Ang ubang mga LC troubleshooting nga mga hilisgutan dili gayud lipas na, tungod kay adunay mga isyu sa LC practice, bisan pa nga ang instrument technology mouswag sa paglabay sa panahon.Adunay daghang mga paagi diin ang mga problema mahimong motumaw sa usa ka LC system ug mosangko sa dili maayo nga peak shape.Sa diha nga ang mga isyu nga may kalabutan sa peak shape motungha, ang usa ka mubo nga lista sa posible nga mga hinungdan alang niini nga mga resulta makatabang sa pagpayano sa atong troubleshooting experience.
Makalingaw ang pagsulat niining kolum sa “LC Troubleshooting” ug paghunahuna bahin sa mga topiko kada bulan, tungod kay ang ubang mga topiko dili gayod mawala sa uso. Samtang sa natad sa chromatography pagsiksik sa pipila ka mga topiko o mga ideya nga dili na magamit tungod kay kini gipulihan sa mas bag-o ug mas maayo nga mga ideya, sa natad sa pag-troubleshoot, tungod kay ang unang troubleshooting nga artikulo mitungha niini nga journal (ang mga LC Journal niadtong panahona) O (ang pipila ka mga LC Journal niadtong panahona) may kalabutan pa). Gipunting nako ang daghang mga seksyon sa Pag-troubleshoot sa LC sa mga kontemporaryo nga uso nga nakaapekto sa liquid chromatography (LC) (pananglitan, ang relatibong pagtandi sa among pagsabut sa epekto sa pressure sa pagpadayon [2] Bag-ong mga Pag-uswag) Ang among paghubad sa mga resulta sa LC ug kung giunsa ang pag-troubleshoot sa mga modernong instrumento sa LC. troubleshooting — mga elemento nga maayo alang sa bisan unsa nga troubleshooter importante, bisan unsa pa ang edad sa sistema nga atong gigamit. Ang kinauyokan nga topiko niini nga serye mao ang kaayo may kalabutan sa LCGC ni bantog nga “LC Troubleshooting Guide” wall chart (4) nga nagbitay sa daghang mga laboratoryo. Alang sa ikatulo nga bahin niini nga serye, ako mipili sa pag-focus sa mga isyu nga may kalabutan sa peak porma o peak nga mga kinaiya sa LCGC. sa niini nga mga isyu sa detalye sa usa ka artikulo, mao nga niining unang installment sa hilisgutan, ako motutok sa pipila sa mga nga akong makita sa kanunay. Nanghinaut ko nga ang mga batan-on ug tigulang nga tiggamit sa LC makakaplag sa pipila ka makatabang nga mga tip ug mga pahinumdom niining importante nga hilisgutan.
Akong nakita ang akong kaugalingon nga nag-anam nga nagtubag sa mga pangutana sa pag-troubleshoot nga adunay "bisan unsa nga posible".Kini nga tubag ingon kadali kung gikonsiderar ang mga obserbasyon nga lisud hubaron, apan nakita nako nga kini kanunay nga angay. Uban sa daghang posible nga mga hinungdan sa dili maayo nga porma sa peak, hinungdanon nga huptan ang bukas nga hunahuna kung hunahunaon kung unsa ang mahimo nga problema, ug aron mahimo nga unahon ang mga potensyal nga hinungdan aron masugdan ang among mga paningkamot sa pag-troubleshoot, nga nagpunting sa labing hinungdanon nga mga posibilidad.
Usa ka yawe nga lakang sa bisan unsang pag-ehersisyo sa pag-troubleshoot —apan usa nga sa akong hunahuna wala’y bili — mao ang pag-ila nga adunay problema nga kinahanglan sulbaron. , nag-unang ngilit, tailing, ug uban pa), apan usab sa gilapdon.Ang atong mga gilauman alang sa aktuwal nga peak porma yano ra.Ang teorya (6) maayo nga nagsuporta sa pagpaabot sa libro nga, sa kadaghanan nga mga kaso, ang chromatographic nga mga taluktok kinahanglan nga simetriko ug nahiuyon sa porma sa usa ka Gaussian nga pag-apod-apod, ingon sa gipakita sa Figure 1a.Unsa ang atong gipaabut gikan sa usa ka peak nga gilapdon sa artikulo sa umaabot. e 1 ipakita ang pipila sa ubang mga posibilidad nga maobserbahan—sa laing pagkasulti, pipila sa mga paagi nga mahimong dili maayo ang mga butang.
Usahay ang mga taluktok dili makita sa tanan sa chromatogram diin sila gilauman nga eluted. Ang ibabaw nga wall chart nagpakita nga ang pagkawala sa usa ka peak (nagtuo nga ang sample sa tinuod naglangkob sa target analyte sa usa ka konsentrasyon nga kinahanglan nga ang detector tubag igo sa pagtan-aw niini sa ibabaw sa kasaba) kasagaran may kalabutan sa pipila ka isyu instrumento o sayop nga mobile phase kondisyon (kon obserbahan sa tanan).peaks, kasagaran kaayo "huyang").Ang usa ka mubo nga listahan sa mga potensyal nga mga problema ug mga solusyon niini nga kategoriya makita sa Table I.
Sama sa nahisgotan na sa ibabaw, ang pangutana kon unsa ka daghan ang peak nga pagpalapad kinahanglan nga itugot sa dili pa magtagad ug mosulay sa pag-ayo niini usa ka komplikado nga hilisgutan nga akong hisgutan sa umaabot nga artikulo.Ang akong kasinatian mao nga ang mahinungdanon nga paglapad sa peak kasagaran giubanan sa usa ka mahinungdanon nga pagbag-o sa peak nga porma, ug ang peak tailing mas komon kay sa pre-peak o splitting.Bisan pa, ang nominally simetriko nga mga taluktok mahimo usab nga gipahinabo sa pipila ka nagkalainlain nga mga rason:
Ang matag usa niini nga mga isyu nahisgotan na sa detalye sa nangaging mga isyu sa Troubleshooting LC, ug ang mga magbabasa nga interesado niini nga mga topiko mahimong mag-refer niining miaging mga artikulo alang sa impormasyon sa mga hinungdan ug posibleng mga solusyon niini nga mga isyu.Dugang detalye.
Ang peak tailing, peak fronting, ug splitting mahimong tungod sa kemikal o pisikal nga panghitabo, ug ang lista sa mga potensyal nga solusyon niini nga mga problema nagkalainlain kaayo, depende kung nag-atubang ba kita og kemikal o pisikal nga problema. Kasagaran, pinaagi sa pagtandi sa lain-laing mga taluktok sa usa ka chromatogram, makit-an nimo ang importante nga mga timailhan kon asa ang hinungdan. apektado, apan ang uban maayo tan-awon, ang hinungdan mao ang lagmit kemikal.
Ang kemikal nga mga hinungdan sa peak tailing komplikado kaayo nga hisgutan sa makadiyot dinhi. Ang interesado nga magbabasa gipunting sa bag-o nga isyu sa "LC Troubleshooting" alang sa usa ka mas lawom nga diskusyon (10). Apan, ang usa ka sayon ​​​​nga butang nga sulayan mao ang pagpakunhod sa masa sa gi-injected analyte ug tan-awon kon ang peak nga porma molambo. o ang mga kondisyon sa chromatographic kinahanglan nga usbon aron ang maayo nga mga porma sa peak makuha bisan kung adunay daghang mga masa nga gi-inject.
Adunay usab daghang mga potensyal nga pisikal nga mga hinungdan sa peak tailing. Ang mga magbabasa nga interesado sa usa ka detalyado nga diskusyon sa mga posibilidad gipunting sa usa ka bag-o nga isyu sa "LC Troubleshooting" (11). sa wala pa, ug instalar sa usa ka gamay nga gidaghanon injection loop uban sa usa ka ferrule nga gihulma ngadto sa usa ka stainless steel capillary.After sa pipila ka inisyal nga troubleshooting mga eksperimento, kita nakaamgo nga ang port giladmon sa injection balbula stator mao ang mas lawom kay sa kita gigamit sa, nga miresulta sa usa ka dako nga patay nga gidaghanon sa ubos sa port.This problema mao ang dali nga masulbad pinaagi sa pag-ilis sa indeyksiyon loop sa ferru sa lain nga tubo.
Ang mga faret nga mga prutas sama sa gipakita sa Figure 1E mahimo usab nga hinungdan sa mga problema sa lawas o kemikal.A nga ang mga partikulo sa pag-ayo sa oras nga pag-ayo sa kini nga pag-ayo sa us aka us aka us aka us aka us aka us aka koleksyon Mga kondisyon sa tuldok .Under ang masa gi-injected.in pagdugang, ang mga nonlinear nga porma nagtino sa dagway sa mga peaks sa chromatographic, nga ang pag-agay sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-agay sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-agay sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-agay sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-agay sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-agay sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-ayo sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-ayo sa pag-analisar nga hinungdan sa pag-ayo sa pag-agay sa pag-agwanta ize kini nga pamatasan.
Usahay atong maobserbahan kung unsa ang makita nga usa ka "split" peak, sama sa gipakita sa Figure 1f. Ang unang lakang sa pagsulbad niini nga problema mao ang pagtino kung ang peak nga porma tungod sa partial co-elution (ie, ang presensya sa duha ka managlahi apan suod nga eluting compounds). Ang mga ks may kalabutan sa pisikal nga Pagpasundayag walay kalabotan sa kolum mismo.Kasagaran, ang labing importanteng timailhan niini nga desisyon mao kung ang tanan nga mga taluktok sa chromatogram nagpakita sa nabahin nga mga porma, o usa o duha lang. Kon kini usa o duha lang, lagmit usa kini ka isyu sa co-elution;kung ang tanan nga mga taluktok gibahin, tingali kini usa ka pisikal nga isyu, lagmit nga adunay kalabotan sa kolum mismo.
Ang mga split peak nga may kalabutan sa pisikal nga mga kabtangan sa kolum mismo kasagaran tungod sa partially blocked inlet o outlet frits, o pag-organisar pag-usab sa mga partikulo sa kolum, nga nagtugot sa mobile phase nga moagos nga mas paspas kay sa mobile phase sa pipila ka mga dapit sa column channel formation .sa ubang mga rehiyon (11) .bisan pa, sa akong kasinatian, kasagaran kini usa ka mubo nga termino kaysa usa ka dugay nga solusyon.Kini sagad nga makamatay sa mga modernong kolum kung ang mga partikulo maghiusa pag-usab sulod sa kolum.Niini nga punto, labing maayo nga ilisan ang kolum ug magpadayon.
Ang peak sa Figure 1g, gikan usab sa usa ka bag-o nga pananglitan sa akong kaugalingon nga lab, kasagaran nagpakita nga ang signal taas kaayo nga kini nakaabot sa taas nga tumoy sa response range.Alang sa optical absorbance detectors (UV-vis niini nga kaso), kung ang analyte nga konsentrasyon taas kaayo, ang analyte mosuhop sa kadaghanan sa kahayag nga moagi sa detector flow cell, nga magbilin ug gamay kaayo nga kahayag gikan niini nga mga tinubdan sa signal nga makita sa lain-laing mga UV nga mga kondisyon, ang mga tinubdan sa kuryente dili mamatikdan. ise, sama sa stray light ug "dark current", nga naghimo sa signal nga "fuzzy" kaayo sa hitsura ug independente sa analyte concentration.Kung mahitabo kini, ang problema sagad dali nga masulbad pinaagi sa pagkunhod sa gidaghanon sa pag-injection sa analyte - pagkunhod sa gidaghanon sa indeyksiyon, pagtunaw sa sample, o pareho.
Sa eskwelahan sa chromatography, gigamit namo ang signal sa detector (ie, ang y-axis sa chromatogram) isip timailhan sa konsentrasyon sa analyte sa sample. Busa morag katingad-an nga makita ang usa ka chromatogram nga adunay signal nga ubos sa zero, tungod kay ang yano nga interpretasyon mao nga kini nagpakita sa negatibo nga analyte nga konsentrasyon - nga siyempre dili posible sa pisikal.
Sa kini nga kaso, ang negatibo nga peak nagpasabot lamang nga ang mga molekula nga mogawas gikan sa kolum mosuhop ug gamay nga kahayag kay sa mobile phase mismo diha-diha dayon sa wala pa ug human sa peak.Kini mahimong mahitabo, pananglitan, sa paggamit sa medyo ubos nga detection wavelengths (<230 nm) ug mobile phase additives nga mosuhop sa kadaghanan sa kahayag niini nga mga wavelength. Ang maong mga additives mahimo nga mobile phase solvent components sama sa mga sangkap sama sa methanol o peacetne nga mag-andam sa tinuod nga mga sangkap sama sa methanol o peacetne. libration curve ug pagkuha sa tukma nga quantitative nga impormasyon, mao nga walay sukaranan nga rason sa paglikay sa kanila per se (kini nga pamaagi usahay gitawag nga "dili direkta nga UV detection") (13). Apan, kon kita gusto gayud nga likayan ang negatibo nga mga taluktok sa hingpit, sa kaso sa absorbance detection, ang labing maayo nga solusyon mao ang paggamit sa usa ka lain-laing detection wavelength aron ang analyte sa mga bahin mosuhop o labaw pa sa mga bahin sa mobile.
Ang negatibo nga mga taluktok mahimo usab nga makita kung gigamit ang refractive index (RI) detection kung ang refractive index sa mga sangkap gawas sa analyte sa sample, sama sa solvent matrix, lahi sa refractive index sa mobile phase. Mahitabo usab kini sa pagkakita sa UV-vis, apan kini nga epekto lagmit nga maminusan sa pagkakita sa RI.
Sa ikatulo nga bahin sa sukaranan nga hilisgutan sa pag-troubleshoot sa LC, akong gihisgutan ang mga sitwasyon diin ang nakita nga peak nga porma lahi sa gipaabot o normal nga peak nga porma. kasagaran.Ang pagkahibalo niini nga mga detalye naghatag ug maayong dapit sa pagsugod sa pag-troubleshoot, apan dili makuha ang tanang mga posibilidad.Ang mga magbabasa nga interesado sa mas lawom nga listahan sa mga hinungdan ug solusyon mahimong mag-refer sa LCGC “LC Troubleshooting Guide” wall chart.
(4) LCGC “LC Troubleshooting Guide” wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis ug Signal Processing sa Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF ug Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.