Σας ευχαριστούμε που επισκεφτήκατε το Nature.com.Η έκδοση του προγράμματος περιήγησης που χρησιμοποιείτε έχει περιορισμένη υποστήριξη CSS.Για την καλύτερη εμπειρία, συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε ένα ενημερωμένο πρόγραμμα περιήγησης (ή να απενεργοποιήσετε τη λειτουργία συμβατότητας στον Internet Explorer).Στο μεταξύ, για να διασφαλίσουμε τη συνεχή υποστήριξη, θα αποδώσουμε τον ιστότοπο χωρίς στυλ και JavaScript.
Η ανεξέλεγκτη αιμορραγία είναι μια από τις κύριες αιτίες θανάτου.Η επίτευξη ταχείας αιμόστασης εξασφαλίζει την επιβίωση του υποκειμένου ως πρώτη βοήθεια κατά τη διάρκεια της μάχης, των τροχαίων ατυχημάτων και των επιχειρήσεων μείωσης του θανάτου.Το σύνθετο ικρίωμα ενισχυμένο με νανοπορώδες ίνες (NFRCS) που προέρχεται από μια απλή αιμοστατική σύνθεση σχηματισμού φιλμ (HFFC) ως συνεχής φάση μπορεί να πυροδοτήσει και να ενισχύσει την αιμόσταση.Η ανάπτυξη του NFRCS βασίζεται στο σχεδιασμό του φτερού της λιβελλούλης.Η δομή του φτερού της λιβελλούλης αποτελείται από εγκάρσια και διαμήκη φτερά και οι μεμβράνες των φτερών συνδέονται μεταξύ τους για να διατηρήσουν την ακεραιότητα της μικροδομής.Το HFFC επικαλύπτει ομοιόμορφα την επιφάνεια της ίνας με μια μεμβράνη πάχους νανομέτρων και συνδέει το τυχαία κατανεμημένο πάχος βαμβακιού (Ct) (διασπαρμένη φάση) για να σχηματίσει μια νανοπορώδη δομή.Ο συνδυασμός συνεχών και διασκορπισμένων φάσεων μειώνει το κόστος του προϊόντος κατά δέκα φορές σε σύγκριση με τα εμπορικά διαθέσιμα προϊόντα.Το τροποποιημένο NFRCS (ταμπόν ή βραχιολάκια) μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ποικίλες βιοϊατρικές εφαρμογές.Μελέτες in vivo κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι το αναπτυγμένο Cp NFRCS ενεργοποιεί και ενισχύει τη διαδικασία πήξης στο σημείο εφαρμογής.Το NFRCS μπορεί να διαμορφώσει το μικροπεριβάλλον και να δράσει σε κυτταρικό επίπεδο λόγω της νανοπορώδους δομής του με αποτέλεσμα την καλύτερη επούλωση του τραύματος στο μοντέλο του τραύματος εκτομής.
Η ανεξέλεγκτη αιμορραγία κατά τη διάρκεια μάχης, διεγχειρητικές και έκτακτες καταστάσεις μπορεί να αποτελέσει σοβαρή απειλή για τη ζωή του τραυματία1.Αυτές οι καταστάσεις οδηγούν περαιτέρω σε συνολική αύξηση της περιφερικής αγγειακής αντίστασης, οδηγώντας σε αιμορραγικό σοκ.Τα κατάλληλα μέτρα για τον έλεγχο της αιμορραγίας κατά τη διάρκεια και μετά την επέμβαση θεωρούνται δυνητικά απειλητικά για τη ζωή2,3.Η βλάβη σε μεγάλα αγγεία οδηγεί σε μαζική απώλεια αίματος, με αποτέλεσμα ποσοστό θνησιμότητας ≤ 50% στη μάχη και 31% κατά τη διάρκεια της επέμβασης1.Η μαζική απώλεια αίματος οδηγεί σε μείωση του όγκου του σώματος, γεγονός που μειώνει την καρδιακή παροχή.Η αύξηση της συνολικής περιφερικής αγγειακής αντίστασης και η προοδευτική διαταραχή της μικροκυκλοφορίας οδηγούν σε υποξία στα όργανα υποστήριξης της ζωής.Αιμορραγικό σοκ μπορεί να συμβεί εάν η κατάσταση συνεχιστεί χωρίς αποτελεσματική παρέμβαση1,4,5.Άλλες επιπλοκές περιλαμβάνουν την εξέλιξη της υποθερμίας και της μεταβολικής οξέωσης, καθώς και μια διαταραχή της πήξης που εμποδίζει τη διαδικασία της πήξης.Το σοβαρό αιμορραγικό σοκ συνδέεται με υψηλότερο κίνδυνο θανάτου6,7,8.Στο βαθμού III (προοδευτικό σοκ), η μετάγγιση αίματος είναι απαραίτητη για την επιβίωση του ασθενούς κατά τη διάρκεια της διεγχειρητικής και μετεγχειρητικής νοσηρότητας και θνησιμότητας.Για να ξεπεράσουμε όλες τις παραπάνω απειλητικές για τη ζωή καταστάσεις, έχουμε αναπτύξει ένα σύνθετο ικρίωμα ενισχυμένο με νανοπορώδη ίνες (NFRCS) που χρησιμοποιεί ελάχιστη συγκέντρωση πολυμερούς (0,5%) χρησιμοποιώντας έναν συνδυασμό υδατοδιαλυτών αιμοστατικών πολυμερών.
Με τη χρήση ενισχυτικών ινών, μπορούν να αναπτυχθούν οικονομικά αποδοτικά προϊόντα.Οι τυχαία διατεταγμένες ίνες μοιάζουν με τη δομή ενός φτερού λιβελλούλης, που ισορροπεί από τις οριζόντιες και κάθετες ρίγες στα φτερά.Οι εγκάρσιες και οι διαμήκεις φλέβες του πτερυγίου επικοινωνούν με τη μεμβράνη του φτερού (Εικ. 1).Το NFRCS αποτελείται από ενισχυμένο Ct ως σύστημα ικριώματος με καλύτερη φυσική και μηχανική αντοχή (Εικόνα 1).Λόγω της οικονομικής προσιτότητας και της δεξιοτεχνίας, οι χειρουργοί προτιμούν να χρησιμοποιούν μετρητές βαμβακερών νημάτων (Ct) κατά τις επεμβάσεις και τους επιδέσμους. Ως εκ τούτου, λαμβάνοντας υπόψη τα πολλαπλά οφέλη του, συμπεριλαμβανομένης της κρυσταλλικής κυτταρίνης > 90% (συμβάλλει στην ενίσχυση της αιμοστατικής δραστηριότητας), η Ct χρησιμοποιήθηκε ως σκελετικό σύστημα του NFRCS9,10. Ως εκ τούτου, λαμβάνοντας υπόψη τα πολλαπλά οφέλη του, συμπεριλαμβανομένης της κρυσταλλικής κυτταρίνης > 90% (συμβάλλει στην ενίσχυση της αιμοστατικής δραστηριότητας), η Ct χρησιμοποιήθηκε ως σκελετικό σύστημα του NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целлюлозы (участвует в повышении гемостатической δραστηριότητες), Ct использовали в качесты10Fлетной систем. Επομένως, δεδομένων των πολλών πλεονεκτημάτων της, συμπεριλαμβανομένης της κρυσταλλικής κυτταρίνης >90% (που εμπλέκεται στην αυξημένη αιμοστατική δραστηριότητα), η Ct χρησιμοποιήθηκε ως το σκελετικό σύστημα NFRCS9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止觼S的结晶纤维素（有助于增强止觼S的结晶纤维素（有助于增强止觼S 9,10 的骨架系统.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%Επομένως, δεδομένων των πολλών πλεονεκτημάτων του, συμπεριλαμβανομένης της κρυσταλλικής κυτταρίνης πάνω από 90% (βοηθά στην ενίσχυση της αιμοστατικής δραστηριότητας), η Ct χρησιμοποιήθηκε ως ικρίωμα για το NFRCS9,10.Το Ct επικαλύφθηκε επιφανειακά (παρατηρήθηκε σχηματισμός νανο-παχύ φιλμ) και διασυνδέθηκε με μια αιμοστατική σύνθεση σχηματισμού φιλμ (HFFC).Το HFFC δρα σαν ένα matrigel, κρατώντας το Ct τυχαία μαζί.Ο ανεπτυγμένος σχεδιασμός μεταδίδει πίεση εντός της διασκορπισμένης φάσης (ενισχυτικές ίνες).Είναι δύσκολο να αποκτηθούν νανοπορώδεις δομές με καλή μηχανική αντοχή χρησιμοποιώντας ελάχιστες συγκεντρώσεις πολυμερών.Επιπλέον, δεν είναι εύκολο να προσαρμόσετε διαφορετικά καλούπια για διαφορετικές βιοϊατρικές εφαρμογές.
Το σχήμα δείχνει ένα διάγραμμα του σχεδιασμού NFRCS που βασίζεται στη δομή του φτερού λιβελλούλης (Α).Αυτή η εικόνα δείχνει μια συγκριτική αναλογία της δομής των φτερών μιας λιβελλούλης (οι τεμνόμενες και διαμήκεις φλέβες της πτέρυγας αλληλοσυνδέονται) και μια φωτομικρογραφία διατομής του Cp NFRCS (B).Σχηματική αναπαράσταση του NFRCS.
Τα NFRC αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας HFFC ως συνεχή φάση για την αντιμετώπιση των παραπάνω περιορισμών.Το HFFC αποτελείται από διάφορα αιμοστατικά πολυμερή που σχηματίζουν φιλμ, συμπεριλαμβανομένης της χιτοζάνης (ως το κύριο αιμοστατικό πολυμερές) με μεθυλοκυτταρίνη (MC), υδροξυπροπυλομεθυλοκυτταρίνη (HPMC 50 cp) και πολυβινυλική αλκοόλη (PVA)) (125 kDa) ως πολυμερές υποστήριξης που προάγει το σχηματισμό θρόμβων.σχηματισμός.Η προσθήκη πολυβινυλοπυρρολιδίνης Κ30 (PVP K30) βελτίωσε την ικανότητα απορρόφησης υγρασίας του NFRCS.Προστέθηκε πολυαιθυλενογλυκόλη 400 (PEG 400) για να βελτιωθεί η σταυροσύνδεση πολυμερών σε δεσμευμένα μίγματα πολυμερών.Τρεις διαφορετικές αιμοστατικές συνθέσεις HFFC (Cm HFFC, Ch HFFC και Cp HFFC), συγκεκριμένα χιτοζάνη με MC (Cm), χιτοζάνη με HPMC (Ch) και χιτοζάνη με PVA (Cp), εφαρμόστηκαν σε Ct.Διάφορες in vitro και in vivo μελέτες χαρακτηρισμού έχουν επιβεβαιώσει την αιμοστατική και επουλωτική δράση του NFRCS.Τα σύνθετα υλικά που προσφέρει η NFRCS μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την προσαρμογή διαφόρων μορφών σκαλωσιάς για την κάλυψη συγκεκριμένων αναγκών.
Επιπλέον, το NFRCS μπορεί να τροποποιηθεί ως επίδεσμος ή ρολό για να καλύψει ολόκληρη την περιοχή τραυματισμού των κάτω άκρων και άλλων μερών του σώματος.Ειδικά για τραυματισμούς άκρων μάχης, ο σχεδιασμένος σχεδιασμός NFRCS μπορεί να αλλάξει σε μισό χέρι ή πλήρες πόδι (Συμπληρωματικό Σχήμα S11).Το NFRCS μπορεί να γίνει ένα βραχιολάκι με κόλλα ιστού, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να σταματήσει την αιμορραγία από σοβαρούς αυτοκτονικούς τραυματισμούς στον καρπό.Ο κύριος στόχος μας είναι να αναπτύξουμε ένα NFRCS με όσο το δυνατόν λιγότερο πολυμερές που μπορεί να παραδοθεί σε μεγάλο πληθυσμό (κάτω από το όριο της φτώχειας) και που να μπορεί να τοποθετηθεί σε κουτί πρώτων βοηθειών.Απλό, αποτελεσματικό και οικονομικό σε σχεδιασμό, το NFRCS ωφελεί τις τοπικές κοινότητες και μπορεί να έχει παγκόσμιο αντίκτυπο.
Η χιτοζάνη (μοριακό βάρος 80 kDa) και ο αμάρανθος αγοράστηκαν από τη Merck, Ινδία.Υδροξυπροπυλομεθυλοκυτταρίνη 50 Cp, πολυαιθυλενογλυκόλη 400 και μεθυλοκυτταρίνη αγοράστηκαν από την Loba Chemie Pvt.LLC, Βομβάη.Πολυβινυλική αλκοόλη (μοριακό βάρος 125 kDa) (87-90% υδρολυμένη) αγοράστηκε από την National Chemicals, Gujarat.Η πολυβινυλοπυρρολιδίνη Κ30 αγοράστηκε από τη Molychem της Βομβάης, τα αποστειρωμένα μάκτρα αγοράστηκαν από τη Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, με το νερό Milli Q (σύστημα καθαρισμού νερού Direct-Q3, Merck, Ινδία) ως φορέα.
Το NFRCS αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας μια μέθοδο λυοφιλοποίησης11,12.Όλες οι συνθέσεις HFFC (Πίνακας 1) παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας μηχανικό αναδευτήρα.Παρασκευάστε ένα διάλυμα χιτοζάνης 0,5% χρησιμοποιώντας οξικό οξύ 1% σε νερό με συνεχή ανάδευση στις 800 rpm σε μηχανικό αναδευτήρα.Το ακριβές βάρος του φορτωμένου πολυμερούς που υποδεικνύεται στον Πίνακα 1 προστέθηκε στο διάλυμα χιτοζάνης και αναδεύτηκε μέχρι να ληφθεί ένα διαυγές διάλυμα πολυμερούς.PVP K30 και PEG 400 προστέθηκαν στο προκύπτον μίγμα στις ποσότητες που υποδεικνύονται στον Πίνακα 1, και η ανάδευση συνεχίστηκε μέχρις ότου ελήφθη ένα διαυγές ιξώδες διάλυμα πολυμερούς.Το προκύπτον λουτρό διαλύματος πολυμερούς υποβλήθηκε σε κατεργασία υπερήχων για 60 λεπτά για να απομακρυνθούν οι παγιδευμένες φυσαλίδες αέρα από το μίγμα πολυμερούς.Όπως φαίνεται στο Συμπληρωματικό Σχήμα S1(b), η Ct κατανεμήθηκε ομοιόμορφα σε κάθε φρεάτιο μιας πλάκας 6 φρεατίων (καλούπι) συμπληρωμένης με 5 ml HFFC.
Η πλάκα των έξι φρεατίων υποβλήθηκε σε υπερήχους για 60 λεπτά για να επιτευχθεί ομοιόμορφη διαβροχή και κατανομή του HFFC στο δίκτυο Ct.Στη συνέχεια παγώστε την πλάκα των έξι φρεατίων στους -20°C για 8-12 ώρες.Οι πλάκες κατάψυξης λυοφιλοποιήθηκαν για 48 ώρες για να ληφθούν διάφορα σκευάσματα NFRCS.Η ίδια διαδικασία χρησιμοποιείται για την παραγωγή διαφορετικών σχημάτων και δομών, όπως ταμπόν ή κυλινδρικά ταμπόν, ή οποιοδήποτε άλλο σχήμα για διαφορετικές εφαρμογές.
Η επακριβώς ζυγισμένη χιτοζάνη (80 kDa) (3%) διαλύεται σε οξικό οξύ 1% χρησιμοποιώντας μαγνητικό αναδευτήρα.Στο προκύπτον διάλυμα χιτοζάνης προστέθηκε 1% PEG 400 και αναδεύτηκε για 30 λεπτά.Ρίξτε το προκύπτον διάλυμα σε τετράγωνο ή ορθογώνιο δοχείο και καταψύξτε στους -80°C για 12 ώρες.Τα κατεψυγμένα δείγματα λυοφιλοποιήθηκαν για 48 ώρες για να ληφθεί πορώδες Cs13.
Το ανεπτυγμένο NFRCS υποβλήθηκε σε πειράματα χρησιμοποιώντας φασματοσκοπία υπερύθρου μετασχηματισμού Fourier (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Τόκιο, Ιαπωνία) για να επιβεβαιωθεί η χημική συμβατότητα της χιτοζάνης με άλλα πολυμερή14,15.Τα φάσματα FTIR (πλάτος της φασματικής περιοχής από 400 έως 4000 cm-1) όλων των δειγμάτων που δοκιμάστηκαν ελήφθησαν πραγματοποιώντας 32 σαρώσεις.
Ο ρυθμός απορρόφησης αίματος (BAR) για όλα τα σκευάσματα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Chen et al.16 με μικρές τροποποιήσεις.Τα αναπτυγμένα NFRK όλων των συνθέσεων ξηράνθηκαν σε φούρνο κενού στους 105°C όλη τη νύχτα για να απομακρυνθεί ο υπολειμματικός διαλύτης.30 mg NFRCS (αρχικό βάρος δείγματος – W0) και 30 mg Ct (θετικός έλεγχος) τοποθετήθηκαν σε χωριστά τρυβλία που περιείχαν ένα προμίγμα 3,8% κιτρικού νατρίου.Σε προκαθορισμένα χρονικά διαστήματα, δηλαδή 5, 10, 20, 30, 40 και 60 δευτερόλεπτα, τα NFRCS αφαιρέθηκαν και οι επιφάνειές τους καθαρίστηκαν από το μη απορροφημένο αίμα τοποθετώντας τα δείγματα σε Ct για 30 δευτερόλεπτα.Το τελικό βάρος του αίματος που απορροφήθηκε από το NFRCS 16 θεωρήθηκε (W1) σε κάθε χρονικό σημείο.Υπολογίστε το ποσοστό BAR χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο:
Ο χρόνος πήξης του αίματος (BCT) προσδιορίστηκε όπως αναφέρεται από τους Wang et al.17 .Ο χρόνος που απαιτείται για την πήξη του πλήρους αίματος (αίμα αρουραίου με 3,8% κιτρικό νάτριο) παρουσία NFRCS υπολογίστηκε ως το BCT του δείγματος δοκιμής.Τα διάφορα συστατικά NFRCS (30 mg) τοποθετήθηκαν σε φιαλίδια με βιδωτό καπάκι των 10 ml και επωάστηκαν στους 37°C.Αίμα (0,5 ml) προστέθηκε στο φιαλίδιο και 0,3 ml 0,2 Μ CaCl2 προστέθηκαν για να ενεργοποιηθεί η πήξη του αίματος.Τέλος, αναστρέψτε το φιαλίδιο κάθε 15 δευτερόλεπτα (έως 180°) μέχρι να σχηματιστεί ένας σταθερός θρόμβος.Το BCT του δείγματος υπολογίζεται από τον αριθμό των αναδιπλώσεων vails17,18.Με βάση το BCT, επιλέχθηκαν δύο βέλτιστες συνθέσεις από NFRCS Cm, Ch και Cp για περαιτέρω μελέτες χαρακτηρισμού.
Το BCT των συνθέσεων Ch NFRCS και Cp NFRCS προσδιορίστηκε με εφαρμογή της μεθόδου που περιγράφεται από τους Li et al.19 .Τοποθετήστε 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS και Cs (θετικός έλεγχος) σε ξεχωριστά τρυβλία Petri (37 °C).Αίμα που περιείχε 3,8% κιτρικό νάτριο αναμίχθηκε με 0,2 Μ CaCl2 σε αναλογία όγκου 10:1 για να ξεκινήσει η διαδικασία πήξης του αίματος.20 μl μίγματος αίματος αρουραίου 0,2 Μ CaCl2 εφαρμόστηκαν στην επιφάνεια του δείγματος και τοποθετήθηκαν σε ένα άδειο τρυβλίο Petri.Ο έλεγχος ήταν αίμα που χύθηκε σε άδεια τρυβλία Petri χωρίς Ct.Σε σταθερά διαστήματα 0, 3 και 5 λεπτών, σταματήστε την πήξη προσθέτοντας 10 ml απιονισμένου νερού (DI) στο δείγμα που περιέχει το πιάτο χωρίς να διαταραχθεί ο θρόμβος.Τα μη πηκτικά ερυθροκύτταρα (ερυθροκύτταρα) υφίστανται αιμόλυση παρουσία απιονισμένου νερού και απελευθερώνουν αιμοσφαιρίνη.Η αιμοσφαιρίνη σε διαφορετικά χρονικά σημεία (ΗΑ(t)) μετρήθηκε στα 540 nm (λmax αιμοσφαιρίνη) χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο UV-Vis.Ως πρότυπο αναφοράς λήφθηκε η απόλυτη απορρόφηση της αιμοσφαιρίνης (AH(0)) σε 0 min 20 μl αίματος σε 10 ml απιονισμένου νερού.Η σχετική πρόσληψη αιμοσφαιρίνης (RHA) του πηγμένου αίματος υπολογίστηκε από την αναλογία ΗΑ(t)/ΗΑ(0) χρησιμοποιώντας την ίδια παρτίδα αίματος.
Χρησιμοποιώντας έναν αναλυτή υφής (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, USA), προσδιορίστηκαν οι συγκολλητικές ιδιότητες του NFRK σε κατεστραμμένο ιστό.Πιέστε ένα κυλινδρικό πιάτο με ανοιχτό πάτο στο εσωτερικό της χοιρινής πέτσας (χωρίς το στρώμα λίπους).Τα δείγματα (Ch NFRCS και Cp NFRCS) εφαρμόστηκαν μέσω σωληνίσκου σε κυλινδρικά καλούπια για να δημιουργήσουν πρόσφυση στο δέρμα του χοίρου.Μετά από επώαση 3 λεπτών σε θερμοκρασία δωματίου (RT) (25°C), η συγκολλητική ισχύς NFRCS καταγράφηκε με σταθερό ρυθμό 0,5 mm/sec.
Το κύριο χαρακτηριστικό των χειρουργικών στεγανωτικών είναι να αυξάνουν την πήξη του αίματος ενώ μειώνουν την απώλεια αίματος.Η πήξη χωρίς απώλειες στο NFRCS αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια προηγουμένως δημοσιευμένη μέθοδο με μικρές τροποποιήσεις 19 .Δημιουργήστε ένα σωλήνα μικροφυγοκέντρησης (2 ml) (εσωτερική διάμετρος 10 mm) με μια οπή 8 × 5 mm2 στη μία πλευρά του σωλήνα φυγοκέντρησης (που αντιπροσωπεύει μια ανοιχτή πληγή).Το NFRCS χρησιμοποιείται για το κλείσιμο του ανοίγματος και η ταινία χρησιμοποιείται για τη σφράγιση των εξωτερικών άκρων.Προσθέστε 20 µl CaCl2 0,2 ​​M στο σωληνάριο της μικροφυγοκέντρησης που περιέχει το πρόμιγμα κιτρικού νατρίου 3,8%.Μετά από 10 λεπτά, οι σωλήνες μικροφυγοκέντρησης αφαιρέθηκαν από τα πιάτα και προσδιορίστηκε η αύξηση της μάζας των πιάτων λόγω της εκροής αίματος από το NFRK (n = 3).Η απώλεια αίματος Ch NFRCS και Cp NFRCS συγκρίθηκαν με Cs.
Η υγρή ακεραιότητα του NFRCS προσδιορίστηκε με βάση τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Mishra και Chaudhary21 με μικρές τροποποιήσεις.Τοποθετήστε το NFRCS σε φιάλη Erlenmeyer των 100 ml με 50 ml νερό και ανακινήστε το για 60 δευτερόλεπτα χωρίς να σχηματιστεί από πάνω.Οπτική επιθεώρηση και ιεράρχηση δειγμάτων για σωματική ακεραιότητα με βάση τη συλλογή.
Η ισχύς δέσμευσης του HFFC σε Ct μελετήθηκε χρησιμοποιώντας προηγουμένως δημοσιευμένες μεθόδους με μικρές τροποποιήσεις.Η ακεραιότητα της επιφανειακής επίστρωσης αξιολογήθηκε με έκθεση του NFRK σε ακουστικά κύματα (εξωτερικό ερέθισμα) παρουσία milliQ νερού (Ct).Τα αναπτυγμένα NFRCS Ch NFRCS και Cp NFRCS τοποθετήθηκαν σε ένα ποτήρι ζέσεως γεμάτο με νερό και υποβλήθηκαν σε υπερήχους για 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 και 30 λεπτά, αντίστοιχα.Μετά την ξήρανση, η ποσοστιαία διαφορά μεταξύ του αρχικού και του τελικού βάρους του NFRCS χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό της εκατοστιαίας απώλειας υλικού (HFFC).Το in vitro BCT υποστήριξε περαιτέρω τη δεσμευτική ισχύ ή την απώλεια των επιφανειακών υλικών.Η αποτελεσματικότητα της δέσμευσης HFFC με Ct παρέχει πήξη του αίματος και ελαστική επικάλυψη στην επιφάνεια του Ct22.
Η ομοιογένεια του αναπτυγμένου NFRCS προσδιορίστηκε από το BCT δειγμάτων (30 mg) που ελήφθησαν από τυχαία επιλεγμένες γενικές τοποθεσίες του NFRCS.Ακολουθήστε την προαναφερθείσα διαδικασία BCT για να προσδιορίσετε τη συμμόρφωση με το NFRCS.Η εγγύτητα μεταξύ και των πέντε δειγμάτων εξασφαλίζει ομοιόμορφη επιφανειακή κάλυψη και εναπόθεση HFFC στο πλέγμα Ct.
Η ονομαστική περιοχή επαφής αίματος (NBCA) προσδιορίστηκε όπως αναφέρθηκε προηγουμένως με ορισμένες τροποποιήσεις.Πήξτε το αίμα σφίγγοντας 20 µl αίματος μεταξύ των δύο επιφανειών Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS και Cs.Μετά από 1 ώρα, τα δύο μέρη του στεντ διαχωρίστηκαν και μετρήθηκε χειροκίνητα η περιοχή του θρόμβου.Η μέση τιμή τριών επαναλήψεων θεωρήθηκε NBCA NFRCS19.
Η ανάλυση Dynamic Vapor Sorption (DVS) χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του NFRCS στην απορρόφηση νερού από το εξωτερικό περιβάλλον ή από το σημείο τραυματισμού που είναι υπεύθυνο για την έναρξη της πήξης.Το DVS αξιολογεί ή καταγράφει την πρόσληψη και την απώλεια ατμών σε ένα δείγμα βαρυμετρικά χρησιμοποιώντας μια εξαιρετικά ευαίσθητη ζυγαριά με ανάλυση μάζας ±0,1 μg.Μια μερική πίεση ατμών (σχετική υγρασία) δημιουργείται από έναν ηλεκτρονικό ελεγκτή ροής μάζας γύρω από το δείγμα με ανάμειξη κορεσμένων και ξηρών αερίων μεταφοράς. Σύμφωνα με τις οδηγίες της Ευρωπαϊκής Φαρμακοποιίας, με βάση το ποσοστό πρόσληψης υγρασίας από τα δείγματα, τα δείγματα κατηγοριοποιήθηκαν σε 4 κατηγορίες (0–0,012% w/w– μη υγροσκοπικά, 0,2–2% w/w ελαφρώς υγροσκοπικά, 2–15% μετρίως υγροσκοπικά)235% πολύ υγροσκοπικά και >1. Σύμφωνα με τις οδηγίες της Ευρωπαϊκής Φαρμακοποιίας, με βάση το ποσοστό πρόσληψης υγρασίας από τα δείγματα, τα δείγματα κατηγοριοποιήθηκαν σε 4 κατηγορίες (0–0,012% w/w– μη υγροσκοπικά, 0,2–2% w/w ελαφρώς υγροσκοπικά, 2–15% μετρίως υγροσκοπικά)235% πολύ υγροσκοπικά και >1.Σύμφωνα με τις συστάσεις της Ευρωπαϊκής Φαρμακοποιίας, ανάλογα με το ποσοστό απορρόφησης υγρασίας από τα δείγματα, τα δείγματα χωρίστηκαν σε 4 κατηγορίες (0–0,012% β/β – μη υγροσκοπικά, 0,2–2% β/β ελαφρώς υγροσκοπικά, 2– δεκαπέντε %).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % μέτρια υγροσκοπική και > 15% πολύ υγροσκοπική)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-2%w-012% w. /w 轻微吸湿性、2-15 % 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 爆为 分为 爆为 分为 爆为 分为 爆为 分为湿 性 、 、 、 、 0,2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23。Σύμφωνα με τις συστάσεις της Ευρωπαϊκής Φαρμακοποιίας, τα δείγματα χωρίζονται σε 4 κατηγορίες ανάλογα με το ποσοστό υγρασίας που απορροφάται από το δείγμα (0-0,012% κατά βάρος – μη υγροσκοπικό, 0,2-2% κατά βάρος ελαφρώς υγροσκοπικό, 2-15% κατά βάρος).% κανονικό γυροσκόπιο, > 15 % очень гиγροσκοπικός) 23. % μέτρια υγροσκοπικό, > 15% πολύ υγροσκοπικό) 23.Η υγροσκοπική απόδοση των NFCS X NFCS και TsN NFCS προσδιορίστηκε σε έναν αναλυτή DVS TA TGA Q5000 SA.Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, ελήφθη ο χρόνος λειτουργίας, η σχετική υγρασία (RH) και το βάρος δείγματος σε πραγματικό χρόνο στους 25°C24.Η περιεκτικότητα σε υγρασία υπολογίζεται με ακριβή ανάλυση μάζας NFRCS χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση:
Το MC είναι υγρασία NFRCS.m1 – ξηρό βάρος ΜΣΑΦ.m2 είναι η μάζα NFRCS σε πραγματικό χρόνο σε δεδομένη RH.
Η συνολική επιφάνεια υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα πείραμα προσρόφησης αζώτου με υγρό άζωτο μετά την εκκένωση των δειγμάτων στους 25 °C για 10 ώρες (< 7 × 10-3 Torr). Η συνολική επιφάνεια υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα πείραμα προσρόφησης αζώτου με υγρό άζωτο μετά την εκκένωση των δειγμάτων στους 25 °C για 10 ώρες (< 7 × 10-3 Torr). Общая площадь поверхности βαθμολόγησε με τη βοήθεια των δοκιμών για την προσφυγή σε ό,τι αφορά τις απαραίτητες παρατηρήσεις σε θερμοκρασία 25 °C σε 10 ώρες (< 7 × 10–3 Τορ). Η συνολική επιφάνεια υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα πείραμα προσρόφησης αζώτου με υγρό άζωτο αφού τα δείγματα εκκενώθηκαν στους 25°C για 10 ώρες (< 7 × 10-3 Torr).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实靌估计总表θερμοκρασία 25°C Βαθμολογία βαθμολόγησης με χρήση των δοκιμών με την προσφυγή σε άγνωστο επίπεδο μετά από ανεπάρκεια 10 ωρών έως 25°C (< 7 × 10-3 θερμοκρασίες). Η συνολική επιφάνεια υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας πειράματα προσρόφησης αζώτου με υγρό άζωτο αφού τα δείγματα εκκενώθηκαν για 10 ώρες στους 25°C (< 7 x 10-3 torr).Η συνολική επιφάνεια, ο όγκος πόρων και το μέγεθος πόρων NFRCS προσδιορίστηκαν με Quantachrome από NOVA 1000e, Αυστρία χρησιμοποιώντας λογισμικό RS 232.
Παρασκευάστε 5% RBC (αλατόνερο ως αραιωτικό) από πλήρες αίμα.Στη συνέχεια, μεταφέρετε ένα δείγμα HFFC (0,25 ml) σε μια πλάκα 96 φρεατίων και μάζα RBC 5% (0,1 ml).Επωάστε το μείγμα στους 37°C για 40 λεπτά.Ένα μείγμα ερυθρών αιμοσφαιρίων και ορού θεωρήθηκε ως θετικός μάρτυρας και ένα μείγμα φυσιολογικού ορού και ερυθρών αιμοσφαιρίων ως αρνητικός μάρτυρας.Η αιμοσυγκόλληση προσδιορίστηκε σύμφωνα με την κλίμακα Stajitzky.Οι προτεινόμενες κλίμακες είναι οι εξής: + + + + πυκνά κοκκώδη αδρανή.+ + + λείο πάτο με καμπύλες άκρες.+ + μαξιλάρια λείου πυθμένα με σκισμένα άκρα.+ στενοί κόκκινοι δακτύλιοι γύρω από τις άκρες των λείων μαξιλαριών.– (αρνητικό) διακριτό κόκκινο κουμπί 12 στο κέντρο του κάτω φρεατίου.
Η αιμοσυμβατότητα του NFRCS μελετήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο του Διεθνούς Οργανισμού Τυποποίησης (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27.Η βαρυμετρική μέθοδος που περιγράφεται από τους Singh et al.Έγιναν μικρές τροποποιήσεις για την αξιολόγηση του σχηματισμού θρόμβου παρουσία ή στην επιφάνεια του NFRCS.500 mg Cs, Ch NFRCS και Cp NFRCS επωάστηκαν σε αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικά (PBS) για 24 ώρες στους 37°C.Μετά από 24 ώρες, το PBS αφαιρέθηκε και το NFRCS υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 2 ml αίματος που περιείχε 3,8% κιτρικό νάτριο.Στην επιφάνεια του NFRCS, προσθέστε 0,04 ml CaCl2 0,1 M στα επωασμένα δείγματα.Μετά από 45 λεπτά, προστέθηκαν 5 ml απεσταγμένου νερού για να σταματήσει η πήξη.Το πηγμένο αίμα στην επιφάνεια του NFRK υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διάλυμα φορμαλδεΰδης 36-38%.Οι θρόμβοι που στερεώθηκαν με φορμαλδεΰδη ξηράνθηκαν και ζυγίστηκαν.Το ποσοστό θρόμβωσης υπολογίστηκε με τον υπολογισμό του βάρους του γυαλιού χωρίς αίμα και δείγματος (αρνητικός έλεγχος) και του γυαλιού με αίμα (θετικός έλεγχος).
Ως αρχική επιβεβαίωση, τα δείγματα οπτικοποιήθηκαν κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο για να κατανοηθεί η ικανότητα της επιφανειακής επίστρωσης HFFC, του Ct διασυνδεδεμένου και του δικτύου Ct να σχηματίζει πόρους.Λεπτά τμήματα Ch και Cp από NFRCS κόπηκαν με μια λεπίδα νυστέρι.Το προκύπτον τμήμα τοποθετήθηκε σε μια γυάλινη διαφάνεια, καλυμμένη με καλυπτρίδα και οι άκρες στερεώθηκαν με κόλλα.Οι παρασκευασμένες διαφάνειες εξετάστηκαν με οπτικό μικροσκόπιο και λήφθηκαν φωτογραφίες σε διαφορετικές μεγεθύνσεις.
Η εναπόθεση πολυμερούς σε δίκτυα Ct οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φθορισμού με βάση τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Rice et al.29. Η σύνθεση HFFC που χρησιμοποιήθηκε για το σκεύασμα αναμίχθηκε με μια φθορίζουσα χρωστική (αμάρανθος) και παρασκευάστηκαν NFRCS (Ch & Cp) σύμφωνα με τη μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως. Η σύνθεση HFFC που χρησιμοποιήθηκε για το σκεύασμα αναμίχθηκε με μια φθορίζουσα χρωστική (αμάρανθος) και παρασκευάστηκαν NFRCS (Ch & Cp) σύμφωνα με τη μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως.Η σύνθεση HFFC που χρησιμοποιήθηκε για το σκεύασμα αναμίχθηκε με μια φθορίζουσα χρωστική (αμάρανθος) και ελήφθη NFRCS (Ch και Cp) σύμφωνα με την προαναφερθείσα μέθοδο.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的戞光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的戞漤将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的戞光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的戞漤Η σύνθεση HFFC που χρησιμοποιήθηκε στο σκεύασμα αναμίχθηκε με μια φθορίζουσα χρωστική (Αμάρανθος) και έλαβε NFRCS (Ch και Cp), όπως αναφέρθηκε προηγουμένως.Λεπτά τμήματα NFRK κόπηκαν από τα ληφθέντα δείγματα, τοποθετήθηκαν σε γυάλινες πλάκες και καλύφθηκαν με καλυπτρίδες.Παρατηρήστε τις προετοιμασμένες πλάκες κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιώντας ένα πράσινο φίλτρο (310-380 nm).Οι εικόνες λήφθηκαν σε μεγέθυνση 4x για την κατανόηση των σχέσεων Ct και της περίσσειας εναπόθεσης πολυμερών στο δίκτυο Ct.
Η επιφανειακή τοπογραφία των NFRCS Ch και Cp προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο ατομικής δύναμης (AFM) με έναν εξαιρετικά αιχμηρό πρόβολο TESP σε λειτουργία τρύπημα: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Taiwan.Η τραχύτητα της επιφάνειας προσδιορίστηκε με ριζικό μέσο τετράγωνο (RMS) χρησιμοποιώντας λογισμικό (Scanning Probe Image Processor).Διάφορες θέσεις NFRCS αποδόθηκαν σε τρισδιάστατες εικόνες για να ελεγχθεί η ομοιομορφία της επιφάνειας.Η τυπική απόκλιση της βαθμολογίας για μια δεδομένη περιοχή ορίζεται ως η τραχύτητα της επιφάνειας.Η εξίσωση RMS χρησιμοποιήθηκε για να ποσοτικοποιηθεί η τραχύτητα της επιφάνειας του NFRCS31.
Πραγματοποιήθηκαν μελέτες που βασίζονται στο FESEM χρησιμοποιώντας FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Τόκιο, για την κατανόηση της επιφανειακής μορφολογίας των Ch NFRCS και Cp NFRCS, που έδειξαν καλύτερο BCT από το Cm NFRCS.Η μελέτη FESEM πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Zhao et al.32 με μικρές τροποποιήσεις.NFRCS 20 έως 30 mg Ch NFRCS και Cp NFRCS αναμείχθηκαν με 20 μΙ κιτρικού νατρίου 3,8% προαναμεμειγμένο με αίμα αρουραίου.20 μl CaCl2 0,2 ​​M προστέθηκαν στα δείγματα που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αίμα για να ξεκινήσει η πήξη και τα δείγματα επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά.Επιπλέον, η περίσσεια των ερυθροκυττάρων απομακρύνθηκε από την επιφάνεια του NFRCS με έκπλυση με φυσιολογικό ορό.
Τα επόμενα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,1% γλουταραλδεΰδη και στη συνέχεια ξηράνθηκαν σε φούρνο θερμού αέρα στους 37°C για να αφαιρεθεί η υγρασία.Τα αποξηραμένα δείγματα επικαλύφθηκαν και αναλύθηκαν 32 .Άλλες εικόνες που λήφθηκαν κατά τη διάρκεια της ανάλυσης ήταν ο σχηματισμός θρόμβου στην επιφάνεια μεμονωμένων ινών βαμβακιού, η εναπόθεση πολυμερούς μεταξύ της Ct, η μορφολογία των ερυθροκυττάρων (σχήμα), η ακεραιότητα του θρόμβου και η μορφολογία των ερυθροκυττάρων παρουσία NFRCS.Οι μη επεξεργασμένες περιοχές NFRCS και οι περιοχές NFRCS που υποβλήθηκαν σε αγωγή με Ch και Cp επωάστηκαν με αίμα σαρώθηκαν για στοιχειακά ιόντα (νάτριο, κάλιο, άζωτο, ασβέστιο, μαγνήσιο, ψευδάργυρος, χαλκός και σελήνιο)33.Συγκρίνετε τα ποσοστά στοιχειωδών ιόντων μεταξύ επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων δειγμάτων για να κατανοήσετε τη συσσώρευση στοιχειωδών ιόντων κατά τον σχηματισμό θρόμβου και την ομοιογένεια του θρόμβου.
Το πάχος της επιφανειακής επικάλυψης Cp HFFC στην επιφάνεια Ct προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας FESEM.Οι διατομές του Cp NFRCS κόπηκαν από το πλαίσιο και επικαλύφθηκαν με διασκορπισμό.Τα δείγματα επικάλυψης που προέκυψαν παρατηρήθηκαν με FESEM και μετρήθηκε το πάχος της επιφανειακής επικάλυψης 34, 35, 36.
Η μικρο-CT ακτίνων Χ παρέχει τρισδιάστατη μη καταστροφική απεικόνιση υψηλής ανάλυσης και σας επιτρέπει να μελετήσετε την εσωτερική δομική διάταξη του NFRK.Το Micro-CT χρησιμοποιεί μια δέσμη ακτίνων Χ που διέρχεται από το δείγμα για να καταγράψει τον τοπικό γραμμικό συντελεστή εξασθένησης των ακτίνων Χ στο δείγμα, ο οποίος βοηθά στη λήψη μορφολογικών πληροφοριών.Η εσωτερική θέση της Ct σε Cp NFRCS και Cp NFRCS που έχει υποστεί επεξεργασία με αίμα εξετάστηκε με μικρο-CT για να κατανοηθεί η αποτελεσματικότητα απορρόφησης και η πήξη του αίματος παρουσία NFRCS37,38,39.Οι τρισδιάστατες δομές των δειγμάτων Cp NFRCS που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αίμα και χωρίς επεξεργασία ανακατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας micro-CT (V|tome|x S240, Phoenix, Γερμανία).Χρησιμοποιώντας το λογισμικό VG STUDIO-MAX έκδοση 2.2, λήφθηκαν πολλές εικόνες ακτίνων Χ από διαφορετικές γωνίες (ιδανικά κάλυψη 360°) για την ανάπτυξη τρισδιάστατων εικόνων για NFRCS.Τα δεδομένα προβολής που συλλέχθηκαν ανακατασκευάστηκαν σε τρισδιάστατες ογκομετρικές εικόνες χρησιμοποιώντας το αντίστοιχο απλό λογισμικό 3D ScanIP Academic.
Επιπλέον, για να κατανοηθεί η κατανομή του θρόμβου, 20 μl προαναμεμιγμένου κιτρικού αίματος και 20 μl 0,2 M CaCl2 προστέθηκαν στο NFRCS για να ξεκινήσει η πήξη του αίματος.Τα παρασκευασμένα δείγματα αφήνονται να σκληρύνουν.Η επιφάνεια NFRK υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 0,5% γλουταραλδεΰδη και στέγνωσε σε φούρνο θερμού αέρα στους 30–40°C για 30 λεπτά.Ο θρόμβος αίματος που σχηματίστηκε στο NFRCS σαρώθηκε, ανακατασκευάστηκε και οπτικοποιήθηκε μια τρισδιάστατη εικόνα του θρόμβου αίματος.
Πραγματοποιήθηκαν αντιβακτηριακές δοκιμασίες σε Cp NFRCS (καλύτερα σε σύγκριση με Ch NFRCS) χρησιμοποιώντας την προηγουμένως περιγραφείσα μέθοδο με μικρές τροποποιήσεις.Η αντιβακτηριακή δράση των Cp NFRCS και Cp HFFC προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τρεις διαφορετικούς δοκιμαστικούς μικροοργανισμούς [S.aureus (gram-θετικά βακτήρια), E.coli (gram-αρνητικά βακτήρια) και λευκό Candida (C.albicans)] που αναπτύσσονται σε άγαρ σε τρυβλία Petri σε επωαστήρα.Εμβολιάστε ομοιόμορφα 50 ml του αραιωμένου εναιωρήματος βακτηριακής καλλιέργειας σε συγκέντρωση 105-106 CFU ml-1 στο μέσο άγαρ.Ρίξτε το μέσο σε ένα ταψί Petri και αφήστε το να στερεοποιηθεί.Κατασκευάστηκαν φρεάτια στην επιφάνεια της πλάκας άγαρ για να γεμίσουν με HFFC (3 φρεάτια για HFFC και 1 για αρνητικό έλεγχο).Προσθέστε 200 µl HFFC σε 3 φρεάτια και 200 ​​µl pH 7,4 PBS στο 4ο φρεάτιο.Στην άλλη πλευρά του τρυβλίου Petri, τοποθετήστε έναν δίσκο Cp NFRCS 12 mm στο στερεοποιημένο άγαρ και βρέξτε με PBS (pH 7,4).Τα δισκία σιπροφλοξασίνης, αμπικιλλίνης και φλουκοναζόλης θεωρούνται πρότυπα αναφοράς για Staphylococcus aureus, Escherichia coli και Candida albicans.Μετρήστε τη ζώνη αναστολής χειροκίνητα και τραβήξτε μια ψηφιακή εικόνα της ζώνης αναστολής.
Μετά από θεσμική δεοντολογική έγκριση, η μελέτη διεξήχθη στο Ιατρικό Κολλέγιο Εκπαίδευσης και Έρευνας Kasturba στο Manipal, Karnataka, στη νότια Ινδία.Το in vitro πειραματικό πρωτόκολλο TEG έχει αναθεωρηθεί και εγκριθεί από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ιδρύματος του Ιατρικού Κολλεγίου Kasturba, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020).Τα άτομα στρατολογήθηκαν από εθελοντές αιμοδότες (ηλικίας 18 έως 55 ετών) από την τράπεζα αίματος του νοσοκομείου.Επιπλέον, λήφθηκε έντυπο ενημερωμένης συγκατάθεσης από τους εθελοντές για τη συλλογή δειγμάτων αίματος.Το Native TEG (N-TEG) ​​χρησιμοποιήθηκε για τη μελέτη της επίδρασης του σκευάσματος Cp HFFC σε πλήρες αίμα προαναμεμειγμένο με κιτρικό νάτριο.Το N-TEG αναγνωρίζεται ευρέως για το ρόλο του στην αναζωογόνηση στο σημείο της φροντίδας, η οποία δημιουργεί προβλήματα στους κλινικούς ιατρούς λόγω της πιθανότητας κλινικά σημαντικής καθυστέρησης στα αποτελέσματα (τεστ ρουτίνας πήξης).Η ανάλυση N-TEG πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας πλήρες αίμα.Ελήφθη ενημερωμένη συγκατάθεση και λεπτομερές ιατρικό ιστορικό από όλους τους συμμετέχοντες.Η μελέτη δεν συμπεριέλαβε συμμετέχοντες με αιμοστατικές ή θρομβωτικές επιπλοκές όπως εγκυμοσύνη/μετά τον τοκετό ή ηπατική νόσο.Τα άτομα που έπαιρναν φάρμακα που επηρεάζουν τον καταρράκτη της πήξης αποκλείστηκαν επίσης από τη μελέτη.Πραγματοποιήθηκαν βασικές εργαστηριακές εξετάσεις (αιμοσφαιρίνη, χρόνος προθρομβίνης, ενεργοποιημένη θρομβοπλαστίνη και αριθμός αιμοπεταλίων) σε όλους τους συμμετέχοντες σύμφωνα με τυπικές διαδικασίες.Το N-TEG καθορίζει την ιξωδοελαστικότητα του θρόμβου αίματος, την αρχική δομή του θρόμβου, την αλληλεπίδραση σωματιδίων, την ενίσχυση του θρόμβου και τη λύση του θρόμβου.Η ανάλυση N-TEG παρέχει γραφικά και αριθμητικά δεδομένα σχετικά με τις συλλογικές επιδράσεις πολλών κυτταρικών στοιχείων και πλάσματος.Η ανάλυση N-TEG πραγματοποιήθηκε σε δύο διαφορετικούς όγκους Cp HFFC (10 μΙ και 50 μΙ).Ως αποτέλεσμα, 1 ml πλήρους αίματος με κιτρικό οξύ προστέθηκε σε 10 μl Cp HFFC.Προσθέστε 1 ml (Cp HFFC + κιτρικό αίμα), 340 μl μικτού αίματος σε 20 μl δίσκου TEG που περιέχει CaCl2 0,2 ​​M.Στη συνέχεια, τρυβλία TEG φορτώθηκαν σε TEG® 5000, US για μέτρηση R, K, γωνία άλφα, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% των δειγμάτων αίματος παρουσία Cp HFFC41.
Το πρωτόκολλο της μελέτης in vivo αναθεωρήθηκε και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Θεσμών των Ζώων (IAEC), Ιατρική Σχολή Kasturba, Ινστιτούτο Ανώτατης Εκπαίδευσης Manipal, Manipal (IAEC/KMC/69/2020).Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις συστάσεις της Επιτροπής Ελέγχου και Εποπτείας Πειραμάτων σε Ζώα (CPCSEA).Όλες οι in vivo μελέτες NFRCS (2 × 2 cm2) πραγματοποιήθηκαν σε θηλυκούς αρουραίους Wistar (βάρους 200 έως 250 g).Όλα τα ζώα εγκλιματίστηκαν σε θερμοκρασία 24-26°C, τα ζώα είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε τυπική τροφή και νερό κατά βούληση.Όλα τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε διαφορετικές ομάδες, κάθε ομάδα αποτελούνταν από τρία ζώα.Όλες οι μελέτες πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με το Animal Studies: Report of In Vivo Experiments 43 .Πριν από τη μελέτη, τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή (IP) χορήγηση ενός μείγματος 20-50 mg κεταμίνης (ανά 1 kg σωματικού βάρους) και 2-10 mg ξυλαζίνης (ανά 1 kg σωματικού βάρους).Μετά τη μελέτη, ο όγκος αιμορραγίας υπολογίστηκε αξιολογώντας τη διαφορά μεταξύ του αρχικού και του τελικού βάρους των δειγμάτων, η μέση τιμή που ελήφθη από τις τρεις δοκιμές λήφθηκε ως ο όγκος αιμορραγίας του δείγματος.
Το μοντέλο ακρωτηριασμού της ουράς αρουραίου εφαρμόστηκε για να κατανοηθεί η δυνατότητα του NFRCS να ρυθμίζει την αιμορραγία σε τραύμα, μάχη ή τροχαίο ατύχημα (μοντέλο τραυματισμού).Κόψτε το 50% της ουράς με μια λεπίδα νυστέρι και αφήστε το στον αέρα για 15 δευτερόλεπτα για να εξασφαλίσετε φυσιολογική αιμορραγία.Επιπλέον, δείγματα δοκιμής τοποθετήθηκαν στην ουρά ενός αρουραίου εφαρμόζοντας πίεση (Ct, Cs, Ch NFRCS και Cp NFRCS).Αιμορραγία και PCT αναφέρθηκαν για τα δείγματα δοκιμής (n = 3) 17,45.
Η αποτελεσματικότητα του ελέγχου πίεσης NFRCS στη μάχη διερευνήθηκε σε ένα μοντέλο της επιφανειακής μηριαίας αρτηρίας.Η μηριαία αρτηρία εκτίθεται, παρακεντείται με τροκάρ 24G και αιμορραγεί μέσα σε 15 δευτερόλεπτα.Αφού παρατηρηθεί ανεξέλεγκτη αιμορραγία, το δοκίμιο τοποθετείται στο σημείο της παρακέντησης με ασκούμενη πίεση.Αμέσως μετά την εφαρμογή του δείγματος δοκιμής, καταγράφηκε ο χρόνος πήξης και παρατηρήθηκε αιμοστατική αποτελεσματικότητα για τα επόμενα 5 λεπτά.Η ίδια διαδικασία επαναλήφθηκε με Cs και Ct46.
Dowling et al.47 πρότεινε ένα μοντέλο ηπατικής βλάβης για την αξιολόγηση του αιμοστατικού δυναμικού των αιμοστατικών υλικών στο πλαίσιο της διεγχειρητικής αιμορραγίας.Το BCT καταγράφηκε για δείγματα Ct (αρνητικός έλεγχος), πλαίσιο Cs (θετικός έλεγχος), δείγματα Ch NFRCS και δείγματα Cp NFRCS.Η υπερηπατική κοίλη φλέβα του αρουραίου εκτέθηκε με τη διενέργεια μέσης λαπαροτομίας.Μετά από αυτό, το περιφερικό τμήμα του αριστερού λοβού κόπηκε με ψαλίδι.Κάντε μια τομή στο συκώτι με μια λεπίδα νυστέρι και αφήστε το να αιμορραγήσει για λίγα δευτερόλεπτα.Ακριβώς ζυγισμένα δείγματα δοκιμής Ch NFRCS και Cp NFRCS τοποθετήθηκαν στην κατεστραμμένη επιφάνεια χωρίς θετική πίεση και καταγράφηκε το BCT.Η ομάδα ελέγχου (Ct) στη συνέχεια άσκησε πίεση ακολουθούμενη από Cs 30 s47 χωρίς να σπάσει ο τραυματισμός.
Πραγματοποιήθηκαν in vivo δοκιμασίες επούλωσης τραυμάτων χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο εκτομής τραύματος για την αξιολόγηση των ιδιοτήτων επούλωσης πληγών των αναπτυγμένων NFRCS που βασίζονται σε πολυμερή.Επιλέχθηκαν μοντέλα τραυμάτων εκτομής και πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με μεθόδους που είχαν δημοσιευθεί προηγουμένως με μικρές τροποποιήσεις19,32,48.Όλα τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως.Χρησιμοποιήστε μια διάτρηση βιοψίας (12 mm) για να κάνετε μια κυκλική βαθιά τομή στο δέρμα της πλάτης.Οι προετοιμασμένες θέσεις του τραύματος επικαλύφθηκαν με Cs (θετικός έλεγχος), Ct (αναγνωρίζοντας ότι τα βαμβακερά επιθέματα παρεμβαίνουν στην επούλωση), Ch NFRCS και Cp NFRCS (πειραματική ομάδα) και αρνητικό μάρτυρα χωρίς καμία θεραπεία.Σε κάθε ημέρα της μελέτης, η περιοχή του τραύματος μετρήθηκε σε όλους τους αρουραίους.Χρησιμοποιήστε μια ψηφιακή κάμερα για να τραβήξετε μια φωτογραφία της περιοχής του τραύματος και να φορέσετε έναν νέο επίδεσμο.Το ποσοστό κλεισίματος του τραύματος μετρήθηκε με τον ακόλουθο τύπο:
Με βάση το ποσοστό κλεισίματος του τραύματος τη 12η ημέρα της μελέτης, το δέρμα του αρουραίου της καλύτερης ομάδας αποκόπηκε ((Cp NFRCS) και η ομάδα ελέγχου) και μελετήθηκε με χρώση Η&Ε και χρώση τριχρωμίου Masson. Με βάση το ποσοστό κλεισίματος του τραύματος τη 12η ημέρα της μελέτης, το δέρμα του αρουραίου της καλύτερης ομάδας αποκόπηκε ((Cp NFRCS) και η ομάδα ελέγχου) και μελετήθηκε με χρώση Η&Ε και χρώση τριχρωμίου Masson.Με βάση το ποσοστό κλεισίματος του τραύματος τη 12η ημέρα της μελέτης, το δέρμα των αρουραίων της καλύτερης ομάδας ((Cp NFRCS) και της ομάδας ελέγχου) αποκόπηκε και εξετάστηκε με χρώση με αιματοξυλίνη-ηωσίνη και τρίχρωμο Masson.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大迌褌猄大连HMa sson三色染色研究.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大迌褌猄大迌褌猄大迌褌猟眳组)Οι αρουραίοι στην καλύτερη ομάδα ((Cp NFRCS) και ομάδες ελέγχου) αφαιρέθηκαν για χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης και χρώση τριχρωμίου Masson με βάση το ποσοστό κλεισίματος του τραύματος την ημέρα 12 της μελέτης.Η εφαρμοζόμενη διαδικασία χρώσης πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με μεθόδους που περιγράφηκαν προηγουμένως49,50.Εν συντομία, μετά από μονιμοποίηση σε φορμαλίνη 10%, τα δείγματα αφυδατώθηκαν χρησιμοποιώντας μια σειρά από διαβαθμισμένες αλκοόλες.Χρησιμοποιήστε ένα μικροτόμο για να λάβετε λεπτές τομές (πάχους 5 μm) του αποκομμένου ιστού.Λεπτές σειριακές τομές μαρτύρων και Cp NFRCS υποβλήθηκαν σε αγωγή με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για τη μελέτη ιστοπαθολογικών αλλαγών.Η χρώση τρίχρωμου Masson χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του σχηματισμού ινιδίων κολλαγόνου.Τα αποτελέσματα που προέκυψαν μελετήθηκαν τυφλά από παθολόγους.
Η σταθερότητα των δειγμάτων Cp NFRCS μελετήθηκε σε θερμοκρασία δωματίου (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) για 12 μήνες51.Το Cp NFRCS (επιφανειακός αποχρωματισμός και μικροβιακή ανάπτυξη) επιθεωρήθηκε οπτικά και δοκιμάστηκε για αντοχή στη φθορά και BCT σύμφωνα με τις παραπάνω μεθόδους που περιγράφονται στην ενότητα Υλικά και Μέθοδοι.
Η επεκτασιμότητα και η αναπαραγωγιμότητα του Cp NFRCS εξετάστηκε παρασκευάζοντας Cp NFRCS με μέγεθος 15×15 cm2.Επιπλέον, δείγματα 30 mg (n = 5) αφαιρέθηκαν από διάφορα κλάσματα Cp NFRCS και το BCT των δειγμάτων που μελετήθηκαν αξιολογήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως στην ενότητα Μέθοδοι.
Προσπαθήσαμε να αναπτύξουμε διάφορα σχήματα και δομές χρησιμοποιώντας συνθέσεις Cp NFRCS για διάφορες βιοϊατρικές εφαρμογές.Τέτοια σχήματα ή διαμορφώσεις περιλαμβάνουν κωνικά επιχρίσματα για ρινορραγίες, οδοντιατρικές επεμβάσεις και κυλινδρικά επιχρίσματα για κολπική αιμορραγία.
Όλα τα σύνολα δεδομένων εκφράζονται ως μέση ± τυπική απόκλιση και αναλύθηκαν με ANOVA χρησιμοποιώντας Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, USA) που ακολουθείται από τη δοκιμή πολλαπλών συγκρίσεων Bonferroni (*ρ<0.05).
Όλες οι διαδικασίες που πραγματοποιήθηκαν σε μελέτες σε ανθρώπους ήταν σύμφωνα με τα πρότυπα του Ινστιτούτου και του Εθνικού Συμβουλίου Ερευνών, καθώς και με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι του 1964 και τις επακόλουθες τροποποιήσεις της, ή παρόμοια πρότυπα ηθικής.Όλοι οι συμμετέχοντες ενημερώθηκαν για τα χαρακτηριστικά της μελέτης και τον εθελοντικό της χαρακτήρα.Τα δεδομένα των συμμετεχόντων παραμένουν εμπιστευτικά μετά τη συλλογή τους.Το in vitro πειραματικό πρωτόκολλο TEG έχει αναθεωρηθεί και εγκριθεί από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ιδρύματος του Ιατρικού Κολλεγίου Kasturba, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020).Οι εθελοντές υπέγραψαν ενημερωμένη συγκατάθεση για τη συλλογή δειγμάτων αίματος.
Όλες οι διαδικασίες που πραγματοποιήθηκαν σε μελέτες σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με την Ιατρική Σχολή Kastuba, Manipal Institute of Higher Education, Manipal (IAEC/KMC/69/2020).Όλα τα πειράματα σε ζώα που σχεδιάστηκαν διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες της Επιτροπής Ελέγχου και Εποπτείας Πειραμάτων σε Ζώα (CPCSEA).Όλοι οι συγγραφείς ακολουθούν τις οδηγίες ARRIVE.
Τα φάσματα FTIR όλων των NFRCS αναλύθηκαν και συγκρίθηκαν με το φάσμα χιτοζάνης που φαίνεται στο Σχήμα 2Α.Χαρακτηριστικές φασματικές κορυφές χιτοζάνης (καταγράφηκαν) στα 3437 cm-1 (διάταση OH και NH, επικάλυψη), 2945 και 2897 cm-1 (διάταση CH), 1660 cm-1 (στέλεχος NH2), 1589 cm-1 (N–H κάμψη), 115 cm-H (κάμψη N–H), 115 cm-Odge (έκταση) 115 cm-1 δευτεροταγές υδροξύλιο), 993 cm-1 (έκταση CO, Βο-ΟΗ) 52,53,54.Ο συμπληρωματικός Πίνακας S1 δείχνει τις τιμές φάσματος απορρόφησης FTIR NFRCS για χιτοζάνη (reporter), καθαρή χιτοζάνη, Cm, Ch και Cp.Τα φάσματα FTIR όλων των NFRCS (Cm, Ch και Cp) έδειξαν τις ίδιες χαρακτηριστικές ζώνες απορρόφησης με την καθαρή χιτοζάνη χωρίς σημαντικές αλλαγές (Εικ. 2Α).Τα αποτελέσματα του FTIR επιβεβαίωσαν την απουσία χημικών ή φυσικών αλληλεπιδράσεων μεταξύ των πολυμερών που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάπτυξη του NFRCS, υποδεικνύοντας ότι τα πολυμερή που χρησιμοποιούνται είναι αδρανή.
In vitro χαρακτηρισμός των Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS και Cs.Το (Α) αντιπροσωπεύει τα συνδυασμένα φάσματα FTIR των συνθέσεων χιτοζάνης και Cm NFRCS, Ch NFRCS και Cp NFRCS υπό συμπίεση.(Β) α) Ρυθμός πρόσληψης πλήρους αίματος NFRCS Cm, Ch, Cp και Cg (n = 3).Τα δείγματα Ct έδειξαν υψηλότερο BAR επειδή η μπατονέτα έχει υψηλότερη απόδοση απορρόφησης.β) Αίμα μετά την απορρόφηση αίματος Απεικόνιση του απορροφηθέντος δείγματος.Γραφική αναπαράσταση του BCT του δείγματος δοκιμής C (το Cp NFRCS είχε το καλύτερο BCT (15 s, n = 3)). Τα δεδομένα στα C, D, E και G εμφανίστηκαν ως μέσος όρος ± SD, και οι γραμμές σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD, ***p < 0,0001. Τα δεδομένα στα C, D, E και G εμφανίστηκαν ως μέσος όρος ± SD, και οι γραμμές σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD, ***p < 0,0001. Данные во C, D, E και G προτείνουν ως среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешноей представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. Τα δεδομένα στα C, D, E και G παρουσιάζονται ως μέση ± τυπική απόκλιση και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν τυπική απόκλιση, ***p<0,0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p <0,0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p <0,0001。 Данные во C, D, E και G υποδεικνύουν ως среднее значение ± стандартное отклонение, λανθασμένα σχέδια λανθασμένα представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. Τα δεδομένα στα C, D, E και G εμφανίζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση, οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν τυπική απόκλιση, ***p<0,0001.