Javascript er i øjeblikket deaktiveret i din browser. Nogle funktioner på denne hjemmeside fungerer ikke, når javascript er deaktiveret.
Registrer dig med dine specifikke oplysninger og specifikke lægemiddel af interesse, og vi vil matche de oplysninger, du giver, med artikler i vores omfattende database og straks sende dig en PDF-kopi.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7. 95123, Italien;2 Center for Eksperimentel Onkologi og Hæmatologi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italien;3 Medicinsk onkologi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italien;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italien;5 Medicin Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italien;6 Institut for Biomedicinsk og Bioteknologisk Videnskab, University of Catania, Medicinsk Genetik, Catania, Italien, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italien Kommunikation: Stefania Stella, tlf. +39 095 378 1946, e-mail [email protected];[email protected] Formål: Kimline-mutationer i BRCA1 og BRCA2 og etableret brystkræft (BC), ovarie (OC) og andet forbundet med en livstidsrisiko for cancer. Testning for BRCA-genet er nøglen til at vurdere individuel risiko, såvel som for at finde forebyggelsesmetoder hos raske bærere og skræddersy behandlinger hos cancerpatienter. Udbredelsen af ​​BRCA2 varierer bredt på tværs af BRCA2 og geografiske forløb ogene varianter i sicilianske familier, undersøgelser, der specifikt retter sig mod befolkninger i det østlige Sicilien, mangler. Formålet med vores undersøgelse var at undersøge forekomsten og fordelingen af ​​BRCA patogene kimlinieændringer i en kohorte af BC-patienter fra det østlige Sicilien og at vurdere deres sammenhæng med specifikke BC-træk ved hjælp af næste generations tilstedeværelse af tumorer og indeksering af altindekser, og SULT. 35 patienter (9 %) havde en BRCA patogen variant, 17 (49 %) i BRCA1 og 18 (51 %) i BRCA2.BRCA1 ændringer er udbredt i triple-negative BC patienter, hvorimod BRCA2 mutationer er mere almindelige hos luminale BC patienter. Sammenlignet med ikke-bærere, giver forsøgspersoner med en signifikant højere BRCA1 indeks varianter og proliferativt højere BRCA1 indeksvarianter. mutationsstatus hos BC-patienter fra det østlige Sicilien og bekræfter NGS-analysens rolle i at identificere patienter med arvelig BC. Samlet set stemmer disse data overens med tidligere beviser, der understøtter BRCA-screening for korrekt forebyggelse og behandling af cancer hos mutationsbærere.
Brystkræft (BC) er den mest almindelige malignitet på verdensplan og den mest dødelige kræftsygdom hos kvinder.1 De biologiske træk, der bestemmer BC-prognose og klinisk adfærd, er blevet grundigt undersøgt og delvist belyst over tid. Faktisk bruges adskillige surrogatmarkører i øjeblikket til at klassificere BC i forskellige molekylære undertyper. De er østrogen (R)-receptor-vækstfaktor (ER) og receptor-2 human vækstfaktor. 2) amplifikation, proliferationsindeks Ki-67 og tumorgrad (G).2 Kombinationen af ​​disse variabler identificerede følgende BC-kategorier: 1) Luminale tumorer, der viste ER- og/eller PgR-ekspression, tegnede sig for 75 % af BC'erne. Disse tumorer blev yderligere opdelt i Luminal A, når Ki-67 var under 20% og HER-20% og HER var lig med B20% og HER-20% og HER. tilstedeværelse af HER2-amplifikation, uanset proliferationsindeks;2) HER2+-tumorer, der er ER- og PgR-negative, men som viser HER2-amplifikation. Denne gruppe tegner sig for 10 % af alle brysttumorer;3) Triple-negativ brystkræft (TNBC), som ikke viser ER- og PgR-ekspression og HER2-amplifikation, tegner sig for omkring 15 % af brystkræfttilfældene.2-4
Blandt disse BC-undertyper repræsenterer tumorgrad og proliferationsindeks tværsnitsbiomarkører, der er direkte og uafhængigt forbundet med tumoraggressivitet og prognose.5,6
Ud over de førnævnte biologiske egenskaber er den rolle, som arvelige genetiske ændringer, der fører til udviklingen af ​​BC, blevet stadig vigtigere i løbet af de sidste par år.7 Omkring 1 ud af 10 brysttumorer nedarves på grund af ændringer i kimlinien i specifikke gener.8 To store epidemiologiske undersøgelser, der involverede mere end 180.000, har for nylig identificeret en gruppe af ATM, BRCA, BRCA, BRCA, 2, CHK2, PALB2, RAD51C og RAD51D) primært ansvarlige for arvelig BC. Blandt disse gener viste BRCA1 og BRCA2 (herefter benævnt BRCA1/2) den stærkeste sammenhæng med udviklingen af ​​brysttumorer. , pancreas, kolorektal og melanom. Fra alderen 13 til 80 år er den kumulative forekomst af BC 72 % hos kvinder med en BRCA1 patogen variant (PV) og 69 % hos kvinder med en BRCA2 PV.14
Navnlig tyder en nylig publikation på, at BC-risiko afhænger af typen af ​​PV. Faktisk, sammenlignet med patogene trunkeringsvarianter, er skarpe missense-varianter, især i BRCA1-genet, forbundet med en reduceret risiko for BC, især hos ældre kvinder.15
Tilstedeværelsen af ​​BRCA1 eller BRCA2 PV var forbundet med forskellige biologiske og klinisk-patologiske træk.16,17 BRCA1-associerede BC'er har tendens til at være klinisk aggressive, dårligt differentierede og meget proliferative. Disse tumorer er sædvanligvis tredobbelt negative og har en tidlig alder for debut. Tumorer, der forekommer hos BRCA2-muterede patienter, udviser typisk vel-graderede indifferente og proliferative tumorer. s er mere almindelige i lumen B og forekommer normalt hos ældre voksne.16-18 Mutationer i BRCA1 og BRCA2 øger især følsomheden over for specifikke behandlinger, herunder platinsalte og målrettede lægemidler såsom poly(ADP-ribose) polymerasehæmmere (PARPi).19,20
I løbet af de sidste par år har implementeringen af ​​næste generations sekventering (NGS) i klinisk praksis gjort det muligt for et stigende antal BC-patienter at gennemgå molekylær testning for cancermodtagelighedssyndromer, herunder BRCA1/2.21. Samtidig er definitioner baseret på præcise kriterier vedrørende familiehistorie, demografiske og klinisk-patologiske karakteristika, der er værd at identificere individuelle kendetegn, BR2CA1,21, der er værd at identificere bedre. mulering på BRCA1/2-screening i specifikke populationer, hvilket fremhæver forskelle på tværs af geografiske regioner.24-27 Selvom der er rapporter om BC-kohorten i det vestlige Sicilien, er færre data tilgængelige om BRCA1/2-screening i den østlige Siciliens befolkning.28,29
Vi beskriver her resultaterne af kimlinje BRCA1/2-screening hos BC-patienter fra det østlige Sicilien, hvilket yderligere korrelerer tilstedeværelsen af ​​BRCA1- eller BRCA2-mutationer med de vigtigste klinisk-patologiske træk ved disse tumorer.
En retrospektiv undersøgelse blev udført på "Center for Eksperimentel Onkologi og Hæmatologi" på Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco i Catania. Fra januar 2017 til marts 2021 blev i alt 455 patienter med bryst- og æggestokkræft, melanom, bugspytkirtel- eller prostatacancer henvist til vores genetiske test for molekylær diagnosticering i laboratoriet i BRCA2. Helsinki, og alle deltagere gav skriftligt informeret samtykke forud for molekylær analyse.
Histologiske og biologiske karakteristika (ER, PgR, HER2-status, Ki-67 og grad) af BC blev vurderet på kernebiopsi eller kirurgiske prøver, idet der kun blev taget hensyn til aggressive tumorkomponenter. Baseret på disse karakteristika blev BC'er klassificeret som følger: luminal A (ER+ og/eller PgR+, HER2-, PgR+, HER2-, B0 Ki-+ ER, 7 %) og HER2-, B0 Ki-6, 7% og 7 -67≥20%), luminal B-HER2+ (ER og/eller PgR+, HER2+), HER2+ (ER og PgR-, HER2+) eller tredobbelt negativ (ER og PgR-, HER2-).
Før vurdering af BRCA1- og BRCA2-mutationsstatus, gennemførte et tværfagligt team, herunder en onkolog, en genetiker og en psykolog, en tumorgenetikkonsultation for hver patient for at bestemme tilstedeværelsen af ​​BRCA1 og/eller BRCA1.eller personer med høj risiko for PV i BRCA2-genet.Patientudvælgelse blev udført i henhold til retningslinjerne fra det italienske selskab for medicinsk onkologi (AIOM) og lokale sicilianske anbefalinger.30,31 Disse kriterier omfatter: (i) familiehistorie med kendte patogene varianter i modtagelighedsgener (f.eks. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) hanner med BC;(iii) dem med BC og OC;(iv) kvinder med BC <36 år, TNBC <60 år eller bilateral BC <50 år;(v) personlig sygehistorie med BC <50 år og mindst én førstegradsslægtning: (a) BC < 50 år;(b) ikke-mucinøs og ikke-grænseoverskridende OC uanset alder;(c) bilateral BC;(d) han-BC;(e) pancreascancer;(f) prostatacancer;(vi) to eller flere personlig historie med BC > 50 år og familiehistorie med BC, OC eller bugspytkirtelkræft for slægtninge, der er førstegradsslægtninge til hinanden (inklusive slægtninge, med hvem hun er førstegradsslægtninge);(vii) Personlig historie med OC og mindst én førstegradsslægtning: (a) BC <50 år;(b) NOC;(c) bilateral BC;(d) han-BC;(vii) hun med serøs OC af høj kvalitet.
En 20 mL perifer blodprøve blev opnået fra hver patient og opsamlet i EDTA-rør (BD Biosciences). Genomisk DNA blev isoleret fra 0,7 mL fuldblodsprøver ved hjælp af QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italien) i henhold til producentens anvisninger og passeret gennem et Fishormo 3.0, USA, Fishormometer, Walhamtometer, 3. kvantificering.Målberigelse og biblioteksforberedelse udføres af Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, klar til at blive indlæst i Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8-kittet til automatiseret biblioteksforberedelse i henhold til producentens instruktioner. Sættet består af to multiplekse PCR-primer-pools, der kan bruges til at studere alle BRCA1 (NM_0070)_00730-genet (NM_00730) (NM_0070) og BRCA1 (NM_0073)-gen. kort sagt blev 15 µL af hver fortyndet prøve-DNA (10 ng) tilsat til stregkodede plader til biblioteksforberedelse, og alle reagenser og forbrugsstoffer blev sat på Ion Chef™-instrumentet. Automatiseret biblioteksforberedelse og stregkodet prøvebibliotekspooling blev derefter udført på Ion Chef™-instrumentet. Antallet af forberedte biblioteker blev derefter vurderet af et Qubitor, Fisher®, Fisher, 3. MA, USA) i henhold til producentens instruktioner. Endelig kombineres biblioteker i ækvimolære forhold i Ion Chef™-biblioteksprøverør (stregkodede rør) og indlæses på Ion Chef™-instrumentet. Sekventering blev udført ved hjælp af et Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific)-instrument (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific)-analyse (Thermo Fisher-Data Scientific 510-analyse (Thermo Fisher Scientific) blev udført af AmData Scientific). plicon Suite (SmartSeq srl) og Ion Reporter Software.
Al variantnomenklatur fulgte de nuværende retningslinjer fra Human Genome Variation Consortium, tilgængelig online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Den kliniske betydning af BRCA1/2-varianter blev defineret ved at bruge klassifikationen af ​​International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutenigons, https://www.hgvs.org/mutnomen). UP, BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD og UMD. Klassifikationen omfatter fem adskilte risikokategorier: godartet (kategori I), sandsynligt godartet (kategori II), variant af usikker betydning (VUS, kategori III), sandsynligt patogen (kategori IV), og patogen (kategori V, også analyseret af proteinstrukturen og 3-funktioner).VarSome. 32
For at tildele potentiel klinisk betydning til hver VUS, blev følgende beregningsmæssige proteinforudsigelsesalgoritmer brugt: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) og Align-agvgvah.GD_agvgvah.GD_agvgvah. input.php). Varianter klassificeret som klasse 1 og 2 blev betragtet som vildtype.
Sanger-sekventering bekræftede tilstedeværelsen af ​​hver patogen variant. Kort fortalt blev et par specifikke primere designet for hver påvist variant ved at bruge BRCA1- og BRCA2-genreferencesekvenserne (NG_005905.2, NM_007294.3 og NG_012772.3, NM_000059, henholdsvis NM_000059, der blev efterfulgt af PCR). cing.
Patienter, der testede negative for BRCA1/2-genet, blev testet ved multiplex ligationsafhængig probe-amplifikation (MLPA) i henhold til producentens instruktioner for at vurdere tilstedeværelsen af ​​store genomiske omlejringer (LGR). Kort fortalt denatureres DNA-prøver, og der bruges op til 60 BRCA1- og BRCA2-genspecifikke prober, der hver består af en specifik DNA-sekvens med ca. af PCR-amplikoner, blev derefter analyseret ved kapillærelektroforese og med Cofalyser.Net-software i forbindelse med de passende batch-specifikke Cofalyser-tabeller (www.mrcholland.com).
Udvalgte klinikopatologiske variabler (histologisk grad og Ki-67 % proliferationsindeks) var forbundet med tilstedeværelsen af ​​BRCA1/2 PV, beregnet ved hjælp af Prism-softwaren v. 8.4 under anvendelse af Fishers eksakte test, der antog, at p-værdi <0,05 var signifikant.
Mellem januar 2017 og marts 2021 blev 455 patienter screenet for kimlinie BRCA1/2-mutationer. Mutationstest blev udført på Policlinico Hospital's Center for Experimental Oncology and Hematology.Ifølge den sicilianske retningslinje (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indic1,Vendic,N.2010,0000 020), Rodolico of Catania – San Marco” i alt, 389 patienter. Der var brystkræft, 37 kræft i æggestokkene, 16 kræft i bugspytkirtlen, 8 prostatacancer og 5 melanom.Fordelingen af ​​patienter efter kræfttype og analyseresultater er vist i figur 1.
Figur 1 viser et flowdiagram, der viser en oversigt over undersøgelsen. Patienter med bryst-, melanom-, pancreas-, prostata- eller ovarietumorer blev testet for mutationer i BRCA1- og BRCA2-generne.
Forkortelser: PV'er, patogen variant;VUS, variant af usikker betydning;WT, vildtype BRCA1/2-sekvens.
Vi fokuserede selektivt vores undersøgelser på brystkræftkohorter. Patienterne havde en medianalder på 49 år (spændvidde 23-89) og var overvejende kvinder (n=376 eller 97%).
Af disse forsøgspersoner havde 64 (17 %) BRCA1/2-mutationer og var alle kvinder. Femogtredive (9 %) havde PV og 29 (7,5 %) havde VUS. Sytten (48,6 %) af de 35 patogene varianter forekom i BRCA1 og 18 (51,4 %) i BRCA2, mens der forekom i BRCA 2,21 %) (8 %). (Figur 1 og 2). LGR var ikke til stede i MLPA-analysen.
Figur 2. Analyse af BRCA1- og BRCA2-mutationer i 389 brystkræftpatienter.(A) Fordeling af patogene varianter (PV) (rød), varianter af usikker betydning (VUS) (orange) og WT (blå) i 389 brystkræftpatienter;(B) 389 brystkræftpatienter Femogtredive (9%) havde BRCA1/2 patogene varianter (PV'er). Blandt dem var 17 (48,6%) BRCA1 PV-bærere (mørkerød) og 18 (51,4%) var BRCA2-bærere (lyserød);(C) 29 (7,5 %) af 389 forsøgspersoner bar VUS, 5 (17,2 %) BRCA1-gener (mørk orange) og 24 (82,8 %) BRCA2-gener (lyse orange).
Forkortelser: PV'er, patogen variant;VUS, variant af usikker betydning;WT, vildtype BRCA1/2-sekvens.
Vi undersøgte dernæst prævalensen af ​​BC molekylære subtyper hos patienter med BRCA1/2 PV. Fordelingen omfattede 2 (5,7 %) luminal A, 15 (42,9 %) luminal B, 3 (8,6 %) luminal B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ og 13 (37,1 %) TNluminale patienter (37,1 %) TN-4CA-positive. B BC, 2 (11,8 %) havde HER2+ sygdom, og 10 (58,8 %) havde TNBC. Tumorer uden BRCA1-mutationer var enten luminale A eller luminale B-HER2+ (figur 3). I den BRCA2-positive undergruppe var 10 (55,6 %) tumorer luminale B, 7ER 6 %) (TN-16 %). BC og 2 (11,1%) var luminal A (figur 3). Der var ingen HER2+-tumorer til stede i denne gruppe. BRCA1-mutationer er således fremherskende hos TNBC-patienter, hvorimod BRCA2-ændringer er fremherskende hos lumen B-individer.
Figur 3 Forekomst af brystkræftundertyper hos patienter med patogene varianter i BRCA1 og BRCA2. Histogrammer, der viser fordelingen af ​​BRCA1- (mørkerøde) og BRCA2- (lyserøde) PV'er blandt molekylære undertyper af brystkræftpatienter. Tallene rapporteret inden for hver boks repræsenterer procentdelen af ​​patienter med BRCA1- og BRCA2-cancer PV'er for hver undertype af brystkræft.
Forkortelser: PV'er, patogen variant;HER2+, human epidermal vækstfaktor receptor 2 positiv;TNBC, triple-negativ brystkræft.
Efterfølgende vurderede vi typen og genlokaliseringen af ​​BRCA1 og BRCA2 PV'er. I BRCA1 PV observerede vi 7 enkeltnukleotidvarianter (SNV'er), 6 deletioner, 3 duplikationer og 1 insertion.Kun én mutation (c.5522delG) repræsenterer en ny opdagelse. Den mest almindelige BRCA1-del blev påvist i begge individer. ændring involverer en deletion af fem nukleotider (CTAAT) i BRCA1 exon 15, hvilket resulterer i substitution af aminosyren leucin med tyrosin ved codon 1679, og på grund af en translationsrammeforskydning med en forudsagt alternativ stopkodon fører til for tidlig proteintrunkering. Alle andre ændringer er kun rapporteret i en PV-region, hvor der ikke er registreret et tilfælde af conplicets-stedet. c.4357+1G>T) (tabel 1).
Med hensyn til BRCA2 PV observerede vi 6 deletioner, 6 SNV'er og 2 duplikationer. Ingen af ​​de fundne ændringer er nye. Tre mutationer gentog sig i vores population, c.428dup og c.8487+1G>A observeret hos 3 forsøgspersoner, efterfulgt af c.5851_5854, der var gentaget i to tilfælde af C.28 gentagelser. 5 af BRCA2, forudsagt at kode for et trunkeret, ikke-funktionelt protein. c.8487+1G>A-mutationen forekommer i den introniske region af BRCA2 intron 19 (± 1,2) og påvirker splejsningskonsensussekvensen, hvilket resulterer i ændret splejsning, hvilket resulterer i unormalt eller fraværende 4-85-4AG-variant-pathogene 4AG-5AG-4-58-protein. otiddeletion fra nukleotidpositionerne 5851 til 5854 i det kodende exon 10 af BRCA2-genet og resulterer i en translationel rammeforskydning med et forudsagt alternativt stopkodon (p.S1951WfsTer). Det er bemærkelsesværdigt, som tidligere rapporteret, at begge ændringer c.631G>A- og c.2-den første mutation af c.700-patienten blev påvist i den samme ad 8-700. enosin (A) i BRCA2 exon 7 med et guanin (G)-holdigt nukleotid, hvilket resulterer i en ændring af valin til isoleucin ved codon 211, isoleucin Aminosyre er en aminosyre med meget lignende egenskaber. Denne ændring påvirker normal mRNA-splejsning. Den anden variant er lokaliseret i en intronisk region og resulterer i en dobbelt (A til 13)-substitution af BRCAon-en-cothymine-genet. 7008-2A>T-ændring kan generere flere transkripter af forskellig længde. Ydermere var 4 ud af 18 ændringer (22,2%) i gruppen af ​​BRCA2 PV'er introniske.
Derefter kortlagde vi BRCA1/2 skadelige mutationer i funktionelle domæner og proteinbindende regioner (fig. 4). I BRCA1-genet var 50 % af PV'erne lokaliseret i brystcancer-klyngeregionen (BCCR), mens 22 % af mutationerne var lokaliseret i ovariecancer-klyngeregionen (OCCR) (fig. 5, 4A-, PV- og variant 3-regionen). 42,8% af mutationerne var lokaliseret i OCCR (fig. 4B). Dernæst vurderede vi placeringen af ​​PV inden for BRCA1- og BRCA2-proteindomænerne. For BRCA1-proteinet fandt vi tre PV'er i loop- og coiled coil-domænerne, og to mutationer i BRCT-domænet (fig. 4A-proteinet, til BRC-proteinet, i BRC-proteinet, i BRC-proteinet, i BRC-proteinet i 4A-gentagelse). troniske og 3 exoniske ændringer blev påvist i oligo/oligosaccharid-bindende (OB) og tårn- (T) domæner (figur 4B).
Figur 4 Skematisk repræsentation af BRCA1- og BRCA2-proteiner og lokalisering af patogene varianter. Denne figur viser fordelingen af ​​BRCA1 (A) og BRCA2 (B) patogene varianter hos brystkræftpatienter. Eksoniske mutationer er vist med blåt, mens introniske varianter er vist med orange. Søjlens højde repræsenterer antallet af tilfælde. BRCA1- og BRCA2-proteindominerne (BRCA1-proteindominerne) er rapporteret. i (RING) og en nuklear lokaliseringssekvens (NLS), et coiled-coil-domæne, et SQ/TQ-cluster-domæne (SCD) og et BRCA1 C-terminalt domæne (BRCT).(B) BRCA2-proteinet indeholder otte BRC-gentagelser, et DNA-bindende domæne med et spiralformet domæne (Helical), tredobbelt oligonu-domæne, charotide-oligonuwerin-binding (Helical) (T) og en NLS på C-siden. Områder kaldet Breast Cancer Cluster Region (BCCR) og Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) er vist forneden.*Repræsenterer mutationer, der bestemmer stopkodoner.
Derefter undersøgte vi BC klinikopatologiske træk, der kunne korrelere med tilstedeværelsen af ​​BRCA1/2 PV. Fuldstændige kliniske optegnelser var tilgængelige for 181 BRCA1/2-negative patienter (ikke-bærere) og alle bærere (n = 35). Der var en sammenhæng mellem tumorproliferationsrate og -grad.
Vi beregnede fordelingen af ​​Ki-67 baseret på medianen af ​​vores kohorte (25%, interval <10-90%). Forsøgspersoner med Ki-67 < 25% blev defineret som "lav Ki-67", mens individer med værdier ≥ 25% blev betragtet som "høj Ki-67". Signifikante Ki-67-forskelle (1-0 CA-carrier) blev fundet mellem 1-0 CA-carriers og BR. bærere (fig. 5A).
Figur 5 Korrelation af Ki-67 med gradsfordeling hos brystkræftkvinder med og uden BRCA1 og BRCA2 PV'er.(A) Boksplot, der viser median Ki-67 værdier hos 181 ikke-bærer BC patienter versus BRCA1 (18) eller BRCA2 (17) PV patienter. P værdier under 0,5 blev betragtet som statistisk signifikante til hans cancerpatienter. klassegrupper (G2 og G3) i henhold til BRCA1- og BRCA2-mutationsstatus (WT-personer, BRCA1- og BRCA2-PV-bærere).
Ligeledes undersøgte vi, om tumorgrad korrelerede med tilstedeværelsen af ​​BRCA1/2 PV. Da G1 BC var fraværende i vores befolkning, opdelte vi patienterne i to grupper (G2 eller G3). I overensstemmelse med Ki-67 resultaterne afslørede analysen en statistisk signifikant korrelation mellem tumorgrad og BRCA1 mutation, med en højere andel af G3 ikke-bærere (0p)-bærere i forhold til BRCA5<Fi0gur-bærere. e 5B).
Fremskridt inden for DNA-sekventeringsteknologi har muliggjort hidtil usete fremskridt inden for BRCA1/2 genetisk testning, med afgørende implikationer for patienter med en familiehistorie med cancer. Til dato er ca. 20.000 BRCA1/2 varianter blevet identificeret og klassificeret i henhold til American Society of Medical Genetics 35 og ENIGMA6 BRCA-systemet er velkendt på tværs af geografiske specifikationer. s.37 Inden for Italien varierede frekvensen af ​​BRCA1/2 PV'er fra 8% til 37%, hvilket viser stor variation inden for landene.38,39 Med en befolkning på næsten 5 millioner er Sicilien den femtestørste region i Italien med hensyn til antallet af indbyggere. Selvom der findes data om fordelingen af ​​BRCA1/2 i den vestlige del, er der ingen omfattende beviser i den østlige del af den vestlige del.
Vores undersøgelse er en af ​​de første rapporter om forekomsten af ​​BRCA1/2 PV hos BC-patienter i det østlige Sicilien.28 Vi fokuserede vores analyse på BC, da dette er langt den mest almindelige sygdom i vores kohorte.
Ved testning af 389 BC-patienter bar 9 % BRCA1/2 PV'er, jævnt fordelt mellem BRCA1 og BRCA2. Disse resultater er i overensstemmelse med dem, der tidligere er rapporteret i den italienske befolkning.28 Interessant nok var 3 % (13/389) af vores kohorte mænd. Denne frekvens er højere end forventet for mandlig brystkræft (1 % af alle BC1-patienter baseret på risiko for mutation af BRCA) (1 % af alle BC1-populationer baseret på BRCA). , udviklede ingen af ​​disse mænd en BRCA1/2 PV, så de var kandidater til yderligere molekylær analyse for at udelukke tilstedeværelsen af ​​mindre almindelige mutationer, såsom PALB2, RAD51C og D, blandt andre. Varianter af usikker betydning blev hentet hos 7 % af forsøgspersonerne, hvor BRCA2 VUS var tydelig.
Da vi analyserede fordelingen af ​​BC molekylære subtyper i BRCA1/2 mutante kvinder, bekræftede vi kendte associationer mellem TNBC og BRCA1 PV (58,8%) og mellem luminal B BC og BRCA2 PV (55,6%).
Vi fokuserer derefter på typen og placeringen af ​​BRCA1/2 PV. I vores kohorte var den mest almindelige BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Selvom Incorvaia et al.beskrev ikke denne variant i deres sicilianske kohorte, andre forfattere har rapporteret den som en kimlinie BRCA1 PV.34 Adskillige BRCA1 PV'er blev fundet i vores kohorte – f.eks. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA og c.5266dupC – som er blevet observeret i disse to Sici- og 1G-mutationer (Brc28>1 og 1G muter. .5266dupC) er almindeligt forekommende hos ashkenazi-jøder i Øst- og Centraleuropa (Polen, Tjekkiet), slovenske, østrigske, ungarske, hviderussiske og tyske ), 44,45 og, i USA og Argentina, blev for nylig defineret som en "tilbagevendende kimlinievariant" hos italienske patienter med BC og OC-patienter med BC og OC5434c tidligere identificeret kræftpatienter med BC5434c. i Palermo og Messina. Interessant nok, selv Incorvaia et al.fundet c.3253dupA-varianten i nogle familier i Catania.28 De mest repræsentative BRCA2 PV'er er c.428dup, c.5851_5854delAGTT og den introniske variant c.8487+1G>A, som er blevet rapporteret mere detaljeret 28 hos en patient i Palermo med c.428dup i hus, c.4258d. det nordvestlige Sicilien, hovedsageligt i Trapani- og Palermo-regionerne, hvorimod c.5851_5854delAGTT PV blev observeret i husholdninger i det nordvestlige Sicilien. 8487+1G>A-varianten var mere almindelig hos forsøgspersoner fra Messina, Palermo og Caltanissetta.28 Rebbeck et al.tidligere beskrevet c.5851_5854delAGTT-ændringen i Colombia.37 En anden BRCA2 PV, c.631+1G>A, er blevet fundet hos BC- og OC-patienter fra Sicilien (Agrigento, Siracusa og Ragusa).28 Det er bemærkelsesværdigt, at vi observerede sameksistensen af ​​to BRCA2-varianter i den samme patient.6.7G>A08-patient (BRCA.7G>A08-patient). som vi antog at være adskilt i cis-tilstand, som tidligere rapporteret sådan.34,46 Disse BRCA2-uble-mutationer observeres faktisk hyppigt i den italienske region og har vist sig at introducere for tidlige stopkodoner, hvilket påvirker messenger-RNA-splejsning og får BRCA2-proteinet til at fejle.47,48
Vi kortlagde også BRCA1- og BRCA2-PV'er i formodede OCCR- og BCCR-regioner af proteindomæner og gener. Disse regioner blev beskrevet af Rebbeck et al.som risikoområder for udvikling af henholdsvis ovarie- og brystkræft.49 Imidlertid er evidensen vedrørende sammenhængen mellem placeringen af ​​kimlinjevarianter og risiko for bryst- eller ovariecancer fortsat kontroversiel.28,50-52 I vores befolkning var BRCA1 PV'er overvejende lokaliseret i BCCR-regionen, hvorimod BRCA2 PV'er var lokaliseret i de fleste, hvorimod PV-regioner, der var udover det, vi kunne finde. OCCR- og BCCR-regioner og BC-træk. Dette kan skyldes det begrænsede antal patienter med BRCA1/2-mutationer. Fra et proteindomæneperspektiv er BRCA1-PV'er fordelt langs hele proteinet, og BRCA2-ændringer findes fortrinsvis i BRC-gentagelsesdomænet.
Endelig korrelerede vi BC klinikopatologiske træk med BRCA1/2 PV. På grund af det begrænsede antal patienter inkluderet, fandt vi kun en signifikant sammenhæng mellem Ki-67 og tumorgraden. Selvom vurderingen og fortolkningen af ​​Ki-67 forbliver noget kontroversiel, er det sikkert, at høje proliferative rater er forbundet med øget risiko for sygdomsfornyelse og nedsættelse af sygdomsoverlevelse og nedsættelse af sygdommens tilbagevenden. lav” Ki-67 er 20%. Denne tærskel gælder dog ikke for vores BRCA1/2-mutationspatientpopulation, som har en median Ki-67-værdi på 25%. Denne tendens i høje Ki-67-rater kan forklares med prævalensen i vores luminale B- og TNBC-kohorter, hvoraf få luminale Aver-tumorer tyder på, at der var en højere Ki-67-svulst til stede, men nogle af dem kan have en højere grad af Ki-60-7. stratificere patienter i henhold til deres prognose.53,54 Ud fra resultaterne af vores analyse er en signifikant sammenhæng ikke overraskende.Forekommer mellem høj Ki-67 og grader og tilstedeværelsen af ​​BRCA1 PV. Faktisk er BRCA1-relaterede tumorer typiske for TNBC og udviser mere aggressive træk.16,17
Som konklusion giver denne undersøgelse en rapport om mutationsstatus for BRCA1/2 i en BC-kohorte fra det østlige Sicilien. Samlet set er vores resultater i overensstemmelse med allerede eksisterende evidens, både med hensyn til mutationsprævalens og klinikopatologiske træk i BC. Flere undersøgelser i større populationer af BRCA1/2-muterede BC-patienter, såsom brug af multigenomer, er tilstedeværelsen af ​​mutation, der er udvidet til at vurdere og mindre PV-analyse. hyppige end BRCA1/2. Dette vil muliggøre identifikation og korrekt håndtering af det stigende antal forsøgspersoner med øget risiko for cancer på grund af genetiske mutationer.
Vi bekræftede, at patienter underskrev informeret samtykke til at frigive deres tumorprøver anonymt til forskningsformål. Alle patienter underskrev skriftligt informeret samtykke i overensstemmelse med Helsinki-deklarationen. I henhold til politikken fra AOU Policlinico "G.Rodolico – S.Marco", var denne undersøgelse undtaget fra etisk gennemgang, fordi BRCA1/2-analysen blev udført i overensstemmelse med deres skriftlige, informerede brugsdata til patienter, der også gav deres samtykke til, at patienterne havde givet samtykke til det kliniske formål til forskning. .
Vi takker Prof. Paolo Vigneri for hans hjælp til pleje af brystkræftpatienter som anmodet af den etiske komité.
Federica Martorana rapporterer honoraria fra Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. De andre forfattere erklærer ingen interessekonflikter i dette værk.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimerer forekomsten og dødeligheden af ​​36 kræftformer i 185 lande rundt om i verden.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi:21603.32:21603.32.