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Plasma rico en plaquetas/prp, regeneración tisular, activación plaquetaria, terapia proliferativa de glucosa, plaquetas, terapia proliferativa
Cite este artículo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 de mayo de 2022) El efecto de la glucosa en el recuento y volumen plaquetario: implicaciones para la medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
El plasma rico en plaquetas (PRP) y las soluciones de glucosa hipertónica se utilizan comúnmente para inyección en medicina regenerativa, a veces en conjunto. El efecto de la glucosa hipertónica sobre la lisis y activación plaquetaria no se ha descrito previamente. Evaluamos el efecto de concentraciones elevadas de glucosa sobre el recuento de plaquetas y eritrocitos, así como sobre el volumen celular en PRP y sangre total (SCT). Se observó una rápida reducción parcial del recuento plaquetario con todas las mezclas de glucosa con PRP o sangre total, lo cual es compatible con una lisis parcial. Después del primer minuto, los recuentos de plaquetas se mantuvieron estables, lo que sugiere una rápida acomodación de las plaquetas residuales a una hipertonicidad extrema (>2000 mOsm). Después del primer minuto, los recuentos de plaquetas se mantuvieron estables, lo que sugiere una rápida acomodación de las plaquetas residuales a una hipertonicidad extrema (>2000 mOsm). Después de que los trombocitos se establezcan estables, qué se coloca en el cuerpo de los trombocitos hacer экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Después del primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que indica una rápida acomodación de las plaquetas residuales a una hipertonicidad extrema (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态。 Después de que los trombocitos de origen estén instalados de forma estable, cómo instalarlos en las adaptaciones de los trombocitos k экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Después del primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que indica una rápida adaptación de las plaquetas residuales al estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).Concentraciones de glucosa del 25 % o superiores resultaron en un aumento significativo del volumen plaquetario medio (VPM), lo que indica una fase temprana de activación plaquetaria. Se requieren más estudios para determinar si se produce lisis o activación plaquetaria y si la inyección de glucosa hipertónica, sola o en combinación con PRP, puede aportar un beneficio clínico adicional.
En la década de 1950, el cirujano estadounidense George Hackett descubrió que podía aliviar permanentemente el dolor articular y de espalda en muchos pacientes inyectando una solución proliferativa en tendones y ligamentos. Sus experimentos con conejos demostraron que el tratamiento, al que llamó terapia proliferativa, provocaba el agrandamiento y fortalecimiento de los tendones. Estudios histológicos han confirmado que durante este proceso se produce nuevo colágeno [1].
Durante las primeras décadas, se probaron diversas soluciones de distribución. Para la década de 1990, la mayoría de los profesionales consideraban que las altas concentraciones de glucosa eran el método más seguro y eficaz. Sin embargo, su mecanismo de acción sigue sin estar claro.
Tras el trabajo de Hackett, se realizaron pocos estudios clínicos en el siglo XX. Sin embargo, en la década del 2000, se renovó el interés y se completaron varios ensayos clínicos exitosos de terapia proliferativa para el tratamiento del dolor lumbar [2], la osteoartritis de rodilla [3] y la epicondilitis lateral [4].
La regeneración tisular requiere la participación de células madre. Por lo tanto, las altas concentraciones de glucosa deben inducir de alguna manera la migración, replicación y diferenciación de las células madre. Nuestra hipótesis es que las plaquetas podrían actuar como mensajeras y que las altas concentraciones de glucosa podrían provocar la liberación de citocinas y factores de crecimiento en las plaquetas, promoviendo así los procesos regenerativos, especialmente la migración de células madre a zonas con altas concentraciones de glucosa.
La activación plaquetaria siempre precede a un aumento del calcio intracelular [5]. Liu et al. en 2008 demostraron que los niveles elevados de glucosa aumentan la actividad de los canales de potencial transitorio del receptor canónico tipo 6 (TRPC6) en la membrana plasmática, lo que provoca la entrada de iones de calcio en las plaquetas [6]. Otro estudio demostró que la exposición de la zona marginal de los microtúbulos a los iones de calcio provoca relajación, expansión y deformación de dicha zona, lo que a su vez provoca un cambio de forma de disco a esférica, lo que resulta en el volumen plaquetario medio (VPM) [7].
Nuestra hipótesis en este estudio es que la exposición de las plaquetas a altas concentraciones de glucosa afecta la zona marginal de los microtúbulos y el entorno intracelular, lo que conduce a un aumento del VPM.
Todos los participantes firmaron un consentimiento informado tras la explicación de los detalles del estudio y antes de recibir las muestras. En este estudio, solo se utilizaron muestras de PRP con un hematocrito superior al 2% para poder comparar el recuento de eritrocitos y el volumen corpuscular medio (VCM).
El estudio se realizó en cuatro fases: la primera con PRP y las restantes con sangre completa (Tabla 1). Como se describió previamente [8], todas las fuerzas centrífugas relativas (FCR, fuerza g) se calcularon a partir del punto medio (Rmid, en cm) de la columna de sangre en la jeringa centrífuga. Se optó por utilizar el VPM como marcador de sensibilización plaquetaria y el recuento plaquetario como indicador de posible lisis plaquetaria, ambos fácilmente medibles con analizadores hematológicos estándar.
En la primera fase, 47 voluntarios donaron muestras de sangre: un tubo de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y una muestra de sangre completa con PRP (anticoagulada con citrato de sodio [NaCl, 3%)) (Tabla 1). Coloque el agitador en el tubo inmediatamente. Se realizó un hemograma completo (HC) a las muestras con EDTA por triplicado, y las muestras con NaCl se analizaron por triplicado para el análisis del HC. Posteriormente, se preparó el PRP mediante los métodos descritos anteriormente [8]. Todas las muestras de PRP se prepararon mediante centrifugación a 900-1000 g. Mezcle cada muestra de PRP en un agitador vórtex durante 5-10 segundos y, a continuación, divida cinco alícuotas de 0,5 ml en tubos.
Para evaluar el efecto de la exposición a plaquetas en concentraciones elevadas de glucosa, se mezclaron cantidades iguales (0,5 ml) de glucosa en agua al 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % y 50 % con muestras de plaquetas para obtener concentraciones de la mezcla de glucosa al 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % y 25 %. Los tubos se agitaron en un agitador de tubos de ensayo durante 15 minutos. El TAC de cada mezcla se analizó por triplicado después de 15 minutos. Se promedió el recuento de plaquetas (PLT), el recuento de glóbulos rojos (RBC), el VCM y el VPM de cada tubo, y se calcularon los recuentos medios de plaquetas, glóbulos rojos (RBC), VCM y VPM de todas las muestras de PRP.
Tras completar la primera fase de recopilación de datos, observamos un aumento significativo del volumen plaquetario en las plaquetas de PRP tras la adición de D50W. Las plaquetas de PRP no necesariamente representan todas las plaquetas de la sangre, y el medio de PRP difiere del medio de sangre completa. Por lo tanto, decidimos realizar una segunda fase de ensayo para evaluar el efecto de la adición de D50W a la sangre completa.
Para la segunda ronda, elegimos un tamaño de muestra de 30 con base en los resultados de la primera serie, como se describe en la sección de Análisis. En esta serie, 20 voluntarios donaron muestras de sangre (Tabla 1). Se extrajo sangre completa (1.8 ml) en una jeringa de 3 ml y se anticoaguló con 0.2 ml de NaCl al 40%. La jeringa de sangre completa se mezcló durante cinco segundos con un mezclador vórtex y el hemograma completo (CSC) se analizó por triplicado. Después del análisis, se agregó sangre anticoagulada a 2 ml de glucosa al 50% en una jeringa de 5 ml (la concentración final de glucosa fue de aproximadamente 25% (D25)) y se colocó en un tubo de agitación durante 30 minutos. Después de 30 minutos, se analizó por triplicado el D25/CBC en jeringas WB. Se promedió el recuento de plaquetas, el recuento de glóbulos rojos, el VCM y el VPM por jeringa, y se calcularon las medias de PLT, recuento de glóbulos rojos, VCM y VPM para cada muestra antes y después de agregar glucosa.
Debido a que las plaquetas en sangre completa están comúnmente expuestas a glucosa hipertónica durante la terapia de glucosa proliferativa debido a la inyección mínimamente invasiva, y no es común combinar PRP con glucosa hipertónica justo antes de la inyección, decidimos estudiar la glucosa hipertónica en combinación con WB en la Sección 1. Paso tres y cuatro. En cada etapa, 20 voluntarios donaron 7-8 ml de ACD-A (ácido que contiene citrato trisódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) y glucosa (24,5 g/l), solución de citrato de dextrosa) para anticoagulantes sanguíneos (Tabla 1). Solo se utilizaron mezclas de glucosa superiores al 12,5% para determinar el porcentaje umbral asociado con un aumento en el VPM. En la tercera etapa, se coloca 1 ml de sangre en un tubo de ensayo. A continuación, mezcle la sangre en un agitador vórtex durante 10 segundos, añadiendo 1 ml de glucosa al 30 %, 40 % o 50 % al tubo para obtener una concentración final de glucosa del 15 %, 20 % y 25 %, respectivamente. Las muestras de sangre con glucosa se analizaron para hemograma completo inmediatamente después de la mezcla y se repitió el proceso cada dos minutos durante 30 minutos.
Durante la mezcla inicial, la adición de glucosa hipertónica y WB o PRP en proporción 1:1 expone a las plaquetas a concentraciones superiores al 25 % durante varios segundos. En el cuarto paso, para evaluar el efecto de la glucosa hipertónica con concentraciones pico iniciales mínimas y comprobar el límite superior del efecto de la glucosa, añadimos solo una pequeña cantidad de sangre a D25W o D50W. Colocamos 1 ml de D25W o D50W en un tubo y añadimos 0,2 ml de WB mientras agitábamos la muestra en vórtex durante 10 segundos. En estos casos, la sangre se expuso a la glucosa a una concentración aproximadamente un 20 % superior a la concentración final, en lugar del 50 % superior a la concentración final como en la fase 3, lo que resultó en concentraciones finales de glucosa del 20,8 % y el 41,6 %. Las muestras mezcladas se analizaron en el mismo intervalo de tiempo que en el paso 3.
En el primer paso de cada serie de dilución de glucosa, se tomaron 30 muestras, ya que este era el tamaño de muestra apropiado para el estudio piloto [9]. Al final de cada fase (incluida la primera fase), evalúe la idoneidad del tamaño de muestra utilizando la fórmula utilizada para determinar el tamaño de muestra necesario para estimar la media de la variable de resultado continua en una población. Fórmula n = Z² × DE² /E². En esta ecuación, Z es la puntuación Z, DE es la desviación estándar y E es el error deseado [10]. Nuestro alfa es 0,05, que corresponde a un valor Z de 1,96, y esperamos un error de 5 (en porcentaje). Por lo tanto, resolvemos para n = (1,962 × DE²)/52. Los resultados mostraron que el tamaño de muestra requerido para cada etapa fue menor que el número real recolectado.
Durante los periodos 1, 3 y 4, utilizando más de una concentración de glucosa, se analizó el efecto de diferentes concentraciones de glucosa comparando el cambio fraccional entre el tiempo 0 y cada tiempo subsiguiente (fase 1 a los 15 minutos, periodo 3 a los 15 minutos) y cuatro a los 15 segundos, luego cada dos minutos). Las tasas de cambio para cada periodo de tiempo se compararon utilizando la prueba U de Mann-Whitney porque los datos no siguieron una distribución normal según lo determinado por la prueba de normalidad de Shapiro-Wilk. Dado que se realizó un análisis 1 a 1 de varios grupos (cinco) en los pasos primero, tercero y cuarto (cinco en total), se realizó una corrección de Bonferroni para ajustar el valor alfa deseado a ≤0,01 pero no a ≤0,05.
Reducción del recuento de plaquetas con todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y un aumento del VPM en plaquetas PRP a una concentración de dextrosa >12,5 %: los recuentos de plaquetas PRP aumentaron de una a cinco veces la concentración en comparación con la sangre completa inicial, variando según el método (no se muestra). Reducción del recuento de plaquetas con todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y un aumento del VPM en plaquetas PRP a una concentración de dextrosa >12,5%: los recuentos de plaquetas PRP aumentaron de una a cinco veces la concentración en comparación con la sangre completa inicial, variando según el método (no se muestra). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Disminución del recuento de plaquetas en todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y aumento del VPM en plaquetas PRP en una concentración de dextrosa >12,5 %: el recuento de plaquetas PRP aumentó de 1 a 5 veces en comparación con la sangre completa inicial, según el método (no se muestra). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 A una concentración de glucosa >12,5%, la alta concentración de glucosa reduce el recuento sanguíneo, el MPV sanguíneo PRP aumenta: en comparación con 与基线全血, el recuento sanguíneo PRP aumenta de 1 a 5 veces la concentración (no descrito). При гипертонической глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической гипертонической снижали количество тромбоцитов, а MPV повышали en тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). En concentraciones de glucosa >12,5%, todas las concentraciones de glucosa hipertensiva disminuyeron los recuentos de plaquetas y aumentaron el VPM en las plaquetas PRP: los recuentos de plaquetas PRP aumentaron de 1 a 5 veces en comparación con las concentraciones basales en sangre completa, según el método (como se describe).La figura 1 muestra que el número de plaquetas disminuyó en casi un 75% después de la dilución en agua y en un 20-30% después de 15 minutos de dilución con diferentes concentraciones de glucosa en comparación con el PRP basal y una dilución 1:1 ajustada por volumen (1- k1 con corrección de volumen). k -1 cría).1 cría).
El número de células en cada dilución se expresa como una fracción del número original antes de la dilución.
El volumen de plasma (MPV) disminuyó mínimamente durante la producción de PRP, sin cambios adicionales en las concentraciones de dilución al 12,5 % en agua o glucosa (incluidas las mezclas de PRP y glucosa al 25 %) y aumentó en más del 20 % tras la dilución en solución de glucosa al 50 % (Fig. 2). Por el contrario, los eritrocitos no mostraron cambios significativos en su volumen con ninguna otra dilución, excepto con H₂O.
El volumen promedio de células en cada dilución se expresa como un porcentaje del volumen original antes de la dilución.
Se observó una reducción similar, pero menos pronunciada, del recuento plaquetario y un aumento del RCV en el CC expuesto a glucosa al 50 % (para formular con glucosa al 25 %). La Tabla 2 compara el número y el volumen celular en sangre total diluida en dextrosa al 50 % con los datos de PRP de fase 1 diluidos en dextrosa al 50 %. Los cambios en el recuento de eritrocitos y el VCM de eritrocitos no fueron evidentes y no fueron el foco de nuestra atención.
DE = desviación estándar, MD = diferencia media entre grupos, SE = desviación estándar de la diferencia media, RBC = eritrocitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico en plaquetas, WB = sangre completa
Tras añadir D50W al WB, la pérdida de plaquetas ajustada por dilución fue del 7,7 % (310 ± 73 frente a 286 ± 96) en comparación con el 17,8 % de la dilución de PRP en D50W (664 ± 348 frente a 544 ± 277). El MPV WB aumentó un 16,8 % (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mientras que el MPV PRP aumentó un 26 % (9,2 ± 0,8 frente a 11,6 ± 0,7). Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del VPM fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la reducción del recuento de plaquetas dentro del grupo WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = ,06) y el aumento del VPM fue significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < ,001). Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del VPM fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la reducción del recuento de plaquetas dentro del grupo WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = ,06) y el aumento del VPM fue significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < ,001).Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del RCV fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la disminución del recuento de plaquetas dentro del grupo WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). El aumento del VPM fue significativo (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7.7%)；p = .06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。El cambio en la reducción del recuento de plaquetas dentro del WB fue casi significativo (de 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), aunque el PRP tuvo diferencias medias significativamente mayores en la disminución del recuento de plaquetas y el aumento del VPM y el aumento del VPM fue significativo.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Se requirió una concentración final de glucosa del 20% para ver un cambio significativo en el VPM, pero el cambio en el VPM fue más pronunciado en la concentración final del 25%. La pérdida de plaquetas se estabilizó después del descenso inicial. Notamos una disminución inicial aguda del CVR, sin embargo, el CVR se restableció rápidamente en la concentración final de glucosa del 25%, que fue significativamente más alta que los niveles de CVR observados en las concentraciones finales de glucosa del 20% y el 15% (Fig. 3 y a la izquierda de la Tabla 3; recuadros sombreados). indican valores p ≤ alfa con una corrección de Bonferroni de 0,01). También hubo una caída inicial aguda en el número de PLT, observada en la fase inicial de 0-15 s, y luego permaneció estable (de 15 s a 30 min; izquierda de la Tabla 4).
La adición de diversas concentraciones de glucosa a la sangre completa resultó en una rápida disminución inicial del VPM, seguida de una recuperación dependiente de la concentración superior al 20 %. La leyenda muestra la concentración de glucosa tras la dilución. Los días 15, 20 y 25 se realizaron con una dilución 1:1. Los días 21 y 41 se realizaron con una dilución 1:5.
La Tabla 4 muestra la variación del recuento plaquetario al diluir en glucosa hipertónica. Se observó una relación dosis-dependiente entre la disminución inmediata del recuento de plaquetas en la dilución 1:1 y la dilución 1:5. Al comparar las diluciones 1:1 como grupo único con las diluciones 1:5, el grupo 1:1 presentó una disminución inmediata del recuento plaquetario menor que el grupo 1:5 (66 ± 48 000 [23 %)] frente a 99 ± 69 000 [37 %). , p = 0,014) en el grupo 1:5. Tras una disminución inicial en el primer punto de medición, el recuento plaquetario como porcentaje de glucosa se estabilizó (Fig. 4).
Al añadir sangre entera a la glucosa en una proporción de 1:1, el recuento de plaquetas se reduce aproximadamente un 25 %. Sin embargo, al añadir sangre entera en una proporción de 1:5, la reducción fue mucho mayor: aproximadamente un 50 %.
La glucosa al 41 % aumentó el VPM más rápido y de forma más drástica que al 25 % o al 21 %. Los resultados del VPM se muestran en la Figura 3. En todas las demás diluciones, no se observó una disminución inicial inmediata del VPM tras la adición de glucosa al 50 %. Cuando se utilizó glucosa al 25 % (concentración de glucosa del 20,8 % en la dilución final), el cambio en el VPM fue comparable al cambio en glucosa al 20 % en una dilución 1:1 (Fig. 3). Aunque los cambios en el VPM fueron inicialmente mayores con la concentración mixta al 41 % que con la del 25 %, la diferencia en el VPM entre el 41 % y el 25 % tras 16 minutos ya no fue significativa (Tabla 3, derecha). También es interesante que la glucosa al 25 % aumentara el VPM de forma más eficaz que la del 20,8 %.
Este estudio in vitro confirmó parcialmente nuestra hipótesis. Se mostró una posible lisis parcial de plaquetas por la mezcla de dextrosa, una rápida acomodación de las plaquetas a una hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a concentraciones > 25% de dextrosa hipertónica. Se mostró una posible lisis parcial de plaquetas por la mezcla de dextrosa, una rápida acomodación de las plaquetas a una hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a concentraciones > 25% de dextrosa hipertónica. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального Los monovolúmenes monovolúmenes no aptos para el consumo excesivo de alcohol tienen una concentración excesiva de aire > 25%. Se mostró una posible lisis parcial de plaquetas con dextrosa, una rápida acomodación de las plaquetas a una hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a niveles de dextrosa hipertónica >25%.> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 En el caso de trombocitos potentes y fuertes, combinados con glucógenos, se adaptan los trombocitos a экстремальному Hipertonus and значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Muestra una posible lisis parcial de plaquetas por mezclas de glucosa, una rápida adaptación de las plaquetas a la hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a una glucosa hipertónica >25%.El aumento inicial fue máximo con una exposición a la glucosa del 41,6 %, pero el aumento del VPM se acercó al 25 % de exposición a la glucosa aproximadamente 20 minutos después de la exposición.
La concentración de plaquetas se ve afectada por la glucosa. Observamos que la cantidad de plaquetas disminuyó en todas las diluciones de glucosa. Una disminución drástica del número de plaquetas en diluciones de H₂O (0 %) de la serie de PRP podría estar asociada a la lisis osmótica. Alternativamente, esto podría ser un artefacto causado por la agregación plaquetaria, pero esto contrasta con la ausencia de variación del VPM en esta dilución. Este hallazgo indica que algunas plaquetas son muy sensibles a la hipoosmolaridad.
En todas las diluciones 1:1 de glucosa, la cantidad de PLT disminuyó entre un 20 % y un 30 %, incluso con D5W (hipotónica a 252 mOsm), lo que podría indicar un efecto no osmótico específico de la glucosa, ya que tanto PLT como VPM se mantuvieron sin cambios al triplicar la concentración. De D5W a D25W. De hecho, las concentraciones de PLT tendieron a aumentar ligeramente con el aumento de la osmolaridad.
La disminución de plaquetas (PLT) entre diluciones 1:1 y 1:5 significa que el efecto de disolución depende de la concentración inicial y final de glucosa. Si dependiera únicamente de la concentración inicial, cabría esperar una diferencia en la reducción de plaquetas entre concentraciones 1:1. Sin embargo, no es así. Si el efecto de lisis depende únicamente de la concentración final de glucosa, no esperamos una gran diferencia entre una dilución 1:1 del 20 % y una dilución 1:5 del 20,8 %. Y, sin embargo, lo conseguimos.
Si se produce pérdida de plaquetas debido a la lisis plaquetaria, se forma un lisado parcial, tras lo cual se liberan citocinas y factores de crecimiento al medio extracelular. Diversos estudios han demostrado que el lisado plaquetario es casi tan eficaz como el PRP como solución de proliferación [11]. El PRP por sí mismo ha demostrado ser una solución eficaz para el tratamiento de la proliferación [12-14].
Las plaquetas inactivas circulan en forma de disco reforzado con diversas estructuras internas. Durante la activación, adquieren una forma más esférica o de ameba, lo que resulta en un aumento de volumen. Este aumento de volumen requiere un aumento de la superficie, resultado de la extrusión del sistema de túbulos abiertos (SCO) y la adición de gránulos exocíticos a la membrana. Queda por determinar si el aumento del VPM inducido por la glucosa hipertónica implica uno o ambos mecanismos; si se trata de este último, un aumento del VPM indicaría degranulación.
Este estudio demostró que la exposición a altas concentraciones de glucosa en PRP o plaquetas de sangre completa resultó en un aumento del VPM en 15 minutos con una concentración de glucosa del 25% y 41,6%, respectivamente.
El aumento del VPM plaquetario puede deberse a la dilatación de los ovillos microtubulares circundantes en respuesta al influjo de calcio. Liu et al. Se ha demostrado que la glucosa media el influjo de calcio a través del canal TRPC6 plaquetario [6]. Nuestra hipótesis es que la glucosa induce la relajación de los ovillos microtubulares, lo que lleva a un aumento del VPM y a la sensibilización y/o activación plaquetaria. Sin embargo, a juzgar por nuestros resultados, esto es solo una parte de la historia. En nuestras pruebas, ninguna concentración por debajo de D25W resultó en un aumento del VPM. Dado que no hemos probado la exposición a concentraciones de glucosa entre el 12,5% y el 25%, nuestros resultados de la fase 1 sugieren que puede haber un umbral en este rango de concentraciones de glucosa que lleve a un aumento del VPM. Pruebas adicionales en las etapas 3 y 4 mostraron que el 20-25% de glucosa parece ser el umbral para esto, pero sigue sin estar claro por qué.
También observamos una disminución de aproximadamente el 9 % en el VPM tras la centrifugación. No está claro si esta disminución se debe a plaquetas más grandes y densas atrapadas en la capa de eritrocitos de la centrífuga. Esta observación puede ser importante para los médicos, ya que podría implicar que las plaquetas de PRP son un subconjunto más pequeño y menos denso de las plaquetas de sangre blanca.
En un estudio previo, demostramos que la preparación de PRP mediante métodos manuales es económica [8]. Si la glucosa sensibiliza las plaquetas tisulares o el PRP, haciéndolos más susceptibles a la activación, o si el PRP se produce con propiedades de lisado parcial, esto puede mejorar la regeneración y reducir la necesidad de terapia. Por lo tanto, la combinación de PRP y glucosa altamente concentrada puede ser más rentable que el PRP o la glucosa solos.
Nuestro estudio presenta varias deficiencias. En primer lugar, utilizamos PRP obtenido mediante diversos métodos, lo que puede generar resultados contradictorios. En segundo lugar, no pudimos realizar un análisis bioquímico de ninguna de nuestras muestras para determinar con mayor precisión si se había producido activación plaquetaria. Nos gustaría medir la P-selectina, el factor plaquetario 4, los agregados plaquetarios monocíticos u otros marcadores de activación plaquetaria para comprender mejor el grado o la presencia de degranulación de los gránulos alfa, pero esto queda fuera del alcance de este estudio. En tercer lugar, no pudimos confirmar mediante microscopía electrónica ni otros métodos que el aumento del VPM en las plaquetas expuestas a la glucosa se debiera al efecto sobre los ovillos microtubulares.
Las mezclas de WB o PRP con 25% de glucosa aumentaron el VPM, lo que indica el inicio de la activación plaquetaria, aunque este estudio no demostró progresión de la agregación ni de la degranulación. La mezcla de glucosa hipertónica provocó pérdida de plaquetas, lo que posiblemente represente un efecto lítico. La activación o lisis parcial de las plaquetas puede causar regeneración tisular tras la inyección de plaquetas. No se conocen las consecuencias clínicas que estos cambios pueden acarrear. Estudios posteriores han demostrado mediciones más precisas de la activación o la lisis y han evaluado los diferentes efectos clínicos de las mezclas de glucosa hipertónica con WB o PRP.
La terapia proliferativa con glucosa es una terapia regenerativa sencilla y económica que se está expandiendo rápidamente y que apoya la investigación clínica. Este estudio sugiere un mecanismo fisiológico que, de confirmarse, podría ayudarnos a comprender parte del mecanismo regenerativo de la terapia proliferativa.
Informática Biomédica y de la Salud en la Facultad de Medicina de la Universidad de Missouri, Kansas City, Kansas City, EE. UU.
Sujetos humanos: Todos los participantes en este estudio dieron o no su consentimiento. La Sociedad Internacional de Medicina Celular ha emitido la aprobación ICMS-2017-003. El siguiente protocolo ha sido aprobado para su uso posterior por la Junta de Revisión Institucional de la Sociedad Internacional de Medicina Celular: Título: Cálculo del rendimiento del fármaco en plasma rico en plaquetas basado en el recuento basal de plaquetas CSC. Sujetos animales: Todos los autores confirmaron que no hubo animales ni tejidos involucrados en este estudio. Conflictos de intereses: De acuerdo con el Formulario de divulgación uniforme del ICMJE, todos los autores declaran lo siguiente: Información de pago/servicio: Todos los autores declaran que no recibieron apoyo financiero de ninguna organización para el trabajo enviado. Relaciones financieras: Todos los autores declaran que no tienen actualmente ni en los últimos tres años relaciones financieras con ninguna organización que pueda estar interesada en el trabajo enviado. Otras relaciones: Todos los autores declaran que no hay otras relaciones o actividades que puedan afectar el trabajo enviado.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 de mayo de 2022) El efecto de la glucosa en el recuento y volumen plaquetario: implicaciones para la medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
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