LC arazoak konpontzeko gai batzuk ez daude inoiz zaharkituta, LC praktikan arazoak baitaude, nahiz eta tresna-teknologia hobetzen den denborarekin. Modu asko daude LC sistema batean arazoak sor daitezkeen eta gailurraren forma txarrean bukatzeko. Gailurraren formarekin lotutako arazoak sortzen direnean, emaitza hauen arrazoi posibleen zerrenda labur batek gure arazoak konpontzeko esperientzia errazten laguntzen du.
Dibertigarria izan da “LC Troubleshooting” zutabe hau idaztea eta hilero gaiei buruz hausnartzea, gai batzuk inoiz ez direlako estilotik pasatzen. Kromatografia-ikerketaren alorrean gai edo ideia batzuk zaharkituta geratzen diren bitartean ideia berriagoak eta hobeak ordezkatuz, arazoak konpontzeko alorrean, arazoen konponketa-artikulua aldizkari honetan (azkeneko LC) aldizkarian agertu zenetik (azkeneko urte batzuetatik, oraindik ere, gaiak gutxi dira).19. LC Troubleshooting hainbat atal bideratu ditut kromatografia likidoaren (LC) eragiten duten joera garaikideetan (adibidez, presioak atxikipenean duen eraginari buruz dugun ulermen erlatiboaren konparaketa erlatiboa [2] Aurrerapen berriak) LC emaitzen interpretazioa eta LC tresna modernoekin arazoak nola konpondu. Hilabete honetako zatian, nire serieari jarraitzen ari naiz, zeina abenduan (32022) bizitzan zentratu zena. arazoak konpontzea — edozein arazo konpontzailerentzat bikainak diren elementuak ezinbestekoak dira, erabiltzen ari garen sistemaren adina edozein dela ere. Serie honen oinarrizko gaia oso garrantzitsua da LCGC-ren "LC Troubleshooting Guide" horma-diagrama ospetsuan (4) laborategi askotan zintzilik. Serie honen hirugarren zatian, gailurraren formarekin edo gailur-ezaugarriekin lotutako gaietan zentratzea aukeratu nuen. gai hauek guztiak zehatz-mehatz artikulu batean, beraz, gaiari buruzko lehen atal honetan, gehien ikusten ditudan batzuetan zentratuko naiz. Espero dut LC-ko erabiltzaile gazteek eta helduek gai garrantzitsu honi buruzko aholku eta abisu lagungarri batzuk aurkitzea.
Arazoak konpontzeko galderei gero eta gehiago erantzuten diet "edozer da posible". Erantzun hau erraza dirudi interpretatzen zailak diren behaketak kontuan hartuta, baina sarritan egokia iruditzen zait. Gailurraren forma txarraren kausa posible askorekin, garrantzitsua da irekita edukitzea arazoa zein izan litekeen aztertzerakoan, eta arrazoi potentzialak lehenesteko gai izatea, arazo arruntenetan arreta jartzen hasteko.
Arazoak konpontzeko edozein ariketatan funtsezko urratsa —baina gutxietsita dagoela uste dut— konpondu beharreko arazo bat dagoela aitortzea da. Arazo bat dagoela aitortzeak askotan esan nahi du tresnarekin gertatzen dena gure itxaropenetatik ezberdina dela aitortzea, zeinak teoria, ezagutza enpiriko eta esperientziaren arabera moldatzen diren (5). , fluffy, puntako ertza, isatsa, etab.), baina baita zabalerari ere. Benetako gailurraren formari buruzko gure itxaropenak sinpleak dira. (6) teoriak ondo onartzen du testuliburuko itxaropena, kasu gehienetan, gailur kromatografikoak simetrikoak izan behar direla eta Gauss-en banaketa baten formara egokitu behar direla, 1a Irudian erakusten den moduan. 1. irudian ikus daitezkeen beste aukera batzuk erakusten dira; beste era batera esanda, gauzak oker egin daitezkeen modu batzuk. Atal honen gainerakoan, forma mota hauek sor ditzaketen egoeren adibide zehatz batzuk eztabaidatzen joango gara.
Batzuetan, gailurrak ez dira eluitzea espero den kromatograman batere antzematen. Goiko horma-diagramak adierazten du gailurrik ez egotea (laginak xede-analitoa duen kontzentrazio batean detektagailuaren erantzuna zarataren gainetik ikusteko nahikoa izan behar duen kontzentrazioan) normalean tresnaren arazo batekin edo fase mugikorreko baldintza okerrekin erlazionatuta dagoela (behatzen bada).gailurrak, normalean "ahulegiak").Kategoria honetako balizko arazo eta irtenbideen zerrenda laburra aurki daiteke I. taulan.
Arestian esan bezala, arreta jarri eta konpontzen saiatu aurretik zenbaterainoko zabalkundea jasan behar den galdera, etorkizuneko artikulu batean eztabaidatuko dudan gai konplexua da. Nire esperientzia da gailur zabaltze esanguratsuak sarritan gailur-formaren aldaketa nabarmena izaten duela, eta gailurraren isatsa ohikoagoa da aurreko gailurra edo zatiketa baino.
Arazo horietako bakoitza zehatz-mehatz eztabaidatu da Troubleshooting LC-ren aurreko aleetan, eta gai hauetan interesa duten irakurleek aurreko artikulu hauetara jo dezakete arazo hauen arrazoiei eta irtenbide posibleei buruzko informazioa lortzeko.Xehetasun gehiago.
Gailurraren isatsa, gailurraren aurrealdea eta zatiketa fenomeno kimiko edo fisikoek eragin ditzakete, eta arazo horietarako balizko irtenbideen zerrenda asko aldatzen da, arazo kimiko edo fisiko batekin ari garen arabera. Askotan, kromatograma bateko gailur desberdinak alderatuz gero, arrasto garrantzitsuak aurki ditzakezu erruduna zein den. gailur bat edo batzuk bakarrik eragiten dute, baina gainerakoek ondo ikusten dute, kausa kimikoa da ziurrenik.
Gailurraren isatsaren kausa kimikoak konplexuegiak dira hemen laburki eztabaidatzeko. Irakurle interesatuari "LC Troubleshooting"-en azken alera jotzen da eztabaida sakonago baterako (10). Hala ere, gauza erraza da injektatutako analitoaren masa murriztea eta gailurraren forma hobetzen den ikustea. Hala bada, kasu horretan, metodo hau mugatua izan behar da arazoa mugatua izateko. analito-masa txikiak egitea, edo baldintza kromatografikoak aldatu behar dira, gailur-forma onak lortu ahal izateko masa handiagoak injektatzen badira ere.
Gailurraren isatsaren arrazoi fisiko potentzial asko ere badaude. Aukerei buruzko eztabaida zehatzean interesa duten irakurleek "LC Troubleshooting" (11) aldizkariaren berriki aipatzen dute. Puntako isatsaren kausa fisiko ohikoenetako bat injektorearen eta detektagailuaren arteko puntu batean dagoen konexio eskasa da (12). aurretik erabili gabe, eta bolumen txikiko injekzio-begizta bat instalatu genuen altzairu herdoilgaitzezko kapilar batean moldatutako ferrula batekin. Hasierako arazoak konpontzeko esperimentu batzuen ondoren, injekzio-balbularen estatoreko ataka-sakonera ohituta zegoena baino askoz ere sakonagoa zela konturatu ginen, eta ondorioz portuaren behealdean bolumen hil handi bat sortu zen. portuaren beheko bolumen hila.
1e irudian agertzen diren gailur-fronteak arazo fisiko edo kimikoek ere eragin ditzakete. Lehen ertzaren kausa fisiko ohikoa zutabearen partikula-ohantzea ondo beteta ez egotea da edo partikulak denboran zehar berrantolatu egin direla. lineal” atxikipen-baldintza. Baldintza (lineal) idealetan, fase geldikorrean atxikitako analito-kopurua (beraz, atxikipen-faktorea) linealki erlazionatuta dago zutabeko analitoaren kontzentrazioarekin. Kromatografikoki, horrek esan nahi du zutabean injektatutako analito-masa handitzen den heinean, gailurra altuagoa bihurtzen dela, baina ez zabalagoa egiten dela. r masa gehiago injektatzen den heinean. Horrez gain, forma ez-linealek gailur kromatografikoen forma zehazten dute, eta ondorioz ertz nagusien edo amaierako ertzak sortzen dira. Isats gailurra (10) eragiten duen masa gainkargarekin gertatzen den bezala, atxikipen ez-linealak eragindako gailurra ere diagnostikatu daiteke, injektatutako analitoaren masa murriztuz. aldatu egin behar da portaera hori gutxitzeko.
Batzuetan "zatitutako" gailurra dirudiena behatzen dugu, 1f. Irudian ikusten den bezala. Arazo hau konpontzeko lehen urratsa gailurraren forma ko-eluzio partzialaren ondoriozkoa den zehaztea da (hau da, bi konposatu bereizi baina estuki eluitzen duten presentzia). Egia esan, bi analito desberdin elkarrengandik hurbil elutatzen badira, orduan haien bereizmena hobetzea da (adibidez, itxurazko plaka errepikatuz edo handituz). t” gailurrak fisikoarekin erlazionatuta Errendimenduak ez du zerikusirik zutabearekin berarekin.Askotan, erabaki honen arrastorik garrantzitsuena kromatogramako gailur guztiek forma zatituak erakusten dituzten, edo bat edo bi besterik ez bada, bat edo bi besterik ez bada, ziurrenik ko-eluzio-arazoa da;gailur guztiak banatzen badira, ziurrenik arazo fisiko bat izango da, ziurrenik zutabeari berari lotutakoa.
Zutabearen beraren propietate fisikoekin erlazionatutako gailur zatituak normalean sarrerako edo irteerako fritak partzialki blokeatuta edo zutabeko partikulen berrantolaketaren ondoriozkoak izan ohi dira, fase mugikorra fase mugikorra baino azkarrago isurtzea ahalbidetuz, zutabearen kanalaren eraketaren eremu jakin batzuetan .beste eskualde batzuetan (11).Parzialki hondatutako frita batzuetan garbitu daiteke zutabearen bidezko fluxua alderantzikatuz;hala ere, nire esperientziaren arabera, hau epe laburrerako irtenbidea izan ohi da, epe luzerako baino. Hau askotan hilgarria da zutabe modernoekin partikulak zutabearen barruan birkonbinatzen badira. Une honetan, hobe da zutabea ordezkatzea eta jarraitzea.
1g irudiko gailurrak, nire laborategiko azken kasu batekoak ere, seinalea hain altua dela adierazten du, non erantzun-eremuaren amaierara iritsi dela. Xurgapen optikoko detektagailuetarako (UV-vis kasu honetan), analitoaren kontzentrazioa oso altua denean, analitoak detektagailuaren fluxu-zelulatik igarotzen den argiaren zatirik handiena xurgatzen du, eta, ondorioz, seinale elektriko ezberdinek baldintza hauetatik detektatzeko argi gutxi uzten dute. zarata, hala nola, argi galdua eta "korronte iluna", seinalea itxuraz oso "lausoa" bihurtuz eta analitoaren kontzentraziotik independentea dena.Hori gertatzen denean, arazoa sarritan erraz konpon daiteke analitoaren injekzio-bolumena murriztuz, injekzio-bolumena murriztuz, lagina diluituz edo biak.
Kromatografia eskolan, detektagailuaren seinalea (hau da, kromatogramako y ardatza) erabiltzen dugu laginaren analito-kontzentrazioaren adierazle gisa. Beraz, arraroa dirudi zero azpiko seinalea duen kromatograma bat ikustea, interpretazio sinplea baita horrek analito-kontzentrazio negatiboa adierazten duela, eta hori, noski, fisikoki posible ez dena.
Kasu honetan, gailur negatiboak esan nahi du, besterik gabe, zutabetik irteten diren molekulek fase mugikorrak berak baino argi gutxiago xurgatzen duela gailurraren aurretik eta ondoren. Hori gerta daiteke, adibidez, detekzio-uhin-luzera nahiko baxuak (<230 nm) eta uhin-luzera horietan argiaren zatirik handiena xurgatzen duten fase mugikorreko gehigarriak erabiltzean. gailurrak kalibrazio-kurba bat prestatzeko eta informazio kuantitatibo zehatza lortzeko, beraz, ez dago berez horiek saihesteko oinarrizko arrazoirik (metodo honi "zeharkako UV detekzioa" esaten zaio batzuetan) (13). Dena den, gailur negatiboak guztiz saihestu nahi baditugu, xurgantzia detektatzeko kasuan, soluzio onena detekzio-uhin-luzera desberdina erabiltzea da, fase mugikorraren konposizioa analitikoa baino gehiago xurga dezan. analitoak baino.
Piko negatiboak ere ager daitezke errefrakzio-indizea (RI) detekzioa erabiltzean, lagineko analitoa ez den osagaien errefrakzio-indizea, hala nola disolbatzaile-matrizea, fase mugikorreko errefrakzio-indizearen desberdina denean. Hau UV-vis detekzioarekin ere gertatzen da, baina efektu hori arintzen da RI detekzioarekin alderatuta. fase mugikorra.
LC arazoak konpontzeko oinarrizko gaiari buruzko hirugarren zatian, behatutako gailurraren forma espero den edo ohiko gailurraren formatik desberdina den egoerak eztabaidatu ditut. Arazoen konponketa eraginkorra espero diren gailur-formen ezagutzarekin hasten da (teorian edo lehendik dauden metodoekin aldez aurretiko esperientzian oinarrituta), beraz, itxaropen horietatik desbideratzeak nabariak dira. gehien ikusten ditudan arrazoiak. Xehetasun hauek jakiteak leku ona eskaintzen du arazoak konpontzen hasteko, baina ez ditu aukera guztiak jasotzen.Kausa eta konponbideen zerrenda sakonago batean interesa duten irakurleek LCGC “LC Troubleshooting Guide” horma-taula jo dezakete.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" horma-diagrama.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), 43-96 or.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF eta Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.