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Por Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Departamento de Medicina Clínica y Experimental, Universidad de Catania, Catania, 95123, Italia; 2 Centro de Oncología y Hematología Experimental, AOU Policlínico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia;3 Oncología Médica, AOU Policlínico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia;4 Genética Médica, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia;5 Medicine Genetics, ASP, Siracusa, 96100, Italia;6 Departamento de Ciencias Biomédicas y Biotecnológicas, Universidad de Catania, Genética Médica, Catania, Italia, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italia Comunicaciones: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, correo electrónico [email protected];[email protected] Propósito: Mutaciones de línea germinal en BRCA1 y BRCA2 y cáncer de mama (BC), ovario (OC) establecido y otros asociados con un riesgo de cáncer de por vida. La prueba del gen BRCA es clave para evaluar el riesgo individual, así como para encontrar métodos de prevención en portadores saludables y tratamientos personalizados en pacientes con cáncer. El objetivo de nuestro estudio fue investigar la incidencia y distribución de las alteraciones de la línea germinal patógenas BRCA en una cohorte de pacientes con CM del este de Sicilia y evaluar su asociación con rasgos específicos de CM mediante secuenciación de nueva generación. La presencia de alteraciones se correlacionó con el grado tumoral y el índice de proliferación. predominante en pacientes con CM triple negativo, mientras que las mutaciones BRCA2 son más comunes en pacientes con CM luminal. En comparación con los no portadores, los sujetos con variantes BRCA1 tenían un grado tumoral y un índice proliferativo significativamente más altos. Conclusiones: Nuestros hallazgos brindan una descripción general del estado mutacional de BRCA en pacientes con CM del este de Sicilia y confirman el papel del análisis NGS en la identificación de pacientes con CM hereditario.
El cáncer de mama (CM) es la neoplasia maligna más común en todo el mundo y el cáncer más letal en las mujeres.1 Las características biológicas que determinan el pronóstico y el comportamiento clínico del CM se han estudiado ampliamente y se han dilucidado parcialmente con el tiempo. De hecho, actualmente se utilizan varios marcadores sustitutos para clasificar el CM en diferentes subtipos moleculares. Son el receptor de estrógeno (ER) y/o progesterona (PgR), la amplificación del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2), el índice de proliferación Ki-67 y el grado tumoral (G).2 La combinación de estas variables identificaron las siguientes categorías de BC: 1) Los tumores luminales, que muestran expresión de ER y/o PgR, representaron el 75 % de los BC. Estos tumores se dividieron en Luminal A, cuando Ki-67 estaba por debajo del 20 % y HER2 negativo, y Luminal B, cuando Ki-67 era igual o superior al 20 % y en presencia de amplificación de HER2, independientemente del índice de proliferación;2) tumores HER2+ que son ER y PgR negativos pero muestran amplificación de HER2. Este grupo representa el 10 % de todos los tumores de mama;3) El cáncer de mama triple negativo (TNBC), que no muestra expresión de ER ni PgR ni amplificación de HER2, representa aproximadamente el 15 % de los cánceres de mama.2-4
Entre estos subtipos de CM, el grado tumoral y el índice de proliferación representan biomarcadores transversales que se asocian directa e independientemente con la agresividad y el pronóstico del tumor.5,6
Además de las características biológicas antes mencionadas, el papel de las alteraciones genéticas hereditarias que conducen al desarrollo de CM se ha vuelto cada vez más importante en los últimos años.7 Aproximadamente 1 de cada 10 tumores de mama se heredan debido a alteraciones de la línea germinal en genes específicos.8 Dos grandes estudios epidemiológicos en los que participaron más de 180 000 mujeres identificaron recientemente un grupo de ocho genes (es decir, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C y RAD51D) el principal responsable del CM hereditario. Entre estos genes, BRCA1 y BRCA2 (en lo sucesivo denominado BRCA1/2) mostraron la correlación más fuerte con el desarrollo de tumores de mama.9-12 De hecho, las mutaciones de la línea germinal BRCA1/2 aumentan significativamente el riesgo de CM a lo largo de la vida, así como de otras neoplasias malignas, incluidas las de ovario, próstata, páncreas, colorrectal y melanoma. Entre los 13 y los 80 años, la incidencia acumulada de CM es del 72 % en mujeres con un BRCA 1 variante patogénica (PV) y 69% en mujeres con BRCA2 PV.14
En particular, una publicación reciente sugiere que el riesgo de CM depende del tipo de PV. De hecho, en comparación con las variantes patógenas truncadas, las variantes sin sentido evidentes, especialmente en el gen BRCA1, se asocian con un riesgo reducido de CM, especialmente en mujeres mayores.15
La presencia de BRCA1 o BRCA2 PV se asoció con diferentes características biológicas y clinicopatológicas.16,17 Los CM asociados con BRCA1 tienden a ser clínicamente agresivos, pobremente diferenciados y altamente proliferativos. Estos tumores suelen ser triple negativos y tienen una edad de aparición temprana. en adultos mayores.16-18 En particular, las mutaciones en BRCA1 y BRCA2 aumentan la sensibilidad a tratamientos específicos, incluidas las sales de platino y fármacos dirigidos como los inhibidores de la poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARPi).19,20
En los últimos años, la implementación de la secuenciación de próxima generación (NGS) en la práctica clínica ha permitido que un número cada vez mayor de pacientes con CM se sometan a pruebas moleculares para los síndromes de susceptibilidad al cáncer, incluido BRCA1/2.21 Al mismo tiempo, las definiciones se basan en criterios precisos con respecto a los antecedentes familiares, las características demográficas y clinicopatológicas para identificar mejor a las personas que merecen la prueba de BRCA1/2.22,23 En este contexto, se está acumulando evidencia sobre la detección de BRCA1/2 en poblaciones específicas, lo que destaca las diferencias entre regiones geográficas.2 4–27 Aunque hay informes sobre la cohorte BC en el oeste de Sicilia, hay menos datos disponibles sobre la detección de BRCA1/2 en la población del este de Sicilia.28,29
Aquí describimos los resultados del cribado de línea germinal BRCA1/2 en pacientes con CM del este de Sicilia, correlacionando aún más la presencia de mutaciones BRCA1 o BRCA2 con las principales características clinicopatológicas de estos tumores.
Se llevó a cabo un estudio retrospectivo en el “Centro de Oncología y Hematología Experimental” del Hospital Policlínico Rodolico – San Marco en Catania. Desde enero de 2017 hasta marzo de 2021, un total de 455 pacientes con cáncer de mama y ovario, melanoma, páncreas o próstata fueron remitidos a nuestro laboratorio de diagnóstico molecular para la prueba genética BRCA/2. Este estudio se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki, y todos los participantes dieron su consentimiento informado por escrito antes del análisis molecular.
Las características histológicas y biológicas (ER, PgR, estado de HER2, Ki-67 y grado) del CM se evaluaron en biopsia central o muestras quirúrgicas, considerando solo los componentes tumorales agresivos. Con base en estas características, los CM se clasificaron de la siguiente manera: luminal A (ER+ y/o PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ y/o PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2 + (ER y/o PgR+, HER2+), HER2+ (ER y PgR-, HER2+) o triple negativo (ER y PgR-, HER2-).
Antes de evaluar el estado de mutación de BRCA1 y BRCA2, un equipo multidisciplinario que incluía a un oncólogo, un genetista y un psicólogo realizó una consulta de genética tumoral para cada paciente para determinar la presencia de BRCA1 y/o BRCA1.o individuos con alto riesgo de PV en el gen BRCA2. La selección de pacientes se realizó de acuerdo con las pautas de la Sociedad Italiana de Oncología Médica (AIOM) y las recomendaciones locales de Sicilia.30,31 Estos criterios incluyen: (i) antecedentes familiares de variantes patogénicas conocidas en los genes de susceptibilidad (p. ej., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) hombres con BC;(iii) aquellos con BC y OC;(iv) mujeres con BC <36 años, TNBC <60 años o BC bilateral <50 años;(v) historial médico personal de BC < 50 años y al menos un familiar de primer grado: (a) BC < 50 años;(b) OC no mucinoso y no borderline de cualquier edad;(c) BC bilateral;(d) macho BC;(e) cáncer de páncreas;(f) cáncer de próstata;(vi) dos o más antecedentes personales de BC > 50 años y antecedentes familiares de BC, OC o cáncer de páncreas para parientes en primer grado entre sí (incluidos parientes con los que ella es pariente en primer grado);(vii) Antecedentes personales de CO y al menos un familiar de primer grado: (a) BC <50 años;(b) CON;(c) BC bilateral;(d) macho BC;(vii) hembra con OC seroso de alto grado.
Se obtuvo una muestra de sangre periférica de 20 ml de cada paciente y se recolectó en tubos con EDTA (BD Biosciences). El ADN genómico se aisló de muestras de sangre total de 0,7 ml utilizando el kit de aislamiento QIAsymphony DSP DNA Midi kit (QIAGEN, Hilden, Italia) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se pasó a través de un fluorómetro Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE. UU.) Realice la cuantificación.El enriquecimiento de dianas y la preparación de bibliotecas las realiza Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, listo para cargarse en el kit Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 para la preparación automatizada de bibliotecas de acuerdo con las instrucciones del fabricante. (10 ng) a las placas con código de barras para la preparación de bibliotecas y todos los reactivos y consumibles se cargaron en el instrumento Ion Chef™. A continuación, se realizó la preparación automatizada de bibliotecas y la agrupación de bibliotecas de muestras con código de barras en el instrumento Ion Chef™. A continuación, se evaluó el número de bibliotecas preparadas mediante un fluorómetro Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE. UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. tubos) y se cargaron en el instrumento Ion Chef™. La secuenciación se realizó con un instrumento Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) con un chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). El análisis de datos se realizó con Amplicon Suite (SmartSeq srl) y el software Ion Reporter.
La nomenclatura de todas las variantes siguió las directrices actuales del Human Genome Variation Consortium, disponible en línea (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). La importancia clínica de las variantes BRCA1/2 se definió utilizando la clasificación del Consorcio Internacional ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) y consultando diferentes bases de datos como ARUP, BRCAEXCHANGE, Clin Var, IARC_LOVD y UMD. La clasificación incluye cinco categorías de riesgo distintas: benigno (categoría I), probablemente benigno (categoría II), variante de significado incierto (VUS, categoría III), probable patógeno (categoría IV) y patógeno (categoría V). VarSome también analizó el efecto de las mutaciones en la estructura y función de las proteínas, una herramienta informativa con acceso a 30 bases de datos.32
Para asignar la importancia clínica potencial a cada VUS, se utilizaron los siguientes algoritmos computacionales de predicción de proteínas: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) y Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Variantes clasificadas como clase 1 y 2 se consideraron de tipo salvaje.
La secuenciación de Sanger confirmó la presencia de cada variante patógena. En resumen, se diseñó un par de cebadores específicos para cada variante detectada utilizando las secuencias de referencia de los genes BRCA1 y BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 y NG_012772.3, NM_000059.3, respectivamente). Por lo tanto, se realizó PCR dirigida seguida de secuenciación de Sanger.
Los pacientes que arrojaron resultados negativos para el gen BRCA1/2 fueron analizados mediante amplificación de sonda dependiente de ligación multiplex (MLPA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante para evaluar la presencia de grandes reordenamientos genómicos (LGR). Brevemente, las muestras de ADN se desnaturalizan y se utilizan hasta 60 sondas específicas del gen BRCA1 y BRCA2, cada una de las cuales detecta una secuencia de ADN específica de aproximadamente 60 nucleótidos de longitud. electroforesis capilar y por el software Cofalyser.Net junto con las tablas Cofalyser específicas del lote correspondientes (www.mrcholland.com).
Las variables clinicopatológicas seleccionadas (grado histológico e índice de proliferación Ki-67%) se asociaron con la presencia de BRCA1/2 PV, calculado con el software Prism v. 8.4 utilizando la prueba exacta de Fisher asumiendo un valor de p <0,05 como significativo.
Entre enero de 2017 y marzo de 2021, 455 pacientes fueron examinados para detectar mutaciones de la línea germinal BRCA1/2. Las pruebas de mutación se realizaron en el Centro de Oncología y Hematología Experimental del Hospital Policlínico. San Marco” en total, 389 pacientes Había cáncer de mama, 37 cáncer de ovario, 16 cáncer de páncreas, 8 cáncer de próstata y 5 melanoma.La distribución de los pacientes según el tipo de cáncer y los resultados del análisis se muestra en la Figura 1.
La figura 1 muestra un diagrama de flujo que muestra una descripción general del estudio. Los pacientes con tumores de mama, melanoma, páncreas, próstata u ovario se analizaron para detectar mutaciones en los genes BRCA1 y BRCA2.
Abreviaturas: PV, variante patógena;VUS, variante de significado incierto;WT, secuencia BRCA1/2 de tipo salvaje.
Enfocamos selectivamente nuestros estudios en cohortes de cáncer de mama. Los pacientes tenían una mediana de edad de 49 años (rango 23-89) y eran predominantemente mujeres (n=376, o 97%).
De estos sujetos, 64 (17%) tenían mutaciones BRCA1/2 y todos eran mujeres. Treinta y cinco (9%) tenían PV y 29 (7,5%) VUS. 2).LGR no estuvo presente en el análisis de MLPA.
Figura 2. Análisis de mutaciones BRCA1 y BRCA2 en 389 pacientes con cáncer de mama. (A) Distribución de variantes patogénicas (PV) (rojo), variantes de significado incierto (VUS) (naranja) y WT (azul) en 389 pacientes con cáncer de mama;(B) 389 pacientes con cáncer de mama Treinta y cinco (9 %) tenían variantes patogénicas (PV) de BRCA1/2. Entre ellas, 17 (48,6 %) eran portadoras de BRCA1 PV (rojo oscuro) y 18 (51,4 %) eran portadoras de BRCA2 (rojo claro);(C) 29 (7,5 %) de 389 sujetos portaban VUS, 5 (17,2 %) genes BRCA1 (naranja oscuro) y 24 (82,8 %) genes BRCA2 (naranja claro).
Abreviaturas: PV, variante patógena;VUS, variante de significado incierto;WT, secuencia BRCA1/2 de tipo salvaje.
A continuación, investigamos la prevalencia de los subtipos moleculares de BC en pacientes con PV BRCA1/2. La distribución incluyó 2 (5,7 %) luminal A, 15 (42,9 %) luminal B, 3 (8,6 %) luminal B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ y 13 (37,1 %) pacientes con TNBC. Entre los pacientes BRCA1 positivos, 5 (29,4 %) tenían luminal B BC, 2 (1 1,8 %) tenían enfermedad HER2+ y 10 (58,8 %) tenían TNBC. Los tumores sin mutaciones en BRCA1 eran luminales A o luminales B-HER2+ (Figura 3). al A (Figura 3). No hubo tumores HER2+ en este grupo. Por lo tanto, las mutaciones de BRCA1 son prevalentes en pacientes con TNBC, mientras que las alteraciones de BRCA2 son predominantes en individuos con lumen B.
Figura 3 Prevalencia de subtipos de cáncer de mama en pacientes con variantes patogénicas en BRCA1 y BRCA2. Histogramas que muestran la distribución de PV BRCA1- (rojo oscuro) y BRCA2- (rojo claro) entre los subtipos moleculares de pacientes con cáncer de mama. Los números informados dentro de cada cuadro representan el porcentaje de pacientes con PV BRCA1 y BRCA2 para cada subtipo de cáncer de mama.
Abreviaturas: PV, variante patógena;HER2+, receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano positivo;TNBC, cáncer de mama triple negativo.
Posteriormente, evaluamos el tipo y la localización del gen de las PV BRCA1 y BRCA2. En la PV BRCA1, observamos 7 variantes de un solo nucleótido (SNV), 6 deleciones, 3 duplicaciones y 1 inserción. Solo una mutación (c.5522delG) representa un nuevo descubrimiento. La PV BRCA1 más común detectada en ambos sujetos fue c.5035_5039delCTAAT. ) en el exón 15 de BRCA1, lo que resultó en la sustitución del aminoácido leucina por tirosina en el codón 1679, y debido a un cambio de marco de traducción con un codón de parada alternativo predicho, condujo a un truncamiento prematuro de la proteína. Todos los demás cambios se detectaron en un solo caso.
Con respecto a BRCA2 PV, observamos 6 deleciones, 6 SNV y 2 duplicaciones. Ninguno de los cambios encontrados es novedoso. Tres mutaciones recurrieron en nuestra población, c.428dup y c.8487+1G>A observadas en 3 sujetos, seguidas de c.5851_5854delAGTT recuperada en dos casos. codifica una proteína no funcional truncada. La mutación c.8487+1G>A ocurre en la región intrónica del intrón 19 de BRCA2 (± 1,2) y afecta la secuencia de consenso de empalme, lo que da como resultado un empalme alterado que da como resultado una proteína anormal o ausente. 10 del gen BRCA2 y da como resultado un cambio de marco traduccional con un codón de parada alternativo predicho (p.S1951WfsTer). En particular, como se informó anteriormente, ambas alteraciones c.631G>A y c.7008-2A>T se detectaron en el mismo paciente. en el codón 211, el aminoácido isoleucina es un aminoácido con propiedades muy similares. Este cambio afecta el empalme normal del ARNm. La segunda variante se encuentra en una región intrónica y da como resultado una sustitución doble A por timina (T) antes del exón 13 del gen que codifica BRCA2. El cambio c.7008-2A>T puede generar múltiples transcripciones de diferentes longitudes. los cambios (22,2%) fueron intrónicos.
Luego mapeamos las mutaciones perjudiciales de BRCA1/2 en dominios funcionales y regiones de unión a proteínas (Fig. 4). En el gen BRCA1, el 50 % de las PV se ubicaron en la región del grupo de cáncer de mama (BCCR), mientras que el 22 % de las mutaciones se ubicaron en la región del grupo de cáncer de ovario (OCCR) (Fig. 4A). en el OCCR (Fig. 4B). A continuación, evaluamos la ubicación de PV dentro de los dominios de proteína BRCA1 y BRCA2. Para la proteína BRCA1, encontramos tres PV en los dominios loop y coiled coil, y dos mutaciones en el dominio BRCT (Fig. 4A). ) y torre (T) dominios (Figura 4B).
Figura 4 Representación esquemática de las proteínas BRCA1 y BRCA2 y localización de variantes patogénicas. Esta figura muestra la distribución de las variantes patogénicas BRCA1 (A) y BRCA2 (B) en pacientes con cáncer de mama. Las mutaciones exónicas se muestran en azul, mientras que las variantes intrónicas se muestran en naranja. La altura de la barra representa el número de casos. (B) La proteína BRCA2 contiene ocho repeticiones BRC, un dominio de unión a ADN con un dominio helicoidal (Helical), tres pliegues de unión a oligonucleótidos/oligosacáridos (OB), un dominio de torre (T) y un NLS en el lado C. la parte inferior. * Representa mutaciones que determinan los codones de parada.
Luego investigamos las características clinicopatológicas de BC que podrían correlacionarse con la presencia de BRCA1/2 PV. Los registros clínicos completos estaban disponibles para 181 pacientes BRCA1/2 negativos (no portadores) y todos los portadores (n = 35). Hubo una correlación entre la tasa de proliferación tumoral y el grado.
Calculamos la distribución de Ki-67 en base a la mediana de nuestra cohorte (25 %, rango <10-90 %). Los sujetos con Ki-67 < 25 % se definieron como "Ki-67 bajo", mientras que los individuos con valores ≥ 25 % se consideraron como "Ki-67 alto".
Figura 5 Correlación de Ki-67 con la distribución de grados en mujeres con cáncer de mama con y sin PV BRCA1 y BRCA2. (A) Diagrama de caja que muestra los valores medianos de Ki-67 en 181 pacientes con CM no portadoras frente a pacientes con PV BRCA1 (18) o BRCA2 (17). Los valores de P por debajo de 0,5 se consideraron estadísticamente significativos. (B) Histograma que representa la asignación de pacientes con cáncer con CM en grupos de grado histológico (G2 y G3) según B Estado de mutación RCA1 y BRCA2 (sujetos WT, portadores de PV BRCA1 y BRCA2).
Del mismo modo, examinamos si el grado del tumor se correlacionaba con la presencia de BRCA1/2 PV. Dado que G1 BC estaba ausente en nuestra población, dividimos a los pacientes en dos grupos (G2 o G3). De acuerdo con los resultados de Ki-67, el análisis reveló una correlación estadísticamente significativa entre el grado del tumor y la mutación BRCA1, con una mayor proporción de tumores G3 en los portadores de BRCA1 en comparación con los no portadores (p<0,005) (Figura 5B).
Los avances en la tecnología de secuenciación de ADN han permitido avances sin precedentes en las pruebas genéticas de BRCA1/2, con implicaciones cruciales para los pacientes con antecedentes familiares de cáncer. Hasta la fecha, se han identificado y clasificado aproximadamente 20 000 variantes de BRCA1/2 según la Sociedad Estadounidense de Genética Médica 35 y el sistema ENIGMA.35,36 Es bien sabido que el espectro mutacional de BRCA1/2 varía ampliamente entre regiones geográficas.37 al 37%, mostrando una amplia variabilidad dentro del país.38,39 Con una población de casi 5 millones, Sicilia es la quinta región más grande de Italia en términos de número de habitantes. Aunque existen datos sobre la distribución de BRCA1/2 en el oeste de Sicilia, no hay evidencia extensa en la parte este de la isla.
Nuestro estudio es uno de los primeros informes sobre la incidencia de BRCA1/2 PV en pacientes con CM en el este de Sicilia.28 Centramos nuestro análisis en el CM, ya que esta es, con mucho, la enfermedad más común en nuestra cohorte.
Cuando se evaluaron 389 pacientes con CM, el 9 % portaba PV BRCA1/2, distribuidos uniformemente entre BRCA1 y BRCA2. Estos resultados son consistentes con los informados previamente en la población italiana.28 Curiosamente, el 3 % (13/389) de nuestra cohorte eran hombres. , por lo que eran candidatos a análisis moleculares adicionales para descartar la presencia de mutaciones menos comunes como PALB2, RAD51C y D, entre otras. Se recuperaron variantes de significado incierto en el 7% de los sujetos en los que BRCA2 VUS era evidente. Incluso este resultado es consistente con la evidencia preexistente.28,41,42
Cuando analizamos la distribución de los subtipos moleculares de BC en mujeres mutantes BRCA1/2, confirmamos asociaciones conocidas entre TNBC y BRCA1 PV (58,8 %) y entre luminal B BC y BRCA2 PV (55,6 %).16,43 Los tumores luminal A y HER2+ en portadoras de BRCA1 y BRCA2 PV son consistentes con los datos existentes en la literatura.16,43
Luego nos enfocamos en el tipo y la ubicación del PV BRCA1/2. En nuestra cohorte, el PV BRCA1 más común fue c.5035_5039delCTAAT. Aunque Incorvaia et al.no describieron esta variante en su cohorte siciliana, otros autores la informaron como un PV BRCA1 de línea germinal.34 Se encontraron varios PV BRCA1 en nuestra cohorte, por ejemplo, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA y c.5266dupC, que se observaron en Sicilia.28 De estos, dos mutaciones fundadoras de BRCA1 (c.181T>G y c.5266dupC) se encuentran comúnmente en judíos asquenazíes de Europa central y oriental (Polonia, República Checa), eslovenos, austriacos, húngaros, bielorrusos y alemanes) 44,45 y, en Estados Unidos y Argentina, se definió recientemente como una “variante germinal recurrente” en pacientes italianos con CM y OC. La variante 34c.514del se identificó previamente en 8 pacientes con cáncer de mama del norte de Sicilia en Palermo y Messina.encontraron la variante c.3253dupA en algunas familias de Catania.28 Las PV BRCA2 más representativas son c.428dup, c.5851_5854delAGTT y la variante intrónica c.8487+1G>A, que han sido reportadas con más detalle 28 en un paciente en Palermo con c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV se observó en hogares del noroeste Sicilia, principalmente en las regiones de Trapani y Palermo, mientras que c.5851_5854delAGTT PV se observó en hogares del noroeste de Sicilia. La variante 8487+1G>A fue más común en sujetos de Messina, Palermo y Caltanissetta.28 Rebbeck et al.describieron previamente la alteración c.5851_5854delAGTT en Colombia37. Otro BRCA2 PV, c.631+1G>A, se ha encontrado en pacientes con CM y OC de Sicilia (Agrigento, Siracusa y Ragusa)28. Cabe destacar que observamos la coexistencia de dos variantes BRCA2 (BRCA2 c.631G>A y c.7008-2A>T) en el mismo paciente, que supusimos segregados en modo cis, como se informó anteriormente de esa manera.34,46 Estas mutaciones uble de BRCA2 se observan con frecuencia en la región italiana y se ha descubierto que introducen codones de terminación prematuros, lo que afecta el empalme del ARN mensajero y hace que la proteína BRCA2 falle.47,48
También mapeamos los PV BRCA1 y BRCA2 en regiones putativas OCCR y BCCR de dominios y genes de proteínas. Estas regiones fueron descritas por Rebbeck et al.como áreas de riesgo para desarrollar cáncer de ovario y de mama, respectivamente.49 Sin embargo, la evidencia con respecto a la asociación entre la ubicación de las variantes de la línea germinal y el riesgo de cáncer de mama o de ovario sigue siendo controvertida.28,50-52 En nuestra población, las PV de BRCA1 se ubicaron predominantemente en la región BCCR, mientras que las PV de BRCA2 se ubicaron predominantemente en la región OCCR. Sin embargo, no pudimos encontrar ninguna asociación entre las regiones putativas de OCCR y BCCR y las características de BC. 1/2 mutaciones. Desde la perspectiva del dominio de la proteína, los PV de BRCA1 se distribuyen a lo largo de toda la proteína, y las alteraciones de BRCA2 se encuentran preferentemente en el dominio repetido de BRC.
Finalmente, correlacionamos las características clinicopatológicas de BC con BRCA1/2 PV. Debido al número limitado de pacientes incluidos, solo encontramos una correlación significativa entre Ki-67 y el grado del tumor. Aunque la evaluación e interpretación de Ki-67 sigue siendo algo controvertida, es cierto que las altas tasas de proliferación se asocian con un mayor riesgo de recurrencia de la enfermedad y una menor supervivencia. Hasta la fecha, el límite para distinguir entre Ki-67 "alto" y "bajo" es del 20%. 1/2 población de pacientes con mutación, que tiene un valor medio de Ki-67 del 25 %. Esta tendencia en tasas altas de Ki-67 puede explicarse por la prevalencia en nuestras cohortes luminal B y TNBC, de las cuales estaban presentes pocos tumores luminal A. Sin embargo, algunas pruebas parecen sugerir que un valor de corte más alto de Ki-67 (25-30 %) puede estratificar mejor a los pacientes según su pronóstico.53,54 A partir de los resultados de nuestro análisis, no es sorprendente que ocurra una correlación significativa. entre Ki-67 alto y grados y la presencia de BRCA1 PV. De hecho, los tumores relacionados con BRCA1 son típicos de TNBC y muestran características más agresivas.16,17
En conclusión, este estudio proporciona un informe sobre el estado mutacional de BRCA1/2 en una cohorte de BC del este de Sicilia. En general, nuestros hallazgos son consistentes con la evidencia preexistente, tanto en términos de prevalencia de mutación como de características clinicopatológicas en BC. Se justifican más estudios en poblaciones más grandes de pacientes con BC con mutación BRCA1/2, como el uso de análisis mutacional expandido multigenoma, para evaluar la presencia de PV que son distintas y menos frecuentes que BRCA1/2. número creciente de sujetos con mayor riesgo de cáncer debido a mutaciones genéticas.
Confirmamos que los pacientes firmaron un consentimiento informado para divulgar sus muestras tumorales de forma anónima con fines de investigación. Todos los pacientes firmaron un consentimiento informado por escrito de acuerdo con la Declaración de Helsinki. De acuerdo con la política del Policlínico AOU "G.Rodolico - S.Marco", este estudio estuvo exento de revisión ética porque el análisis BRCA1/2 se realizó de acuerdo con la práctica clínica y todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito. Los pacientes también dan su consentimiento para el uso de sus datos con fines de investigación.
Agradecemos al Prof. Paolo Vigneri por su asistencia en el cuidado de pacientes con cáncer de mama según lo solicitado por el Comité de Ética.
Federica Martorana reporta honorarios del Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Los demás autores declaran no tener conflictos de interés en este trabajo.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estima la incidencia y mortalidad de 36 cánceres en 185 países alrededor del mundo.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660