Diolch i chi am ymweld â Nature.com.Mae gan y fersiwn porwr rydych yn ei ddefnyddio gefnogaeth gyfyngedig i CSS. I gael y profiad gorau, rydym yn argymell eich bod yn defnyddio porwr wedi'i ddiweddaru (neu ddiffodd modd cydweddoldeb yn Internet Explorer). Yn y cyfamser, er mwyn sicrhau cefnogaeth barhaus, byddwn yn arddangos y wefan heb arddulliau a JavaScript.
Gronynnau silica mandyllog eu paratoi gan ddull sol-gel gyda rhai addasiadau i gael gronynnau macroporous.These gronynnau eu derivatized gan adio cildroadwy darnio cadwyn trosglwyddo (RAFT) polymerization gyda N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) a styrene i baratoi N-phenylmaleimide intercalation o polystyren (PMPs) cyfnod 1.1 llonydd-bore dur gwrthstaen-1. pacio gan slyri packing.Evaluated PMP gwahanu colofn o gymysgedd peptid sy'n cynnwys pum peptidau (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, enkephalin leucine) cromatograffig perfformiad) a treuliad trypsin o humanpeptide cyflyrriad yr albwm peptidaidd cyflyrau optimaidd (cyflwr optimeiddio peptide) yw'r optimwm cyfrif ewmidin peptid). mor uchel â 280,000 o blatiau/m². Gan gymharu perfformiad gwahanu'r golofn ddatblygedig â cholofn fasnachol Ascentis Express RP-Amide, sylwyd bod perfformiad gwahanu'r golofn PMP yn well na'r golofn fasnachol o ran effeithlonrwydd gwahanu a datrysiad.
Yn y blynyddoedd diwethaf, mae'r diwydiant biofferyllol wedi dod yn farchnad fyd-eang sy'n ehangu gyda chynnydd sylweddol yn y farchnad share.With twf ffrwydrol y diwydiant biopharmaceutical1,2,3, y dadansoddiad o peptidau a phroteinau yn hynod Desire.In ogystal â'r targed peptid, mae nifer o amhureddau yn cael eu cynhyrchu yn ystod peptidau, a thrwy hynny ei gwneud yn ofynnol puro cromatograffig i gael y corff a ddymunir puro synthesis peptidau a meinweoedd puro, dadansoddiad o peptidau a meinweoedd pur hynod dymunol. dasg heriol oherwydd y nifer fawr o rywogaethau y gellir eu canfod mewn un sample.Although sbectrometreg màs yn arf effeithiol ar gyfer dilyniannu peptid a phrotein, os samplau o'r fath yn cael eu chwistrellu i mewn i'r sbectromedr màs mewn un tocyn, ni fydd y gwahanu yn ideal.This broblem yn cael ei liniaru trwy weithredu cromatograffaeth hylifol (LC) gwahaniadau cyn dadansoddiad MS, a fydd yn lleihau nifer yr adio analytes.6 cyfnod, yn ystod cyfnod adio a roddir analytromedr. gellir canolbwyntio alytes mewn rhanbarthau cul, a thrwy hynny ganolbwyntio'r analytes hyn a gwella sensitifrwydd canfod MS.
Defnyddir cromatograffaeth hylif gwrthdroi-cyfnod (RP-LC) yn eang ar gyfer puro a gwahanu cymysgeddau peptid gan ddefnyddio silica wedi'i addasu octadecyl (ODS) fel y cyfnod llonydd11,12,13.However, nid yw cyfnodau llonydd RP yn darparu gwahaniad boddhaol o peptidau a phroteinau oherwydd eu strwythur cymhleth a natur amphiphilic 14,15 ac mae angen 14,15 o broteinau a dadansoddi gorsaf begynol a phroteinau sydd eu hangen i orsafoedd 14,15 a dadansoddiadau pegynol. Gall moieties ambegynol i ryngweithio â'r analytes16.Mixed-mode cromatograffaeth, sy'n darparu rhyngweithiadau amlfodd, fod yn ddewis amgen i RP-LC ar gyfer gwahanu peptidau, proteinau, a chymysgeddau cymhleth eraill.Mae nifer o gyfnodau llonydd modd-cymysg wedi'u paratoi, a cholofnau sy'n llawn dop o'r cyfnodau hyn wedi'u defnyddio ar gyfer gwahanu peptidau, proteinix-modal, a phroteinau28,197,217,200,217,200,217,217,19,217,19,217,19,217,217,197,217,217,200,217; s (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, intercalation pegynol/RPLC) yn addas ar gyfer gwahaniadau peptid a phrotein oherwydd presenoldeb grwpiau pegynol ac amhenodol22,23,24,25,26,27,28. Yn yr un modd, mae cyfnodau llonydd rhyngosod pegynol gyda grwpiau pegynol wedi'u bondio'n gofalent yn dangos gwahaniad da ar gyfer pwer a di-begynol, ac mae gwahaniad pegynol a detholedd unigryw yn dibynnu ar wahaniad pwer a detholedd unigryw. cyfnod ary.Rhyngweithiadau amlfodd 29, 30, 31, 32.Yn ddiweddar, mae Zhang et al.30 paratowyd cyfnod llonydd polyamine dodecyl-terfynu ac yn llwyddiannus gwahanu hydrocarbonau, gwrth-iselder, flavonoids, niwcleosidau, estrogens, a nifer o analytes.The eraill intercalator pegynol grwpiau pegynol a di-begynol, fel y gellir ei ddefnyddio i wahanu peptidau a phroteinau sydd â'r ddau hydroffobig a hydrophilic moieties (colofnau-colofn-1), yn fasnachol moieties amed C. ar gael o dan y colofnau enw masnach Ascentis Express RP-Amide, ond defnyddir y colofnau hyn ar gyfer dadansoddi amin 33 yn unig.
Yn yr astudiaeth gyfredol, paratowyd cyfnod sefydlog pegynol (Polystyren wedi'i fewnosod N-phenylmaleimide) a'i werthuso ar gyfer gwahanu peptidau a chrynodiadau trypsin o HSA. Paratowyd y cyfnod llonydd gan ddefnyddio'r strategaeth ganlynol. Paratowyd gronynnau silica mandyllog yn unol â'r weithdrefn a roddwyd yn ein cyhoeddiad blaenorol gyda rhai addasiadau i'r protocol paratoi.The cymhareb o urea asid glycetig, asid asetig wedi'i addasu, gronynnau glycetig ac asid asetig wedi'u haddasu. gyda maint.Second mandwll mawr, ligand newydd, phenylmaleimide-methyl finyl isocyanate, ei syntheseiddio a'i ddefnyddio i derivatize gronynnau silica i baratoi pegynol wreiddio phase.The llonydd llonydd cam sy'n deillio o hyn ei bacio i mewn i golofn dur di-staen (100 × 1.8 mm id) gan ddefnyddio'r pacio optimized scheme.The golofn pacio yn cael ei gynorthwyo gyda dirgryniad begynol becyn o fewn becyn gwahanu mecanyddol o fewn gwely wedi'i ffurfio o fewn becynnu dirgryniad begynol er mwyn sicrhau bod cymysgedd mecanyddol colofn E yn cael ei ffurfio o fewn dirgryniad pecyn mecanyddol. ing o bum peptid;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) a Trypsin crynhoad o albwmin serwm dynol (HAS). Arsylwyd y cymysgedd peptid a trypsin crynhoad HSA i wahanu gyda cydraniad da ac effeithlonrwydd. Roedd perfformiad gwahanu'r peptides PMPothis colofn a PMPoth.B. gwelwyd eu bod wedi'u datrys yn dda ac yn effeithlon ar y golofn PMP, a oedd yn fwy effeithlon na cholofn RP-Amide Ascentis Express.
PEG (Polyethylen Glycol), Wrea, Asid Asetig, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Clorosilane (TMCS), Trypsin, Albwmin Serwm Dynol (HSA), Amoniwm Clorid, Wrea, Methyldisilazane Hexane (HMDS), Clorid Methacryloyl (MC), Styrene, Perocsid-BenylDisilazîn (MC), Styrene, 4-BLC, 4-B-HPOocsid. tonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ac Aseton a Brynwyd o Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, UDA).
Trowyd cymysgedd o wrea (8 g), polyethylen glycol (8 g), ac 8 ml o asid asetig 0.01 N am 10 munud, ac yna ychwanegwyd 24 ml o TMOS ato dan amodau oerfel iâ. ar 70°C am 12 awr. Roedd y màs meddal sych yn dir llyfn mewn popty a'i galchynnu ar 550°C am 12 awr. Paratowyd tri swp a'u nodweddu i archwilio atgynhyrchedd ym maint gronynnau, maint mandwll ac arwynebedd.
Trwy addasu wyneb gronynnau silica â ligand cyn-syntheseiddio ffenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ac yna polymerization rheiddiol â styrene, paratowyd cyfansoddyn sy'n cynnwys grŵp pegynol.Cyfnod llonydd ar gyfer agregau a chadwyni polystyren. Disgrifir y broses baratoi isod.
Cafodd N-phenylmaleimide (200 mg) ac isocyanad finyl methyl (100 mg) eu hydoddi mewn tolwen sych, ac ychwanegwyd 0.1 ml o 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) i'r fflasg adwaith i baratoi copolymer isocyanad finyl ffenylmaleimide-methyl (100 mg) ar 4 awr wedi'i hidlo, wedi'i hidlo ar 4 awr mewn popty 400, wedi'i hidlo'n 4 awr a PMCP. °C am 3 awr.
Roedd gronynnau silica sych (2 g) yn cael eu gwasgaru mewn tolwen sych (100 ml), eu troi a'u sonicated mewn fflasg gwaelod crwn 500 ml am 10 munud. , Diddymwyd gronynnau silica bond PMCP (100 g) mewn tolwen (200 ml) ac ychwanegwyd 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ym mhresenoldeb 100 µL o dibutyltin dilaurate fel catalydd. Trowyd y cymysgedd ar 50 ° C am 8 awr, ei hidlo a'i sychu ar 3 ° C am 3 awr.
Gwasgarwyd Styrene (1 mL), perocsid benzoyl BPO (0.5 mL), a gronynnau silica ynghlwm TEMPO-PMCP (1.5 g) mewn tolwen a'u glanhau â nitrogen. Cynhaliwyd polymerization styren ar 100 ° C am 12 hours.
Roedd y samplau yn degassed yn 393 K am 1 awr i gael pwysau gweddilliol o lai na 10-3 Torr.The swm o N2 arsugniad ar bwysau cymharol o P/P0 = 0.99 yn cael ei ddefnyddio i benderfynu ar y cyfaint mandwll cyfanswm.Archwiliwyd morffoleg y gronynnau silica noeth a ligand-bondio gyda sganio microsgopeg electronchi, Japan-bara silicad (High-Silica-Silice Technologies). ) eu gosod ar golofn alwminiwm gan ddefnyddio tâp carbon gludiog.Gold ei blatio ar y samplau gan ddefnyddio coater sputter Q150T, a haen 5 nm Au ei adneuo ar y samples.This yn gwella effeithlonrwydd proses gan ddefnyddio folteddau isel ac yn darparu grawn dirwy, oer sputtering.A Thermo Electron (Waltham, MA, UDA) Flash EA1112 Sputter coater (analysydd elfennol EA1112). r yn cael ei ddefnyddio i gael y gronynnau maint gronynnau distribution.Naked silica gronynnau a ligand-bondio gronynnau silica (5 mg yr un) eu gwasgaru mewn 5 ml o isopropanol, sonicated am 10 munud, vortexed am 5 munud, a gosod ar y fainc optegol y dadansoddiad Mastersizer.Thermogravimetric ei pherfformio ar gyfradd o 5 ° C y funud 3 ° C dros 0 i 0.
Cafodd colofnau tyllu cul o ddur di-staen wedi'u leinio â gwydr eu maint (100 × 1.8 mm id) eu pacio gan ddefnyddio'r dull pacio slyri, gan ddefnyddio'r un weithdrefn a ddefnyddir yn Cyf.31.A colofn dur di-staen (gwydr-leinio, 100 × 1.8 mm id) gyda ffitiad allfa sy'n cynnwys frit 1 µm ei gysylltu â paciwr slyri (Alltech Deerfield, IL, UDA).Paratoi slyri cyfnod llonydd drwy atal 150 mg o gyfnod llonydd yn 1.2 mL o slyri yn storio a'i anfon yn datrys y slyri yn dda. nt.Llenwch y golofn yn olynol trwy gymhwyso pwysau o 100 AS am 10 munud, 80 AS am 15 munud, a 60 AS am 30 minutes.During pacio, cymhwyswyd dirgryniad mecanyddol gyda dau ysgydwr colofn GC (Alltech, Deerfield, IL, UDA) i sicrhau pacio unffurf y column.Close y paciwr slyri i atal y paciwr slyri uned pwysau a rhyddhau'r paciwr slyri yn araf o fewn cysylltu'r slyri a'i ryddhau rhag difrodi'r slyri uned. i'r fewnfa ac i'r system LC i wirio ei berfformiad.
Adeiladwyd pwmp LC (10AD Shimadzu, Japan), chwistrellwr (Valco (UDA) C14 W.05) gyda dolen chwistrellu 50nL, degasser bilen (Shimadzu DGU-14A), ffenestr capilarïau UV-VIS Synhwyrydd dyfais µLC arbennig (UV-2075) a micro-golofnau wedi'u leinio â gwydr i leihau'r effaith gulhau pecynnu bandiau ychwanegol, a lleihau'r effaith ar becynnu'r bandiau byrrach i leihau'r effaith ar becynnu bandiau ychwanegol. gosodwyd aries (50 μm id 365 a capilarïau undeb lleihau (50 μm) yn allfa 1/16″ yr undeb lleihau. Casglwyd data a phrosesu cromatograffig gan ddefnyddio meddalwedd Multichro 2000. Monitro ar 254 nm Profwyd dadansoddiadau am amsugno UV. Dadansoddwyd data cromatograffig gan OriginPro, MA8).
Albwmin o serwm dynol, powdr lyophilized, ≥ 96% (electrofforesis gel agarose) 3 mg wedi'i gymysgu â trypsin (1.5 mg), 4.0 M wrea (1 mL), a 0.2 M amoniwm bicarbonad (1 ml). .Hidlo'r hydoddiant a'i storio o dan 4 °C.
Gwerthuswyd gwahanu cymysgeddau peptid a chrynodebau trypsin HSA ar wahân ar golofnau PMP. Gwiriwch wahaniad y cymysgedd peptid a chrynhoad trypsin HSA gan y golofn PMP a chymharwch y canlyniadau â cholofn Ascentis Express RP-Amide colofn. Cyfrifir y rhif plât damcaniaethol fel a ganlyn:
Dangosir delweddau SEM o ronynnau silica noeth a gronynnau silica wedi'u bondio â ligand yn FIG.Mae delweddau 2 .SEM o ronynnau silica noeth (A, B) yn dangos, yn wahanol i'n hastudiaethau blaenorol, fod y gronynnau hyn yn sfferig lle mae'r gronynnau'n hir neu'n meddu ar gymesuredd afreolaidd.
Sganio delweddau microsgop electron o ronynnau silica noeth (A, B) a gronynnau silica wedi'u bondio â ligand (C, D).
Dangosir dosbarthiad maint gronynnau gronynnau silica noeth a gronynnau silica wedi'u bondio â ligand yn Ffigur 3(A). Dangosodd cromliniau dosbarthiad maint gronynnau sy'n seiliedig ar gyfaint fod maint y gronynnau silica wedi cynyddu ar ôl eu haddasu'n gemegol (Ffig. 3A). Mae data dosbarthiad maint gronynnau'r gronynnau silica o'r astudiaeth gyfredol a'r astudiaeth flaenorol yn cael eu cymharu yn Nhabl 1(A). ad(0.5) gwerth 3.05 μm (gronynnau silica wedi'u rhwymo â pholystyren)34.Roedd gan y swp hwn ddosbarthiad maint gronynnau culach o gymharu â'n hastudiaeth flaenorol oherwydd y cymarebau amrywiol o PEG, wrea, TMOS, ac asid asetig yn y cymysgedd adwaith. haen polystyren (0.97 µm) ar yr wyneb silica, tra yn y cyfnod PMP trwch yr haen oedd 1.38 µm.
Dosbarthiad maint gronynnau (A) a dosbarthiad maint mandwll (B) o ronynnau silica noeth a gronynnau silica wedi'u rhwymo â ligand.
Rhoddir maint mandwll, cyfaint mandwll ac arwynebedd y gronynnau silica yn yr astudiaeth gyfredol yn Nhabl 1(B). Mae'r proffiliau PSD o ronynnau silica noeth a gronynnau silica rhwymedig ligand i'w gweld yn Ffigur 3(B). Mae'r canlyniadau yn debyg i'n hastudiaeth flaenorol. (B), ac mae'r newid y gromlin yn cael ei ddangos yn Ffig. d o 116 m2/g i 105 m2/g ar ôl addasu cemegol.
Mae canlyniadau dadansoddiad elfennol o'r cyfnod llonydd yn cael eu dangos yn Nhabl 2.The llwytho carbon y cyfnod llonydd presennol yn 6.35%, sy'n is na'r llwytho carbon ein hastudiaeth flaenorol (gronynnau silica bondio polystyren, 7.93%35 a 10.21%, yn y drefn honno) 42. Mae llwytho carbon y cyfnod llonydd presennol yn 6.35%, sy'n is na'r llwythiad carbon o'n hastudiaeth flaenorol (gronynnau silica bondio polystyren, 7.93%35 a 10.21%, yn y drefn honno) 42. Mae llwytho carbon y cyfnod llonydd presennol yn ogystal â'r cyfnod sefydlog presennol yn isel, Oherwydd yn y cyfnod paratoad ffenstyyl a phegynol yn isel, Oherwydd yn y cyfnod paratoi ffenstyylyl a rhai o'r fath yn isel, Oherwydd yn y paratoad ffenstyl a phegynol mae rhai yn isel. ide-methylvinylisocyanate (PCMP) a 4-hydroxy-TEMPO were used.The nitrogen pwysau y cant o'r cyfnod llonydd presennol yw 2.21%, o'i gymharu â 0.1735 a 0.85% yn ôl pwysau o nitrogen mewn astudiaethau blaenorol, yn y drefn honno. Mae hyn yn golygu bod y wt% o nitrogen yn uwch yn y cyfnod llonydd presennol oherwydd phenylimilyeimide a 2.4% oedd llwythi o gynhyrchion a phenylmaleimide carbon. .9%, yn y drefn honno, tra bod llwytho carbon y cynnyrch terfynol (6) yn 6.35%, fel y dangosir yn Nhabl 2. Gwiriwyd y golled pwysau gyda PMP cyfnod llonydd, a dangosir y gromlin TGA yn Ffigur 4. Mae cromlin TGA yn dangos colled pwysau o 8.6%, sydd mewn cytundeb da â'r llwytho carbon (6.35, nid yn unig) oherwydd bod y ligand N hefyd yn cynnwys, ond mae N hefyd yn cynnwys ligand a H.
Dewiswyd y ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ar gyfer addasu wyneb gronynnau silica oherwydd mae ganddo grwpiau ffenylmaleimide pegynol a grwpiau isocyanate vinylisocyanate.Gall grwpiau isocyanate Vinyl adweithio ymhellach gyda styrene trwy polymerization radical byw.Yr ail reswm yw mewnosod grŵp sydd â rhyngweithiad cymedrol gyda'r analyte ac nid oes gan unrhyw ryngweithio electrostatig cryf rhwng yr orsaf analyte analyte, a'r orsaf wefriad normal, ac nid oes gan yr orsaf ffenyl analyte a'r orsaf wefriad normal mo polariaidd. Gall ity y cyfnod llonydd yn cael ei reoli gan y swm gorau posibl o styrene a'r amser adwaith o radical rhad ac am ddim polymerization.The cam olaf yr adwaith (am ddim-radical polymerization) yn hollbwysig a gall newid y polaredd y dadansoddiad phase.Elemental llonydd ei pherfformio i wirio llwytho carbon o'r rhain phases.It llonydd Gwelwyd bod cynyddu faint o styrene a'r amser adweithio cynyddu'r cyfnod o lwythi carbon vers a baratowyd gyda chyfnodau gwahanol crynodiadau a SP. carbon loadings.Again, llwythwch y cyfnodau llonydd hyn i mewn i golofnau dur di-staen a gwirio eu perfformiad cromatograffig (detholusrwydd, cydraniad, gwerth N, ac ati). Yn seiliedig ar yr arbrofion hyn, dewiswyd fformiwleiddiad wedi'i optimeiddio i baratoi'r cyfnod PMP llonydd i sicrhau polaredd rheoledig a chadw dadansoddol da.
Gwerthuswyd pum cymysgedd peptid (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) hefyd gan ddefnyddio colofn PMP gan ddefnyddio cyfnod symudol;60/40 (v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA) at a flow rate of 80 μL/min.Under optimal elution conditions, the theoretical plate number (N) per column (100 × 1.8 mm id) is 20,000 ± 100 (200,000 plates/m²).Table 3 gives the N values ​​​​for the three PMP columns and the chromatograms are shown in Figure 5A.Fast analysis on a PMP column at high flow rate (700 μL/min), five peptides were eluted within one minute, N values ​​​​were very good, 13,500 ± 330 per column (100 × 1.8 mm id), Corresponds to 135,000 plates/m (Figure 5B).Three identically sized columns (100 × 1.8 mm id) were packed with three different lots of PMP stationary phase to check reproducibility.The analyte concentration for each column was recorded using the optimal elution conditions and the number of theoretical plates N and retention time to separate the same test mixture on each column.The reproducibility data for the PMP columns are shown in Table 4.The reproducibility of the PMP column correlates well with very low %RSD values, as shown in Table 3.
Gwahanu cymysgedd peptid ar golofn PMP (B) a cholofn Ascentis Express RP-Amide (A);cyfnod symudol 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), dimensiynau colofn PMP (100 × 1.8 mm id);dadansoddol Trefn elution y cyfansoddion: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) a 5 (leucine asid enkephalin)).
Gwerthuswyd colofn PMP (100 × 1.8 mm id) ar gyfer gwahanu crynhoad tryptig o albwmin serwm dynol mewn cromatograffaeth hylif perfformiad uchel. Mae'r cromatogram yn Ffigur 6 yn dangos bod y sampl wedi'i wahanu'n dda a'r cydraniad yn dda iawn. Dadansoddwyd crynhoadau HSA gan ddefnyddio cyfradd llif o 100 µL/min, cyfnod symudol 70/30 ace cromatogram. igure 6), mae treuliad yr HSA wedi'i rannu'n 17 copa sy'n cyfateb i 17 peptidau. Cyfrifwyd effeithlonrwydd gwahanu pob uchafbwynt yn y crynhoad HSA a rhoddir y gwerthoedd yn Nhabl 5.
Gwahanwyd crynhoad tryptig o HSA (100 × 1.8 mm id) ar golofn PMP;cyfradd llif (100 µL/munud), cyfnod symudol 60/40 acetonitrile/dŵr gyda 0.1% TFA.
lle L yw hyd y golofn, η yw gludedd y cyfnod symudol, ΔP yw'r ôl-bwysedd colofn, a u yw cyflymder llinol y cyfnod symudol. Roedd athreiddedd y golofn PMP yn 2.5 × 10-14 m2, y gyfradd llif oedd 25 μL/min, a 60/40 v/v oedd y golofn PMP.0 mm.0 athreiddedd i 1.0 mm. d) yn debyg i un ein hastudiaeth flaenorol Cyf.34.The athreiddedd y golofn yn llawn gronynnau mandyllog arwynebol yw: 1.7 × 10-15 ar gyfer gronynnau 1.3 μm, 3.1 × 10-15 ar gyfer gronynnau 1.7 μm, 5.2 × 10-15 a 2.5 × μ2 gronynnau ar gyfer-2.5 × 15 m. 43.Felly, mae athreiddedd y cyfnod PMP yn debyg i 5 μm o ronynnau cragen craidd.
lle Wx yw pwysau'r golofn sy'n llawn clorofform, Wy yw pwysau'r golofn sy'n llawn methanol, a ρ yw dwysedd y toddydd.Dwyseddau methanol (ρ = 0.7866) a chlorofform (ρ = 1.484). Cyfanswm mandylledd colofnau SILICA PARTICLES-C18 (1.3U × 1-C18) colofnau 1.3U3 a 1-C18 a astudiwyd yn flaenorol oedd 0.63 a 0.55, instead.This yn golygu bod presenoldeb ligandau wrea yn lleihau athreiddedd y stage.On llonydd y llaw arall, mae cyfanswm mandylledd y golofn PMP (100 × 1.8 mm id) yn 0.60.Mae athreiddedd colofnau PMP yn is na hynny o golofnau-C18800000000000000000000000. ynghlwm wrth y gronynnau silica fel cadwyni llinol, tra mewn cyfnodau llonydd math polystyren, mae'r haen polymer A cymharol drwchus yn cael ei ffurfio o'i gwmpas. Mewn arbrawf nodweddiadol, cyfrifir mandylledd y golofn fel:
Mae Ffigur 7A,B yn dangos colofn PMP (100 × 1.8 mm id) a cholofn Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) gan ddefnyddio'r un amodau elution (hy, 60/40 ACN/H2O a 0.1% TFA).) o lain fan Deemter.Paratowyd cymysgeddau peptid dethol (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) mewn 20 µL/ Y gyfradd llif isaf ar gyfer y ddwy golofn yw 800 µL/min.Yr isafswm gwerthoedd HETP ar gyfer y golofn µL/min yw'r gyfradd llif isaf optimwm ar gyfer y golofn µL a µMP (As y 8 munud). Colofn Express RP-Amide oedd 2.6 µm a 3.9 µm, yn ôl eu trefn. Mae gwerthoedd HETP yn nodi bod effeithlonrwydd gwahanu y golofn PMP (100 × 1.8 mm id) yn llawer gwell na'r ar gael yn fasnachol Ascentis Express RP-Amide colofn (100 × 1.8 mm id). Mae'r fan Deemter llain 7 yn dangos nad yw'r gostyngiad sylweddol llif yn Fig. mae effeithlonrwydd gwahanu uwch y golofn PMP (100 × 1.8 mm id) o'i gymharu â cholofn Ascentis Express RP-Amide yn seiliedig ar welliannau mewn siâp gronynnau, maint, a gweithdrefnau pacio colofnau cymhleth a ddefnyddir yn y gwaith cyfredol34.
(A) llain fan Deemter (HETP yn erbyn cyflymder llinol cyfnod symudol) a gafwyd gan ddefnyddio colofn PMP (100 × 1.8 mm id) yn 60/40 ACN/H2O gyda 0.1% TFA.(B) llain fan Deemter (HETP yn erbyn cyflymder llinol cyfnod symudol) a gafwyd gan ddefnyddio colofn Ascentis Express RP-0.0 mmd 1 × 1 / 1 4 mewn RP-04 id 1 / 8 mmd id RP-0 4 i /H2O gyda 0.1% TFA.
Paratowyd a gwerthuswyd cyfnod sefydlog polystyren pegynol ar gyfer gwahanu cymysgeddau peptid synthetig a chrynodiadau trypsin o albwmin serwm dynol (HAS) mewn perfformiad uchel cromatograffaeth hylif cromatograffaeth.The perfformiad cromatograffig o golofnau PMP ar gyfer cymysgeddau peptid yn ardderchog o ran effeithlonrwydd gwahanu a resolution.The perfformiad gwahanu gwell o golofnau PMP oherwydd amrywiaeth o resymau, megis maint y gronynnau a'r cyfnod syntheseiddio a reolir y gronynnau mandwll, maint a'r cyfnod syntheseiddio o ronynnau mandwll. yn ychwanegol at effeithlonrwydd gwahanu uchel, pwysau cefn colofn isel ar gyfraddau llif uchel yn fantais arall o hyn colofnau phase.PMP llonydd yn arddangos atgynyrchioldeb da a gellir ei ddefnyddio ar gyfer dadansoddi cymysgeddau peptid a threuliad trypsin o proteins.We amrywiol yn bwriadu defnyddio'r golofn hon ar gyfer gwahanu cynhyrchion naturiol, cyfansoddion bioactif o blanhigion meddyginiaethol a darnau ffwngaidd mewn cromatograffaeth hylifol.Yn y dyfodol hefyd yn cael ei gloriannu monobodies protein a gwahanu proteinau monoclonaidd amrywiol proteins.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Ymchwil ar Systemau Gwahanu Peptid yn ôl Cromatograffaeth Cam Wrthdro Rhan I: Datblygu Protocol Nodweddu Colofn.J.Cromatograffeg.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved peptidau gweithredol a gynlluniwyd ar gyfer trin clefydau heintus.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptidau therapiwtig synthetig: gwyddoniaeth a'r darganfyddiad market.drug.15 (1-2) heddiw, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.09 (1-2).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Cromatograffaeth Hylif Proteomig Uwch.J.Cromatograffaeth.A 1261, 78–90 (2012).
Mae Liu, W. et al.Advanced hylif cromatograffaeth-sbectrometreg màs yn galluogi ymgorffori metabolomeg a phroteomeg wedi'u targedu'n fras.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Rôl UHPLC mewn datblygu cyffuriau.J.Medi Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AC Agweddau sylfaenol ac ymarferol ar gromatograffaeth hylif pwysedd ultrahigh ar gyfer gwahanu cyflym.J.Medi Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Dryw, SA a Tchelitcheff, P. Cymhwyso cromatograffaeth hylif perfformiad uchel iawn wrth ddatblygu cyffuriau.J.Cromatograffaeth.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic hydrogeliau macroporous a baratowyd o olew-mewn-dŵr emylsiynau cyfnod mewnol uchel ar gyfer puro effeithlon o enterovirws.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rôl cromatograffaeth hylifol mewn proteomeg.J.Cromatograffaeth.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Tueddiadau sy'n dod i'r amlwg mewn gwahaniadau cromatograffaeth hylif cyfnod gwrthdro rhwng peptidau a phroteinau therapiwtig: theori a chymwysiadau.J.Fferylliaeth.Gwyddoniaeth Biofeddygol.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Gwahaniad dau ddimensiwn o peptidau gan ddefnyddio system RP-RP-HPLC gan ddefnyddio gwerthoedd pH gwahanol yn y dimensiynau gwahanu cyntaf a'r ail.J.Medi Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ymchwiliwyd i nodweddion trosglwyddo màs a pherfformiad cinetig colofnau cromatograffig effeithlonrwydd uchel sy'n llawn C18 is-2 μm gronynnau mandyllog llawn ac arwynebol.J.Medi Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Tueddiadau diweddar a heriau dadansoddol o ran ynysu, nodi a dilysu planhigion bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-08018-x ().
Mueller, JB et al.Tirwedd proteomig teyrnas bywyd.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.
Yang, Y. & Geng, X. Cromatograffaeth modd cymysg a'i gymhwysiad i fiopolymerau.J.Cromatograffaeth.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands ar gyfer cromatograffaeth protein modd-cymysg: egwyddor, nodweddu, a dylunio.J.Biotechnoleg.144(1), 3-11 (2009).