„Nikdy nepochybujte o tom, že malá skupina přemýšlivých, oddaných občanů může změnit svět.Ve skutečnosti je tam jediná.“
Posláním Cureus je změnit dlouhodobý model lékařského publikování, ve kterém může být předkládání výzkumu drahé, složité a časově náročné.
Plazma bohatá na krevní destičky/prp, regenerace tkání, aktivace krevních destiček, glukózová proliferativní terapie, krevní destičky, proliferativní terapie
Citujte tento článek jako: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17. května 2022) Vliv glukózy na počet a objem krevních destiček: důsledky pro regenerativní medicínu.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plazma bohatá na krevní destičky (PRP) a hypertonické roztoky glukózy se běžně používají pro injekci v regenerativní medicíně, někdy společně.Vliv hypertonické glukózy na lýzu a aktivaci krevních destiček nebyl dříve popsán.Testovali jsme vliv zvýšených koncentrací glukózy na počet krevních destiček a erytrocytů, stejně jako objemy buněk v PRP a plné krvi (WB).K rychlému částečnému snížení počtu krevních destiček došlo u všech směsí glukózy smíchaných s PRP nebo plnou krví, což odpovídá částečné lýze. Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což naznačuje rychlé přizpůsobení reziduálních krevních destiček extrémní (>2000 mOsm) hypertonicitě. Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což naznačuje rychlé přizpůsobení reziduálních krevních destiček extrémní (>2000 mOsm) hypertonicitě. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указыбоцитов ю остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což ukazuje na rychlou adaptaci reziduálních krevních destiček na extrémní (>2000 mOsm) hypertonicitu.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端８り> 2000 怼数渗00002000 mOsm）高渗状态。 Pomozte nám jej zlepšit! остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состояниму Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což ukazuje na rychlou adaptaci zbytkových krevních destiček na extrémní (>2000 mOsm) hyperosmolární stav.Koncentrace glukózy 25 % a vyšší vedly k významnému zvýšení středního objemu krevních destiček (MPV), což ukazuje na časnou fázi aktivace krevních destiček.Jsou zapotřebí další studie, aby se zjistilo, zda dochází k lýze nebo aktivaci krevních destiček a zda hypertonická injekce glukózy samotná nebo v kombinaci s PRP může poskytnout další klinický přínos.
V 50. letech minulého století americký chirurg George Hackett zjistil, že dokáže u mnoha pacientů trvale zmírnit bolesti kloubů a zad injekčním podáním proliferačního roztoku do šlach a vazů.Jeho pokusy na králících ukázaly, že léčba, kterou nazval proliferativní terapie, způsobila zvětšení a posílení šlach.Histologické studie potvrdily, že při tomto procesu vzniká nový kolagen [1].
Během prvních několika desetiletí bylo vyzkoušeno mnoho různých distribučních řešení.V 90. letech 20. století většina praktiků považovala vysoké koncentrace glukózy za nejbezpečnější a nejúčinnější metodu.Mechanismus účinku však zůstává nejasný.
Po Hackettově práci bylo ve 20. století provedeno několik klinických studií.V roce 2000 však došlo k obnovení zájmu a bylo dokončeno několik úspěšných klinických studií proliferativní terapie pro léčbu bolesti dolní části zad [2], osteoartrózy kolena [3] a laterální epikondylitidy [4].
Regenerace tkání vyžaduje účast kmenových buněk.Vysoké koncentrace glukózy proto musí nějakým způsobem vyvolat migraci, replikaci a diferenciaci kmenových buněk.Předpokládáme, že krevní destičky mohou působit jako poslové a že vysoké koncentrace glukózy mohou způsobit, že krevní destičky uvolňují cytokiny a růstové faktory, čímž podporují regenerační procesy, zejména migraci kmenových buněk do oblastí s vysokou koncentrací glukózy.
Aktivace krevních destiček vždy předchází zvýšení intracelulárního vápníku [5].Liu a kol.v roce 2008 ukázaly, že vysoké hladiny glukózy zvyšují aktivitu kanonických kanálů typu 6 (TRPC6) v plazmatické membráně s přechodným receptorovým potenciálem, což vede k přílivu iontů vápníku do krevních destiček [6].Jiná studie ukázala, že vystavení marginální zóny mikrotubulů vápenatým iontům způsobuje relaxaci, expanzi a deformaci marginální zóny, což následně způsobuje změnu tvaru z disku na sférický, což má za následek střední objem krevních destiček (MPV) [7].
Naší hypotézou v této studii je, že vystavení krevních destiček vysokým koncentracím glukózy ovlivňuje marginální zónu mikrotubulů a intracelulární prostředí, což vede ke zvýšení MPV.
Všichni účastníci podepsali informovaný souhlas poté, co byly vysvětleny podrobnosti studie a před obdržením vzorků.V této studii byly použity pouze vzorky PRP s hematokritem vyšším než 2 %, takže pro srovnání bylo možné zahrnout počet erytrocytů (erytrocytů) a střední korpuskulární objem červených krvinek (MCV).
Studie byla provedena ve čtyřech fázích, první fází byla PRP a zbývající fáze byla plná krev (tabulka 1).Jak bylo popsáno dříve [8], všechny relativní odstředivé síly (RCF, g-force) byly vypočteny ze středu (Rmid, v cm) krevního sloupce v odstředivé stříkačce.Rozhodli jsme se použít MPV jako marker senzibilizace krevních destiček a počet krevních destiček jako indikátor potenciální lýzy krevních destiček, přičemž obojí lze snadno měřit na standardních hematologických analyzátorech.
V první fázi darovalo 47 dobrovolníků vzorky krve – jednu zkumavku s kyselinou ethylendiamintetraoctovou (EDTA) a jeden vzorek plné krve PRP (antikoagulované citrátem sodným (NaCl, 3 %)) (tabulka 1).Ihned umístěte kolébku do zkumavky.Kompletní krevní obraz (CBC) byl proveden na vzorcích EDTA v triplikátech a vzorky NaCl byly analyzovány v triplikátech pro analýzu CBC a poté byl PRP připraven různými metodami popsanými výše [8].Všechny vzorky PRP byly připraveny centrifugací při 900–1000 g.Každý vzorek PRP míchejte na vortexovém mixéru po dobu 5–10 sekund, poté rozdělte pět 0,5 ml alikvotů do zkumavek.
Pro vyhodnocení vlivu expozice krevních destiček na zvýšené koncentrace glukózy byla stejná množství (0,5 ml) 0%, 5%, 12,5%, 25% a 50% glukózy ve vodě smíchána se vzorky krevních destiček, aby se získaly koncentrace 0%, 2,5% 6,25%, 12,5% a 25% na glukózové směsi a 1 zkumavka se protřepávala 5 minut.TAC každé směsi byl analyzován trojmo po 15 minutách.Počet krevních destiček (PLT), počet červených krvinek, MCV a MPV byly zprůměrovány pro každou zkumavku a průměrný počet krevních destiček, počet červených krvinek, MCV a MPV byly vypočteny pro všechny vzorky PRP.
Po dokončení první fáze sběru dat jsme zaznamenali významný nárůst objemu trombocytů v PRP trombocytech po přidání D50W.PRP krevní destičky nemusí nutně představovat všechny krevní destičky v krvi a PRP médium se liší od WB média.Proto jsme se rozhodli provést druhou fázi testu účinku přidání D50W do plné krve.
Pro druhé kolo jsme zvolili velikost vzorku 30 na základě výsledků z první série, jak je popsáno v části Analýza.V této sérii 20 dobrovolníků darovalo vzorky krve (tabulka 1).Plná krev (1,8 ml) byla odebrána do 3 ml injekční stříkačky a antikoagulována 0,2 ml 40% NaCl.Stříkačka s plnou krví byla míchána po dobu pěti sekund pomocí vortexového mixéru a CBC byla analyzována trojmo.Po analýze byla antikoagulovaná krev přidána ke 2 ml 50% glukózy v 5ml injekční stříkačce (konečná koncentrace glukózy byla přibližně 25 % (D25) a umístěna do protřepávací zkumavky na 30 minut. Po 30 minutách byly D25/CBC ve stříkačkách WB analyzovány v triplikátech. Předtím byly počty krevních destiček, počet RBC, MCV, vypočteny průměrné hodnoty RMC, PBC a počet vzorků pro každý vzorek, průměr MPV a počet RBC na stříkačku a po přidání glukózy.
Protože krevní destičky v plné krvi jsou běžně vystaveny hypertonické glukóze během proliferativní glukózové terapie díky minimálně invazivní injekci a není běžné kombinovat PRP s hypertonickou glukózou těsně před injekcí, rozhodli jsme se studovat hypertonickou glukózu v kombinaci s WB v části 1. Krok tři a čtyři.V každé fázi darovalo 20 dobrovolníků 7-8 ml ACD-A (kyselina obsahující citrát trisodný (22,0 g/l), kyselinu citronovou (8,0 g/l) a glukózu (24,5 g/l), roztok dextróza citrát) pro krevní antikoagulancia (tabulka 1).Ke stanovení prahového procenta spojeného se zvýšením MPV byly použity pouze směsi glukózy vyšší než 12,5 %.Ve třetí fázi se do zkumavky umístí 1 ml krve.Poté míchejte krev na vortexovém mixéru po dobu 10 sekund přidáním 1 ml 30% glukózy, 40% glukózy nebo 50% glukózy do zkumavky, abyste získali konečnou koncentraci glukózy 15 %, 20 % a 25 %.Vzorky glukózové krve byly analyzovány na CBC ihned po smíchání a opakovány každé dvě minuty po dobu 30 minut.
Během počátečního míchání vystaví přidání 1:1 hypertonické glukózy a WB nebo PRP na několik sekund krevní destičky koncentracím nad 25 %.Ve čtvrtém kroku, abychom vyhodnotili účinek hypertonické glukózy s minimálními počátečními vrcholovými koncentracemi a otestovali horní hranici účinku glukózy, jsme do D25W nebo D50W přidali pouze malé množství krve.Vložte 1 ml D25W nebo D50W do zkumavky a přidejte 0,2 ml WB za současného míchání vzorku na vortexu po dobu 10 sekund.V těchto případech byla krev vystavena glukóze v koncentraci přibližně 20 % nad konečnou koncentrací, spíše než o 50 % nad konečnou koncentrací jako ve fázi 3, což vedlo ke konečným koncentracím glukózy 20,8 % a 41,6 %.Smíšené vzorky byly analyzovány ve stejném časovém intervalu jako v kroku 3.
V prvním kroku každé série ředění glukózy bylo odebráno 30 vzorků, protože to byla vhodná velikost vzorku pro pilotní studii [9].Na konci každé fáze (včetně první fáze) vyhodnoťte přiměřenost velikosti vzorku pomocí vzorce použitého k určení velikosti vzorku potřebného k odhadu střední hodnoty spojité výsledné proměnné v jedné populaci.Vzorec n = Z2 x SD2/E2.V této rovnici je Z Z-skóre, SD je standardní odchylka a E je požadovaná chyba [10].Naše alfa je 0,05, což odpovídá hodnotě Z 1,96, a očekáváme chybu 5 (v procentech).Řešíme tedy pro n = (1,962 x SD2)/52.Výsledky ukázaly, že velikost vzorku požadovaná pro každou fázi byla menší než skutečný počet shromážděných.
Během období 1, 3 a 4 s použitím více než jedné koncentrace glukózy byl analyzován účinek různých koncentrací glukózy porovnáním dílčí změny mezi časem 0 a každým následujícím časem (fáze 1 v 15 minutách, období 3 v 15 minutách).a čtyři po 15 sekundách, poté každé dvě minuty.) Rychlosti změn pro každé časové období byly porovnány pomocí Mann-Whitneyho U-testu, protože data nesledovala normální rozdělení, jak bylo stanoveno Shapiro-Wilkovým testem normality.Protože v prvním, třetím a čtvrtém kroku (celkem pět) byla provedena analýza 1 ku 1 několika skupin (pět), byla provedena Bonferroniho korekce pro úpravu požadované hodnoty alfa na ≤ 0,01, ale ne ≤ 0,05.
Snížení počtu krevních destiček se všemi koncentracemi hypertonické dextrózy a zvýšení MPV v PRP krevních destičkách při >12,5% koncentraci dextrózy: Počet krevních destiček PRP vzrostl z jedno až pětinásobné koncentrace ve srovnání s výchozí hodnotou v plné krvi, liší se podle metody (není znázorněno). Snížení počtu krevních destiček se všemi koncentracemi hypertonické dextrózy a zvýšení MPV v krevních destičkách PRP při koncentraci dextrózy > 12,5 %: Počet krevních destiček PRP vzrostl z jedno až pětinásobné koncentrace ve srovnání s výchozí hodnotou v plné krvi, liší se podle metody (není znázorněno). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической зевынской девекит ромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5 %: количество тромбоцитов PRP увельчино1с с исходной цельной кровью, v зависимости от метода (не показано). Snížený počet krevních destiček při všech hypertonických koncentracích dextrózy a zvýšený MPV v krevních destičkách PRP při koncentraci > 12,5 % dextrózy: Počet krevních destiček PRP se zvýšil 1-5krát ve srovnání s výchozí hodnotou v plné krvi, v závislosti na metodě (nezobrazeno). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数MP：数塏上上上仠传基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法耉式菂（未揂（未揂 Při koncentraci glukózy > 12,5 % snižuje vysoká koncentrace glukózy krevní obraz, PRP krevní MPV se zvyšuje: ve srovnání s 与基线全血 se krevní obraz PRP zvyšuje 1 až 5krát oproti koncentraci (není popsáno). При концентрациях глюкозы > 12,5 % za концентрации гипертонической глююкозты сникорожат ов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалосцх от 1-йетноцно 5 сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не оп). Při koncentracích glukózy >12,5 % všechny hypertenzní koncentrace glukózy snížily počet krevních destiček a zvýšily MPV v krevních destičkách PRP: počet krevních destiček PRP se zvýšil 1- až 5krát ve srovnání s výchozími koncentracemi v plné krvi, v závislosti na metodě (jak je popsáno).Obrázek 1 ukazuje, že počet krevních destiček se snížil o téměř 75 % po naředění ve vodě a o 20–30 % po 15 minutách ředění s různými koncentracemi glukózy ve srovnání s výchozí hodnotou PRP a ředěním 1:1 upraveným na objem (1-k1 s korekcí objemu).k -1 chov).1 chov).
Počet buněk v každém ředění je vyjádřen jako zlomek původního počtu před ředěním.
MPV se během výroby PRP snížil minimálně, bez další změny koncentrací ředění na 12,5 % ve vodě nebo glukóze (včetně 25 % směsí PRP glukózy) a zvýšil se o více než 20 % po zředění v 50% roztoku glukózy (obr. .2).).Naproti tomu erytrocyty nevykazovaly žádnou významnou změnu objemu při jakémkoli jiném ředění než H2O.
Průměrný objem buněk v každém ředění je vyjádřen jako procento původního objemu před ředěním.
Podobné, ale méně výrazné snížení počtu krevních destiček a zvýšení CVR bylo pozorováno u BC vystavených 50% glukóze (pro formulaci s 25% glukózou).Tabulka 2 porovnává počty buněk a objemy buněk v plné krvi zředěné v 50% dextróze s údaji fáze 1 PRP zředěnými v 50% dextróze.Změny v počtu RBC a RBC MCV nebyly zřejmé a nebyly středem naší pozornosti.
SD = směrodatná odchylka, MD = průměrný rozdíl mezi skupinami, SE = směrodatná odchylka průměrného rozdílu, RBC = erytrocyty, PLT = krevní destičky, PRP = plazma bohatá na destičky, WB = plná krev
Po přidání D50W k WB byla procentuální ztráta krevních destiček upravená ředěním 7,7 % (310±73 vs. 286±96) ve srovnání se 17,8 % pro ředění PRP v D50W (664±348 vs. 544±277).MPV WB vzrostlo o 16,8 % (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6), zatímco MPV PRP vzrostlo o 26 % (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Ačkoli průměrné rozdíly ve snížení počtu krevních destiček i ve zvýšení MPV byly významně větší u PRP, změny ve snížení počtu krevních destiček v rámci WB byly téměř významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) a zvýšení MPV bylo významné (10,1 ± 0,5 až 11,6 (p1) ± 0,6). Ačkoli průměrné rozdíly ve snížení počtu krevních destiček i ve zvýšení MPV byly významně větší u PRP, změny ve snížení počtu krevních destiček v rámci WB byly téměř významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) a zvýšení MPV bylo významné (10,1 ± 0,5 až 11,6 (p1) ± 0,6).Ačkoli průměrné rozdíly ve snížení počtu krevních destiček a zvýšení CVR byly významně větší u PRP, změny v poklesu počtu krevních destiček v rámci WB byly téměř významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). zvýšení MPV bylo signifikantní (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血儏坏喕血小减文几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7 %) ；p = 0,06）和MPV 的增加是显着 的显着的1.8光 10,8 p.6 ± 10.8 p. 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显 着 大 ， 但 䡰 冇 葡 氰冇 葡 氰 冇葑的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = 0,06 ） 和 MPV 的增加1 ± 1 . ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。Změna snížení počtu krevních destiček v rámci WB byla téměř významná (z 310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), ačkoli PRP měla významně větší průměrné rozdíly v poklesu počtu krevních destiček a zvýšení MPV.a nárůst MPV byl významný.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (od 10,1 ± 0,5 do 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Konečná koncentrace 20 % glukózy byla vyžadována, aby byla vidět významná změna MPV, ale změna MPV byla výraznější při konečné koncentraci 25 %.Ztráta krevních destiček se po počátečním poklesu stabilizovala.Zaznamenali jsme počáteční prudký pokles CVR, nicméně CVR se rychle obnovila při 25% konečné koncentraci glukózy, která byla významně vyšší než hladiny CVR pozorované při konečných koncentracích glukózy 20 % a 15 % (obr. 3 a vlevo od tabulky 3; stínované rámečky).označují p-hodnoty ≤ alfa s Bonferroniho korekcí 0,01).Došlo také k počátečnímu prudkému poklesu počtu PLT, pozorovanému v počáteční fázi 0-15 s, a poté zůstal stabilní (od 15 s do 30 min; vlevo od tabulky 4).
Přidání různých koncentrací glukózy do plné krve vedlo k počátečnímu rychlému poklesu MPV, po kterém následovalo na koncentraci závislé obnovení více než 20 %.Legenda ukazuje koncentraci glukózy po naředění.D15, D20 a D25 byly provedeny v ředění 1:1.D21 a D41 byly provedeny při ředění 1:5.
Tabulka 4 ukazuje změnu počtu krevních destiček při zředění hypertonickou glukózou.Pozorovali jsme na dávce závislý vztah mezi okamžitým poklesem počtu PLT při ředění 1:1 a při ředění 1:5.Při srovnání ředění 1:1 jako jedné skupiny s ředěním 1:5, skupina 1:1 měla okamžitý pokles počtu krevních destiček menší než skupina 1:5 66±48 000 (23 %) oproti 99±69 000 (37 %).p = 0,014) ve skupině 1:5.Po počátečním poklesu v prvním bodě měření se počet krevních destiček jako procento glukózy stabilizoval (obr. 4).
Když se ke glukóze přidá plná krev v poměru 1:1, počet krevních destiček se sníží asi o 25 %.Když se však přidala plná krev v poměru 1:5, bylo snížení mnohem větší – asi 50 %.
41 % glukózy zvýšilo MPV rychleji a dramatičtěji než 25 % nebo 21 %.Výsledky MPV jsou uvedeny na obrázku 3. Při všech ostatních ředěních nebylo po přidání 50% glukózy pozorováno žádné okamžité počáteční snížení MPV.Při použití 25% glukózy (koncentrace glukózy 20,8 % při konečném ředění) byla změna MPV srovnatelná se změnou 20% glukózy při ředění 1:1 (obr. 3).Ačkoli změny v MPV byly zpočátku větší při 41% smíšené koncentraci než při 25%, rozdíl v MPV mezi 41% a 25% po 16 minutách již nebyl významný (tabulka 3 vpravo).Je také zajímavé, že 25 % glukózy zvýšilo MPV účinněji než 20,8 %.
Tato in vitro studie částečně potvrdila naši hypotézu. Ukázala potenciální částečnou lýzu krevních destiček příměsí dextrózy, rychlé přizpůsobení krevních destiček extrémní hypertonii a významný vzestup MPV v reakci na > 25% koncentrace hypertonické dextrózy. Ukázala potenciální částečnou lýzu krevních destiček příměsí dextrózy, rychlé přizpůsobení krevních destiček extrémní hypertonii a významný vzestup MPV v reakci na > 25% koncentrace hypertonické dextrózy. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декастрозиодадобыстыр, декастрозирут омбоцитов до экстремального гипертонуса a значительное повышение MPV в ответипентинернение цию декстрозы > 25 %. Prokázala potenciální částečnou lýzu krevních destiček dextrózou, rychlou akomodaci krevních destiček k extrémní hypertonii a významné zvýšení MPV v reakci na hypertonické hladiny dextrózy > 25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速庫速店极瓼仗店>极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗应极瓼仗店极瓼仗应极瓼仏% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 逫庌 枥板 快速 适庌 枥极 的庌 枥极 的 部分 血小板应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой,стрюкозой, тромбоцитов к экстремальному гипертонусу a значительное увеличенсие MPV в ответноиненконие кой глюкозы > 25 %. Ukazuje potenciální částečnou lýzu krevních destiček směsí glukózy, rychlou adaptaci krevních destiček na extrémní hypertonicitu a významné zvýšení MPV v reakci na hypertonickou glukózu > 25 %.Počáteční zvýšení bylo maximální při 41,6% expozici glukózy, ale zvýšení MPV se přiblížilo 25% expozici glukózy přibližně 20 minut po expozici.
Koncentraci krevních destiček ovlivňuje glukóza.Všimli jsme si, že množství PLT se snížilo při všech ředěních glukózy.Prudký pokles počtu krevních destiček v ředěních H2O (0 %) řady PRP může být spojen s osmotickou lýzou.Alternativně by to mohl být artefakt způsobený shlukováním krevních destiček, ale to je v kontrastu s chybějící změnou MPV při tomto ředění.Toto zjištění znamená, že některé krevní destičky jsou velmi citlivé na hypoosmolaritu.
Ve všech ředěních glukózy 1:1 se množství PLT snížilo o 20-30 %, dokonce i o D5W (hypotonický při 252 mOsm), což může indikovat specifický neosmotický účinek glukózy, protože PLT i MPV zůstaly nezměněny při trojnásobném zvýšení koncentrace.glukóza.od D5W do D25W.Ve skutečnosti měly koncentrace PLT tendenci se mírně zvyšovat se zvyšující se osmolaritou.
Pokles PLT mezi ředěními 1:1 a 1:5 znamená, že účinek rozpouštění závisí na počáteční a konečné koncentraci glukózy.Pokud by záleželo pouze na počáteční koncentraci, pak by se očekával rozdíl v redukci PLT mezi koncentracemi 1:1.Ale my ne.Pokud účinek lýzy závisí pouze na konečné koncentraci glukózy, pak neočekáváme velký rozdíl mezi 20% ředěním 1:1 a 20,8% ředěním 1:5.A přesto jsme to dokázali.
Pokud dojde k úbytku krevních destiček v důsledku lýzy krevních destiček, vzniká částečný lyzát, po kterém se cytokiny a růstové faktory uvolňují do extracelulárního prostředí.Několik studií ukázalo, že lyzát krevních destiček je téměř stejně účinný jako PRP jako proliferační roztok [11].Samotná PRP se ukázala jako účinné řešení pro léčbu proliferace [12–14].
Neaktivní krevní destičky cirkulují ve formě disku vyztuženého několika vnitřními strukturami.Během aktivace získávají více kulovitý nebo amébový tvar, což má za následek zvětšení objemu.Zvětšení objemu vyžaduje zvětšení plochy povrchu, což je výsledkem extruze systému otevřených tubulů (OCS) a přidání exocytárních granulí k membráně.Zbývá určit, zda zvýšení MPV vyvolané hypertonickou glukózou zahrnuje jeden nebo oba tyto mechanismy, ale pokud druhý, pak zvýšení MPV by indikovalo degranulaci.
Tato studie ukázala, že vystavení vysokým koncentracím glukózy na PRP nebo krevních destičkách z plné krve vedlo ke zvýšení MPV během 15 minut s koncentrací glukózy 25 % a 41,6 %.
Zvýšení MPV krevních destiček může být způsobeno dilatací okolních spletí mikrotubulů v reakci na příliv vápníku.Liu a kol.Ukázalo se, že glukóza zprostředkovává přísun vápníku kanálem TRPC6 krevních destiček [6].Naší hypotézou je, že glukóza indukuje relaxaci spleti mikrotubulů, což vede ke zvýšení MPV a senzibilizace a/nebo aktivace krevních destiček.Nicméně, soudě podle našich výsledků, je to jen část příběhu.V našich testech žádná koncentrace pod D25W nevedla ke zvýšení MPV.Vzhledem k tomu, že jsme netestovali expozici koncentracím glukózy mezi 12,5 % a 25 %, naše výsledky fáze 1 naznačují, že v tomto rozmezí koncentrací glukózy může existovat práh, který vede ke zvýšení MPV.Další testování ve stupních 3 a 4 ukázalo, že 20-25% glukózy se zdá být prahovou hodnotou, ale není jasné proč.
Také jsme pozorovali ~9% pokles MPV po centrifugaci.Není jasné, zda je tento pokles MPV způsoben většími a hustšími krevními destičkami zachycenými ve vrstvě červených krvinek centrifugy.Toto pozorování může být pro lékaře důležité, protože může znamenat, že krevní destičky PRP jsou menší a méně hustá podskupina krevních destiček WB.
V předchozí studii jsme ukázali, že příprava PRP manuálními metodami je levná [8].Pokud glukóza senzibilizuje tkáňové destičky nebo PRP, čímž je činí náchylnějšími k aktivaci, nebo pokud je PRP produkován s vlastnostmi částečného lyzátu, může to zlepšit regeneraci a snížit potřebu terapie.Kombinace PRP a vysoce koncentrované glukózy tedy může být nákladově efektivnější než PRP nebo samotná glukóza.
Naše studie má několik nedostatků.Nejprve použijeme PRP získaný několika různými metodami.To může vést k rozporuplným výsledkům.Za druhé, nebyli jsme schopni provést biochemickou analýzu žádného z našich vzorků, abychom přesněji určili, zda došlo k aktivaci krevních destiček.Rádi bychom změřili P-selektin, destičkový faktor 4, agregáty monocytárních destiček nebo jiné markery aktivace destiček, abychom lépe porozuměli stupni nebo přítomnosti degranulace alfa granulí, ale to je nad rámec této studie.Za třetí jsme nebyli schopni potvrdit elektronovou mikroskopií nebo jinými metodami, že zvýšení MPV v krevních destičkách vystavených glukóze bylo způsobeno účinkem na spleti mikrotubulů.
Směsi WB nebo PRP s 25% glukózou zvýšily MPV, což signalizovalo počátek aktivace krevních destiček, ačkoli tato studie neprokázala progresi agregace nebo degranulace.Hypertonická směs glukózy vedla ke ztrátě krevních destiček, což pravděpodobně představuje lytický efekt.Částečná aktivace nebo lýza krevních destiček může způsobit regeneraci tkáně po injekci krevních destiček.Není jasné, jaké klinické důsledky mohou tyto změny vést.Další studie prokázaly přesnější měření aktivace nebo lýzy a vyhodnotily různé klinické účinky hypertonických směsí glukózy s WB nebo PRP.
Glukózová proliferativní terapie je jednoduchá a nenákladná regenerační terapie, která se rychle rozšiřuje a podporuje klinický výzkum.Tato studie naznačuje fyziologický mechanismus, který, pokud se potvrdí, by nám mohl pomoci pochopit část regeneračního mechanismu proliferativní terapie.
Biomedicínská a zdravotnická informatika na University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Lidské subjekty: Všichni účastníci této studie dali nebo nedali souhlas.Mezinárodní společnost pro buněčnou medicínu vydala schválení ICMS-2017-003.Následující protokol byl schválen pro další použití Institutional Review Board Mezinárodní společnosti pro buněčnou medicínu: Název: Výpočet výtěžku léčiva v plazmě bohaté na krevní destičky na základě výchozího počtu krevních destiček v CBC.Zvířecí subjekty: Všichni autoři potvrdili, že do této studie nebyla zapojena žádná zvířata ani tkáně.Střet zájmů: V souladu s ICMJE Uniform Disclosure Form prohlašují všichni autoři následující: Platební/servisní informace: Všichni autoři prohlašují, že na předloženou práci nezískali finanční podporu od žádné organizace.Finanční vztahy: Všichni autoři prohlašují, že v současné době ani v posledních třech letech nemají finanční vztahy s žádnou organizací, která by mohla mít zájem o předloženou práci.Jiné vztahy: Všichni autoři prohlašují, že neexistují žádné další vztahy nebo činnosti, které by mohly ovlivnit předloženou práci.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K a kol.(17. května 2022) Vliv glukózy na počet a objem krevních destiček: důsledky pro regenerativní medicínu.Cure 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison a kol.Toto je článek s otevřeným přístupem distribuovaný za podmínek licence Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Neomezené použití, distribuce a reprodukce na jakémkoli médiu je povoleno za předpokladu, že je uveden původní autor a zdroj.