Dankon pro vizito de Nature.com.La retumila versio, kiun vi uzas, havas limigitan CSS-subtenon.Por la plej bona sperto, ni rekomendas, ke vi uzu ĝisdatigitan retumilon (aŭ malŝaltu Kongruo-Reĝimon en Internet Explorer).Intertempe, por certigi daŭran subtenon, ni redonos la retejon sen stiloj kaj JavaScript.
Senbrida sangado estas unu el la ĉefaj kaŭzoj de morto.Atingo de rapida hemostazo certigas la supervivon de la subjekto kiel unua helpo dum batalo, trafikaj akcidentoj kaj mortreduktaj operacioj.Nanopora fibro-plifortikigita kunmetita eŝafodo (NFRCS) derivita de simpla hemostatic filmforma komponaĵo (HFFC) ĉar kontinua fazo povas ekigi kaj plibonigi hemostazon.La evoluo de la NFRCS estas bazita sur la dezajno de la flugilo de la libelo.La libelflugila strukturo konsistas el transversaj kaj longitudaj flugiloj, kaj la flugilmembranoj estas ligitaj unu al la alia por konservi la integrecon de la mikrostrukturo.HFFC unuforme tegas la surfacon de la fibro per filmo de nanometra dikeco kaj ligas la hazarde distribuitan kotondikecon (Ct) (disigita fazo) por formi nanoporan strukturon.La kombinaĵo de kontinuaj kaj disaj fazoj reduktas la koston de la produkto je dekoble kompare kun komerce haveblaj produktoj.Modifita NFRCS (tamponoj aŭ pojnoj) povas esti uzata en diversaj biomedicinaj aplikoj.En vivaj studoj finis ke la evoluinta Cp NFRCS ekigas kaj plifortigas la koagulprocezon ĉe la loko de aplikiĝo.NFRCS povas moduli la mikromedion kaj agi sur la ĉela nivelo pro ĝia nanopora strukturo rezultiganta pli bonan vundkuracadon en la detranĉa vundmodelo.
Senbrida sangado dum batalo, intraoperaciaj kaj krizaj situacioj povas prezenti gravan minacon al la vivo de la vunditoj1.Tiuj kondiĉoj plue kondukas al totala pliiĝo en periferia angia rezisto, kondukante al hemoragia ŝoko.Taŭgaj mezuroj por kontroli sangadon dum kaj post kirurgio estas konsiderataj potenciale vivminacaj2,3.Difekto de grandaj angioj kondukas al amasa sangoperdo, rezultigante mortoprocenton de ≤ 50% en batalo kaj 31% dum kirurgio1.Amasa sangoperdo kondukas al malpliigo de korpa volumo, kiu reduktas koran eliron.Pliiĝo en totala periferia angia rezisto kaj progresiva difekto de mikrocirkulado kondukas al hipoksio en la vivsubtenaj organoj.Hemoragia ŝoko povas okazi se la kondiĉo daŭras sen efika interveno1,4,5.Aliaj komplikaĵoj inkludas la progresadon de hipotermio kaj metabola acidozo, same kiel koagulmalsanon kiu malhelpas la koagulprocezon.Severa hemoragia ŝoko estas rilata al pli alta risko de morto6,7,8.En grado III (progresema) ŝoko, sangotransfuzo estas esenca por pacienca supervivo dum intraoperacia kaj postoperacia malsaneco kaj morteco.Por venki ĉiujn ĉi-suprajn vivdanĝerajn situaciojn, ni evoluigis nanoporan fibro-plifortigitan kompozitan eŝafodon (NFRCS) kiu utiligas minimuman polimerkoncentriĝon (0.5%) uzante kombinaĵon de hidrosolveblaj hemostataj polimeroj.
Kun la uzo de fibro-plifortigo, kostefikaj produktoj povas esti evoluigitaj.La hazarde aranĝitaj fibroj similas la strukturon de la flugilo de libelo, balancita per la horizontalaj kaj vertikalaj strioj sur la flugiloj.La transversaj kaj longitudaj vejnoj de la flugilo komunikas kun la flugilmembrano (Fig. 1).NFRCS konsistas el plifortikigita Ct kiel eŝafoda sistemo kun pli bona fizika kaj mekanika forto (Figuro 1).Pro la pagebleco kaj metio, kirurgoj preferas uzi kotonfadenajn mezurilojn (Ct) dum operacioj kaj pansaĵoj. Tial, konsiderante ĝiajn multoblajn avantaĝojn, inkluzive de> 90% kristala celulozo (aldonas al la plibonigo de hemostatika agado), Ct estis uzata kiel skeleta sistemo de NFRCS9,10. Tial, konsiderante ĝiajn multoblajn avantaĝojn, inkluzive de> 90% kristala celulozo (aldonas al la plibonigo de hemostatika agado), Ct estis uzata kiel skeleta sistemo de NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристалическлой Следовательно в повышении гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. Tial, konsiderante ĝiajn multajn avantaĝojn, inkluzive de>90% kristala celulozo (implikita en pliigita hemostatika agado), Ct estis utiligita kiel la NFRCS-skeleta sistemo9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血滢止血滴止血滴止血滴 NF ， NF ,10 的骨架系统。因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%Tial, pro ĝiaj multaj avantaĝoj, inkluzive de pli ol 90% kristala celulozo (helpas plibonigi hemostatan aktivecon), Ct estis uzata kiel eŝafodo por NFRCS9,10.Ct estis supraĵe kovrita (nano-dika filmformado estis observita) kaj interligita kun hemostatika filmforma komponaĵo (HFFC).HFFC agas kiel matriĝelo, tenante hazarde metitan Ct kune.La evoluinta dezajno elsendas streĉon ene de la disigita fazo (plifortikigantaj fibroj).Estas malfacile akiri nanoporajn strukturojn kun bona mekanika forto uzante minimumajn polimerkoncentriĝojn.Krome, ne estas facile personecigi malsamajn muldilojn por malsamaj biomedicinaj aplikoj.
La figuro montras diagramon de la NFRCS-dezajno bazita sur la libelflugila strukturo (A).Ĉi tiu bildo montras komparan analogecon de la flugilstrukturo de libelo (la intersekciĝantaj kaj longitudaj vejnoj de la flugilo estas interligitaj) kaj sekcan fotomikrografaĵon de Cp NFRCS (B).Skema reprezentado de NFRCS.
NFRCoj estis evoluigitaj uzante HFFC kiel kontinuan fazon por trakti ĉi-suprajn limigojn.HFFC estas kunmetita de diversaj filmformaj hemostataj polimeroj inkluzive de kitosano (kiel la ĉefa hemostaza polimero) kun metilcelulozo (MC), hidroksipropilmetilcelulozo (HPMC 50 cp) kaj polivinilalkoholo (PVA)) (125 kDa) kiel subtenpolimero kiu antaŭenigas tromboformadon.formacio.La aldono de polivinilpirolidino K30 (PVP K30) plibonigis la humidan sorbadkapaciton de la NFRCS.Polietilenglikolo 400 (PEG 400) estis aldonita por plibonigi polimeran krucligadon en ligitaj polimermiksaĵoj.Tri malsamaj HFFC hemostataj komponaĵoj (Cm HFFC, Ch HFFC kaj Cp HFFC), nome kitosano kun MC (Cm), kitosano kun HPMC (Ch), kaj kitosano kun PVA (Cp), estis aplikitaj al Ct.Diversaj en vitro kaj en vivaj karakterizadstudoj konfirmis la hemostazan kaj vundkuracan agadon de NFRCS.Komponitaj materialoj ofertitaj de NFRCS povas esti uzataj por personecigi diversajn formojn de skafaldaro por renkonti specifajn bezonojn.
Krome, NFRCS povas esti modifita kiel bandaĝo aŭ rulo por kovri la tutan vundan areon de la malsuperaj ekstremaĵoj kaj aliaj partoj de la korpo.Specife por batalmembro-vundoj, la desegnita NFRCS-dezajno povas esti ŝanĝita al duonbrako aŭ plena kruro (Suplementa Figuro S11).La NFRCS povas esti transformita en pojnon kun histogluo, kiu povas esti uzita por ĉesigi sangadon de severaj suicidaj pojnaj vundoj.Nia ĉefa celo estas evoluigi NFRCS kun kiel eble plej malmulte da polimero, kiu povas esti liverita al granda loĝantaro (sub la limo de malriĉeco) kaj kiu povas esti metita en sukurilon.Simpla, efika kaj ekonomia en dezajno, NFRCS profitigas lokajn komunumojn kaj povas havi tutmondan efikon.
Kitosano (molekula pezo 80 kDa) kaj amaranto estis aĉetitaj de Merck, Hindio.Hidroksipropilmetilcelulozo 50 Cp, polietilenglikolo 400 kaj metilcelulozo estis aĉetitaj de Loba Chemie Pvt.LLC, Mumbajo.Polivinilalkoholo (molekula pezo 125 kDa) (87-90% hidrolizita) estis aĉetita de National Chemicals, Guĝarato.Polivinilpirolidino K30 estis aĉetita de Molychem, Mumbajo, sterilaj swaboj estis aĉetitaj de Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamilnado, kun Milli Q-akvo (Direct-Q3 akvopurigsistemo, Merck, Hindio) kiel la portanto.
NFRCS estis evoluigita per liofiligmetodo11,12.Ĉiuj HFFC-kunmetaĵoj (Tabelo 1) estis preparitaj per mekanika agitalo.Preparu 0,5% solvon de kitosano uzante 1% acetacido en akvo per kontinua kirlado je 800 rpm sur mekanika kirlado.La preciza pezo de la ŝarĝita polimero indikita en Tabelo 1 estis aldonita al la kitosana solvo kaj movita ĝis klara polimera solvo estis akirita.PVP K30 kaj PEG 400 estis aldonitaj al la rezulta miksaĵo en la kvantoj indikitaj en Tabelo 1, kaj moviĝado estis daŭrigita ĝis klara viskoza polimersolvo estis akirita.La rezulta bano de polimersolvo estis sonikita dum 60 minutoj por forigi kaptitajn aervezikojn de la polimermiksaĵo.Kiel montrite en Suplementa Figuro S1 (b), Ct estis egale distribuita en ĉiu puto de 6-puta plato (muldilo) kompletigita per 5 ml da HFFC.
La ses-puta plato estis sonikita dum 60 min por atingi unuforman malsekigon kaj distribuadon de HFFC en la Ct-reto.Poste frostigu la ses-putan teleron je -20 °C dum 8-12 horoj.Frostigaj teleroj estis liofiligitaj dum 48 horoj por akiri diversajn formulaĵojn de NFRCS.La sama proceduro estas uzata por produkti malsamajn formojn kaj strukturojn, kiel tamponojn aŭ cilindrajn tamponojn, aŭ ajnan alian formon por malsamaj aplikoj.
Precize pezita kitosano (80 kDa) (3%) estas solvita en 1% acetacido uzante magnetan kirlilon.Al la rezulta solvo de kitosano estis aldonita 1% PEG 400 kaj movita dum 30 minutoj.Verŝu la rezultan solvon en kvadratan aŭ rektangulan ujon kaj frostigu je -80 °C dum 12 horoj.Frostigitaj specimenoj estis liofiligitaj dum 48 horoj por akiri poran Cs13.
La evoluinta NFRCS estis submetita al eksperimentoj uzantaj Fourier-transformitan infraruĝan spektroskopion (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokio, Japanio) por konfirmi la kemian kongruecon de kitosano kun aliaj polimeroj14,15.La FTIR-spektroj (larĝo de la spektra gamo de 400 ĝis 4000 cm-1) de ĉiuj testitaj provaĵoj estis akiritaj per elfarado de 32 skanadoj.
La sango-sorbada indico (BAR) por ĉiuj formuliĝoj estis taksita per la metodo priskribita de Chen et al.16 kun etaj modifoj.La evoluintaj NFRK-oj de ĉiuj komponaĵoj estis sekigitaj en vakua forno je 105 °C dum la nokto por forigi restan solvilon.30 mg NFRCS (komenca specimena pezo - W0) kaj 30 mg Ct (pozitiva kontrolo) estis metitaj en apartajn pladojn enhavantajn premikson de 3.8% natria citrato.Je antaŭdestinitaj tempointervaloj, te 5, 10, 20, 30, 40 kaj 60 sekundoj, la NFRCS estis forigitaj kaj iliaj surfacoj purigitaj de nesorbita sango metante la specimenojn sur Ct dum 30 sekundoj.La fina pezo de sango absorbita de NFRCS 16 estis konsiderita (W1) ĉe ĉiu tempopunkto.Kalkulu la BAR-procenton uzante la jenan formulon:
Sanga koagula tempo (BCT) estis determinita kiel raportite fare de Wang et al.17 .La tempo postulata por tuta sango (ratsango premizita kun 3.8% natria citrato) koaguliĝi en la ĉeesto de NFRCS estis kalkulita kiel la BCT de la provprovaĵo.La diversaj NFRCS-komponentoj (30 mg) estis metitaj en 10 ml-ŝraŭbkaptilojn kaj kovitaj je 37 °C.Sango (0,5 ml) estis aldonita al la fiolo kaj 0,3 ml da 0,2 M CaCl2 estis aldonitaj por aktivigi sangan koaguliĝon.Fine, renversu la fiolon ĉiujn 15 sekundojn (ĝis 180°) ĝis formiĝas firma embolo.La BCT de la specimeno estas taksita per la nombro da flip-vails17,18.Surbaze de BCT, du optimumaj komponaĵoj de NFRCS Cm, Ch kaj Cp estis elektitaj por pliaj karakterizaj studoj.
La BCT de Ch NFRCS kaj Cp NFRCS-komponaĵoj estis determinita per efektivigo de la metodo priskribita de Li et al.19 .Metu 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS kaj Cs (pozitiva kontrolo) en apartajn Petri-pladojn (37 °C).Sango enhavanta 3.8% natriocitrato estis miksita kun 0.2 M CaCl2 en 10:1 volumenoproporcio por komenci la sangokoagulprocezon.20 µl da 0.2 M CaCl2 ratsangomiksaĵo estis aplikitaj al la provaĵsurfaco kaj metitaj en malplenan Petri-pladon.La kontrolo estis sango verŝita en malplenajn Petri-pladojn sen Ct.Je fiksaj intervaloj de 0, 3 kaj 5 minutoj, ĉesu koaguliĝon aldonante 10 ml da dejonigita (DI) akvo al la provaĵo enhavanta la pladon sen ĝeni la embolon.Nekoagulitaj eritrocitoj (eritrocitoj) spertas hemolizon en ĉeesto de dejonigita akvo kaj liberigas hemoglobinon.Hemoglobino ĉe malsamaj tempopunktoj (HA(t)) estis mezurita je 540 nm (λmax hemoglobino) uzante UV-Vis-spektrofotometron.La absoluta sorbado de hemoglobino (AH(0)) en 0 min de 20 µl da sango en 10 ml da dejonigita akvo estis prenita kiel referencnormo.La relativa hemoglobina asimilado (RHA) de koagulita sango estis kalkulita de la rilatumo HA(t)/HA(0) uzante la saman aron de sango.
Uzante teksturanalizilon (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, Usono), la gluaj propraĵoj de NFRK al damaĝita histo estis determinitaj.Premu malferma-fundan cilindran pladon kontraŭ la internon de la porka haŭto (sen la tavolo de graso).Provaĵoj (Ch NFRCS kaj Cp NFRCS) estis aplikitaj per kanulo en cilindrajn ŝimojn por krei adiĝon al la haŭto de la porko.Post 3-minuta kovado ĉe ĉambra temperaturo (RT) (25 ° C.), la algluiĝa forto de NFRCS estis registrita kun konstanta rapideco de 0,5 mm/sek.
La ĉefa trajto de kirurgiaj sigelaĵoj estas pliigi sangokoaguladon dum redukto de sangoperdo.Senperda koaguliĝo en NFRCS estis taksita uzante antaŭe publikigitan metodon kun etaj modifoj 19 .Faru mikrocentrifugan tubon (2 ml) (interna diametro 10 mm) kun 8 × 5 mm2 truo sur unu flanko de la centrifugila tubo (reprezentante malfermitan vundon).NFRCS estas uzata por fermi la malfermaĵon kaj glubendo estas uzata por sigeli la eksterajn randojn.Aldonu 20 µl da 0,2 M CaCl2 al la mikrocentrifuga tubo enhavanta la 3,8% natria citrato premix.Post 10 minutoj, la mikrocentrifugaj tuboj estis forigitaj de la pladoj kaj la kresko de la maso de la pladoj estis determinita pro la elfluo de sango de la NFRK (n = 3).Sanga perdo Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis komparitaj kun Cs.
Malseka integreco de NFRCS estis determinita surbaze de la metodo priskribita fare de Mishra kaj Chaudhary21 kun negravaj modifoj.Metu la NFRCS en 100 ml Erlenmeyer-flakon kun 50 ml akvo kaj kirli dum 60 s sen formi supro.Vida inspektado kaj prioritato de specimenoj por fizika integreco bazita sur kolekto.
La deviga forto de HFFC al Ct estis studita uzante antaŭe publikigitajn metodojn kun negravaj modifoj.Surfaca tega integreco estis taksita eksponante NFRK al akustikaj ondoj (ekstera stimulo) en la ĉeesto de milliQ-akvo (Ct).La evoluinta NFRCS Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis metitaj en beklon plenigitan per akvo kaj sonikataj dum 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 kaj 30 minutoj respektive.Post sekiĝo, la procenta diferenco inter la komenca kaj fina pezo de la NFRCS estis uzata por kalkuli la procentan perdon de materialo (HFFC).En vitro BCT plue apogis la devigan forton aŭ perdon de surfacmaterialoj.La efikeco de HFFC ligado al Ct disponigas sangokoaguliĝon kaj elastan tegaĵon sur la surfaco de Ct22.
La homogeneco de la evoluinta NFRCS estis determinita per la BCT de provaĵoj (30 mg) prenitaj de hazarde elektitaj ĝeneralaj lokoj de la NFRCS.Sekvu la antaŭe menciitan BCT-proceduron por determini NFRCS-konformecon.Proksimeco inter ĉiuj kvin specimenoj certigas unuforman surfacan kovradon kaj HFFC-demetadon en la Ct-maŝo.
La nominala sangokontakta areo (NBCA) estis determinita kiel antaŭe raportite kun kelkaj modifoj.Koagu la sangon premante 20 µl da sango inter la du surfacoj de Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS kaj Cs.Post 1 horo, la du partoj de la stent estis apartigitaj kaj mane mezuris la areon de la embolo.La averaĝa valoro de tri ripetoj estis konsiderita NBCA NFRCS19.
Analizo de Dynamic Vapor Sorption (DVS) estis uzata por taksi la efikecon de NFRCS por sorbi akvon de la ekstera medio aŭ de la vundejo respondeca por komenci koaguliĝon.La DVS taksas aŭ registras la vaporsorbadon kaj perdon en provaĵo gravimetrie uzante ultra-senteman ekvilibron kun masrezolucio de ±0.1 µg.Parta vaporpremo (relativa humideco) estas generita per elektronika masfluregilo ĉirkaŭ la provaĵo miksante saturitajn kaj sekajn portantgasojn. Laŭ la gvidlinioj de Eŭropa Farmakopeo, surbaze de la procento de humideco de la specimenoj, specimenoj estis klasifikitaj en 4 kategoriojn (0-0.012% p/w− ne-higroskopaj, 0.2-2% p/w iomete higroskopaj, 2-15% modere higroskopaj, kaj > 15% higroskopaj, kaj > 15.5%). Laŭ la gvidlinioj de Eŭropa Farmakopeo, surbaze de la procento de humideco de la specimenoj, specimenoj estis klasifikitaj en 4 kategoriojn (0-0.012% p/w− ne-higroskopaj, 0.2-2% p/w iomete higroskopaj, 2-15% modere higroskopaj, kaj > 152% higroskopaj)Konforme al la rekomendoj de la Eŭropa Farmakopeo, depende de la procento de humida sorbado de la specimenoj, la specimenoj estis dividitaj en 4 kategoriojn (0-0,012% p/w - ne-higroskopaj, 0,2-2% p/w iomete higroskopaj, 2-15 %).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % modere higroskopaj kaj > 15% tre higroskopaj)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/0.012% w/0.012% w/0.012% w/0.012% w/0.012% w. /w 轻微吸湿性、2-15 % 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23。根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 分为 分为 分为 分为 琸 （0.湿 性 、 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23。Konforme al la rekomendoj de la Eŭropa Farmakopeo, specimenoj estas dividitaj en 4 klasojn depende de la procento de humideco absorbita de la specimeno (0-0,012% laŭ pezo - ne-higroskopaj, 0,2-2% laŭ pezo iomete higroskopaj, 2-15% laŭ pezo).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % modere higroskopaj, > 15% tre higroskopaj) 23.La higroskopa efikeco de NFCS X NFCS kaj TsN NFCS estis determinita sur analizilo DVS TA TGA Q5000 SA.Dum ĉi tiu procezo, rultempo, relativa humideco (RH) kaj realtempa specimena pezo je 25 °C24 estis akiritaj.Humidenhavo estas kalkulita per preciza NFRCS-masanalizo uzante la sekvan ekvacion:
MC estas NFRCS-humido.m1 - seka pezo de NSAIDoj.m2 estas la realtempa NFRCS-maso ĉe antaŭfiksita RH.
La totala surfacareo estis taksita uzante nitrogenadsorbadeksperimenton kun likva nitrogeno post malplenigado de la provaĵoj je 25 °C dum 10 h (< 7 × 10-3 Torr). La totala surfacareo estis taksita uzante nitrogenadsorbadeksperimenton kun likva nitrogeno post malplenigado de la provaĵoj je 25 °C dum 10 h (< 7 × 10-3 Torr). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азоток пи с помощью эксперимента по адсорбции азоток пи ожнения образцов при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). La totala surfacareo estis taksita uzante nitrogenadsorbadeksperimenton kun likva nitrogeno post kiam specimenoj estis malplenigitaj je 25 °C dum 10 h (< 7 × 10-3 Torr).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面总表。在 25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбтцод пи бтцод писорбтцик площадь оценивалась с использованием ле опорожнения образцов в течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). La totala surfacareo estis taksita uzante nitrogenadsorbadeksperimentojn kun likva nitrogeno post kiam specimenoj estis malplenigitaj dum 10 horoj je 25 °C (< 7 x 10-3 torr).Totala surfacareo, porvolumeno kaj NFRCS-porgrandeco estis determinitaj per Quantachrome de NOVA 1000e, Aŭstrio uzante RS 232-softvaron.
Preparu 5% RBC (salino kiel diluaĵo) el tuta sango.Poste transdonu alikvoton de HFFC (0,25 ml) al 96-puta plato kaj 5% RBC-maso (0,1 ml).Kovu la miksaĵon je 37 °C dum 40 minutoj.Miksaĵo de ruĝaj globuloj kaj serumo estis konsiderita pozitiva kontrolo, kaj miksaĵo de salozaj kaj ruĝaj globuloj kiel negativa kontrolo.Hemagglutino estis determinita laŭ la Stajitzky-skalo.La proponitaj skvamoj estas jenaj: + + + + densaj grajnecaj agregaĵoj;+ + + glataj malsupraj kusenetoj kun kurbaj randoj;+ + glataj malsupraj kusenetoj kun ŝiritaj randoj;+ mallarĝaj ruĝaj ringoj ĉirkaŭ la randoj de la glataj kusenetoj;– (negativa) diskreta ruĝa butono 12 en la centro de la malsupra puto.
La hemokongrueco de NFRCS estis studita laŭ la metodo de la Internacia Organizo por Normigado (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27.La gravimetra metodo priskribita de Singh et al.Negravaj modifoj estis faritaj por taksi tromboformadon en la ĉeesto de aŭ sur la surfaco de NFRCS.500 mg da Cs, Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis kovataj en fosfata bufrita salo (PBS) dum 24 horoj je 37 °C.Post 24 horoj, PBS estis forigita kaj NFRCS estis traktita kun 2 ml da sango enhavanta 3.8% natriocitrato.Sur la surfaco de la NFRCS, aldonu 0,04 ml de 0,1 M CaCl2 al la kovataj specimenoj.Post 45 minutoj, 5 ml da distilita akvo estis aldonitaj por ĉesigi koaguliĝon.Koagulita sango sur la surfaco de NFRK estis traktita kun 36-38% formaldehida solvo.La koagulaĵoj fiksitaj per formaldehido estis sekigitaj kaj pesitaj.La procento de trombozo estis taksita kalkulante la pezon de la vitro sen sango kaj specimeno (negativa kontrolo) kaj la vitro kun sango (pozitiva kontrolo).
Kiel komenca konfirmo, la provaĵoj estis bildigitaj sub optika mikroskopo por kompreni la kapablon de la HFFC-surfaca tegaĵo, Ct interligita, kaj Ct-reto formi porojn.Maldikaj sekcioj de Ch kaj Cp de NFRCS estis tajlitaj per skalpelklingo.La rezulta sekcio estis metita sur vitran gliton, kovrita per kovrilo, kaj la randoj estis fiksitaj per gluo.La pretaj diapozitivoj estis rigarditaj sub optika mikroskopo kaj fotoj estis faritaj ĉe malsamaj pligrandigoj.
Polimerdemetado en Ct-retoj estis bildigita uzante fluoreskecan mikroskopion bazitan sur la metodo priskribita de Rice et al.29. La HFFC-kunmetaĵo uzita por la formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (amaranto), kaj NFRCS (Ch & Cp) estis preparita laŭ la metodo menciita antaŭe. La HFFC-kunmetaĵo uzita por la formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (amaranto), kaj NFRCS (Ch & Cp) estis preparita laŭ la metodo menciita antaŭe.La HFFC-kunmetaĵo uzata por formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturo (amaranto) kaj NFRCS (Ch kaj Cp) estis akirita laŭ la antaŭe menciita metodo.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶到的斶Chp将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶到的斶ChpLa HFFC-kunmetaĵo uzita en la formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (Amaranto) kaj ricevis NFRCS (Ch kaj Cp), kiel menciite antaŭe.Maldikaj sekcioj de NFRK estis tranĉitaj el la akiritaj specimenoj, metitaj sur vitraj lumbildoj, kaj kovritaj per kovriloj.Observu la pretajn lumbildojn sub fluoreska mikroskopo uzante verdan filtrilon (310-380 nm).Bildoj estis prenitaj ĉe 4x pligrandigo por kompreni Ct-rilatojn kaj troan polimerdemetadon en la Ct-reto.
La surfaca topografio de NFRCS Ch kaj Cp estis determinita uzante atomfortmikroskopon (AFM) kun ultra-akra TESP-kantilevro en frapeta reĝimo: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Tajvano.Surfaca malglateco estis determinita per radika averaĝa kvadrato (RMS) uzante programaron (Scanning Probe Image Processor).Diversaj NFRCS-lokoj estis igitaj sur 3D bildoj por kontroli surfacunuformecon.La norma devio de la poentaro por antaŭfiksita areo estas difinita kiel la surfaca malglateco.La RMS-ekvacio estis utiligita por kvantigi la surfacan malglatecon de NFRCS31.
FESEM-bazitaj studoj estis faritaj uzante FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokio, por kompreni la surfacan morfologion de Ch NFRCS kaj Cp NFRCS, kiuj montris pli bonan BCT ol Cm NFRCS.La FESEM-studo estis farita laŭ la metodo priskribita de Zhao et al.32 kun etaj modifoj.NFRCS 20 ĝis 30 mg Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis premiksitaj kun 20 µl da 3.8% natria citrato premiksita kun ratsango.20 μl de 0.2 M CaCl2 estis aldonitaj al la sangotraktitaj specimenoj por komenci koaguliĝon kaj la specimenoj estis kovataj ĉe ĉambra temperaturo dum 10 minutoj.Krome, troaj eritrocitoj estis forigitaj de la NFRCS-surfaco per lavado kun salo.
Postaj specimenoj estis traktitaj kun 0.1% glutaraldehido kaj tiam sekigitaj en varmaera forno je 37 °C por forigi humidon.La sekigitaj specimenoj estis kovritaj kaj analizitaj 32 .Aliaj bildoj akiritaj dum la analizo estis formado de koagulaĵo sur la surfaco de individuaj kotonfibroj, polimerdemetaĵo inter Ct, eritrocita morfologio (formo), eritrocita morfologio, kaj eritrocita morfologio en la ĉeesto de NFRCS.Netraktitaj NFRCS-areoj kaj Ch kaj Cp traktitaj NFRCS-areoj kovataj kun sango estis skanitaj por elementaj jonoj (natrio, kalio, nitrogeno, kalcio, magnezio, zinko, kupro kaj seleno)33.Komparu elementajn jonprocentojn inter traktitaj kaj netraktitaj specimenoj por kompreni elementan jon-amasiĝon dum embolformado kaj embolhomogenecon.
La dikeco de la surfaca tegaĵo de Cp HFFC sur la surfaco de Ct estis determinita uzante FESEM.La sekcoj de Cp NFRCS estis tranĉitaj de la kadro kaj ŝprucitaj kovritaj.La rezultaj ŝpructaj tegaĵoj estis observitaj de FESEM kaj la dikeco de la surfaca tegaĵo estis mezurita 34 , 35 , 36 .
Rentgenfota mikro-CT disponigas alt-rezolucian 3D ne-detruan bildigon kaj permesas vin studi la internan strukturan aranĝon de NFRK.Mikro-CT uzas Rentgenradian trabon pasantan tra la provaĵo por registri la lokan linearan malfortigkoeficienton de la Rentgenradioj en la provaĵo, kiu helpas akiri morfologiajn informojn.La interna loko de Ct en Cp NFRCS kaj sangotraktita Cp NFRCS estis ekzamenita per mikro-CT por kompreni absorban efikecon kaj sangokoaguladon en la ĉeesto de NFRCS37,38,39.La 3D strukturoj de sangotraktitaj kaj netraktitaj Cp NFRCS-provaĵoj estis rekonstruitaj uzante mikro-CT (V|tome|x S240, Fenikso, Germanio).Uzante VG STUDIO-MAX softvarversion 2.2, pluraj Rentgenfotaj bildoj estis prenitaj de malsamaj anguloj (ideale 360° priraportado) por evoluigi 3D bildojn por NFRCS.La kolektitaj projekciaj datumoj estis rekonstruitaj en 3D volumetrajn bildojn uzante la respondan simplan 3D ScanIP Academic-softvaron.
Krome, por kompreni la distribuadon de la embolo, 20 µl da premiksita citrata sango kaj 20 µl da 0.2 M CaCl2 estis aldonitaj al la NFRCS por komenci sangokoaguliĝon.La pretaj specimenoj estas lasitaj por malmoliĝi.La NFRK-surfaco estis traktita kun 0.5% glutaraldehido kaj sekigita en varmaera forno je 30-40 °C dum 30 min.La sangokoagulaĵo formita sur la NFRCS estis skanita, rekonstruita, kaj 3D bildo de la sangokoagulaĵo estis bildigita.
Antibakteriaj provoj estis faritaj sur Cp NFRCS (plej bone kompare kun Ch NFRCS) uzante la antaŭe priskribitan metodon kun malgrandaj modifoj.La kontraŭbakteria agado de Cp NFRCS kaj Cp HFFC estis determinita uzante tri malsamajn testajn mikroorganismojn [S.aureus (gram-pozitivaj bakterioj), E.coli (gram-negativaj bakterioj) kaj blanka Candida (C.albicans)] kreskantaj sur agaro en Petri-pladoj en inkubatoro.Unuforme inokulas 50 ml de la diluita bakteria kultursuspendo je koncentriĝo de 105-106 CFU ml-1 sur la agarmedio.Verŝu la medion en Petri-pladon kaj lasu ĝin solidigi.Putoj estis faritaj sur la surfaco de la agarplato por plenigi per HFFC (3 putoj por HFFC kaj 1 por negativa kontrolo).Aldonu 200 µl HFFC al 3 putoj kaj 200 µl pH 7.4 PBS al la 4-a puto.Sur la alia flanko de la petri-plado, metu 12 mm Cp NFRCS-diskon sur la solidigitan agaron kaj malsekigu per PBS (pH 7,4).Ciprofloxacino, ampicilino kaj fluconazole-tablojdoj estas konsiderataj referencnormoj por Staphylococcus aureus, Escherichia coli kaj Candida albicans.Mezuru la zonon de inhibicio permane kaj prenu ciferecan bildon de la zono de inhibicio.
Post institucia etika aprobo, la studo estis farita ĉe la Kasturba Medicina Kolegio de Edukado kaj Esplorado en Manipal, Karnatako, en suda Hindio.La en vitro TEG-eksperimenta protokolo estis reviziita kaj aprobita de la Institucia Etika Komitato de Kasturba Medical College, Manipal, Karnatako (IEC: 674/2020).Subjektoj estis rekrutitaj de volontulaj sangodonantoj (aĝaj 18 ĝis 55) de la hospitala sangobanko.Krome, informita konsentoformularo estis akirita de la volontuloj por la kolekto de sangospecimenoj.Denaska TEG (N-TEG) ​​estis uzata por studi la efikon de la formulo Cp HFFC sur tuta sango premisita kun natria citrato.N-TEG estas vaste rekonita por sia rolo en punkto-de-prizorga reanimado, kiu kreas problemojn por klinikistoj pro la potencialo por klinike signifa prokrasto en rezultoj (rutinaj koagulaj testoj).N-TEG-analizo estis farita uzante tutan sangon.Informita konsento kaj detala medicina historio estis akirita de ĉiuj partoprenantoj.La studo ne inkludis partoprenantojn kun hemostataj aŭ trombotaj komplikaĵoj kiel gravedeco/postnaska aŭ hepata malsano.Subjektoj prenantaj medikamentojn kiuj influas la koagulan kaskadon ankaŭ estis ekskluditaj de la studo.Bazaj laboratoriotestoj (hemoglobino, protrombina tempo, aktivigita tromboplastino kaj trombocitulo) estis faritaj ĉe ĉiuj partoprenantoj laŭ normaj proceduroj.N-TEG determinas sangokoagulviskoelastikecon, komencan embolstrukturon, partiklan interagadon, embolfortigon, kaj embollizon.La N-TEG-analizo disponigas grafikajn kaj nombrajn datenojn pri la kolektivaj efikoj de pluraj ĉelaj elementoj kaj plasmo.N-TEG-analizo estis farita sur du malsamaj volumoj de Cp HFFC (10 µl kaj 50 µl).Kiel rezulto, 1 ml da tuta sango kun citra acido estis aldonita al 10 μl da Cp HFFC.Aldonu 1 ml (Cp HFFC + citratita sango), 340 µl miksitan sangon al 20 µl 0,2 M CaCl2 enhavanta TEG-pladon.Poste, TEG-pladoj estis ŝarĝitaj en TEG® 5000, Usono por mezuri R, K, alfa-angulon, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% de sangospecimenoj en ĉeesto de Cp HFFC41.
La studprotokolo en vivo estis reviziita kaj aprobita de la Institucia Besta Etika Komitato (IAEC), Kasturba Lernejo de Medicino, Manipal Instituto de Supera Eduko, Manipal (IAEC/KMC/69/2020).Ĉiuj bestaj eksperimentoj estis faritaj laŭ la rekomendoj de la Komitato por Kontrolo kaj Superrigardo de Besta Eksperimentado (CPCSEA).Ĉiuj en vivo NFRCS-studoj (2 × 2 cm2) estis faritaj sur inaj Wistar-ratoj (pezantaj 200 ĝis 250 g).Ĉiuj bestoj estis alklimatigitaj je temperaturo de 24-26 °C, la bestoj havis liberan aliron al norma manĝaĵo kaj akvo laŭvole.Ĉiuj bestoj estis hazarde dividitaj en malsamajn grupojn, ĉiu grupo konsistis el tri bestoj.Ĉiuj studoj estis faritaj laŭ Bestaj Studoj: Raporto de In Vivo Experiments 43 .Antaŭ la studo, la bestoj estis anestezitaj per intraperitonea (ip) administrado de miksaĵo de 20-50 mg da ketamina (po 1 kg da korpa pezo) kaj 2-10 mg da xilazino (po 1 kg da korpa pezo).Post la studo, la sanga volumo estis kalkulita per taksado de la diferenco inter la komenca kaj fina pezo de la specimenoj, la averaĝa valoro akirita de la tri testoj estis prenita kiel la sanganta volumo de la specimeno.
La modelo de amputado de ratvosto estis efektivigita por kompreni la potencialon de NFRCS moduli sangadon en traŭmato, batalo aŭ trafika akcidento (vundomodelo).Tranĉu 50% de la vosto per skalpelklingo kaj metu en aeron dum 15 s por certigi normalan sangadon.Krome, testaj specimenoj estis metitaj sur la voston de rato aplikante premon (Ct, Cs, Ch NFRCS kaj Cp NFRCS).Sangado kaj PCT estis raportitaj por testaj specimenoj (n = 3)17,45.
La efikeco de NFRCS-premkontrolo en batalo estis esplorita sur modelo de la supraĵa femura arterio.La femura arterio estas elmontrita, trapikita per 24G trokaro, kaj sangita ene de 15 sekundoj.Post kiam nekontrolita sangado estas observita, la testa specimeno estas metita ĉe la trapikejo kun premo aplikita.Tuj post aplikado de la prova specimeno, la koagula tempo estis registrita kaj hemostatika efikeco estis observita dum la sekvaj 5 minutoj.La sama procedo estis ripetita kun Cs kaj Ct46.
Dowling et al.47 proponis hepatan vundan modelon por taksi la hemostatikan potencialon de hemostataj materialoj en la kunteksto de intraoperacia sangado.BCT estis registrita por Ct-provaĵoj (negativa kontrolo), Cs-kadro (pozitiva kontrolo), Ch NFRCS-provaĵoj, kaj Cp NFRCS-provaĵoj.La suprahepata kava veno de la rato estis elmontrita farante mezan laparotomion.Post tio, la distala parto de la maldekstra lobo estis tranĉita per tondilo.Faru incizon en la hepato per skalpelklingo kaj lasu ĝin sangi dum kelkaj sekundoj.Precize pesitaj Ch NFRCS kaj Cp NFRCS testspecimenoj estis metitaj sur la damaĝita surfaco sen ajna pozitiva premo kaj BCT estis registrita.La kontrolgrupo (Ct) tiam aplikis premon sekvitan de Cs 30 s47 sen rompi la vundon.
En vivaj vundresanigaj analizoj estis faritaj uzante eltranĉan vundmodelon por taksi la vundkuracajn trajtojn de la evoluintaj polimer-bazitaj NFRCSoj.Modeloj de detranĉaj vundoj estis elektitaj kaj faritaj laŭ antaŭe publikigitaj metodoj kun malgrandaj modifoj19,32,48.Ĉiuj bestoj estis anestezitaj kiel antaŭe priskribite.Uzu biopsian stampilon (12 mm) por fari cirklan profundan incizon en la haŭto de la dorso.Pretaj vundejoj estis vestitaj per Cs (pozitiva kontrolo), Ct (rekonante, ke kotonaj kusenetoj malhelpas resanigon), Ch NFRCS kaj Cp NFRCS (eksperimenta grupo) kaj negativa kontrolo sen ia traktado.En ĉiu tago de la studo, la areo de la vundo estis mezurita en ĉiuj ratoj.Uzu ciferecan fotilon por preni foton de la vundareo kaj surmeti novan pansaĵon.La procento de vundfermo estis mezurita per la sekva formulo:
Surbaze de la procento de vundfermo en la 12-a tago de la studo, la rathaŭto de la plej bona grupo estis eltranĉita ((Cp NFRCS) kaj la kontrolgrupo) kaj studita per H&E-makulado kaj la trikroma makulo de Masson. Surbaze de la procento de vundfermo en la 12-a tago de la studo, la rathaŭto de la plej bona grupo estis eltranĉita ((Cp NFRCS) kaj la kontrolgrupo) kaj studita per H&E-makulado kaj la trikroma makulo de Masson.Surbaze de la procento de vundofermo en la 12-a tago de la studo, la haŭto de la ratoj de la plej bona grupo ((Cp NFRCS) kaj la kontrolgrupo) estis eltranĉita kaj ekzamenita per makulado kun hematoxilin-eozino kaj la trikromo de Masson.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠百分比切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠百分比切除最佳组三色染色研究。根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠百分比切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皌大鼠皌大鼠皌大迉迉进最佳组眳组）Ratoj en la plej bona grupo ((Cp NFRCS) kaj kontrolgrupoj) estis eltranĉitaj por hematoksilin-eozina makulado kaj la trikroma makulo de Masson surbaze de procenta vundfermo en la tago 12 de la studo.La efektivigita makula procedo estis farita laŭ antaŭe priskribitaj metodoj49,50.Mallonge, post fiksado en 10% formalino, la specimenoj estis senhidratigitaj uzante serion de gradigitaj alkoholoj.Uzu mikrotomon por akiri maldikajn sekciojn (5 µm dikaj) de la eltranĉita histo.Maldikaj seriaj sekcioj de kontroloj kaj Cp NFRCS estis traktitaj kun hematoksilino kaj eozino por studi histopatologiajn ŝanĝojn.La trikroma makulo de Masson kutimis detekti la formadon de kolagenfibriloj.La rezultoj akiritaj estis blinde studitaj de patologoj.
La stabileco de Cp NFRCS-specimenoj estis studita ĉe ĉambra temperaturo (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) dum 12 monatoj51.Cp NFRCS (surfaca malkoloro kaj mikroba kresko) estis vide inspektita kaj testita pri fald-eluziĝo-rezisto kaj BCT laŭ la supraj metodoj skizitaj en la sekcio Materialoj kaj Metodoj.
La skaleblo kaj reproduktebleco de Cp NFRCS estis ekzamenitaj preparante Cp NFRCS kun grandeco de 15 × 15 cm2.Krome, 30 mg-specimenoj (n = 5) estis forigitaj de diversaj Cp NFRCS-frakcioj kaj la BCT de la studitaj specimenoj estis taksita kiel priskribite pli frue en la sekcio de Metodoj.
Ni provis evoluigi diversajn formojn kaj strukturojn uzante Cp NFRCS-kunmetaĵojn por diversaj biomedicinaj aplikoj.Tiaj formoj aŭ konfiguracioj inkludas konusajn swabojn por nazsangoj, dentajn procedurojn, kaj cilindrajn swabojn por vagina sangado.
Ĉiuj datenoj estas esprimitaj kiel meznombro ± norma devio kaj estis analizitaj per ANOVA uzante Prism 5.03 (GraphPad, San-Diego, CA, Usono) sekvita de la multoblaj kompar-testo de Bonferroni (*p<0.05).
Ĉiuj proceduroj faritaj en homaj studoj estis laŭ la normoj de la Instituto kaj la Nacia Esplorkonsilio, same kiel la Deklaracio de Helsinko 1964 kaj ĝiaj postaj amendoj, aŭ similaj etikaj normoj.Ĉiuj partoprenantoj estis informitaj pri la trajtoj de la studo kaj ĝia libervola naturo.Partoprenantaj datumoj restas konfidencaj post kolektitaj.La en vitro TEG-eksperimenta protokolo estis reviziita kaj aprobita de la Institucia Etika Komitato de Kasturba Medical College, Manipal, Karnatako (IEC: 674/2020).Volontuloj subskribis informitan konsenton por kolekti sangospecimenojn.
Ĉiuj proceduroj faritaj en bestaj studoj estis faritaj laŭ la Kastuba Fakultato de Medicino, Manipal Instituto de Supera Eduko, Manipal (IAEC/KMC/69/2020).Ĉiuj bestaj eksperimentoj desegnitaj estis faritaj laŭ la gvidlinioj de la Komitato por Kontrolo kaj Superrigardo de Besta Eksperimentado (CPCSEA).Ĉiuj aŭtoroj sekvas la gvidliniojn de ARRIVE.
La FTIR-spektroj de ĉiuj NFRCS estis analizitaj kaj komparitaj kun la kitosana spektro montrita en Figuro 2A.Karakterizaj spektraj pintoj de kitosano (registritaj) je 3437 cm-1 (OH kaj NH etendiĝanta, interkovro), 2945 kaj 2897 cm-1 (CH-streĉado), 1660 cm-1 (NH2-trostreĉiĝo), 1589 cm-1 (N-H-fleksado), 1157 cm-c-10 (pontstreĉado O-cm--10) yl), 993 cm-1 (streĉado CO, Bo-OH) 52,53,54.Suplementa Tabelo S1 montras la FTIR NFRCS-sorbadajn spektrajn valorojn por kitosano (raportisto), pura kitosano, Cm, Ch, kaj Cp.La FTIR-spektroj de ĉiuj NFRCS (Cm, Ch kaj Cp) montris la samajn karakterizajn absorbajn bendojn kiel pura kitosano sen iuj signifaj ŝanĝoj (Fig. 2A).La FTIR-rezultoj konfirmis la foreston de kemiaj aŭ fizikaj interagoj inter la polimeroj uzitaj por evoluigi la NFRCS, indikante ke la polimeroj uzitaj estas inertaj.
In vitro karakterizado de Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS kaj Cs.(A) reprezentas la kombinitajn FTIR-spektrojn de la kunmetaĵoj de kitosano kaj Cm NFRCS, Ch NFRCS kaj Cp NFRCS sub kunpremado.(B) a) Tuta sanga konsumado de NFRCS Cm, Ch, Cp kaj Cg (n = 3);La Ct-provaĵoj montris pli altan TRINKON ĉar la kotonbando havas pli altan absorban efikecon;b) Sango post sangosorbado Ilustraĵo de la sorbita specimeno.Grafika reprezentado de la BCT de testa specimeno C (Cp NFRCS havis la plej bonan BCT (15 s, n = 3)). Datumoj en C, D, E kaj G estis montritaj kiel meznombro ± SD, kaj la eraraj stangoj reprezentas SD, ***p < 0.0001. Datumoj en C, D, E kaj G estis montritaj kiel meznombro ± SD, kaj la eraraj stangoj reprezentas SD, ***p < 0.0001. Данные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей прешностей прешноставлены онение, ***p <0,0001. Datumoj en C, D, E kaj G estas prezentitaj kiel meznombro ± norma devio, kaj eraraj stangoj reprezentas norman devion, ***p<0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001。 Данные в C, D, E и G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрештносде погрештносде погрештносто е отклонение, ***p <0,0001. Datumoj en C, D, E kaj G estas montritaj kiel meznombro ± norma devio, eraraj stangoj reprezentas norman devion, ***p<0.0001.