Diolch am ymweld â Nature.com.Mae gan y fersiwn porwr rydych chi'n ei ddefnyddio gefnogaeth CSS gyfyngedig.I gael y profiad gorau, rydym yn argymell eich bod yn defnyddio porwr wedi'i ddiweddaru (neu analluogi Modd Cydnawsedd yn Internet Explorer).Yn y cyfamser, er mwyn sicrhau cefnogaeth barhaus, byddwn yn gwneud y wefan heb arddulliau a JavaScript.
Mae angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) yn blanhigyn leguminous a ddefnyddir ar gyfer cynhyrchu bwyd a gwella pridd.Mae ehangu byd -eang NLL fel cnwd wedi denu llawer o ffyngau pathogenig, gan gynnwys anthracnose lupine, sy'n achosi'r clefyd anthracnose dinistriol.Mae dau alel, LANR1 ac Anman, sy'n rhoi mwy o wrthwynebiad, wedi cael eu defnyddio mewn bridio NLL, ond mae'r mecanweithiau moleciwlaidd sylfaenol yn parhau i fod yn anhysbys.Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd marcwyr LANR1 ac ANMAN i sgrinio samplau NLL Ewropeaidd.Cadarnhaodd profi'r brechlyn mewn amgylchedd rheoledig effeithiolrwydd y ddau roddwr gwrthsefyll.Perfformiwyd proffilio mynegiant genynnau gwahaniaethol ar linellau gwrthsefyll cynrychioliadol a thueddol.Roedd gwrthiant anthracnose yn gysylltiedig â gor -iselder y termau ontoleg genynnau “GO: 0006952 Ymateb Amddiffyn”, “GO: 0055114 Proses Redox”, a “GO: 0015979 ffotosynthesis”.Yn ogystal, dangosodd llinell LANR1 (83A: 476) ailraglennu trawsgrifiad sylweddol yn gyflym ar ôl eu brechu, tra bod y llinellau eraill yn dangos oedi yn yr ymateb hwn tua 42 awr.Mae ymatebion amddiffyn yn gysylltiedig â'r genynnau TIR-NBS, CC-NBS-LRR a NBS-LRR, 10 protein sy'n ymwneud â phathogenesis, proteinau trosglwyddo lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, proteinau wal gell sy'n llawn glycin, a genynnau o lwybr adweithiol o ocsigen.Roedd ymatebion cynnar i 83A: 476, gan gynnwys atal genynnau sy'n gysylltiedig â ffotosynthesis yn ofalus, yn cyd -daro ag amddiffyniad llwyddiannus yn ystod cyfnod twf llystyfol bioleg ffwngaidd, gan awgrymu bod effeithydd yn sbarduno imiwnedd.Mae adwaith Mandeloop yn cael ei arafu, fel y mae'r llusgo llorweddol cyffredinol.
Mae'r lupine dail cul (NLL, Lupinus angustifolius L.) yn rawnfwyd protein uchel sy'n tarddu o ranbarth gorllewinol Môr y Canoldir1,2.Ar hyn o bryd mae'n cael ei dyfu fel cnwd bwyd i anifeiliaid a bodau dynol.Mae hefyd yn cael ei ystyried yn dail gwyrdd mewn systemau cylchdroi cnydau oherwydd gosodiad nitrogen gan facteria trwsio nitrogen symbiotig a gwella strwythur y pridd yn gyffredinol.Mae NLL wedi cael proses gyflym o ddofi yn y ganrif ddiwethaf ac mae'n dal i fod o dan bwysau bridio uchel3,4,5,6,7,8,9,9,10,11,12.Gyda thyfu NLL yn eang, datblygodd olyniaeth ffyngau pathogenig gilfachau amaethyddol newydd ac achosi afiechydon newydd sy'n dinistrio cnwd. Y mwyaf rhyfeddol i ffermwyr a bridwyr lupine oedd ymddangosiad anthracnose, a achoswyd gan y ffwng pathogenig, Colletotrichum Lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler a Hagedorn13. Y mwyaf rhyfeddol i ffermwyr a bridwyr lupine oedd ymddangosiad anthracnose, a achoswyd gan y ffwng pathogenig, Colletotrichum Lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler a Hagedorn13. Наиболее примечательным для фереров и селелекционеров люпина ыыло поumиumнCOut аOut аOut пOut п пOut п пOut а пOut аOutз Upini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Yn fwyaf nodedig i ffermwyr a bridwyr lupine oedd ymddangosiad anthracnose a achoswyd gan y ffwng pathogenig Colletotrichum Lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于 羽扇豆 农民 和 饲养者 来说 ， ， 最 引 人注目 的 是 炭疽病 的 出现 ， 它 它 是 由 病原 真菌 Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 引起 的 的 的 的。 的 引起 的。。。。。。。。。。。。。。对于 羽扇豆 农民 和 饲养者 来说 ， ， 最 引 人注目 的 是 炭疽病 的 出现 ， 它 它 是 由 病原 真菌 Colletotrichum lupini (Bondar) 嵵 Haired。1 Yn fwyaf trawiadol i ffermwyr a bridwyr lupine yw ymddangosiad anthracnose a achosir gan y ffwng pathogenig Colletotrichum Lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Daeth adroddiadau cynharaf y clefyd o Brasil a'r Unol Daleithiau, gyda symptomau nodweddiadol yn ymddangos ym 1912 a 1929 yn y drefn honno.Fodd bynnag, ar ôl tua 30 mlynedd, dynodwyd y pathogen fel colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., Teleomorph Glomerella Cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Teleomorph Glomerella Cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Телеомор peth Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Teleomorph o Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc. ， 有 目的 形态 的 Glomerella Cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc. ， 有 目的 形态 的 Glomerella Cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в целенаправленнной мор pethологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld mewn morffoleg wedi'i thargedu. & H. Schrenk,. & H. Schrenk ,.a H. Schrenk. & H. 施伦克 ，。 & H. 施伦克 ，。a H. Schlenk ,.Dangosodd ffenoteipio clefyd rhagarweiniol a wnaed yng nghanol yr 20fed ganrif rywfaint o wrthwynebiad mewn derbyniadau NLL a lupine melyn (L. luteus L.), ond roedd yr holl dderbyniadau lupine gwyn (L. albus L.) a brofwyd yn agored iawn i niwed15,16.Mae astudiaethau wedi dangos bod datblygiad anthracnose yn gysylltiedig â dyodiad cynyddol (lleithder aer) a thymheredd (yn yr ystod o 12-28 ° C), gan arwain at dorri gwrthiant ar dymheredd uwch17, 18. Mewn gwirionedd, roedd yr amser sy'n ofynnol i conidia egino a'r clefyd i ddechrau, bedair awr) o dan yr oriau 40 C199 99.Felly, mae'r cynhesu byd -eang parhaus wedi arwain at ledaenu anthracnose.Fodd bynnag, arsylwyd y clefyd yn Ffrainc (1982) a'r Wcráin (1983) fel un o fygythiad sydd ar ddod, ond mae'n debyg iddo gael ei anwybyddu gan y diwydiant Lupine ar yr amser20,21.Ychydig flynyddoedd yn ddiweddarach, ymledodd y clefyd dinistriol hwn ledled y byd a hefyd effeithio ar wledydd mawr sy'n cynhyrchu lupine fel Awstralia, Gwlad Pwyl a'r Almaen22,23,24.Yn dilyn achos o anthracnose yng nghanol y 1990au, arweiniodd sgrinio helaeth at nodi sawl rhoddwr gwrthsefyll mewn samplau NLL19.Mae ymwrthedd NLL i anthracnose yn cael ei reoli gan ddau alel ddominyddol ar wahân a geir mewn gwahanol ffynonellau germplasm: LANR1 yn Cultivar Tanjil ac Wonga ac Anman yn Cyltifar.Mandalay 25, 26. Mae'r alelau hyn yn ategu'r marcwyr moleciwlaidd sy'n cefnogi'r dewis o germplasm gwrthsefyll mewn rhaglenni bridio25,26,27,28,29,30.Y llinell fridio gwrthsefyll 83a: 476 Croeswyd yr alel LANR1 gyda'r llinell wyllt tueddol P27255 i gael poblogaeth RIL yn gwahanu am wrthwynebiad anthracnose, a oedd yn ei gwneud yn bosibl aseinio locws LANR1 i fap nell-1131, 32, 32, 32, 32 i fapio fflam datgelodd leoliad y tri alel ar yr un cromosom (NLL-11), ond mewn gwahanol swyddi29,34,35.Fodd bynnag, oherwydd y nifer fach o RILs a'r pellter genetig mawr rhwng marcwyr ac alelau cyfatebol, ni ellir dod i gasgliadau dibynadwy am eu genynnau sylfaenol.Ar y llaw arall, mae'n anodd defnyddio geneteg gwrthdroi mewn lupins oherwydd eu potensial adfywio isel iawn, sy'n gwneud trin genetig yn feichus37.
Mae datblygiad germplasm dof yn cario'r alel a ddymunir yn y wladwriaeth homosygaidd, megis 83a: 476 (LANR1) a Mandelup (Anman), wedi agor y drws i astudio ymwrthedd anthracnose yn wyneb presenoldeb gwrthwynebu cyfuniadau o alelau mewn poblogaethau gwyllt.Posibiliadau mecanweithiau moleciwlaidd.Cymharwch ymatebion amddiffyn a gynhyrchir gan genoteipiau penodol.Gwerthusodd yr astudiaeth hon ymateb trawsgrifiad cynnar NLL i frechu C. lupini.Yn gyntaf, sgriniwyd panel germplasm NLL Ewropeaidd sy'n cynnwys 215 llinell gan ddefnyddio marcwyr moleciwlaidd sy'n nodi'r alelau LANR1 ac Anman.Yna perfformiwyd ffenoteipio anthracnose ar 50 llinell NLL, a ddewiswyd yn flaenorol ar gyfer marcwyr moleciwlaidd, o dan amodau rheoledig.Yn seiliedig ar yr arbrofion hyn, dewiswyd pedair llinell sy'n wahanol o ran ymwrthedd anthracnose a chyfansoddiad alel LANR1/ANMAN ar gyfer proffilio mynegiant genynnau amddiffyn gwahaniaethol gan ddefnyddio dau ddull cyflenwol: dilyniant RNA trwybwn uchel a meintioli PCR amser real.
Dangosodd sgrinio set o germplasm NLL (n = 215) gyda marcwyr LANR1 (ANSEQ3 ac ANSEQ4) ac Anman (ANSEQ4) ac Anman (Anmanm1) mai dim ond un llinell (95726, ger Salamanca-B) sy'n chwyddo'r alel “gwrthiant” i bob marc, tra bod yr holl farcwyr ”yn canfod yr holl farcwyr, tra bod yr holl farcwyr, tra bod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, tra bod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn canfod yr holl farcwyr, yn dod o hyd i bob marc, llinellau.Cynhyrchodd tair llinell ar ddeg ddwy alel “gwrthsefyll” o farciwr LANR1, ac roedd 8 llinell yn cynhyrchu alelau “gwrthsefyll” LANR1.marciwr.Alel “gwrthiant” y marciwr anman (Tabl Atodol S1).Roedd dwy linell yn heterosygaidd ar gyfer marciwr ANSEQ3 ac un heterosygaidd ar gyfer marciwr Anmanm1.Roedd 42 llinell (19.5%) yn cario cyfnodau gyferbyn yr alelau ANSEQ3 ac ANSEQ4, gan nodi amledd uchel o ailgyfuno rhwng y ddau loci hyn.Datgelodd ffenoteipiau anthracnose o dan amodau rheoledig (Tabl Atodol S2) amrywioldeb yng ngwrthwynebiad y genoteipiau a brofwyd, a adlewyrchwyd yn nifrifoldeb anthracnose.Roedd y gwahaniaethau mewn sgoriau cymedrig yn amrywio o 1.8 (gwrthsefyll cymedrol) i 6.9 (tueddol) ac roedd gwahaniaethau pwysau planhigion yn amrywio o 0.62 (tueddol) i 4.45 g (gwrthsefyll). Roedd cydberthynas sylweddol rhwng gwerthoedd a welwyd mewn dau ddyblygiad o'r arbrawf (0.51 ar gyfer sgoriau difrifoldeb afiechydon, p = 0.00017 a 0.61 ar gyfer pwysau planhigion, p <0.0001) yn ogystal â rhwng y ddau baramedr hyn ( - 0.59 a - 0.77, p <0.0001). Roedd cydberthynas sylweddol rhwng gwerthoedd a welwyd mewn dau ddyblygiad o'r arbrawf (0.51 ar gyfer sgoriau difrifoldeb afiechydon, p = 0.00017 a 0.61 ar gyfer pwysau planhigion, p <0.0001) yn ogystal â rhwng y ddau baramedr hyn ( - 0.59 a - 0.77, p <0.0001). Ыыявлена ​​достоверная корреляция между значенини, наблюдаемымher в д пOutвOutв я я я я я я я х я я п я пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOut пOL. лезни, p = 0,00017 и 0,61 для масы растения, p <0,0001), а т также между этими двумя парара рor, 0,0001). Canfuwyd cydberthynas sylweddol rhwng y gwerthoedd a arsylwyd mewn dau ailadrodd yr arbrawf (0.51 ar gyfer sgoriau difrifoldeb afiechydon, p = 0.00017 a 0.61 ar gyfer pwysau planhigion, p <0.0001), yn ogystal â rhwng y ddau baramedr hyn ( - 0.59 a -0.77, p <0.0001) 0.0001).在 两 次 重复 实验 中 观察 观察 到 的 值 之间 存在 显着 相关性 （疾病 严重 严重 程度 分为 分为 0.51 ， p = 0.00017 ， 植物 重量 为 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 以及 这 这 两 个 参数 之间 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和 和。 和 和。 和。 和。 和 和。。 和 和 和 和 和。。。。 和 和。 和。 和 和 和 和 和 和 和。 和 和。。. Наблюдалась значительная корреляция между значеними, наблююдаемы ми в 0 п1, p. . Roedd cydberthynas sylweddol rhwng y gwerthoedd a welwyd yn ddyblyg (sgôr difrifoldeb afiechyd 0.51, p = 0.00017 a phwysau planhigion 0.61, p <0.0001) a rhwng y ddau baramedr hyn (-0.59 a -0 .0001) 0.77, p <0.0001. ).Mae'r symptomau nodweddiadol a welir mewn planhigion tueddol yn cynnwys cincio a throelli'r coesyn yn debyg i strwythur “bwa bugail”, ac yna briwiau hirgrwn gyda sporozoites oren/pinc (Ffig Atodol 1).Mae derbyniadau Awstralia sy'n cario'r genynnau LANR1 (83A: 476 a Tanjil) ac Anman (Mandelup) yn gallu gwrthsefyll cymedrol, 0.0331 a 0.0036).Mae rhai llinellau sydd hefyd yn cario alelau LANR1 a/neu Anman “gwrthsefyll” yn dangos symptomau'r afiechyd.
有趣 的 是 ， 一些 一些 任何 任何 “抗性” 标记 等 位 基因 的 nll 系 显示 出高 水平 的 的 炭疽 （（与 LANR1 或 ANMAN 基因型 相当 或 更 更 高 高 ， 例如 例如 例如 BOREGINE （0. ） 和 种群 B-549/79B （得分 P 值 <0.0001 ， 重量 不 显着 显着）。。 Yn ddiddorol, dangosodd rhai llinellau NLL heb unrhyw alelau marciwr 'gwrthiant' lefelau uchel o wrthwynebiad anthracnose (tebyg i neu'n uwch na genoteipiau LANR1 neu ANMAN), megis turegine (gwerth p ar gyfer y ddau baramedr <0.0001), Bojar (p-value not not notion <0.0001).Mae'r ffenomen hon yn awgrymu'r posibilrwydd o ffynhonnell genetig newydd o wrthwynebiad, gan esbonio'r diffyg cydberthynas a welwyd rhwng genoteipiau marciwr a ffenoteipiau afiechydon (gwerthoedd P o ~ 0.42 i ~ 0.98).Felly, dangosodd y prawf Kolmogorov-Smirnov fod y data ar wrthwynebiad anthracnose wedi'u dosbarthu bron fel arfer ar gyfer sgoriau (gwerthoedd p 0.25 a 0.11) a màs planhigion (gwerthoedd p 0.47 a 0.55), gan awgrymu i ddamcaniaethu fy mod yn damcaniaethu bod mwy o alelau na LANR1 ac anman yn cymryd rhan.
Yn seiliedig ar ganlyniadau sgrinio gwrthiant anthracnose, dewiswyd 4 llinell ar gyfer dadansoddiad trawsgrifiad: 83a: 476, turegine, mandelup, a phoblogaeth 22660. Ailbrofwyd y llinellau hyn ar gyfer ymwrthedd anthracs mewn arbrofion brechu trwy ddilyniant RNA, ar yr amod eu bod yr un peth ag yr oedd yr un peth ag yn y prawf blaenorol.Roedd y gwerthoedd sgôr fel a ganlyn: Borygin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) a phoblogaeth 22660 (6.11 ± 1.29).
Cyflawnodd Protocol Illumina Novaseq 6000 gyfartaledd o 40.5 pâr â rheng fesul sampl (29.7 i 54.4 MARRES) (Tabl Atodol S3).Roedd sgoriau alinio yn y dilyniant cyfeirio yn amrywio o 75.5% i 88.6%.Roedd cydberthynas cyfartalog data cyfrif darllen rhwng amrywiadau arbrofol rhwng dyblygiadau biolegol yn amrywio o 0.812 i 0.997 (cymedr 0.959). O'r 35,170 o enynnau a ddadansoddwyd, ni ddatgelodd 2917 unrhyw fynegiant, a mynegwyd y 4785 o enynnau eraill ar lefel ddibwys (cymedr sylfaenol <5). O'r 35,170 o enynnau a ddadansoddwyd, ni ddatgelodd 2917 unrhyw fynegiant, a mynegwyd y 4785 o enynnau eraill ar lefel ddibwys (cymedr sylfaenol <5). Из 35 170 проалнализированных генов 2917 не провлity экспрессии, а о остальные 4785 гемиээээээ helaeth не (базовое среднее <5). O'r 35,170 o enynnau a ddadansoddwyd, ni ddangosodd 2917 unrhyw fynegiant, a mynegwyd y 4785 o enynnau sy'n weddill ar lefel ddibwys (cymedr sylfaenol <5).在 分析 的 35,170 个 基因 中 ， 2917 个 没有 表达 ， 其他 4785 个 基因 的 的 表达 可以 （（基本 基本 平均值 <5）。。35,170 ? еднее значение <5). O'r 35,170 o enynnau a ddadansoddwyd, ni fynegwyd 2917 ac roedd gan y 4785 o enynnau sy'n weddill fynegiant dibwys (cymedr sylfaenol <5).Felly, nifer y genynnau a ystyriwyd a fynegwyd (cymedr sylfaenol ≥ 5) yn ystod yr arbrawf oedd 27,468 (78.1%) (Tabl Atodol S4).
O'r pwynt amser cyntaf, ymatebodd pob llinell NLL i frechu C. lupini (straen Col-08) trwy ailraglennu'r trawsgrifiad (Tabl 1), fodd bynnag, gwelwyd gwahaniaethau sylweddol rhwng y llinellau.Felly, dangosodd y Llinell Gwrthiant 83A: 476 (wrth gario'r genyn LANR1) ailraglennu trawsgrifiad sylweddol ar y pwynt tro cyntaf (6 hpi) gyda chynnydd o 31-69 gwaith yn nifer y genynnau i fyny ac i lawr ynysig o gymharu â phwyntiau amser eraill ar yr adeg hon.Yn ogystal, byrhoedlog oedd y brig hwn, gan fod mynegiant dim ond ychydig o enynnau wedi aros yn sylweddol wedi'i newid yn sylweddol ar yr ail bwynt amser (12 hpi).Yn ddiddorol, ni chafodd Boregine, a oedd hefyd yn dangos lefel uchel o wrthwynebiad yn y prawf impiad, ailraglennu trawsgrifio mor enfawr yn ystod yr arbrawf.Fodd bynnag, roedd nifer y genynnau a fynegwyd yn wahanol (DEG) yr un peth ar gyfer Boregine ac 83A: 476 ar 12 hpi.Dangosodd Mandelup a phoblogaeth 22660 DEG Peaks ar y pwynt amser olaf (48 L/s), gan nodi oedi cymharol mewn ymatebion amddiffyn.
Oherwydd bod 83a: 476 wedi cael ailraglennu trawsgrifiad enfawr mewn ymateb i C. lupini ar 6 hpi o'i gymharu â phob llinell arall, roedd ~ 91% o'r DEGs a welwyd ar yr adeg hon yn benodol i linach (Ffig. 1).Fodd bynnag, bu rhywfaint o orgyffwrdd mewn ymatebion cynnar rhwng llinellau astudio, gan fod 68.5%, 50.9%, a 52.6%deg mewn turegine, Mandelup, a phoblogaeth 22660, yn y drefn honno, yn gorgyffwrdd â'r rhai a ddarganfuwyd yn 83A: 476 mewn rhai pwyntiau mewn amser.Fodd bynnag, dim ond ffracsiwn bach (0.97–1.70%) o'r holl DEGs a ganfuwyd ar hyn o bryd gan ddefnyddio 83A: 476 oedd y DEGs hyn yn cyfrif am y DEGau bach.Yn ogystal, roedd 11 deg o bob llinell yn gydlynol ar yr adeg hon (Tablau Atodol S4-S6), gan gynnwys cydrannau cyffredin o ymatebion amddiffyn planhigion: protein trosglwyddo lipid (Tanjilg_32225), endoglucan-1,3-β-glucoside ensym , protein latecs sylfaenol (TANJILG_32352), a dau brotein wal gell strwythurol llawn glycin (TANJILG_19701 a TANJILG_19702).Roedd gorgyffwrdd cymharol uchel hefyd mewn ymatebion trawsgrifiad rhwng 83a: 476 a boregine ar 24 hpi (cyfanswm 16-38% deg) a rhwng mandelup a phoblogaeth 22660 ar 48 hpi (cyfanswm 14-20% deg).
Diagram Venn yn dangos nifer y genynnau a fynegir yn wahanol (DEG) mewn llinellau lupine dail cul (NLL) wedi'u brechu â colletotrichum lupini (straen col-08 a gafwyd o gaeau lupine yn Wierzhenice yn Wierzhenice, Gwlad Pwyl, 1999).Y llinellau NLL a ddadansoddwyd oedd: 83A: 476 (gwrthsefyll, cario'r alel LANR1), tureGine (gwrthsefyll, cefndir genetig anhysbys), Mandelup (yn gallu gwrthsefyll cymedrol, yn cario'r alel Anman) a phoblogaeth 22660 (yn agored iawn).Mae'r talfyriad HPI yn sefyll am oriau ar ôl brechu.Mae gwerthoedd sero wedi'u tynnu i symleiddio'r graff.
Dadansoddwyd y set o enynnau sydd wedi'u gor -bwysleisio ar 6 hpi ar gyfer presenoldeb parthau genynnau R canonaidd (Tabl Atodol S7).Datgelodd yr astudiaeth hon ymsefydlu trawsgrifiad o enynnau ymwrthedd clefydau clasurol gyda pharthau NBS-LRR yn unig yn 83A: 476.Roedd y set hon yn cynnwys un genyn TIR-NBS-LRR (TANJILG_05042), pum genyn CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, a phedwar nbs-lbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs-lbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs-lbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs, a phedwar nbs-lbS Tanjilg_16162) yn ogystal â phedwar NBS-LRR (TANJILG_16162) a phedwar NBS-LRR (TANJILG_16162).Mae gan bob un o'r genynnau hyn barthau canonaidd wedi'u trefnu mewn dilyniannau gwarchodedig.Yn ychwanegol at y genynnau parth NBS-LRR, actifadwyd sawl cinase RLL ar 6 hpi, sef un yn Boregine (tanjilg_19877), dau yn Mandelup (tanjilg_07141 a tanjilg_19877) ac ym mhoblogaeth 22660 (tanjilg_09 a thanjilg_01 a thanjilg_01 a thanjilg_09
Roedd genynnau â mynegiant wedi'i newid yn sylweddol mewn ymateb i frechu â C. lupini (straen Col-08) yn destun dadansoddiad cyfoethogi ontoleg genynnau (GO) (Tabl Atodol S8). Y term proses fiolegol a or -gynrychiolwyd amlaf oedd “GO: 0006952 ymateb amddiffyn” a ymddangosodd mewn 6 allan o 16 (amser × llinell) cyfuniadau ag arwyddocâd uchel (gwerth p <0.001) (Ffig. 2). Y term proses fiolegol a or -gynrychiolwyd amlaf oedd “GO: 0006952 ymateb amddiffyn” a ymddangosodd mewn 6 allan o 16 (amser × llinell) cyfuniadau ag arwyddocâd uchel (gwerth p <0.001) (Ffig. 2). Наиболее часто чрезмерно представленным терином биологического процеса ы ы »», 0006952 000, из 16 (время × линия) комбинаций с ысокой значимостюю (значение p <0,001) (рис. 2). Y term proses fiolegol a or -gynrychiolwyd amlaf oedd 'GO: 0006952 ymateb amddiffyn', a ymddangosodd mewn 6 o 16 (amser × llinach) cyfuniadau ag arwyddocâd uchel (gwerth p <0.001) (Ffig. 2).最 常 被 被 过度 的 的 生物 过程 术语 是 “GO: 0006952 防御 反应” ， 它 出现 在 16 个 个 （时间 × 线） 组合 中 的 的 6 个 中 中 ， ， 具有 高 高 显着性 显着性 （（（p 值 值 <0.001） （（）） Y term proses fiolegol mwyaf cynrychioliadol yw “GO: 0006952 Ymateb Amddiffyn”, sy'n ymddangos mewn 6 o'r cyfuniadau 16 (时间 × 线), gyda arwyddocâd uchel (gwerth p <0.001) (图 2). Наиболее часто чрезмерно представленным терином биологического процеса ыoughasoch «go: 0006952 000 Â 000 Â 000 Â 000 Â 000 Â 000 Â 000 Â. аций (время × линия) с ысокой значимостюю (значение p <0,001) (рис. 2). Y term proses fiolegol a or -gynrychiolwyd amlaf oedd 'GO: 0006952 ymateb amddiffyn', a ymddangosodd mewn 6 allan o 16 cyfuniad (amser × llinell) gydag arwyddocâd uchel (gwerth p <0.001) (Ffig. 2).Cafodd y term hwn ei or -gynrychioli ar ddau bwynt amser yn 83A: 476 a Boregine (6 a 24 HPI) ac ar un pwynt amser yn Mandelup a phoblogaeth 22660 (12 a 6 HPI, yn y drefn honno).Mae hwn yn ganlyniad disgwyliedig, gan amlygu ymateb gwrthffyngaidd y llinellau gwrthiannol.Yn ogystal, ymatebodd 83a: 476 i C. lupini trwy ysgogi genynnau yn gyflym sy'n gysylltiedig â'r byrst ocsideiddiol a gynrychiolir gan y term “GO: 0055114 Proses Redox”, gan nodi ymateb amddiffyn penodol, tra bod Boregine wedi datgelu ymatebion amddiffyn penodol, yn gysylltiedig â'r term 'GO'.: 0006950 Ymateb Straen ”.Poblogaeth 22660 Wedi'i actifadu Mae'r ymateb gwrthiant llorweddol yn cynnwys metabolion eilaidd, gan dynnu sylw at y nifer gormodol o dermau “GO: 0016104 Proses o biosynthesis Triterpene” a “GO: 0006722 Proses Metaboledd Triterpene” (roedd y ddau derm yn perthyn i'r un set o Genethau, gan gymryd y set o Genethau, gan gymryd y set Genethau, gan gymryd y Tymor INSECTIONSE, gan gymryd y Tymor INSECTIONSE. 0. Yn ogystal, mae ymateb cynnar 83a: 476 (6 hpi) ac oedi mandelup adwaith a phoblogaeth 22660 yn cynnwys y term GO: 0015979 'ffotosynthesis' ac eraill prosesau biolegol cysylltiedig.
Mae'r termau ontoleg genynnau bioprocess a ddewiswyd wrth anodi genynnau a fynegir yn wahanol yn ystod ymatebion trawsgrifiadome o lupine dail cul (NLL) wedi'u brechu â lupine anthracs (straen col-08 a gafwyd o gaeau lupine yn Wierzhenice, Gwlad Pwyl, yn 1999) yn cael eu dyfynnu'n fawr.Y llinellau NLL a ddadansoddwyd oedd: 83A: 476 (gwrthsefyll, yn cario'r alel LANR1 homosygaidd), tureGine (gwrthsefyll, cefndir genetig anhysbys), mandelup (gwrthsefyll cymedrol, yn cario'r alel anman homosygaidd) a phoblogaeth 22660 (tueddadwy).
Oherwydd bod yr astudiaeth hon yn anelu at nodi genynnau sy’n cyfrannu at wrthwynebiad anthracnose, dadansoddwyd y genynnau a neilltuwyd i’r termau “GO: 0006952 Ymatebion Amddiffynnol” a “GO: 0055114 prosesau rhydocs” gyda thoriadau gan fod y llinell sylfaen yn golygu ≥ 30 gydag o leiaf un llinell.× Pwynt mewn amser gan gyfuno gwerthoedd ystadegol arwyddocaol log2 (newid plyg).Nifer y genynnau a oedd yn cwrdd â'r meini prawf hyn oedd 65 ar gyfer GO: 0006952 a 524 ar gyfer GO: 0055114.
83A: Datgelodd 476 ddau gopa deg wedi'u hanodi â'r term GO: 0006952, y cyntaf ar 6 genyn y fodfedd (64 genyn, rheoleiddio i fyny ac i lawr) a'r ail ar 24 genyn y fodfedd (15 genyn, i fyny rheoleiddio i fyny yn unig).Dangosodd Boregine hefyd fod GO: 0006952 wedi cyrraedd uchafbwynt ar yr un pwynt amser, ond gyda llai o DEG (11 ac 8) ac actifadu ffafriol.Dangosodd Mandeloop ddau gopa o GO: 0006952 yn 12 a 48 hpi, y ddau yn cario 12 genyn (y cyntaf gyda genynnau actifadu, a'r ail gyda genynnau ataliol yn unig), tra bod gan y boblogaeth 22660 yn 6 hpi (13 genyn) fwy o oruchafiaeth yr uchafbwynt cynnydd.rheoleiddio.Dylid nodi bod gan 96.4% o GO: 0006952 deg yn y copaon hyn yr un math o ymateb (i fyny neu i lawr), gan nodi gorgyffwrdd sylweddol mewn ymatebion amddiffyn er gwaethaf gwahaniaethau yn nifer y genynnau dan sylw.Mae'r grŵp mwyaf o ddilyniannau sy'n gysylltiedig â'r term GO: 0006952 yn amgodio'r newyn sy'n gysylltiedig â straen protein 22 (tebyg i SAM22), sy'n perthyn i'r clade protein protein sy'n gysylltiedig â pathogenesis Dosbarth 10 (PR-10) a'r latecs protein craidd.protein tebyg (tebyg i MLP)) protein (Ffig. 3).Roedd y ddau grŵp yn amrywio o ran natur mynegiant a chyfeiriad yr ymateb.Roedd y genynnau a oedd yn amgodio proteinau tebyg i Sam22 yn dangos ymsefydlu cyson a sylweddol ar adegau cynnar (6 neu 12 hpi) ac yn gyffredinol roeddent yn anymatebol ar ddiwedd yr arbrawf (48 hpi), tra bod proteinau tebyg i MLP yn dangos cydgysylltiad ar 6 hpi.hpi.83a: 476 a Mandelup yn 48 hp/i mewn, roedd bron pob pwynt data arall yn anymatebol.Yn ogystal, roedd gwahaniaethau mewn proffiliau mynegiant genynnau protein tebyg i SAM22 yn dilyn amrywioldeb arsylwi mewn ymwrthedd anthracnose, gan fod gan linellau mwy gwrthsefyll fwy o bwyntiau amser yn cymell y genynnau hyn yn sylweddol na genynnau mwy tueddol.Dangosodd genyn PR-10 tebyg i LLR18A/B arall batrwm mynegiant tebyg iawn i'r genyn protein tebyg i SAM22.
Nodwyd prif gydrannau term y broses fiolegol “GO: 0006952 Ymateb Amddiffyn” a phatrymau mynegiant genynnau ymgeisydd yr alelau LANR1 ac Anman.Mae'r raddfa log2 yn cynrychioli gwerthoedd log2 (newid plygu) rhwng brechedig (colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd o gaeau lupine, Wizhenica, Gwlad Pwyl, 1999) a phlanhigion rheoli (wedi'u nocio ffug) ar yr un pwynt amser.Dadansoddwyd y llinellau lupine cultleaf canlynol: 83a: 476 (gwrthsefyll, yn cario'r alel LANR1 homosygaidd), tureGine (gwrthsefyll, cefndir genetig yn anhysbys), mandelup (gwrthsefyll gweddol wrthsefyll, yn cario'r alel anman homosygaidd), a phoblogaeth 22660 (tueddiad).
Yn ogystal, gwerthuswyd proffiliau mynegiant genynnau ymgeisydd RNA-seq LANR1 (TANJILG_05042) ac ANMAN (TANJILG_12861) (Ffig. 3).Dangosodd y genyn tanjilg_05042 ymateb sylweddol (actifadu) yn 83a: 476 yn unig ar y pwynt tro cyntaf (6 hpi), tra bod tanjilg_12861 yn arwyddocaol mewn mandeloop yn unig ar ddau bwynt amser: 6 hpi (rheoleiddio i lawr) a 24 hpi (6 hpi).Gyda.).addasadwy)).
Y genynnau mwyaf gorlawn yn y term GO: 0055114 Roedd “proses rhydocs” yn enynnau a oedd yn amgodio proteinau cytochrome P450 a peroxidase (Ffig. 4).Ar gyfer samplau sydd wedi'u hynysu oddi wrth 83a: 476 ar 6 hpi, gwelwyd gwerthoedd log2 uchaf neu isafswm (newid plyg) (ar gyfer 86.6% o enynnau) yn gyffredinol rhwng planhigion wedi'u brechu a rheoli, gan dynnu sylw at ymateb uchel y genoteip hwn i frechu rhyw.83A: Dangosodd 476 y GO mwyaf arwyddocaol: 0055114 deg ar 6 hpi (503 genyn), tra bod gweddill y llinellau yn 48 hpi (tureGine, 31 genyn; mandelup, 85 genyn; a phoblogaeth 22660, 78 genyn).Yn y mwyafrif o enynnau'r teulu GO: 0055114, gwelwyd dau fath o ymateb i frechu (actifadu a gwaharddiad).Yn ddiddorol, mae hyd at 97.6% o'r DEGs a nodwyd ar gyfer y tymor GO: 0055114 yn Mandelupe ar 48 hp Mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu, er gwaethaf y raddfa sylweddol llai (hy, nifer y genynnau rhydocs treigledig, 85 yn erbyn 503), y patrwm o ymatebion trawsgrifiad oedi yw 8 i The Cynnare: 4 i The Cynnare: 4.Yn Boregine a phoblogaeth 22660, mae'r cydgyfeiriant hwn yn is ar 51.6% a 75.6%, yn y drefn honno.
Datgelwyd patrymau mynegiant prif gydrannau term y broses fiolegol “GO: 0055114 Redox process”.Mae'r raddfa log2 yn cynrychioli gwerthoedd log2 (newid plygu) rhwng brechedig (colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd o gaeau lupine, Wizhenica, Gwlad Pwyl, 1999) a phlanhigion rheoli (wedi'u nocio ffug) ar yr un pwynt amser.Dadansoddwyd y llinellau lupine cultleaf canlynol: 83a: 476 (gwrthsefyll, yn cario'r alel LANR1 homosygaidd), tureGine (gwrthsefyll, cefndir genetig yn anhysbys), mandelup (gwrthsefyll gweddol wrthsefyll, yn cario'r alel anman homosygaidd), a phoblogaeth 22660 (tueddiad).
83A: 476 Roedd ymatebion trawsgrifiadomig i frechu â C. lupini (straen Col-08) hefyd yn cynnwys distewi cydgysylltiedig genynnau a briodolir i'r term GO: 0015979 “ffotosynthesis” a phrosesau biolegol cysylltiedig eraill (Ffig. 5).Roedd hyn yn mynd: roedd set 0015979 deg yn cynnwys 105 o enynnau a gafodd eu gormesu'n sylweddol ar 6 hpi ar 83a: 476.Yn yr is -set hon, cafodd 37 genyn eu dadreoleiddio hefyd yn Mandelup ar 48 hpi a 35 ar yr un pwynt amser yn y boblogaeth 22660, gan gynnwys 19 DEG sy'n gyffredin i'r ddau genoteip.Nid oedd unrhyw DEGs yn ymwneud â thymor GO: roedd 0015979 wedi'u actifadu'n sylweddol mewn unrhyw gyfuniad (llinell x amser).
Datgelwyd patrymau mynegiant prif gydrannau term y broses fiolegol “GO: 0015979 Photosynthesis”.Mae'r raddfa log2 yn cynrychioli gwerthoedd log2 (newid plygu) rhwng brechedig (colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd o gaeau lupine, Wizhenica, Gwlad Pwyl, 1999) a phlanhigion rheoli (wedi'u nocio ffug) ar yr un pwynt amser.Dadansoddwyd y llinellau lupine cultleaf canlynol: 83a: 476 (gwrthsefyll, yn cario'r alel LANR1 homosygaidd), tureGine (gwrthsefyll, cefndir genetig yn anhysbys), mandelup (gwrthsefyll gweddol wrthsefyll, yn cario'r alel anman homosygaidd), a phoblogaeth 22660 (tueddiad).
Yn seiliedig ar ganlyniadau dadansoddiad mynegiant gwahaniaethol ac yn ôl pob tebyg yn ymwneud ag ymatebion amddiffyn yn erbyn ffyngau pathogenig, dewiswyd y set hon o saith genyn ar gyfer meintioli proffiliau mynegiant gan PCR amser real (Tabl Atodol S9).
Cafodd y genyn protein tybiedig TANJILG_10657 ei gymell yn sylweddol ym mhob llinell a phwynt amser a astudiwyd o gymharu â phlanhigion rheoli (dynwared) (Tablau Atodol S10, S11).Yn ogystal, dangosodd proffil mynegiant TanjilG_10657 duedd gynyddol dros gyfnod yr arbrawf ar gyfer pob llinell.Dangosodd poblogaeth 22660 y sensitifrwydd uchaf o TANJILG_10657 i frechu gydag actifadu 114 gwaith a'r lefel mynegiant gymharol uchaf (4.4 ± 0.4) ar 24 hpi (Ffig. 6a).Dangosodd y genyn protein PR10 LLR18A TANJILG_27015 hefyd actifadu ar draws pob llinell a phwynt amser, gydag arwyddocâd ystadegol ar y mwyaf o bwyntiau data (Ffig. 6 B).Yn debyg i TANJILG_10657, gwelwyd y lefel mynegiant cymharol uchaf o TANJILG_27015 yn y boblogaeth wedi'i brechu 22660 yn 24 hpi (19.5 ± 2.4).Cafodd y genyn endochitinase asid TanjilG_04706 ei uwchreoleiddio'n sylweddol ym mhob llinell ac ar bob pwynt amser ac eithrio Boregine 6 hpi (Ffig. 6c).Fe'i cymhellwyd yn gryf ar y pwynt tro cyntaf (6 HPI) ar 83A:476 (o 10.5 gwaith) a'i gynyddu'n gymedrol mewn llinellau eraill (6.6-7.5 gwaith).Yn ystod yr arbrawf, arhosodd mynegiant TANJILG_04706 ar lefelau tebyg yn 83A: 476 a boregine, tra yn Mandelup a phoblogaeth 22660 cynyddodd yn sylweddol, gan gyrraedd gwerthoedd cymharol uchel (5.9 ± 1.5 a 6.2 ± 1.5, yn y drefn honno).Dangosodd y genyn tebyg i endoglucan-1,3-β-glucosidase TANJILG_23384 actifadu uchel ar y ddau bwynt amser cyntaf (6 a 12 hpi) ym mhob llinell ac eithrio'r boblogaeth 22660 (Ffig. 6d).Gwelwyd y lefelau mynegiant cymharol uchaf o TANJILG_23384 ar yr ail bwynt amser (12 hpi) yn Mandelup (2.7 ± 0.3) ac 83A: 476 (1.5 ± 0.1).Ar 24 HPI, roedd mynegiant TanjilG_23384 yn gymharol isel ym mhob llinell a astudiwyd (o 0.04 ± 0.009 i 0.44 ± 0.12).
Proffiliau mynegiant genynnau dethol (AG) a ddatgelwyd gan PCR meintiol.Mae'r rhifau 6, 12 a 24 yn cynrychioli oriau ar ôl y brechiad.Defnyddiwyd y genynnau LanDExH7 a LanTUB6 ar gyfer normaleiddio a defnyddiwyd LanTUB6 ar gyfer graddnodi rhyng-gyfres.Mae bariau gwall yn cynrychioli'r gwyriad safonol yn seiliedig ar dri atgynhyrchiad biolegol, a phob un ohonynt yn gyfartaledd o dri atgynhyrchiad technegol. Mae arwyddocâd ystadegol gwahaniaethau yn y lefelau mynegiant rhwng y rhai a gafodd eu brechu (Colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd ym 1999 o'r maes lupine yn Wierzenica, Gwlad Pwyl) a phlanhigion rheolaeth (ffug-breintiedig) wedi'u marcio uwchlaw pwyntiau data (*gwerth p <0. 0.05, *0 p, *0 p. Mae arwyddocâd ystadegol gwahaniaethau yn y lefelau mynegiant rhwng y rhai a gafodd eu brechu (Colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd ym 1999 o'r maes lupine yn Wierzenica, Gwlad Pwyl) a phlanhigion rheolaeth (ffug-breintiedig) wedi'u marcio uwchlaw pwyntiau data (*gwerth p <0. 0.05, *0 p, *0 p. Статистическая значимость различий у уровннх экспрессии между инококулировuchовано d, н н н н н н н ld н н н н нOLч н н нOLч нOLT. я люпина в верженице, полшша) и контрольныныныи (лно инокулировнныы dwys) расте 3,0 о о о ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч ч 5, ** значение p ≤ 0,01, *** значение p ≤ 0,001). Mae gwahaniaethau ystadegol arwyddocaol mewn lefelau mynegiant rhwng brechedig (colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd ym 1999 o gae lupine yn Wierzhenice, Gwlad Pwyl) a phlanhigion rheoli (ffug wedi'u brechu) yn cael eu nodi uwchlaw'r pwyntiau data (*gwerth P <0.05, ** 0 0.* 0 0.* 0 0.* p-value.接种（Colletotrichum lupini, Col-08株, 1999平差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值< 0.05, **P值≤ 0.01, ***P值≤) 0.0.接种 （Colletotrichum lupini ， lliw-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 羽扇 获得） 和 对照 （（接种 植物 之间 水平 差异 的 的 统计学 显着性 显着性 标记 标记 数据点 数据点 上方 上方*p 值*p 值 <0.05, ** 0.01, ** p ≤ 0.01, ** p. Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулирироваюю iwt п пOutOrн ш ш шOutOUTCOUTOUTOutOUTOUTOutOUTOUTOUTOUTCOUTOutOUTOutOUTOutOUTOUTUCOutOUTOUTUCOUT. а в верженице, полша, в 1999 г.) и контрольны nad ve (ложно инокулиров ddehongl) растечock* о оOut оOut очдачдддatur 05, ** p-значение ≤ 0,01, *** p-значение ≤ 0,001). Mae gwahaniaethau ystadegol arwyddocaol yn y lefelau mynegiant rhwng brechedig (colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd o gaeau lupine yn Verzhenice, Gwlad Pwyl, ym 1999) a phlanhigion rheoli (sham wedi'u heintio) yn uwch na'r pwyntiau data (*gwerth P <0.05, ** 0 0.* 0 0.* p-≤, ** p-value.Y llinellau NLL a ddadansoddwyd oedd: 83A: 476 (gwrthsefyll, cario'r alel LANR1 homosygaidd), mandelup (gwrthsefyll cymedrol, yn cario'r alel anman homosygaidd), tureegine (gwrthsefyll, cefndir genetig anhysbys) a phoblogaeth 22660 (tueddadwy).
Dangosodd y genyn ymgeisydd TANJILG_05042 yn locws LANR1 batrwm mynegiant gwahanol iawn o'r proffiliau a gafwyd o astudiaethau RNA-seq (Ffig. 6E).Gwelwyd actifadu'r genyn hwn yn sylweddol yn Mandelup a phoblogaeth 22660 (hyd at 39.7 ac 11.7 gwaith, yn y drefn honno), gan arwain at lefelau mynegiant cymharol uchel (hyd at 1.4 ± 0.14 a 7.2 ± 1.3, yn y drefn honno).83A: Datgelodd 476 hefyd rywfaint o ddadreoleiddio genyn TANJILG_05042 (hyd at 3.8-plyg), fodd bynnag, roedd y lefelau mynegiant cymharol a gyflawnwyd (0.044 ± 0.002) fwy na 30 gwaith yn is na'r rhai a welwyd yn Mandelup a'r boblogaeth 22660.Dangoswyd gan qPCR yn dangos gwahaniaethau sylweddol mewn lefelau mynegiant rhwng genoteipiau mewn amrywiadau ffug-frechu (rheolaeth), gan gyrraedd gwahaniaeth 58 gwaith rhwng poblogaethau 22660 ac 83A: 476, yn ogystal â rhwng poblogaethau 22660 a 22660. Cyflawnwyd gwahaniaeth deublyg rhwng boregine a mandalup.
Cafodd y genyn ymgeisydd yn locws Anman, Tanjilg_12861, ei actifadu mewn ymateb i frechu yn 83a: 476 a mandelup, roedd yn niwtral yn y boblogaeth 22660, ac fe'i dadreoleiddiwyd mewn tureGine (Ffig. 6F).Mynegiad cymharol y genyn tanjilg_12861 oedd yr uchaf yn 83A wedi'i frechu: 476 (0.14 ± 0.01).Dangosodd y genyn protein sioc gwres 17.4 kDa TANJILG_05080 HSP17.4 lefelau mynegiant cymharol is ym mhob straen a phwyntiau amser a astudiwyd (Ffig. 6G).Gwelwyd y gwerth uchaf ar 24 hpi yn y boblogaeth 22660 (0.14 ± 0.02, cynnydd wyth gwaith mewn ymateb i frechu).
Datgelodd cymhariaeth o broffiliau mynegiant genynnau (Ffig. 7) gydberthynas uchel rhwng tanjilg_10657 a phedwar genyn arall: tanjilg_27015 (r = 0.89), tanjilg_05080 (r = 0.85), tanjilg_05042 (r = 0.80).Gall canlyniadau o'r fath ddangos cyd-reoleiddio'r genynnau hyn yn ystod ymatebion amddiffyn.Dangosodd y genynnau tanjilg_12861 a tanjilg_23384 broffiliau mynegiant gwahanol gyda gwerthoedd cyfernod cydberthynas Pearson is (o 0.08 i 0.43 a -0.19 i 0.28, yn y drefn honno) o gymharu â genynnau eraill.
Canfuwyd cydberthynas rhwng proffiliau mynegiant genynnau gan ddefnyddio PCR meintiol.Dadansoddwyd y llinellau lupine culneleaf canlynol: 83a: 476 (gwrthsefyll, yn cario'r alel LANR1 homosygaidd), mandelup (gwrthsefyll cymedrol, yn cario'r alel anman homosygaidd), boregine (gwrthsefyll, cefndir genetig yn anhysbys), a phoblogaeth 22660 (tueddiad).Cyfrifwyd tri phwynt amser (6, 12 a 24 awr ar ôl eu brechu), gan gynnwys brechu (Colletotrichum lupini, straen Col-08, a gafwyd o gaeau Lupine yn Wierzhenice, Gwlad Pwyl, ym 1999) a rheolyddion rheoli (ffug-brenwyd).Mae'r raddfa yn dangos gwerth cyfernod cydberthynas Pearson.
Yn seiliedig ar ddata a gafwyd ar 6 marchnerth y fodfedd, perfformiwyd WGCNA ar 9981 DEG a nodwyd trwy gymharu planhigion wedi'u brechu a rheoli i ganolbwyntio ar ymatebion amddiffyn cynnar (Tabl Atodol S12).Cafwyd hyd i ddau ar hugain o fodiwlau genynnau (clystyrau) gyda phroffiliau mynegiant cydberthynol (positif neu negyddol) rhwng genoteipiau ac amrywiadau arbrofol. Ar gyfartaledd, roedd lefelau mynegiant genynnau yn disgyn yn nhrefn 83a: 476> Mandelup> Boregine> Poblogaeth 22660 (yn y ddau amrywiad, fodd bynnag, roedd y duedd hon yn gryfach o ran planhigion rheoli). Ar gyfartaledd, roedd lefelau mynegiant genynnau yn disgyn yn nhrefn 83a: 476> Mandelup> Boregine> Poblogaeth 22660 (yn y ddau amrywiad, fodd bynnag, roedd y duedd hon yn gryfach o ran planhigion rheoli). В среднем уровни экспрессии генов снижались в п пордке 83a: 476> mandelup> mandelup> tureGine> poblogaeth 22660 (в оOutы вOutы, сильнее у контрольных растений). Ar gyfartaledd, gostyngodd lefelau mynegiant genynnau yn y Gorchymyn 83A: 476> Mandelup> Boregine> Poblogaeth 22660 (yn y ddau amrywiad, fodd bynnag, roedd y duedd hon yn gryfach o ran planhigion rheoli).平均 而 言 ， 基因 表达 水平 水平 按 83a: 476> mandelup> Boregine> Poblogaeth 22660 的 顺序 下降 （（然而 ， 在 两 种 变体 变体 ， ， 这 种 种 趋势 趋势 在 对照 对照 植物 中 中 强 强）。平均 而 言 ， 基因 水平 按 按 按 83a: 476> mandelup> Boregine> Poblogaeth 22660 的 顺序 下降 （（， 在 种 中 ， 这 这 种 在 在 在 植物 植物 中 更 更） 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 В среднем уровни экспрессии генов снижались в д д р 83a: 476> mandelup> mandelup> turegine> poblogaeth 22660 (оди lleuchegau о оLс о veve оOut оOution нее у контрольных растений). Ar gyfartaledd, gostyngodd lefelau mynegiant genynnau yn y Gyfres 83A: 476> Mandelup> Boregine> Poblogaeth 22660 (fodd bynnag, yn y ddau amrywiad, roedd y duedd hon yn gryfach o ran planhigion rheoli).Arweiniodd brechu at ddadreoleiddio mynegiant genynnau, yn enwedig ym modiwlau 18, 19, 14, 6 ac 1 (yn nhrefn ddisgynnol yr effaith), rheoleiddio negyddol (ee modiwlau 9 a 20) neu gydag effeithiau niwtral (ee modiwlau 11, 22, 8 a 13).Datgelodd Dadansoddiad Cyfoethogi Tymor GO (Tabl Atodol S13) “GO: 0006952 Ymatebion Amddiffynnol” ar gyfer y modiwl wedi'i frechu (18) gyda'r actifadu uchaf, gan gynnwys genynnau a ddadansoddwyd gan qPCR (tanjilg_04706, tanjilg_23384 (9015) Tanjilg_10) a thanjilg_10) a Tanjilg_10) a Tanjilgululues a mwy .Nodwyd crynodwr Modiwl 18 (Ffig. 8) fel y genyn Tanjilg_26536 sy'n amgodio'r protein LLR18B tebyg i PR-10, a nodwyd crynodwr Modiwl 9 fel y genyn Tanjilg_28955 sy'n amgodio'r protein ffotos system II PSBQ.Cafwyd hyd i ymgeisydd genyn gwrthiant anthracnose LANR1, tanjilg_05042, ym Modiwl 22 (Ffig. 9) ac mae'n gysylltiedig â'r termau “GO: 0044260 Prosesau metabolig macromoleciwlaidd cellog” a “GO: 0006355 Rheoliad trawsgrifio, demolio DNA.Mae'r genyn yn amgodio ffactor trawsgrifio straen gwres A-4A (HSFA4A).
Dadansoddiad rhwydwaith wedi'i bwysoli o gyd-fynegiant genynnau modiwlau gyda thermau proses fiolegol wedi'u gor-gynrychioli “GO: 0006952 Ymatebion Amddiffyn”.Symleiddiwyd ligation i dynnu sylw at y pedwar genyn a ddadansoddwyd gan qPCR (TANJILG_04706, TANJILG_23384, TANJILG_10657 a TANJILG_27015).
Dadansoddiad rhwydwaith wedi'i bwysoli o gyd-fynegiant genynnau modiwl gyda therm proses fiolegol wedi'i or-gynrychioli “GO: 0006355: Rheoliad trawsgrifio, templedi DNA” a chario ymgeisydd Gene Gwrthiant Anthracnose Gene LANR1 TANJILG_05042.Symleiddiwyd ligation i ynysu'r genyn tanjilg_05042 a'r genyn canolog tanjilg_01212.
Dangosodd sgrinio gwrthiant anthracnose a gasglwyd yn Awstralia fod y rhan fwyaf o'r cyltifarau a ryddhawyd yn gynnar yn agored i niwed;Mae Kalya, Coromup a Mandelup wedi cael eu disgrifio fel rhai gweddol wrthsefyll, tra bod Wonga, Tanjil a 83a: 476 wedi cael eu disgrifio fel rhai gwrthsefyll iawn26,27,31.Roedd yr un alel gwrthiant, dynodedig LANR1, ac roedd gan Coromup a Mandelup alel wahanol, dynodedig Anman10, 26, 39, tra bod Kalya wedi trosglwyddo alel wahanol., LANR2.Arweiniodd sgrinio am wrthwynebiad anthracnose yn yr Almaen at nodi llinell wrthsefyll BO7212 gydag alel ymgeisydd heblaw LANR1, dynodedig LANRBO36.
Datgelodd ein hastudiaeth amledd isel iawn (tua 6%) o'r alel LANR1 yn y germplasm a brofwyd.Mae'r arsylwi hwn yn gyson â chanlyniadau sgrinio germplasm Dwyrain Ewrop gan ddefnyddio marcwyr ANSEQ3 ac ANSEQ4, a ddangosodd fod yr alel LANR1 yn bresennol mewn dwy linell Belarwsia yn unig.Mae hyn yn awgrymu nad yw'r alel LANR1 yn cael ei defnyddio'n helaeth eto gan raglenni bridio lleol, yn wahanol i Awstralia, lle mae'n un o'r alelau allweddol ar gyfer bridio â chymorth marciwr.Gall hyn fod oherwydd y lefel is o wrthwynebiad a ddarperir gan alel LANR1 mewn amodau caeau Ewropeaidd o'i gymharu ag adroddiad Awstralia.Yn ogystal, mae astudiaethau o anthracnose mewn ardaloedd glawiad uchel yn Awstralia wedi dangos efallai na fydd ymatebion gwrthiant a gyfryngir gan alel LANR1 yn effeithiol mewn tywydd sy'n ffafrio twf a datblygiad cyflym y pathogen19,42.Mewn gwirionedd, yn yr astudiaeth bresennol, gwelwyd rhai symptomau anthracnose hefyd mewn genoteipiau sy'n cario'r alel LANR1, gan awgrymu y gallai gwrthiant ddiflannu o dan yr amodau gorau posibl ar gyfer datblygu C. lupini.Yn ogystal, mae dehongliadau positif ffug o bresenoldeb marcwyr ANSEQ3 ac ANSEQ4, sydd oddeutu 1 cm o locws LANR1, yn bosibl 28,30,43.
(o 24 i 48 hp).Mae atodiad yn strwythur heintus sy'n glynu wrth wyneb y gwesteiwr ac yn hwyluso treiddiad i'r meinweoedd gwesteiwr.Dangosodd Mango C. gloeosporioides fwy na 40% o egino conidial ar ôl 3 awr o ddeori a thua 20% yn ffurfio appressors ar ôl 4 awr.Dangosodd y genyn CAP20 sy'n gysylltiedig â ffyrnigrwydd C. gloeosporioides weithgaredd trawsgrifio mewn conidia sy'n ffurfio epiffyt ar ôl deori 3.5 h mewn cwyr wyneb afocado gyda chrynodiadau uchel o brotein CAP20 ar ôl 4 h 46 munud.Yn yr un modd, achoswyd gweithgaredd genynnau biosynthesis melanin yn C. trifolii yn ystod deori 2 awr ac yna ffurfio appressorium ar ôl 1 awr.Mae astudiaethau o feinweoedd dail wedi dangos bod gan fefus sydd wedi'u brechu â C. acutatum ataliad cyntaf ar 8 hpi, tra bod tomatos sydd wedi'u brechu â C. coccodes yn ataliad cyntaf ar 4 hpi48,49.Yn gyson i raddau helaeth â graddfa amser Colletotrichum spp.proses heintus.Mae ymatebion amddiffyn cyflym i 83a: 476 yn awgrymu cyfranogiad ymwrthedd planhigion ac genynnau imiwnedd a ysgogwyd gan effaith (ETI) yn y llinell hon, tra bod ymatebion oedi Mandelup yn cefnogi'r rhagdybiaeth imiwnedd moleciwlaidd moleciwlaidd micro-gysylltiedig (MTI) rhagdybiaeth 50. ymatebion cynnar i 83a: 476.Mae'r gorgyffwrdd rhannol rhwng genynnau uwch-reoledig neu is-reoleiddio mewn ymateb oedi hefyd yn cefnogi'r cysyniad hwn, gan fod ETI yn aml yn cael ei ystyried yn ymateb MTI carlam a gwell sy'n arwain at farwolaeth celloedd wedi'i raglennu ar safle'r haint, a elwir yn sioc anaffylactig 51,52.
Mae'r rhan fwyaf o'r genynnau a briodolir i'r term gor-gynrychiolaeth ontoleg genyn GO: 0006952 “Ymateb Amddiffyn” yw 11 homolog y Protein Neges Ymprydio 22 a achosir gan straen (tebyg i SAM22) a'r saith prif debyg i brotein latecs (MLP).Dangosodd proteinau tebyg i 31, 34, 43 a 423 debygrwydd dilyniant.Dangosodd genynnau tebyg i SAM22 actifadu sylweddol a barhaodd yn hirach, gan ddangos lefelau uwch o wrthwynebiad anthracnose (83A: 476 a Boregine).Fodd bynnag, dim ond mewn llinellau a oedd yn cario'r alel gwrthiant ymgeisydd (83a: 476/LANR1 yn 6 hpi a mandelup/anman yn 24 hpi) y cafodd genynnau tebyg i MLP eu dadreoleiddio mewn llinellau.Dylid nodi bod yr holl homologau tebyg i Sam22 yn tarddu o glwstwr genynnau sy'n rhychwantu oddeutu 105 kb, tra bod genynnau tebyg i MLP yn tarddu o ranbarthau ar wahân o'r genom.Canfuwyd actifadu cydgysylltiedig genynnau tebyg i Sam22 o'r fath hefyd yn ein hastudiaeth flaenorol o wrthwynebiad NLL i frechiad diaporthetoxica, gan awgrymu eu bod yn ymwneud â chydrannau llorweddol yr ymateb amddiffyn.Cefnogir y casgliad hwn hefyd gan adroddiadau o ymateb cadarnhaol genynnau tebyg i Sam22 i anaf neu driniaeth ag asid salicylig, ysgogwyr ffwngaidd, neu hydrogen perocsid.
Dangoswyd bod genynnau tebyg i MLP yn ymateb i amryw o straenau anfiotig a biotig, gan gynnwys heintiau ffwngaidd bacteriol, firaol a phathogenig mewn llawer o rywogaethau planhigion55.Roedd y cyfarwyddiadau ymateb i ryngweithio penodol rhwng planhigion a phathogenau yn amrywio o gynyddu'n gryf (hy, yn ystod pla cotwm â verticillium dahliae) i ostwng yn sylweddol (hy, ar ôl heintio coeden afal ag alternaria spp.) 56,57.Gwelwyd dadreoleiddio sylweddol o'r genyn 423 tebyg i MLP yn ystod amddiffynfeydd afocado i haint F. niger ac yn ystod haint y coed afal botryosphaeria berengeriana f.cn.Mae Piricola ac Alternaria alternata yn bathoteipiau afal58,59.Yn ogystal, roedd gan Apple Calli or-wasgu'r genyn 423 tebyg i MLP fynegiant is o enynnau sy'n gysylltiedig â gwrthiant ac roeddent yn fwy agored i haint ffwngaidd59.Yn dilyn Fusarium oxysporum F, cafodd y genyn 423 tebyg i MLP ei atal hefyd mewn germplasm ffa cyffredin gwrthsefyll.cn.Haint ffa 60.
Aelodau eraill o'r teulu PR-10 a nodwyd yn ein hastudiaeth RNA-seq oedd y genynnau LLR18A a LLR18B mewn ymateb i ddadreoleiddio, yn ogystal â'r genyn sydd wedi'i reoleiddio (1 genyn) neu genyn sydd wedi'u dadreoleiddio (3 genyn) ar gyfer y protein trosglwyddo lipid DIR1..Yn ogystal, mae WGCNA yn tynnu sylw at y genyn LLR18B fel canolbwynt yn y modiwl hwn, sy'n agored iawn i frechu ac sy'n cario sawl genyn ymateb amddiffynnol.Cafodd y genynnau LLR18A a LLR18B eu cymell mewn dail lupine melyn mewn ymateb i facteria pathogenig, yn ogystal ag mewn coesau NLL ar ôl brechu D. tocsica, tra bod homolog reis y genynnau hyn, rsospr10, yn cael ei gymell yn gyflym gan y patho 22, y pathose pathu 2, y path o dan y pathose1, y pathose1, y pathose1, y pathosol Proteinau cludo lipid cific sy'n ofynnol ar gyfer dyfodiad gwrthiant systemig a gafwyd (SAR).Gyda datblygiad adweithiau amddiffynnol, mae'r protein DIR1 yn cael ei gludo o ganolbwynt yr haint trwy'r ffloem i gymell SAR mewn organau pell.Yn ddiddorol, achoswyd genyn Tanjilg_02313 DIR1 yn sylweddol ar y pwynt tro cyntaf yn llinellau 84A: 476 a phoblogaeth 22660, ond datblygodd ymwrthedd anthracnose yn llwyddiannus yn unig yn llinell 84A: 476.Gall hyn ddangos rhywfaint o is -weithrediad y genyn DIR1 yn NLL, gan fod y tri homolog sy'n weddill wedi ymateb i frechiad yn unig yn y llinell 83A: 476 yn 6 hpi, a chyfeiriwyd yr ymateb hwn i lawr.
Yn ein hastudiaeth, y cydrannau mwyaf cyffredin a oedd yn cyfateb i'r broses fiolegol o'r enw “GO: 0055114 proses rhydocs” oedd protein cytochrome P450, peroxidase, asid linoleig 9S-/13S-lipoxygenase, ac 1-aminocyclopropane-1-ocsidase asid asid-carboxylig.Yn ogystal, mae ein WGCNA yn diffinio'r homologue HSFA4A fel canolbwynt sy'n cario modiwlau fel ymgeisydd genyn gwrthiant LANR1 TANJILG_05042.Mae HSFA4a yn rhan o reoleiddio trawsgrifio niwclear sy'n ddibynnol ar rydocs mewn planhigion.
Mae proteinau cytochrome P450 yn ocsidororeductases sy'n cataleiddio adweithiau hydroxylation NADPH a/neu O2-ddibynnol mewn metaboledd cynradd ac eilaidd, gan gynnwys metaboledd xenobioteg, yn ogystal â hormonau, asidau brasterog, sterolau o ran celloedd, biopolder biopol. Gostyngwyd swyddogaeth tochrome P450 o -10.6 log2 (newid plyg) i 5.7 oherwydd nifer fawr o homologau wedi'u newid (37) a gwahaniaethau mewn patrymau ymateb rhwng genynnau penodol, gan adlewyrchu adolygiad ar i fyny..Byddai defnyddio data RNA-seq yn unig i egluro swyddogaeth fiolegol tybiedig y genynnau NLL mewn superfamily protein mor fawr yn hapfasnachol iawn.Fodd bynnag, mae'n werth nodi bod rhai genynnau cytochrome P450 yn gysylltiedig â mwy o wrthwynebiad i ffyngau pathogenig neu facteria, gan gynnwys cyfraniad at adweithiau alergaidd69,70,71.
Mae perocsidasau Dosbarth III yn ensymau planhigion amlswyddogaethol sy'n ymwneud ag ystod eang o brosesau metabolaidd yn ystod twf a datblygiad planhigion, yn ogystal ag mewn ymateb i straen amgylcheddol fel halltedd, sychder, dwyster ysgafn uchel, ac ymosodiad pathogen72.Mae peroxidases yn ymwneud â rhyngweithio sawl rhywogaeth o blanhigion ag anthracis, gan gynnwys stylosanthes humilis a C. gloeosporioides, lens culinaris a C. truncatum, phaseolus vulgaris a C. lindemuthianum, cucumis sativus a C. lagenarium73,763,76.Mae'r ymateb yn gyflym iawn, weithiau hyd yn oed ar 4 hpi, cyn i'r ffwng dreiddio i feinwe'r planhigyn73.Ymatebodd y genyn peroxidase hefyd i frechiad D. toxyca nll.
9s-/13s-lipoxygenase o asid linoleig yw'r cam cyntaf yn llwybr ocsideiddiol biosynthesis lipid78.Mae gan gynhyrchion y llwybr hwn sawl swyddogaeth ym maes amddiffyn planhigion, gan gynnwys cryfhau waliau celloedd trwy ffurfio dyddodion callose a pectin, a rheoleiddio straen ocsideiddiol trwy gynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol79,80,81,82,83.Yn yr astudiaeth bresennol, newidiwyd mynegiant asid linoleig 9s-/13s-lipoxygenase ym mhob straen, ond yn y boblogaeth dueddol 22660, roedd dadreoleiddio yn drech na phwyntiau gwahanol, tra mewn straenau sy'n cario LANR1 gwrthsefyll a'r alel Anman, mae'n pwysleisio'r gortheriad hyn o ocsidyn yr ocsideb hyn.
Cafodd y homologue 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) ei ddadreoleiddio'n sylweddol (9 genyn) neu ei ddadreoleiddio (2 genyn) wrth ei frechu â lupine.Gyda dau eithriad, digwyddodd yr holl ymatebion hyn ar 6 hp.am 83a: 476.Yr adwaith ensymatig a gyfryngir gan broteinau ACO yw'r cam sy'n cyfyngu ar y gyfradd wrth gynhyrchu ethylen ac felly mae'n cael ei reoleiddio'n fawr84.Mae Ethylene yn hormon planhigion sy'n chwarae amrywiaeth o rolau wrth reoleiddio datblygiad planhigion ac ymateb i amodau straen anfiotig a biotig.Mae ymsefydlu trawsgrifio ac actifadu'r llwybr signalau ethylen yn ymwneud â chynyddu gwrthiant reis i'r ffwng hemibiotroffig oryzae oryzae trwy reoleiddio cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol a ffytoalecsinau.Mae proses haint dail tebyg iawn a ddarganfuwyd rhwng M. oryzae a C. lupini88,89, yn erbyn cefndir o ddadreolaeth sylweddol o homologau ACO yn y llinell 83a: 476 a adroddir yn yr astudiaeth hon, yn symud y posibilrwydd o roi ymwrthedd i NLL anthracnose ethylen ethylen sy'n signalau cam canolog mewn llwybrau moleciwlaidd.
Yn yr astudiaeth bresennol, gwelwyd ataliad ar raddfa fawr o lawer o enynnau sy'n gysylltiedig â ffotosynthesis yn 6 hpi yn 83a: 476 ac ar 48 hpi yn Mandeloop a'r boblogaeth 22660.Mae maint a dilyniant y newidiadau hyn yn gymesur â'r lefel.Gwelwyd ymwrthedd anthracnose yn yr arbrawf hwn.Yn ddiweddar, adroddwyd am ormes cryf a chynnar trawsgrifiadau sy'n gysylltiedig â ffotosynthesis mewn sawl model o ryngweithio planhigion-pathogen, gan gynnwys bacteria pathogenig a ffyngau.Gall brys (o 2 hpi mewn rhai rhyngweithio) ac atal genynnau yn fyd -eang sy'n gysylltiedig â ffotosynthesis mewn ymateb i haint sbarduno imiwnedd planhigion yn seiliedig ar ddefnyddio rhywogaethau ocsigen adweithiol a'u rhyngweithio â'r llwybr asid salicylig i gyfryngu adweithiau alergaidd 90,94.
I gloi, mae mecanweithiau ymateb amddiffyn a gynigiwyd ar gyfer y llinach fwyaf gwrthsefyll (83a: 476) yn cynnwys cydnabyddiaeth pathogen cyflym gan y genyn R (yn ôl pob tebyg TIR-NBS-LRR TANJILG_05042) ac asid salicylig wedi'i gyfryngu gan ymateb alergaidd a signalau ethylen, a ddilynir gan sar hir.Cefnogir gweithredu gan y protein DIR-1.Dylid nodi bod y cyfnod biotroffig ar gyfer haint C. lupini yn fyr iawn (tua 2 ddiwrnod), ac yna twf necrotig95.Gall y trawsnewid rhwng y camau hyn fod yn gysylltiedig â necrosis a mynegiant proteinau ethylen-inducible sy'n gweithredu fel sbardunau ar gyfer adweithiau gorsensitifrwydd mewn planhigion cynnal.Felly, mae'r ffenestr amser ar gyfer cipio C. lupini yn llwyddiannus yn y cam biotroffig yn gul iawn.
Mae'n ymddangos bod ETI, sy'n cael ei yrru gan y genyn R ganonaidd, yn fecanwaith cyffredin ar gyfer ymwrthedd ffa i anthracnose.Felly, yn y codlys model Medicago truncatula, rhoddir ymwrthedd i anthracnose gan y genyn RCT1, aelod o ddosbarth genynnau planhigion R TIR-NBS-NBS-LRR97.Mae'r genyn hwn hefyd yn rhoi ymwrthedd anthracnose sbectrwm eang yn alffalffa wrth ei drosglwyddo i blanhigion tueddol.Yn y ffa cyffredin (P. vulgaris), mae mwy na dau ddwsin o enynnau gwrthiant anthracnose wedi'u nodi hyd yma.Mae rhai o'r genynnau hyn i'w cael mewn rhanbarthau sydd heb unrhyw enynnau R canonaidd, ond mae llawer o rai eraill wedi'u lleoli ar ymylon cromosomau sy'n cario'r clwstwr genynnau NBS-LRR, gan gynnwys TIR-NBS-LRRS99.Cadarnhaodd yr astudiaeth SSR genom-eang hefyd gysylltiad y genyn NBS-LRR ag ymwrthedd anthracnose yn y ffa cyffredin.Cafwyd hyd i'r genyn R canonaidd hefyd yn y rhanbarth genomig sy'n cario'r locws gwrthiant anthracnose mawr yn lupine gwyn 101.
Mae ein gwaith yn dangos bod adwaith gwrthiant ar unwaith, wedi'i actifadu yn gynnar o haint planhigion (heb fod yn ddelfrydol heb fod yn hwyrach na 12 hpi), i bob pwrpas yn amddiffyn lupine dail cul rhag anthracnose a achosir gan y ffwng pathogenig Collelotrichum lupini.Gan ddefnyddio dilyniant trwybwn uchel, gwnaethom ddangos proffiliau mynegiant gwahaniaethol genynnau gwrthiant anthracnose mewn planhigion NLL a gyfryngir gan enynnau gwrthiant LANR1 ac Anman.Mae amddiffyniad llwyddiannus yn cynnwys dylunio'r genynnau yn ofalus ar gyfer proteinau sy'n ymwneud â rhydocs, ffotosynthesis, a phathogenesis o fewn oriau i gyswllt cyntaf y planhigyn â phathogen.Mae adweithiau amddiffynnol tebyg, ond wedi'u gohirio mewn pryd, yn llawer llai effeithiol wrth amddiffyn planhigion rhag afiechydon.Mae gwrthiant anthracs a gyfryngir gan y genyn LANR1 yn debyg i ymateb cyflym nodweddiadol y genyn R (imiwnedd a ysgogwyd gan effaith), tra bod y genyn Anman yn fwyaf tebygol yn darparu ymateb llorweddol (imiwnedd wedi'i sbarduno gan batrwm moleciwlaidd sy'n gysylltiedig â microbe), gan ddarparu lefel gymedrol o gynaliadwyedd.
Roedd y 215 o linellau NLL a ddefnyddiwyd i sgrinio ar gyfer marcwyr anthracnose yn cynnwys 74 cyltifarau, 60 llinell a gafwyd trwy groesi neu fridio, 5 mutants, a 76 germplasms gwyllt neu wreiddiol.Daeth y llinellau o 17 gwlad, yn bennaf o Wlad Pwyl (58), Sbaen (47), yr Almaen (27), Awstralia (26), Rwsia (19), Belarus (7), yr Eidal (5) a llinellau eraill.o 10 gwlad.Mae'r set hefyd yn cynnwys llinellau gwrthsefyll cyfeirio: 83a: 476, Tanjil, Wonga yn cario'r alel LANR1, a Mandelup yn cario'r alel Anman.Cafwyd y llinellau o gronfa ddata adnoddau genetig Lupine Ewropeaidd a gynhaliwyd gan Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Gwlad Pwyl (Tabl Atodol S1).
Tyfwyd planhigion o dan amodau rheoledig (ffotoperiod 16 awr, tymheredd 25 ° C yn ystod y dydd a 18 ° C yn y nos).Dadansoddwyd dau ddyblygiad biolegol.Roedd DNA wedi'i ynysu o ddail tair wythnos oed gan ddefnyddio pecyn Mini Planhigion DNeasy (Qiagen, Hilden, yr Almaen) yn ôl y protocol.Sgoriwyd homozygotau ar gyfer yr alel gwrthsefyll fel “1 ″, yn dueddol - fel“ 0 ″, a heterozygotau - fel 0.5.
Tyfwyd planhigion mewn potiau (11 × 11 × 21 cm) gyda phridd di-haint (TS-1 REC 085 Canolig Sylfaenol, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Gwlad Pwyl).Cael ardal.Tyfwyd yr ynysoedd mewn cyfrwng SNA ar 20 ° C. o dan olau du am 21 diwrnod i gymell sborio.Yna tyfwyd y planhigion o dan ffotoperiod 14 awr ar 22 ° C diwrnod/19 ° C noson a lleithder 70%.Gwnaed sgôr y clefyd 22 diwrnod ar ôl eu brechu ac roedd yn amrywio o 0 (imiwn) i 9 (tueddol iawn) yn dibynnu ar bresenoldeb neu absenoldeb briwiau necrotig ar goesau a dail.Yn ogystal, ar ôl sgorio, mesurwyd pwysau'r planhigion.Cyfrifwyd perthnasoedd rhwng genoteipiau marciwr a ffenoteipiau afiechydon fel cydberthynas pwynt dau ddilyniant (absenoldeb marcwyr heterosygaidd yn y set o linellau ar gyfer dadansoddi'r ffenoteip gwrthiant anthracnose).