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plasma rico en plaquetas/prp, regeneración tisular, activación plaquetaria, terapia proliferativa de glucosa, plaquetas, terapia proliferativa
Citar este artículo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 de mayo de 2022) El efecto de la glucosa en el recuento y el volumen de plaquetas: implicaciones para la medicina regenerativa.Cura 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
El plasma rico en plaquetas (PRP) y las soluciones de glucosa hipertónica se usan comúnmente para inyección en medicina regenerativa, a veces juntas.El efecto de la glucosa hipertónica sobre la lisis y activación plaquetaria no se ha informado previamente.Probamos el efecto de las concentraciones elevadas de glucosa en los recuentos de plaquetas y eritrocitos, así como los volúmenes de células en PRP y sangre total (WB).Se produjo una rápida reducción parcial en el recuento de plaquetas con todas las mezclas de glucosa mezcladas con PRP o sangre completa, lo que concuerda con la lisis parcial. Después del primer minuto, los recuentos de plaquetas se mantuvieron estables, lo que sugiere una rápida acomodación de las plaquetas residuales a una hipertonicidad extrema (>2000 mOsm). Después del primer minuto, los recuentos de plaquetas se mantuvieron estables, lo que sugiere una rápida acomodación de las plaquetas residuales a una hipertonicidad extrema (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю акк омодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Después del primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que indica una rápida acomodación de las plaquetas residuales a una hipertonicidad extrema (>2000 mOsm).(> 2000 mOsm)2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю ад аптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Después del primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que indica una rápida adaptación de las plaquetas residuales al estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).Las concentraciones de glucosa del 25% y superiores dieron como resultado un aumento significativo en el volumen plaquetario medio (MPV), lo que indica una etapa temprana de activación plaquetaria.Se necesitan más estudios para determinar si se produce lisis o activación plaquetaria y si la inyección de glucosa hipertónica sola o en combinación con PRP puede proporcionar un beneficio clínico adicional.
En la década de 1950, el cirujano estadounidense George Hackett descubrió que podía aliviar de forma permanente el dolor articular y de espalda en muchos pacientes inyectando una solución proliferativa en tendones y ligamentos.Sus experimentos en conejos mostraron que el tratamiento, al que llamó terapia proliferativa, hizo que los tendones se agrandaran y fortalecieran.Los estudios histológicos han confirmado que se produce colágeno nuevo durante este proceso [1].
Durante las primeras décadas, se probaron muchas soluciones de distribución diferentes.En la década de 1990, la mayoría de los médicos consideraban que las altas concentraciones de glucosa eran el método más seguro y eficaz.Sin embargo, el mecanismo de acción sigue sin estar claro.
Se realizaron pocos estudios clínicos en el siglo XX siguiendo el trabajo de Hackett.Sin embargo, en la década de 2000 hubo un interés renovado y se completaron varios ensayos clínicos exitosos de terapia proliferativa para el tratamiento del dolor lumbar [2], la osteoartritis de la rodilla [3] y la epicondilitis lateral [4].
La regeneración de tejidos requiere la participación de células madre.Por lo tanto, las altas concentraciones de glucosa deben inducir de alguna manera la migración, replicación y diferenciación de las células madre.Nuestra hipótesis es que las plaquetas pueden actuar como mensajeros y que las altas concentraciones de glucosa pueden hacer que las plaquetas liberen citoquinas y factores de crecimiento, promoviendo así los procesos regenerativos, especialmente la migración de células madre a áreas de altas concentraciones de glucosa.
La activación plaquetaria siempre precede a un aumento del calcio intracelular [5].Liu et al.en 2008 mostró que los niveles altos de glucosa aumentan la actividad de los canales canónicos de potencial receptor transitorio tipo 6 (TRPC6) en la membrana plasmática, lo que conduce a una entrada de iones de calcio en las plaquetas [6].Otro estudio mostró que la exposición de la zona marginal de los microtúbulos a los iones de calcio causa relajación, expansión y deformación de la zona marginal, lo que a su vez provoca un cambio en la forma de disco a esférica, lo que da como resultado un volumen plaquetario medio (MPV) [7].
Nuestra hipótesis en este estudio es que la exposición de las plaquetas a altas concentraciones de glucosa afecta la zona marginal de los microtúbulos y el entorno intracelular, lo que lleva a un aumento del MPV.
Todos los participantes firmaron un formulario de consentimiento informado después de explicar los detalles del estudio y antes de recibir las muestras.En este estudio, solo se usaron muestras de PRP con un hematocrito superior al 2% para poder incluir el recuento de eritrocitos (eritrocitos) y el volumen corpuscular medio de glóbulos rojos (MCV) para la comparación.
El estudio se realizó en cuatro fases, la primera fase fue PRP y las fases restantes fueron sangre total (Tabla 1).Como se describió anteriormente [8], todas las fuerzas centrífugas relativas (RCF, g-force) se calcularon desde el punto medio (Rmid, en cm) de la columna de sangre en la jeringa centrífuga.Elegimos usar MPV como marcador de sensibilización de plaquetas y recuento de plaquetas como indicador de posible lisis de plaquetas, los cuales se pueden medir fácilmente en analizadores de hematología estándar.
En la primera fase, 47 voluntarios donaron muestras de sangre: un tubo de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y una muestra de sangre entera con PRP (anticoagulada con citrato de sodio (NaCl, 3%)) (Tabla 1).Coloque el balancín en el tubo inmediatamente.Se realizó hemograma completo (CBC) en muestras de EDTA por triplicado, y muestras de NaCl se analizaron por triplicado para el análisis de CBC, y luego se preparó PRP mediante varios métodos descritos anteriormente [8].Todas las muestras de PRP se prepararon mediante centrifugación a 900–1000 g.Mezcle cada muestra de PRP en un mezclador vórtex durante 5 a 10 segundos, luego divida cinco alícuotas de 0,5 ml en tubos.
Para evaluar el efecto de la exposición a las plaquetas sobre las concentraciones elevadas de glucosa, se mezclaron cantidades iguales (0,5 ml) de glucosa en agua al 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % y 50 % con muestras de plaquetas para obtener concentraciones de la mezcla de glucosa al 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % y 25 % y se mezclaron los tubos en un agitador de tubos de ensayo durante 15 minutos.La TAC de cada mezcla se analizó por triplicado después de 15 min.Se promediaron el recuento de plaquetas (PLT), el recuento de RBC, el MCV y el MPV para cada tubo, y se calculó el recuento medio de plaquetas, el recuento de RBC, el MCV y el MPV para todas las muestras de PRP.
Después de que se completó la primera fase de recopilación de datos, notamos un aumento significativo en el volumen de plaquetas en las plaquetas de PRP después de la adición de D50W.Las plaquetas PRP no representan necesariamente todas las plaquetas en la sangre, y el medio PRP difiere del medio WB.Por lo tanto, decidimos realizar una prueba de segunda fase del efecto de agregar D50W a la sangre entera.
Para la segunda ronda, elegimos un tamaño de muestra de 30 con base en los resultados de la primera serie, como se describe en la sección Análisis.En esta serie, 20 voluntarios donaron muestras de sangre (Tabla 1).Se extrajo sangre entera (1,8 ml) en una jeringa de 3 ml y se anticoaguló con 0,2 ml de NaCl al 40%.La jeringa de sangre completa se mezcló durante cinco segundos con un mezclador de vórtice y el CBC se analizó por triplicado.Después del análisis, se añadió sangre anticoagulada a 2 ml de glucosa al 50 % en una jeringa de 5 ml (la concentración final de glucosa fue de aproximadamente el 25 % (D25) y se colocó en un tubo de agitación durante 30 minutos. Después de 30 minutos, se analizó D25/CBC en jeringas WB por triplicado. Se promediaron el recuento de plaquetas, el recuento de RBC, el MCV y el MPV por jeringa, y se calculó la media de PLT, recuento de RBC, MCV y MPV para cada muestra antes y después de agregar glucosa .
Debido a que las plaquetas en la sangre entera están comúnmente expuestas a la glucosa hipertónica durante la terapia de glucosa proliferativa debido a la inyección mínimamente invasiva, y no es común combinar PRP con glucosa hipertónica justo antes de la inyección, decidimos estudiar la glucosa hipertónica en combinación con WB en la Sección 1. Pasos tres y cuatro.En cada etapa, 20 voluntarios donaron 7-8 ml de ACD-A (ácido que contiene citrato trisódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) y glucosa (24,5 g/l), solución de citrato de dextrosa) para anticoagulantes sanguíneos (Tabla 1).Solo se utilizaron mezclas de glucosa superiores al 12,5 % para determinar el porcentaje umbral asociado a un aumento del MPV.En la tercera etapa, se coloca 1 ml de sangre en un tubo de ensayo.Luego mezcle la sangre en un mezclador de vórtice durante 10 segundos agregando 1 ml de glucosa al 30 %, glucosa al 40 % o glucosa al 50 % al tubo para obtener una concentración final de glucosa del 15 %, 20 % y 25 %, respectivamente.Las muestras de glucosa en sangre se analizaron para CBC inmediatamente después de mezclarlas y se repitieron cada dos minutos durante 30 minutos.
Durante la mezcla inicial, la adición de glucosa hipertónica 1:1 y WB o PRP expone las plaquetas a concentraciones superiores al 25 % durante varios segundos.En el cuarto paso, para evaluar el efecto de la glucosa hipertónica con concentraciones máximas iniciales mínimas y probar el límite superior del efecto de la glucosa, agregamos solo una pequeña cantidad de sangre a D25W o D50W.Coloque 1 ml de D25W o D50W en un tubo y agregue 0,2 ml de WB mientras agita la muestra durante 10 segundos.En estos casos, la sangre se expuso a glucosa a una concentración de aproximadamente un 20 % por encima de la concentración final, en lugar de un 50 % por encima de la concentración final como en la Fase 3, lo que resultó en concentraciones finales de glucosa de 20,8 % y 41,6 %.Las muestras mixtas se analizaron en el mismo intervalo de tiempo que en el paso 3.
En el primer paso de cada serie de dilución de glucosa, se tomaron 30 muestras, ya que este era el tamaño de muestra apropiado para el estudio piloto [9].Al final de cada fase (incluida la primera fase), evalúe la idoneidad del tamaño de la muestra utilizando la fórmula utilizada para determinar el tamaño de la muestra necesario para estimar la media de la variable de resultado continua en una población.Fórmula n = Z2 x SD2 /E2.En esta ecuación, Z es el puntaje Z, SD es la desviación estándar y E es el error deseado [10].Nuestro alfa es 0,05, que corresponde a un valor Z de 1,96, y esperamos un error de 5 (en porcentaje).Por lo tanto, resolvemos para n = (1.962 x SD2)/52.Los resultados mostraron que el tamaño de muestra requerido para cada etapa fue menor que el número real recolectado.
Durante los períodos 1, 3 y 4 usando más de una concentración de glucosa, se analizó el efecto de diferentes concentraciones de glucosa comparando el cambio fraccional entre el tiempo 0 y cada tiempo subsiguiente (fase 1 a los 15 minutos, período 3 a los 15 minutos).y cuatro a los 15 segundos, luego cada dos minutos). Las tasas de cambio para cada período de tiempo se compararon usando la prueba U de Mann-Whitney porque los datos no siguieron una distribución normal según lo determinado por la prueba de normalidad de Shapiro-Wilk.Dado que se realizó un análisis 1 a 1 de varios grupos (cinco) en los pasos primero, tercero y cuarto (cinco en total), se realizó una corrección de Bonferroni para ajustar el valor alfa deseado a ≤0,01 pero no ≤0,05.
Reducción del recuento de plaquetas con todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y aumento del MPV en plaquetas de PRP a una concentración de dextrosa >12,5 %: los recuentos de plaquetas de PRP aumentaron de una a cinco veces la concentración en comparación con la sangre total inicial, variando según el método (no representado). Reducción del recuento de plaquetas con todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y aumento del MPV en plaquetas de PRP a una concentración de dextrosa >12,5 %: el recuento de plaquetas de PRP aumentó de una a cinco veces la concentración en comparación con la sangre total inicial, variando según el método (no representado). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MP V в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз п о сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Disminución del recuento de plaquetas en todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y aumento del MPV en plaquetas de PRP a una concentración de dextrosa >12,5 %: el recuento de plaquetas de PRP aumentó de 1 a 5 veces en comparación con la sangre total inicial, según el método (no se muestra). ).在> 12,5 %线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 A >12,5 % de concentración de glucosa, la alta concentración de glucosa reduce el recuento sanguíneo, el MPV sanguíneo del PRP aumenta: en comparación con 与基线全血, el recuento sanguíneo del PRP aumenta de 1 a 5 veces el de la concentración (no descrito). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тро мбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных ко нцентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). A concentraciones de glucosa >12,5 %, todas las concentraciones de glucosa hipertensivas redujeron los recuentos de plaquetas y aumentaron el MPV en las plaquetas de PRP: los recuentos de plaquetas de PRP aumentaron de 1 a 5 veces en comparación con las concentraciones basales en sangre total, según el método (como se describe).La figura 1 muestra que el número de plaquetas disminuyó casi un 75 % después de la dilución en agua y un 20-30 % después de 15 minutos de dilución con diferentes concentraciones de glucosa en comparación con el PRP basal y una dilución 1:1 ajustada por volumen (1-k1 con corrección de volumen).k -1 cria).1 cria).
El número de células en cada dilución se expresa como una fracción del número original antes de la dilución.
El MPV disminuyó mínimamente durante la producción de PRP, sin más cambios en las concentraciones de dilución al 12,5 % en agua o glucosa (incluidas las mezclas de glucosa con PRP al 25 %) y aumentó en más del 20 % después de la dilución en solución de glucosa al 50 % (Fig. 2).).Por el contrario, los eritrocitos no mostraron cambios significativos en el volumen en ninguna dilución distinta de H2O.
El volumen medio de células en cada dilución se expresa como porcentaje del volumen original antes de la dilución.
Se observó una reducción similar pero menos pronunciada en el recuento de plaquetas y un aumento en el RCV en BC expuestos a glucosa al 50 % (para formular con glucosa al 25 %).La Tabla 2 compara el número de células y los volúmenes de células en sangre completa diluida en dextrosa al 50 % con los datos de PRP de fase 1 diluidos en dextrosa al 50 %.Los cambios en el recuento de RBC y el MCV de RBC no fueron obvios y no fueron el foco de nuestra atención.
SD = desviación estándar, MD = diferencia media entre grupos, SE = desviación estándar de la diferencia media, RBC = eritrocitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico en plaquetas, WB = sangre total
Después de agregar D50W a WB, el porcentaje de pérdida de plaquetas ajustada por dilución fue del 7,7 % (310 ± 73 frente a 286 ± 96) en comparación con el 17,8 % para la dilución de PRP en D50W (664 ± 348 frente a 544 ± 277).MPV WB aumentó un 16,8 % (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mientras que MPV PRP aumentó un 26 % (9,2 ± 0,8 frente a 11,6 ± 0,7). Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del MPV fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la reducción del recuento de plaquetas dentro de WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) y el aumento del MPV fue significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del MPV fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la reducción del recuento de plaquetas dentro de WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) y el aumento del MPV fue significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del RCV fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la disminución del recuento de plaquetas dentro de WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). el aumento de MPV fue significativo (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7.7%)；p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001） 。PRP的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0. 6 (+16.8) p < .001）。El cambio en la reducción del recuento de plaquetas dentro del WB fue casi significativo (de 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), aunque el PRP tuvo diferencias medias significativamente mayores en la disminución del recuento de plaquetas y el aumento del MPV.y el aumento en MPV fue significativo.(de 10,1 ± 0,5 de 11,8 ± 0,6 (+16,8) r < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Se requirió una concentración final de glucosa al 20 % para ver un cambio significativo en el MPV, pero el cambio en el MPV fue más pronunciado en la concentración final del 25 %.La pérdida de plaquetas se estabilizó después de la disminución inicial.Notamos una fuerte disminución inicial en la RCV, sin embargo, la RCV se restauró rápidamente a la concentración final de glucosa del 25 %, que fue significativamente más alta que los niveles de RCV observados en las concentraciones finales de glucosa del 20 % y el 15 % (Fig. 3 y a la izquierda de la Tabla 3; cuadros sombreados).indican valores de p ≤ alfa con una corrección de Bonferroni de 0.01).También hubo una fuerte caída inicial en el número de PLT, observada en la fase inicial de 0-15 s, y luego se mantuvo estable (de 15 s a 30 min; a la izquierda de la tabla 4).
La adición de varias concentraciones de glucosa a la sangre entera dio como resultado una rápida disminución inicial del MPV seguida de una recuperación dependiente de la concentración de más del 20 %.La leyenda muestra la concentración de glucosa después de la dilución.D15, D20 y D25 se llevaron a cabo en una dilución 1:1.D21 y D41 se llevaron a cabo a una dilución de 1:5.
La Tabla 4 muestra el cambio en el recuento de plaquetas cuando se diluye en glucosa hipertónica.Observamos una relación dependiente de la dosis entre la caída inmediata en el número de PLT en la dilución 1:1 y en la dilución 1:5.Al comparar las diluciones 1:1 como un solo grupo con las diluciones 1:5, el grupo 1:1 tuvo una disminución inmediata en el recuento de plaquetas menor que el grupo 1:5 66±48 000 (23 %) versus 99±69 000 (37 %)., p = 0,014) en el grupo 1:5.Después de una caída inicial en el primer punto de medición, el recuento de plaquetas como porcentaje de glucosa se estabilizó (Fig. 4).
Cuando se agrega sangre completa a la glucosa en una proporción de 1:1, el recuento de plaquetas se reduce en aproximadamente un 25 %.Sin embargo, cuando se añadió sangre total en una proporción de 1:5, la reducción fue mucho mayor: alrededor del 50 %.
La glucosa al 41 % aumentó el MPV más rápido y de forma más drástica que al 25 % o al 21 %.Los resultados del MPV se muestran en la Figura 3. En todas las demás diluciones, no se observó una disminución inicial inmediata del MPV después de la adición de glucosa al 50 %.Cuando se utilizó glucosa al 25 % (concentración de glucosa del 20,8 % en la dilución final), el cambio en el MPV fue comparable al cambio en glucosa al 20 % en una dilución 1:1 (Fig. 3).Aunque los cambios en el MPV fueron inicialmente mayores con la concentración mixta al 41 % que con el 25 %, la diferencia en el MPV entre el 41 % y el 25 % después de 16 minutos ya no fue significativa (Tabla 3, derecha).También es interesante que la glucosa al 25 % aumentara el VPM más eficazmente que al 20,8 %.
Este estudio in vitro confirmó parcialmente nuestra hipótesis. Mostró una lisis plaquetaria parcial potencial por la mezcla de dextrosa, una acomodación rápida de las plaquetas a hipertonicidad extrema y un aumento significativo en MPV en respuesta a concentraciones de dextrosa hipertónica > 25%. Mostró una lisis plaquetaria parcial potencial por la mezcla de dextrosa, una acomodación rápida de las plaquetas a hipertonicidad extrema y un aumento significativo en MPV en respuesta a concentraciones de dextrosa hipertónica > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомода цию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническу ю концентрацию декстрозы > 25%. Mostró lisis plaquetaria parcial potencial con dextrosa, acomodación plaquetaria rápida hasta hipertonicidad extrema y un aumento significativo en MPV en respuesta a niveles de dextrosa hipertónica >25%.25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。·应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адап тацию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Muestra potencial lisis plaquetaria parcial por mezclas de glucosa, rápida adaptación plaquetaria a hipertonicidad extrema y un aumento significativo en MPV en respuesta a glucosa hipertónica >25%.El aumento inicial fue máximo con una exposición a la glucosa del 41,6 %, pero el aumento del MPV se acercó al 25 % de la exposición a la glucosa aproximadamente 20 minutos después de la exposición.
La concentración de plaquetas se ve afectada por la glucosa.Notamos que la cantidad de PLT disminuyó en todas las diluciones de glucosa.Una fuerte caída en el número de plaquetas en diluciones de H2O (0%) de la serie PRP puede estar asociada con lisis osmótica.Alternativamente, esto podría ser un artefacto causado por la acumulación de plaquetas, pero esto contrasta con la falta de cambio de MPV en esta dilución.Este hallazgo significa que algunas plaquetas son muy sensibles a la hipoosmolaridad.
En todas las diluciones 1:1 de glucosa, la cantidad de PLT disminuyó en un 20-30 %, incluso por D5W (hipotónica a 252 mOsm), lo que puede indicar un efecto no osmótico específico de la glucosa, ya que tanto PLT como MPV permanecieron sin cambios al triplicar su concentración.glucosa.de D5W a D25W.De hecho, las concentraciones de PLT tendieron a aumentar ligeramente con el aumento de la osmolaridad.
La disminución de PLT entre diluciones 1:1 y 1:5 significa que el efecto de disolución depende de la concentración de glucosa inicial y final.Si dependiera solo de la concentración inicial, entonces uno esperaría ver una diferencia en la reducción de PLT entre concentraciones 1:1.Pero no lo hacemos.Si el efecto de lisis depende únicamente de la concentración final de glucosa, entonces no esperamos mucha diferencia entre una dilución 1:1 al 20 % y una dilución 1:5 al 20,8 %.Y sin embargo lo hicimos.
Si se produce pérdida de plaquetas debido a la lisis plaquetaria, se forma un lisado parcial, después de lo cual se liberan citocinas y factores de crecimiento al medio extracelular.Varios estudios han demostrado que el lisado de plaquetas es casi tan efectivo como el PRP como solución de proliferación [11].El propio PRP ha demostrado ser una solución eficaz para el tratamiento de la proliferación [12-14].
Las plaquetas inactivas circulan en forma de disco reforzado con varias estructuras internas.Durante la activación, adquieren una forma más esférica o de ameba, lo que provoca un aumento de volumen.El aumento de volumen requiere un aumento del área superficial, que es el resultado de la extrusión del sistema de túbulos abiertos (OCS) y la adición de gránulos exocíticos a la membrana.Queda por determinar si el aumento de MPV inducido por la glucosa hipertónica involucra uno o ambos de estos mecanismos, pero si es el último, entonces un aumento de MPV indicaría desgranulación.
Este estudio mostró que la exposición a altas concentraciones de glucosa en PRP o plaquetas de sangre completa resultó en un aumento en MPV dentro de los 15 minutos con una concentración de glucosa de 25% y 41.6%, respectivamente.
El aumento del MPV plaquetario puede deberse a la dilatación de los ovillos de microtúbulos circundantes en respuesta a la entrada de calcio.Liu et al.Se ha demostrado que la glucosa media en la entrada de calcio a través del canal TRPC6 de las plaquetas [6].Nuestra hipótesis es que la glucosa induce la relajación de los ovillos de microtúbulos, lo que lleva a un aumento en la sensibilización y/o activación de MPV y plaquetas.Sin embargo, a juzgar por nuestros resultados, esto es solo una parte de la historia.En nuestras pruebas, ninguna concentración por debajo de D25W dio como resultado un aumento en MPV.Dado que no hemos probado la exposición a concentraciones de glucosa entre el 12,5 % y el 25 %, nuestros resultados de la fase 1 sugieren que puede haber un umbral en este rango de concentraciones de glucosa que conduce a un aumento del MPV.Pruebas adicionales en las etapas 3 y 4 mostraron que 20-25 % de glucosa parece ser el umbral para esto, pero aún no está claro por qué.
También observamos una disminución de ~ 9% en MPV después de la centrifugación.No está claro si esta disminución del MPV se debe a plaquetas más grandes y densas atrapadas en la capa de glóbulos rojos de la centrífuga.Esta observación puede ser importante para los médicos, ya que puede implicar que las plaquetas PRP son un subconjunto más pequeño y menos denso de las plaquetas WB.
En un estudio anterior, mostramos que la preparación de PRP por métodos manuales es económica [8].Si la glucosa sensibiliza las plaquetas tisulares o el PRP, haciéndolos más susceptibles a la activación, o si el PRP se produce con propiedades de lisado parcial, esto puede mejorar la regeneración y reducir la necesidad de terapia.Por lo tanto, la combinación de PRP y glucosa altamente concentrada puede ser más rentable que el PRP o la glucosa solos.
Nuestro estudio tiene varias deficiencias.Primero, usamos PRP obtenido de varios métodos diferentes.Esto puede conducir a resultados contradictorios.En segundo lugar, no pudimos realizar un análisis bioquímico de ninguna de nuestras muestras para determinar con mayor precisión si se había producido la activación plaquetaria.Nos gustaría medir la selectina P, el factor plaquetario 4, los agregados plaquetarios monocíticos u otros marcadores de activación plaquetaria para comprender mejor el grado o la presencia de desgranulación de los gránulos alfa, pero esto va más allá del alcance de este estudio.En tercer lugar, no pudimos confirmar mediante microscopía electrónica u otros métodos que el aumento del MPV en las plaquetas expuestas a la glucosa se deba al efecto sobre los ovillos de microtúbulos.
Las mezclas de WB o PRP con glucosa al 25 % aumentaron el MPV, lo que indica el inicio de la activación plaquetaria, aunque este estudio no demostró la progresión de la agregación o la desgranulación.La mezcla de glucosa hipertónica resultó en la pérdida de plaquetas, posiblemente representando un efecto lítico.La activación parcial o la lisis de las plaquetas puede provocar la regeneración tisular después de la inyección de plaquetas.No está claro qué consecuencias clínicas pueden tener estos cambios.Otros estudios han demostrado mediciones más precisas de activación o lisis y han evaluado los diferentes efectos clínicos de las mezclas de glucosa hipertónica con WB o PRP.
La terapia proliferativa de glucosa es una terapia regenerativa simple y económica que se está expandiendo rápidamente y apoyando la investigación clínica.Este estudio sugiere un mecanismo fisiológico que, de confirmarse, podría ayudarnos a comprender parte del mecanismo regenerativo de la terapia proliferativa.
Informática Biomédica y de la Salud en la Universidad de Missouri, Facultad de Medicina de Kansas City, Kansas City, EE. UU.
Sujetos humanos: Todos los participantes en este estudio dieron o no dieron su consentimiento.La Sociedad Internacional de Medicina Celular ha emitido la aprobación ICMS-2017-003.El siguiente protocolo ha sido aprobado para su uso posterior por la Junta de Revisión Institucional de la Sociedad Internacional de Medicina Celular: Título: Cálculo del rendimiento del fármaco en plasma rico en plaquetas basado en el recuento de plaquetas CBC de referencia.Sujetos animales: todos los autores confirmaron que no participaron animales ni tejidos en este estudio.Conflictos de interés: De acuerdo con el Formulario de divulgación uniforme del ICMJE, todos los autores declaran lo siguiente: Información de pago/servicio: Todos los autores declaran que no recibieron apoyo financiero de ninguna organización para el trabajo presentado.Relaciones financieras: Todos los autores declaran que actualmente o en los últimos tres años no tienen relaciones financieras con ninguna organización que pueda estar interesada en el trabajo presentado.Otras Relaciones: Todos los autores declaran que no existen otras relaciones o actividades que puedan afectar el trabajo enviado.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al.(17 de mayo de 2022) El efecto de la glucosa en el recuento y el volumen de plaquetas: implicaciones para la medicina regenerativa.Cura 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
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