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La corrosión microbiana (MIC) es un problema grave en muchas industrias, ya que puede causar enormes pérdidas económicas. El acero inoxidable super dúplex 2707 (2707 HDSS) se ha utilizado en ambientes marinos debido a su excelente resistencia química. Sin embargo, no se ha demostrado experimentalmente su resistencia a la MIC. inosa en medio 2216E, hubo un cambio positivo en el potencial de corrosión y un aumento en la densidad de la corriente de corrosión. El análisis de espectroscopía de fotoelectrones de rayos X (XPS) mostró una disminución en el contenido de Cr en la superficie de la muestra debajo de la biopelícula. inmune a la MIC de las biopelículas de P. aeruginosa.
Los aceros inoxidables dúplex (DSS) se utilizan ampliamente en diversas industrias por su combinación ideal de excelentes propiedades mecánicas y resistencia a la corrosión1,2. Sin embargo, todavía se producen picaduras localizadas que afectan la integridad de este acero3,4. El DSS no es resistente a la corrosión microbiana (MIC)5,6. Los aceros inoxidables (SDSS) tienen algunas limitaciones en términos de resistencia a la corrosión. Por lo tanto, en algunas aplicaciones se requieren aceros inoxidables súper dúplex (HDSS) con mayor resistencia a la corrosión. Esto condujo al desarrollo de HDSS altamente aleado.
La resistencia a la corrosión de DSS depende de la relación de las fases alfa y gamma y de las regiones empobrecidas de Cr, Mo y W 8, 9, 10 adyacentes a la segunda fase. HDSS contiene un alto contenido de Cr, Mo y N11, por lo que tiene una excelente resistencia a la corrosión y un alto valor (45-50) Número equivalente de resistencia a las picaduras (PREN), determinado por el % en peso de Cr + 3,3 (% en peso de Mo + 0,5 % en peso de W) + 16 % en peso de N12 .Su excelente resistencia a la corrosión se basa en una composición equilibrada que contiene aproximadamente 50 % de ferrita (α) y 50 % de austenita (γ), HDSS tiene mejores propiedades mecánicas y mayor resistencia que el DSS13 convencional.Propiedades de corrosión del cloruro. La resistencia a la corrosión mejorada amplía el uso de HDSS en entornos de cloruro más corrosivos, como los entornos marinos.
Los MIC son un problema importante en muchas industrias, como las de petróleo, gas y servicios públicos de agua. 14. MIC representa el 20 % de todos los daños por corrosión. ) es el factor limitante de la velocidad de la CIM inducida por microorganismos electrogénicos. Zhang et al.18 demostraron que los mediadores de electrones aceleran la transferencia de electrones entre las células de Desulfovibrio sessificans y el acero inoxidable 304, lo que lleva a un ataque MIC más severo. Enning et al.19 y Venzlaff et al.20 mostró que las biopelículas de bacterias reductoras de sulfato corrosivas (SRB) pueden absorber directamente los electrones de los sustratos metálicos, lo que da como resultado una corrosión severa por picaduras.
Se sabe que DSS es susceptible a MIC en entornos que contienen SRB, bacterias reductoras de hierro (IRB), etc. 21. Estas bacterias causan picaduras localizadas en las superficies de DSS bajo biopelículas22,23. A diferencia de DSS, la MIC de HDSS24 es poco conocida.
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria gramnegativa móvil en forma de bastoncillo que se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza25. Pseudomonas aeruginosa también es un grupo microbiano importante en el ambiente marino, lo que provoca que el MIC se acere. Pseudomonas está estrechamente involucrada en los procesos de corrosión y es reconocida como colonizadora pionera durante la formación de biopelículas. Mahat et al.28 y Yuan et al.29 demostraron que Pseudomonas aeruginosa tiene una tendencia a aumentar la tasa de corrosión del acero dulce y las aleaciones en ambientes acuosos.
El objetivo principal de este trabajo fue investigar las propiedades MIC de 2707 HDSS causadas por la bacteria aeróbica marina Pseudomonas aeruginosa utilizando métodos electroquímicos, técnicas analíticas de superficie y análisis de productos de corrosión. Se realizaron estudios electroquímicos que incluyen potencial de circuito abierto (OCP), resistencia de polarización lineal (LPR), espectroscopia de impedancia electroquímica (EIS) y polarización dinámica potencial para estudiar el comportamiento MIC de 2707 HDSS. Análisis de espectrómetro de dispersión de energía (EDS) se realizó para encontrar elementos químicos en la superficie corroída. Además, se utilizó el análisis de espectroscopía de fotoelectrones de rayos X (XPS) para determinar la estabilidad de la pasivación de la película de óxido bajo la influencia de un entorno marino que contenía Pseudomonas aeruginosa. La profundidad del pozo se midió bajo un microscopio de barrido láser confocal (CLSM).
La Tabla 1 enumera la composición química de 2707 HDSS. La Tabla 2 muestra que 2707 HDSS tiene excelentes propiedades mecánicas con un límite elástico de 650 MPa. La Figura 1 muestra la microestructura óptica de la solución 2707 HDSS tratada térmicamente. Se pueden ver bandas alargadas de fases de austenita y ferrita sin fases secundarias en la microestructura que contiene aproximadamente un 50 % de austenita y un 50 % de fases de ferrita.
La Figura 2a muestra datos de potencial de circuito abierto (Eocp) versus tiempo de exposición para HDSS 2707 en medio abiótico 2216E y caldo de P. aeruginosa durante 14 días a 37 °C. Muestra que el cambio más grande y significativo en Eocp ocurre dentro de las primeras 24 horas. vs. SCE) y -236 mV (vs. SCE) para la muestra abiótica y P, respectivamente).Cupones de Pseudomonas aeruginosa, respectivamente. Después de 24 horas, el valor Eocp de 2707 HDSS para P. aeruginosa fue relativamente estable a -228 mV (frente a SCE), mientras que el valor correspondiente para muestras no biológicas fue de aproximadamente -442 mV (frente a SCE). La Eocp en presencia de P. aeruginosa fue bastante baja.
Prueba electroquímica de 2707 especímenes de HDSS en medio abiótico y caldo de Pseudomonas aeruginosa a 37 °C:
(a) Eocp en función del tiempo de exposición, (b) curvas de polarización en el día 14, (c) Rp en función del tiempo de exposición y (d) icorr en función del tiempo de exposición.
La Tabla 3 enumera los valores de los parámetros de corrosión electroquímica de 2707 muestras de HDSS expuestas a medio abiótico y medio inoculado con Pseudomonas aeruginosa durante 14 días. Las tangentes de las curvas anódica y catódica se extrapolaron para llegar a las intersecciones que arrojaron densidad de corriente de corrosión (icorr), potencial de corrosión (Ecorr) y pendientes de Tafel (βα y βc) según métodos estándar30,31.
Como se muestra en la Figura 2b, el desplazamiento hacia arriba de la curva de P. aeruginosa resultó en un aumento de Ecorr en comparación con la curva abiótica. El valor de icorr, que es proporcional a la velocidad de corrosión, aumentó a 0,328 μA cm-2 en la muestra de Pseudomonas aeruginosa, cuatro veces mayor que la muestra no biológica (0,087 μA cm-2).
LPR es un método electroquímico no destructivo clásico para el análisis rápido de la corrosión. También se utilizó para estudiar MIC32. La Figura 2c muestra la resistencia a la polarización (Rp) en función del tiempo de exposición. Un valor Rp más alto significa menos corrosión. 2c también muestra que el valor de Rp disminuyó rápidamente después de un día y luego permaneció relativamente sin cambios durante los siguientes 13 días. El valor de Rp de la muestra de Pseudomonas aeruginosa es de aproximadamente 40 kΩ cm2, que es mucho más bajo que el valor de 450 kΩ cm2 de la muestra no biológica.
El valor de icorr es proporcional a la tasa de corrosión uniforme. Su valor se puede calcular a partir de la siguiente ecuación de Stern-Geary,
Siguiendo a Zou et al.33, se supuso que un valor típico de la pendiente B de Tafel en este trabajo era de 26 mV/dec. La figura 2d muestra que la icorr de la muestra no biológica 2707 permaneció relativamente estable, mientras que la muestra de P. aeruginosa fluctuó mucho después de las primeras 24 horas. Los valores de icorr de las muestras de P. aeruginosa fueron un orden de magnitud más altos que los controles no biológicos. Esta tendencia es consistente con los resultados de resistencia a la polarización.
EIS es otra técnica no destructiva utilizada para caracterizar reacciones electroquímicas en interfaces corroídas. Espectros de impedancia y valores de capacitancia calculados de muestras expuestas a medios abióticos y solución de Pseudomonas aeruginosa, resistencia Rb de película pasiva/biopelícula formada en la superficie de la muestra, resistencia de transferencia de carga Rct, capacitancia eléctrica de doble capa (EDL) Cdl y parámetros de elemento de fase constante (CPE) QCPE. Estos parámetros se analizaron más a fondo ajustando los datos usando un circuito equivalente (EEC) modelo
La figura 3 muestra diagramas típicos de Nyquist (a y b) y diagramas de Bode (a' y b') de 2707 muestras de HDSS en medio abiótico y caldo de P. aeruginosa para diferentes tiempos de incubación. El diámetro del anillo de Nyquist disminuye en presencia de Pseudomonas aeruginosa. El diagrama de Bode (Fig. 3b') muestra un aumento en la magnitud de la impedancia total. .La figura 4 muestra las estructuras físicas basadas en monocapa (a) y bicapa (b) y sus correspondientes EEC. El CPE se introduce en el modelo EEC. Su admitancia e impedancia se expresan de la siguiente manera:
Dos modelos físicos y circuitos equivalentes correspondientes para ajustar el espectro de impedancia de la muestra 2707 HDSS:
donde Y0 es la magnitud del CPE, j es el número imaginario o (-1)1/2, ω es la frecuencia angular y n es el índice de potencia del CPE menor que la unidad35. La inversa de la resistencia de transferencia de carga (es decir, 1/Rct) corresponde a la velocidad de corrosión. que los 489 kΩ cm2 de las muestras no biológicas (Cuadro 4).
Las imágenes CLSM y SEM en la Figura 5 muestran claramente que la cobertura de biopelícula en la superficie de la muestra HDSS 2707 después de 7 días es densa. Sin embargo, después de 14 días, la cobertura de biopelícula fue escasa y aparecieron algunas células muertas. 0,9 μm después de 14 días. El grosor medio de la biopelícula también confirmó esta tendencia. Disminuyó de 22,2 ± 0,7 μm después de 7 días a 17,8 ± 1,0 μm después de 14 días.
(a) imagen CLSM 3-D después de 7 días, (b) imagen CLSM 3-D después de 14 días, (c) imagen SEM después de 7 días y (d) imagen SEM después de 14 días.
EDS reveló elementos químicos en biopelículas y productos de corrosión en muestras expuestas a P. aeruginosa durante 14 días. La Figura 6 muestra que el contenido de C, N, O y P en biopelículas y productos de corrosión es mucho más alto que en metales desnudos, porque estos elementos están asociados con biopelículas y sus metabolitos. Los microbios solo necesitan pequeñas cantidades de cromo y hierro. corrosión.
Después de 14 días, se observaron picaduras con y sin P. aeruginosa en medio 2216E. Antes de la incubación, la superficie de la muestra era lisa y sin defectos (Fig. 7a). Después de la incubación y la eliminación de la biopelícula y los productos de corrosión, las picaduras más profundas en la superficie de las muestras se examinaron bajo CLSM, como se muestra en la Figura 7b y c. m). La profundidad máxima del pozo causada por Pseudomonas aeruginosa fue de 0,52 μm después de 7 días y de 0,69 μm después de 14 días, con base en la profundidad máxima promedio del pozo de 3 muestras (se seleccionaron 10 valores máximos de profundidad del pozo para cada muestra) alcanzó 0,42 ± 0,12 μm y 0,52 ± 0,15 μm, respectivamente (Tabla 5). Estos valores de profundidad del pozo son pequeños pero importantes.
(a) Antes de la exposición, (b) 14 días en medio abiótico y (c) 14 días en caldo de Pseudomonas aeruginosa.
La Figura 8 muestra los espectros XPS de diferentes superficies de muestra, y las composiciones químicas analizadas para cada superficie se resumen en la Tabla 6. En la Tabla 6, los porcentajes atómicos de Fe y Cr en presencia de P. aeruginosa (muestras A y B) fueron mucho más bajos que los de las muestras de control no biológicas (muestras C y D). 574,4, 576,6, 578,3 y 586,8 eV, que se pueden atribuir a Cr, Cr2O3, CrO3 y Cr(OH)3, respectivamente (Fig. 9a y b). d, respectivamente. La diferencia más llamativa entre las muestras abióticas y de P. aeruginosa fue la presencia de Cr6+ y una fracción relativa mayor de Cr(OH)3 (BE de 586,8 eV) debajo de la biopelícula.
Los amplios espectros XPS de la superficie de la muestra HDSS 2707 en los dos medios son de 7 y 14 días, respectivamente.
(a) 7 días de exposición a P. aeruginosa, (b) 14 días de exposición a P. aeruginosa, (c) 7 días en medio abiótico y (d) 14 días en medio abiótico.
HDSS exhibe altos niveles de resistencia a la corrosión en la mayoría de los entornos. Kim et al.2 informaron que UNS S32707 HDSS se definió como un DSS altamente aleado con un PREN de más de 45. El valor PREN del espécimen 2707 HDSS en este trabajo fue 49. Esto se debe a su alto contenido de cromo y altos niveles de molibdeno y Ni, que son beneficiosos en ambientes ácidos y con alto contenido de cloruro. Además, una composición bien balanceada y una microestructura libre de defectos son útiles para la estabilidad estructural y la resistencia a la corrosión. Sin embargo, a pesar de su excelente resistencia química, los datos experimentales de este trabajo sugieren que 2707 HDSS no es completamente inmune a la MIC de las biopelículas de P. aeruginosa.
Los resultados electroquímicos mostraron que la velocidad de corrosión de 2707 HDSS en caldo de P. aeruginosa aumentó significativamente después de 14 días en comparación con el medio no biológico. En la Figura 2a, se observó una reducción de Eocp tanto en el medio abiótico como en el caldo de P. aeruginosa durante las primeras 24 horas. Eocp biológico. Hay motivos para creer que esta diferencia se debe a la formación de biopelículas de P. aeruginosa. En la Fig. 2d, en presencia de P. aeruginosa, el valor de icorr de 2707 HDSS alcanzó 0,627 μA cm-2, que fue un orden de magnitud mayor que el del control abiótico (0,063 μA cm-2), que fue consistente con el valor Rct medido por EIS. Durante los primeros días, la impedancia los valores en el caldo de P. aeruginosa aumentaron debido a la unión de células de P. aeruginosa y la formación de biopelículas. Sin embargo, cuando la biopelícula cubre completamente la superficie de la muestra, la impedancia disminuye. La capa protectora es atacada primero debido a la formación de biopelículas y metabolitos de biopelícula. Por lo tanto, la resistencia a la corrosión disminuyó con el tiempo y la unión de P. aeruginosa causó corrosión localizada. fue mucho más alto que el valor correspondiente de las muestras expuestas al caldo de P. aeruginosa. Además, para las muestras abióticas, el valor Rct de 2707 HDSS alcanzó 489 kΩ cm2 el día 14, que fue 15 veces el valor Rct (32 kΩ cm2) en presencia de P. aeruginosa. Por lo tanto, 2707 HDSS tiene una excelente resistencia a la corrosión en un ambiente estéril, pero no es resistente al ataque de MIC por P. aer biopelículas de uginosa.
Estos resultados también se pueden observar en las curvas de polarización de la Fig. 2b. La ramificación anódica se atribuyó a la formación de biopelículas de Pseudomonas aeruginosa y a reacciones de oxidación de metales. Al mismo tiempo, la reacción catódica es la reducción de oxígeno. encontró que la densidad de corriente de corrosión de la aleación 70/30 Cu-Ni aumentó bajo el desafío de la biopelícula de P. aeruginosa. Esto puede deberse a la biocatálisis de la reducción de oxígeno por parte de las biopelículas de Pseudomonas aeruginosa. Esta observación también puede explicar la MIC de 2707 HDSS en este trabajo. Las biopelículas aeróbicas también pueden tener menos oxígeno debajo de ellas.
Dickinson et al.38 sugirió que las tasas de reacciones químicas y electroquímicas pueden verse directamente afectadas por la actividad metabólica de las bacterias sésiles en la superficie de la muestra y la naturaleza de los productos de corrosión. Como se muestra en la Figura 5 y la Tabla 5, tanto el número de células como el espesor de la biopelícula disminuyeron después de 14 días. Esto puede explicarse razonablemente que después de 14 días, la mayoría de las células sésiles en la superficie de 2707 HDSS murieron debido al agotamiento de nutrientes en el medio 2216E o la liberación de metal tóxico iones de la matriz 2707 HDSS. Esta es una limitación de los experimentos por lotes.
En este trabajo, la biopelícula de P. aeruginosa promovió el agotamiento local de Cr y Fe debajo de la biopelícula en la superficie de HDSS 2707 (Fig. 6). En la Tabla 6, la reducción de Fe y Cr en la muestra D en comparación con la muestra C, indica que el Fe y el Cr disueltos causados ​​por la biopelícula de P. aeruginosa persistió más allá de los primeros 7 días. El medio 2216E se usa para simular ambientes marinos. encontrado en agua de mar natural. La presencia de 17700 ppm de Cl- fue la razón principal de la reducción de Cr en las muestras abióticas de 7 y 14 días analizadas por XPS. En comparación con las muestras de P. aeruginosa, la disolución de Cr en las muestras abióticas fue mucho menor debido a la fuerte resistencia al Cl− de 2707 HDSS en ambientes abióticos. La Figura 9 muestra la presencia de Cr6+ en la película de pasivación. Biopelículas de P. aeruginosa, según lo sugerido por Chen y Clayton.
Debido al crecimiento bacteriano, los valores de pH del medio antes y después del cultivo fueron 7,4 y 8,2, respectivamente. Por lo tanto, debajo de la biopelícula de P. aeruginosa, es poco probable que la corrosión por ácidos orgánicos sea un factor que contribuya a este trabajo debido al pH relativamente alto en el medio a granel. El pH del medio de control no biológico no cambió significativamente (de un 7,4 inicial a un 7,5 final) durante el período de prueba de 14 días. debido a la actividad metabólica de P. aeruginosa y se encontró que tenía el mismo efecto sobre el pH en ausencia de tiras reactivas.
Como se muestra en la Figura 7, la profundidad máxima del hoyo causada por la biopelícula de P. aeruginosa fue de 0,69 μm, mucho más grande que la del medio abiótico (0,02 μm). Esto es consistente con los datos electroquímicos descritos anteriormente. resistencia en comparación con 2205 DSS. Esto no debería sorprender, ya que 2707 HDSS tiene un mayor contenido de cromo, lo que proporciona una pasivación más duradera, debido a la estructura de fase equilibrada sin precipitados secundarios dañinos, lo que dificulta la despasivación de P. aeruginosa y los puntos de inicio eclipsados.
En conclusión, se encontraron picaduras de MIC en la superficie de 2707 HDSS en caldo de P. aeruginosa en comparación con picaduras insignificantes en medios abióticos. Este trabajo muestra que 2707 HDSS tiene mejor resistencia a MIC que 2205 DSS, pero no es completamente inmune a MIC debido a la biopelícula de P. aeruginosa. Estos hallazgos ayudan en la selección de aceros inoxidables adecuados y la vida útil estimada para el entorno marino.
El cupón para 2707 HDSS lo proporciona la Escuela de Metalurgia de la Universidad del Noreste (NEU) en Shenyang, China. La composición elemental de 2707 HDSS se muestra en la Tabla 1, que fue analizada por el Departamento de Análisis y Pruebas de Materiales de NEU. Todas las muestras se trataron con una solución a 1180 °C durante 1 hora. con papel de carburo de silicio y pulido adicional con una suspensión de polvo de Al2O3 de 0,05 μm. Los lados y el fondo están protegidos con pintura inerte. Después del secado, los especímenes se enjuagaron con agua desionizada estéril y se esterilizaron con etanol al 75 % (v/v) durante 0,5 h. Luego se secaron al aire bajo luz ultravioleta (UV) durante 0,5 horas antes de su uso.
La cepa MCCC 1A00099 de Pseudomonas aeruginosa marina se adquirió en el Centro de recolección de cultivos marinos de Xiamen (MCCC), China. Se cultivó Pseudomonas aeruginosa aeróbicamente a 37 °C en matraces de 250 ml y celdas de vidrio electroquímicas de 500 ml utilizando medio líquido Marine 2216E (Qingdao Hope Biotechnology Co., Ltd., Qingdao, China). Medio (g/L): 19,45 NaCl, 5,98 MgCl2, 3,24 Na2SO4, 1,8 CaCl2, 0,55 KCl, 0,16 Na2CO3, 0,08 KBr, 0,034 SrCl2, 0,08 SrBr2, 0,022 H3BO3, 0,004 NaSiO3, 0016 NH3, 0016 NH3, 0016 NaH2PO4, 5,0 peptona, 1,0 extracto de levadura y 0,1 citrato férrico. Esterilice en autoclave a 121 °C durante 20 minutos antes de la inoculación. Cuente las células sésiles y planctónicas usando un hemocitómetro bajo un microscopio óptico con un aumento de 400X. La concentración celular inicial de Pseudomonas aeruginosa planctónica inmediatamente después de la inoculación fue de aproximadamente 106 células/ml.
Las pruebas electroquímicas se realizaron en una celda clásica de vaso de tres electrodos con un volumen medio de 500 ml. Se conectaron una lámina de platino y un electrodo calomel saturado (SCE) al reactor a través de capilares de Luggin rellenados con puentes de sal, sirviendo como contador y electrodos de referencia, para que los electrodos de trabajo, sean ungóxicos de trabajo, se unieran a cada sencillo de que se compara con un cifra de Cobre de goma a cada Spoxy, y se cubrió a los electrodos, y se cubrió a los electrodos. Área de superficie ideada para el electrodo de trabajo. Mediciones electroquímicas de la que se colocaron en el medio 2216E y se mantuvieron a una temperatura de incubación constante (37 ° C) en un baño de agua. de -5 y 5 mV con EOCP y una frecuencia de muestreo de 1 Hz.EIS se realizó con una onda sinusoidal en el rango de frecuencia 0.01 a 10,000 Hz usando un voltaje aplicado de 5 mV a EOCP de estado estacionario. Antes del barrido potencial, los electrodos fueron en modo de circuito abierto hasta que se alcanzó un valor de potencial de corosión libre de un valor de corosión estable. 66 MV/S. La prueba de cada uno se repitió 3 veces con y sin P. aeruginosa.
Las muestras para el análisis metalográfico se pulieron mecánicamente con papel SiC húmedo de grano 2000 y luego se pulieron más con una suspensión de polvo de Al2O3 de 0,05 μm para la observación óptica. El análisis metalográfico se realizó con un microscopio óptico. Las muestras se grabaron con una solución de hidróxido de potasio al 10 % en peso 43.
Después de la incubación, las muestras se lavaron 3 veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) (pH 7,4 ± 0,2) y luego se fijaron con glutaraldehído al 2,5 % (v/v) durante 10 horas para fijar las biopelículas. Posteriormente se deshidrataron con una serie graduada (50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % y 100 % v/v) de etanol antes del secado al aire. .Finalmente, la superficie de la muestra se pulveriza con una película de oro para proporcionar conductividad para la observación SEM. Las imágenes SEM se enfocaron en los puntos con las células más sésiles de P. aeruginosa en la superficie de cada espécimen. Realice un análisis EDS para encontrar elementos químicos. primero se limpió de acuerdo con el Estándar Nacional Chino (CNS) GB/T4334.4-2000 para eliminar los productos de corrosión y la biopelícula en la superficie de la pieza de prueba.
El análisis de espectroscopía de fotoelectrones de rayos X (XPS, sistema de análisis de superficie ESCALAB250, Thermo VG, EE. UU.) se realizó utilizando una fuente de rayos X monocromática (línea Kα de aluminio a 1500 eV de energía y 150 W de potencia) en un amplio rango de energía de enlace 0 en condiciones estándar -1350 eV. Los espectros de alta resolución se registraron utilizando una energía de paso de 50 eV y un tamaño de paso de 0,2 eV.
Las muestras incubadas se retiraron y se enjuagaron suavemente con PBS (pH 7,4 ± 0,2) durante 15 s45. Para observar la viabilidad bacteriana de las biopelículas en las muestras, las biopelículas se tiñeron con el kit de viabilidad bacteriana LIVE/DEAD BacLight (Invitrogen, Eugene, OR, EE. UU.). El kit tiene dos tintes fluorescentes, un tinte fluorescente verde SYTO-9 y un tinte rojo fluorescente de yoduro de propidio (PI). Bajo CLSM, los puntos con verde y rojo fluorescentes representan células vivas y muertas, respectivamente. Para la tinción, se incubó una mezcla de 1 ml que contenía 3 μl de SYTO-9 y 3 μl de solución de PI durante 20 minutos a temperatura ambiente (23 oC) en la oscuridad. Luego, las muestras teñidas se observaron en dos longitudes de onda (488 nm para células vivas y 559 nm para células muertas) utilizando una máquina Nikon CLSM (C2 Plus, Nikon, Japón). Se midió el espesor del biofilm. en el modo de escaneo 3-D.
Cómo citar este artículo: Li, H. et al. Corrosión microbiana del acero inoxidable súper dúplex 2707 por biopelícula marina de Pseudomonas aeruginosa.ciencia.Rep.6, 20190;doi: 10.1038/srep20190 (2016).
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