Děkujeme, že jste navštívili Nature.com. Verze prohlížeče, kterou používáte, má omezenou podporu pro CSS. Abyste dosáhli co nejlepšího zážitku, doporučujeme vám používat aktualizovaný prohlížeč (nebo vypnout režim kompatibility v Internet Exploreru). Abychom zajistili nepřetržitou podporu, budeme web mezitím zobrazovat bez stylů a JavaScriptu.
Porézní částice oxidu křemičitého byly připraveny sol-gel metodou s určitými modifikacemi pro získání makroporézních částic. Tyto částice byly derivatizovány reverzibilní adiční fragmentační řetězovou transferovou polymerací (RAFT) s N-fenylmaleimid-methylvinylisokyanátem (PMI) a styrenem za účelem přípravy N-fenylmaleimidu interkalace polystyrenu (PMP) stacionární fáze0 mm 0 x1 sloupec 0 mm 1 x 1 sloupec packing.Vyhodnocená PMP kolonová separace směsi peptidů skládající se z pěti peptidů (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin enkefalin) chromatografický výkon) a trypsinem štěpení lidského sérového albuminu 8 teoretické podmínky eluce jako plotna HAS 8 teoretická jako eluce. 000 desek/m². Při porovnání separačního výkonu vyvinuté kolony s komerční Ascentis Express RP-Amidovou kolonou bylo pozorováno, že separační výkon PMP kolony byl lepší než komerční kolona, ​​pokud jde o separační účinnost a rozlišení.
Biofarmaceutický průmysl se v posledních letech stal expandujícím globálním trhem s podstatným nárůstem podílu na trhu. S explozivním růstem biofarmaceutického průmyslu1,2,3 je analýza peptidů a proteinů velmi žádaná. Kromě cílového peptidu vzniká během syntézy peptidů několik nečistot, proto je potřeba chromatografické čištění k získání peptidů požadované čistoty buněk, velký počet tkáňových proteinů a analýza tělních tekutin je náročný úkol. prakticky detekovatelné druhy v jediném vzorku. Přestože hmotnostní spektrometrie je účinným nástrojem pro sekvenování peptidů a proteinů, pokud jsou takové vzorky vstřikovány do hmotnostního spektrometru v jednom průchodu, separace nebude ideální. Tento problém lze zmírnit implementací separací kapalinovou chromatografií (LC) před MS analýzou, což sníží počet analytů vstupujících do hmotnostního spektrometru, 5, přidání analytů v daném čase v koncentračním 4 oblastech. Tyto analyty a zlepšení citlivosti detekce MS. Kapalinová chromatografie (LC) výrazně pokročila za poslední desetiletí a stala se populární technikou v proteomické analýze7,8,9,10.
Kapalinová chromatografie na reverzní fázi (RP-LC) je široce používána pro čištění a separaci směsí peptidů s použitím oktadecyl-modifikovaný oxid křemičitý (ODS) jako stacionární fáze11,12,13.Stacionární fáze RP však nezajišťují uspokojivou separaci peptidů a proteinů kvůli jejich složité struktuře a amfifilní povaze 14,15 jsou potřebné pro polární analýzu proteinů a polárních stanic speciální proteinové fáze -polární skupiny k interakci a udržení těchto analytů16. Chromatografie ve smíšeném režimu, která poskytuje multimodální interakce, může být alternativou k RP-LC pro separaci peptidů, proteinů a dalších komplexních směsí. Bylo připraveno několik stacionárních fází ve smíšeném režimu a kolony naplněné těmito fázemi byly použity pro separace peptidů a proteinů, separace peptidů a proteinů,2RP-MixW17,2Mix, stanice 297,2M8 LC, HILIC/RPLC, polární interkalace/RPLC) jsou vhodné pro separace peptidů a proteinů díky přítomnosti polárních i nepolárních skupin22,23,24,25,26,27,28 .Podobně polární interkalační stacionární fáze s kovalentně vázanými polárními skupinami vykazují dobrou separační sílu a jedinečnou selektivitu pro polární a analytickou interakci, protože separace mezi polární a nepolární fází závisí.Multimodální interakce 29, 30, 31, 32. Nedávno Zhang et al.30 připravil dodecyl-terminovanou polyaminovou stacionární fázi a úspěšně oddělil uhlovodíky, antidepresiva, flavonoidy, nukleosidy, estrogeny a několik dalších analytů. Polární interkalátor má polární i nepolární skupiny, takže jej lze použít k separaci peptidů a proteinů, které mají hydrofobní i hydrofilní části, které mají jak hydrofobní, tak hydrofilní části, dostupné pod obchodním názvem C8 amidová kolona Kolony Ascentis Express RP-Amide, ale tyto kolony se používají pouze pro analýzu aminu 33.
V této studii byla připravena a vyhodnocena polární zapuštěná stacionární fáze (polystyrén zapuštěný N-fenylmaleimidem) pro separaci peptidů a trypsinové digesty HSA. Stacionární fáze byla připravena s použitím následující strategie. Částice porézního oxidu křemičitého byly připraveny podle postupu uvedeného v naší předchozí publikaci s některými modifikacemi protokolu přípravy. Poměr močoviny, částic polyethylenglykolu, polyethylenglykolu, vody s velkou velikostí kyseliny octové a kyseliny TMOS. Ligand, fenylmaleimid-methylvinylisokyanát, byl syntetizován a použit k derivatizaci částic oxidu křemičitého k přípravě polární zalité stacionární fáze. Výsledná stacionární fáze byla naplněna do kolony z nerezové oceli (100 × 1,8 mm id) pomocí optimalizovaného schématu plnění. Náplň kolony je podporována mechanickými vibracemi, aby se zajistilo vytvoření homogenního lože složeného z pěti kolon naplněných peptidem;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucin Enkephalin) a trypsinový štěp lidského sérového albuminu (HAS). Bylo pozorováno, že směs peptidů a trypsinový štěpení HSA se oddělují s dobrým rozlišením a účinností. Výkon separace na koloně PMP Bo byl porovnán se separačním výkonem sloupce PMP. a bylo pozorováno, že proteiny jsou dobře rozlišené a účinné na koloně PMP, která byla účinnější než kolona Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylenglykol), močovina, kyselina octová, trimethoxyorthosilikát (TMOS), trimethyl chlorosilan (TMCS), trypsin, lidský sérový albumin (HSA), chlorid amonný, močovina, hexan methyldisilazan (HMDS), methakryloylchlorid (MC4), styrén-GradeM, benzen-oxidehcrop, benzen-styrenHPC Acetonitril (ACN), methanol, 2-propanol a aceton zakoupené od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Směs močoviny (8 g), polyethylenglykolu (8 g) a 8 ml 0,01 N kyseliny octové byla míchána po dobu 10 minut a poté k ní bylo přidáno 24 ml TMOS za podmínek ledového chlazení. Reakční směs byla zahřívána na 40 °C po dobu 6 hodin a poté na 120 °C po dobu 8 hodin a zbytkový materiál byl vylit do nerezové oceli na 170 °C. Vysušená měkká hmota byla hladce rozemleta v peci a kalcinována při 550 °C po dobu 12 hodin. Byly připraveny tři šarže a charakterizovány pro zkoumání reprodukovatelnosti velikosti částic, velikosti pórů a plochy povrchu.
Povrchovou modifikací částic oxidu křemičitého předsyntetizovaným ligandem fenylmaleimid-methylvinylisokyanátem (PCMP) s následnou radiální polymerací se styrenem byla připravena sloučenina obsahující polární skupiny.Stacionární fáze pro agregáty a polystyrénové řetězce. Postup přípravy je popsán níže.
N-fenylmaleimid (200 mg) a methylvinylisokyanát (100 mg) byly rozpuštěny v suchém toluenu a do reakční baňky bylo přidáno 0,1 ml 2,2'-azoisobutyronitrilu (AIBN), aby se připravil kopolymer fenylmaleimid-methylvinylizokyanát, kopolymer, zahřátý na 4 °C a sušen po dobu 3 hodin (PMCP) v sušárně (PMCP). po dobu 3 hodin.
Vysušené částice oxidu křemičitého (2 g) byly dispergovány v suchém toluenu (100 ml), míchány a sonikovány v 500 ml baňce s kulatým dnem po dobu 10 minut. PMCP (10 mg) byl rozpuštěn v toluenu a po kapkách přidán do reakční baňky pomocí kapací nálevky. částice (100 g) byly rozpuštěny v toluenu (200 ml) a byl přidán 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) v přítomnosti 100 ul dibutylcíndilaurátu jako katalyzátoru. Směs byla míchána při teplotě 50 °C po dobu 8 hodin, přefiltrována a sušena při teplotě 50 °C po dobu 3 hodin.
Styren (1 ml), benzoylperoxid BPO (0,5 ml) a částice oxidu křemičitého s navázaným TEMPO-PMCP (1,5 g) byly dispergovány v toluenu a propláchnuty dusíkem. Polymerace styrenu probíhala při 100 °C po dobu 12 hodin. Výsledný produkt byl promyt methanolem a sušen při 60 °C přes noc. Obrázek 1 celkové reakční schéma je znázorněno na obrázku.
Vzorky byly odplyněny při 393 K po dobu 1 hodiny, aby se získal zbytkový tlak menší než 10-3 Torr. Množství N2 adsorbovaného při relativním tlaku P/P0 = 0,99 bylo použito ke stanovení celkového objemu pórů. Morfologie holých a ligandem vázaných částic oxidu křemičitého byla zkoumána skenovací elektronovou mikroskopií (vzorky Hitachi a ligandy byly umístěny na hliníkové křemičité technologie, Japane Bare BarD Technologies). kolona s použitím lepicí uhlíkové pásky. Zlato bylo naneseno na vzorky pomocí rozprašovacího nanášeče Q150T a na vzorky byla nanesena 5 nm Au vrstva. To zlepšuje efektivitu procesu při použití nízkého napětí a poskytuje jemné zrnitost, studené naprašování. K elementární analýze byl použit elementární analyzátor Flash EA1112 (velikost částic Master UKW200 byl použit analyzátor Malvern UK) distribuce velikosti. Nahé částice oxidu křemičitého a částice oxidu křemičitého vázaného ligandem (každé 5 mg) byly dispergovány v 5 ml isopropanolu, sonikovány po dobu 10 minut, vortexovány po dobu 5 minut a umístěny na optickou lavici Mastersizer. Termogravimetrická analýza byla prováděna rychlostí 5 °C za minutu v teplotním rozsahu 30 až 800 °C.
Sklo vyložené nerezové kolony s úzkým otvorem o rozměrech (100 × 1,8 mm vnitřní průměr) byly plněny s použitím metody suspenzního plnění za použití stejného postupu jako v Ref.31. Kolona z nerezové oceli (se skleněnou vložkou, vnitřní průměr 100 × 1,8 mm) s výstupní armaturou obsahující 1 µm fritu byla připojena k plničce kaše (Alltech Deerfield, IL, USA). Připravte kaši stacionární fáze suspendováním 150 mg stacionární fáze v 1,2 ml methanolu jako dobře rozpouštědlo. postupně aplikací tlaků 100 MP po dobu 10 minut, 80 MP po dobu 15 minut a 60 MP po 30 minut. Během plnění byly aplikovány mechanické vibrace pomocí dvou třepaček GC kolony (Alltech, Deerfield, IL, USA), aby bylo zajištěno rovnoměrné naplnění kolony. LC systém, abyste zkontrolovali jeho výkon.
LC čerpadlo (10AD Shimadzu, Japonsko), injektor (Valco (USA) C14 W.05) s 50nL vstřikovací smyčkou, membránovým odplyňovačem (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapilárním okénkem. ries (50 μm id 365 a redukční spojovací kapiláry (50 μm) byly instalovány na 1/16″ výstupu redukčního spojení. Sběr dat a chromatografické zpracování bylo provedeno pomocí softwaru Multichro 2000. Monitorování při 254 nm Analyty byly testovány na UV absorbanci. Chromatografická data byla analyzována MAN OriginProton8).
Albumin z lidského séra, lyofilizovaný prášek, ≥ 96 % (elektroforéza na agarózovém gelu) 3 mg smíchaný s trypsinem (1,5 mg), 4,0 M močovinou (1 ml) a 0,2 M hydrogenuhličitanem amonným (1 ml). Roztok byl míchán po dobu 10 minut a poté udržován ve vodní lázni při 1 % 6nch, 37 °C. roztok přefiltrujte a uchovávejte při teplotě do 4 °C.
Separace směsí peptidů a štěpení HSA trypsinem byly hodnoceny odděleně na PMP kolonách. Zkontrolujte separaci směsi peptidů a štěpení HSA trypsinem pomocí PMP kolony a porovnejte výsledky s kolonou Ascentis Express RP-Amide. Teoretický počet pater se vypočítá následovně:
SEM snímky holých částic oxidu křemičitého a částic oxidu křemičitého vázaného ligandem jsou uvedeny na OBR.2. SEM snímky holých částic oxidu křemičitého (A, B) ukazují, že na rozdíl od našich předchozích studií jsou tyto částice kulovité, ve kterých jsou částice protáhlé nebo mají nepravidelnou symetrii. Povrch částic oxidu křemičitého vázaného ligandem (C, D) je hladší než povrch holých částic oxidu křemičitého, což může být způsobeno povlakem polystyrénových řetězců na povrchu částic oxidu křemičitého.
Snímky holých částic oxidu křemičitého (A, B) a částic oxidu křemičitého s vázanými ligandy (C, D) ze skenovacího elektronového mikroskopu.
Distribuce velikosti částic holých částic oxidu křemičitého a částic oxidu křemičitého vázaného ligandem je znázorněna na obrázku 3(A). Křivky distribuce velikosti částic založené na objemu ukázaly, že velikost částic oxidu křemičitého se po chemické modifikaci zvětšila (obr. 3A). Údaje o distribuci velikosti částic částic oxidu křemičitého ze současné studie a předchozí studie jsou porovnány v tabulce 1(A). Velikost částic založená na objemu, d(0,5) v naší předchozí studii, je ve srovnání s hodnotou ad.3 μm u PMP 3,05 μm (částice oxidu křemičitého vázaného na polystyren)34. Tato šarže měla užší distribuci velikosti částic ve srovnání s naší předchozí studií kvůli měnícím se poměrům PEG, močoviny, TMOS a kyseliny octové v reakční směsi. Velikost částic fáze PMP je o něco větší než velikost částic křemičitanu vázaného na polystyren (částice křemičitanu vázaného na polystyren, kterou jsme dříve studovali). , zatímco ve fázi PMP byla tloušťka vrstvy 1,38 um.
Distribuce velikosti částic (A) a distribuce velikosti pórů (B) holých částic oxidu křemičitého a částic oxidu křemičitého vázaného na ligand.
Velikost pórů, objem pórů a povrchová plocha částic oxidu křemičitého ze současné studie jsou uvedeny v tabulce 1(B). Profily PSD holých částic oxidu křemičitého a částic oxidu křemičitého vázaného ligandem jsou znázorněny na obrázku 3(B). Výsledky jsou srovnatelné s naší předchozí studií. Velikosti pórů holých částic oxidu křemičitého a částic oxidu křemičitého vázaného na ligand jsou 310 a 241, v tomto pořadí, což ukazuje, že velikost pórů 16 (B je po změně v tabulce zmenšena a velikost pórů se po změně v tabulce zmenšila). znázorněno na obr. 3(B). Podobně se objem pórů částic oxidu křemičitého po chemické modifikaci snížil z 0,67 na 0,58 cm3/g. Specifický povrch aktuálně studovaných částic oxidu křemičitého je 116 m2/g, což je srovnatelné s naší předchozí studií (124 m2/g). 05 m2/g po chemické úpravě.
Výsledky elementární analýzy stacionární fáze jsou uvedeny v tabulce 2. Zatížení uhlíkem současné stacionární fáze je 6,35 %, což je nižší než uhlíkové zatížení v naší předchozí studii (částice oxidu křemičitého vázaného polystyrénem, ​​7,93 %35 a 10,21 %, v tomto pořadí) 42. Zatížení uhlíkem současné stacionární fáze je nízké, protože při přípravě současného SPsren-methyl polárního ligandu je přídavek některého SPsren-methyl polárního ligandu byly použity vinylisokyanát (PCMP) a 4-hydroxy-TEMPO. Hmotnostní procento dusíku v současné stacionární fázi je 2,21 % ve srovnání s 0,1735 a 0,85 % hmotnostními dusíku v předchozích studiích. To znamená, že hmotnostní % dusíku je v současné stacionární fázi vyšší kvůli obsahu fenylmaleimidu. zatímco uhlíkové zatížení konečného produktu (6) bylo 6,35 %, jak je uvedeno v tabulce 2. Ztráta hmotnosti byla kontrolována pomocí PMP stacionární fáze a křivka TGA je znázorněna na obrázku 4. Křivka TGA ukazuje ztrátu hmotnosti 8,6 %, což je v dobré shodě s uhlíkovou zátěží (6,35 %), protože ligandy obsahují nejen C, ale také H, O a N.
Pro povrchovou modifikaci částic oxidu křemičitého byl vybrán fenylmaleimid-methylvinylisokyanátový ligand, protože má polární fenylmaleimidové skupiny a vinylisokyanátové skupiny. Vinylisokyanátové skupiny mohou dále reagovat se styrenem živou radikálovou polymerací. Druhým důvodem je vložení skupiny, která má mírnou interakci s analytem a žádnou silnou elektrostatickou interakci mezi analytem a fenylimidem při normální stacionární fázi nemá žádný virtuální náboj fenylimidu. arní fáze může být řízena optimálním množstvím styrenu a reakční dobou volné radikálové polymerace. Poslední krok reakce (volná radikálová polymerace) je kritický a může změnit polaritu stacionární fáze. Byla provedena elementární analýza pro kontrolu uhlíkového zatížení těchto stacionárních fází. Bylo pozorováno, že zvýšení množství styrenu a reakční doby připravené zvýšilo uhlíkové zatížení v opačné stacionární fázi a různé koncentrace uhlíku v různých stacionárních fázích. Naplňte tyto stacionární fáze do kolon z nerezové oceli a zkontrolujte jejich chromatografický výkon (selektivitu, rozlišení, hodnotu N atd.). Na základě těchto experimentů byla vybrána optimalizovaná formulace pro přípravu stacionární fáze PMP, aby byla zajištěna řízená polarita a dobrá retence analytu.
Pět směsí peptidů (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin enkefalin) bylo také hodnoceno pomocí PMP kolony s použitím mobilní fáze;60/40 (obj./obj.) acetonitril/voda (0,1 % TFA) při průtoku 80 μl/min. Za optimálních elučních podmínek je teoretické číslo pater (N) na kolonu (100 × 1,8 mm vnitřní průměr) 20 000 ± 100 (200 000 uvedených chromatogramů pro kolony PT² a tři hodnoty P chromatogramu 3 m²). na obrázku 5A. Rychlá analýza na koloně PMP při vysokém průtoku (700 μl/min), pět peptidů bylo eluováno během jedné minuty, hodnoty N byly velmi dobré, 13 500 ± 330 na sloupec (100 × 1,8 mm vnitřní průměr), odpovídá 135 000 destičkám/m2 (obrázek 1 s) identické (obrázek 15). ed se třemi různými šaržemi PMP stacionární fáze pro kontrolu reprodukovatelnosti. Koncentrace analytu pro každou kolonu byla zaznamenána za použití optimálních elučních podmínek a počtu teoretických pater N a retenčního času pro oddělení stejné testovací směsi na každé koloně. Údaje o reprodukovatelnosti pro PMP kolony jsou uvedeny v tabulce 4. Reprodukovatelnost kolony PMP dobře koreluje s velmi nízkými hodnotami %RSD.
Separace směsi peptidů na PMP koloně (B) a Ascentis Express RP-Amidové koloně (A);mobilní fáze 60/40 ACN/H20 (TFA 0,1 %), rozměry PMP kolony (100 x 1,8 mm vnitřní průměr);analytické Pořadí eluce sloučenin: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) a 5 (leucin) kyselý enkefalin)).
Kolona PMP (100 × 1,8 mm vnitřní průměr) byla vyhodnocena pro separaci tryptických štěpů lidského sérového albuminu ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Chromatogram na obrázku 6 ukazuje, že vzorek je dobře separován a rozlišení je velmi dobré. HSA štěpení byla analyzována s použitím průtoku 100 µL/min, mobilní fáze 70/30 zobrazeno acetonitrilogram. štěpení HSA bylo rozděleno do 17 píku odpovídajících 17 peptidům. Byla vypočtena separační účinnost každého píku v štěpení HSA a hodnoty jsou uvedeny v tabulce 5.
Tryptický štěp HSA (100 x 1,8 mm vnitřní průměr) byl separován na PMP koloně;průtok (100 ul/min), mobilní fáze 60/40 acetonitril/voda s 0,1 % TFA.
kde L je délka kolony, η je viskozita mobilní fáze, ΔP je zpětný tlak kolony a u je lineární rychlost mobilní fáze. Permeabilita kolony PMP byla 2,5 × 10-14 m2, průtok byl 25 μL/min a 60/40 v/min. byla použita kolona 60/40 v/v 10 mm ACN. podobná jako v naší předchozí studii Ref.34.Propustnost kolony naplněné povrchově porézními částicemi je: 1,7 × 10-15 pro částice o velikosti 1,3 μm, 3,1 × 10-15 pro částice o velikosti 1,7 μm, 5,2 × 10-15 a 2,5 × 10-15 pro částice o velikosti 10-14 μm. permeabilita fáze PMP je podobná jako u částic o velikosti 5 μm jádro-plášť.
kde Wx je hmotnost kolony naplněné chloroformem, Wy je hmotnost kolony naplněné methanolem a ρ je hustota rozpouštědla. Hustoty methanolu (ρ = 0,7866) a chloroformu (ρ = 1,484). Celková porozita kolon SILICA PARTICLES-C18 (100 mm-1U a 3 dříve studovaných kolon C8-3) byla 18 mm-1U x ​​3. 0,63 a 0,55. To znamená, že přítomnost močovinových ligandů snižuje permeabilitu stacionární fáze. Na druhou stranu celková porozita kolony PMP (100 × 1,8 mm vnitřní průměr) je 0,60. Permeabilita kolon PMP je nižší než u kolon naplněných částicemi C18 v C8-vazebné fázi s lineárním oxidem křemičitým. řetězců, zatímco ve stacionárních fázích polystyrenového typu se kolem něj vytvoří relativně silná vrstva polymeru. V typickém experimentu se porozita kolony vypočítá jako:
Obrázky 7A,B ukazují kolonu PMP (100 x 1,8 mm vnitřní průměr) a kolonu Ascentis Express RP-Amide (100 x 1,8 mm vnitřní průměr) za použití stejných elučních podmínek (tj. 60/40 ACN/H20 a 0,1 % TFA).) van Deemterova spiknutí.Vybrané směsi peptidů (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucin Enkephalin) byly připraveny ve 20 µL/ Minimální průtok pro obě kolony je 800 µL a As při optimálních hodnotách HETP 8 MP při minimálním průtoku 0 centů/min. Kolona RP-Amide byla 2,6 µm a 3,9 µm, v tomto pořadí. Hodnoty HETP naznačují, že účinnost separace kolony PMP (100 × 1,8 mm vnitřní průměr) je mnohem lepší než komerčně dostupná kolona Ascentis Express RP-Amide (100 x 1,8 mm vnitřní průměr). separační účinnost kolony PMP (100 × 1,8 mm vnitřní průměr) ve srovnání s kolonou Ascentis Express RP-Amide je založena na zlepšení tvaru částic, velikosti a složitých postupech plnění kolony používaných v současné práci34.
(A) van Deemterův graf (HETP versus lineární rychlost mobilní fáze) získaný pomocí PMP kolony (100 × 1,8 mm id) v 60/40 ACN/H2O s 0,1% TFA.(B) van Deemterův graf (HETP versus mobilní fáze lineární rychlost) získaný pomocí Ascentis Express RP-Amide kolony s 100 mm ACN6/H20. 0,1 % TFA.
Polystyrenová stacionární fáze byla připravena a vyhodnocena pro separaci syntetických peptidových směsí a trypsinové štěpení lidského sérového albuminu (HAS) ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Chromatografický výkon PMP kolon pro peptidové směsi je vynikající z hlediska účinnosti separace a rozlišení. Zlepšená separační výkonnost PMP kolon je způsobena řadou důvodů, jako je velikost částic a řízená syntéza částic zadní fáze kolony a vysoká velikost pórů v zadní koloně separace na koloně. tlak při vysokých průtocích je další výhodou této stacionární fáze. PMP kolony vykazují dobrou reprodukovatelnost a lze je použít pro analýzu peptidových směsí a trypsinové štěpení různých proteinů. Tuto kolonu hodláme použít pro separaci přírodních produktů, bioaktivních látek z léčivých rostlin a extraktů hub v kapalinové chromatografii. V budoucnu budou PMP kolony hodnoceny i pro separaci proteinů a monoklonových protilátek.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptide Separation Systems by Reverse Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. Vylepšené aktivní peptidy určené pro léčbu infekčních onemocnění. Biotechnologie. Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drog discovery.15 (1-2) today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.101009 (2009.101009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatografie.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Pokročilá kapalinová chromatografie-hmotnostní spektrometrie umožňuje začlenění široce cílené metabolomiky a proteomiky.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Role UHPLC ve vývoji léků.J.září Sci. 30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Základní a praktické aspekty ultravysokotlaké kapalinové chromatografie pro rychlé separace.J.září Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplikace ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie při vývoji léčiv.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolitické makroporézní hydrogely připravené z emulzí olej-ve-vodě s vysokou vnitřní fází pro účinnou purifikaci enterovirů.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Role kapalinové chromatografie v proteomice.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Vznikající trendy v separacích terapeutických peptidů a proteinů kapalinovou chromatografií na reverzní fázi: teorie a aplikace.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivová, P., Daly, AE & Gebler, JC Dvourozměrná separace peptidů pomocí systému RP-RP-HPLC s použitím různých hodnot pH v prvním a druhém separačním rozměru.J.Sci. 28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Byly zkoumány charakteristiky přenosu hmoty a kinetická výkonnost vysoce účinných chromatografických kolon naplněných plně a povrchově porézními částicemi C18 sub-2 μm. J.září Sci. 43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Nedávné trendy a analytické výzvy v izolaci, identifikaci a validaci rostlinných bioaktivních peptidů. anus.biologický řitní otvor.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-00216-018-0852-018).
Mueller, JB et al. Proteomická krajina království života. Příroda 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Následné zpracování terapeutických peptidů preparativní kapalinovou chromatografií. Molekula (Basilej, Švýcarsko) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatografie a její aplikace na biopolymery.J.Chromatografie.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligandy pro proteinovou chromatografii ve smíšeném režimu: princip, charakterizace a design.J.Biotechnology. 144(1), 3-11 (2009).