Tak, fordi du besøgte Nature.com. Den browserversion, du bruger, har begrænset understøttelse af CSS. For den bedste oplevelse anbefaler vi, at du bruger en opdateret browser (eller slår kompatibilitetstilstand fra i Internet Explorer). I mellemtiden vil vi for at sikre fortsat support vise webstedet uden stilarter og JavaScript.
Porøse silicapartikler blev fremstillet ved hjælp af en sol-gel-metode med nogle modifikationer for at opnå makroporøse partikler. Disse partikler blev derivatiseret ved reversibel additionsfragmenteringskædeoverførsel (RAFT) polymerisation med N-phenylmaleimid-methylvinylisocyanat (PMI) og styren for at fremstille N-phenylmaleimid-faseinterkalation af N-phenylmaleimid-faseløs polystyren (PMP)-søjle-0-0-stationær polystyren-søjle (NMP)-søjle-0 1,8 mm id) blev pakket ved opslæmningspakning. Evalueret PMP-søjleseparation af en peptidblanding bestående af fem peptider (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin-enkephalin) kromatografiske betingelser for humant serum (US-fordøjelse og optimal chromatografisk præstation af humant album) (HA). teoretisk pladetal af peptidblandingen er så højt som 280.000 plader/m². Ved at sammenligne separationsydelsen af ​​den udviklede kolonne med den kommercielle Ascentis Express RP-Amide-søjle, blev det observeret, at separationsydelsen af ​​PMP-søjlen var overlegen i forhold til den kommercielle kolonne med hensyn til separationseffektivitet og opløsning.
I de senere år er den biofarmaceutiske industri blevet et ekspanderende globalt marked med en væsentlig stigning i markedsandele. Med den eksplosive vækst i den biofarmaceutiske industri1,2,3 er analysen af ​​peptider og proteiner yderst ønsket. Ud over målpeptidet genereres adskillige urenheder under peptidsyntesen, hvilket kræver, at den ønskede kromatografiske peptidoprensning af vævet i kropsvævet og vævsanalysen af ​​væskeproteiner. s og celler er en ekstremt udfordrende opgave på grund af det store antal potentielt påviselige arter i en enkelt prøve. Selvom massespektrometri er et effektivt værktøj til peptid- og proteinsekventering, vil adskillelsen ikke være ideel, hvis sådanne prøver injiceres i massespektrometeret i én omgang. på et givet tidspunkt4,5,6. Derudover kan analytter under væskefaseseparation fokuseres i snævre områder, hvorved disse analytter koncentreres og MS-detektionsfølsomheden forbedres.Væskekromatografi (LC) er gået betydeligt frem i løbet af det seneste årti og er blevet en populær teknik inden for proteomanalyse7,8,9,10.
Væskekromatografi med omvendt fase (RP-LC) bruges i vid udstrækning til oprensning og separation af peptidblandinger ved brug af octadecyl-modificeret silica (ODS) som stationær fase11,12,13. RP stationære faser giver dog ikke tilfredsstillende adskillelse af peptider og proteiner på grund af deres komplekse natur, 14,1 stationære fasestruktur og de amphirephilic-designede 14,1 stationære faser. at analysere peptider og proteiner med polære og ikke-polære dele for at interagere med og bibeholde disse analytter16. Mixed-mode kromatografi, som giver multimodale interaktioner, kan være et alternativ til RP-LC til adskillelse af peptider, proteiner og andre komplekse blandinger. Adskillige mixed-mode stationære faser er blevet fremstillet med,1 peptider, 1-søjler og proteiner er blevet fremstillet med, 1-søjler, 1-søjler og proteiner. 9,20,21. Blandede stationære faser (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polær interkalation/RPLC) er velegnede til peptid- og proteinseparationer på grund af tilstedeværelsen af ​​både polære og ikke-polære grupper polære og ikke-polære analytter, da separation afhænger af interaktionen mellem analyt og stationær fase.Multimodale interaktioner 29, 30, 31, 32. For nylig har Zhang et al.30 fremstillede en stationær fase af dodecyltermineret polyamin og med succes adskilte kulbrinter, antidepressiva, flavonoider, nukleosider, østrogener og adskillige andre analytter. Den polære interkalator har både polære og ikke-polære grupper, så den kan bruges til at adskille peptider og proteiner, der har både hydrofobe og hydrofile søjler, f.eks. ) er kommercielt tilgængelige under handelsnavnet Ascentis Express RP-Amide-søjler, men disse søjler bruges kun til analyse af amin 33.
I den aktuelle undersøgelse blev en polær-indlejret stationær fase (N-phenylmaleimid-indlejret polystyren) fremstillet og evalueret for separation af peptider og trypsin-fordøjelser af HSA. Den stationære fase blev fremstillet ved hjælp af følgende strategi. Porøse silica-partikler blev fremstillet i overensstemmelse med proceduren givet i vores tidligere publikation med nogle protokoller, EG-preparatet med nogle modifikationer, polyOS-glycen. , blev vandeddikesyre justeret for at fremstille silicapartikler med stor porestørrelse. For det andet blev en ny ligand, phenylmaleimid-methylvinylisocyanat, syntetiseret og brugt til at derivatisere silicapartikler for at fremstille en polær indlejret stationær fase. Den resulterende stationære fase blev pakket ind i en rustfri stålsøjle ved hjælp af 10 mm0 pakkesøjle ved hjælp af 10 mm0 pakke. mekanisk vibration for at sikre, at der dannes et homogent leje inde i kolonnen. Evaluer pakket kolonneseparation af peptidblandinger bestående af fem peptider;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) og Trypsin-fordøjelse af humant serumalbumin (HAS). Peptidblandingen og trypsinfordøjelsen af ​​HSA blev observeret at adskille med god opløsning og effektivitet. Søjlens separationsydelse for PMP-peptider blev sammenlignet med PMP-søjlens peptid. og proteiner blev observeret at være velopløste og effektive på PMP-søjlen, som var mere effektiv end Ascentis Express RP-Amide-søjlen.
PEG (polyethylenglycol), urinstof, eddikesyre, trimethoxyorthosilikat (TMOS), trimethylchlorosilan (TMCS), trypsin, humant serumalbumin (HSA), ammoniumchlorid, urinstof, hexanmethyldisilazan (HMDS), methacryloylchlorid (MC, hydroxy), benzogradydroxy (HPLC, styren, 4-TEB), benzogradoxyd, styren trile (ACN), methanol, 2-propanol og acetone købt fra Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
En blanding af urinstof (8 g), polyethylenglycol (8 g) og 8 ml 0,01 N eddikesyre blev omrørt i 10 minutter, og derefter blev 24 ml TMOS tilsat dertil under iskolde betingelser. Reaktionsblandingen blev opvarmet til 40 °C i 6 timer og derefter ved 120 timer i autoklavet stål blev remanensen tørret i 8 °C. d ved 70°C i 12 timer. Den tørrede bløde masse blev glat formalet i en ovn og calcineret ved 550°C i 12 timer. Tre batches blev fremstillet og karakteriseret for at undersøge reproducerbarhed i partikelstørrelse, porestørrelse og overfladeareal.
Ved overflademodifikation af silicapartikler med præsyntetiseret ligand phenylmaleimid-methylvinylisocyanat (PCMP) efterfulgt af radial polymerisation med styren blev en polær gruppe-holdig forbindelse fremstillet.Stationær fase for tilslag og polystyrenkæder. Forberedelsesprocessen er beskrevet nedenfor.
N-phenylmaleimid (200 mg) og methylvinylisocyanat (100 mg) blev opløst i tør toluen, og 0,1 ml 2,2'-azoisobutyronitril (AIBN) blev tilsat til reaktionskolben for at fremstille phenylmaleimid-methylvinyl-isocyanat-blandingen i 3 timer, tørret i 3,0°C. d i en ovn ved 40°C i 3 timer.
Tørrede silicapartikler (2 g) blev dispergeret i tør toluen (100 ml), omrørt og sonikeret i en 500 ml rundbundet kolbe i 10 minutter. PMCP (10 mg) blev opløst i toluen og tilsat dråbevis til reaktionskolben via en dråbetragt. Blandingen blev tilbagesvalet ved 100 tons og tørret ved 100 tons. °C i 3 timer. Derefter blev PMCP-bundne silicapartikler (100 g) opløst i toluen (200 ml), og 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) blev tilsat i nærvær af 100 µL dibutyltindilaurat som katalysator. Blandingen blev omrørt ved 50 °C og tørret ved 50 °C i 3 timer og tørret i 3 timer.
Styren (1 ml), benzoylperoxid BPO (0,5 ml) og TEMPO-PMCP-vedhæftede silicapartikler (1,5 g) blev dispergeret i toluen og skyllet med nitrogen. Polymerisationen af ​​styren blev udført ved 100 °C i 12 timer. Det resulterende produkt blev vasket med methanol over natten i reaktionsskema 1 og tørret i 60°C natten over.
Prøverne blev afgasset ved 393 K i 1 time for at opnå et resttryk på mindre end 10-3 Torr. Mængden af ​​N2 adsorberet ved et relativ tryk på P/P0 = 0,99 blev brugt til at bestemme det totale porevolumen. Morfologien af ​​nøgne og ligandbundne silicapartikler blev undersøgt med scanning-elektronisk mikroskopi, Tokyo- og Japan-prøver (Higitat-elektronisk mikroskopi, Japan). ed silica-partikler) blev anbragt på en aluminiumssøjle ved hjælp af klæbende carbontape. Guld blev udpladet på prøverne ved hjælp af en Q150T sputtercoater, og et 5 nm Au-lag blev afsat på prøverne. Dette forbedrer proceseffektiviteten ved brug af lave spændinger og giver finkornet kold sputtering.A Thermo Electron (Waltham)1 element analyse blev brugt til EA Malvernal (Waltham, USA)1 element analyse. orcestershire, UK) Mastersizer 2000 partikelstørrelsesanalysator blev brugt til at opnå partikelstørrelsesfordelingen. Nøgne silicapartikler og ligandbundne silicapartikler (5 mg hver) blev dispergeret i 5 mL isopropanol, sonikeret i 10 minutter, vortexbehandlet i 5 minutter og anbragt på den optiske perlebænk på en °C-analyse på 5 minutter. et temperaturområde på 30 til 800 °C.
Glasbeklædte, smalborede søjler af rustfrit stål med dimensioner (100 × 1,8 mm id) blev pakket ved anvendelse af opslæmningspakningsmetoden under anvendelse af den samme procedure, der blev anvendt i ref.31. En søjle af rustfrit stål (glasforet, 100 × 1,8 mm id) med en udløbsfitting indeholdende en 1 µm fritte blev forbundet til en slampakker (Alltech Deerfield, IL, USA). Forbered en stationær fase-opslæmning ved at suspendere 150 mg stationær fase af opløsningsmidlet methanol i 1.2-søjlen. som drivopløsningsmiddel.Fyld kolonnen sekventielt ved at påføre tryk på 100 MP i 10 minutter, 80 MP i 15 minutter og 60 MP i 30 minutter.Under pakningen blev der påført mekanisk vibration med to GC-søjlerystere (Alltech, Deerfield, IL, USA) for at sikre ensartet pakning af kolonnen og forhindre langsom udløsning af trykket i kolonnen. gyllepakningsenheden og tilslut en anden fitting til indløbet og til LC-systemet for at kontrollere dens ydeevne.
En LC-pumpe (10AD Shimadzu, Japan), injektor (Valco (USA) C14 W.05) med 50nL injektionssløjfe, membranafgasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapillarvindue blev konstrueret. Speciel µLC-enhedsdetektor (UV-2075) og kortslutning af mikrosøjler med mikrosøjler for at forbinde den meget kortere glaskolonne. båndudvidelse. Efter emballering blev kapillærer (50 μm id 365 og reducerende unionskapillærer (50 μm) installeret ved 1/16″ udløbet på den reducerende union. Dataindsamling og kromatografisk behandling blev udført ved hjælp af Multichro 2000 software. Monitorering ved 254 data blev testet for 254 UV-analyser. (Northampton, MA).
Albumin fra humant serum, lyofiliseret pulver, ≥ 96 % (agarosegelelektroforese) 3 mg blandet med trypsin (1,5 mg), 4,0 M urinstof (1 ml) og 0,2 M ammoniumbicarbonat (1 ml). TFA. Filtrer opløsningen og opbevar under 4 °C.
Separation af peptidblandinger og HSA-trypsinfordøjelser blev evalueret separat på PMP-søjler. Tjek adskillelsen af ​​peptidblandingen og trypsinfordøjelsen af ​​HSA ved PMP-søjlen og sammenlign resultaterne med Ascentis Express RP-Amide-kolonnen. Det teoretiske pladenummer beregnes som følger:
SEM-billeder af nøgne silicapartikler og ligandbundne silicapartikler er vist i fig.2 .SEM-billeder af nøgne silicapartikler (A, B) viser, at disse partikler i modsætning til vores tidligere undersøgelser er sfæriske, hvor partiklerne er forlængede eller har uregelmæssig symmetri. Overfladen af ​​de ligandbundne silicapartikler (C, D) er glattere end overfladen af ​​de nøgne silicapartikler til overfladen af ​​silicapartiklerne, som kan være duestyrenoverfladen på partiklerne.
Scanning af elektronmikroskopbilleder af nøgne silicapartikler (A, B) og ligandbundne silicapartikler (C, D).
Partikelstørrelsesfordelingerne af nøgne silicapartikler og ligandbundne silicapartikler er vist i figur 3(A).Volumenbaserede partikelstørrelsesfordelingskurver viste, at størrelsen af ​​silicapartiklerne steg efter kemisk modifikation (Fig. 3A).Partikelstørrelsesfordelingsdataene for silicapartiklerne fra den nuværende undersøgelse og den tidligere volumenundersøgelse er sammenlignet med partikelstørrelsen 1(A, 0,- og partikelstørrelsen P,(5). 3,36 μm, sammenlignet med vores tidligere undersøgelse med en ad(0,5) værdi på 3,05 μm (polystyrenbundne silicapartikler)34. Denne batch havde en snævrere partikelstørrelsesfordeling sammenlignet med vores tidligere undersøgelse på grund af de varierende forhold mellem PEG, urinstof, TMOS og eddikesyrepartikelstørrelsen i PMP-silicafasen, der er lidt større i blandingen af ​​polystyren-silica. fase, vi tidligere har undersøgt. Det betyder, at overfladefunktionalisering af silicapartikler med styren kun aflejrede et polystyrenlag (0,97 µm) på silicaoverfladen, hvorimod lagtykkelsen i PMP-fasen var 1,38 µm.
Partikelstørrelsesfordeling (A) og porestørrelsesfordeling (B) for nøgne silicapartikler og ligandbundne silicapartikler.
Porestørrelsen, porevolumen og overfladearealet af silicapartiklerne i den aktuelle undersøgelse er angivet i tabel 1(B). PSD-profilerne for bare silicapartikler og ligandbundne silicapartikler er vist i figur 3(B). Resultaterne er sammenlignelige med vores tidligere undersøgelse. Porestørrelserne af de bare og ligandbundne silicapartikler angiver, hvilke pore10-størrelser, hhv. 69 efter kemisk modifikation, som vist i tabel 1(B), og ændringen af ​​kurven er vist i fig. 3(B). Tilsvarende faldt porevolumenet af silicapartiklerne fra 0,67 til 0,58 cm3/g efter kemisk modifikation. 1(B) faldt overfladearealet (m2/g) af silicapartiklerne også fra 116 m2/g til 105 m2/g efter kemisk modifikation.
Resultaterne af elementær analyse af den stationære fase er vist i tabel 2. Kulstofbelastningen af ​​den nuværende stationære fase er 6,35%, hvilket er lavere end kulstofbelastningen i vores tidligere undersøgelse (polystyrenbundne silicapartikler, henholdsvis 7,93%35 og 10,21%) 42. Kulstofbelastningen af ​​den nuværende stationære fase er lav, fordi SP-tilsætningen af ​​den nuværende stationære fase er lav i den nuværende stationære fase, fordi SP-tilsætningen i den nuværende stationære fase er lav. Der blev brugt phenylmaleimid-methylvinylisocyanat (PCMP) og 4-hydroxy-TEMPO. Nitrogenvægtprocenten af ​​den nuværende stationære fase er 2,21%, sammenlignet med henholdsvis 0,1735 og 0,85% efter vægt af nitrogen i tidligere undersøgelser. s af produkter (4) og (5) var henholdsvis 2,7 % og 2,9 %, mens kulstofbelastningen af ​​slutproduktet (6) var 6,35 %, som vist i tabel 2. Vægttabet blev kontrolleret med PMP stationær fase, og TGA-kurven er vist i figur 4. TGA-kurven viser et vægttab på 8 % i 6 %), fordi vægttabet kun er godt med 8 % og kulstof. men også N, O og H.
Phenylmaleimid-methylvinylisocyanat-liganden blev valgt til overflademodifikation af silicapartikler, fordi den har polære phenylmaleimidgrupper og vinylisocyanatgrupper. Vinylisocyanatgrupper kan reagere yderligere med styren ved levende radikal polymerisation. Den anden grund er at indsætte en gruppe, der har en moderat og ingen vekselvirkning mellem den analytiske fase, den analytiske fase og den analytiske fase med den analytiske fase og den analytiske fase. ylmaleimid-delen har ingen virtuel ladning ved normal pH. Polariteten af ​​den stationære fase kan styres af den optimale mængde styren og reaktionstiden for fri radikal polymerisation. Det sidste trin af reaktionen (fri-radikal polymerisation) er kritisk og kan ændre polariteten af ​​den stationære fase. Elementær analyse blev udført for at kontrollere kulstofbelastningen af ​​disse stationære faser og øget mængden af ​​carbon i de observerede stationære faser og øget mængden af ​​styrene i stationære carbonfaser og den øgede mængde af carbon. versa.SP'er, der er fremstillet med forskellige koncentrationer af styren, har forskellige kulstofbelastninger. Igen skal du indlæse disse stationære faser i rustfri stålsøjler og kontrollere deres kromatografiske ydeevne (selektivitet, opløsning, N-værdi osv.). Baseret på disse eksperimenter blev en optimeret formulering udvalgt til at forberede den stationære PMP-fase for at sikre kontrolleret polaritet og god analytretention.
Fem peptidblandinger (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin-enkephalin) blev også evalueret under anvendelse af en PMP-søjle under anvendelse af en mobil fase;60/40 (v/v) acetonitril/vand (0,1 % TFA) ved en strømningshastighed på 80 μL/min. Under optimale elueringsforhold er det teoretiske pladetal (N) pr. søjle (100 × 1,8 mm id) 20.000 ± 100 (200.000 P-plader/m² T-pladerne giver N-pladerne/3 T-plader). kromatogrammer er vist i figur 5A. Hurtig analyse på en PMP-søjle ved høj strømningshastighed (700 μL/min), fem peptider blev elueret inden for et minut, N-værdier var meget gode, 13.500 ± 330 pr. søjle (100 × 1,8 mm id), svarer til 5-søjlestørrelsen/03m, svarende til 5/03 m). (100 × 1,8 mm id) blev pakket med tre forskellige partier af PMP stationær fase for at kontrollere reproducerbarheden. Analytkoncentrationen for hver kolonne blev registreret ved hjælp af de optimale elueringsbetingelser og antallet af teoretiske plader N og retentionstid til at adskille den samme testblanding på hver kolonne. Reproducerbarhedsdataene for PMP-kolonnerne er vist i tabel 4. Den meget lave reproducerbarhed af PMP3-værdien er vist i brønd-reproducerbarheden i % TRD. .
Adskillelse af peptidblanding på PMP-søjle (B) og Ascentis Express RP-amid-søjle (A);mobil fase 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP søjle dimensioner (100 × 1,8 mm id);analytisk Elueringsrækkefølgen af ​​forbindelserne: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) og 5 (leucin) syre enkephalin)).
En PMP-søjle (100 × 1,8 mm id) blev evalueret for adskillelse af tryptiske fordøjelser af humant serumalbumin ved højtydende væskekromatografi. Kromatogrammet i figur 6 viser, at prøven er godt adskilt, og opløsningen er meget god. Som vist i kromatogrammet (figur 6) er HSA-fordøjelsen blevet opdelt i 17 toppe svarende til 17 peptider. Separationseffektiviteten af ​​hver top i HSA-fordøjelsen blev beregnet, og værdierne er angivet i tabel 5.
En tryptisk fordøjelse af HSA (100 x 1,8 mm id) blev separeret på en PMP-søjle;strømningshastighed (100 µL/min), mobil fase 60/40 acetonitril/vand med 0,1 % TFA.
hvor L er kolonnelængden, η er viskositeten af ​​den mobile fase, ΔP er kolonnens modtryk, og u er den lineære hastighed af den mobile fase. PMP-søjlens permeabilitet var 2,5 × 10-14 m2, strømningshastigheden var 25 μL/min, og 60/40 v/v PMP/1me-søjlen blev brugt x 0 mm-søjlen per1me. svarede til den i vores tidligere undersøgelse Ref.34. Permeabiliteten af ​​søjlen pakket med overfladisk porøse partikler er: 1,7 × 10-15 for 1,3 μm partikler, 3,1 × 10-15 for 1,7 μm partikler, 5,2 × 10-15 og 102 m for 102 μm partikler. μm-partikler 43. Derfor svarer permeabiliteten af ​​PMP-fasen til den for 5 μm kerne-skal-partikler.
hvor Wx er vægten af ​​kolonnen pakket med chloroform, Wy er vægten af ​​kolonnen pakket med methanol, og ρ er densiteten af ​​opløsningsmidlet. Densiteter af methanol (ρ = 0,7866) og chloroform (ρ = 1,484). Den samlede porøsitet af SILICA PARTICLES-C1018 kolonner-C1008 kolonner (C31 mm) og 1008 kolonner (1008). s 31, som vi tidligere har undersøgt, var henholdsvis 0,63 og 0,55. Dette betyder, at tilstedeværelsen af ​​urinstofligander reducerer permeabiliteten af ​​den stationære fase. På den anden side er den totale porøsitet af PMP-søjlen (100 × 1,8 mm id) 0,60. Permeabiliteten af ​​PMP-søjler, der er bundet til PMP-søjler, er lavere end C8-søjler, der er bundet med C8-søjler-partikel-type. ære faser er C18-liganderne knyttet til silicapartiklerne som lineære kæder, mens der i stationære faser af polystyrentypen dannes det relativt tykke polymerlag omkring det. I et typisk eksperiment beregnes søjleporøsiteten som:
Figur 7A,B viser PMP-søjlen (100 x 1,8 mm id) og Ascentis Express RP-Amide-søjlen (100 x 1,8 mm id) under anvendelse af de samme elueringsbetingelser (dvs. 60/40 ACN/H2O og 0,1 % TFA).) af van Deemter-grunden.Udvalgte peptidblandinger (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucin Enkephalin) blev fremstillet i 20 µL/ Den mindste flowhastighed for begge søjler er 800 µL/min. Den minimale HETP-hastighed er optimum for P- og min. er Express RP-Amide-søjlen var henholdsvis 2,6 µm og 3,9 µm. HETP-værdierne indikerer, at adskillelseseffektiviteten af ​​PMP-søjlen (100 × 1,8 mm id) er meget bedre end den kommercielt tilgængelige Ascentis Express RP-Amide-søjle (100 × 1,8 mm id) viser, at der ikke er en signifikant reduktion i N-værdien (fig. 7 mm id). til vores tidligere undersøgelse. Den højere separationseffektivitet af PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) sammenlignet med Ascentis Express RP-Amide-søjlen er baseret på forbedringer i partikelform, størrelse og komplekse kolonnepakningsprocedurer, der anvendes i det nuværende arbejde34.
(A) van Deemter-plot (HETP versus lineær hastighed i mobilfase) opnået ved anvendelse af en PMP-søjle (100 × 1,8 mm id) i 60/40 ACN/H2O med 0,1 % TFA.(B) van Deemter-plot (HETP versus lineær hastighed i mobilfase) opnået ved anvendelse af en Ascentis Express RP-Amid-søjle ×1.00 mm / 000 mm2 i.H2O. med 0,1 % TFA.
En stationær fase af polært indlejret polystyren blev fremstillet og evalueret til adskillelse af syntetiske peptidblandinger og trypsinfordøjelser af humant serumalbumin (HAS) i højtydende væskekromatografi. Den kromatografiske ydeevne af PMP-søjler til peptidblandinger er fremragende med hensyn til adskillelseseffektivitet og opløsning. Den forbedrede adskillelsesevne, som partikelstørrelsen af ​​PMP-søjlestørrelsen, skyldes PMP-størrelsen og søjlens størrelse. partikler, kontrolleret syntese af den stationære fase og kompleks søjlepakning. Ud over høj separationseffektivitet er lavt søjlemodtryk ved høje strømningshastigheder en anden fordel ved denne stationære fase. PMP-søjler udviser god reproducerbarhed og kan bruges til analyse af peptidblandinger og trypsinfordøjelse af forskellige proteiner. Vi har til hensigt at bruge denne søjle til adskillelse af medicinske funchromografiske produkter fra fremtidige medicinske og bioaktive sammensætninger fra medicinske, bioaktive, naturlige produkter. , vil PMP-søjler også blive evalueret for adskillelse af proteiner og monoklonale antistoffer.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Forbedrede aktive peptider designet til behandling af infektionssygdomme.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) i dag, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (120.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
Liu, W. et al. Avanceret væskekromatografi-massespektrometri muliggør inkorporering af bredt målrettet metabolomics og proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC's rolle i lægemiddeludvikling.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Grundlæggende og praktiske aspekter af ultrahøjtryksvæskekromatografi til hurtige separationer.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Anvendelse af ultrahøjtydende væskekromatografi i lægemiddeludvikling.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolitiske makroporøse hydrogeler fremstillet ud fra olie-i-vand emulsioner med høj indre fase til effektiv oprensning af enterovira. Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rollen af ​​væskekromatografi i proteomics.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Nye tendenser i omvendt-fase væskekromatografiseparationer af terapeutiske peptider og proteiner: teori og anvendelser.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Todimensionel adskillelse af peptider ved hjælp af et RP-RP-HPLC-system ved hjælp af forskellige pH-værdier i den første og anden separationsdimension.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Masseoverførselskarakteristika og kinetisk ydeevne af højeffektive kromatografiske kolonner pakket med C18 sub-2 μm fuldt og overfladisk porøse partikler blev undersøgt.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Nylige tendenser og analytiske udfordringer inden for isolering, identifikation og validering af plantebioaktive peptider.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-00216-028-0018).
Mueller, JB et al. Livets riges proteomiske landskab.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Nedstrømsbehandling af terapeutiske peptider ved præparativ væskekromatografi. Molecule (Basel, Schweiz) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode kromatografi og dens anvendelse på biopolymerer.J.Chromatography.A 1218(49), 8813-8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligander til mixed-mode proteinkromatografi: princip, karakterisering og design.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).