Mae caffael a dosbarthu maetholion yn integreiddio chwilota pryfed a nodweddion hanes bywyd.I wneud iawn am ddiffygion mewn maetholion penodol ar wahanol gyfnodau bywyd, gall pryfed gael y maetholion hyn trwy fwydo atodol, er enghraifft, trwy fwydo ar secretions fertebrat mewn proses a elwir yn puddles.The mosgito Anopheles arabiani yn ymddangos i fod yn ddiffyg maeth, mae'r astudiaeth hon yn gofyn am ddiffyg maeth ac, felly, roedd angen i'r astudiaeth fetaboledd ac atgynyrchiadau.mae cynnwrf arabiensis ar wrin buwch ar gyfer caffael maetholion yn gwella nodweddion hanes bywyd.
Gwnewch yn siŵr ei fod yn safe.arabiensis ei ddenu i aroglau o wrin buwch ffres, 24-awr, 72-awr, a 168-awr oed, a gwesteiwr-chwilio a bwydo gwaed (48-awr pryd ôl-gwaed) benywod eu mesur mewn olfactometer Y-tiwb, a benywod beichiog eu hasesu ar gyfer cyfansawdd silio wrin prawf a'r holl cemegau bioffisiolegol a ddefnyddiwyd. pedwar dosbarth oedran.Gwerthuswyd cymysgeddau synthetig o gyfansoddion bioactif mewn Y-tiwb a threialon maes.I ymchwilio i wrin buwch a'i brif wrea cyfansawdd sy'n cynnwys nitrogen fel dietau atodol posibl ar gyfer fectorau malaria, mesurwyd paramedrau bwydo a nodweddion hanes bywyd. Mesurwyd cyfran y mosgitos benywaidd a faint o wrin buwch ac wrea a gafodd eu hamsugno, eu hasesu, eu hasesu, eu clymu a'u hamsugno ar gyfer goroesiad.
Seek for the host's blood and nourishment.In laboratory and field studies, Arabs were drawn to the natural and synthetic scent of fresh and aged cow urine.Pregnant females were indifferent to cow urine responses at spawning sites.Host-seeking and blood-sucking females actively absorb cow urine and urea and allocate these resources according to life-history trade-offs as a function of physiological state for flight, survival, or reproduction.
Anopheles arabinis caffael a dosbarthu wrin buwch ar gyfer gwell nodweddion hanes bywyd.
Mae caffael a dosbarthu maetholion yn integreiddio porthiant pryfed a nodweddion hanes bywyd [1,2,3].Mae pryfed yn gallu dewis a chaffael bwyd a pherfformio bwydo cydadferol yn seiliedig ar argaeledd bwyd a gofynion maetholion [1, 3]. bwydo atodol, megis ar fwd, carthion amrywiol a secretions o fertebratau, a carrion, proses a elwir yn byllau [2].Er bod amrywiaeth o rywogaethau glöyn byw a gwyfynod yn cael eu disgrifio'n bennaf, mae tyllau dyfrio hefyd yn digwydd mewn gorchmynion pryfed eraill, a gall denu a bwydo ar y mathau hyn o adnoddau gael effeithiau sylweddol ar iechyd a bywyd arall - ei hanes, ei hanes, ei hun. Mae Anopheles gambiae sensu lato (sl) yn dod i'r amlwg fel oedolyn 'diffyg maeth' [8], felly gall dyfrio chwarae rhan bwysig yn ei nodweddion hanes bywyd, ond hyd yma mae'r ymddygiad hwn wedi'i esgeuluso.
Mae cymeriant nitrogen mewn mosgitos Anopheles benywaidd sy'n oedolion yn gyfyngedig oherwydd y cronfeydd calorig isel a gludir o'r cyfnod larfa a defnydd aneffeithlon o flawd gwaed [9]. Mae Ann.gambiae benywaidd fel arfer yn gwneud iawn am hyn trwy ychwanegu at brydau gwaed atodol [10, 11], gan felly roi mwy o bobl mewn perygl o ddal y clefyd a rhoi mwy o risg o ddefnyddio mosgitos ychwanegol o borthiant mosgitos. carthion asgwrn cefn i gaffael cyfansoddion nitrogenaidd sy'n gwella addasu a maneuverability hedfan, fel y dangosir gan bryfed eraill [2]. Mae wrin gwartheg yn adnodd sy'n gyfoethog mewn cyfansoddion nitrogenaidd, gyda wrea yn cyfrif am 50-95% o gyfanswm y nitrogen mewn wrin ffres [15, 16]. Wrth i wrin buwch heneiddio, mae micro-organebau'n defnyddio'r adnoddau hyn i leihau cymhlethdod cyfansoddion nitrogenaidd o fewn 24 awr [15]. ve [15], a all fod yn fenyw Mae Ann.arabiensis yn cael ei denu'n ffafriol i wrin 24 awr neu lai [13, 14].
Yn yr astudiaeth hon, edrychwyd am Ans gwesteiwr a gwaed bwydo.Yn ystod ei gylchred gonadotropin cyntaf, aseswyd arabiensis ar gyfer caffael cyfansoddion nitrogenaidd, gan gynnwys wrea, trwy gymysgu wrin.Next, cynhaliwyd cyfres o arbrofion i asesu sut mae mosgitos benywaidd yn dyrannu'r adnodd maetholion posibl hwn ar gyfer gwell goroesiad, atgenhedlu a chwilota pellach. Wedi'u bwydo An.Yn eu chwiliad am yr adnodd maethol posibl hwn, darganfu arabiensis gydberthynas cemegol y tu ôl i'r atyniad gwahaniaethol a welwyd. Gwerthuswyd cymysgeddau arogleuon synthetig o gyfansoddion organig anweddol (VOCs) a nodwyd mewn wrin oedran 24 awr o dan amodau maes, gan ymestyn y canlyniadau a gafwyd o dan amodau labordy a dangos effaith aroglau wrin buchol ar wahanol gyflyrau ffisiolegol ffisiolegol.Atyniad mosgito.Mae'r canlyniadau a gafwyd yn cadarnhau bod An.mae arabiensis yn caffael ac yn dosbarthu cyfansoddion nitrogenaidd a geir mewn wrin fertebrataidd i ddylanwadu ar nodweddion hanes bywyd. Trafodir y canlyniadau hyn yng nghyd-destun canlyniadau epidemiolegol posibl a sut y gellir eu defnyddio ar gyfer gwyliadwriaeth a rheolaeth fector.
Anopheles arabicans (Dongola straen) yn cael eu cynnal ar 25 ± 2 ° C, 65 ± 5% RH a 12:12 h golau: tywyll cycle.Larvae eu magu mewn hambyrddau plastig (20 cm × 18 cm × 7 cm) llenwi â dŵr distyll a bwydo Tetramin® fishkeups bwyd (Tetramin® Wenkeups bwyd 3,10 ml). Hertila, Åstorp, SE) ac yna trosglwyddo i gewyll Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Gwyddoniaeth, Taichung, Taiwan) i ganiatáu i oedolion ddod i'r amlwg. Oedolion yn cael eu darparu gyda datrysiad swcros 10% ad libitum tan 4 diwrnod ôl-ymddangosiad (dpe), a phryd hynny gwesteiwr-chwilio yn arbrawf gyda'r nos cyn arbrofion yn cael eu cynnig ar unwaith dros ddeiet i'r d?r. a ddisgrifir below.Benywod a ddefnyddiwyd ar gyfer arbrofion tiwb hedfan yn newynu am ddim ond 4-6 awr gyda dŵr ad libitum.I baratoi gwaed-sugno mosgitos ar gyfer bio-asesiadau dilynol, 4 dpe benywod yn cael eu darparu gyda gwaed defaid defibrotic (Håtunalab, Bro, SE) gan ddefnyddio system bwydo bilen (Gweithdai Darganfod Hemotek, Accrington, a ddarparwyd yn uniongyrchol congestion unigol fel y disgrifiwyd Accrington, UK F, a throsglwyddwyd yn uniongyrchol i'r dietau benywaidd a congested unigol). 10% swcros ad libitum am 3 diwrnod cyn yr arbrofion a ddisgrifir isod. Defnyddiwyd y benywod olaf ar gyfer biobrofion tiwb hedfan a'u trosglwyddo i'r labordy, ac yna roeddent wedi distyllu dŵr ad libitum am 4-6 awr cyn yr arbrawf.
Defnyddiwyd profion bwydo i fesur defnydd wrin a wrea mewn oedolion An.Arab female.Host-seeking a gwaed-borthi benywod yn cael eu darparu diet yn cynnwys 1% gwanhau wrin buwch ffres ac yn oed, crynodiadau amrywiol o wrea, a dau reolaethau (10% swcros a dŵr) ar gyfer 48 h. ma-Aldrich, Stockholm, SE) ei ychwanegu at y diet a'i gyflenwi mewn matrics 4 × 4 mewn tiwbiau microcentrifuge 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, UDA; Ffigur 1A) Llenwch i'r ymyl (~300 µl). , Ostermundigen, CH;Ffigur 1A) mewn tywyllwch llwyr ar 25 ± 2 cm ° C a 65 ± 5% lleithder cymharol. Ailadroddwyd yr arbrofion hyn 5 i 10 gwaith.Ar ôl dod i gysylltiad â diet, gosodwyd mosgitos ar -20 ° C tan ddadansoddiad pellach.
Chwiliwch am wrin buchol ac wrea amsugno gan y gwesteiwr a gwaed-sugno benywaidd benywaidd Anopheles arabianus.Yn bwydo treial (A), mosgitos benywaidd yn cael eu darparu gyda diet yn cynnwys wrin buwch ffres ac yn oed, crynodiadau amrywiol o wrea, swcros (10%), a dŵr distyll (H2O).Host-chwilio gwesteiwr (B) ac amsugno gwaed benywaidd-fwydo eraill na Csee. s amsugno wrin buwch 72-awr yn llai na 168-awr wrin buwch (B).Cynrychiolir y cynnwys nitrogen cymedrig cyfanswm (± gwyriad safonol) o wrin yn y inset.Host-ceisio (D, F) a gwaed-sugno (E, G) benywod yn cymryd wrea mewn modd dos-ddibynnol. Cymedrig mewnanadlu cyfrolau gwahanol i'w gilydd (D VA) enwau gwahanol i'w gilydd (D VA), llythyrau wedi'u hanadlu yn wahanol i bob un arall dadansoddiad; p < 0.05).Barrau gwall yn cynrychioli cyfeiliornad safonol y cymedr (BE).Mae'r llinell doriad syth yn cynrychioli'r llinell atchweliad llinol log (F, G)
I ryddhau bwyd wedi'i amsugno, gosodwyd mosgitos yn unigol i mewn i diwbiau microcentrifuge 1.5 ml yn cynnwys 230 µl o ddŵr distyll ac amharwyd ar y meinwe gan ddefnyddio pestl tafladwy a modur diwifr (VWR International, Lund, SE), ac yna centrifugation ar 10 krpm am 10 munud. yn gyfoethog) ac amsugnedd (λ620) yn cael ei bennu gan ddefnyddio darllenydd microplate seiliedig ar sbectroffotomedr (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Fel arall, cafodd y mosgitos eu malu mewn 1 ml o ddŵr distyll, a throsglwyddwyd 900 µl ohono i cuvette ar gyfer dadansoddiad sbectroffotometrig, λsta, λsta 620, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta, λsta. cymeriant dietegol, paratowyd cromlin safonol trwy wanhau cyfresol i gynhyrchu 0.2 µl i 2.4 µl o 1 mg ml-1 cyanid xylene.
Dadansoddwyd data cyfaint gan ddefnyddio dadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) wedi'i ddilyn gan gymariaethau parwise post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, UD, 1989-2007). Disgrifiodd dadansoddiadau atchweliad llinol gymeriant wrea sy'n dibynnu ar grynodiad a chymharwyd ymatebion rhwng gwesteiwr sy'n chwilio am waed a sugno gwaed Prisio. , San Diego, CA, UDA).
Cafodd tua 20 µl o samplau wrin o bob grŵp oedran eu rhwymo ar Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 rhwyll, Sigma Aldrich) a'u hamgáu mewn capsiwlau tun (8 mm × 5 mm). Rhoddwyd capsiwlau i mewn i siambr hylosgi dadansoddwr CHNS/O000 Fisher Fisher, F, Slashmo00 (F, Slashmo00, Pysgotwr 2000000000000000, F. cynnwys mewn wrin ffres a hen yn unol â phrotocol y gwneuthurwr. Cafodd cyfanswm nitrogen (g N l-1) ei feintioli ar sail crynodiadau wrea hysbys a ddefnyddiwyd fel safon.
Er mwyn asesu effaith diet ar oroesiad benywaidd sy'n ceisio gwesteiwr a gwaed-sugno, gosodwyd mosgitos yn unigol mewn prydau Petri mawr (12 cm mewn diamedr a 6 cm o uchder; Semadeni) gyda thwll wedi'i orchuddio â rhwyll yn y caead (3 cm mewn diamedr) gyda'r awyru a'r cyflenwad bwyd. Darparwyd diet yn uniongyrchol ar ôl 4 dpe ac roedd yn cynnwys 1% wedi'i wanhau â chrynodiad o urc ffres, pedwar wedi'i wanhau, a 1% o wra wedi'i reoli, a 1% wedi'i wanhau o wra, a 1% wedi'i reoli o wra, a 1% wedi'i wanhau o wra, a 1% o wra wedi'i wanhau, a 1% wedi'i reoli o wra, a 1% wedi'i wanhau. rhosyn a water.Pob diet ei bibellu ar tampon deintyddol (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) fewnosod i mewn i chwistrell 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), y plunger tynnu, a gosod ar ben dysgl petri (ffigur 1).1A).Newid eich diet bob dydd. ed hyd nes y bu farw'r mosgito diwethaf (n = 40 fesul triniaeth). Dadansoddwyd goroesiad mosgitos a borthwyd ar ddietau amrywiol yn ystadegol gan ddefnyddio cromliniau goroesi Kaplan-Meyer a phrofion gradd log i gymharu cymariaethau dosbarthiad goroesi rhwng diet (Ystadegau SPSS IBM 24.0.0.0).
Melin hedfan mosgito wedi'i seilio ar Attisano et al. magnetau ium 9 cm oddi wrth ei gilydd. Roedd tiwb llorweddol wedi'i wneud o'r un deunydd (6.5 cm L) yn haneru'r tiwb fertigol i ffurfio braich glymu a braich a oedd yn cario darn bach o ffoil alwminiwm fel signal sy'n tarfu ar olau.
Rhoddwyd y diet uchod i fenywod â newyn 24 awr am 30 munud cyn eu hatal. Yna cafodd mosgitos benywaidd wedi'u bwydo'n llawn eu hanestheteiddio'n unigol ar rew am 2-3 munud a'u cysylltu â phinnau pryfed gyda chŵyr gwenyn (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) ac yna cofnodwyd y tiwbiau Millvo yn llorweddol ac yna'n clymu'r tiwbiau'n llorweddol. cofnodwr data pwrpasol, yna ei storio a'i arddangos gan ddefnyddio meddalwedd PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Gosodwyd y felin hedfan mewn ystafell a reolir gan yr hinsawdd (12 h:12 h, golau: tywyll, 25 ± 2 ° C, 65 ± 5% RH).
Er mwyn delweddu patrwm gweithgaredd hedfan, cyfrifwyd cyfanswm y pellter a hedfanwyd (m) a chyfanswm y gweithgareddau hedfan olynol fesul awr dros gyfnod o 24 awr. Yn ogystal, cymharwyd y pellteroedd cyfartalog a hedfanwyd gan fenywod unigol ar draws triniaethau a'u dadansoddi gan ddefnyddio ANOVA unffordd a dadansoddiad post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, Sefydliad SAS Inc.), tra bod triniaeth gyfartalog annibynnol yn ffactor amrywiol, yn cael ei ystyried yn ffactor cyfartaleddol dibynnol. cyfrifir nifer y rowndiau mewn cynyddrannau 10 munud.
Er mwyn asesu effaith diet ar berfformiad atgenhedlu An.arabiensis, trosglwyddwyd chwe benyw (4 dpe) yn uniongyrchol i gewyll Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) ar ôl casglu gwaed ac yna darparwyd y diet arbrofol ar gyfer 48 h fel y disgrifir uchod. Yna tynnwyd dietau a darparwyd cwpanau silio (30 ml; Nolato Hertila 4 yn newid bob dydd) o ddŵr disbyddu 4 bob dydd ar gyfer newid 30 ml ar gyfer y trydydd dydd ar gyfer newid Nolato Hertila) yn cael eu llenwi â dŵr dislled 4 bob dydd. 24 hours.Repeat bob regimen deietegol 20-50 times.Eggs eu cyfrif a'u cofnodi ar gyfer pob cawell arbrofol.Subsamples o wyau yn cael eu defnyddio i asesu maint cymedrig ac amrywiad hyd wyau unigol (n ≥ 200 fesul diet) gan ddefnyddio microsgop Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar a 2D);Leica Microsystems Ltd., DE).Cadwwyd yr wyau sy'n weddill mewn ystafell a reolir gan yr hinsawdd o dan amodau magu safonol am 24 h, a mesurwyd is-sampl o larfa instar 1af a ddaeth i'r amlwg yn ddiweddar (n ≥ 200 fesul diet), fel y disgrifir uchod. Cymharwyd nifer yr wyau a maint wyau a larfa rhwng triniaethau a defnyddio dadansoddiad un-ffordd ANO, SAMP.0, ANO, SAV.0 Inc Tukey a hoc. ).
Casglwyd anweddolion Headspace o wrin ffres (1 awr ar ôl samplu), 24 awr, 72 awr a 168 awr o wrin oed o samplau a gasglwyd o wartheg Zebu, rasys Arsi.Er hwylustod, casglwyd samplau wrin yn gynnar yn y bore tra bod y buchod yn dal yn yr ysgubor.Casglwyd samplau wrin o 10 unigolyn a 100-200 o fagiau polyppit yr un yn cael eu trosglwyddo i frechdanau coesgoch unigol (100-200 ml o fagiau coffraid unigol, trosglwyddwyd samplau o frech goch unigol i ml. teprodukte GmbH and Co., Minden, DE) mewn 3 l polyamid gyda chaead Mewn plastig finyl clorid drums.Headspace volatiles o bob sampl wrin buchol eu casglu naill ai'n uniongyrchol (ffres) neu ar ôl aeddfedu ar dymheredd ystafell am 24 h, 72 h a 168 h, hy roedd pob sampl wrin yn gynrychioliadol o bob grŵp oedran.
Ar gyfer casglu anweddolion gofod pen, defnyddiwyd system dolen gaeedig i gylchredeg llif nwy carbon-hidlo actifedig (100 ml min-1) trwy fag polyamid i'r golofn arsugniad am 2.5 h trwy ddefnyddio pwmp gwactod diaffram (KNF Neuberger, Freiburg, DE). 3 mm id) sy'n cynnwys 35 mg o Porapak Q (rhwyll 50/80; Waters Associates, Aberdaugleddau, MA, Unol Daleithiau) rhwng gwlân gwydr plugs.Before defnydd, y golofn ei fflysio gyda 1 ml redistilled n-hexane (Merck, Darmstadt, DE) a 1 ml pentane (99.0% volent GCluds volts a solves solves grade4, Purples Solent 1 ). μl o bentan.Cafodd casgliadau gofod pen eu cronni ac yna eu storio ar -20°C nes eu defnyddio ar gyfer dadansoddiad pellach.
Dadansoddwyd ymatebion ymddygiadol o echdynion cyfnewidiol An.Headspace sy'n ceisio gwesteiwr a bwyta gwaed a gasglwyd o wrin ffres, 24-h, 72-h, a 168-h-oed ar gyfer detholiadau anweddol o mosgitos Arabidopsis gan ddefnyddio olfactometer tiwb gwydr syth [18]. Cynhaliwyd yr arbrofion yn ystod cyfnod brig ZT, 13-19-A. olfactometer tiwb gwydr (80 cm × 9.5 cm id) ei oleuo gyda 3 ± 1 lx o olau coch o above.Charcoal hidlo a lleithiwyd llif aer (25 ± 2 ° C, 65 ± 2% lleithder cymharol) pasio'r bioassay ar 30 cm s-1 lx o olau coch, llif aer wedi'i hidlo a lleithder above. dispenser tampon ental (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Deintyddol AB), atal o coil 5 cm ar ddiwedd windward y olfactometer, gyda newidiadau ysgogydd bob 5 minutes.For dadansoddiad, 10 μl pob dyfyniad headspace, gwanhau 1:10, yn cael ei ddefnyddio fel stimulus.An swm cyfartal o control-Inputing blood-recording were used as a number of control-inquiries in-setting-in-cwestiation unigol yn rhyddhau gwaed pentane. cewyll 2-3 awr cyn dechrau'r experiment.The cawell rhyddhau ei osod ar ochr i'r gwynt y olfactometer, a'r mosgitos yn caniatáu i acclimate am 1 munud, ac yna y falf glöyn byw y cawell ei agor i release.Attraction i driniaeth neu reolaeth ei ddadansoddi fel y gyfran o mosgitos a ddaeth i gysylltiad â'r ffynhonnell o fewn 5 munud o amser rhyddhau a volta 3 lleiafswm o amserau rheoli ac yn cael eu hechdynnyn o leiaf rethilep rheoli. effeithiau unrhyw un diwrnod, profwyd yr un nifer o driniaethau a rheolaethau ar bob diwrnod arbrofol. Dadansoddwyd ymatebion gan setiau gofod Ans.Arabic yn erbyn headspace gwesteiwr a gwaed-bwyd gan ddefnyddio atchweliad logistaidd enwol ac yna cymariaethau pâr ar gyfer cymarebau od (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Dadansoddwyd detholiadau silio An o wrin buwch ffres ac oedrannus mewn cewyll Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Roedd cwpanau plastig (30 ml; Nolato Hertila) wedi'u llenwi â 20 ml o ddŵr distyll yn darparu'r swbstrad silio ac fe'u gosodwyd mewn corneli gyferbyn â'r cwpanau 1 μ. l pob echdynnyn gofod pen ar wanediad o 1:10.Defnyddiwyd swm cyfartal o bentan i addasu'r cwpanau rheoli. Cyfnewidiwyd triniaeth a chwpanau rheoli rhwng pob arbrawf i reoli effeithiau safle. Rhyddhawyd deg o fenywod a gafodd eu bwydo â gwaed i gewyll arbrofol yn ZT 9-11 a chyfrifwyd wyau mewn cwpanau 24 awr yn ddiweddarach. Y fformiwla ar gyfer cyfrifo nifer yr wyau a dodwywyd yn y cwpanau (rheoli nifer y cwpanau a dodwywyd yn y mynegai: rheoli nifer yr wyau a dodwywyd yn y cwpan) cyfanswm nifer yr wyau a dodwywyd). Ailadroddwyd pob triniaeth 8 gwaith.
Perfformiwyd dadansoddiad canfod patrwm antena cromatograffig nwy ac electron (GC-EAD) o An.arabiensis benywaidd fel y disgrifiwyd yn flaenorol [20]. Yn gryno, gwahanwyd darnau cyfnewidiol headspace ffres gan ddefnyddio Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, UD) gyda cholofn HP-5 (30 m × 0.25 mm id, ffilm Agilent μent, μent, trwch μm).a heneiddio wrin.Hydrogen yn cael ei ddefnyddio fel y cyfnod symudol gyda chyfradd llif llinol gyfartalog o 45 cm s-1. Chwistrellwyd pob sampl (2 μl) am 30 eiliad mewn modd hollt gyda thymheredd mewnfa o 225 °C. Rhaglennwyd tymheredd y popty GC o 35 ° C (daliad 3 munud) i 300 ° C (daliad hollt GC) i 300 °C ar gyfer elifiant - 11 °C. Ychwanegwyd 4 psi o nitrogen a'i rannu 1:1 mewn croesiad cyfaint marw isel Gerstel 3D/2 (Gerstel, Mülheim, DE) rhwng y synhwyrydd ionization fflam a'r capilari elifiant EAD.The GC ar gyfer EAD ei basio trwy linell drosglwyddo Gerstel ODP-2, sy'n olrhain tymheredd y popty GC ynghyd â 5 ° C, i mewn i tiwb gwydr wedi'i humidio, mm-8, i mewn i tiwb gwydr wedi'i gymysgu â humid-8 (mm-10 cm). .5 l mun -1). Gosodwyd yr antena 0.5 cm o allfa'r tiwb. Roedd pob mosgito unigol yn cyfrif am un atgynhyrchiad, ac ar gyfer mosgitos oedd yn chwilio am westeion, perfformiwyd o leiaf dri atgynhyrchiad ar samplau wrin o bob oed.
Adnabod cyfansoddion bioactif mewn casgliadau gofod pen o wrin buchol ffres ac oedrannus gan ddefnyddio GC cyfun a sbectromedr màs (GC-MS; 6890 GC a 5975 MS; Agilent Technologies) i ennyn ymatebion antena mewn dadansoddiad GC-EAD, gan weithredu yn y modd ïoneiddiad trawiad electronau yn 70 eV. Roedd gan y GCMSs UI cap-500 × 2000 capanog silicad (HP-500m2) wedi'i gyfarparu â cholofn UI silica wedi'i gorchuddio â UI-505m. diamedr mewnol mm, trwch ffilm 0.25 μm) gan ddefnyddio heliwm fel y cyfnod symudol gyda chyfradd llif llinol gyfartalog o 35 cm s-1.A 2 μl sampl ei chwistrellu gan ddefnyddio'r un gosodiadau chwistrellwr a thymheredd popty ag ar gyfer y GC-EAD analysis.Compounds eu nodi yn seiliedig ar eu hamser cadw (mynegai Kovát) a sbectra màs a chadarnhawyd llyfrgell NIST1 dilys gan y llyfrgell sbectra arferiad dilyswyd 4 i'r NIST1 dilyswyd y llyfrgell sbectra a dilyswyd 4 i'r llyfrgell NIST1 dilys. safonau (Ffeil Ychwanegol 1: Tabl S2). Ar gyfer meintioli, chwistrellwyd asetad heptyl (10 ng, purdeb cemegol 99.8%, Aldrich) fel safon allanol.
Gwerthuso effeithiolrwydd cymysgedd arogleuon synthetig sy'n cynnwys cyfansoddion bioactif a nodwyd mewn wrin ffres ac oedrannus i ddenu Ans.arabiensis sy'n ceisio gwesteiwr ac yn sugno gwaed, gan ddefnyddio'r un olfactometer a phrotocol ag uchod. Fe ddynwaredodd cymysgeddau synthetig gyfansoddiad a chyfrannau cyfansoddion mewn darnau cyfnewidiol gofod pen cymysg o ffres, 24-awr, ager, 478 awr, a 478 awr. (Ffigur 5D-G; Ffeil Ychwanegol 1: Tabl S2).Ar gyfer dadansoddiad, defnyddiwch 10 μl o wanediad 1:100 o'r cymysgedd llawn synthetig, gyda chyfradd rhyddhau cyffredinol yn amrywio o tua 140-2400 ng h-1, ar gyfer asesu atyniad i letyol a gwaed-sugno mosgitos.Wedyn, mae'r prawf yn cael ei wneud cymysgeddau o gyfuniadau cyflawn o waed ac atebion subtractive gwared ar cymysgeddau unigol cyflawn o waed a gwaed-sugno. -fed Ans.Arab vs synthetig a chymysgeddau tynnu eu dadansoddi gan ddefnyddio atchweliad logistaidd enwol ac yna cymariaethau pairwise ar gyfer cymarebau od (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Er mwyn asesu a allai wrin buwch fod yn gynefin cynhaliol ar gyfer mosgitos malaria, troeth buwch ffres a hen, a gasglwyd fel y disgrifir uchod, a gosodwyd dŵr mewn bwcedi rhwyllog 3 l (100 ml) a'u gosod mewn trapiau abwyd lletyol.(Fersiwn BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE).Deg trapiau gosod 50 m ar wahân mewn porfa, 400 m o gymuned pentref (Silay, Ethiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´E) a dim gwartheg, ar diroedd bridio parhaol a phentrefi presenoldeb.Five trapiau lletyol eu gwresogi yn gosod trapiau un noson wedi'i gynhesu i'w gwresogi pump. ly am gyfanswm o bum noson. Cymharwyd niferoedd mosgitos a ddaliwyd mewn trapiau a abwyd ag wrin o wahanol oedrannau gan ddefnyddio atchweliad logistaidd gyda dosbarthiad beta binomaidd (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Mewn pentref malaria-endemig ger tref Maki, rhanbarth Oromia, Ethiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Ffigur 6A). Cynhaliwyd yr astudiaeth rhwng canol mis Awst a chanol mis Medi cyn y chwistrellu gweddilliol dan do blynyddol, ynghyd â pharau hir wedi'u lleoli ar tua 20% o'r tymor glawog ar ddiwedd y tymor glawog. pentref eu dewis ar gyfer yr astudiaeth (Ffig. 6A).Y meini prawf a ddefnyddiwyd i ddewis y tai oedd: dim anifeiliaid yn cael eu caniatáu yn y tŷ, dim coginio dan do (tynnu coed tân neu siarcol) yn cael ei ganiatáu (o leiaf yn ystod y cyfnod prawf), a thai gydag uchafswm o ddau o drigolion, yn cysgu mewn pryfleiddiad.o dan y mosgito trin net.Ethical cymeradwyaeth wedi'i roi gan y Bwrdd Adolygu Moeseg Ymchwil Sefydliadol (IRB/022/2016) y Gyfadran y Gwyddorau Naturiol (CNS-IRB), Prifysgol Addis Ababa, yn unol â'r canllawiau a sefydlwyd gan y Gymdeithas Feddygol y Byd Datganiad Helsinki.Consent gan bob pennaeth cartref ei gael gyda chymorth staff gweinyddol warde gyfan ar lefel leol 'yn cymeradwyo'r ardal. Roedd y dyluniad arbrofol yn dilyn dyluniad sgwâr Lladin 2 × 2, lle neilltuwyd cymysgeddau synthetig a rheolaethau i dai pâr ar y noson gyntaf a'u cyfnewid rhwng tai ar y noson arbrofol nesaf. Ailadroddwyd y broses hon ddeg gwaith.
Mae cymysgedd synthetig sy'n cynnwys chwe chyfansoddion bioactif ei ddiddymu yn heptane (97.0% toddyddion gradd GC, Sigma Aldrich) a'i ryddhau ar 140 ng h-1 gan ddefnyddio dosbarthwr wick cotwm [20].The dispenser wick caniatáu holl gyfansoddion i gael eu rhyddhau mewn cyfrannau cyson drwy gydol yr arbrawf 12 awr.Heptane ei ddefnyddio fel control.The man cychwyn rheoli Clefydau (DCC) ataliwyd y trobwynt nesaf i'r Ganolfan Rheoli ac atal golau W (DCC). Hock Company, Gainesville, FL, Unol Daleithiau; Ffigur 6A).Cafodd y trapiau eu hongian 0.8 - 1 m uwchben y ddaear, ger gwaelod y gwely, a chysgodd gwirfoddolwr o dan rwyd mosgito heb ei drin a'i weithredu rhwng 18:00 a 06:30. Cafodd mosgitos a ddaliwyd gan ryw a statws ffisiolegol (dadansoddiad polymer heb eu bwydo, eu bwydo, a lled-preg 2) eu dal yn ôl rhyw a statws ffisiolegol (dadansoddiad polymerau heb eu bwydo, wedi'u bwydo, a lled-preg2) yn dilyn hynny adnabod y rhywogaeth a adnabuwyd yn forffolegol fel A. gambiae sl.Aelodau o'r cymhleth [23] Yn yr astudiaeth maes, dadansoddwyd trapio tai pâr gan ddefnyddio model ffit logistaidd enwol, lle'r atyniad oedd y newidyn dibynnol a'r driniaeth (cymysgedd synthetig vs rheolaeth) oedd yr effaith sefydlog (JMP® 14.0.0. Sefydliad SAS Inc.).Yma, rydym yn adrodd ar y χ2 a'r gwerthoedd-p o'r prawf cymhareb tebygolrwydd.
Gwerthuswch a yw'n safe.arabiensis yn gallu cael wrin, ei brif ffynhonnell nitrogen, wrea, trwy fwydo uniongyrchol, o fewn 48 h o'i weinyddu am 4 diwrnod ar ôl (dpe) treialon bwydo benywaidd sy'n ceisio gwesteiwr a bwydo gwaed (Ffig. 1A).Amsugnodd y merched sy'n ceisio gwesteiwr a sugno gwaed lawer mwy o swcros (Ffig. 4, 2). 1 ac F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, yn y drefn honno; Ffig. 1B,C). Ymhellach, roedd merched oedd yn ceisio lletywr yn bwyta llai mewn wrin ar 72 awr o'i gymharu ag wrin ar 168 awr (Ffig. 1B). Pan gynigiwyd diet yn cynnwys wrea iddynt, roedd cryn dipyn yn fwy o fenywod oedd yn chwilio am wrea o'u cymharu â 6 m. roedd hyn mewn cyferbyniad ag ymateb benywod a borthwyd yn y gwaed, a oedd yn nodweddiadol yn amsugno llawer mwy o ddietau sy'n cynnwys wrea na dŵr, er ei fod yn sylweddol llai na 10% o swcros (F(10,75); 1E). Ymhellach, wrth gymharu rhwng y ddau gyflwr ffisiolegol, roedd benywod fflebotomaidd yn amsugno mwy o wrea na merched oedd yn chwilio am letywyr ar y crynodiadau isaf, ac roedd y benywod hyn yn amsugno symiau tebyg o wrea mewn crynodiadau uwch (F(1,953) = 78.82, p < 0.0001;Ffig. 1F, G).Er ei bod yn ymddangos bod gan gymeriant o ddeiet sy'n cynnwys wrea werthoedd gorau posibl (Ffig. 1D,E), roedd menywod yn y ddau gyflwr ffisiolegol yn gallu modiwleiddio faint o wrea a amsugnwyd dros yr ystod gyfan o grynodiadau wrea mewn modd log-llinol (Ffig. 1F, G).Yn yr un modd, mae'n ymddangos bod mosgitos yn rheoli eu cymeriant nitrogen trwy reoleiddio faint o wrin sy'n cael ei amsugno, gan fod faint o nitrogen mewn wrin yn cael ei adlewyrchu yn y swm sy'n cael ei amsugno (mewnosodiadau Ffigur 1B, C a B).
Er mwyn asesu effeithiau wrin ac wrea ar oroesiad mosgito ceisio gwesteiwr a sugno gwaed, cafodd benywod eu bwydo â wrin o bob un o'r pedair oed (ffres, 24 h, 72 h, a 168 h ar ôl dyddodiad) ac ystod o grynodiadau wrea, yn ogystal â dŵr distyll a 10% swcros gweler bod dadansoddiad goroesi arwyddocaol yn dangos bod gan y dadansoddiad goroesiad benywaidd effaith sylweddol ar ddeiet benywaidd. (wrin: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; wrea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Ffig. 2B, C) a benywod sy'n cael eu bwydo â gwaed (wrin: χ2 = 93.0, df χ2 = 93.0, d 0 = 2 = 93.0, d 1 = χ2 = 93.0, d 1 = χ = 93.0, df χ = 93.0, d 1 = χ .9, df = 5, p < 0.0001; Ffigur 2D,E).Ym mhob arbrawf, roedd gan fenywod a fwydodd ddiet o wrin, wrea, a dŵr gyfraddau goroesi sylweddol is o gymharu â benywod a borthwyd ar ddeiet swcros (Ffigur 2B-E). Merched a oedd yn chwilio am letywyr yn bwydo wrin ffres a hen yn dangos cyfraddau goroesi gwahanol, gyda'r rhai a oedd yn bwydo ar ddiet swcros (Ffigur 2B-E). gallu (Ffig. 2B). Ymhellach, goroesodd merched oedd yn chwilio am letywyr a fwydodd wrea 135 mM yn hirach na rheolyddion dŵr (p < 0.04) (Ffig.2C). O gymharu â dŵr, roedd menywod a gafodd eu bwydo ag wrin ffres ac wrin 24 awr wedi goroesi'n hirach (p = 0.001 a p = 0.012, yn y drefn honno; Ffigur 2D), tra bod menywod a gafodd eu bwydo ag wrin 72 awr wedi goroesi'n hirach na'r rhai a gafodd eu bwydo â wrin ffres byr benywaidd a 24 awr oed wrin 0.00, p. < 0. < 0. Wedi bwydo wrea 135 mM, fe wnaeth benywod wedi'u bwydo â gwaed oroesi'n hirach na phob crynodiad arall o wrea a dŵr (p < 0.013; Ffigur 2E).
Goroesiad o letyol a gwaed-sugno benywaidd benywaidd Anopheles arabinis bwydo ar wrin buwch ac wrea.Yn y bioassay (A), mosgitos benywaidd yn darparu diet yn cynnwys wrin buwch ffres ac yn oed, crynodiadau amrywiol o wrea, swcros (10%) a dŵr distyll (H2O). Cofnodwyd goroesiad ceisio gwesteiwr (B, 1 awr) mosgitos ac sugno gwaed (B, C) holl echlynau gwawdio (B, 2 awr) a mosgitos benywaidd. bwydo ar wrin (B, D) ac wrea (C, E), a rheolyddion, swcros a dŵr, yn farw
Roedd cyfanswm pellter a nifer y rowndiau a bennwyd ym mhrawf y felin hedfan dros gyfnod o 24 awr yn amrywio rhwng mosgitos ceisio gwesteiwr a sugno gwaed, a ddangosodd lai o weithgarwch hedfan yn gyffredinol (Ffig. 3). Dangosodd mosgitos a oedd yn bwydo ar wrin wahanol batrymau hedfan ac roeddent yn ddyddiol yn bennaf. Dangosodd mosgitos benywaidd a oedd yn darparu swcros neu wrin 72-awr weithgaredd trwy gydol y cyfnod 24 awr, tra bod menywod a oedd yn darparu dŵr yn fwy egnïol yn ystod y cyfnod canol. Mosgitos a fwydwyd ar swcros oedd yn arddangos y lefelau uchaf o weithgaredd yn hwyr yn y nos ac yn gynnar yn y bore, gwelwyd y lefelau uchaf o weithgaredd yn hwyr yn y nos ac yn gynnar yn y bore yn llai o weithgaredd yn hwyr yn y nos ac yn gynnar yn y bore. 24 awr (Ffigur 3).
Hedfan perfformiad heliwr-chwilio gwaed-sugno benywaidd Anopheles arabinis bwydo ar wrin buwch a urea.In y prawf felin hedfan, mosgitos benywaidd bwydo ar wrin buwch ffres ac yn oed, crynodiadau amrywiol o wrea, swcros (10%), a dŵr distyll (H2O) eu clymu i llorweddol, yn rhydd cylchdroi hosting-gweld breichiau gwaed (uchod), Forft cyfanswm y breichiau hedfan-gweld-gweld. s yr awr ar gyfer pob diet dros gyfnod o 24 awr (tywyll: llwyd; golau: gwyn).Dangosir pellter cyfartalog a nifer cyfartalog pyliau i'r dde o'r graff gweithgaredd circadian. Mae bariau gwall yn cynrychioli gwall safonol y cymedr. Dadansoddiad ystadegol gweler y testun
Yn gyffredinol, roedd gweithgaredd hedfan cyffredinol merched oedd yn chwilio am westeion yn dilyn patrwm tebyg i bellter hedfan dros gyfnod o 24 awr. Effeithiwyd yn sylweddol ar y pellter hedfan cymedrig gan ddeiet a amlyncwyd (F(5, 138) = 28.27, p <0.0001), a benywod oedd yn chwilio am letywyr wedi amlyncu 72 awr o wrin yn hedfan o'i gymharu â phellteroedd gryn dipyn yn hirach <000000, o'i gymharu â phellteroedd sugno mwy o amser, o gymharu â phellteroedd sugno mwy o amser. es hedfan yn hirach na ffres (p = 0.022) a 24-h-oed wrin (p = 0.022)-bwydo mosgitos.Yn wahanol i'r patrwm gweithgaredd hedfan a ddisgrifiwyd gan y diet wrin, merched sy'n cael eu bwydo wrea gwesteiwr-chwilio arddangos gweithgaredd hedfan parhaus dros gyfnod o 24-h, cyrraedd uchafbwynt yn ystod ail hanner y cyfnod gwesteiwr-3 gweithgaredd tebyg. cynnydd sylweddol yn y pellter hedfan cymedrig yn dibynnu ar y crynodiad a amsugnwyd (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Roedd merched sy'n chwilio am westeion yn bwydo unrhyw grynodiad o wrea yn hedfan yn hirach na'r benywod yn bwydo naill ai dŵr neu swcros (p < 0.03).
Roedd gweithgaredd hedfan cyffredinol mosgitos sy'n sugno gwaed yn sefydlog ac wedi'i gynnal dros 24 awr ar draws pob diet, gyda mwy o weithgaredd wrin yn ystod ail hanner y cyfnod tywyll ar gyfer menywod sy'n cael eu bwydo ar ddŵr yn ogystal â benywod yn cael eu bwydo'n ffres a 24 awr oed (delwedd 3). 138) = 1.36, p = 0.24).with eraill wrin a diet rheoli (ffres, p = 0.0091; 72 awr, p = 0.0022; 168 awr, p = 0.001; swcros, p = 0.0017; dH2O, p = 0.).
Aseswyd effeithiau bwydo wrin ac wrea ar baramedrau atgenhedlu mewn bio-asesiadau dodwy wyau (Ffigur 4A) ac ymchwiliwyd iddynt yn ôl nifer yr wyau a dodwywyd gan bob benyw, maint wy, a larfa instar cyntaf oedd newydd ddeor. Roedd troeth 4-awr, pryd gwaed yn dodwy llawer mwy o wyau na benywod a oedd yn bwydo ar ddiet wrin arall ac yn debyg i'r rhai sy'n cael eu bwydo â swcros (Ffig. 4B). Yn yr un modd, roedd maint yr wyau a dodwywyd gan fenywod sy'n cael eu bwydo â wrin yn amrywio yn ôl diet (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), gyda 24-awr yn dodwy wyau wedi'u bwydo â dŵr benywaidd yn sylweddol uwch na merched, tra'n dodwy wyau benywaidd wedi'u bwydo â dŵr yn sylweddol fwy na rhai benywaidd. s bwydo gyda 168 h o wrin yn sylweddol llai (Ffig. 4C).Yn ogystal, diet wrin effeithio'n sylweddol ar faint larfa (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), gyda larfâu sylweddol fwy yn dod i'r amlwg o wyau dodwy gan 24- a 72-awr-oed merched sy'n bwydo wrin nag o wyau larfa-bwydo urh-18 18-w. 4D).
Perfformiad atgenhedlu o Anopheles arabinis benywaidd bwydo ar wrin buwch a urea.Blood-bwydo mosgitos benywaidd yn cael eu bwydo dietau yn cynnwys wrin buwch ffres ac oed, crynodiadau amrywiol o wrea, swcros (10%), a dŵr distyll (H2O) am 48 awr cyn rhoi mewn bio-asesiadau a chael wy-rhif 4, Egg-rhif (B) a dodwy wy (Awr 4C), maint y swbstrad Egg a dodwy. Roedd maint larfa (D, G) yn cael eu heffeithio'n sylweddol gan y diet a ddarparwyd (wrin buwch: BD; wrea: EG). Roedd y moddau ar gyfer pob paramedr a fesurwyd gan ddefnyddio gwahanol enwau llythrennau yn sylweddol wahanol i'w gilydd (ANOVA un ffordd gan ddefnyddio dadansoddiad post hoc Tukey; p <0.05). Mae bariau gwall yn cynrychioli gwall safonol y cymedr.
Fel y brif gydran nitrogenaidd o wrin, wrea, pan ddarperir fel diet i fenywod sy'n bwydo gwaed, effeithio'n sylweddol ar baramedrau atgenhedlu ym mhob studies.The nifer o wyau dodwy gan fenywod bwydo wrea, ar ôl pryd gwaed, yn dibynnu ar grynodiad wrea (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), benywod bwydo 3 M 3 crynodiadau a mwy o wyau gosod (Ffigur 4 µ 4 M 4 wrea crynodiadau a mwy. E). Mae benywod sy'n cael eu bwydo ar grynodiadau wrea o 134 µM neu uwch yn dodwy wyau mwy na benywod sy'n cael eu bwydo ar ddŵr (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Ffigur 4F), a maint larfal, er bod crynodiadau tebyg o wrea mewn mamau yn effeithio arnynt (F(10, 330.0.0). 4G).
Atyniad cyffredinol i westeiwr-chwilio gofod wrin buchol headspace extracts.The arabiensis a aseswyd yn y olfactometer tiwb gwydr (Ffig. 5A) ei effeithio'n sylweddol gan oedran wrin (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Ffig. 5B). 0.0060, 168 awr: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), Ac eithrio arogl wrin ffres (p = 0.13; Ffigur 5B). Er nad oedd atyniad cyffredinol mosgitos sy'n sugno gwaed i aroglau wrin yn sylweddol wahanol (χ2 = 8.78, dfig = 8.78, tudalen C). i fod yn llawer mwy deniadol i echdynion anweddol gofod pen o gymharu ag wrin 72-awr oed o gymharu â rheolaethau (p = 0.0066; Ffigur 5C).
Ymatebion ymddygiadol i arogleuon wrin buwch naturiol a synthetig yn y chwilio am letyol a gwaed-bwyd Anopheles arabianus.Schematic y tiwb gwydr olfactometer (A).Atyniad o headspace darnau anweddol o wrin buwch ffres a hen i westeiwr (B) a gwaed-sugno (C) mosgitos.Dod o hyd i'r adwaith tentacleadated o'r Lord.Hespace (extraction.Herspace) ffres), 72-awr (F), a 168-awr (G) wrin buwch oed yn cael eu dangos.Electron canfod antena (EAD) olion yn dangos newidiadau foltedd mewn ymateb i gyfansoddion bioactif yn y headspace eluted o'r cromatograff nwy ac yn canfod gan synhwyrydd ionization fflam (FID).Mae'r raddfa bar yn cynrychioli osgled ymateb (mV) yn erbyn y cyfraddau cadw ymateb (mV) yn erbyn y cyfansoddyn ac amser rhyddhau µ). seren sengl (*) yn dynodi ymateb osgled isel cyson.Mae sêr dwbl (**) yn dynodi ymatebion anatgynyrchadwy.Dod o hyd i'r gwesteiwr (H) a'r sugno gwaed (I) Mae gan An.arabiensis apeliadau gwahanol i gymysgeddau synthetig o arogleuon wrin buwch ffres ac oedrannus. Mae cyfrannau cymedrig mosgitos wedi'u denu i ddadansoddiad gwahanol VA-O.p < 0.05).Mae bariau gwall yn cynrychioli cyfeiliornad safonol y raddfa
Benywaidd Ann.arabiensis, 72 h a 120 h ar ôl pryd gwaed, yn ystod silio, ni ddangoswyd unrhyw ffafriaeth ar gyfer darnau anweddol gofod pen o wrin buwch ffres a hen o'i gymharu â rheolaethau pentan (χ2 = 3.07, p > 0.05; Ffeil ychwanegol 1: Ffig. S1).
Ar gyfer dadansoddiadau benywaidd Ann.arabiensis, GC-EAD a GC-MS adnabuwyd wyth, chwech, tri a thri chyfansoddyn bioactif (Ffigur 5D-G). Er y gwelwyd gwahaniaethau yn nifer y cyfansoddion a ddeilliodd o ymatebion electroffisiolegol, roedd y rhan fwyaf o'r cyfansoddion hyn yn bresennol ym mhob echdyniad anweddol gofod pen a gasglwyd o wrin ffres ac hen.
Cynyddodd cyfanswm cyfradd rhyddhau anweddol cyfansoddion bioactif yn y casgliad headspace o 29 µg h-1 mewn wrin ffres i 242 µg h-1 mewn wrin 168-awr oed, yn bennaf oherwydd p-cresol a m-formaldehyde Mae ffenol yn cynyddu yn ogystal â ffenol.Mewn cyferbyniad, mae cyfraddau rhyddhau cyfansoddion eraill, megis wretan-1-cysylltiedig cynyddol, sy'n gysylltiedig ag oedran cor-canolin-2 yn gostwng ac yn cynyddu. gyda'r gostyngiad a welwyd mewn dwyster signal (digonedd) yn y cromatogram (Ffig. 5D) -G panel chwith) ac ymatebion ffisiolegol i'r cyfansoddion hyn (Ffig. 5D-G panel dde).
Yn gyffredinol, roedd gan y cymysgedd synthetig gymhareb naturiol debyg o gyfansoddion bioactif a nodwyd mewn detholiadau anweddol o ofodau wrin ffres ac oedrannus (Ffig. 5D–G) ac nid oedd yn ymddangos ei fod yn ennyn apêl sylweddol wrth chwilio am westeiwr (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Ffig. 5H), neu df. 4 = ffug sugno gwaed = χ. 30; Ffig. 5I).Fodd bynnag, dangosodd cymariaethau pâr post hoc rhwng triniaethau fod mosgitos oedd yn chwilio am letywyr yn ddeniadol iawn i'r cymysgedd synthetig o wrin 24-h oed o'i gymharu â rheolyddion pentan (p = 0.0086; Ffigur 5H).
Er mwyn asesu rôl cydrannau unigol mewn cymysgeddau synthetig o wrin 24-h-oed, gwerthuswyd chwe chymysgedd tynnu yn erbyn cymysgeddau cyflawn yn y assay Y-tiube, lle cafodd cyfansoddion unigol eu dileu.Ar gyfer mosgitos sy'n ceisio gwesteiwr, cafodd tynnu cyfansoddion unigol o'r cymysgedd cyflawn effaith sylweddol ar ymatebion ymddygiadol (χ2 = 19.63, Ffigur 2, df = 2; ffeil ychwanegol = 0.63, df = Ffigur 2 = 2 = ffeil ychwanegol; cymysgeddau tractive yn fwy deniadol na Llai na llawn cymysg.Mewn cyferbyniad, tynnu cyfansoddion unigol o'r cymysgedd llawn synthetig nid oedd yn effeithio ar ymatebion ymddygiadol mosgitos sugno gwaed (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), ac eithrio decanal, a arweiniodd at lefelau is o gymharu â'r cymysgedd cyflawn Atyniad 01: 2 Ffeil (p = 2 Ffeil Ychwanegol).
Mewn pentref malaria-endemig yn Ethiopia, gwerthuswyd effeithiolrwydd cymysgedd synthetig o wrin buwch 24-awr wrth ddenu mosgitos o dan amodau maes am ddeg noson (Ffig. 6A). Daliwyd a dynodwyd cyfanswm o 4,861 o mosgitos, ac roedd 45.7% ohonynt yn Anthropus.gambiae sl, 18.53% yn Anthropus.gambiae sl, 18.53% pharexp. Ffeil ychwanegol 1: Tabl S1).Anopheles arabinis yw'r unig aelod o gymhleth rhywogaethau An.Gambian a nodwyd gan PCR analysis.Ar gyfartaledd, 320 mosgitos eu dal y noson, ac yn ystod yr amser trapiau gyda chymysgedd synthetig abwyd dal mosgitos mwy na thrapiau pâr heb gymysgedd (χ2(0, 3196) = 170.0, p n gosodwyd pum trap yr un <- 1 bai-1) y pum trapiau ar bob <-1bai. nosweithiau rheoli ar ddechrau, canol, a diwedd y treial.Cafodd niferoedd tebyg o fosgitos eu dal ym mhob pâr o drapiau, gan ddangos nad oes unrhyw ragfarn rhwng tai (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) a dim dirywiad yn y boblogaeth yn ystod cyfnod yr astudiaeth. O gymharu â thrapiau rheoli, cynyddodd nifer y mosgitos a ddaliwyd yn sylweddol yn y maglau rheoli χ2(0, 1665): 7) = 138.7, p < 0.0001), bwydo gwaed yn ddiweddar (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) a beichiogrwydd (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123;Ffeil ychwanegol 1: Tabl S1). Adlewyrchir hyn hefyd yng nghyfanswm nifer y mosgitos a ddaliwyd: gwesteiwr yn ceisio > sugno gwaed > beichiog > lled feichiog > gwryw.
Gwerthusiad maes o effeithiolrwydd cymysgedd arogl wrin buwch synthetig 24-awr. Cynhaliwyd treialon maes yn ne-ganolog Ethiopia (map), ger tref Maki (mewnosoder), gan ddefnyddio trap golau Canolfannau Rheoli Clefydau (CDC) (dde) mewn pâr tai, gyda dyluniad sgwâr Lladin (delwedd o'r awyr) (A).Synthetig aroglau-bwyta CDC), Anquepsophele yn cipio arogl benywaidd, ond CDC Anquepsele (photos Anquepsele abwydo) benywaidd. oes (C), mewn ffordd wahanol, yn ffisiolegol cyflwr-ddibynnol effect.In ogystal, trapiau hyn dal niferoedd sylweddol uwch o'r mosgitos Culex gwesteiwr.(D) O'i gymharu â control.The bariau ar y chwith yn cynrychioli mynegai dethol cyfartalog o mosgitos dal mewn parau o abwyd arogl (gwyrdd) a rheolaeth (agored) trapiau (N = 10), tra bod y bariau rheoli mynegai dethol ar y dde (N = 10) ar gyfartaledd.).Mae sêr yn dynodi lefelau arwyddocâd ystadegol (*p = 0.01 a ***p < 0.0001)
Cafodd y tair rhywogaeth eu dal yn wahanol mewn trapiau sy'n cynnwys cymysgeddau synthetig. Roedd chwilio am letywr (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), bwydo gwaed (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) a beichiogrwydd (χ2(1, 61.0. sis) = ara. gaeth yn y trap rhyddhau'r cymysgedd synthetig (Ffig. 6 B), tra nad oedd y swm o An differ.Pharoensis mewn gwahanol wladwriaethau ffisiolegol Darganfuwyd (Ffig. 6 C). Ar gyfer Culex, dim ond cynnydd sylweddol yn y nifer o mosgitos ceisio lletyol a ddarganfuwyd mewn trapiau abwyd gyda'r cymysgedd synthetig (χ2(1,1319) = 12.6, o'i gymharu â maglau D.
Defnyddiwyd trapiau abwyd gwesteiwr sydd wedi'u lleoli y tu allan i westeion posibl rhwng safleoedd bridio a chymunedau gwledig yn Ethiopia i asesu a yw mosgitos malaria yn defnyddio aroglau wrin buwch fel ciw cynefin gwesteiwr.Yn absenoldeb ciwiau lletyol, gwres, a gyda neu heb bresenoldeb arogl wrin buwch, ni ddaliwyd mosgitos (Ffeil ychwanegol 1: Ffigur S3).Fodd bynnag, roedd tymheredd uchel a phresenoldeb coquitoes urw yn denu aroglau uchel a choginio benyw yn denu odor uchel. , er mewn niferoedd bach, yn annibynnol ar oedran wrin (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Ffeil ychwanegol 1: Ffigur S3). Mewn cyferbyniad, nid oedd rheolaethau dŵr yn dal mosgitos malaria ar dymheredd uchel (Ffeil Ychwanegol 1: Ffigur S3).
Mae mosgitos malaria yn caffael ac yn dosbarthu cyfansoddion sy'n cynnwys nitrogen trwy fwydo cydadferol ar wrin buwch (hy, pyllau) i wella nodweddion hanes bywyd, yn debyg i bryfed eraill [2, 4, 24, 25, 26]. Mae troeth buwch yn adnodd adnewyddadwy sydd ar gael yn hawdd ac sy'n gysylltiedig yn agos â mannau gorffwys ar gyfer fectorau malaria, megis mannau gorffwys ar gyfer fectorau malaria, megis safleoedd gwrychoedd malaria a mannau gwan ar gyfer lladd gwrychoedd. Mae quitoes yn lleoli'r adnodd hwn trwy arogl ac yn gallu rheoleiddio'r defnydd o gyfansoddion nitrogenaidd mewn wrin, gan gynnwys wrea, y brif gydran nitrogenaidd mewn wrin [15, 16]. Yn dibynnu ar gyflwr ffisiolegol y mosgito benywaidd, mae maetholion yn yr wrin yn cael eu dyrannu i wella gweithgaredd hedfan a goroesiad mosgitos benywaidd sy'n chwilio am westeiwr, yn ogystal â nodweddion unigolion sy'n cael eu bwydo â chymysgedd gwaed ac atgenhedlu yn gyntaf. s rôl maethol pwysig ar gyfer fectorau malaria sy'n cael eu cau fel oedolion â diffyg maeth [8], gan ei fod yn darparu mosgitos benywaidd gyda'r gallu i gaffael cyfansoddion nitrogenaidd pwysig trwy gymryd rhan mewn bwydo risg isel.