Dankon pro vizito de Nature.com.La retumila versio, kiun vi uzas, havas limigitan subtenon por CSS.Por la plej bona sperto, ni rekomendas, ke vi uzu ĝisdatigitan retumilon (aŭ malŝaltu kongruecreĝimon en Internet Explorer).Dume, por certigi daŭran subtenon, ni montros la retejon sen stiloj kaj JavaScript.
Poraj silicoksidaj partikloj estis preparitaj per sol-ĝela metodo kun kelkaj modifoj por akiri makroporajn partiklojn. Ĉi tiuj partikloj estis derivitaj per reigebla aldono fragmentiĝoĉentranslokigo (RAFT) polimerigo kun N-fenilmaleimida-metilvinilisocianato (PMI) kaj stireno por prepari N-fenilmaleimidan interkaladon de polistireno neoksidebla ŝtalo (P180-N-sago) stacia kolumno. mm id) estis pakitaj per slurry-pakaĵo.Taksita PMP-kolumna apartigo de peptida miksaĵo konsistanta el kvin peptidoj (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leŭcin-enkefalino) kromatografia agado de la homa sekrecia agado) kaj la optimuma digesto de la homa digesto kaj la digesto de HA. Oretical-plata kalkulo de la peptida miksaĵo estas tiel alta kiel 280,000 teleroj/m². Komparante la disiga agado de la evoluinta kolumno kun la komerca Ascentis Express RP-Amide-kolumno, oni observis, ke la disiga agado de la PMP-kolumno estis pli alta ol la komerca kolumno laŭ disiga efikeco kaj rezolucio.
En la lastaj jaroj, la biofarmacia industrio fariĝis ekspansiiĝanta tutmonda merkato kun granda kresko de merkatparto. Kun la eksploda kresko de la biofarmacia industrio1,2,3, la analizo de peptidoj kaj proteinoj estas tre dezirata. Krom la cela peptido, pluraj malpuraĵoj estas generitaj dum peptida sintezo, tiel postulante kromatografian purigadon de la korpa purigo de peptidoj kaj la deziratan purigon de peptidoj de la korpa analizo kaj purigado de peptidoj kaj la dezirata fluida analizo de peptidoj. estas ekstreme malfacila tasko pro la granda nombro da potenciale detekteblaj specioj en ununura specimeno. Kvankam mas-spektrometrio estas efika ilo por peptida kaj proteina sinsekvo, se tiaj specimenoj estas injektitaj en la mas-spektrometron en unu paŝo, la apartigo ne estos ideala. Ĉi tiu problemo povas esti mildigita per efektivigo de likva kromatografio (LC) reduktas la masan analizon antaŭ ol la analizo de la maso-analizo reduktas la tempon de MS-analizo. 5,6.Krome, dum disiĝo de likva fazo, analitoj povas esti fokusitaj en mallarĝaj regionoj, tiel koncentrante ĉi tiujn analitojn kaj plibonigante MS-detektan sentivecon.Likva kromatografio (LC) signife progresis dum la pasinta jardeko kaj fariĝis populara tekniko en proteomia analizo7,8,9,10.
Inversa-faza likva kromatografio (RP-LC) estas vaste uzata por la purigo kaj apartigo de peptidaj miksaĵoj uzante okdecil-modifitan silicoksidon (ODS) kiel la senmova fazo11,12,13.Tamen, RP-senmovaj fazoj ne provizas kontentigan disigon de peptidoj kaj proteinoj pro sia kompleksa strukturo kaj amfifilaj naturaj peptidoj estas specialaj dezajnitaj por analizi peptidojn. es kaj proteinoj kun polusaj kaj nepolusaj duonoj por interagi kun kaj reteni ĉi tiujn analizojn16.Miks-reĝima kromatografio, kiu disponigas multmodalajn interagojn, povas esti alternativo al RP-LC por la apartigo de peptidoj, proteinoj, kaj aliaj kompleksaj miksaĵoj. Pluraj miksreĝimaj senmovaj fazoj estis preparitaj, kaj kolumnoj estis pakitaj kun ĉi tiuj peptidaj disigoj, peptidoj kaj kolumnoj, pakitaj kaj uzataj por ĉi tiuj peptidoj, peptidoj kaj disiĝo. 21.Miks-reĝimaj senmovaj fazoj (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polusa interkalado/RPLC) taŭgas por disiĝo de peptidoj kaj proteinoj pro la ĉeesto de kaj polusaj kaj nepolusaj grupoj22,23,24,25,26,27,28 .Simile, polusaj interkaloj/RPLC montras polusajn interkalajn fazojn kaj unikajn disigon de polusaj potencoj kaj unikaj polaraj disigiloj kun kovalentaj fazoj por polusaj kaj nepolusaj grupoj. r analitoj, ĉar apartigo dependas de la interago inter analito kaj senmova fazo.Plurmodaj interagoj 29, 30, 31, 32.Lastatempe, Zhang et al.30 preparis dodecil-finigitan poliaminan senmovan fazon kaj sukcese apartigis hidrokarbonojn, antidepresiaĵojn, flavonoidojn, nukleozidojn, estrogenojn kaj plurajn aliajn analitojn. La polusa interkalilo havas kaj polusajn kaj nepolusajn grupojn, do ĝi povas esti uzata por apartigi peptidojn kaj proteinojn kiuj havas ambaŭ hidrofobajn kaj hidrofilajn kolumnojn enmetitajn (ekz. 8 kolumnoj) estas komerce haveblaj sub la komerca nomo Ascentis Express RP-Amide-kolumnoj, sed tiuj kolumnoj estas uzitaj por la analizo de amino 33 nur.
En la nuna studo, polus-enigita senmova fazo (N-fenilmaleimida-enigita polistireno) estis preparita kaj taksita por apartigo de peptidoj kaj tripsinaj digestoj de HSA. La senmova fazo estis preparita uzante la sekvan strategion. Poraj silikaj partikloj estis preparitaj laŭ la proceduro donita en nia antaŭa publikigado kun iuj modifoj al la preparprotokolo de acido de polietil-acido (TPE), polietil-acido, TMOS-acido, GPE-a publikigado. estis ĝustigita por prepari silicoksidajn partiklojn kun granda porograndeco. Due, nova peranto, fenilmaleimida-metilvinilizocianato, estis sintezita kaj uzata por derivi silicoksidajn partiklojn por prepari polusan enigitan senmovan fazon.La rezulta senmova fazo estis pakita en neoksidebla ŝtalo kolono (100 × 1,8 mm) uzante la optimumigitan kolonan pakadon por certigi. d ene de la kolumno.Taksi pakita kolona apartigo de peptidaj miksaĵoj konsistantaj el kvin peptidoj;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) kaj Tripsin-digesto de homa serumalbumino (HAS).La peptidmiksaĵo kaj tripsina digesto de HSA estis observitaj apartigi kun bona disiga kolumno de la disig-rezolucio de la HSA. -Amida kolumno.Ambaŭ peptidoj kaj proteinoj estis observitaj bone solvitaj kaj efikaj sur la PMP-kolumno, kiu estis pli efika ol la Ascentis Express RP-Amide-kolumno.
PEG (polietilenglikolo), ureo, acetacido, trimetoksi-ortosilikato (TMOS), trimetilklorosilano (TMCS), tripsino, homa serumalbumino (HSA), amonia klorido, ureo, heksano-metildisilazano (HMDS), metacriloil-klorido (MC), 4-TEMP-Bendroyl-Bendroyl (MC-4-POLC-Benzoyl) Grado Acetonitrilo (ACN), Metanolo, 2-Propanolo, kaj Acetono Aĉetita de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Usono).
Miksaĵo de ureo (8 g), polietilenglikolo (8 g) kaj 8 ml de aceta acido 0,01 N estis kirlita dum 10 minutoj, kaj poste 24 ml de TMOS estis aldonitaj al tio en glacimalvarmaj kondiĉoj. ed je 70°C dum 12 horoj.La sekigita mola maso estis glata muelita en forno kaj kalcinita je 550°C dum 12 horoj.Tri aroj estis preparitaj kaj karakterizitaj por ekzameni reprodukteblecon en partiklograndeco, porograndeco kaj surfacareo.
Per surfaca modifo de silicoksidaj partikloj kun antaŭsintezita peranto fenilmaleimida-metilvinilisocianato (PCMP) sekvita de radiala polimerigo kun stireno, estis preparita polusa grup-enhava kunmetaĵo.Senmova fazo por agregaĵoj kaj polistirenaj ĉenoj. La preparprocezo estas priskribita sube.
N-fenilmaleimida (200 mg) kaj metil-vinilizocianato (100 mg) estis solvita en seka tolueno, kaj 0,1 mL da 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) estis aldonitaj al la reakcia flakono por prepari fenilmaleimido-metilvinilizocianato. en forno je 40°C dum 3 horoj.
Sekigitaj silicoksidaj eroj (2 g) estis disĵetitaj en seka tolueno (100 mL), movitaj kaj sonikataj en 500 mL rondfunda flakono dum 10 minutoj. PMCP (10 mg) estis solvita en tolueno kaj aldonis gute al la reakcia flakono per guta funelo. 0 °C dum 3 horoj. Poste, PMCP-ligitaj silicoksidaj partikloj (100 g) estis solvita en tolueno (200 ml) kaj 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) estis aldonita en ĉeesto de 100 µL da dibutilstana dilaurato kiel katalizilo. La miksaĵo estis movita je 50 °C je 50 °C horoj kaj filtrita dum 5 °C 30 horojn.
Stireno (1 mL), benzoila peroksido BPO (0,5 mL), kaj TEMPO-PMCP-alfiksitaj silikaj partikloj (1,5 g) estis disigitaj en tolueno kaj purigitaj per nitrogeno.La polimerigo de stireno estis efektivigita je 100 °C dum 12 horoj. La rezulta produkto estis lavita per metanolo kaj entute montrita skemo 60 °C.
La specimenoj estis sengasigitaj je 393 K dum 1 horo por akiri restan premon malpli ol 10-3 Torr. La kvanto de N2 adsorbita je relativa premo de P/P0 = 0,99 estis uzata por determini la totalan poran volumon. La morfologio de nudaj kaj ligand-ligitaj silicpartikloj estis ekzamenita per skanado de elektronaj mikroskopoj kaj specimenoj de Japanio (H, Tokio kaj Japanujo). ligitaj silikaj partikloj) estis metitaj sur aluminian kolonon uzante gluan karbonbendon.Oro estis tegita sur la specimenoj per Q150T ŝpruckovrilo, kaj 5 nm Au-tavolo estis deponita sur la specimenoj.Tio plibonigas procecefikecon uzante malaltajn tensiojn kaj provizas fajnan grenon, malvarma ŝprucado. n (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 partiklogranda analizilo estis uzita por akiri la partiklograndecan distribuon. Nudaj silicoksidaj partikloj kaj ligand-ligitaj silicoksidaj partikloj (5 mg ĉiu) estis disigitaj en 5 ml da izopropanolo, sonikataj dum 10 minutoj, vortexitaj dum 5 minutoj, kaj metitaj sur la optikan analizon de 5 min. temperaturo de 30 ĝis 800 °C.
Vitro-tegitaj neoksideblaj ŝtalaj mallarĝ-boraj kolonoj de dimensioj (100 × 1.8 mm id) estis pakitaj uzante la suspensiaĵan pakmetodon, aplikante la saman proceduron uzitan en Ref.31.Neoksidebla ŝtala kolumno (vitra tegita, 100 × 1,8 mm id) kun elirejo enhavanta 1 µm friton estis konektita al suspensiaĵo pakilo (Alltech Deerfield, IL, Usono). la propulsa solvento.Plenigu la kolumnon sinsekve aplikante premojn de 100 MP dum 10 minutoj, 80 MP dum 15 minutoj kaj 60 MP dum 30 minutoj. Dum pakado, mekanika vibro estis aplikita per du GC-kolumnskuiloj (Alltech, Deerfield, IL, Usono) por certigi uniforman pakadon de la kolumno. de la suspensiaĵo-pakaĵunuo kaj konektu alian konvenaĵon al la enirejo kaj al la LC-sistemo por kontroli ĝian agadon.
LC-pumpilo (10AD Shimadzu, Japanio), injektilo (Valco (Usono) C14 W.05) kun 50nL injektobuklo, membrandegasigilo (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapilara fenestro estis konstruita Speciala µLC-aparato-detektilo (UV-2075) kaj vitro-tegita mikrokolumnoj por minimumigi la ekstran mallarĝan efekton de kolumnoj. pakado, kapilaroj (50 μm id 365 kaj reduktantaj uniokapilaroj (50 μm) estis instalitaj ĉe la 1/16″ ellasejo de la reduktanta unio. Datenkolektado kaj kromatografia pretigo estis farita per Multichro 2000 programaro. Monitorado ĉe 254 nm Analizoj estis testitaj pri UV-sorbado.
Albumino el homa serumo, liofiligita pulvoro, ≥ 96% (agaroza ĝela elektroforezo) 3 mg miksita kun tripsino (1,5 mg), 4,0 M ureo (1 mL), kaj 0,2 M amonia bikarbonato (1 mL). La solvo estis movita dum 10 minutoj kaj konservita en akvobaĉo dum 63 horoj, 10 °C dum 6 3 7°C. % TFA. Filtru la solvon kaj konservu sub 4 °C.
Apartigo de peptidaj miksaĵoj kaj HSA-tripsindigestoj estis taksitaj aparte sur PMP-kolumnoj. Kontrolu la apartigon de la peptida miksaĵo kaj tripsina-digesto de HSA per la PMP-kolumno kaj komparu la rezultojn al la Ascentis Express RP-Amide-kolumno.La teoria platnombro estas kalkulita jene:
SEM-bildoj de nudaj silicoksidpartikloj kaj Perant-ligitaj silicpartikloj estas montritaj en FIG.2 .SEM-bildoj de nudaj silikaj partikloj (A, B) montras, ke, kontraste al niaj antaŭaj studoj, ĉi tiuj partikloj estas sferaj, en kiuj la partikloj estas longformaj aŭ havas neregulan simetrion.La surfaco de la ligand-ligitaj silikaj partikloj (C, D) estas pli glata ol tiu de la nudaj silikaj partikloj, kio povas esti pro la tegaĵo de kalinoj sur la surfaco de la silikaj partikloj.
Skanantaj elektronmikroskopaj bildoj de nudaj silicoksidpartikloj (A, B) kaj perligand-ligitaj silicoksidpartikloj (C, D).
La distribuoj de partiklograndeco de nudaj silikaj partikloj kaj ligand-ligitaj silikaj partikloj estas montritaj en Figuro 3 (A).Volum-bazitaj partiklograndaj distribuokurboj montris, ke la grandeco de la silikaj partikloj pliiĝis post kemia modifo (Fig. 3A). , Kompare al nia antaŭa studo kun ad(0.5) valoro de 3.05 μm (polistiren-ligitaj silicpartikloj)34.Ĉi tiu aro havis pli mallarĝan partikla grandeco distribuo kompare kun nia antaŭa studo pro la diversaj proporcioj de PEG, ureo, TMOS, kaj acetacido en la reakcia miksaĵo. antaŭe studita. Ĉi tio signifas, ke surfacfunkciigo de silikaj partikloj kun stireno nur deponis polistirenan tavolon (0,97 µm) sur la silicsurfaco, dum en la PMP-fazo la tavoldikeco estis 1,38 µm.
Partiklograndecdistribuo (A) kaj porgrandecdistribuo (B) de nudaj silicoksidpartikloj kaj Perant-ligitaj silicpartikloj.
La porograndeco, pora volumo kaj surfacareo de la silicpartikloj de la nuna studo estas donitaj en Tabelo 1 (B). La PSD-profiloj de nudaj silicpartikloj kaj ligand-ligitaj silicpartikloj estas montritaj en Figuro 3 (B). La rezultoj estas kompareblaj al nia antaŭa studo. La poraj grandecoj de la nudaj kaj ligand-ligitaj silicpartikloj estas 310 kaj 2941 por kemiaj grandecoj indikas respektive la kemia modifo per 2941. kiel montrite en Tabelo 1(B), kaj la ŝanĝo de la kurbo estas montrita en Fig. 3(B).Simile, la pora volumo de la silikaj partikloj malpliiĝis de 0,67 ĝis 0,58 cm3/g post kemia modifo.La specifa surfacareo de la nuntempe studitaj silikaj partikloj estas 116 m2/g, kiu estas komparebla al nia antaŭa areo montrita en Tabelo (124 m2/g). /g) de la silikaj partikloj ankaŭ malpliiĝis de 116 m2/g ĝis 105 m2/g post kemia modifo.
La rezultoj de elementa analizo de la senmova fazo estas montritaj en Tabelo 2.La karbonŝarĝo de la nuna senmova fazo estas 6,35%, kio estas pli malalta ol la karbona ŝarĝo de nia antaŭa studo (polistirenaj ligitaj silicpartikloj, respektive 7,93% 35 kaj 10,21%, respektive) 42. La karbona ŝarĝo de la nuna senmova fazo estas iom pli malalta ol la nuna senmova preparo, krome de la nuna senmova fazo, krome iom da ligo. NDoj kiel fenilmaleimida-metilvinilisocianato (PCMP) kaj 4-hidroksi-TEMPO estis uzataj.La nitrogena pezo-procento de la nuna senmova fazo estas 2,21%, kompare kun 0,1735 kaj 0,85% laŭ pezo de nitrogeno en antaŭaj studoj, respektive.Ĉi tio signifas, ke la pezo% de nitrogena ŝarĝo de karbono estas pli alta pro la nuna stacio de karbono ŝarĝo pro la nuna stacio de karbono. 4) kaj (5) estis 2.7% kaj 2.9%, respektive, dum la karbonŝarĝo de la fina produkto (6) estis 6.35%, kiel montrite en Tabelo 2.La pezoperdo estis kontrolita kun PMP-senmova fazo, kaj la TGA-kurbo estas montrita en Figuro 4.La TGA-kurbo montras pezon de 8.6%, kiu ankaŭ enhavas la ligojn en bona konsento, sed ankaŭ la karbono ne entenas (nur) en bona interkonsento kun C35 %. , O, kaj H.
La fenilmaleimida-metilvinilisocianato-ligando estis elektita por surfaca modifo de silikaj partikloj ĉar ĝi havas polusajn fenilmaleimidajn grupojn kaj vinilizocianatgrupojn. Vinilizocianato-grupoj povas plu reagi kun stireno per vivanta radikala polimerigo.La dua kialo estas enmeti grupon kiu havas moderan interagadon kun la analita stacidomo kaj nenia interagado inter la analita stacidomo kaj la analita stacidomo kaj nenia interagado kun la analita stacidomo kaj la fazo. imida parto ne havas virtualan ŝargon ĉe normala pH. La poluseco de la senmova fazo povas esti kontrolita per la optimuma kvanto de stireno kaj la reakcia tempo de libera radikala polimerigo. La lasta paŝo de la reago (liberradikala polimerigo) estas kritika kaj povas ŝanĝi la polusecon de la senmova fazo. ing de la senmova fazo kaj inverse.SPs preparitaj kun malsamaj koncentriĝoj de stireno havas malsamajn karbonŝarĝojn. Denove, ŝarĝu ĉi tiujn senmovajn fazojn en neoksideblajn kolumnojn kaj kontrolu ilian kromatografian agadon (selektiveco, rezolucio, N-valoro, ktp.). Surbaze de ĉi tiuj eksperimentoj, optimumigita formulaĵo estis elektita por prepari la PMP-senmovan fazon por certigi bonan kontrolitan analecan retenon.
Kvin peptidmiksaĵoj (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leŭcinenkefalino) ankaŭ estis taksitaj uzante PMP-kolumnon uzantan moveblan fazon;60/40 (v/v) acetonitrilo/akvo (0,1% TFA) kun flukvanto de 80 μL/min. Sub optimumaj elujkondiĉoj, la teoria platnombro (N) per kolumno (100 × 1,8 mm id) estas 20,000 ± 100 (200,000 ± 100 (200,000 μL/min). gramoj estas montritaj en Figuro 5A.Rapida analizo sur PMP-kolumno ĉe alta flua rapido (700 μL/min), kvin peptidoj estis eluitaj ene de unu minuto, N-valoroj estis tre bonaj, 13,500 ± 330 per kolumno (100 × 1,8 mm id), Korespondas al 135,000 μL/min. .8 mm id) estis pakitaj per tri malsamaj lotoj de PMP-senmova fazo por kontroli reprodukteblecon. La analizkoncentriĝo por ĉiu kolumno estis registrita uzante la optimumajn eluiĝajn kondiĉojn kaj la nombron da teoriaj platoj N kaj retentempon por apartigi la saman testan miksaĵon sur ĉiu kolumno. La reproduktebleco-datenoj por la PMP-kolumnoj estas montritaj en Tabelo 4. La reproduktebleco de la PMP-kolumnoj estas montritaj en Tabelo 3-a valoro de la PMP-kolumno, kiel tre malalta korelaciaĵo de la PMP-kolumno.
Apartigo de peptida miksaĵo sur PMP-kolumno (B) kaj Ascentis Express RP-Amide-kolumno (A);movebla fazo 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP-kolumno-dimensioj (100 × 1.8 mm id);analiza La elucia ordo de la kunmetaĵoj: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) kaj 5 (leŭcina) acida encefalino)).
PMP-kolumno (100 × 1.8 mm id) estis taksita por apartigo de triptikaj digestoj de homa seruma albumino en alt-efikeca likva kromatografio.La kromatogramo en Figuro 6 montras, ke la specimeno estas bone apartigita kaj la rezolucio estas tre bona.HSA-digestoj estis analizitaj uzante flukvanton de 100 µL/min, movebla fazo en la akvo 701/30% montrita. kromatogramo (Figuro 6), la HSA-digesto estis dividita en 17 pintojn respondajn al 17 peptidoj. La disiga efikeco de ĉiu pinto en la HSA-digesto estis kalkulita kaj la valoroj estas donitaj en Tabelo 5.
Triptika digesto de HSA (100 × 1.8 mm id) estis apartigita sur PMP-kolumno;flukvanto (100 µL/min), movebla fazo 60/40 acetonitrilo/akvo kun 0.1% TFA.
kie L estas la kolumlongo, η estas la viskozeco de la movebla fazo, ΔP estas la kolumna malantaŭa premo, kaj u estas la lineara rapideco de la movebla fazo.La permeablo de la PMP-kolumno estis 2.5 × 10-14 m2, la flukvanto estis 25 μL/min, kaj 60/40 v/v ACN/vv ACN/akvo estis uzita la de 0 × 8 mm. nia antaŭa studo Ref.34.La permeablo de la kolumno plenplena de supraĵe poraj partikloj estas: 1,7 × 10-15 por 1,3 μm partikloj, 3,1 × 10-15 por 1,7 μm partikloj, 5,2 × 10-15 kaj 2,5 × 10-14 μm por la partikloj, 6 μm2 por la partikloj, 3,1 × 10-15 por μm3. permeablo de la PMP-fazo estas simila al tiu de 5 μm kern-ŝelaj partikloj.
kie Wx estas la pezo de la kolumno plenplena de kloroformo, Wy estas la pezo de la kolumno plenplena de metanolo, kaj ρ estas la denseco de la solvilo.Densoj de metanolo (ρ = 0.7866) kaj kloroformo (ρ = 1.484).La totala poreco de SILICAJ PARTICLOJ-C18 kolumnoj × 1 8 kolumnoj. 31, kiujn ni antaŭe studis, estis 0,63 kaj 0,55, respektive.Ĉi tio signifas, ke la ĉeesto de ureaj ligandoj reduktas la permeablon de la senmova fazo.Aliflanke, la totala poreco de la PMP-kolumno (100 × 1,8 mm id) estas 0,60.La permeablo de PMP-kolumnoj estas pli malalta, ĉar tiu de kolumnoj de PMP estas pli malaltaj en C1-kolumnoj-tipaj silikaj 8 partikuloj. fazoj la C18-Perantoj estas alkroĉitaj al la silicoksidaj partikloj kiel liniaj ĉenoj, dum en polistiren-specaj senmovaj fazoj, la relative dika polimera tavolo estas formita ĉirkaŭ ĝi. En tipa eksperimento, la kolumna poreco estas kalkulita kiel:
Figuro 7A,B montras la PMP-kolumnon (100 × 1.8 mm id) kaj Ascentis Express RP-Amide-kolumnon (100 × 1.8 mm id) uzante la samajn eliciajn kondiĉojn (te, 60/40 ACN/H2O kaj 0.1% TFA).) de la van Deemter-intrigo.Elektitaj peptidaj miksaĵoj (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) estis preparitaj en 20 µL/ La minimuma flukvanto por ambaŭ kolumnoj estas 800 µL/min. La minimuma valoro de HETP/min. s Express RP-Amide-kolumno estis 2.6 µm kaj 3.9 µm, respektive. La HETP-valoroj indikas, ke la disiga efikeco de la PMP-kolumno (100 × 1.8 mm id) estas multe pli bona ol la komerce havebla Ascentis Express RP-Amide-kolumno (100 × 1.8 mm id). studo.La pli alta disiga efikeco de la PMP-kolumno (100 × 1.8 mm id) kompare kun la Ascentis Express RP-Amide-kolumno baziĝas sur plibonigoj en partikla formo, grandeco kaj kompleksaj kolumnaj pakaj proceduroj uzataj en la nuna laboro34.
(A) van Deemter-intrigo (HETP kontraŭ movebla faza lineara rapideco) akirita uzante PMP-kolumnon (100 × 1.8 mm id) en 60/40 ACN/H2O kun 0.1% TFA. (B) van Deemter-intrigo (HETP kontraŭ movebla faza lineara rapideco) akirita uzante Ascentis Express RP-Amide kolumno × Amide 0.400/H20/H20. kun 0,1% TFA.
Polusa enigita polistirena senmova fazo estis preparita kaj taksita por apartigo de sintezaj peptidaj miksaĵoj kaj tripsinaj digestoj de homa serumalbumino (HAS) en alta rendimento likva kromatografio. La kromatografia rendimento de PMP-kolumnoj por peptidaj miksaĵoj estas bonega en apartiga efikeco kaj rezolucio. , Kontrolita sintezo de la senmova fazo, kaj kompleksa kolumna pakado.Aldone al alta disiga efikeco, malalta kolumna malantaŭa premo ĉe altaj flukvantoj estas alia avantaĝo de ĉi tiu senmova fazo.PMP-kolumnoj elmontras bonan reprodukteblecon kaj povas esti uzataj por la analizo de peptidaj miksaĵoj kaj tripsina digestado de diversaj proteinoj.Ni intencas uzi ĉi tiun kolumnon por la disiĝo de naturaj produktoj, likvaj kolumnoj en bioaktivaj kolumnoj en medicinaj kolumnoj, bioaktivaj kolumnoj. ankaŭ estos taksita por la apartigo de proteinoj kaj unuklonaj antikorpoj.
Field, JK, Euerby, S-RO, Lau, J. , Thøgersen, H. & Petersson, P. Esplorado pri Peptide Separation Systems per Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Kromatografio.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Plibonigitaj aktivaj peptidoj desegnitaj por la traktado de infektaj malsanoj.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintezaj terapiaj peptidoj: scienco kaj la merkato.drug discovery.15 (1-2) hodiaŭ, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Kromatografio.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Altnivela likva kromatografio-masa spektrometrio ebligas la aliĝon de larĝe celitaj metabolomikoj kaj proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ La rolo de UHPLC en drogevoluo.J.Sep Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamentaj kaj praktikaj aspektoj de ultraalta prema likva kromatografio por rapidaj apartigoj.J.Sep Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Apliko de ultra-alta rendimento likva kromatografio en drogevoluo.J.Kromatografio.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic makroporaj hidroĝeloj preparitaj el oleo-en-akvaj altaj interna fazaj emulsioj por efika purigo de enterovirusoj.Kemia.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA La rolo de likva kromatografio en proteomiko.J.Kromatografio.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Emerging trends in reverse-phase likva kromatografio-apartigoj de terapiaj peptidoj kaj proteinoj: teorio kaj aplikoj.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Dudimensia disiĝo de peptidoj uzante RP-RP-HPLC-sistemon uzante malsamajn pH-valorojn en la unua kaj dua disiĝo-dimensioj.J.Sep Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Oni esploris la amastransigajn trajtojn kaj kinetan agadon de alt-efikecaj kromatografiaj kolonoj pakitaj kun C18 sub-2 μm plene kaj supraĵe poraj partikloj.J.Sep Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Lastatempaj tendencoj kaj analizaj defioj en la izolado, identigo kaj validumado de plantaj bioaktivaj peptidoj.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-x (02018-x).
Mueller, JB et al.La proteomia pejzaĝo de la regno de vivo.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Downstream prilaborado de terapiaj peptidoj per prepara likva kromatografio.Molekulo (Basel, Svislando) 26 (15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Miks-reĝima kromatografio kaj ĝia apliko al biopolimeroj.J.Kromatografio.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligandoj por miksreĝima proteinkromatografio: principo, karakterizado kaj dezajno.J.Bioteknologio.144(1), 3-11 (2009).