Η Javascript είναι απενεργοποιημένη αυτήν τη στιγμή στο πρόγραμμα περιήγησής σας. Ορισμένες λειτουργίες αυτού του ιστότοπου δεν θα λειτουργούν όταν το javascript είναι απενεργοποιημένο.
Εγγραφείτε με τα συγκεκριμένα στοιχεία σας και το συγκεκριμένο φάρμακο που σας ενδιαφέρει και θα αντιστοιχίσουμε τις πληροφορίες που παρέχετε με άρθρα στην εκτενή βάση δεδομένων μας και θα σας στείλουμε αμέσως ένα αντίγραφο σε μορφή PDF.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Στεφανία Στέλλα, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Ficherazeinal του Department72, Exp. ine, University of Catania, Catania, 95123, Italy;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italy;3 Ιατρική Ογκολογία, ΑΟΥ Πολυκλινικό «Γ.Rodolico – San Marco”, Κατάνια, 95123, Ιταλία;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Κατάνια, 95123, Ιταλία;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italy;6 Department of Biomedical and Biotechnology Sciences, University of Catania, Medical Genetics, Catania, Italy, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Ιταλία Επικοινωνίες: Stefania Stella, τηλ +39 095 378 1946, email [email protected];[email protected] Σκοπός: Μεταλλάξεις βλαστικών γραμμών σε BRCA1 και BRCA2 και εγκατεστημένος καρκίνος του μαστού (BC), ωοθηκών (OC) και άλλος που σχετίζεται με κίνδυνο καρκίνου στη διάρκεια της ζωής. Η δοκιμή για το γονίδιο BRCA είναι το κλειδί για την αξιολόγηση του ατομικού κινδύνου, καθώς και για την εύρεση μεθόδων πρόληψης σε υγιείς φορείς και προσαρμογής θεραπειών σε όλες τις διαφορετικές περιοχές του καρκίνου.BRCA21 και παρόλο που υπάρχουν δεδομένα για παθογόνες παραλλαγές BRCA σε οικογένειες της Σικελίας, ελλείπουν μελέτες που στοχεύουν συγκεκριμένα πληθυσμούς στην ανατολική Σικελία. Ο στόχος της μελέτης μας ήταν να διερευνήσει τη συχνότητα και την κατανομή των παθογόνων αλλοιώσεων της βλαστικής σειράς BRCA σε μια ομάδα ασθενών με BC από την ανατολική Σικελία και να αξιολογήσει τη συσχέτισή τους με συγκεκριμένα χαρακτηριστικά BC με προγενέστερη γένεση. ULTS: Συνολικά, 35 ασθενείς (9%) είχαν παθογόνο παραλλαγή BRCA, 17 (49%) στο BRCA1 και 18 (51%) στο BRCA2. BRCA1 αλλοιώσεις επικρατούν σε ασθενείς με τριπλά αρνητικά BC, ενώ οι μεταλλάξεις BRCA2 είναι πιο συχνές σε ασθενείς με BC αυλού. Συμπεράσματα: Τα ευρήματά μας παρέχουν μια επισκόπηση της κατάστασης μετάλλαξης BRCA σε ασθενείς με BC από την ανατολική Σικελία και επιβεβαιώνουν το ρόλο της ανάλυσης NGS στην ταυτοποίηση ασθενών με κληρονομική BC. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα είναι σύμφωνα με προηγούμενα στοιχεία που υποστηρίζουν τον έλεγχο BRCA για σωστή πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου σε φορείς μετάλλαξης.
Ο καρκίνος του μαστού (BC) είναι η πιο κοινή κακοήθεια παγκοσμίως και ο πιο θανατηφόρος καρκίνος στις γυναίκες.1 Τα βιολογικά χαρακτηριστικά που καθορίζουν την πρόγνωση και την κλινική συμπεριφορά του BC έχουν μελετηθεί εκτενώς και έχουν αποσαφηνιστεί εν μέρει με την πάροδο του χρόνου. Στην πραγματικότητα, αρκετοί υποκατάστατοι δείκτες χρησιμοποιούνται επί του παρόντος για την ταξινόμηση του BC σε διαφορετικούς μοριακούς υποτύπους. HER2) ενίσχυση, δείκτης πολλαπλασιασμού Ki-67 και βαθμός όγκου (G).2 Ο συνδυασμός αυτών των μεταβλητών προσδιόρισε τις ακόλουθες κατηγορίες BC: 1) Οι όγκοι του αυλού, που έδειχναν έκφραση ER και/ή PgR, αντιπροσώπευαν το 75% των BC. Αυτοί οι όγκοι διαιρέθηκαν περαιτέρω σε Luminal A, όταν το Ki-67 ήταν ίσο με Ki-67 και κάτω από 20, το Ki-67 ήταν χαμηλότερο από 20. % και παρουσία ενίσχυσης HER2, ανεξάρτητα από τον δείκτη πολλαπλασιασμού.2) Όγκοι HER2+ που είναι αρνητικοί σε ER και PgR αλλά παρουσιάζουν ενίσχυση HER2. Αυτή η ομάδα αντιπροσωπεύει το 10% όλων των όγκων του μαστού.3) Ο τριπλά αρνητικός καρκίνος του μαστού (TNBC), ο οποίος δεν εμφανίζει έκφραση ER και PgR και ενίσχυση HER2, αποτελεί περίπου το 15% των καρκίνων του μαστού.2-4
Μεταξύ αυτών των υποτύπων BC, ο βαθμός όγκου και ο δείκτης πολλαπλασιασμού αντιπροσωπεύουν βιοδείκτες διατομής που σχετίζονται άμεσα και ανεξάρτητα με την επιθετικότητα και την πρόγνωση του όγκου.5,6
Εκτός από τα προαναφερθέντα βιολογικά χαρακτηριστικά, ο ρόλος των κληρονομικών γενετικών αλλαγών που οδηγούν στην ανάπτυξη του BC έχει γίνει όλο και πιο σημαντικός τα τελευταία χρόνια.7 Περίπου 1 στους 10 όγκους του μαστού κληρονομούνται λόγω αλλοιώσεων βλαστικής σειράς σε συγκεκριμένα γονίδια. Τα BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C και RAD51D) είναι κυρίως υπεύθυνα για την κληρονομική BC. Μεταξύ αυτών των γονιδίων, τα BRCA1 και BRCA2 (εφεξής BRCA1/2) έδειξαν την ισχυρότερη συσχέτιση με την ανάπτυξη όγκων του μαστού. συμπεριλαμβανομένων των ωοθηκών, του προστάτη, του παγκρέατος, του παχέος εντέρου και του μελανώματος. Από την ηλικία των 13 έως 80 ετών, η αθροιστική επίπτωση του BC είναι 72% σε γυναίκες με παθογόνο παραλλαγή BRCA1 (PV) και 69% σε γυναίκες με BRCA2 PV.14
Συγκεκριμένα, μια πρόσφατη δημοσίευση προτείνει ότι ο κίνδυνος BC εξαρτάται από τον τύπο του PV. Στην πραγματικότητα, σε σύγκριση με τις παθογόνες παραλλαγές περικοπής, οι κραυγαλέες παραλλαγές, ειδικά στο γονίδιο BRCA1, σχετίζονται με μειωμένο κίνδυνο BC, ειδικά σε γυναίκες μεγαλύτερης ηλικίας.15
Η παρουσία BRCA1 ή BRCA2 PV συσχετίστηκε με διαφορετικά βιολογικά και κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά.16,17 BCs που σχετίζονται με BRCA1 τείνουν να είναι κλινικά επιθετικά, ελάχιστα διαφοροποιημένα και εξαιρετικά πολλαπλασιαστικά. Αυτοί οι όγκοι είναι συνήθως τριπλά αρνητικοί και έχουν μια πρώιμη ηλικία έναρξης. Όγκοι που εμφανίζονται σε ασθενείς με μέτριο βαθμό μετάλλαξης σε BRCA. Ικανοί πολλαπλασιαστικοί δείκτες. Αυτοί οι όγκοι είναι πιο συχνοί στον αυλό Β και εμφανίζονται συνήθως σε ενήλικες μεγαλύτερης ηλικίας.16-18 Συγκεκριμένα, οι μεταλλάξεις στα BRCA1 και BRCA2 αυξάνουν την ευαισθησία σε συγκεκριμένες θεραπείες, συμπεριλαμβανομένων των αλάτων πλατίνας και στοχευμένων φαρμάκων όπως οι αναστολείς πολυμεράσης πολυ(ADP-ριβόζης) (PARPi).19,20
Τα τελευταία χρόνια, η εφαρμογή του προσδιορισμού αλληλουχίας επόμενης γενιάς (NGS) στην κλινική πράξη επέτρεψε σε έναν αυξανόμενο αριθμό ασθενών με π. πολτοποίηση για τον έλεγχο BRCA1/2 σε συγκεκριμένους πληθυσμούς, τονίζοντας τις διαφορές μεταξύ γεωγραφικών περιοχών.24–27 Αν και υπάρχουν αναφορές για την κοόρτη BC στη δυτική Σικελία, λιγότερα δεδομένα είναι διαθέσιμα για τον έλεγχο BRCA1/2 στον πληθυσμό της ανατολικής Σικελίας.28,29
Περιγράφουμε εδώ τα αποτελέσματα του βλαστικού ελέγχου BRCA1/2 σε ασθενείς BC από την ανατολική Σικελία, συσχετίζοντας περαιτέρω την παρουσία μεταλλάξεων BRCA1 ή BRCA2 με τα κύρια κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά αυτών των όγκων.
Αυτή η αναδρομική μελέτη πραγματοποιήθηκε στο "Center for Experimental Oncology and Hematology" στο Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco στην Κατάνια. Από τον Ιανουάριο του 2017 έως τον Μάρτιο του 2021, συνολικά 455 ασθενείς με μαστού και ωοθηκών, μελάνωμα, παγκρεατικό ή γονιδιακό καρκίνο του προστάτη παραπέμφθηκαν στη μελέτη CA2 για γονιδιακό καρκίνο του προστάτη. διεξήχθη σύμφωνα με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι και όλοι οι συμμετέχοντες παρείχαν γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση πριν από τη μοριακή ανάλυση.
Τα ιστολογικά και βιολογικά χαρακτηριστικά (ER, PgR, HER2 status, Ki-67, και βαθμός) του BC αξιολογήθηκαν σε βιοψία πυρήνα ή χειρουργικά δείγματα, λαμβάνοντας υπόψη μόνο τα επιθετικά συστατικά του όγκου. Με βάση αυτά τα χαρακτηριστικά, τα BC ταξινομήθηκαν ως εξής: αυλός A (ER+ και/ή PgR+, HER2-, Ki-Rg%), HER2-, Ki-R+, 6<7 Ki-67≥20%), B-HER2+ του αυλού (ER και/ή PgR+, HER2+), HER2+ (ER και PgR-, HER2+) ή τριπλά αρνητικό (ER και PgR-, HER2-).
Πριν από την αξιολόγηση της κατάστασης μετάλλαξης BRCA1 και BRCA2, μια διεπιστημονική ομάδα που περιελάμβανε έναν ογκολόγο, έναν γενετιστή και έναν ψυχολόγο διεξήγαγε μια διαβούλευση γενετικής όγκου για κάθε ασθενή για να καθορίσει την παρουσία BRCA1 ή/και BRCA1.ή άτομα με υψηλό κίνδυνο PV στο γονίδιο BRCA2. Η επιλογή ασθενών πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες της Ιταλικής Εταιρείας Ιατρικής Ογκολογίας (AIOM) και τις τοπικές συστάσεις της Σικελίας.30,31 Αυτά τα κριτήρια περιλαμβάνουν: (i) οικογενειακό ιστορικό γνωστών παθογόνων παραλλαγών σε γονίδια ευαισθησίας (π.χ.(ii) αρσενικά με π.Χ.(iii) εκείνα με BC και OC.(iv) γυναίκες με BC <36 ετών, TNBC <60 ετών ή αμφοτερόπλευρο BC <50 ετών.(v) προσωπικό ιατρικό ιστορικό π.Χ. <50 ετών και τουλάχιστον ένας συγγενής πρώτου βαθμού: (α) π.Χ. < 50 έτη.(β) μη βλεννογόνο και μη οριακό OC οποιασδήποτε ηλικίας·(γ) διμερής π.Χ.(δ) αρσενικό π.Χ.(ε) καρκίνος του παγκρέατος.(στ) καρκίνος του προστάτη.(vi) δύο ή περισσότερα Προσωπικό ιστορικό BC > 50 ετών και οικογενειακό ιστορικό BC, OC ή καρκίνου του παγκρέατος για συγγενείς που είναι συγγενείς πρώτου βαθμού μεταξύ τους (συμπεριλαμβανομένων των συγγενών με τους οποίους είναι συγγενής πρώτου βαθμού).(vii) Προσωπικό ιστορικό OC και τουλάχιστον ένας συγγενής πρώτου βαθμού: (α) π.Χ. <50 έτη.(β) NOC;(γ) διμερής π.Χ.(δ) αρσενικό π.Χ.(vii) θηλυκό με υψηλού βαθμού ορογόνο OC.
Ελήφθη δείγμα περιφερικού αίματος 20 mL από κάθε ασθενή και συλλέχθηκε σε σωληνάρια EDTA (BD Biosciences). Το γονιδιωματικό DNA απομονώθηκε από δείγματα πλήρους αίματος 0,7 mL χρησιμοποιώντας το κιτ απομόνωσης QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Italy) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, το οποίο διήλθε από τον κατασκευαστή. , MA, ΗΠΑ) Εκτελέστε ποσοτικοποίηση.Ο εμπλουτισμός στόχων και η προετοιμασία της βιβλιοθήκης εκτελούνται από τον Chef Research Assay Oncomine™ BRCA, έτοιμος να φορτωθεί στο κιτ Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 για αυτοματοποιημένη προετοιμασία βιβλιοθήκης σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το κιτ αποτελείται από δύο δεξαμενές πολυπλεξίας PCR primer που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη μελέτη όλων των αντιδραστηρίων ιόντων AmpliSeq™. 059.3) γονίδια. Εν συντομία, 15 μL από κάθε αραιωμένο δείγμα DNA (10 ng) προστέθηκαν σε πλάκες με γραμμωτό κώδικα για προετοιμασία βιβλιοθήκης και όλα τα αντιδραστήρια και τα αναλώσιμα φορτώθηκαν στο όργανο Ion Chef™. Η αυτόματη προετοιμασία της βιβλιοθήκης και η συγκέντρωση βιβλιοθήκης με γραμμικό κώδικα δειγματοληψίας προετοιμάστηκαν στη συνέχεια με το όργανο του αριθμού Chef. (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τέλος, οι βιβλιοθήκες συνδυάζονται σε ισομοριακές αναλογίες σε σωλήνες δειγμάτων βιβλιοθήκης Ion Chef™ (σωλήνες με γραμμωτό κώδικα) και φορτώνονται στο όργανο Ion Chef™. Η αλληλουχία πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Ion Torrent S5 (Thermo Scientificrp) mo Fisher Scientific). Η ανάλυση δεδομένων πραγματοποιήθηκε από το Amplicon Suite (SmartSeq srl) και το λογισμικό Ion Reporter.
Όλη η ονοματολογία των παραλλαγών ακολούθησε τις τρέχουσες οδηγίες του Human Genome Variation Consortium, που διατίθεται στο διαδίκτυο (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Η κλινική σημασία των παραλλαγών BRCA1/2 ορίστηκε χρησιμοποιώντας την ταξινόμηση της Διεθνούς Κοινοπραξίας ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Allermlinee, and Mutsee-Based Network for Interpreting Germlinee differents. όπως ARUP, BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD και UMD. Η ταξινόμηση περιλαμβάνει πέντε διακριτές κατηγορίες κινδύνου: καλοήθη (κατηγορία I), πιθανή καλοήθης (κατηγορία II), παραλλαγή αβέβαιης σημασίας (VUS, κατηγορία III), πιθανή παθογόνος (κατηγορία IV), και παθογόνος για την ανάλυση της δομής της πρωτεΐνης και η παθογόνος δομή του εργαλείου V. πρόσβαση σε 30 βάσεις δεδομένων.32
Για να αποδοθεί η πιθανή κλινική σημασία σε κάθε VUS, χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθοι υπολογιστικοί αλγόριθμοι πρόβλεψης πρωτεϊνών: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2.aguhvGvG) and Aligny gd_input.php). Οι παραλλαγές που ταξινομήθηκαν ως κλάσεις 1 και 2 θεωρήθηκαν άγριος τύπος.
Η αλληλουχία Sanger επιβεβαίωσε την παρουσία κάθε παθογόνου παραλλαγής. Εν συντομία, σχεδιάστηκε ένα ζεύγος ειδικών εκκινητών για κάθε παραλλαγή που ανιχνεύτηκε χρησιμοποιώντας τις αλληλουχίες αναφοράς γονιδίων BRCA1 και BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 και NG_012772.3, αντίστοιχα, ακολουθήθηκε ο στόχος P509, αντίστοιχα. Ακολουθία Sanger.
Οι ασθενείς που ήταν αρνητικοί για το γονίδιο BRCA1/2 δοκιμάστηκαν με πολλαπλή ενίσχυση εξαρτώμενης από την απολίνωση ανιχνευτή (MLPA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή για την αξιολόγηση της παρουσίας μεγάλων γονιδιωματικών αναδιατάξεων (LGR). Εν συντομία, τα δείγματα DNA μετουσιώνονται και έως και 60 BRCA1 και BRCA2 χρησιμοποιούνται κατά προσέγγιση μήκους γονιδίων. προϊόντα ενίσχυσης, αποτελούμενα από ένα μοναδικό σύνολο αμπλικονίων PCR, αναλύθηκαν στη συνέχεια με τριχοειδική ηλεκτροφόρηση και με λογισμικό Cofalyser.Net σε συνδυασμό με τους κατάλληλους πίνακες Cofalyser για συγκεκριμένες παρτίδες (www.mrcholland.com).
Επιλεγμένες κλινικοπαθολογικές μεταβλητές (ιστολογικός βαθμός και δείκτης πολλαπλασιασμού Ki-67%) συσχετίστηκαν με την παρουσία BRCA1/2 PV, υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Prism v. 8.4 χρησιμοποιώντας την ακριβή δοκιμή Fisher υποθέτοντας ότι η τιμή p <0,05 είναι σημαντική.
Μεταξύ Ιανουαρίου 2017 και Μαρτίου 2021, 455 ασθενείς υποβλήθηκαν σε έλεγχο για μεταλλάξεις βλαστικής σειράς BRCA1/2. Πραγματοποιήθηκε έλεγχος μετάλλαξης στο Κέντρο Πειραματικής Ογκολογίας και Αιματολογίας του Νοσοκομείου Policlinico. Σύμφωνα με την κατευθυντήρια γραμμή Sicilian (http://www.gurs.regione.It. 0 Gennaio 2020), το Rodolico of Catania – San Marco» συνολικά, 389 ασθενείς Υπήρξαν καρκίνος του μαστού, 37 καρκίνος των ωοθηκών, 16 καρκίνοι του παγκρέατος, 8 καρκίνοι του προστάτη και 5 μελάνωμα.Η κατανομή των ασθενών ανάλογα με τον τύπο του καρκίνου και τα αποτελέσματα της ανάλυσης φαίνεται στο Σχήμα 1.
Το Σχήμα 1 δείχνει ένα διάγραμμα ροής που δείχνει μια επισκόπηση της μελέτης. Ασθενείς με όγκους μαστού, μελανώματος, παγκρέατος, προστάτη ή ωοθηκών εξετάστηκαν για μεταλλάξεις στα γονίδια BRCA1 και BRCA2.
Συντομογραφίες: PVs, παθογόνος παραλλαγή;VUS, παραλλαγή αβέβαιης σημασίας.WT, άγριου τύπου BRCA1/2 ακολουθία.
Εστιάσαμε επιλεκτικά τις μελέτες μας σε ομάδες καρκίνου του μαστού. Οι ασθενείς είχαν μέση ηλικία 49 ετών (εύρος 23-89) και ήταν κυρίως γυναίκες (n=376, ή 97%).
Από αυτά τα άτομα, 64 (17%) είχαν μεταλλάξεις BRCA1/2 και ήταν όλα γυναίκες. Τριάντα πέντε (9%) είχαν PV και 29 (7,5%) είχαν VUS. Δεκαεπτά (48,6%) από τις 35 παθογόνες παραλλαγές εμφανίστηκαν στο BRCA1 και 18 (51,4%) στο BRCA1 και 21 (5%) στο BRCAUS1, ενώ 29 (7,5%) είχαν VUS. %) στο BRCA2 (Εικόνες 1 και 2). Το LGR δεν υπήρχε στην ανάλυση MLPA.
Εικόνα 2. Ανάλυση μεταλλάξεων BRCA1 και BRCA2 σε 389 ασθενείς με καρκίνο του μαστού.(Β) 389 ασθενείς με καρκίνο του μαστού Τριάντα πέντε (9%) είχαν παθογόνες παραλλαγές BRCA1/2 (PV). Μεταξύ αυτών, 17 (48,6%) ήταν φορείς BRCA1 PV (σκούρο κόκκινο) και 18 (51,4%) ήταν φορείς BRCA2 (ανοιχτό κόκκινο).(Γ) 29 (7,5%) από τα 389 άτομα έφεραν γονίδια VUS, 5 (17,2%) γονίδια BRCA1 (σκούρο πορτοκαλί) και 24 (82,8%) γονίδια BRCA2 (ανοιχτό πορτοκαλί).
Συντομογραφίες: PVs, παθογόνος παραλλαγή;VUS, παραλλαγή αβέβαιης σημασίας.WT, άγριου τύπου BRCA1/2 ακολουθία.
Στη συνέχεια διερευνήσαμε τον επιπολασμό των μοριακών υποτύπων BC σε ασθενείς με BRCA1/2 PV. Η κατανομή περιελάμβανε 2 (5,7%) ασθενείς με αυλό Α, 15 (42,9%) αυλούς Β, 3 (8,6%) αυλούς B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ και 13 (NBC2,9.5%) ασθενείς με θετικό αυλό είχαν αυλό B BC, 2 (11,8%) είχαν νόσο HER2+ και 10 (58,8%) είχαν TNBC. Οι όγκοι χωρίς μεταλλάξεις BRCA1 ήταν είτε αυλός Α είτε αυλός B-HER2+ (Εικόνα 3). Στην υποομάδα θετική για BRCA2, 10 (55,6%) όγκοι φωτεινότητας B.2, 7ER ήταν 3 16,7%) TNBC και 2 (11,1%) ήταν αυλού Α (Εικόνα 3). Δεν υπήρχαν όγκοι HER2+ σε αυτήν την ομάδα. Έτσι, οι μεταλλάξεις BRCA1 είναι επικρατούσες σε ασθενείς με TNBC, ενώ οι αλλοιώσεις BRCA2 είναι κυρίαρχες σε άτομα Β αυλού.
Εικόνα 3 Επιπολασμός υποτύπων καρκίνου του μαστού σε ασθενείς με παθογόνες παραλλαγές σε BRCA1 και BRCA2. Ιστογράμματα που δείχνουν την κατανομή των BRCA1- (σκούρο κόκκινο) και BRCA2- (ανοιχτό κόκκινο) PV μεταξύ μοριακών υποτύπων ασθενών με καρκίνο του μαστού. Οι αριθμοί που αναφέρονται σε κάθε πλαίσιο αντιπροσωπεύουν το ποσοστό των ασθενών με κάθε υποτύπο BRCAV μαστού.
Συντομογραφίες: PVs, παθογόνος παραλλαγή;HER2+, υποδοχέας ανθρώπινου επιδερμικού αυξητικού παράγοντα 2 θετικός.TNBC, τριπλά αρνητικός καρκίνος του μαστού.
Στη συνέχεια, αξιολογήσαμε τον τύπο και τον εντοπισμό γονιδίων των BRCA1 και BRCA2 PV. Στο BRCA1 PV, παρατηρήσαμε 7 παραλλαγές μεμονωμένων νουκλεοτιδίων (SNVs), 6 διαγραφές, 3 διπλασιασμούς και 1 εισαγωγή. Μόνο μία μετάλλαξη (c.5522delG) αντιπροσωπεύει το πιο κοινό υποκείμενο cV5 που ανιχνεύεται. 039delCTAAT. Αυτή η αλλαγή περιλαμβάνει μια διαγραφή πέντε νουκλεοτιδίων (CTAAT) στο BRCA1 εξόνιο 15, με αποτέλεσμα την υποκατάσταση του αμινοξέος λευκίνη από τυροσίνη στο κωδικόνιο 1679, και λόγω μετατόπισης πλαισίου μετάφρασης με προβλεπόμενο εναλλακτικό κωδικόνιο λήξης δεν ανιχνεύτηκε πρόωρη περικοπή σε άλλη πρωτεΐνη V. περιοχή συναίνεσης θέσης ματίσματος (c.4357+1G>T) (Πίνακας 1).
Όσον αφορά το BRCA2 PV, παρατηρήσαμε 6 διαγραφές, 6 SNV και 2 διπλασιασμούς. Καμία από τις αλλαγές που βρέθηκαν δεν είναι νέα. Τρεις μεταλλάξεις επανεμφανίστηκαν στον πληθυσμό μας, c.428dup και c.8487+1G>A που παρατηρήθηκαν σε 3 άτομα, ακολουθούμενες από c.5851 c.5851_8 επαναλαμβανόμενες περιπτώσεις AG. του C στο εξόνιο 5 του BRCA2, προβλέπεται ότι κωδικοποιεί μια κολοβωμένη, μη λειτουργική πρωτεΐνη. Η μετάλλαξη c.8487+1G>A εμφανίζεται στην ιντρονική περιοχή του εσωνίου 19 BRCA2 (± 1,2) και επηρεάζει τη συναινετική αλληλουχία ματίσματος, με αποτέλεσμα την αλλοιωμένη συναινετική αλληλουχία ματίσματος. Η παθογόνος παραλλαγή ΤΤ οφείλεται σε μια διαγραφή 4 νουκλεοτιδίων από τις θέσεις νουκλεοτιδίων 5851 έως 5854 στο κωδικοποιητικό εξόνιο 10 του γονιδίου BRCA2 και έχει ως αποτέλεσμα μια μετατόπιση πλαισίου με ένα προβλεπόμενο εναλλακτικό κωδικόνιο τερματισμού (p.S1951WfsTer.). στον ίδιο ασθενή.34 Η πρώτη μετάλλαξη περιλαμβάνει την αντικατάσταση της αδενοσίνης (Α) στο εξόνιο 7 BRCA2 με ένα νουκλεοτίδιο που περιέχει γουανίνη (G) με αποτέλεσμα την αλλαγή της βαλίνης σε ισολευκίνη στο κωδικόνιο 211, ισολευκίνη Το αμινοξύ είναι ένα αμινοξύ με πολύ παρόμοιες ιδιότητες. υποκατάσταση πριν από το εξόνιο 13 του γονιδίου που κωδικοποιεί το BRCA2. Η αλλαγή c.7008-2A>T μπορεί να δημιουργήσει πολλαπλές μεταγραφές διαφορετικού μήκους. Επιπλέον, στην ομάδα των BRCA2 PV, 4 από τις 18 αλλαγές (22,2%) ήταν ιντρονικές.
Στη συνέχεια χαρτογραφήσαμε τις επιβλαβείς μεταλλάξεις BRCA1/2 σε λειτουργικές περιοχές και περιοχές δέσμευσης πρωτεϊνών (Εικ. 4). Στο γονίδιο BRCA1, το 50% των PV εντοπίστηκαν στην περιοχή συστάδας καρκίνου του μαστού (BCCR), ενώ το 22% των μεταλλάξεων εντοπίστηκαν στην περιοχή συστάδας του καρκίνου των ωοθηκών (OCCR) (Σχήμα 35, στο BRCA4, στο BRCA4, στο% 35). Η περιοχή BCCR και το 42,8% των μεταλλάξεων εντοπίστηκαν στο OCCR (Εικ. 4Β). Στη συνέχεια, αξιολογήσαμε τη θέση του PV εντός των περιοχών πρωτεϊνών BRCA1 και BRCA2. Για την πρωτεΐνη BRCA1, βρήκαμε τρία PV στον τομέα βρόχου και περιτυλιγμένου πηνίου και δύο μεταλλάξεις στον τομέα BRCA2, ενώ επαναλάβαμε τον τομέα BRCA2 (Εικ. 4). Ανιχνεύθηκαν 3 ιντρονικές και 3 εξωνικές αλλαγές στους τομείς δέσμευσης ολίγο/ολιγοσακχαρίτη (OB) και πύργου (Τ) (Εικόνα 4Β).
Σχήμα 4 Σχηματική αναπαράσταση των πρωτεϊνών BRCA1 και BRCA2 και εντοπισμός παθογόνων παραλλαγών. Αυτό το σχήμα δείχνει την κατανομή των παθογόνων παραλλαγών BRCA1 (A) και BRCA2 (B) σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού. Οι εξωνικές μεταλλάξεις εμφανίζονται με μπλε, ενώ οι ιντρονικές παραλλαγές εμφανίζονται με πορτοκαλί. Το ύψος της ράβδου αντιπροσωπεύει τον αριθμό των περιπτώσεων BRCA2 πρωτεΐνης και ο τομέας BRCA2. Η πρωτεΐνη BRCA1 περιέχει μια περιοχή βρόχου (RING) και μια αλληλουχία πυρηνικού εντοπισμού (NLS), μια περιοχή περιελιγμένης περιέλιξης, μια περιοχή συστάδας SQ/TQ (SCD) και μια περιοχή C-τερματικής BRCA1 (BRCT). μια περιοχή πύργου (T) και ένα NLS στην πλευρά C. Οι περιοχές που ονομάζονται περιοχή συστάδας καρκίνου του μαστού (BCCR) και περιοχή συστάδας καρκίνου των ωοθηκών (OCCR) εμφανίζονται στο κάτω μέρος.*Αντιπροσωπεύει μεταλλάξεις που καθορίζουν τα κωδικόνια λήξης.
Στη συνέχεια, διερευνήσαμε κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά του BC που μπορεί να συσχετίζονται με την παρουσία του BRCA1/2 PV. Υπήρχαν διαθέσιμα πλήρη κλινικά αρχεία για 181 ασθενείς αρνητικούς σε BRCA1/2 (μη φορείς) και όλους τους φορείς (n = 35). Υπήρχε συσχέτιση μεταξύ του ρυθμού πολλαπλασιασμού του όγκου και του βαθμού.
Υπολογίσαμε την κατανομή του Ki-67 με βάση τη διάμεσο της κοόρτης μας (25%, εύρος <10-90%). Τα άτομα με Ki-67 < 25% ορίστηκαν ως "χαμηλό Ki-67", ενώ άτομα με τιμές ≥ 25% θεωρήθηκαν "υψηλό Ki-67". riers (Εικ. 5Α).
Σχήμα 5 Συσχέτιση του Ki-67 με την κατανομή βαθμού σε γυναίκες με καρκίνο του μαστού με και χωρίς BRCA1 και BRCA2 PV. (A) Πλαισίου που δείχνει τις μέσες τιμές Ki-67 σε 181 μη φορείς BC ασθενείς έναντι BRCA1 (18) ή BRCA2 (17) PV ασθενών. Οι τιμές του gram. Οι ασθενείς με καρκίνο BC σε ομάδες ιστολογικού βαθμού (G2 και G3) σύμφωνα με την κατάσταση μετάλλαξης BRCA1 και BRCA2 (υποκείμενα WT, φορείς PV BRCA1 και BRCA2).
Ομοίως, εξετάσαμε εάν ο βαθμός όγκου συσχετίστηκε με την παρουσία BRCA1/2 PV. Επειδή το G1 BC απουσίαζε στον πληθυσμό μας, χωρίσαμε τους ασθενείς σε δύο ομάδες (G2 ή G3). Σύμφωνα με τα αποτελέσματα Ki-67, η ανάλυση αποκάλυψε μια στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ μετάλλαξης βαθμού όγκου και μετάλλαξης BRCA1. 005) (Εικόνα 5Β).
Οι πρόοδοι στην τεχνολογία προσδιορισμού αλληλουχίας DNA έχουν επιτρέψει πρωτοφανή πρόοδο στον γενετικό έλεγχο BRCA1/2, με κρίσιμες συνέπειες για ασθενείς με οικογενειακό ιστορικό καρκίνου. Μέχρι σήμερα, περίπου 20.000 παραλλαγές BRCA1/2 έχουν ταυτοποιηθεί και ταξινομηθεί σύμφωνα με την Αμερικανική Εταιρεία Ιατρικής Γενετικής 35 και το γνωστό σύστημα BRCA235ENIG. Το ρούμι ποικίλλει ευρέως μεταξύ γεωγραφικών περιοχών.37 Στην Ιταλία, το ποσοστό των BRCA1/2 PV κυμάνθηκε από 8% έως 37%, εμφανίζοντας μεγάλη μεταβλητότητα εντός της χώρας.38,39 Με πληθυσμό σχεδόν 5 εκατομμυρίων, η Σικελία είναι η πέμπτη μεγαλύτερη περιοχή στην Ιταλία όσον αφορά τον αριθμό των κατοίκων. ανατολικό τμήμα του νησιού.
Η μελέτη μας είναι μία από τις πρώτες αναφορές σχετικά με τη συχνότητα εμφάνισης του BRCA1/2 PV σε ασθενείς με BC στην ανατολική Σικελία.28 Εστιάσαμε την ανάλυσή μας στο BC, καθώς αυτή είναι μακράν η πιο κοινή ασθένεια στην κοόρτη μας.
Κατά τη δοκιμή 389 ασθενών π.Χ., το 9% έφερε BRCA1/2 PV, ομοιόμορφα κατανεμημένα μεταξύ BRCA1 και BRCA2. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με αυτά που αναφέρθηκαν προηγουμένως στον ιταλικό πληθυσμό.28 Είναι ενδιαφέρον ότι το 3% (13/389) της κοόρτης μας ήταν άνδρες. Κίνδυνος μετάλλαξης.Ωστόσο, κανένας από αυτούς τους άνδρες δεν ανέπτυξε BRCA1/2 PV, επομένως ήταν υποψήφιοι για περαιτέρω μοριακή ανάλυση για να αποκλειστεί η παρουσία λιγότερο κοινών μεταλλάξεων όπως οι PALB2, RAD51C και D, μεταξύ άλλων. Ανακτήθηκαν παραλλαγές αβέβαιης σημασίας στο 7% των υποκειμένων στις οποίες BRCA2E28 ήταν προϋπάρχουσες ενδείξεις.
Όταν αναλύσαμε την κατανομή των μοριακών υποτύπων BC σε μεταλλαγμένες γυναίκες BRCA1/2, επιβεβαιώσαμε γνωστές συσχετίσεις μεταξύ TNBC και BRCA1 PV (58,8%) και μεταξύ αυλού B BC και BRCA2 PV (55,6%).
Στη συνέχεια, εστιάζουμε στον τύπο και τη θέση του BRCA1/2 PV. Στην κοόρτη μας, το πιο κοινό BRCA1 PV ήταν c.5035_5039delCTAAT. Αν και οι Incorvaia et al.δεν περιέγραψαν αυτήν την παραλλαγή στη κοόρτη τους στη Σικελία, άλλοι συγγραφείς την ανέφεραν ως βλαστική σειρά BRCA1 PV.34 Στην κοόρτη μας βρέθηκαν αρκετά BRCA1 PV – π.χ. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA και c.5266dupC – τα οποία έχουν παρατηρηθεί δύο BRCA1, Si. Οι G and c.5266dupC) βρίσκονται συνήθως σε Εβραίους Ασκενάζι της Ανατολικής και Κεντρικής Ευρώπης (Πολωνία, Τσεχία), Σλοβενίας, Αυστρίας, Ουγγαρίας, Λευκορωσίας και Γερμανίας), 44,45 και, στις Ηνωμένες Πολιτείες και την Αργεντινή, ορίστηκε πρόσφατα ως «υποτροπιάζουσα βλαστική παραλλαγή» σε Ιταλούς ασθενείς με BC και OC. στο Παλέρμο και τη Μεσσήνη. Είναι ενδιαφέρον ότι ακόμη και οι Incorvaia et al.βρήκε την παραλλαγή c.3253dupA σε ορισμένες οικογένειες στην Κατάνια.28 Τα πιο αντιπροσωπευτικά BRCA2 PV είναι τα c.428dup, c.5851_5854delAGTT και η ιντρονική παραλλαγή c.8487+1G>A, τα οποία έχουν αναφερθεί λεπτομερέστερα 28 σε έναν ασθενή στο Παλέρμο που είχε παρατηρηθεί στο Palermo88up4,TT25AG4, c. νοικοκυριά στη βορειοδυτική Σικελία, κυρίως στις περιοχές Trapani και Palermo, ενώ c.5851_5854delAGTT PV παρατηρήθηκε σε νοικοκυριά στη βορειοδυτική Σικελία. Η παραλλαγή 8487+1G>A ήταν πιο κοινή σε άτομα από τη Μεσίνα, το Παλέρμο και την Caltanissetta.28 Rebbe.περιέγραψε προηγουμένως την αλλαγή c.5851_5854delAGTT στην Κολομβία.37 Μια άλλη BRCA2 PV, c.631+1G>A, βρέθηκε σε ασθενείς BC και OC από τη Σικελία (Agrigento, Siracusa και Ragusa). ) στον ίδιο ασθενή, τον οποίο υποθέσαμε ότι είναι διαχωρισμένος σε λειτουργία cis, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως έτσι.34,46 Αυτές οι μεταλλάξεις BRCA2 uble παρατηρούνται πράγματι συχνά στην ιταλική περιοχή και έχει βρεθεί ότι εισάγουν πρόωρα κωδικόνια διακοπής, επηρεάζοντας το μάτισμα του αγγελιαφόρου RNA και προκαλώντας την αποτυχία της πρωτεΐνης BRCA248.
Χαρτογραφήσαμε επίσης BRCA1 και BRCA2 PV σε πιθανές περιοχές OCCR και BCCR πρωτεϊνικών περιοχών και γονιδίων. Αυτές οι περιοχές περιγράφηκαν από τους Rebbeck et al.ως περιοχές κινδύνου για την ανάπτυξη καρκίνου των ωοθηκών και του μαστού, αντίστοιχα.49 Ωστόσο, τα στοιχεία σχετικά με τη συσχέτιση μεταξύ της θέσης των παραλλαγών της βλαστικής σειράς και του κινδύνου καρκίνου του μαστού ή των ωοθηκών παραμένουν αμφιλεγόμενα. Περιοχές OCCR και BCCR και χαρακτηριστικά BC. Αυτό μπορεί να οφείλεται στον περιορισμένο αριθμό ασθενών με μεταλλάξεις BRCA1/2. Από την άποψη του τομέα πρωτεΐνης, τα BRCA1 PV κατανέμονται κατά μήκος ολόκληρης της πρωτεΐνης και οι αλλοιώσεις BRCA2 εντοπίζονται κατά προτίμηση στον τομέα επανάληψης BRC.
Τέλος, συσχετίσαμε κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά του BC με το BRCA1/2 PV. Λόγω του περιορισμένου αριθμού ασθενών που συμπεριλήφθηκαν, βρήκαμε μόνο σημαντική συσχέτιση μεταξύ Ki-67 και βαθμού όγκου. Αν και η αξιολόγηση και η ερμηνεία του Ki-67 παραμένει κάπως αμφιλεγόμενη, είναι βέβαιο ότι τα υψηλά ποσοστά πολλαπλασιασμού συνδέονται με αυξημένο κίνδυνο εμφάνισης και μείωση της ημερομηνίας υποτροπής της νόσου. Το Ki-67 είναι 20%.Ωστόσο, αυτό το όριο δεν ισχύει για τον πληθυσμό ασθενών με μετάλλαξη BRCA1/2, ο οποίος έχει μέση τιμή Ki-67 25%. Αυτή η τάση στα υψηλά ποσοστά Ki-67 μπορεί να εξηγηθεί από τον επιπολασμό στις κοόρτες B και TNBC του αυλού μας, από τις οποίες λίγοι όγκοι αυλού A φαίνεται ότι ήταν καλύτεροι από 27% ότι υπήρχαν περισσότερες ενδείξεις H. στρωματοποιήστε τους ασθενείς σύμφωνα με την πρόγνωσή τους.53,54 Από τα αποτελέσματα της ανάλυσής μας, μια σημαντική συσχέτιση δεν προκαλεί έκπληξη. Εμφανίζεται μεταξύ υψηλών Ki-67 και βαθμών και της παρουσίας BRCA1 PV. Στην πραγματικότητα, οι όγκοι που σχετίζονται με BRCA1 είναι τυπικοί του TNBC και παρουσιάζουν πιο επιθετικά χαρακτηριστικά.16,17
Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη παρέχει μια αναφορά σχετικά με την κατάσταση μετάλλαξης του BRCA1/2 σε μια κοόρτη BC από την ανατολική Σικελία. Συνολικά, τα ευρήματά μας συνάδουν με τα προϋπάρχοντα στοιχεία, τόσο όσον αφορά τον επιπολασμό της μετάλλαξης όσο και τα κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά στο BC. που είναι διακριτά και λιγότερο συχνά από το BRCA1/2. Αυτό θα επιτρέψει τον εντοπισμό και τη σωστή διαχείριση του αυξανόμενου αριθμού ατόμων με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου λόγω γενετικών μεταλλάξεων.
Επιβεβαιώσαμε ότι οι ασθενείς υπέγραψαν ενημερωμένη συγκατάθεση για την ανώνυμη απελευθέρωση των δειγμάτων του όγκου τους για ερευνητικούς σκοπούς. Όλοι οι ασθενείς υπέγραψαν γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση σύμφωνα με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Σύμφωνα με την πολιτική του AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco», αυτή η μελέτη εξαιρέθηκε από ηθική αναθεώρηση επειδή η BRCA1/2 έδωσε επίσης την έγγραφη συναίνεση των ασθενών στην κλινική χρήση. των δεδομένων τους για ερευνητικούς σκοπούς.
Ευχαριστούμε τον καθηγητή Paolo Vigneri για τη βοήθειά του στη φροντίδα ασθενών με καρκίνο του μαστού, όπως ζητήθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας.
Η Federica Martorana αναφέρει τιμητικά από τους Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Οι άλλοι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων σε αυτό το έργο.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: Η GLOBOCAN υπολογίζει τη συχνότητα εμφάνισης και τη θνησιμότητα 36 καρκίνων σε 185 χώρες σε όλο τον κόσμο.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.33226/doi: 209-249.