"Tvivl aldrig på, at en lille gruppe af tænksomme, engagerede borgere kan ændre verden. Faktisk er det den eneste der."
Cureus' mission er at ændre den langvarige model for medicinsk publicering, hvor forskningsindsendelser kan være dyre, kompleks og tidskrævende.
Blodpladerig plasma/prp, vævsregenerering, blodpladeaktivering, glukoseproliferativ terapi, blodplader, proliferativ terapi
Citer denne artikel som: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17. maj 2022) Effekten af ​​glukose på blodpladetælling og -volumen: implikationer for regenerativ medicin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Blodpladerigt plasma (PRP) og hypertoniske glukoseopløsninger anvendes almindeligvis til injektion i regenerativ medicin, nogle gange sammen. Effekten af ​​hypertonisk glukose på blodpladelyse og -aktivering er ikke tidligere blevet rapporteret. Vi testede effekten af ​​forhøjede glukosekoncentrationer på blodplade- og erytrocyttællinger samt cellevolumener i PRP og fuldblod (WB). En hurtig delvis reduktion i blodpladetællingen forekom med alle glukoseblandinger blandet med PRP eller fuldblod, hvilket stemmer overens med delvis lyse. Efter det første minut forblev trombocyttallet stabilt, hvilket tyder på en hurtig akkommodation af resterende trombocytter til ekstrem (>2000 mOsm) hypertonicitet. Efter det første minut forblev trombocyttallet stabilt, hvilket tyder på en hurtig akkommodation af resterende trombocytter til ekstrem (>2000 mOsm) hypertonicitet. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккоходац тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Efter det første minut forblev trombocyttallet stabilt, hvilket indikerer en hurtig akkommodation af de resterende trombocytter til ekstrem (>2000 mOsm) hypertonicitet.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацих тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Efter det første minut forblev trombocyttallet stabilt, hvilket indikerer en hurtig tilpasning af de resterende trombocytter til den ekstreme (>2000 mOsm) hyperosmolære tilstand.Glukosekoncentrationer på 25 % og derover resulterede i en signifikant stigning i det gennemsnitlige trombocytvolumen (MPV), hvilket indikerer et tidligt stadie af trombocytaktivering. Yderligere undersøgelser er nødvendige for at afgøre, om der forekommer trombocytlyse eller -aktivering, og om hypertonisk glukoseinjektion alene eller i kombination med PRP kan give yderligere klinisk fordel.
I 1950'erne opdagede den amerikanske kirurg George Hackett, at han permanent kunne lindre led- og rygsmerter hos mange patienter ved at injicere en proliferativ opløsning i sener og ledbånd. Hans eksperimenter på kaniner viste, at behandlingen, som han kaldte proliferativ terapi, fik senerne til at forstørres og styrkes. Histologiske undersøgelser har bekræftet, at der produceres nyt kollagen under denne proces [1].
I løbet af de første par årtier blev mange forskellige distributionsløsninger afprøvet. I 1990'erne anså de fleste praktiserende læger høje koncentrationer af glukose for at være den sikreste og mest effektive metode. Virkningsmekanismen er dog stadig uklar.
Der blev udført få kliniske studier i det 20. århundrede efter Hacketts arbejde. I 2000'erne var der dog fornyet interesse, og adskillige succesfulde kliniske forsøg med proliferativ terapi blev gennemført til behandling af lændesmerter [2], slidgigt i knæet [3] og lateral epikondylitis [4].
Vævsregenerering kræver deltagelse af stamceller. Derfor må høje koncentrationer af glukose på en eller anden måde inducere migration, replikation og differentiering af stamceller. Vi antager, at blodplader kan fungere som budbringere, og at høje glukosekoncentrationer kan få blodplader til at frigive cytokiner og vækstfaktorer og derved fremme regenerative processer, især stamcellemigration til områder med høje glukosekoncentrationer.
Blodpladeaktivering går altid forud for en stigning i intracellulært calcium [5]. Liu et al. viste i 2008, at høje glukoseniveauer øger aktiviteten af ​​transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6) kanaler i plasmamembranen, hvilket fører til en tilstrømning af calciumioner til blodplader [6]. Et andet studie viste, at eksponering af mikrotubulus marginale zone for calciumioner forårsager relaksation, ekspansion og deformation af marginalzonen, hvilket igen forårsager en ændring i form fra disk til sfærisk, hvilket resulterer i gennemsnitligt blodpladevolumen (MPV) [7].
Vores hypotese i dette studie er, at eksponering af blodplader for høje koncentrationer af glukose påvirker mikrotubulus marginale zone og det intracellulære miljø, hvilket fører til en stigning i MPV.
Alle deltagere underskrev en informeret samtykkeerklæring efter at detaljerne i undersøgelsen var blevet forklaret og inden de modtog prøverne. I denne undersøgelse blev kun PRP-prøver med en hæmatokrit på over 2% anvendt, så erytrocyttal (erytrocytter) og gennemsnitligt korpuskulært volumen af ​​røde blodlegemer (MCV) kunne inkluderes til sammenligning.
Undersøgelsen blev udført i fire faser, den første fase var PRP, og de resterende faser var fuldblod (Tabel 1). Som tidligere beskrevet [8] blev alle relative centrifugalkræfter (RCF, g-kraft) beregnet ud fra midtpunktet (Rmid, i cm) af blodsøjlen i centrifugalsprøjten. Vi valgte at bruge MPV som en markør for trombocytsensibilisering og trombocyttal som en indikator for potentiel trombocytlyse, som begge let kan måles på standard hæmatologianalysatorer.
I den første fase donerede 47 frivillige blodprøver – et rør med ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) og én PRP-fuldblodsprøve (antikoaguleret med natriumcitrat (NaCl, 3%)) (Tabel 1). Vippemekanismen blev straks placeret i røret. Der blev udført en komplet blodtælling (CBC) på EDTA-prøver i triplikat, NaCl-prøverne blev analyseret i triplikat til CBC-analyse, og derefter blev PRP fremstillet ved hjælp af forskellige metoder beskrevet ovenfor [8]. Alle PRP-prøver blev fremstillet ved centrifugering ved 900-1000 g. Bland hver PRP-prøve på en vortexblander i 5-10 sekunder, og fordel derefter fem 0,5 ml aliquoter i rør.
For at evaluere effekten af ​​blodpladeeksponering på forhøjede glukosekoncentrationer blev lige store mængder (0,5 ml) af 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % og 50 % glukose i vand blandet med blodpladeprøverne for at opnå 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % og 25 % koncentrationer af glukoseblandingen, og rørene blev blandet på en reagensglasryster i 15 minutter. TAC'en for hver blanding blev analyseret i triplikat efter 15 minutter. Blodpladetælling (PLT), RBC-tælling, MCV og MPV blev gennemsnittet for hvert rør, og gennemsnitligt blodpladetælling, RBC-tælling, MCV og MPV blev beregnet for alle PRP-prøver.
Efter den første fase af dataindsamlingen var afsluttet, bemærkede vi en signifikant stigning i trombocytvolumen i PRP-trombocytter efter tilsætning af D50W. PRP-trombocytter repræsenterer ikke nødvendigvis alle trombocytter i blodet, og PRP-medium adskiller sig fra WB-medium. Derfor besluttede vi at udføre en anden fase af forsøget om effekten af ​​at tilsætte D50W til fuldblod.
Til anden runde valgte vi en stikprøvestørrelse på 30 baseret på resultaterne fra den første serie, som beskrevet i afsnittet Analyse. I denne serie donerede 20 frivillige blodprøver (Tabel 1). Fuldblod (1,8 ml) blev trukket ind i en 3 ml sprøjte og antikoaguleret med 0,2 ml 40% NaCl. Fuldblodssprøjten blev blandet i fem sekunder med en vortexmixer, og CBC blev analyseret i triplikat. Efter analyse blev antikoaguleret blod tilsat 2 ml 50% glukose i en 5 ml sprøjte (den endelige glukosekoncentration var ca. 25% (D25)) og placeret i et rysterør i 30 minutter. Efter 30 minutter blev D25/CBC i WB-sprøjter analyseret i triplikat. Blodpladetælling, erytrocyttal, MCV og MPV pr. sprøjte blev gennemsnittet, og gennemsnitlig PLT, erytrocyttal, MCV og MPV blev beregnet for hver prøve før og efter tilsætning af glukose.
Da blodplader i fuldblod ofte udsættes for hypertonisk glukose under proliferativ glukosebehandling på grund af minimalt invasiv injektion, og det ikke er almindeligt at kombinere PRP med hypertonisk glukose lige før injektion, besluttede vi at undersøge hypertonisk glukose i kombination med WB i afsnit 1, trin tre og fire. I hvert trin donerede 20 frivillige 7-8 ml ACD-A (syre indeholdende trinatriumcitrat (22,0 g/l), citronsyre (8,0 g/l) og glukose (24,5 g/l), dextrosecitratopløsning) til blodantikoagulantia (tabel 1). Kun glukoseblandinger på over 12,5 % blev brugt til at bestemme tærskelprocenten forbundet med en stigning i MPV. I tredje trin placeres 1 ml blod i et reagensglas. Bland derefter blodet på en vortexblander i 10 sekunder ved at tilsætte 1 ml 30% glukose, 40% glukose eller 50% glukose til røret for at opnå en endelig glukosekoncentration på henholdsvis 15%, 20% og 25%. Glukoseblodprøver blev analyseret for CBC umiddelbart efter blanding og gentaget hvert andet minut i 30 minutter.
Under den indledende blanding udsætter tilsætningen af ​​1:1 hypertonisk glukose og WB eller PRP blodpladerne for koncentrationer over 25 % i flere sekunder. I det fjerde trin tilsatte vi kun en lille mængde blod til D25W eller D50W for at evaluere effekten af ​​hypertonisk glukose med minimale initiale peakkoncentrationer og teste den øvre grænse for glukosens effekt. Placer 1 ml D25W eller D50W i et rør, og tilsæt 0,2 ml WB, mens prøven vortexes i 10 sekunder. I disse tilfælde blev blodet udsat for glukose i en koncentration ca. 20 % over slutkoncentrationen i stedet for 50 % over slutkoncentrationen som i fase 3, hvilket resulterede i slutglukosekoncentrationer på 20,8 % og 41,6 %. Blandede prøver blev analyseret med samme tidsinterval som i trin 3.
I det første trin i hver glukosefortyndingsserie blev der taget 30 prøver, da dette var den passende stikprøvestørrelse til pilotundersøgelsen [9]. Ved afslutningen af ​​hver fase (inklusive den første fase) skal stikprøvestørrelsens tilstrækkelighed vurderes ved hjælp af den formel, der bruges til at bestemme den stikprøvestørrelse, der er nødvendig for at estimere middelværdien af ​​den kontinuerlige udfaldsvariabel i én population. Formel n = Z2 x SD2 /E2. I denne ligning er Z Z-scoren, SD er standardafvigelsen, og E er den ønskede fejl [10]. Vores alfa er 0,05, hvilket svarer til en Z-værdi på 1,96, og vi forventer en fejl på 5 (i procent). Derfor løser vi for n = (1,962 x SD2)/52. Resultaterne viste, at den nødvendige stikprøvestørrelse for hvert trin var mindre end det faktisk indsamlede antal.
I periode 1, 3 og 4 med mere end én glukosekoncentration blev effekten af ​​forskellige glukosekoncentrationer analyseret ved at sammenligne den fraktionelle ændring mellem tidspunkt 0 og hvert efterfølgende tidspunkt (fase 1 ved 15 minutter, periode 3 ved 15 minutter) og fire ved 15 sekunder, derefter hvert andet minut.) Ændringsraterne for hver tidsperiode blev sammenlignet ved hjælp af Mann-Whitney U-testen, fordi dataene ikke fulgte en normalfordeling som bestemt af Shapiro-Wilk-normalitetstesten. Da en 1-til-1-analyse af flere grupper (fem) blev udført i første, tredje og fjerde trin (fem i alt), blev der udført en Bonferroni-korrektion for at justere den ønskede alfaværdi til ≤0,01, men ikke ≤0,05.
Reduktion af blodpladetælling med alle koncentrationer af hypertonisk dextrose og en stigning i MPV i PRP-blodplader ved >12,5 % dextrosekoncentration: PRP-blodpladetællingen steg fra en til fem gange koncentrationen sammenlignet med baseline fuldblod, varierende afhængigt af metoden (ikke vist). Reduktion af blodpladetælling med alle koncentrationer af hypertonisk dextrose og en stigning i MPV i PRP-blodplader ved >12,5% dextrosekoncentration: PRP-blodpladetællingen steg fra en til fem gange koncentrationen sammenlignet med baseline fuldblod, varierende afhængigt af metoden (ikke vist). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в RP концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной зависимости от метода (nе показано). Nedsat blodpladetælling ved alle hypertoniske dextrosekoncentrationer og øget MPV i PRP-blodplader ved >12,5% dextrosekoncentration: PRP-blodpladetællingen steg 1-5 gange sammenlignet med baseline fuldblod, afhængigt af metode (ikke vist). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血数，PRP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方漳朌因方漳而 Ved en glukosekoncentration på >12,5% reducerer den høje glukosekoncentration blodtallet, PRP-blod-MPV stiger: sammenlignet med 与基线全血 stiger PRP-blodtallet fra 1 til 5 gange koncentrationen (ikke beskrevet). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество MP, повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- til 5-кратных концентраций исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (nе описано ). Ved glukosekoncentrationer >12,5% faldt antallet af blodplader i alle hypertensive glukosekoncentrationer og øgede MPV i PRP-blodplader: PRP-blodpladetallet steg 1 til 5 gange sammenlignet med baseline-fuldblodskoncentrationer, afhængigt af metoden (som beskrevet).Figur 1 viser, at antallet af blodplader faldt med næsten 75 % efter fortynding i vand og med 20-30 % efter 15 minutters fortynding med forskellige glukosekoncentrationer sammenlignet med baseline PRP og en 1:1 fortynding justeret for volumen (1-k1 med volumenkorrektion). k -1 avl).
Antallet af celler i hver fortynding udtrykkes som en brøkdel af det oprindelige antal før fortynding.
MPV faldt minimalt under PRP-produktion, uden yderligere ændring i fortyndingskoncentrationerne til 12,5 % i vand eller glukose (inklusive 25 % PRP-glukoseblandinger) og steg med mere end 20 % efter fortynding i 50 % glukoseopløsning (fig. 2). I modsætning hertil viste erytrocytter ingen signifikant ændring i volumen ved nogen anden fortynding end H2O.
Det gennemsnitlige cellevolumen i hver fortynding udtrykkes som en procentdel af det oprindelige volumen før fortynding.
En lignende, men mindre udtalt reduktion i blodpladetællingen og en stigning i CVR blev observeret hos brystvorter eksponeret for 50 % glukose (for at formulere med 25 % glukose). Tabel 2 sammenligner celleantal og cellevolumen i fuldblod fortyndet i 50 % dextrose med fase 1 PRP-data fortyndet i 50 % dextrose. Ændringer i erytrocyttal og erytrocyttens maksimale blodtryk (MCV) var ikke tydelige og var ikke i fokus for vores opmærksomhed.
SD = standardafvigelse, MD = gennemsnitlig forskel mellem grupper, SE = standardafvigelse for gennemsnitlig forskel, RBC = erytrocytter, PLT = blodplader, PRP = blodpladerigt plasma, WB = fuldblod
Efter tilsætning af D50W til WB var det procentvise fortyndingsjusterede trombocyttab 7,7% (310 ± 73 vs. 286 ± 96) sammenlignet med 17,8% for PRP-fortynding i D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). MPV WB steg med 16,8% (fra 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6), mens MPV PRP steg med 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Selvom de gennemsnitlige forskelle i både reduktion af trombocyttal og stigning i MPV var signifikant større med PRP, var ændringerne i reduktionen af ​​trombocyttal inden for WB næsten signifikante (310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), og stigningen i MPV var signifikant (10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Selvom de gennemsnitlige forskelle i både reduktion af trombocyttal og stigning i MPV var signifikant større med PRP, var ændringerne i reduktionen af ​​trombocyttal inden for WB næsten signifikante (310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), og stigningen i MPV var signifikant (10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Selvom de gennemsnitlige forskelle i både reduktion af trombocyttal og stigning i CVR var signifikant større med PRP, var ændringerne i faldet i trombocyttal inden for WB næsten signifikante (310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Stigningen i MPV var signifikant (fra 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 殌 但 轡 内减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的瀄睯暘 的睯加1. ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Ændringen i reduktionen i trombocyttallet inden for WB var næsten signifikant (fra 310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), selvom PRP havde signifikant større gennemsnitlige forskelle i fald i trombocyttallet og stigning i MPV, og stigningen i MPV var signifikant.(от 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (fra 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
En slutkoncentration på 20 % glukose var nødvendig for at se en signifikant ændring i MPV, men ændringen i MPV var mere udtalt ved den endelige koncentration på 25 %. Tabet af blodplader stabiliserede sig efter det indledende fald. Vi bemærkede et indledende kraftigt fald i CVR, men CVR blev hurtigt genoprettet ved den endelige glukosekoncentration på 25 %, hvilket var signifikant højere end de CVR-niveauer, der blev observeret ved de endelige glukosekoncentrationer på 20 % og 15 % (fig. 3 og til venstre for tabel 3; skyggelagte bokse). indikerer p-værdier ≤ alfa med en Bonferroni-korrektion på 0,01). Der var også et indledende kraftigt fald i antallet af PLT, observeret i den indledende fase på 0-15 s, og forblev derefter stabilt (fra 15 s til 30 min; venstre for tabel 4).
Tilsætning af forskellige koncentrationer af glukose til fuldblod resulterede i et indledende hurtigt fald i MPV efterfulgt af en koncentrationsafhængig genvinding på mere end 20%. Forklaringen viser glukosekoncentrationen efter fortynding. D15, D20 og D25 blev udført i en 1:1 fortynding. D21 og D41 blev udført i en 1:5 fortynding.
Tabel 4 viser ændringen i blodpladetælling ved fortynding i hypertonisk glukose. Vi observerede en dosisafhængig sammenhæng mellem det øjeblikkelige fald i PLT-tal ved 1:1-fortyndingen og ved 1:5-fortyndingen. Ved sammenligning af 1:1-fortyndingerne som en enkelt gruppe med 1:5-fortyndingerne havde 1:1-gruppen et øjeblikkeligt fald i blodpladetælling, der var mindre end 1:5-gruppen, 66 ± 48.000 (23 %) versus 99 ± 69.000 (37 %), p = 0,014) i 1:5-gruppen. Efter et indledende fald ved det første målepunkt stabiliserede blodpladetællingen som en procentdel af glukose sig (fig. 4).
Når fuldblod tilsættes glukose i forholdet 1:1, reduceres antallet af blodplader med omkring 25 %. Men når fuldblod blev tilsat i forholdet 1:5, var reduktionen meget større – omkring 50 %.
41 % glukose øgede MPV hurtigere og mere dramatisk end 25 % eller 21 %. MPV-resultaterne er vist i figur 3. Ved alle andre fortyndinger blev der ikke observeret noget øjeblikkeligt initialt fald i MPV efter tilsætning af 50 % glukose. Ved brug af 25 % glukose (glukosekoncentration 20,8 % ved den endelige fortynding) var ændringen i MPV sammenlignelig med ændringen i 20 % glukose ved en 1:1 fortynding (fig. 3). Selvom ændringerne i MPV initialt var større ved den blandede koncentration på 41 % end ved 25 %, var forskellen i MPV mellem 41 % og 25 % efter 16 minutter ikke længere signifikant (tabel 3, højre). Det er også interessant, at 25 % glukose øgede MPV mere effektivt end 20,8 %.
Dette in vitro-studie bekræftede delvist vores hypotese. Den viste potentiel partiel blodpladelyse ved blanding af dextrose, en hurtig akkommodation af blodplader til ekstrem hypertonicitet og en signifikant stigning i MPV som reaktion på > 25% koncentrationer af hypertonisk dextrose. Den viste potentiel partiel blodpladelyse ved blanding af dextrose, en hurtig akkommodation af blodplader til ekstrem hypertonicitet og en signifikant stigning i MPV som reaktion på > 25% koncentrationer af hypertonisk dextrose. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациц тромби экстремального гипертонуса og значительное повышение MPV в ответ på гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Den viste potentiel partiel trombocytlyse med dextrose, hurtig trombocytakkommodation til ekstrem hypertonicitet og en signifikant stigning i MPV som reaktion på hypertoniske dextroseniveauer >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庸响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ på концентрацию гипертонической глюкозы >25%. Det viser potentiel partiel blodpladelyse ved glukoseblandinger, hurtig blodpladetilpasning til ekstrem hypertonicitet og en signifikant stigning i MPV som reaktion på hypertonisk glukose >25%.Den initiale stigning var maksimal ved 41,6 % glukoseeksponering, men stigningen i MPV nærmede sig 25 % glukoseeksponering cirka 20 minutter efter eksponering.
Koncentrationen af ​​blodplader påvirkes af glukose. Vi bemærkede, at mængden af ​​PLT faldt ved alle glukosefortyndinger. Et kraftigt fald i antallet af blodplader i H2O (0%) fortyndinger af PRP-serien kan være forbundet med osmotisk lyse. Alternativt kunne dette være en artefakt forårsaget af blodpladeklumpning, men dette står i kontrast til manglen på MPV-ændring ved denne fortynding. Dette fund betyder, at nogle blodplader er meget følsomme over for hypoosmolaritet.
I alle 1:1-fortyndinger af glukose faldt mængden af ​​PLT med 20-30 %, selv med D5W (hypotonisk ved 252 mOsm), hvilket kan indikere en specifik ikke-osmotisk effekt af glukose, da både PLT og MPV forblev uændrede ved en tredobbelt stigning i glukosekoncentrationen fra D5W til D25W. Faktisk havde PLT-koncentrationerne en tendens til at stige en smule med stigende osmolaritet.
Faldet i PLT mellem fortyndinger på 1:1 og 1:5 betyder, at opløsningseffekten afhænger af den indledende og den endelige glukosekoncentration. Hvis den kun afhang af den indledende koncentration, ville man forvente at se en forskel i PLT-reduktion mellem 1:1-koncentrationer. Men det gør vi ikke. Hvis lysiseffekten kun afhænger af den endelige glukosekoncentration, forventer vi ikke den store forskel mellem en 20% 1:1-fortynding og en 20,8% 1:5-fortynding. Og alligevel gjorde vi det.
Hvis der opstår blodpladetab på grund af blodpladelyse, dannes et partielt lysat, hvorefter cytokiner og vækstfaktorer frigives til det ekstracellulære miljø. Adskillige undersøgelser har vist, at blodpladelysat er næsten lige så effektivt som PRP som en proliferationsopløsning [11]. PRP har i sig selv vist sig at være en effektiv løsning til behandling af proliferation [12-14].
Inaktive blodplader cirkulerer i form af en skive forstærket med flere interne strukturer. Under aktivering antager de en mere sfærisk eller amøbeform, hvilket resulterer i en stigning i volumen. Stigningen i volumen kræver en stigning i overfladearealet, hvilket er resultatet af ekstrudering af det åbne tubulisystem (OCS) og tilføjelsen af ​​exocytære granuler til membranen. Det skal stadig afgøres, om stigningen i MPV induceret af hypertonisk glukose involverer en eller begge af disse mekanismer, men hvis sidstnævnte er tilfældet, vil en stigning i MPV indikere degranulation.
Denne undersøgelse viste, at eksponering for høje koncentrationer af glukose på PRP eller fuldblodsplader resulterede i en stigning i MPV inden for 15 minutter med en glukosekoncentration på henholdsvis 25 % og 41,6 %.
Stigningen i blodplade-MPV kan skyldes dilatation af de omgivende mikrotubuli-sammenfiltringer som reaktion på calciumtilstrømning. Liu et al. Glukose har vist sig at mediere calciumtilstrømning gennem blodplade-TRPC6-kanalen [6]. Vores hypotese er, at glukose inducerer afslapning af mikrotubuli-sammenfiltringer, hvilket fører til en stigning i MPV og blodpladesensibilisering og/eller -aktivering. Ud fra vores resultater er dette dog kun en del af historien. I vores test resulterede ingen koncentration under D25W i en stigning i MPV. Da vi ikke har testet eksponering for glukosekoncentrationer mellem 12,5 % og 25 %, tyder vores fase 1-resultater på, at der kan være en tærskel i dette interval af glukosekoncentrationer, der fører til en stigning i MPV. Yderligere test i trin 3 og 4 viste, at 20-25 % glukose synes at være tærsklen for dette, men det er fortsat uklart hvorfor.
Vi observerede også et fald i MPV på ~9% efter centrifugering. Det er ikke klart, om dette fald i MPV skyldes større og tættere blodplader fanget i centrifugens røde blodlegemer. Denne observation kan være vigtig for klinikere, da den kan antyde, at PRP-blodplader er en mindre og mindre tæt delmængde af hvide blodlegemer.
I et tidligere studie viste vi, at PRP-fremstilling ved manuelle metoder er billig [8]. Hvis glukose sensibiliserer vævsplader eller PRP, hvilket gør dem mere modtagelige for aktivering, eller hvis PRP produceres med partielle lysategenskaber, kan dette forbedre regenereringen og reducere behovet for behandling. Derfor kan kombinationen af ​​PRP og højkoncentreret glukose være mere omkostningseffektiv end PRP eller glukose alene.
Vores undersøgelse har adskillige mangler. For det første bruger vi PRP opnået ved hjælp af flere forskellige metoder. Dette kan føre til modstridende resultater. For det andet var vi ikke i stand til at udføre en biokemisk analyse af nogen af ​​vores prøver for mere præcist at bestemme, om der var forekommet trombocytaktivering. Vi vil gerne måle P-selektin, trombocytfaktor 4, monocytiske trombocytaggregater eller andre markører for trombocytaktivering for bedre at forstå graden eller tilstedeværelsen af ​​alfa-granula-degranulation, men dette ligger uden for denne undersøgelses rammer. For det tredje var vi ikke i stand til at bekræfte ved elektronmikroskopi eller andre metoder, at stigningen i MPV i glukose-eksponerede trombocytter skyldtes effekten på mikrotubulus-sammenfiltringer.
Blandinger af WB eller PRP med 25% glukose øgede MPV, hvilket signalerer begyndelsen af ​​trombocytaktivering, selvom dette studie ikke påviste progression af aggregering eller degranulation. Den hypertoniske glukoseblanding resulterede i trombocyttab, hvilket muligvis repræsenterer en lytisk effekt. Delvis aktivering eller lysis af trombocytter kan forårsage vævsregenerering efter trombocytinjektion. Det er ikke klart, hvilke kliniske konsekvenser disse ændringer kan føre til. Yderligere undersøgelser har vist mere nøjagtige målinger af aktivering eller lysis og har evalueret de forskellige kliniske effekter af hypertoniske glukoseblandinger med WB eller PRP.
Glukoseproliferativ terapi er en simpel og billig regenerativ terapi, der er i hastig vækst og understøtter klinisk forskning. Denne undersøgelse antyder en fysiologisk mekanisme, som, hvis den bekræftes, kan hjælpe os med at forstå en del af den regenerative mekanisme i proliferativ terapi.
Biomedicinsk og sundhedsinformatik ved University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Menneskelige forsøgspersoner: Alle deltagere i dette studie har givet eller ikke givet samtykke. International Society for Cellular Medicine har udstedt ICMS-2017-003-godkendelse. Følgende protokol er blevet godkendt til videre brug af Institutional Review Board of the International Society for Cellular Medicine: Titel: Beregning af udbytte af blodpladerigt plasma-lægemiddel baseret på baseline CBC-trombocyttal. Dyreforsøgspersoner: Alle forfattere bekræftede, at ingen dyr eller væv var involveret i dette studie. Interessekonflikter: I overensstemmelse med ICMJE Uniform Disclosure Form erklærer alle forfattere følgende: Betalings-/serviceoplysninger: Alle forfattere erklærer, at de ikke har modtaget økonomisk støtte fra nogen organisation til det indsendte arbejde. Økonomiske forhold: Alle forfattere erklærer, at de ikke i øjeblikket eller inden for de seneste tre år har økonomiske forhold til nogen organisation, der måtte være interesseret i det indsendte arbejde. Andre forhold: Alle forfattere erklærer, at der ikke er andre forhold eller aktiviteter, der kan påvirke det indsendte arbejde.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17. maj 2022) Effekten af ​​glukose på blodpladetælling og -volumen: implikationer for regenerativ medicin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Dette er en artikel med åben adgang, der distribueres under vilkårene i Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie er tilladt, forudsat at den oprindelige forfatter og kilde krediteres.