“No dubtis mai que un petit grup de ciutadans reflexius i entregats pot canviar el món.De fet, és l'únic que hi ha".
La missió de Cureus és canviar el model de publicació mèdica de llarga data, en què la presentació d'investigacions pot ser costosa, complexa i consumir molt de temps.
Plasma/prp ric en plaquetes, regeneració de teixits, activació plaquetària, teràpia proliferativa de glucosa, plaquetes, teràpia proliferativa
Citeu aquest article com a: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 de maig de 2022) L'efecte de la glucosa sobre el recompte i el volum de plaquetes: implicacions per a la medicina regenerativa.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
El plasma ric en plaquetes (PRP) i les solucions de glucosa hipertònica s'utilitzen habitualment per a la injecció en medicina regenerativa, de vegades juntes.L'efecte de la glucosa hipertònica sobre la lisi i l'activació plaquetària no s'ha informat prèviament.Hem provat l'efecte de les concentracions elevades de glucosa sobre el recompte de plaquetes i eritròcits, així com els volums cel·lulars en PRP i sang sencera (WB).Es va produir una ràpida reducció parcial del recompte de plaquetes amb totes les mescles de glucosa barrejades amb PRP o sang sencera, d'acord amb la lisi parcial. Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que suggereix una ràpida allotjament de plaquetes residuals a una hipertonicitat extrema (> 2000 mOsm). Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que suggereix una ràpida allotjament de plaquetes residuals a una hipertonicitat extrema (> 2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на ставалось стабильным очных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que indica una ràpida acomodació de les plaquetes residuals a una hipertonicitat extrema (> 2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 m， sm）极明残余血小板迅速适应极端（> 2000 m.2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на ставалось стабильным, что указывает на зывает на ставалось чных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que indica una ràpida adaptació de les plaquetes residuals a l'estat hiperosmolar extrem (>2000 mOsm).Les concentracions de glucosa del 25% i superiors van donar lloc a un augment significatiu del volum mitjà de plaquetes (MPV), cosa que indica una etapa primerenca d'activació plaquetària.Es necessiten més estudis per determinar si es produeix la lisi o l'activació plaquetària i si la injecció hipertònica de glucosa sola o en combinació amb PRP pot proporcionar un benefici clínic addicional.
A la dècada de 1950, el cirurgià nord-americà George Hackett va descobrir que podia alleujar permanentment el dolor articular i d'esquena en molts pacients injectant una solució proliferativa als tendons i lligaments.Els seus experiments amb conills van demostrar que el tractament, que va anomenar teràpia proliferativa, feia que els tendons s'engrandissin i s'enfortissin.Els estudis histològics han confirmat que durant aquest procés es produeix nou col·lagen [1].
Durant les primeres dècades, es van provar moltes solucions de distribució diferents.A la dècada de 1990, la majoria dels professionals consideraven que les altes concentracions de glucosa eren el mètode més segur i eficaç.No obstant això, el mecanisme d'acció encara no està clar.
Al segle XX es van realitzar pocs estudis clínics després del treball de Hackett.Tanmateix, a la dècada de 2000 hi va haver un interès renovat i es van completar diversos assaigs clínics amb èxit de teràpia proliferativa per al tractament del mal d'esquena [2], l'artrosi del genoll [3] i l'epicondilitis lateral [4].
La regeneració dels teixits requereix la participació de cèl·lules mare.Per tant, altes concentracions de glucosa han d'induir d'alguna manera la migració, la replicació i la diferenciació de les cèl·lules mare.Presentem la hipòtesi que les plaquetes poden actuar com a missatgers i que les altes concentracions de glucosa poden fer que les plaquetes alliberin citocines i factors de creixement, afavorint així els processos regeneratius, especialment la migració de cèl·lules mare a zones amb concentracions elevades de glucosa.
L'activació plaquetària sempre precedeix un augment del calci intracel·lular [5].Liu et al.el 2008 va demostrar que els nivells elevats de glucosa augmenten l'activitat dels canals canònics tipus 6 (TRPC6) potencials del receptor transitori a la membrana plasmàtica, la qual cosa condueix a una afluència d'ions de calci a les plaquetes [6].Un altre estudi va demostrar que l'exposició de la zona marginal dels microtúbuls als ions de calci provoca la relaxació, l'expansió i la deformació de la zona marginal, que al seu torn provoca un canvi de forma de disc a esfèric, donant lloc al volum mitjà de plaquetes (MPV) [7].
La nostra hipòtesi en aquest estudi és que l'exposició de plaquetes a altes concentracions de glucosa afecta la zona marginal dels microtúbuls i el medi intracel·lular, donant lloc a un augment del MPV.
Tots els participants van signar un formulari de consentiment informat després d'explicar els detalls de l'estudi i abans de rebre les mostres.En aquest estudi, només es van utilitzar mostres de PRP amb un hematocrit superior al 2% perquè es poguessin incloure el recompte d'eritròcits (eritròcits) i el volum corpuscular mitjà de glòbuls vermells (MCV) per a la comparació.
L'estudi es va realitzar en quatre fases, la primera fase va ser PRP i les fases restants eren sang sencera (taula 1).Tal com es va descriure anteriorment [8], totes les forces centrífugues relatives (RCF, força g) es van calcular a partir del punt mitjà (Rmid, en cm) de la columna de sang a la xeringa centrífuga.Hem escollit utilitzar MPV com a marcador de sensibilització plaquetària i recompte de plaquetes com a indicador de la lisi plaquetària potencial, que es poden mesurar fàcilment amb analitzadors d'hematologia estàndard.
En la primera fase, 47 voluntaris van donar mostres de sang: un tub d'àcid etilendiaminotetraacètic (EDTA) i una mostra de sang sencera PRP (anticoagulada amb citrat de sodi (NaCl, 3%)) (taula 1).Col·loqueu el balancí al tub immediatament.Es va realitzar un recompte sanguini complet (CBC) en mostres d'EDTA per triplicat, i les mostres de NaCl es van analitzar per triplicat per a l'anàlisi de CBC, i després es va preparar PRP mitjançant diversos mètodes descrits anteriorment [8].Totes les mostres de PRP es van preparar per centrifugació a 900-1000 g.Barregeu cada mostra de PRP en un mesclador de vòrtex durant 5-10 segons, després divideix cinc alíquotes de 0,5 ml en tubs.
Per avaluar l'efecte de l'exposició plaquetària en concentracions elevades de glucosa, es van barrejar quantitats iguals (0,5 ml) de 0%, 5%, 12,5%, 25% i 50% de glucosa a l'aigua amb mostres de plaquetes per obtenir 0%, 2,5% 6,25%, 12,5% i la barreja de tubs d'assaig de 25% per a la concentració de la barreja de tubs d'assaig de 25 minuts. .El TAC de cada mescla es va analitzar per triplicat després de 15 min.El recompte de plaquetes (PLT), el recompte de glòbuls, el MCV i el MPV es van calcular per a cada tub i es va calcular el recompte mitjà de plaquetes, el recompte de glòbuls, el MCV i el MPV per a totes les mostres de PRP.
Un cop finalitzada la primera fase de recollida de dades, vam notar un augment significatiu del volum de plaquetes en plaquetes PRP després de l'addició de D50W.Les plaquetes PRP no representen necessàriament totes les plaquetes de la sang, i el medi PRP difereix del medi WB.Per tant, vam decidir dur a terme una segona fase de prova de l'efecte d'afegir D50W a la sang sencera.
Per a la segona ronda, vam triar una mida de mostra de 30 segons els resultats de la primera sèrie, tal com es descriu a la secció Anàlisi.En aquesta sèrie, 20 voluntaris van donar mostres de sang (taula 1).Es va extreure sang sencera (1,8 ml) en una xeringa de 3 ml i es va anticoagular amb 0,2 ml de NaCl al 40%.La xeringa de sang sencera es va barrejar durant cinc segons amb un mesclador de vòrtex i es va analitzar el CBC per triplicat.Després de l'anàlisi, es va afegir sang anticoagulada a 2 ml de glucosa al 50% en una xeringa de 5 ml (la concentració final de glucosa va ser aproximadament del 25% (D25) i es va col·locar en un tub d'agitació durant 30 minuts. Després de 30 minuts, es van analitzar D25/CBC en xeringues WB per triplicat. El recompte de plaquetes, el recompte de plaquetes, RBC, RBC, PLT i MPV mitjà, es van analitzar per triplicat. es van calcular el recompte, el MCV i el MPV per a cada mostra abans i després d'afegir glucosa.
Com que les plaquetes de la sang sencera s'exposen habitualment a la glucosa hipertònica durant la teràpia proliferativa de glucosa a causa d'una injecció mínimament invasiva, i no és habitual combinar PRP amb glucosa hipertònica just abans de la injecció, vam decidir estudiar la glucosa hipertònica en combinació amb WB a la secció 1. Pas tres i quatre.En cada etapa, 20 voluntaris van donar 7-8 ml d'ACD-A (àcid que conté citrat trisòdic (22,0 g/l), àcid cítric (8,0 g/l) i glucosa (24,5 g/l), solució de citrat de dextrosa) per a anticoagulants sanguinis (taula 1).Només es van utilitzar mescles de glucosa superiors al 12,5% per determinar el percentatge de llindar associat a un augment de MPV.A la tercera etapa, es col·loca 1 ml de sang en un tub d'assaig.A continuació, barregeu la sang en un mesclador de vòrtex durant 10 segons afegint 1 ml de glucosa al 30%, glucosa al 40% o glucosa al 50% al tub per obtenir una concentració final de glucosa del 15%, 20% i 25%, respectivament.Les mostres de sang de glucosa es van analitzar per CBC immediatament després de la barreja i es van repetir cada dos minuts durant 30 minuts.
Durant la barreja inicial, l'addició de glucosa hipertònica 1:1 i WB o PRP exposa les plaquetes a concentracions superiors al 25% durant diversos segons.En el quart pas, per avaluar l'efecte de la glucosa hipertònica amb concentracions màximes inicials mínimes i provar el límit superior de l'efecte de la glucosa, vam afegir només una petita quantitat de sang a D25W o D50W.Col·loqueu 1 ml de D25W o D50W en un tub i afegiu 0,2 ml de WB mentre agita la mostra durant 10 segons.En aquests casos, la sang es va exposar a la glucosa a una concentració aproximadament un 20% per sobre de la concentració final, en lloc d'un 50% per sobre de la concentració final com en la fase 3, donant lloc a concentracions finals de glucosa del 20,8% i del 41,6%.Les mostres mixtes es van analitzar al mateix interval de temps que al pas 3.
En el primer pas de cada sèrie de dilució de glucosa, es van prendre 30 mostres, ja que aquesta era la mida de mostra adequada per a l'estudi pilot [9].Al final de cada fase (inclosa la primera fase), avalueu l'adequació de la mida de la mostra mitjançant la fórmula utilitzada per determinar la mida de la mostra necessària per estimar la mitjana de la variable de resultat contínua en una població.Fórmula n = Z2 x SD2 /E2.En aquesta equació, Z és la puntuació Z, SD és la desviació estàndard i E és l'error desitjat [10].El nostre alfa és 0,05, que correspon a un valor Z d'1,96, i esperem un error de 5 (en percentatge).Per tant, resolem per n = (1,962 x SD2)/52.Els resultats van mostrar que la mida de la mostra requerida per a cada etapa era més petita que el nombre real recollit.
Durant els períodes 1, 3 i 4 utilitzant més d'una concentració de glucosa, es va analitzar l'efecte de diferents concentracions de glucosa comparant el canvi fraccionari entre el temps 0 i cada temps posterior (fase 1 als 15 minuts, període 3 als 15 minuts).i quatre als 15 segons, després cada dos minuts.) Les taxes de canvi per a cada període de temps es van comparar mitjançant la prova U de Mann-Whitney perquè les dades no seguien una distribució normal determinada per la prova de normalitat de Shapiro-Wilk.Com que es va realitzar una anàlisi 1 a 1 de diversos grups (cinc) en el primer, tercer i quart pas (cinc en total), es va realitzar una correcció de Bonferroni per ajustar el valor alfa desitjat a ≤0,01 però no ≤0,05.
Reducció del recompte de plaquetes amb totes les concentracions de dextrosa hipertònica i un augment del MPV en plaquetes de PRP a > 12, 5% de concentració de dextrosa: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'una a cinc vegades la concentració en comparació amb la sang sencera inicial, variant segons el mètode (no representat). Reducció del recompte de plaquetes amb totes les concentracions de dextrosa hipertònica i augment del MPV en plaquetes de PRP a > 12,5% de concentració de dextrosa: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'una a cinc vegades la concentració en comparació amb la sang sencera inicial, variant segons el mètode (no representat). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстроеской декстроцитов при всех концентрациях цитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в соличество тромбоцитов PRP увеличилось en 1-5 сорах ни пра ой цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Disminució del recompte de plaquetes a totes les concentracions de dextrosa hipertònica i augment de MPV en plaquetes de PRP a > 12,5% de concentració de dextrosa: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'1 a 5 vegades en comparació amb la sang sencera inicial, depenent del mètode (no mostrat). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，中度度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，中度度小，PRP 掝 厸 丟 PRP：线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未揉迂 A una concentració de glucosa > 12,5%, l'alta concentració de glucosa redueix el recompte sanguini, augmenta el MPV sanguini PRP: en comparació amb 与基线全血, el recompte sanguini PRP augmenta d'1 a 5 vegades la concentració (no descrita). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижтали снижтали снижтали снижаточ контрации гипертонической MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратрнац пистрнац повышали PRP ю с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). A concentracions de glucosa > 12, 5%, totes les concentracions de glucosa hipertenses van disminuir el recompte de plaquetes i van augmentar el MPV a les plaquetes de PRP: els recomptes de plaquetes de PRP van augmentar d'1 a 5 vegades en comparació amb les concentracions basals de sang sencera, depenent del mètode (tal com es descriu).La figura 1 mostra que el nombre de plaquetes va disminuir gairebé un 75% després de la dilució en aigua i un 20-30% després de 15 minuts de dilució amb diferents concentracions de glucosa en comparació amb el PRP inicial i una dilució 1:1 ajustada per volum (1-k1 amb correcció de volum).k -1 cria).1 cria).
El nombre de cèl·lules de cada dilució s'expressa com una fracció del nombre original abans de la dilució.
El MPV va disminuir mínimament durant la producció de PRP, sense més canvis en les concentracions de dilució fins al 12,5% en aigua o glucosa (incloses les mescles de glucosa PRP al 25%) i va augmentar més d'un 20% després de la dilució en una solució de glucosa al 50% (Fig. .2).).En canvi, els eritròcits no van mostrar cap canvi significatiu de volum en cap dilució que no sigui H2O.
El volum mitjà de cèl·lules de cada dilució s'expressa com a percentatge del volum original abans de la dilució.
Es va observar una reducció similar, però menys pronunciada, del recompte de plaquetes i un augment de la CVR a la BC exposada al 50% de glucosa (per formular amb un 25% de glucosa).La taula 2 compara el nombre de cèl·lules i els volums de cèl·lules de la sang sencera diluïda en dextrosa al 50% amb dades de PRP de fase 1 diluïdes en dextrosa al 50%.Els canvis en el recompte de RBC i RBC MCV no eren evidents i no eren el focus de la nostra atenció.
SD = desviació estàndard, MD = diferència mitjana entre grups, SE = desviació estàndard de la diferència mitjana, RBC = eritròcits, PLT = plaquetes, PRP = plasma ric en plaquetes, WB = sang sencera
Després d'afegir D50W a WB, el percentatge de pèrdua de plaquetes ajustada a la dilució va ser del 7,7% (310±73 vs. 286±96) en comparació amb el 17,8% de la dilució de PRP a D50W (664±348 vs. 544±277).MPV WB va augmentar un 16,8% (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mentre que MPV PRP va augmentar un 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Tot i que les diferències mitjanes tant en la reducció del recompte de les plaquetes com en l’augment de MPV van ser significativament més amb PRP, els canvis en la reducció del recompte de plaquetes dins del WB van ser gairebé significatius (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); P = 0,06) i l’augment de MPV va ser significatiu (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p <.001). Tot i que les diferències mitjanes tant en la reducció del recompte de les plaquetes com en l’augment de MPV van ser significativament més amb PRP, els canvis en la reducció del recompte de plaquetes dins del WB van ser gairebé significatius (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); P = 0,06) i l’augment de MPV va ser significatiu (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p <.001).Tot i que les diferències mitjanes tant en la reducció del recompte de plaquetes com en l'augment de la CVR van ser significativament més grans amb PRP, els canvis en la disminució del recompte de plaquetes dins del WB van ser gairebé significatius (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7, 7%); p = 0, 06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). l'augment de MPV va ser significatiu (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血塘氏的平均差异显着更大，但WB几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 10,1 ± 1,5 ± 8,0 ± 1,5 ± 8 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 和 和 增加 平均 差异的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增加是1增加（1增加是显.（1 的增加是显. ± 0,6 (+16,8) p <.001）。El canvi en la reducció del recompte de plaquetes dins del WB va ser gairebé significatiu (de 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7, 7%); p = 0, 06), tot i que el PRP tenia diferències mitjanes significativament més grans en la disminució del recompte de plaquetes i l'augment de MPV.i l'augment de MPV va ser important.(de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Es va requerir una concentració final de glucosa del 20% per veure un canvi significatiu en el MPV, però el canvi en el MPV va ser més pronunciat a la concentració final del 25%.La pèrdua de plaquetes es va estabilitzar després de la disminució inicial.Vam observar una forta disminució inicial de la CVR, però, la CVR es va restaurar ràpidament a la concentració final de glucosa del 25%, que era significativament superior als nivells de CVR observats a les concentracions finals de glucosa del 20% i del 15% (Fig. 3 i a l'esquerra de la taula 3; requadres ombrejats).indicar valors p ≤ alfa amb una correcció de Bonferroni de 0,01).També hi va haver una forta caiguda inicial del nombre de PLT, observada en la fase inicial de 0-15 s, i després es va mantenir estable (de 15 s a 30 min; esquerra de la taula 4).
L'addició de diverses concentracions de glucosa a la sang sencera va donar lloc a una disminució ràpida inicial de MPV seguida d'una recuperació depenent de la concentració de més del 20%.La llegenda mostra la concentració de glucosa després de la dilució.D15, D20 i D25 es van realitzar en una dilució 1:1.D21 i D41 es van realitzar amb una dilució 1:5.
La taula 4 mostra el canvi en el recompte de plaquetes quan es dilueix en glucosa hipertònica.Vam observar una relació dependent de la dosi entre la caiguda immediata del nombre de PLT a la dilució 1:1 i a la dilució 1:5.Comparant les dilucions 1:1 com a grup únic amb les dilucions 1:5, el grup 1:1 va tenir una disminució immediata del recompte de plaquetes menor que el grup 1:5 66±48.000 (23%) versus 99±69.000 (37%)., p = 0,014) al grup 1:5.Després d'una caiguda inicial en el primer punt de mesura, el recompte de plaquetes com a percentatge de glucosa s'estabilitza (Fig. 4).
Quan s'afegeix sang sencera a la glucosa en una proporció 1:1, el recompte de plaquetes es redueix aproximadament un 25%.Tanmateix, quan es va afegir sang sencera en una proporció d'1:5, la reducció va ser molt més gran: al voltant del 50%.
La glucosa del 41% va augmentar el MPV més ràpidament i de manera més espectacular que el 25% o el 21%.Els resultats de MPV es mostren a la figura 3. En totes les altres dilucions, no es va observar cap disminució inicial immediata de MPV després d'afegir un 50% de glucosa.Quan s'utilitzava un 25% de glucosa (concentració de glucosa 20,8% a la dilució final), el canvi en el MPV era comparable al canvi en el 20% de glucosa en una dilució 1:1 (Fig. 3).Tot i que els canvis de MPV van ser inicialment més grans a la concentració mixta del 41% que al 25%, la diferència de MPV entre el 41% i el 25% després de 16 minuts ja no era significativa (taula 3, dreta).També és interessant que la glucosa del 25% va augmentar el MPV amb més eficàcia que el 20,8%.
Aquest estudi in vitro va confirmar parcialment la nostra hipòtesi. Va mostrar una potencial lisi plaquetària parcial per barreja de dextrosa, una ràpida allotjament de les plaquetes a una hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a concentracions > 25% de dextrosa hipertònica. Va mostrar una potencial lisi plaquetària parcial per barreja de dextrosa, una ràpida allotjament de les plaquetes a una hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a concentracions > 25% de dextrosa hipertònica. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю затрую боцитов примесью декстрозы в до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоничестертоничеструц значительное повышение MPV 5%. Va mostrar una potencial lisi plaquetària parcial amb dextrosa, una ràpida adaptació plaquetària a una hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a nivells hipertònics de dextrosa > 25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应枫速适应极潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应枫速适应极渫应极攫唺唏极縫唺2攓% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 适庯 垫 适庯 垫 结 枫滏应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 О показывает потенциальный частичный лизис тыыоцитов сеесям с слюкозой пертонус и иначительное увеличение mpv о ответ на концентрацию гипертонической глюкозы> 25%. Mostra una potencial lisi plaquetària parcial per mescles de glucosa, una ràpida adaptació plaquetària a una hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a la glucosa hipertònica >25%.L'augment inicial va ser màxim amb un 41,6% d'exposició a la glucosa, però l'augment del MPV es va apropar al 25% d'exposició a la glucosa aproximadament 20 minuts després de l'exposició.
La concentració de plaquetes es veu afectada per la glucosa.Hem observat que la quantitat de PLT va disminuir en totes les dilucions de glucosa.Una forta caiguda del nombre de plaquetes en dilucions d'H2O (0%) de la sèrie PRP pot estar associada a la lisi osmòtica.Alternativament, podria ser un artefacte causat per l'aglomeració de plaquetes, però això contrasta amb la manca de canvi de MPV en aquesta dilució.Aquesta troballa significa que algunes plaquetes són molt sensibles a la hipoosmolaritat.
En totes les dilucions 1:1 de glucosa, la quantitat de PLT va disminuir un 20-30%, fins i tot per D5W (hipotònic a 252 mOsm), cosa que pot indicar un efecte no osmòtic específic de la glucosa, ja que tant el PLT com el MPV es van mantenir sense canvis amb un augment de tres vegades de concentració.glucosa.de D5W a D25W.De fet, les concentracions de PLT van tendir a augmentar lleugerament amb l'augment de l'osmolaritat.
La disminució del PLT entre dilucions 1:1 i 1:5 fa que l'efecte de dissolució depèn de la concentració inicial i final de glucosa.Si només depengués de la concentració inicial, s'esperaria veure una diferència en la reducció de PLT entre concentracions 1:1.Però no ho fem.Si l'efecte de lisi depèn només de la concentració final de glucosa, llavors no esperem molta diferència entre una dilució del 20% 1:1 i una dilució del 20,8% 1:5.I tanmateix ho vam fer.
Si es produeix la pèrdua de plaquetes a causa de la lisi plaquetària, es forma un lisat parcial, després del qual s'alliberen citocines i factors de creixement a l'entorn extracel·lular.Diversos estudis han demostrat que el lisat de plaquetes és gairebé tan eficaç com el PRP com una solució de proliferació [11].S'ha demostrat que el propi PRP és una solució eficaç per al tractament de la proliferació [12-14].
Les plaquetes inactives circulen en forma de disc reforçat amb diverses estructures internes.Durant l'activació, prenen una forma més esfèrica o d'ameba, donant lloc a un augment de volum.L'augment de volum requereix un augment de la superfície, que és el resultat de l'extrusió del sistema de túbuls oberts (OCS) i l'addició de grànuls exocítics a la membrana.Queda per determinar si l'augment de MPV induït per la glucosa hipertònica implica un o ambdós mecanismes, però si aquest últim, un augment de MPV indicaria una desgranulació.
Aquest estudi va demostrar que l'exposició a altes concentracions de glucosa en PRP o plaquetes de sang sencera va provocar un augment del MPV en 15 minuts amb una concentració de glucosa del 25% i del 41,6%, respectivament.
L'augment de MPV plaquetària pot ser degut a la dilatació dels embolics de microtúbuls circumdants en resposta a l'afluència de calci.Liu et al.S'ha demostrat que la glucosa media l'afluència de calci a través del canal TRPC6 de les plaquetes [6].La nostra hipòtesi és que la glucosa indueix la relaxació dels embolcalls dels microtúbuls, donant lloc a un augment de la sensibilització i/o activació de MPV i plaquetes.Tanmateix, a jutjar pels nostres resultats, això només és una part de la història.A les nostres proves, cap concentració per sota de D25W va provocar un augment del MPV.Atès que no hem provat l'exposició a concentracions de glucosa entre el 12,5% i el 25%, els nostres resultats de la fase 1 suggereixen que hi pot haver un llindar en aquest rang de concentracions de glucosa que condueixi a un augment del MPV.Les proves posteriors a les etapes 3 i 4 van demostrar que el 20-25% de glucosa sembla ser el llindar per a això, però encara no està clar per què.
També vam observar una disminució d'un ~ 9% de MPV després de la centrifugació.No està clar si aquesta disminució de MPV es deu a plaquetes més grans i denses atrapades a la capa de RBC de la centrífuga.Aquesta observació pot ser important per als metges, ja que pot implicar que les plaquetes PRP són un subconjunt de plaquetes WB més petit i menys dens.
En un estudi anterior, vam demostrar que la preparació de PRP mitjançant mètodes manuals és barata [8].Si la glucosa sensibilitza les plaquetes dels teixits o el PRP, fent-les més susceptibles a l'activació, o si el PRP es produeix amb propietats de lisat parcial, això pot millorar la regeneració i reduir la necessitat de teràpia.Per tant, la combinació de PRP i glucosa altament concentrada pot ser més rendible que el PRP o la glucosa sola.
El nostre estudi té diverses mancances.En primer lloc, utilitzem PRP obtingut de diversos mètodes diferents.Això pot conduir a resultats contradictoris.En segon lloc, no vam poder realitzar una anàlisi bioquímica de cap de les nostres mostres per determinar amb més precisió si s'havia produït l'activació plaquetària.Ens agradaria mesurar la P-selectina, el factor plaquetari 4, els agregats plaquetaris monocítics o altres marcadors d'activació plaquetària per entendre millor el grau o la presència de la desgranulació dels grànuls alfa, però això està fora de l'abast d'aquest estudi.En tercer lloc, no vam poder confirmar mitjançant microscòpia electrònica o altres mètodes que l'augment de MPV en plaquetes exposades a glucosa es degués a l'efecte sobre els embolcalls de microtúbuls.
Les mescles de WB o PRP amb un 25% de glucosa van augmentar el MPV, senyalant l'inici de l'activació plaquetària, tot i que aquest estudi no va demostrar la progressió de l'agregació o la desgranulació.La barreja de glucosa hipertònica va donar lloc a la pèrdua de plaquetes, possiblement representant un efecte lític.L'activació o lisi parcial de les plaquetes pot provocar la regeneració del teixit després de la injecció de plaquetes.No està clar quines conseqüències clíniques poden comportar aquests canvis.Estudis posteriors han demostrat mesures més precises d'activació o lisi i han avaluat els diferents efectes clínics de les mescles hipertòniques de glucosa amb WB o PRP.
La teràpia proliferativa de glucosa és una teràpia regenerativa senzilla i econòmica que s'està expandint ràpidament i donant suport a la investigació clínica.Aquest estudi suggereix un mecanisme fisiològic que, si es confirma, podria ajudar-nos a entendre part del mecanisme regeneratiu de la teràpia proliferativa.
Informàtica Biomèdica i Sanitària a la Universitat de Missouri, Escola de Medicina de Kansas City, Kansas City, EUA
Subjectes humans: tots els participants en aquest estudi van donar o no consentiment.La Societat Internacional de Medicina Cel·lular ha emès l'aprovació ICMS-2017-003.El següent protocol ha estat aprovat per a un ús posterior per part de la Junta de Revisió Institucional de la Societat Internacional de Medicina Cel·lular: Títol: Càlcul del rendiment de fàrmacs plasmàtics rics en plaquetes basat en el recompte de plaquetes CBC basal.Animals: tots els autors van confirmar que no hi havia cap animal ni teixit implicat en aquest estudi.Conflictes d'interessos: D'acord amb el Formulari de divulgació uniforme de l'ICMJE, tots els autors declaren el següent: Informació de pagament/servei: Tots els autors declaren que no han rebut suport financer de cap organització per al treball enviat.Relacions econòmiques: Tots els autors declaren que actualment o durant els últims tres anys no tenen relacions financeres amb cap organització que pugui estar interessada en el treball presentat.Altres relacions: Tots els autors declaren que no hi ha altres relacions o activitats que puguin afectar el treball enviat.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al.(17 de maig de 2022) L'efecte de la glucosa sobre el recompte i el volum de plaquetes: implicacions per a la medicina regenerativa.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al.Aquest és un article d'accés obert distribuït sota els termes de la llicència de reconeixement de Creative Commons CC-BY 4.0.Es permet l'ús, la distribució i la reproducció il·limitats en qualsevol mitjà, sempre que s'acreditin l'autor i la font originals.