Salamat sa pagbisita sa Nature.com. Naggamit ka usa ka bersyon sa browser nga adunay limitado nga suporta sa CSS. Alang sa labing kaayo nga kasinatian, among girekomenda nga mogamit ka usa ka bag-ong browser (o i-disable ang Compatibility Mode sa Internet Explorer). Dugang pa, aron masiguro ang padayon nga suporta, gipakita namon ang site nga wala’y mga istilo ug JavaScript.
Nagpakita sa usa ka carousel sa tulo ka mga slide sa usa ka higayon. Gamita ang Kaniadto ug Sunod nga mga buton sa paglihok sa tulo ka mga slide sa usa ka higayon, o gamita ang mga buton sa slider sa katapusan aron sa paglihok sa tulo ka mga slide sa usa ka higayon.
Ang mga porous nga mga partikulo sa silica giandam sa pamaagi sa sol-gel nga adunay pipila nga mga pagbag-o aron makuha ang mga partikulo sa lapad nga lungag. Kini nga mga partikulo gikuha sa N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) ug styrene pinaagi sa reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) polymerization aron makahimo og N-phenylmaleimide intercalated polyamides. Styrene (PMP) stationary phase. Ang pig-ot nga mga kolum nga stainless steel (100 × 1.8 mm sa sulod nga diametro) giputos sa usa ka slurry packing. Ang chromatographic performance sa PMP column gisusi aron mabulag ang usa ka sinagol nga sintetikong peptides nga gilangkuban sa lima ka peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) ug tryptic hydrolyzate sa human serum (HASrum albumin). Ubos sa kamalaumon nga mga kondisyon sa elution, ang teoretikal nga gidaghanon sa mga palid nga adunay sinagol nga mga peptide miabot sa 280,000 nga mga palid/sq.m. Ang pagtandi sa separation performance sa naugmad nga column sa commercial Ascentis Express RP-Amide column, naobserbahan nga ang separation efficiency sa PMP column mas labaw sa commercial column sa termino sa separation efficiency ug resolution.
Ang industriya sa biopharmaceutical nahimong usa ka nagkalapad nga merkado sa kalibutan nga adunay usa ka hinungdanon nga pagtaas sa bahin sa merkado sa bag-ohay nga mga tuig. Uban sa eksplosibo nga pagtubo sa biopharmaceutical industry1,2,3 adunay dako nga panginahanglan alang sa peptide ug pagtuki sa protina. Dugang pa sa target nga peptide, lain-laing mga impurities ang naporma sa panahon sa peptide synthesis, mao nga ang chromatographic purification gikinahanglan aron makuha ang gitinguha nga kaputli sa peptide. Ang pag-analisa ug pag-ila sa mga protina sa mga likido sa lawas, mga tisyu, ug mga selyula usa ka labi ka mahagiton nga buluhaton tungod sa daghang mga potensyal nga makit-an nga mga espisye nga naa sa usa ka sample. Bisan kung ang mass spectrometry usa ka epektibo nga himan alang sa pagsunud sa mga peptide ug mga protina, kung ang ingon nga mga sample direkta nga gipaila sa mass spectrometer, ang pagbulag dili makatagbaw. Kini nga problema mahimong masulbad pinaagi sa paghimo sa liquid chromatography (LC) sa wala pa ang MS analysis, nga makapakunhod sa gidaghanon sa mga analyte nga mosulod sa mass spectrometer sa usa ka gihatag nga oras4,5,6. Dugang pa, ang mga analyte mahimong magkonsentrar sa usa ka pig-ot nga rehiyon sa panahon sa pagbulag sa bahin sa likido, sa ingon nagkonsentrar niini nga mga analyte ug nagdugang ang pagkasensitibo sa pagkakita sa MS. Ang liquid chromatography (LC) miuswag pag-ayo sa milabay nga dekada ug nahimong kaylap nga gigamit nga pamaagi alang sa proteomic analysis7,8,9,10.
Ang reverse-phase liquid chromatography (RP-LC) kaylap nga gigamit sa pagputli ug pagbulag sa mga sagol sa peptides gamit ang octadecyl-modified silica (ODS) isip stationary phase11,12,13. Bisan pa, tungod sa ilang komplikado nga istruktura ug amphoteric nga kinaiya, ang 14,15 RP stationary nga mga hugna dili makahatag usa ka makapatagbaw nga pagbulag sa mga peptide ug protina. Busa, ang pag-analisa sa mga peptide ug mga protina nga adunay polar ug non-polar nga mga tipik nanginahanglan espesyal nga gidisenyo nga mga yugto nga wala’y hunong aron makig-uban ug mapadayon kini nga mga analyte16. Mixed chromatography, nga nagtanyag multimodal interaksyon, mahimong usa ka alternatibo sa RP-LC alang sa pagbulag peptides, protina, ug uban pang komplikado nga mga sagol. Daghang mga mixed-type nga stationary nga mga hugna ang giandam ug ang mga kolum nga puno niini nga mga stationary nga mga hugna gigamit sa pagbulag sa mga peptide ug mga protina17,18,19,20,21. Tungod sa presensya sa polar ug non-polar nga mga grupo, ang mixed mode stationary phases (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) angay alang sa pagbulag sa mga peptide ug protina22,23,24,25,26,27,28. , polar intercalated stationary phases nga adunay covalently bonded polar groups nagpakita sa maayo nga separation capabilities ug unique selectivity alang sa polar ug non-polar analytes tungod kay ang separation nagdepende sa interaksyon tali sa analyte ug sa stationary phase Multimodal interactions 29,30,31,32. Bag-ohay lang, si Zhang et al. 30 nakuha ang behenyl-terminated stationary nga mga hugna sa polyamines ug malampusong nagbulag sa hydrocarbon, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ug uban pang analytes. Ang polar embedded stationary nga materyal adunay polar ug non-polar nga mga grupo, mao nga kini magamit sa pagbulag sa mga peptide ug mga protina ngadto sa hydrophobic ug hydrophilic nga mga bahin. Ang polar inline nga mga column (pananglitan, C18 nga mga column nga adunay amide inline) anaa ubos sa trade name nga Acentis Express RP-Amide columns, apan kini nga mga column gigamit lamang alang sa pagtuki sa amine 33.
Sa kasamtangan nga pagtuon, ang usa ka polar embedding stationary phase (N-phenylmaleimide, embedding polystyrene) giandam ug gisusi alang sa peptide separation ug tryptic HSA cleavage. Ang mosunod nga estratehiya gigamit sa pag-andam sa estasyon nga bahin. Ang mga porous nga silica nga mga partikulo giandam sumala sa mga pamaagi nga gihulagway sa among nangaging mga publikasyon, nga adunay pipila ka mga pagbag-o sa mga laraw sa pagpangandam 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Ang mga ratios sa urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS ug aqueous-acetic acid gi-adjust aron makuha ang mga partikulo sa silica nga adunay dako nga pore. Ikaduha, usa ka bag-ong phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand ang gi-synthesize ug ang mga derivatized nga silica nga mga partikulo niini gigamit sa pag-andam sa polar embedded stationary nga mga hugna. Ang nakuha nga stasionary phase giputos sa usa ka stainless steel column (inner diameter 100 × 1.8 mm) sumala sa usa ka optimized packing scheme. Ang pagputos sa kolum gitabangan sa mekanikal nga vibration aron masiguro ang usa ka uniporme nga layer sa sulod sa kolum. Ang giputos nga kolum gisusi alang sa pagbulag sa usa ka sinagol nga peptides nga gilangkoban sa lima ka peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). ug tryptic hydrolysates sa human serum albumin (HSA). Naobserbahan nga ang peptide mixture ug ang HSA tryptic digest nagbulag nga adunay maayo nga resolusyon ug kahusayan. Ang pagkaayo sa pagbulag sa kolum sa PMP gitandi sa kolum sa Ascentis Express RP-Amide. Naobserbahan nga ang mga peptide ug mga protina adunay maayo nga resolusyon ug taas nga kahusayan sa pagbulag sa kolum sa PMP, ug ang kahusayan sa pagbulag sa kolum sa PMP mas taas kaysa sa kolum sa Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylene glycol), urea, acetic acid, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, human serum albumin (HSA), ammonium chloride, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl chloride (MC4, BP4-hydroxyl chloride (MC), styrene, BP4 acetonitrile (ACN) alang sa HPLC, methanol, 2-propanol ug acetone. Sigma-Aldrich Company (St. Louis, Missouri, USA).
Ang usa ka sinagol nga urea (8 g), polyethylene glycol (8 g) ug 8 ml sa 0.01 N. acetic acid gikutaw sulod sa 10 minutos, ug 24 ml sa TMOS ang gidugang niini ubos sa ice-cooling. Ang sagol nga reaksyon gipainit sa 40 ° C sulod sa 6 ka oras ug dayon sa 120 ° C sulod sa 8 ka oras sa usa ka stainless steel autoclave. Ang tubig gibubo ug ang nahabilin gipauga sa 70 ° C sulod sa 12 ka oras. Ang uga nga humok nga mga bloke gigaling nga hapsay ug gi-calcine sa oven sa 550 ° C sulod sa 12 ka oras. Tulo ka mga batch ang giandam ug gihulagway aron masulayan ang pag-usab sa mga gidak-on sa partikulo, gidak-on sa lungag ug lugar sa nawong.
Polar nga grupo ug naghunong nga hugna alang sa polystyrene chain. Ang pamaagi sa pag-andam gihulagway sa ubos.
Ang N-phenylmaleimide (200 mg) ug methyl vinyl isocyanate (100 mg) natunaw sa anhydrous toluene, ug dayon ang 0.1 ml sa 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) gidugang sa reaction flask aron makakuha og copolymer sa phenylmaleimide ug methylPMCP isocyanate (methylPMCP isocyanate). ) Ang sagol gipainit sa 60°C sulod sa 3 ka oras, sinala ug gipauga sa hurnohan sa 40°C sulod sa 3 ka oras.
Ang uga nga mga partikulo sa silica (2 g) gisabwag sa uga nga toluene (100 ml), gipalihok ug gi-sonicated sa 10 min sa usa ka 500 ml nga round bottom flask. Ang PMCP (10 mg) gitunaw sa toluene ug gidugang sa tinulo sa reaksyon nga flask pinaagi sa usa ka dugang nga funnel. Ang sagol nga refluxed sa 100 ° C sulod sa 8 ka oras, sinala, gihugasan sa acetone ug gipauga sa 60 ° C sulod sa 3 ka oras. Dayon, ang mga partikulo sa silica nga nakig-uban sa PMCP (100 g) natunaw sa toluene (200 ml), ug ang 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) gidugang niini sa presensya sa 100 μl sa dibutyltin dilaurate isip usa ka catalyst. Ang sagol nga gikutaw sa 50 ° C sulod sa 8 ka oras, sinala ug gipauga sa 50 ° C sulod sa 3 ka oras.
Styrene (1 ml), benzoyl peroxide BPO (0.5 ml) ug silica particles nga gilakip sa TEMPO-PMCP (1.5 g) gisabwag sa toluene ug gipurga sa nitrogen. Ang polymerization sa styrene gihimo sa 100 ° C sulod sa 12 ka oras. Ang resulta nga produkto gihugasan sa methanol ug gipauga sa tibuok gabii sa 60 ° C. Ang kinatibuk-ang laraw sa reaksyon gipakita sa fig. usa.
Ang mga sample gi-degassed sa 393 K sulod sa 1 ka oras hangtod nakuha ang nahabilin nga presyur nga ubos sa 10-3 Torr. Ang kantidad sa N2 adsorbed sa relatibong presyur P/P0 = 0.99 gigamit sa pagtino sa kinatibuk-ang pore volume. Ang morpolohiya sa puro ug ligand-bound silica particles gisusi gamit ang scanning electron microscope (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan). Ang uga nga mga sample (pure silica ug ligan nga gigapos nga mga partikulo sa silica) gibutang sa aluminum rod gamit ang carbon tape. Ang bulawan gideposito sa sample gamit ang Q150T sputtering device, ug usa ka 5 nm nga gibag-on nga Au layer ang gibutang sa sample. Gipauswag niini ang kaepektibo sa proseso sa ubos nga boltahe ug naghatag maayo nga pag-spray sa bugnaw. Ang pag-analisar sa elemento gihimo gamit ang Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 elemental composition analyzer. Usa ka Malvern particle size analyzer (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ang gigamit aron makuha ang partikulo nga gidak-on sa pag-apod-apod. Ang uncoated silica particles ug ligand-bound silica particles (5 mg matag usa) gisabwag sa 5 ml nga isopropanol, gi-sonicated sulod sa 10 minutos, gipalihok sa 5 minutos, ug gibutang sa usa ka Mastersizer optical bench. Ang Thermogravimetric analysis gihimo sa gikusgon nga 5 °C kada minuto sa temperatura nga range gikan sa 30 ngadto sa 800 °C.
Ang glass fiber lined narrow bore stainless steel columns nga adunay mga dimensyon (ID 100 × 1.8 mm) giputos sa slurry filling method nga nagsunod sa samang pamaagi sama sa reference 31. Stainless steel column (glass lined, ID 100 × 1 .8 mm) ug usa ka outlet nga adunay sulod nga 1 µm frit nga konektado sa usa ka slurry packaging machine, De USA. Pag-andam og suspension sa stationary phase pinaagi sa pagsuspenso sa 150 mg sa stationary phase sa 1.2 ml nga methanol ug isulod kini sa usa ka reservoir column. Ang methanol gigamit isip slurry solvent ug control solvent. I-pack ang kolum pinaagi sa pag-apply sa pressure sequence nga 100 MP sa 10 min, 80 MP sa 15 min, ug 60 MP sa 30 min. Ang proseso sa pagputos migamit ug duha ka gas chromatography column vibrator (Alltech, Deerfield, IL, USA) para sa mekanikal nga vibration aron masiguro ang uniporme nga column packing. Isira ang slurry packer ug hinayhinay nga buhian ang pressure aron malikayan ang kadaot sa hilo. Ang kolum gidiskonekta gikan sa slurry nozzle ug laing haom ang gilakip sa pagsulod ug gikonektar sa LC system aron sulayan ang operasyon niini.
Ang usa ka custom nga MLC gitukod gamit ang LC pump (10AD Shimadzu, Japan), usa ka sampler nga adunay 50 nL injection loop (Valco (USA) C14 W.05), usa ka membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), ug usa ka UV-VIS capillary window. Detector device (UV-2075) ug enamelled microcolumn. Gamit ug hiktin kaayo ug mugbo nga mga tubo nga nagdugtong aron mamenosan ang epekto sa dugang nga pagpalapad sa kolum. Human mapuno ang kolum, i-install ang usa ka capillary (50 µm id 365) sa outlet sa 1/16″ reducing junction ug i-install ang capillary (50 µm) sa reducing junction. Ang pagkolekta sa datos ug pagproseso sa chromatogram gihimo gamit ang Multichro 2000 software. Sa 254 nm, ang UV absorbance sa mga subject analytes gimonitor sa 0. Chromatographic data gisusi gamit ang OriginPro8 (Northampton, MA).
Human serum albumin, lyophilized powder, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg nga sinaktan sa trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) ug 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml). Ang solusyon gikutaw sa 10 min ug gitipigan sa usa ka kaligoanan sa tubig sa 37 ° C sulod sa 6 ka oras, dayon gipalong sa 1 ml nga 0.1% TFA. Salain ang solusyon ug ibutang sa ubos sa 4°C.
Ang pagbulag sa usa ka sinagol nga peptides ug tryptic digest HSA sa usa ka kolum sa PMP gibanabana nga gilain. Susiha ang tryptic hydrolysis sa usa ka sinagol nga peptides ug HSA nga gibulag sa usa ka kolum sa PMP ug itandi ang mga resulta sa usa ka kolum sa Ascentis Express RP-Amide. Ang gidaghanon sa teoretikal nga mga plato gikalkulo gamit ang mosunod nga equation:
Ang mga hulagway sa SEM sa puro nga mga partikulo sa silica ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand gipakita sa Figure 2. Ang mga hulagway sa SEM sa puro nga mga partikulo sa silica (A, B) nagpakita sa usa ka spherical nga porma diin ang mga partikulo elongated o adunay dili regular nga simetriko kon itandi sa atong nangaging mga pagtuon. Ang nawong sa mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand (C, D) mas hamis kaysa sa puro nga mga partikulo sa silica, nga mahimong tungod sa mga kadena nga polystyrene nga nagtabon sa nawong sa mga partikulo sa silica.
Pag-scan sa mga electron micrograph sa puro nga silica nga mga partikulo (A, B) ug ligand bound silica nga mga partikulo (C, D).
Ang pag-apud-apod sa gidak-on sa partikulo sa puro nga mga partikulo sa silica ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand gipakita sa Fig. 2. 3 (A). Ang volumetric particle size distribution curves nagpakita nga ang silica particle size misaka human sa kemikal nga kausaban (Fig. 3A). Ang datos sa pag-apod-apod sa gidak-on sa silica particle gikan sa kasamtangan nga pagtuon ug sa miaging pagtuon gitandi sa Table 1(A). Ang volumetric nga partikulo nga gidak-on d(0.5) sa PMP maoy 3.36 µm, kon itandi sa ad(0.5) nga kantidad nga 3.05 µm sa among miaging pagtuon (polystyrene bonded silica particles)34. Tungod sa pagbag-o sa ratio sa PEG, urea, TMOS ug acetic acid sa sagol nga reaksyon, ang gidak-on sa partikulo nga pag-apud-apod niini nga batch mas pig-ot kon itandi sa among miaging pagtuon. Ang gidak-on sa partikulo sa PMP nga bahin mas dako kay sa polystyrene bound silica particle phase nga atong gitun-an sa sayo pa. Kini nagpasabot nga ang surface functionalization sa silica particles nga adunay styrene nagdeposito lang ug polystyrene layer (0.97 µm) sa silica surface, samtang sa PMP phase ang layer thickness kay 1.38 µm.
Particle size distribution (A) ug pore size distribution (B) sa puro nga silica particles ug ligand bound silica particles.
Ang gidak-on sa pore, pore volume, ug surface area sa silica particle nga gigamit niini nga pagtuon gipakita sa Table 1 (B). Ang mga profile sa PSD sa puro nga mga partikulo sa silica ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand gipakita sa Fig. 3(B). Ang mga resulta ikatandi sa among miaging pagtuon34. Ang gidak-on sa pore sa puro ug ligand-bound silica particles mao ang 310 Å ug 241 Å, matag usa, nga nagpakita nga human sa kemikal nga pagbag-o, ang pore size mikunhod sa 69 Å, sama sa gipakita sa Table 1 (B), ug ang shift curve gipakita sa Fig. m2/g). Sama sa gipakita sa Table 1(B), ang surface area (m2/g) sa silica particles human sa kemikal nga kausaban usab mikunhod gikan sa 116 m2/g ngadto sa 105 m2/g.
Ang mga resulta sa elemental analysis sa stasionary phase gipresentar sa Table. 2. Ang carbon content sa kasamtangan nga stationary phase mao ang 6.35%, nga mas ubos kaysa sa atong miaging pagtuon (silica particles nga may kalabutan sa polystyrene, 7.93%35 ug 10.21%, matag usa) 42. Ang carbon content sa kasamtangan nga stationary phase sa ubos, tungod kay ang pipila ka polar ligands sama sa phenylmaleimide to methylMP isocyanate gigamit (hydro-PC vinyl isocyanate) ug O4-PC vinyl isocyanate. styrene sa pag-andam sa SP. Ang porsyento sa gibug-aton sa nitroheno sa kasamtangan nga stasionary phase mao ang 2.21% kumpara sa 0.1735 ug 0.85% sa miaging mga pagtuon42. Kini nagpasabot nga ang kasamtangan nga stasionary phase adunay taas nga gibug-aton nga porsyento sa nitroheno tungod sa phenylmaleimide. Sa susama, ang mga produkto (4) ug (5) adunay carbon content nga 2.7% ug 2.9%, sa tinagsa, samtang ang final product (6) adunay carbon content nga 6.35%, sama sa gipakita sa Table 2. Thermogravimetric analysis (TGA) gigamit sa stationary phase sa PMP aron masulayan ang pagkawala sa timbang, ug ang TGA curve gipakita sa Figure 6 nga pagkawala sa timbang 4. nga nahiuyon sa sulud sa carbon (6.35%), tungod kay ang mga ligand adunay dili lamang C, apan usab N, O ug H.
Ang ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate gipili aron usbon ang nawong sa mga partikulo sa silica tungod sa polar nga phenylmaleimide ug vinylisocyanate nga mga grupo niini. Ang Vinyl isocyanate nga mga grupo mahimong dugang nga reaksyon sa styrene pinaagi sa buhi nga radical polymerization. Ang ikaduha nga rason mao ang pagsal-ot sa usa ka grupo nga adunay kasarangang interaksyon sa analyte ug walay lig-on nga electrostatic nga interaksyon tali sa analyte ug sa naghunong nga hugna, tungod kay ang phenylmaleimide moiety walay virtual charge sa normal nga pH. Ang polarity sa naghunong nga hugna mahimong kontrolado sa labing maayo nga kantidad sa styrene ug ang oras sa reaksyon sa libre nga radical polymerization. Ang katapusang lakang sa reaksyon (free radical polymerization) kritikal tungod kay kini nagbag-o sa polarity sa naghunong nga hugna. Ang pag-analisar sa elemento gihimo aron masusi ang sulud sa carbon sa kini nga mga yugto nga wala’y hunong. Naobserbahan nga ang pagdugang sa gidaghanon sa styrene ug ang oras sa reaksyon nagdugang sa sulud sa carbon sa naghunong nga yugto ug vice versa. Ang mga SP nga giandam nga adunay lainlain nga konsentrasyon sa styrene adunay lainlaing mga karga sa carbon. Sa susama, kini nga mga stasionary phase gibutang sa stainless steel column ug ang ilang chromatographic nga mga kinaiya (selectivity, resolution, N value, etc.) gisusi. Base sa kini nga mga eksperimento, usa ka optimized nga komposisyon alang sa pag-andam sa PMP stationary phase gipili aron mahatagan ang kontrolado nga polarity ug maayo nga pagpabilin sa analyte.
Ang kolum sa PMP gisusi usab alang sa pag-analisar sa lima ka mga panagsagol sa peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) gamit ang kapasidad sa mobile phase. 60/40 (v/v) ACN/tubig (0.1% TFA) sa dagan sa 80 µl/min. Ubos sa labing maayo nga mga kondisyon sa elution (200,000 plates/m), ang gidaghanon sa theoretical plates (N) kada column (100 × 1.8 mm) kay 20,000 ± 100. Ang N values ​​​​sa tulo ka PMP columns gipakita sa Table 3 ug ang chromatograms gipakita sa Figure 5A. Ang paspas nga pag-analisa sa taas nga rate sa pag-agos (700 µl / min) sa usa ka kolum sa PMP, lima ka mga peptide nga gipagawas sa sulod sa usa ka minuto, maayo kaayo nga kantidad sa N nga 13,500 ± 330 matag kolum (100 x 1.8 mm diameter), katumbas sa 135,000 nga mga plato / m (Fig. 5B). Tulo ka kolum nga parehas ang gidak-on (inner diameter 100 x 1.8 mm) napuno sa tulo ka lain-laing mga batch sa PMP stationary phase aron masulayan ang reproducibility. Ang mga analyte girekord alang sa matag kolum pinaagi sa pagbulag sa parehas nga timpla sa pagsulay sa matag kolum gamit ang labing maayo nga kondisyon sa elution, gidaghanon sa teoretikal nga mga plato N, ug oras sa pagpadayon. Ang datos sa reproducibility para sa mga column sa PMP gipakita sa Table 4. Ang reproducibility sa column sa PMP maayo nga may kalabutan sa ubos kaayo nga %RSD values ​​​​sama sa gipakita sa Table 3.
Pagbulag sa peptide mixtures sa usa ka PMP column (B) ug usa ka Ascentis Express RP-Amide column (A), mobile phase 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP column dimensions (100 x 1.8 mm id), analysis Elution order of compounds: 1 (Gly-Tyr), 3-Leu (Tyr) (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ug 5 ( leucic acid enkephalin).
Ang usa ka kolum sa PMP (inner diameter 100 x 1.8 mm) gisusi alang sa pagbulag sa tryptic hydrolyzate sa human serum albumin pinaagi sa HPLC. Ang chromatogram sa Figure 6 nagpakita nga ang mga sample maayong pagkabulag nga adunay maayo kaayo nga resolusyon. Ang mga solusyon sa HSA gisusi gamit ang flow rate nga 100 μl/min, usa ka mobile phase nga 70/30 acetonitrile/water ug 0.1% TFA. Ang cleavage sa HSA gibahin ngadto sa 17 ka mga taluktok, ingon sa gipakita sa chromatogram (Fig. 6), nga katumbas sa 17 peptides. Ang mga kahusayan sa pagbulag sa mga indibidwal nga mga taluktok gikan sa HSA hydrolyzate gikalkula ug ang mga kantidad gipakita sa Talaan 5.
Ang HSA tryptic hydrolysates gibulag sa usa ka PMP column (inner diameter 100 x 1.8 mm), flow rate (100 μl/min), mobile phase 60/40 acetonitrile/water, ug 0.1% TFA.
diin ang L mao ang gitas-on sa kolum, η ang viscosity sa mobile phase, ΔP mao ang back pressure sa column, ug u ang linear velocity sa mobile phase. Ang permeability sa PMP column mao ang 2.5 × 10-14 m2, ang flow rate mao ang 25 µl/min, 60/40 v/v ang gigamit. ACN/tubig. Ang pagkamatuhup sa kolum sa PMP (ID 100 × 1.8 mm) susama sa among miaging Ref.34 nga pagtuon. Ang permeability sa usa ka column nga puno sa superficially porous nga mga partikulo kay 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 m2 para sa 5 µm nga mga partikulo43. Busa, ang permeability sa PMP phase susama sa permeability sa core-shell nga mga partikulo nga adunay gidak-on nga 5 μm.
diin ang Wx mao ang masa sa kolum nga napuno sa chloroform, ang Wy mao ang masa sa kolum nga napuno sa methanol, ug ang ρ mao ang densidad sa solvent. Densidad sa methanol (ρ = 0.7866) ug chloroform (ρ = 1.484). Ang kinatibuk-ang porosity sa silica-C18 particle column (100 × 1.8 mm ID)34 ug ang among gitun-an kaniadto nga C18-urea31 column mao ang 0.63 ug 0.55, matag usa. Kini nagpasabot nga ang presensya sa urea ligand makapakunhod sa pagkamatuhup sa estasyon nga bahin. Sa laing bahin, ang kinatibuk-ang porosity sa PMP column (inner diameter 100 × 1.8 mm) kay 0.60. Ang mga kolum sa PMP dili kaayo matuhop kay sa mga kolum nga puno sa mga partikulo sa silica nga gigapos sa C18 tungod kay sa C18 nga matang sa mga stasionary nga mga hugna ang C18 nga mga ligand gilakip sa mga silica nga mga partikulo sa mga linear nga kadena, samtang sa polystyrene type nga stationary nga mga hugna usa ka medyo baga nga polimer ang naporma palibot sa mga partikulo. layer A. Sa usa ka tipikal nga eksperimento, ang porosity sa kolum gikalkula ingon sa mosunod:
Sa fig. Ang 7A, B nagpakita sa mga laraw sa Van Deemter alang sa usa ka kolum sa PMP (id 100 x 1.8 mm) ug usa ka kolum sa Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ubos sa parehas nga kondisyon sa elution, 60/40 ACN/H2O ug 0 .1% TFA 20 µl/min ngadto sa 80 µl/min. Ang minimum nga mga kantidad sa HETP sa labing kamalaumon nga rate sa pag-agos (80 µl / min) mao ang 2.6 µm ug 3.9 µm alang sa kolum sa PMP ug ang kolum nga Ascentis Express RP-Amide, matag usa. Ang HETP values ​​​​nga nagpakita nga ang separation efficiency sa PMP column (100 x 1.8 mm id) mas taas kay sa commercially available nga Ascentis Express RP-Amide column (100 x 1.8 mm id). Ang van Deemter graph sa Fig. 7 (A) nagpakita nga ang pagkunhod sa N nga bili dili kaayo mas taas sa pagtaas sa dagan kon itandi sa atong miaging pagtuon. Ang mas taas nga separation efficiency sa PMP column (id 100 × 1.8 mm) kumpara sa Ascentis Express RP-Amide column gibase sa gipaayo nga particle shape ug size ug ang sophisticated column packing procedure nga gigamit sa kasamtangang trabaho34.
(A) Van Deemter plot (HETP vs. mobile phase linear velocity) nakuha sa usa ka PMP column (id 100 x 1.8 mm) sa 60/40 ACN / H2O nga adunay 0.1% TFA. (B) Van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) nakuha sa usa ka Ascentis Express RP-Amide column (id 100 x 1.8 mm) sa 60/40 ACN/H2O nga adunay 0.1% TFA.
Usa ka polar stationary nga hugna sa intercalated polystyrene giandam ug gisusi alang sa pagbulag sa usa ka sinagol nga synthetic peptides ug tryptic hydrolyzate sa human serum albumin (HSA) sa high performance liquid chromatography. Ang chromatographic performance sa PMP columns alang sa peptide mixtures maayo kaayo sa termino sa separation efficiency ug resolution. Ang gipaayo nga pagkaayo sa pagbulag sa mga kolum sa PMP tungod sa daghang mga hinungdan sama sa gidak-on sa particle sa silica ug gidak-on sa pore, kontrolado nga synthesis sa mga stasionary phase, ug komplikado nga mga materyales sa pagputos sa kolum. Gawas pa sa taas nga kahusayan sa pagbulag, ang lain nga bentaha sa kini nga naghunong nga yugto mao ang ubos nga presyur sa likod sa kolum sa taas nga mga rate sa pag-agos. Ang mga kolum sa PMP labi ka mabag-o ug magamit sa pag-analisar sa mga panagsagol sa peptides ug tryptic digestion sa lainlaing mga protina. Gitinguha namon nga gamiton kini nga kolum alang sa pagbulag sa mga bioactive compound gikan sa natural nga mga produkto, mga extract sa mga tanum nga medisina ug mga uhong sa likido nga chromatography. Sa umaabot, ang mga kolum sa PMP susihon usab alang sa pagbulag sa mga protina ug monoclonal antibodies.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation ngadto sa reversed phase chromatography peptide separation systems part I: Development sa usa ka protocol alang sa column characterization. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation ngadto sa reversed phase chromatography peptide separation systems nga bahin I: Pagpalambo sa usa ka protocol alang sa column characterization.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ug Petersson, P. Investigation sa Peptide Separation Systems pinaagi sa Reverse-Phase Chromatography, Part I: Pagpalambo sa usa ka Protocol alang sa Column Characterization. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation sa reversed phase chromatography peptide separation systems nga bahin I: Pagpalambo sa usa ka protocol alang sa mga kinaiya sa kolum. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation sa reversed phase chromatography peptide separation systems nga bahin I: Pagpalambo sa usa ka protocol alang sa mga kinaiya sa kolum.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ug Petersson, P. Investigation sa Peptide Separation Systems pinaagi sa Reverse-Phase Chromatography, Part I: Pagpalambo sa usa ka Protocol alang sa Column Characterization.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. ug uban pa. Mga pamaagi alang sa paghimo sa gipaayo nga aktibo nga mga peptide alang sa pagtambal sa mga makatakod nga sakit. Bioteknolohiya. Mga nakab-ot 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: Science ug merkado. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: Science ug merkado.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ug Chreschatyski M. Synthetic therapeutic peptides: siyensya ug merkado.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ug Khreschatsky M. Synthetic therapeutic peptides: siyensya ug merkado. pagkadiskobre sa droga. Karon 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced nga proteomic liquid chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced nga proteomic liquid chromatography.Tan-awa ang F., Smith RD ug Shen Yu. Advanced nga proteomic liquid chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced nga komposisyon sa protina 液相色谱。Tan-awa ang F., Smith RD ug Shen Yu. Advanced nga proteomic liquid chromatography.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. ug uban pa. Ang advanced liquid chromatography-mass spectrometry makahimo sa pagkombinar sa halapad nga base sa metabolomics ug proteomics. anus. Si Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ang tahas sa UHPLC sa pag-uswag sa parmasyutiko. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ang tahas sa UHPLC sa pag-uswag sa parmasyutiko.Chesnut, SM ug Salisbury, JJ Ang tahas sa UHPLC sa pag-uswag sa parmasyutiko.Chesnut, SM ug Salisbury, JJ Ang papel sa UHPLC sa pagpalambo sa droga. J. Sept Siyensiya. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamental ug praktikal nga mga aspeto sa ultrahigh pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag. Wu, N. & Clausen, AM Fundamental ug praktikal nga mga aspeto sa ultrahigh pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag.Wu, N. ug Clausen, AM Fundamental ug praktikal nga mga aspeto sa high pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Basic ug praktikal nga aspeto sa ultra-high pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag.Wu, N. ug Clausen, AM Fundamental ug praktikal nga mga aspeto sa high pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag.J. Sept. Siyensiya. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Paggamit sa ultra-performance liquid chromatography sa pharmaceutical development. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Paggamit sa ultra-performance liquid chromatography sa pharmaceutical development.Ren, SA ug Chelischeff, P. Ang paggamit sa ultra high performance liquid chromatography sa pharmaceutical development. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA ug Chelischeff, P. Paggamit sa ultra-performance liquid chromatography sa drug development.J. Chromatography. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. ug uban pa. Usa ka monolithic macroporous hydrogel nga nakuha gikan sa usa ka oil-in-water emulsion nga adunay taas nga internal nga bahin para sa episyente nga pagputli sa enterovirus 71. Kemikal. proyekto. Journal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ang papel sa liquid chromatography sa proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ang papel sa liquid chromatography sa proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ug Wilkins, JA Ang papel sa liquid chromatography sa proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ug Wilkins, JA Ang papel sa liquid chromatography sa proteomics.J. Chromatography. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Bag-ong mga uso sa reversed-phase liquid chromatographic separations sa therapeutic peptides ug mga protina: Teorya ug mga aplikasyon. & Guillarme, D. Bag-ong mga uso sa reversed-phase liquid chromatographic separations sa therapeutic peptides ug mga protina: Teorya ug mga aplikasyon. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира теория и приложения. & Guillarme, D. Bag-ong mga uso sa pagbulag sa mga therapeutic peptides ug mga protina pinaagi sa reverse phase liquid chromatography: teorya ug aplikasyon. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.ug Guillarmé, D. Bag-ong mga uso sa pagbulag sa mga therapeutic peptides ug mga protina pinaagi sa reverse phase liquid chromatography: theory and applications.J. Pharm. Biomedical Science. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Two-dimensional separation of peptides gamit ang RP-RP-HPLC system nga adunay lain-laing pH sa una ug ikaduhang separation dimensions. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Two-dimensional separation of peptides gamit ang RP-RP-HPLC system nga adunay lain-laing pH sa una ug ikaduhang separation dimensions.Gilar M., Olivova P., Dali AE ug Gebler JK Two-dimensional separation of peptides gamit ang RP-RP-HPLC system nga adunay lain-laing pH sa una ug ikaduhang separation dimensions.Gilar M., Olivova P., Dali AE ug Gebler JK Duha ka dimensyon nga pagbulag sa mga peptide gamit ang lainlaing mga kantidad sa pH sa una ug ikaduha nga mga sukat sa pagbulag gamit ang sistema sa RP-RP-HPLC. J. Sept Siyensiya. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Pagsusi sa mass transfer ug kinetic nga mga kinaiya sa high-performance chromatography columns nga puno sa bug-os nga porous ug superficially porous nga mga partikulo sa C18 nga mas gamay sa 2 µm. J. Sept Siyensiya. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Bag-o nga mga uso ug analitikal nga mga hagit sa pag-inusara, pag-ila, ug pag-validate sa bioactive peptides sa tanum. anus. Anal nga binuhat. Kemikal. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB ug uban pa. Proteomic nga talan-awon sa gingharian sa kinabuhi. Kinaiyahan 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. ug uban pa. Post-pagtambal sa therapeutic peptides pinaagi sa preparative liquid chromatography. Molecules (Basel, Switzerland) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ug ang mga aplikasyon niini sa biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ug ang mga aplikasyon niini sa biopolymers.Yang, Yu. ug Geng, X. Mixed mode chromatography ug ang paggamit niini sa biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Mixed mode chromatography ug ang paggamit niini sa biopolymers.Yang, Yu. ug Gene, X. Mixed mode chromatography ug ang paggamit niini sa biopolymers.J. Chromatography. Usa ka 1218(49), 8813–8825 (2011).