Salamat sa pagbisita sa Nature.com.Ang bersyon sa browser nga imong gigamit adunay limitado nga suporta alang sa CSS.Alang sa labing kaayo nga kasinatian, among girekomenda nga mogamit ka usa ka updated nga browser (o i-off ang compatibility mode sa Internet Explorer).Sa kasamtangan, aron masiguro ang padayon nga suporta, among ipakita ang site nga walay mga estilo ug JavaScript.
Ang mga porous nga silica nga mga partikulo giandam pinaagi sa usa ka pamaagi sa sol-gel nga adunay pipila nga mga pagbag-o aron makuha ang mga macroporous nga mga partikulo.Kini nga mga partikulo nakuha pinaagi sa reversible nga pagdugang fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization nga adunay N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ug styrene aron maandam ang N-phenylmaleimide phase 1 x stainless steel intercalation sa N-phenylmaleimide (PMP). .8 mm id) giputos sa slurry packing.Gi-evaluate ang PMP column separation sa usa ka peptide mixture nga gilangkuban sa lima ka peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ug ekromatograma nga seksyon sa pagtunaw sa album sa mga tawo. theoretical plate count sa peptide mixture kay taas sa 280,000 plates/m².Ang pagtandi sa separation performance sa naugmad nga column sa commercial Ascentis Express RP-Amide column, naobserbahan nga ang separation performance sa PMP column mas labaw sa commercial column sa termino sa separation efficiency ug resolution.
Sa bag-ohay nga mga tuig, ang biopharmaceutical nga industriya nahimong usa ka pagpalapad sa tibuok kalibutan nga merkado uban sa usa ka igo nga pagtaas sa bahin sa merkado. Uban sa eksplosibo nga pagtubo sa biopharmaceutical industriya1,2,3, ang pag-analisa sa peptides ug mga protina mao ang kaayo gitinguha. Dugang pa sa target peptide, daghang mga hugaw ang namugna sa panahon sa peptide synthesis, sa ingon nanginahanglan sa pagdalisay sa chromatographic nga kinaiya sa protina. Ang mga pluwido, mga tisyu ug mga selula usa ka hilabihan nga mahagiton nga buluhaton tungod sa kadaghan sa posibleng makit-an nga mga espisye sa usa ka sample.Bisan tuod ang mass spectrometry usa ka epektibo nga himan alang sa peptide ug protein sequencing, kung ang maong mga sample gi-injected ngadto sa mass spectrometer sa usa ka pass, ang pagbulag dili maayo. metro sa gihatag nga oras4,5,6.Dugang pa, sa panahon sa liquid phase separation, analytes mahimong naka-focus sa pig-ot nga mga rehiyon, sa ingon concentrating niini nga mga analytes ug pagpalambo sa MS detection sensitivity.Liquid chromatography (LC) abante kamahinungdanon sa milabay nga dekada ug nahimong popular nga teknik sa proteomic analysis7,8,9,10.
Ang reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) kaylap nga gigamit alang sa pagputli ug pagbulag sa mga peptide mixtures gamit ang octadecyl-modified silica (ODS) isip stationary phase11,12,13.Apan, ang RP stationary phases wala maghatag ug makatagbaw nga separation sa peptides ug proteins tungod sa ilang complex nga gambalay nga 14, philore to peptide tungod sa ilang komplikado nga gambalay sa kinaiyahan nga 14, to philore. analisa ang mga peptide ug mga protina nga adunay polar ug non-polar moieties aron makig-interact ug magpabilin kini nga mga analytes16.Mixed-mode chromatography, nga naghatag og multimodal interactions, mahimong alternatibo sa RP-LC alang sa pagbulag sa peptides, proteins, ug uban pang komplikadong mga mixture.Ubay-ubay nga mixed-mode stationary nga mga hugna ang giandam na uban niini nga mga phase, peptide1para1 nga mga hugna nga giandam, ug ang mga kolumna nga giputos11para1, mga peptide1para nga gigamit, ug ang mga kolumna nga giputos119 para sa 20,21.Mixed-mode stationary phases (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) ang angay alang sa peptide ug protein separations tungod sa presensya sa duha ka polar ug non-polar nga mga grupo22,23,24,25,26,27,28 .Sama, polar phase bonds intercalating nga mga grupo nga maayo ug polar nga separasyon nga nagpakita sa polar nga separasyon nga maayo nga estasyon sa polar ug dili polar. ug non-polar analytes, kay ang pagbulag nagdepende sa interaksyon tali sa analyte ug stationary phase.Multimodal nga mga interaksyon 29, 30, 31, 32. Bag-ohay lang, Zhang et al.30 nag-andam ug dodecyl-terminated polyamine stationary phase ug malampusong nagbulag sa mga hydrocarbon, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ug uban pang mga analytes.Ang polar intercalator adunay duha ka polar ug non-polar nga mga grupo, mao nga kini magamit sa pagbulag sa mga peptides ug mga protina nga adunay duha ka hydrophobic ug hydrophilic-kolum nga mga embedded. ubos sa trade name nga Ascentis Express RP-Amide columns, apan kini nga column kay gigamit alang sa pag-analisa sa amine 33 lamang.
Sa kasamtangan nga pagtuon, ang usa ka polar-embedded stationary phase (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) giandam ug gi-evaluate alang sa separation sa peptides ug trypsin digests sa HSA.The stationary phase giandam gamit ang mosunod nga estratehiya.Ang mga porous nga silica nga mga partikulo giandam sumala sa pamaagi nga gihatag sa among miaging publikasyon nga adunay pipila ka mga pagbag-o sa protocol sa pag-andam, ang polyethylene sa polyethylene a. sa pag-andam sa silica particles nga adunay dako nga pore size.Ikaduha, usa ka bag-ong ligand, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, gi-synthesize ug gigamit sa pag-derivatize sa mga particle sa silica aron sa pag-andam sa usa ka polar embedded stationary phase. ang kolum.Pagtimbang-timbang sa packed column separation sa peptide mixtures nga naglangkob sa lima ka peptides;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ug Trypsin digest sa human serum albumin (HAS) . .Ang mga peptide ug mga protina naobserbahan nga maayo nga nasulbad ug episyente sa kolum sa PMP, nga mas episyente kay sa kolum sa Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS) trile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ug Acetone Gipalit gikan sa Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Ang usa ka sinagol nga urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), ug 8 mL sa 0.01 N acetic acid gikutaw sulod sa 10 minutos, ug dayon 24 mL sa TMOS ang gidugang niini ubos sa bugnaw nga mga kondisyon. 70 ° C sulod sa 12 ka oras. Ang uga nga humok nga masa mao ang hamis nga yuta sa usa ka hurnohan ug gi-calcined sa 550 ° C sulod sa 12 ka oras. Tulo ka batch ang giandam ug gihulagway aron masusi ang reproducibility sa gidak-on sa partikulo, gidak-on sa pore ug lugar sa nawong.
Pinaagi sa pagbag-o sa nawong sa mga partikulo sa silica nga adunay pre-synthesized ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) nga gisundan sa radial polymerization nga adunay styrene, giandam ang usa ka polar group-containing compound.Stationary phase para sa mga aggregates ug polystyrene chains.Ang proseso sa pagpangandam gihulagway sa ubos.
Ang N-phenylmaleimide (200 mg) ug methyl vinyl isocyanate (100 mg) natunaw sa dry toluene, ug 0.1 mL nga 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ang gidugang sa reaction flask aron maandam ang phenylmaleimide-methyl isocyanate copolymer (PMC) ug 3° nga gisagol sa 3° nga hurnohan. 40°C sulod sa 3 ka oras.
Ang uga nga mga partikulo sa silica (2 g) gisabwag sa uga nga toluene (100 mL), gipalihok ug gi-sonicated sa usa ka 500 mL round bottom flask sulod sa 10 min. Ang PMCP (10 mg) natunaw sa toluene ug gidugang dropwise sa reaction flask pinaagi sa dropping funnel. oras.Dayon, ang PMCP-bonded silica particles (100 g) dissolved sa toluene (200 ml) ug 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) gidugang sa atubangan sa 100 µL sa dibutyltin dilaurate ingon nga usa ka catalyst.Ang sagol nga gikutaw sa 50 °C alang sa 8 ka oras, sinala ug uga nga oras.
Ang Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ug TEMPO-PMCP-attached silica particles (1.5 g) gisabwag sa toluene ug gipurga sa nitrogen. Ang polymerization sa styrene gihimo sa 100 ° C sulod sa 12 ka oras. Ang resulta nga produkto gihugasan sa methanol ug gipauga sa tibuok gabii sa Figure nga pamaagi sa 60 ° C.
Ang mga sample gi-degassed sa 393 K sulod sa 1 ka oras aron makuha ang nahabilin nga presyur nga ubos sa 10-3 Torr.Ang kantidad sa N2 adsorbed sa usa ka relatibong presyur sa P / P0 = 0.99 gigamit aron mahibal-an ang kinatibuk-ang pore volume.Ang morphology sa hubo ug ligand-bonded silica nga mga partikulo gisusi gamit ang scanning electron microsD, Japan silicaboned nga mga partikulo (H. ded silica particles) gibutang sa usa ka aluminum column gamit ang adhesive carbon tape.Gold ang plated sa mga sample gamit ang Q150T sputter coater, ug usa ka 5 nm Au layer ang gideposito sa samples.Kini nagpalambo sa proseso sa efficiency gamit ang ubos nga boltahe ug naghatag ug pinong lugas, cold sputtering.A Thermo Electron (Waltham, MA, USA)2 Flash elemental analysis. Ang Mastersizer 2000 nga particle size analyzer gigamit aron makuha ang partikulo nga gidak-on sa pag-apud-apod.Hubo nga mga partikulo sa silica ug ligand-bonded silica nga mga partikulo (5 mg matag usa) gisabwag sa 5 mL nga isopropanol, gi-sonicated sa 10 min, gi-vortex sa 5 min, ug gibutang sa optical bench sa Mastersizer.Thermogravimetric nga temperatura sa usa ka 0 °C nga sukod sa 0.5 °C sa usa ka temperatura nga 0.8 °C sa usa ka 0.5 °C.
Ang glass-lined stainless steel narrow-bore columns sa mga dimensyon (100 × 1.8 mm id) giputos gamit ang slurry packing method, nga nag-apply sa samang pamaagi nga gigamit sa Ref.31.Usa ka stainless steel column (glass-lined, 100 × 1.8 mm id) nga adunay outlet fitting nga adunay sulod nga 1 µm frit ang konektado sa slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA). ingon man usab sa propelling solvent. Pun-a ang column nga sunud-sunod pinaagi sa paggamit sa pressure sa 100 MP sulod sa 10 minutos, 80 MP sulod sa 15 minutos, ug 60 MP sulod sa 30 minutos. Atol sa pagpamutos, ang mekanikal nga vibration gipadapat sa duha ka GC column shakers (Alltech, Deerfield, IL, USA) aron maseguro nga ang presyur nga pagputos hinayhinay sa pagdiskarga sa column. kolum gikan sa slurry packing unit ug ikonektar ang laing haom sa inlet ug sa LC system aron masusi ang performance niini.
Usa ka LC pump (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) nga adunay 50nL injection loop, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary nga bintana gitukod Espesyal nga µLC device detector (UV-2075) ug glass-lined nga mga microcolumns nga nagdugtong kaayo nga mga microcolumn ug UV nga mugbo nga epekto. ter packaging, capillaries (50 μm id 365 ug pagkunhod sa unyon capillaries (50 μm) gi-install sa 1/16″ outlet sa pagkunhod sa unyon. Ang pagkolekta sa datos ug pagproseso sa chromatographic gihimo gamit ang Multichro 2000 software. Ang pag-monitor sa 254 nm Analytes gisulayan alang sa O UV nga pagsuyup sa mga datos sa Prod.
Albumin gikan sa serum sa tawo, lyophilized powder, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg nga gisagol sa trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ug 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) .Ang solusyon gikutaw sulod sa 10 minutos ug gitipigan sa usa ka water bath sa 37,1 °C nga tubig sa 67,1 °C nga kaligoanan sa 67,1 °C. Ilisan ang solusyon ug tipigan ubos sa 4 °C.
Pagbulag sa peptide mixtures ug HSA trypsin digests gibana-bana nga gilain sa PMP columns.Check the separation of peptide mixture and trypsin digest of HSA by the PMP column and compare the results to the Ascentis Express RP-Amide column.The theoretical plate number is calculated as follows:
Ang mga imahe sa SEM sa mga hubad nga mga partikulo sa silica ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand gipakita sa FIG.Ang 2 .SEM nga mga hulagway sa hubo nga silica nga mga partikulo (A, B) nagpakita nga, sukwahi sa atong nangaging mga pagtuon, kini nga mga partikulo mga lingin diin ang mga partikulo elongated o adunay dili regular nga simetriya.Ang nawong sa ligand-bonded silica nga mga partikulo (C, D) mas hamis kay sa hubo nga silica nga mga partikulo, nga mahimong tungod sa kadena sa polystyrene sa ibabaw nga mga partikulo sa silica.
Pag-scan sa mga hulagway sa mikroskopyo sa elektron sa hubo nga mga partikulo sa silica (A, B) ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand (C, D).
Ang gidak-on sa partikulo sa mga partikulo sa hubo nga silica ug ligand-bonded silica nga mga partikulo gipakita sa Figure 3 (A). Gipakita sa mga kurba sa gidak-on sa gidak-on sa partikulo nga gibase sa volume nga ang gidak-on sa mga partikulo sa silica misaka human sa kemikal nga pagbag-o (Fig. 3A). sa among miaging pagtuon nga adunay ad(0.5) nga kantidad nga 3.05 μm (polystyrene-bound silica particles)34.Kini nga batch adunay mas pig-ot nga partikulo sa gidak-on sa pag-apod-apod kon itandi sa among miaging pagtuon tungod sa lain-laing mga ratios sa PEG, urea, TMOS, ug acetic acid sa reaksyon nga sinagol.Ang gidak-on sa partikulo sa PMP nga bahin sa partikulo sa PMP kay gamay nga mas dako kaysa sa naunang partikulo sa polystyrene. Ang styrene nagdeposito lamang ug polystyrene layer (0.97 µm) sa silica surface, samtang sa PMP phase ang layer gibag-on mao ang 1.38 µm.
Pag-apod-apod sa gidak-on sa partikulo (A) ug pag-apod-apod sa gidak-on sa lungag (B) sa mga partikulo sa silica nga hubo ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand.
Ang pore size, pore volume ug surface area sa silica particles sa kasamtangan nga pagtuon gihatag sa Table 1(B). kemikal nga pagbag-o, ingon sa gipakita sa Table 1(B), ug ang pagbag-o sa kurba gipakita sa Fig. 3(B) .Sama, ang pore volume sa silica particles mikunhod gikan sa 0.67 ngadto sa 0.58 cm3/g human sa kemikal nga modification.The specific surface area of ​​the kasamtangan gitun-an silica particles is 116 m2/g2. B), ang surface area (m2/g) sa silica particles usab mikunhod gikan sa 116 m2/g ngadto sa 105 m2/g human sa kemikal nga kausaban.
Ang mga resulta sa elemental analysis sa stationary phase gipakita sa Table 2. Ang carbon loading sa kasamtangan nga stationary phase mao ang 6.35%, nga mas ubos kay sa carbon loading sa atong miaging pagtuon (polystyrene bonded silica particles, 7.93%35 ug 10.21%, sa tinagsa) 42. Ang carbon loading sa kasamtangan nga stationary nga hugna sa pag-andam mao ang ubos sa , tungod kay ang pag-load sa carbon sa kasamtangan nga stationary nga hugna mao ang ubos sa , gigamit ang nylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ug 4-hydroxy-TEMPO.Ang porsyento sa gibug-aton sa nitroheno sa kasamtangan nga yugto sa paghunong mao ang 2.21%, kung itandi sa 0.1735 ug 0.85% nga gibug-aton sa nitroheno sa miaging mga pagtuon, matag usa. Kini nagpasabut nga ang gibug-aton nga porsyento sa nitroheno mas taas sa karon nga stasionary nga hugna sa . mao ang 2.7% ug 2.9%, sa tinagsa, samtang ang carbon loading sa katapusan nga produkto (6) mao ang 6.35%, ingon sa gipakita sa Table 2. Ang gibug-aton sa pagkawala gisusi sa PMP stationary phase, ug ang TGA curve gipakita sa Figure 4. Ang TGA curve nagpakita sa usa ka gibug-aton sa pagkawala sa 8.6%, nga mao ang sa maayo nga kasabutan uban sa carbon loading, dili lamang sa 6.
Ang phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand gipili alang sa pagbag-o sa nawong sa mga partikulo sa silica tungod kay kini adunay polar nga phenylmaleimide nga mga grupo ug vinylisocyanate nga mga grupo. Ang Vinyl isocyanate nga mga grupo mahimo pa nga mo-react sa styrene pinaagi sa buhi nga radical polymerization. Ang ikaduha nga rason mao ang pagsal-ot sa usa ka grupo nga adunay kasarangang interaksyon sa analyte ug ang estasyon sa electrolyteimide ug walay lig-on nga interaksyon tali sa analyte ug sa estasyon sa electrolyteimide. ety walay virtual charge sa normal pH.Ang polarity sa stationary phase makontrolar pinaagi sa kamalaumon nga gidaghanon sa styrene ug ang reaction time sa free radical polymerization.Ang kataposang lakang sa reaksyon (free-radical polymerization) kritikal ug makapausab sa polarity sa stationary nga hugna.Ang elemental analysis gihimo aron masusi ang carbon loading niining mga stasionary phase.Naobserbahan nga ang gidaghanon sa styrene ug loading nga mga hugna sa reaksyon naobserbahan. giandam uban sa lain-laing mga konsentrasyon sa styrene adunay lain-laing mga carbon loadings.Pag-usab, load niini nga mga stationary hugna ngadto sa stainless steel kolum ug check sa ilang chromatographic performance (selectivity, resolution, N bili, ug uban pa).Base niini nga mga eksperimento, usa ka optimized pormulasyon ang gipili aron sa pag-andam sa PMP stationary phase aron maseguro ang kontrolado nga polarity ug maayo nga analyte retention.
Lima ka peptide mixtures (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) gi-evaluate usab gamit ang PMP column gamit ang mobile phase;60/40 (v/v) acetonitrile/tubig (0.1% TFA) sa flow rate nga 80 μL/min. Ubos sa kamalaumon nga kondisyon sa elution, ang theoretical plate number (N) kada column (100 × 1.8 mm id) kay 20,000 ± 100 (200,000 ka mga T chromato ​​m²) nga mga value (200,000 ka TMP/m²). Ang mga gramo gipakita sa Figure 5A. Ang paspas nga pag-analisar sa usa ka kolum sa PMP sa taas nga rate sa pag-agos (700 μL / min), lima ka mga peptide ang na-eluted sa sulod sa usa ka minuto, ang mga kantidad sa N maayo kaayo, 13,500 ± 330 matag kolum (100 × 1.8 mm id), Katugbang sa 135,000 nga kolum sa 135,000 (Figured plate 5000). × 1.8 mm id) giputos sa tulo ka lain-laing mga lote sa PMP stationary phase aron masusi ang reproducibility.Ang analyte nga konsentrasyon alang sa matag column girekord gamit ang kamalaumon nga elution nga kondisyon ug ang gidaghanon sa theoretical plates N ug retention time aron mabulag ang parehas nga test mixture sa matag column.
Pagbulag sa peptide mixture sa PMP column (B) ug Ascentis Express RP-Amide column (A);mobile phase 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP column dimensyon (100 × 1.8 mm id);analytical Ang han-ay sa elution sa mga compound: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ug 5 (leucine) acid enkephalin)).
Ang usa ka kolum sa PMP (100 × 1.8 mm id) gi-evaluate alang sa pagbulag sa tryptic digests sa human serum albumin sa high performance liquid chromatography.Ang chromatogram sa Figure 6 nagpakita nga ang sample maayo nga gibulag ug ang resolusyon maayo kaayo. Ang HSA digests gi-analisar gamit ang flow rate nga 100 µL/30% nga tubig nga chromatography. gipakita sa chromatogram (Figure 6), ang HSA digestion nabahin ngadto sa 17 peak nga katumbas sa 17 peptides.
Usa ka tryptic digest sa HSA (100 × 1.8 mm id) gibulag sa usa ka kolum sa PMP;flow rate (100 µL/min), mobile phase 60/40 acetonitrile/tubig nga adunay 0.1% TFA.
diin ang L mao ang gitas-on sa kolum, ang η mao ang viscosity sa mobile phase, ΔP mao ang column back pressure, ug ang u mao ang linear velocity sa mobile phase. Ang permeability sa PMP column mao ang 2.5 × 10-14 m2, ang flow rate mao ang 25 μL/min, ug 60/40 v/v . susama sa sa atong miaging pagtuon Ref.34.Ang permeability sa kolum packed uban sa superficially porous particles mao ang: 1.7 × 10-15 alang sa 1.3 μm particle, 3.1 × 10-15 alang sa 1.7 μm particles, 5.2 × 10-15 ug 2.5 × μm 3. refore, ang pagkamatuhup sa PMP nga hugna susama sa 5 μm core-shell nga mga partikulo.
diin ang Wx mao ang gibug-aton sa kolum nga giputos sa chloroform, ang Wy mao ang gibug-aton sa kolum nga giputos sa methanol, ug ang ρ mao ang densidad sa solvent. Densidad sa methanol (ρ = 0.7866) ug chloroform (ρ = 1.484). s 31 nga atong gitun-an kaniadto mao ang 0.63 ug 0.55, sa tinagsa. Kini nagpasabot nga ang presensya sa urea ligands makapamenos sa pagkamatuhup sa stationary phase. Sa laing bahin, ang kinatibuk-ang porosity sa PMP column (100 × 1.8 mm id) kay 0.60. Ang permeability sa PMP nga mga kolum-1 nga mga kolum mas ubos kay sa C-1 nga mga kolum nga naputos sa silica-8 nga mga estasyonan kay sa C-1 nga mga kolum. mga hugna ang C18 ligands gilakip sa silica particles isip linear chain, samtang sa polystyrene-type stationary phases, ang medyo baga nga polymer layer naporma sa palibot niini.
Ang Figure 7A,B nagpakita sa PMP column (100 × 1.8 mm id) ug Ascentis Express RP-Amide column (100 × 1.8 mm id) gamit ang parehas nga elution nga kondisyon (ie, 60/40 ACN/H2O ug 0.1% TFA).) sa laraw sa van Deemter.Pinili nga peptide mixtures (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) giandam sa 20 µL/ Ang minimum flow rate alang sa duha ka column mao ang 800 µL/min. mao ang Express RP-Amide column mao ang 2.6 µm ug 3.9 µm, sa tinagsa. Ang HETP values ​​​​nagpakita nga ang separation efficiency sa PMP column (100 × 1.8 mm id) mas maayo pa kay sa commercially available nga Ascentis Express RP-Amide column (100 × 1.8 mm nga dagan sa id7). mahinungdanon kon itandi sa atong miaging pagtuon.Ang mas taas nga separation efficiency sa PMP column (100 × 1.8 mm id) kumpara sa Ascentis Express RP-Amide column gibase sa mga kalamboan sa particle shape, size, ug complex column packing procedures nga gigamit sa kasamtangang trabaho34.
(A) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) nakuha gamit ang PMP column (100 × 1.8 mm id) sa 60/40 ACN/H2O nga adunay 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) nga nakuha gamit ang Ascentis Express RP-Amide × 1 column (10 mm0 × id 1) O nga adunay 0.1% TFA.
Ang usa ka polar-embedded polystyrene stationary phase giandam ug gisusi alang sa pagbulag sa sintetikong peptide mixtures ug trypsin digests sa human serum albumin (HAS) sa high performance liquid chromatography. nthesis sa stationary phase, ug complex column packing.Dugang pa sa taas nga separation efficiency, ubos nga column back pressure sa taas nga flow rates mao ang laing bentaha niini nga stationary phase.PMP columns nagpakita sa maayo nga reproducibility ug mahimong gamiton alang sa pagtuki sa peptide mixtures ug trypsin digestion sa nagkalain-laing mga protina.We tuyo nga gamiton kini nga kolum alang sa pagbulag sa natural nga mga produkto, biomedicinal nga mga compound sa chromat sa umaabot nga mga chromographe sa umaabot nga fungal nga mga tanum ug chromat. pagtimbang-timbang alang sa pagbulag sa mga protina ug monoclonal antibodies.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Pagpanukiduki sa Peptide Separation Systems pinaagi sa Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez.
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) karon, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Advanced liquid chromatography-mass spectrometry makahimo sa paglakip sa halapad nga target metabolomics ug proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ang papel sa UHPLC sa pagpalambo sa droga.J.Septiyembre Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamental ug praktikal nga mga aspeto sa ultrahigh pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Paggamit sa ultra-high performance liquid chromatography sa drug development.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels giandam gikan sa lana-sa-tubig taas nga internal nga bahin emulsions alang sa episyente nga pagputli sa enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ang papel sa liquid chromatography sa proteomics.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Nag-uswag nga mga uso sa reversed-phase liquid chromatography separations sa therapeutic peptides ug proteins: theory and applications.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Two-dimensional separation of peptides gamit ang RP-RP-HPLC system gamit ang lain-laing pH values ​​sa una ug ikaduhang separation dimensions.J.Septiyembre Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ang mass transfer nga mga kinaiya ug kinetic performance sa high-efficiency chromatographic columns nga puno sa C18 sub-2 μm nga bug-os ug taphaw nga porous nga mga partikulo gisusi.J.Septiyembre Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Bag-o nga mga uso ug analytical nga mga hagit sa pag-inusara, pag-ila ug pag-validate sa tanum nga bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410 (15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-08-(20216-018-08).
Mueller, JB et al.Ang proteomic nga talan-awon sa gingharian sa kinabuhi.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Pagproseso sa downstream sa therapeutic peptides pinaagi sa preparative liquid chromatography.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ug ang paggamit niini sa biopolymers.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands para sa mixed-mode protein chromatography: prinsipyo, karakterisasyon, ug disenyo.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).