajućeg čelika i provjerite njihove kromatografske performanse (selektivnost, rezolucija, N vrijednost, itd.). Na osnovu ovih eksperimenata, odabrana je optimizirana formulacija kako bi se pripremila kontrolna faza stacionarnog polariteta s ponovnim analnim polaritetom.
Pet mešavina peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin enkefalin) je takođe procenjeno korišćenjem PMP kolone koristeći mobilnu fazu;60/40 (v/v) acetonitril/voda (0,1% TFA) pri brzini protoka od 80 μL/min. Pod optimalnim uslovima eluiranja, teoretski broj ploče (N) po koloni (100 × 1,8 mm id) je 20.000 ± 100 (200.000 P roma kolone). togrami su prikazani na slici 5A. Brza analiza na PMP koloni pri visokoj brzini protoka (700 μL/min), pet peptida je eluirano u roku od jedne minute, vrijednosti N su bile vrlo dobre, 13.500 ± 330 po koloni (100 × 1.8 mm id), odgovara 135.000 × 1.8 mm id., odgovara 135.000 s. 1,8 mm id) bili su upakovani sa tri različite serije PMP stacionarne faze da bi se proverila reproduktivnost. Koncentracija analita za svaku kolonu je zabeležena korišćenjem optimalnih uslova elucije i broja teoretskih ploča N i vremena retencije da se ista test smeša odvoji na svakoj koloni. Podaci o reproduktivnosti za PMP kolone prikazani su u Tabeli 4, sa veoma niskom korelacijom kolone PMP, prikazane su vrednosti PMP kolone sa veoma niskom reproduktivnošću. .
Odvajanje mješavine peptida na koloni PMP (B) i koloni Ascentis Express RP-Amide (A);mobilna faza 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), dimenzije PMP kolone (100 × 1,8 mm id);analitički Redosled eluiranja jedinjenja: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) i 5 (leucin) kiselina enkefalin).
PMP kolona (100 × 1,8 mm id) je procijenjena za odvajanje triptičkih digestija humanog serumskog albumina u tečnoj hromatografiji visoke performanse. Kromatogram na slici 6 pokazuje da je uzorak dobro odvojen i da je rezolucija vrlo dobra. HSA digesti su analizirani korištenjem brzine protoka od 100 µL/min. hromatogramom (slika 6), HSA digestija je podijeljena na 17 vrhova koji odgovaraju 17 peptida. Izračunata je efikasnost odvajanja svakog vrha u HSA digestiji, a vrijednosti su date u tabeli 5.
Triptički digest HSA (100 × 1,8 mm id) je odvojen na PMP koloni;brzina protoka (100 µL/min), mobilna faza 60/40 acetonitril/voda sa 0,1% TFA.
gdje je L dužina kolone, η viskozitet mobilne faze, ΔP protupritisak kolone, a u linearna brzina mobilne faze. Permeabilnost PMP kolone bila je 2,5 × 10-14 m2, brzina protoka je bila 25 μL/min, a 60/40 v/v kolone je korišteno 60/40 v/v. ) bila je slična onoj u našoj prethodnoj studiji Ref.34. Permeabilnost kolone pune površinski poroznih čestica je: 1,7 × 10-15 za čestice od 1,3 μm, 3,1 × 10-15 za čestice od 1,7 μm, 5,2 × 10-15 µm za čestice 5,2 × 10-15 µm i 5,2 × 10-15 µm za čestice. 5 μm čestice 43. Stoga je propusnost PMP faze slična onoj kod čestica jezgro-ljuska od 5 μm.
gdje je Wx težina kolone napunjene hloroformom, Wy je težina kolone napunjene metanolom, a ρ je gustina rastvarača. Gustine metanola (ρ = 0,7866) i hloroforma (ρ = 1,484). Ukupna poroznost SILICIJSKIH ČESTICA i CESTICE CILICA 1-80 mm 1-80 mm i. Stubovi uree 31 koje smo prethodno proučavali bili su 0,63 odnosno 0,55. To znači da prisustvo liganda uree smanjuje propusnost stacionarne faze. S druge strane, ukupna poroznost PMP kolone (100 × 1,8 mm id) je 0,60. Stacionarne faze tipa 18, ligandi C18 su vezani za čestice silicijum dioksida kao linearni lanci, dok se u stacionarnim fazama tipa polistirena oko njega formira relativno debeo sloj polimera A. U tipičnom eksperimentu, poroznost kolone se izračunava kao:
Slika 7A,B prikazuje PMP kolonu (100 × 1,8 mm id) i Ascentis Express RP-Amide kolonu (100 × 1,8 mm id) koristeći iste uslove eluiranja (tj. 60/40 ACN/H2O i 0,1% TFA).) van Deemterove parcele.Odabrane mješavine peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) pripremljene su u 20 µL/ Minimalna brzina protoka za obje kolone je 800 µLum HE/min. Minimalna brzina protoka je 800 µL/min. MP kolona i Ascentis Express RP-Amide kolona bile su 2,6 µm i 3,9 µm, respektivno. HETP vrijednosti pokazuju da je efikasnost odvajanja PMP kolone (100 × 1,8 mm id) mnogo bolja od komercijalno dostupne Ascentis Express RP-Amide kolone (100 mm id1). smanjenje vrijednosti N s povećanjem protoka nije značajno u poređenju sa našom prethodnom studijom. Veća efikasnost odvajanja PMP kolone (100 × 1,8 mm id) u poređenju sa Ascentis Express RP-Amide kolonom zasnovana je na poboljšanju oblika, veličine čestica i složenih procedura pakovanja kolone koje se koriste u trenutnom radu34.
(A) van Deemter grafik (HETP u odnosu na linearnu brzinu mobilne faze) dobijen upotrebom PMP kolone (100 × 1,8 mm id) u 60/40 ACN/H2O sa 0,1% TFA. (B) van Deemter grafik (HETP u odnosu na linearnu brzinu mobilne faze) dobijen korištenjem Ascentisde Express kolone RP × 100 mm (Ascentis Express) × 100 mm. CN/H2O sa 0,1% TFA.
Stacionarna faza polistirena u polarnom sloju je pripremljena i procijenjena za odvajanje sintetičkih mješavina peptida i tripsina digestije humanog serumskog albumina (HAS) u tečnoj hromatografiji visokih performansi. Kromatografske performanse PMP kolona za mješavine peptida su odlične u efikasnosti i rezoluciji razdvajanja. čestice lica, kontrolisana sinteza stacionarne faze i složeno pakovanje kolone. Pored visoke efikasnosti separacije, nizak povratni pritisak u koloni pri velikim brzinama protoka je još jedna prednost ove stacionarne faze. PMP kolone pokazuju dobru reproduktivnost i mogu se koristiti za analizu mešavina peptida i digestiju tripsina različitih proteina. .U budućnosti će se PMP kolone također procjenjivati ​​za odvajanje proteina i monoklonskih antitijela.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Istraživanje sistema za odvajanje peptida hromatografijom obrnute faze I dio: Razvoj protokola za karakterizaciju kolone.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. Poboljšani aktivni peptidi dizajnirani za liječenje zaraznih bolesti.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetički terapeutski peptidi: znanost i tržište. otkriće lijekova.15 (1-2) danas, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.10.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Napredna proteomska tečna kromatografija.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Napredna tečna hromatografija-masena spektrometrija omogućava inkorporaciju široko ciljane metabolomike i proteomike.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Uloga UHPLC-a u razvoju lijekova.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamentalni i praktični aspekti tečne hromatografije ultravisokog pritiska za brza odvajanja.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelicheff, P. Primena tečne hromatografije ultra-visokih performansi u razvoju lekova.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolitni makroporozni hidrogelovi pripremljeni od emulzija visoke unutrašnje faze ulja u vodi za efikasno prečišćavanje enterovirusa.Chemical.Britanija.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Uloga tečne hromatografije u proteomici.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Trendovi u razvoju tečnom hromatografijom reverzne faze odvajanja terapeutskih peptida i proteina: teorija i primjena.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Dvodimenzionalno odvajanje peptida pomoću RP-RP-HPLC sistema koristeći različite pH vrijednosti u prvoj i drugoj dimenziji razdvajanja.J.Sep. Sci. 28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Ispitivane su karakteristike prijenosa mase i kinetičke performanse visokoefikasnih hromatografskih kolona napunjenih C18 sub-2 μm potpuno i površinski poroznih čestica.J.Sep. Sci. 43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Nedavni trendovi i analitički izazovi u izolaciji, identifikaciji i validaciji biljnih bioaktivnih peptida.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-02-x02855-018-x28.
Mueller, JB et al. Proteomski krajolik kraljevstva života. Priroda 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Nizvodna obrada terapeutskih peptida preparativnom tečnom hromatografijom. Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode kromatografija i njena primjena na biopolimere.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligandi za mješovitu proteinsku hromatografiju: princip, karakterizacija i dizajn.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).