Ang ubang mga LC troubleshooting nga mga hilisgutan dili gayud lipas na, tungod kay adunay mga isyu sa LC practice, bisan pa nga ang instrument technology mouswag sa paglabay sa panahon.Adunay daghang mga paagi diin ang mga problema mahimong motumaw sa usa ka LC system ug mosangko sa dili maayo nga peak shape.Sa diha nga ang mga isyu nga may kalabutan sa peak shape motungha, ang usa ka mubo nga lista sa posible nga mga hinungdan alang niini nga mga resulta makatabang sa pagpayano sa atong troubleshooting experience.
Makalingaw ang pagsulat niining kolum sa “LC Troubleshooting” ug paghunahuna bahin sa mga topiko kada bulan, tungod kay ang ubang mga topiko dili gayud mawala sa uso. Samtang sa natad sa chromatography research pipila ka mga topiko o mga ideya nahimong dili na magamit tungod kay kini gipulihan sa mas bag-o ug mas maayo nga mga ideya, sa natad sa troubleshooting, tungod kay ang unang troubleshooting nga artikulo mipakita niini nga journal (ang LC Journal niadtong panahona) may kalabutan pa (ang LC Journal niadtong panahona). sa milabay nga pipila ka tuig, naka-focus ko sa pipila ka LC Troubleshooting nga mga seksyon sa kontemporaryong uso nga nakaapekto sa liquid chromatography (LC) (pananglitan, ang relatibong pagtandi sa atong pagsabot sa epekto sa pressure sa retention [2] Bag-ong Advances) Ang atong interpretasyon sa mga resulta sa LC ug unsaon pag-troubleshoot sa modernong LC nga mga instrumento. “kinabuhi ug kamatayon” nga mga hilisgutan sa LC troubleshooting — mga elemento nga maayo alang sa bisan unsa nga troubleshooter importante, bisan unsa pa ang edad sa sistema nga atong gigamit. lain-laing posibleng hinungdan sa dili maayo nga peak nga porma!Dili nato makonsiderar ang tanan niini nga mga isyu sa detalye sa usa ka artikulo, busa niining unang bahin sa hilisgutan, akong ipunting ang pipila sa akong makita kanunay. Nanghinaut ko nga ang mga batan-on ug tigulang nga mga tiggamit sa LC makakita og pipila ka makatabang nga mga tip ug mga pahinumdom niining importante nga hilisgutan.
Akong nakita ang akong kaugalingon nga nag-anam nga nagtubag sa mga pangutana sa pag-troubleshoot gamit ang "bisan unsa nga posible".Kini nga tubag ingon kadali kung gikonsiderar ang mga obserbasyon nga lisud hubaron, apan nakita nako nga kini kanunay nga angay. Uban sa daghang posible nga mga hinungdan sa dili maayo nga porma sa peak, hinungdanon nga huptan ang bukas nga hunahuna kung hunahunaon kung unsa ang mahimo nga problema, ug aron mahimo nga unahon ang mga potensyal nga hinungdan aron masugdan ang among mga paningkamot sa pag-troubleshoot, nga nagpunting sa labing kasagaran nga mga posibilidad.
Usa ka yawe nga lakang sa bisan unsang pag-ehersisyo sa pag-troubleshoot —apan usa nga sa akong hunahuna wala’y pagtagad — mao ang pag-ila nga adunay problema nga kinahanglan sulbaron. hamis, fluffy, nag-unang ngilit, tailing, ug uban pa), apan usab sa gilapdon.Ang atong mga gilauman alang sa aktuwal nga peak porma mao ang yano.Ang teorya (6) maayo nga nagsuporta sa textbook pagpaabut nga, sa kadaghanan sa mga kaso, ang chromatographic peak kinahanglan nga simetriko ug mopahiuyon sa porma sa usa ka Gaussian distribution, ingon sa gipakita sa Figure 1a.Unsa ang atong gilauman sa umaabot nga isyu ug usa ka mas komplikado nga hilisgutan gikan sa usa ka peak sa umaabot. artikulo.Ang ubang mga peak shapes sa Figure 1 nagpakita sa pipila sa ubang mga posibilidad nga maobserbahan—sa laing pagkasulti, pipila sa mga paagi nga mahimong dili maayo ang mga butang.Sa nahibilin niini nga installment, mogahin kami og panahon sa paghisgot sa pipila ka piho nga mga pananglitan sa mga sitwasyon nga mahimong mosangpot niining mga matang sa porma.
Usahay ang mga taluktok dili makita sa tanan sa chromatogram diin sila gilauman nga eluted. Ang ibabaw nga wall chart nagpakita nga ang pagkawala sa usa ka peak (nagtuo nga ang sample sa tinuod naglangkob sa target analyte sa usa ka konsentrasyon nga kinahanglan nga ang detector tubag igo sa pagtan-aw niini sa ibabaw sa kasaba) kasagaran may kalabutan sa pipila ka isyu instrumento o sayop nga mobile phase kondisyon (kon obserbahan sa tanan). peaks, kasagaran kaayo "huyang").Ang usa ka mubo nga listahan sa mga potensyal nga mga problema ug mga solusyon niini nga kategoriya makita sa Table I.
Sama sa nahisgotan na sa ibabaw, ang pangutana kon unsa ka daghan ang peak nga pagpalapad kinahanglan nga itugot sa dili pa magtagad ug mosulay sa pag-ayo niini usa ka komplikado nga hilisgutan nga akong hisgutan sa umaabot nga artikulo.Ang akong kasinatian mao nga ang mahinungdanon nga paglapad sa peak kasagaran giubanan sa usa ka mahinungdanon nga pagbag-o sa peak nga porma, ug ang peak tailing mas komon kay sa pre-peak o splitting.Bisan pa, ang nominally simetriko nga mga taluktok mahimo usab nga gipahinabo sa pipila ka nagkalainlain nga mga rason:
Ang matag usa niini nga mga isyu gihisgutan sa detalye sa miaging mga isyu sa Troubleshooting LC, ug ang mga magbabasa nga interesado niini nga mga hilisgutan mahimong mag-refer niining mga nangaging mga artikulo alang sa kasayuran sa mga hinungdan ug potensyal nga mga solusyon niini nga mga isyu. Dugang detalye.
Ang peak tailing, peak fronting, ug splitting mahimong tungod sa kemikal o pisikal nga panghitabo, ug ang lista sa mga potensyal nga solusyon niini nga mga problema nagkalainlain kaayo, depende kung nag-atubang ba kita og kemikal o pisikal nga problema. Kasagaran, pinaagi sa pagtandi sa lain-laing mga taluktok sa usa ka chromatogram, makit-an nimo ang importanteng mga timailhan kon asa ang hinungdan. pipila ka mga taluktok ang apektado, apan ang uban maayo tan-awon, ang hinungdan lagmit kemikal.
Ang kemikal nga mga hinungdan sa peak tailing komplikado kaayo nga hisgutan sa makadiyot dinhi. Ang interesado nga magbabasa gipunting sa bag-o nga isyu sa "LC Troubleshooting" alang sa usa ka mas lawom nga diskusyon (10). Apan, ang usa ka sayon ​​​​nga butang nga sulayan mao ang pagpakunhod sa masa sa gi-injected analyte ug tan-awon kon ang peak nga porma molambo. analyte nga mga masa, o ang chromatographic nga mga kondisyon kinahanglan nga usbon aron ang maayo nga peak nga mga porma makuha bisan sa mas dagkong mga masa nga gi-injected.
Adunay usab daghang potensyal nga pisikal nga mga hinungdan sa peak tailing. Ang mga magbabasa nga interesado sa usa ka detalyado nga diskusyon sa mga posibilidad gipunting sa usa ka bag-o nga isyu sa "LC Troubleshooting" (11). nga wala namo gigamit kaniadto, ug nag-instalar sa usa ka gamay nga volume injection loop nga adunay usa ka ferrule nga gihulma ngadto sa usa ka stainless steel capillary.After sa pipila ka inisyal nga troubleshooting mga eksperimento, among naamgohan nga ang port depth sa injection valve stator mas lawom kay sa among naandan, nga miresulta sa usa ka dako nga patay nga volume sa ubos sa port.Kini nga problema dali nga masulbad pinaagi sa pag-ilis sa posisyon sa pag-injection aron ma-adjust ang tube, mahimo namong masulbad ang husto nga posisyon sa pag-injection. patay nga gidaghanon sa ubos sa pantalan.
Ang peak fronts sama sa gipakita sa Figure 1e mahimo usab nga tungod sa pisikal o kemikal nga mga problema. Usa ka kasagarang pisikal nga hinungdan sa nag-unang ngilit mao nga ang partikulo nga higdaanan sa kolum dili maayo nga giputos, o nga ang mga partikulo nahan-ay pag-usab sa paglabay sa panahon. Sama sa peak tailing nga gipahinabo niining pisikal nga panghitabo, ang pinakamaayong paagi sa pag-ayo niini mao ang pag-ilis sa kolum ug pagpadayon. "non-linear" retention nga mga kondisyon.Ubos sa ideal (linear) nga mga kondisyon, ang gidaghanon sa analyte nga gipabilin sa stationary nga hugna (busa, ang retention factor) kay linearly nga may kalabutan sa konsentrasyon sa analyte sa column.Chromatographically, kini nagpasabot nga samtang ang mass sa analyte nga gi-inject sa column mosaka, ang peak mahimong mas taas, ang retention kay mas lapad, apan dili mas lapad ang retention. dili lamang mahimong mas taas apan mas lapad usab samtang mas daghang masa ang gi-injected.Dugang pa, ang mga nonlinear nga porma nagtino sa porma sa chromatographic peaks, nga moresulta sa nag-una o nagsunod nga mga ngilit.Sama sa mass overload nga maoy hinungdan sa peak tailing (10), ang peak leading tungod sa nonlinear retention mahimo usab nga madayagnos pinaagi sa pagkunhod sa gi-injected nga analyte nga porma kinahanglan nga mo-uswag sa mass, nga ang peak nga hinungdan sa pag-analisar kinahanglan nga mapauswag ang kalidad. ngilit, o ang mga kondisyon sa chromatographic kinahanglan nga usbon aron maminusan kini nga pamatasan.
Usahay atong maobserbahan ang usa ka "split" peak, ingon sa gipakita sa Figure 1f. Ang unang lakang sa pagsulbad niini nga problema mao ang pagtino kung ang peak nga porma tungod sa partial co-elution (ie, ang presensya sa duha ka managlahi apan suod nga eluting compounds). Ang “split” nga mga taluktok may kalabotan sa pisikal nga Pagpasundayag walay kalabotan sa kolum mismo.Kasagaran, ang labing importanteng timailhan niini nga desisyon mao ang kon ang tanan nga mga taluktok sa chromatogram nagpakita sa mga porma nga nabahin, o usa o duha lang. Kon kini usa o duha lang, kini lagmit usa ka isyu sa co-elution; kung ang tanan nga mga taluktok gibahin, tingali kini usa ka pisikal nga isyu, lagmit nga adunay kalabotan sa kolum mismo.
Ang mga split peak nga may kalabutan sa pisikal nga mga kabtangan sa kolum mismo kasagaran tungod sa partially blocked inlet o outlet frits, o pag-organisar pag-usab sa mga partikulo sa kolum, nga nagtugot sa mobile phase nga moagos nga mas paspas kay sa mobile phase sa pipila ka mga dapit sa column channel formation .sa ubang mga rehiyon (11) . bisan pa, sa akong kasinatian, kasagaran kini usa ka mubo nga termino kaysa usa ka dugay nga solusyon.Kini sagad nga makamatay sa mga modernong kolum kung ang mga partikulo maghiusa pag-usab sulod sa kolum.Niini nga punto, labing maayo nga ilisan ang kolum ug magpadayon.
Ang peak sa Figure 1g, gikan usab sa usa ka bag-o nga pananglitan sa akong kaugalingon nga lab, kasagaran nagpakita nga ang signal taas kaayo nga kini nakaabot sa taas nga katapusan sa response range.Alang sa optical absorbance detectors (UV-vis niini nga kaso), kung ang analyte concentration taas kaayo, ang analyte mosuhop sa kadaghanan sa kahayag nga moagi sa detector flow cell, nga magbilin ug gamay kaayo nga kahayag gikan niini nga mga kondisyon nga makita sa mga de-koryenteng signal, ang UV-vis sa niini nga kaso, sa diha nga ang analyte nga konsentrasyon taas kaayo, ang analyte mosuhop sa kadaghanan sa kahayag nga moagi sa detector flow cell, nga magbilin ug gamay kaayo nga kahayag gikan niini nga mga kondisyon sa de-koryente nga mamatikdan. pinaagi sa nagkalain-laing tinubdan sa kasaba, sama sa saag nga kahayag ug "dark current", nga naghimo sa signal nga "fuzzy" kaayo sa panagway ug independente sa analyte concentration. Kung mahitabo kini, ang problema sagad dali nga masulbad pinaagi sa pagkunhod sa gidaghanon sa pag-injection sa analyte - pagkunhod sa gidaghanon sa indeyksiyon, pagtunaw sa sample, o pareho.
Sa eskwelahan sa chromatography, gigamit namo ang signal sa detector (ie, ang y-axis sa chromatogram) isip timailhan sa konsentrasyon sa analyte sa sample. Busa morag katingad-an nga makita ang usa ka chromatogram nga adunay signal nga ubos sa zero, tungod kay ang yano nga interpretasyon mao nga kini nagpakita sa negatibo nga analyte nga konsentrasyon - nga siyempre dili posible sa pisikal.
Sa kini nga kaso, ang usa ka negatibo nga peak nagpasabut nga ang mga molekula nga nagpagawas gikan sa kolum mosuhop ug gamay nga kahayag kaysa sa mobile phase mismo sa wala pa ug pagkahuman sa peak. Mahimo kini mahitabo, pananglitan, kung mogamit medyo ubos nga wavelength sa detection (<230 nm) ug mga additives sa mobile phase nga mosuhop sa kadaghanan sa kahayag sa kini nga mga wavelength. Ang ingon nga mga additives mahimo nga mobile phase solvent nga mga sangkap sama sa mga sangkap nga adunay negatibo nga sangkap sama sa methanol ocetne. mga taluktok aron sa pag-andam sa usa ka calibration curve ug pagkuha sa tukma nga quantitative nga impormasyon, mao nga walay sukaranan nga rason sa paglikay kanila sa matag se (kini nga pamaagi usahay gitawag nga "dili direkta UV detection") (13). Apan, kon kita gusto gayud sa paglikay sa negatibo nga mga taluktok sa bug-os, sa kaso sa absorbance detection, ang labing maayo nga solusyon mao ang paggamit sa usa ka lain-laing mga detection wavelength sa ingon nga ang pag-usab sa mga bahin sa mobile mas mosuhop sa bahin sa mobile o mas ubos nga bahin sa komposisyon. kahayag kay sa analytes.
Ang negatibo nga mga taluktok mahimo usab nga makita kung gigamit ang refractive index (RI) detection kung ang refractive index sa mga sangkap gawas sa analyte sa sample, sama sa solvent matrix, lahi sa refractive index sa mobile phase. Mahitabo usab kini sa pagkakita sa UV-vis, apan kini nga epekto lagmit nga maminusan sa pagkakita sa RI. ang mobile phase.
Sa ikatulo nga bahin sa sukaranan nga hilisgutan sa pag-troubleshoot sa LC, akong gihisgutan ang mga sitwasyon diin ang nakita nga peak nga porma lahi sa gipaabot o normal nga peak nga porma. ang mga rason nga akong makita kanunay.Ang pagkahibalo niini nga mga detalye naghatag ug maayong dapit sa pagsugod sa pag-troubleshoot, apan dili makuha ang tanang mga posibilidad.Ang mga magbabasa nga interesado sa mas lawom nga listahan sa mga hinungdan ug mga solusyon mahimong mag-refer sa LCGC “LC Troubleshooting Guide” wall chart.
(4) LCGC “LC Troubleshooting Guide” wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis ug Signal Processing sa Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF ug Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.