Eskerrik asko Nature.com bisitatzeagatik. Erabiltzen ari zaren arakatzailearen bertsioak CSSrako laguntza mugatua du. Esperientzia onena izateko, arakatzaile eguneratua erabiltzea gomendatzen dizugu (edo Internet Explorer-en bateragarritasun modua desaktibatzea). Bitartean, laguntza etengabea bermatzeko, gunea estilorik eta JavaScript gabe bistaratuko dugu.
Silice-partikula porotsuak sol-gel metodo baten bidez prestatu ziren partikula makroporotsuak lortzeko aldaketa batzuekin. Partikula hauek gehikuntza itzulgarriko fragmentation chain transfer (RAFT) polimerizazioaren bidez deribatu ziren N-fenilmaleimida-metilvinilisozianatoarekin (PMI) eta estirenoarekin N-fenilmaleimida intercalación de poliestireno (180N) altzairu herdoilgaitza (180N) altzairu herdoilgaitza. mm id) minda ontziratuz ontziratu ziren. Bost peptidoz osatutako nahasketa peptidiko baten PMP zutabeen bereizketa ebaluatua (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkefalina) kromatografia-baldintzak digestioa eta HA digestioa, giza sekrezio-baldintza optimoa eta HA digestioa. Peptido-nahastearen plaka oretikoen kopurua 280.000 plaka/m²-koa da. Garatutako zutabearen bereizketa-errendimendua Ascentis Express RP-Amide zutabe komertzialarekin alderatuz gero, ikusi zen PMP zutabearen bereizketa-errendimendua zutabe komertzialaren baino handiagoa zela bereizketa-eraginkortasunari eta bereizmenari dagokionez.
Azken urteotan, industria biofarmazeutikoa hedatzen ari den merkatu global bat bihurtu da, merkatu-kuota nabarmen handituz. Industria biofarmazeutikoaren hazkunde lehergarriarekin1,2,3, peptidoen eta proteinen analisia oso desiragarria da. Helburuko peptidoaz gain, hainbat ezpurutasun sortzen dira peptidoen sintesian, eta horrela, peptidoen gorputzaren garbiketa kromatografikoa eta peptidoen zelulen analisia nahi den zelulen garbitasun kromatografikoa eta peptidoen zelulen purutasuna lortzeko. Oso erronka zaila da lagin bakarrean detekta daitezkeen espezie ugari dagoelako. Masa-espektrometria peptidoen eta proteinen sekuentziaziorako tresna eraginkorra den arren, lagin horiek masa-espektrometroan pasaldi batean injektatzen badira, bereizketa ez da ezin hobea izango. 5,6.Gainera, fase likidoaren bereizketan, analitoak eskualde estuetan zentratu daitezke, horrela analito horiek kontzentratzen eta MS detektatzeko sentikortasuna hobetuz.Kromatografia likidoak (LC) nabarmen egin du aurrera azken hamarkadan eta analisi proteomikoan teknika ezaguna bihurtu da7,8,9,10.
Alderantzizko faseko kromatografia likidoa (RP-LC) oso erabilia da nahasketa peptidikoen arazketa eta bereizketa egiteko, octadecyl-eraldatutako silizea (ODS) erabiliz fase geldikor gisa. Analito hauekin elkarreragiteko eta eusteko zati polarrak eta ez-polarrak dituzten proteinak eta proteinak16.Modu mistoko kromatografia, interakzio multimodalak ematen dituena, RP-LC-ren alternatiba izan daiteke peptidoak, proteinak eta beste nahaste konplexuak bereizteko. 21.Modu mistoko fase geldikorrak (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) egokiak dira peptidoen eta proteina-bereizketetarako, talde polar eta ez-polarren presentziagatik22,23,24,25,26,27,28 .Era berean, polar intercalating talde polar-selektiboa eta kobalentzia-fase kobalentea duten polar bereizketa ona erakusten dute. r analitoak, bereizketa analitoaren eta fase geldikorraren arteko elkarrekintzaren araberakoa baita.Interakzio multimodalak 29, 30, 31, 32. Duela gutxi, Zhang et al.30-ek dodecil-amaituriko poliamina fase geldiko bat prestatu zuen eta arrakastaz bereizi zituen hidrokarburoak, antidepresiboak, flavonoideak, nukleosidoak, estrogenoak eta beste hainbat analito. Intercalator polarrak talde polarrak eta ez-polarrak ditu, beraz, peptido eta proteinak bereizteko erabil daiteke. 8 zutabe) komertzialki eskuragarri daude Ascentis Express RP-Amide zutabe izenarekin, baina zutabe hauek 33 amina aztertzeko soilik erabiltzen dira.
Oraingo ikerketan, fase geldikorrean txertatutako polar bat (N-fenilmaleimida txertatutako poliestirenoa) prestatu eta ebaluatu zen HSAren peptidoen eta tripsina digestioak bereizteko.Fase geldikorrak hurrengo estrategia erabiliz prestatu ziren.Silice partikula porotsuak gure aurreko argitalpenean emandako prozeduraren arabera prestatu ziren. Poro-tamaina handiko silize partikulak prestatzeko egokitu zen. Bigarrenik, ligando berri bat, fenilmaleimida-metil binilo isozianatoa, sintetizatu zen eta silize partikulak deribatuz erabili zen txertatutako fase geldiko polar bat prestatzeko. Ondoko fase geldikoa altzairu herdoilgaitzezko zutabe batean bildu zen (100 × 1,8 mm-ko id) d zutabearen barruan.Bost peptidoz osatutako peptido-nahasteen zutabe paketatuen bereizketa ebaluatzea;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) eta Trypsin digestioa giza serum albuminaren (HAS). Peptido-nahasketa eta tripsina-digestioa HSAren bereizketa onarekin bereizten zen. -Amida zutabea. Bai peptidoak bai proteinak ondo ebatzita eta eraginkorrak zirela ikusi zen PMP zutabean, Ascentis Express RP-Amide zutabea baino eraginkorragoa zela.
PEG (polietilenglicol), urea, azido azetikoa, trimetoxi ortosilikatoa (TMOS), trimetil klorosilanoa (TMCS), tripsina, giza serum albumina (HSA), amonio kloruroa, urea, hexano metildisilazanoa (HMDS), metakriloil kloruroa (MC-4-POLC), (HP-4-POLC), (HP-4-POLC) Sigma-Aldrich-en (St. Louis, MO, AEB) erositako azetonitriloa (ACN), metanola, 2-propanola eta azetona.
Urea (8 g), polietilenglikol (8 g) eta 0,01 N azido azetiko 8 ml nahastu ziren 10 minutuz, eta, ondoren, 24 ml TMOS gehitu zizkioten izotz-hotzean. Erreakzio-nahasketa 40 °C-tan berotu zen 6 orduz eta, ondoren, 120 °C-tan 120 °C-tan isurtzen zen materiala autoklabean hondarra 8 orduz altzairu herdoilgaitzean isurtzen zen. 70 °C-tan 12 orduz.Lehortutako masa biguna labean leun ehotzen zen eta 550 °C-tan kaltzitu zen 12 orduz. Hiru lote prestatu eta ezaugarritu ziren partikulen tamainan, poroen tamainan eta azaleran erreproduzigarritasuna aztertzeko.
Silice partikulen gainazaleko aldaketaren bidez presintetizatutako ligando fenilmaleimida-metilvinilisozianatoarekin (PCMP) eta jarraian estirenoarekin polimerizazio erradialaz, talde polarra duen konposatu bat prestatu zen.Agregatuen eta poliestireno-kateen fase geldikorra. Prestaketa-prozesua deskribatzen da jarraian.
N-fenilmaleimida (200 mg) eta metil binilo isozianatoa (100 mg) tolueno lehorrean disolbatu ziren, eta 0,1 ml 2,2′-azoisobutironitrilo (AIBN) erreakzio matrazean gehitu ziren fenilmaleimida-metil binilo isozianatoa prestatzeko. 40 °C-tan labean sartu 3 orduz.
Lehortutako silize partikulak (2 g) tolueno lehorrean (100 ml) sakabanatu ziren, nahastu eta 500 ml-ko hondo biribileko matraz batean sonikatu 10 minutuz. PMCP (10 mg) toluenoan disolbatu zen eta tantaka gehitu zen erreakzio-matrazean tantaka inbutu baten bidez. 0 °C 3 orduz. Ondoren, PMCP-rekin loturiko silize partikulak (100 g) toluenoan (200 ml) disolbatu ziren eta 4-hidroxi-TEMPO (2 ml) gehitu zen katalizatzaile gisa 100 µL dibutiltin dilauratoaren aurrean. Nahasketa 50 °C-tan irabiatu, 50 °C-tan iragazi eta 8 orduz iragazi zen.
Estirenoa (1 mL), benzoil peroxidoa BPO (0,5 mL) eta TEMPO-PMCPri erantsitako silize partikulak (1,5 g) toluenoan barreiatu eta nitrogenoarekin purkatu ziren. Estirenoaren polimerizazioa 100 °C-tan egin zen 12 orduz. Ondorioz produktua metanolarekin garbitu zen eta erreakzio orokorrean 60 °C irudian erakusten da.
Laginak 393 K-tan desgasifikatu ziren ordubetez, 10-3 Torr baino gutxiagoko hondar-presioa lortzeko.P/P0 = 0,99 presio erlatiboan adsorbatutako N2 kantitatea erabili zen poroen bolumen osoa zehazteko.Silize-partikulen morfologia biluzi eta ligando-loturiko silize partikulen morfologia aztertu zen. loturiko silize partikulak) aluminiozko zutabe batean jarri ziren karbonozko zinta itsasgarria erabiliz. Laginetan urrea xaflatu zen Q150T sputter-estaldura erabiliz, eta 5 nm-ko Au geruza bat jarri zen laginetan. Honek prozesuaren eraginkortasuna hobetzen du tentsio baxuak erabiliz eta ale fina eta hotza sputtering eskaintzen du. n (Worcestershire, Erresuma Batua) Mastersizer 2000 partikula-tamaina analizatzailea erabili zen partikulen tamainaren banaketa lortzeko. Silice-partikula biluziak eta ligando-loturiko silize-partikulak (5 mg bakoitza) 5 ml isopropanoletan barreiatu ziren, 10 minutuz sonikatu, 5 minutuz zurrunbilo egin eta 5 minutuz zurrunbilo egin zuten eta Mastersizer minutuko analisi-erritmoko 5 minutuko abiaduran egin zen. 30 eta 800 °C arteko tenperatura tartea.
Beiraz estalitako altzairu herdoilgaitzezko zutabe estuak (100 × 1,8 mm dimentsiokoak) minda ontziratzeko metodoa erabiliz ontziratu ziren, Erref.n erabilitako prozedura bera aplikatuz.31. Altzairu herdoilgaitzezko zutabe bat (beiraz betetakoa, 100 × 1,8 mm-ko ID) 1 µm-ko frita duen irteera-konexio batekin konektatu zen minda ontziratzaile batera (Alltech Deerfield, IL, AEB). Prestatu fase geldikorreko minda 150 mg fase geldikorrean esekituta eta disolbatzaile gisa erabilitako 1,2 ml baino gehiago disolbatzaile zutabea baino gehiago bidali. Disolbatzaile propultsatzailea. Bete zutabea sekuentzialki 100 MP 10 minutuz, 80 MP 15 minutuz eta 60 MP 30 minutuz presioa aplikatuz. Paketatzean, bibrazio mekanikoa aplikatu zen GC zutabe astingailuekin (Alltech, Deerfield, IL, AEB) zutabearen paketatze uniformea ​​bermatzeko. minda ontziratzeko unitatetik eta konektatu beste fiting bat sarrerara eta LC sistemara bere funtzionamendua egiaztatzeko.
LC ponpa (10AD Shimadzu, Japonia), injektore (Valco (AEB) C14 W.05) 50nL injekzio begizta, mintz desgasifikatzailea (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS leiho kapilarra eraiki zen. paketatzeak, kapilarrak (50 μm id 365 eta erreduktore-union kapilarrak (50 μm) batasun murriztearen 1/16″-ko irteeran instalatu ziren. Datuen bilketa eta prozesaketa kromatografikoa Multichro 2000 softwarearen bidez egin ziren. Monitorizazioa 254 nm-tan Analytes UV absorbance for tested for.
Giza serumeko albumina, hauts liofilizatua, % ≥ 96 (agarosa gel elektroforesia) 3 mg tripsinarekin (1,5 mg), 4,0 M urearekin (1 mL) eta 0,2 M amonio bikarbonatoarekin (1 mL) nahastuta. % TFA. Iragazi disoluzioa eta gorde 4 °C-tik behera.
Peptido-nahasketak eta HSA tripsina-digestioak bereizita ebaluatu dira PMP zutabetan. Egiaztatu peptido-nahastearen eta HSA-ren tripsina-digestioaren bereizketa PMP zutabearen bidez eta alderatu emaitzak Ascentis Express RP-Amide zutabarekin. Plaka-zenbaki teorikoa honela kalkulatzen da:
FIG.ean silize hutsezko partikulen eta ligandoekin loturiko silize partikulen SEM irudiak erakusten dira.2 .SEM-ko silize-partikulen (A, B) irudiek erakusten dute, gure aurreko ikerketen aldean, partikula hauek esferikoak direla, eta horietan partikulak luzangak edo simetria irregularra dute.Ligandoekin loturiko silize-partikulen gainazala (C, D) silize-partikulen gainazala leunagoa da, silize-partikulen gainazaleko polizikulen estalduraren ondorioz izan daitekeena.
Mikroskopio elektronikoko silize partikulen (A, B) eta ligandoekin loturiko silize partikulen (C, D) irudiak.
silize partikula biluzien eta ligando-loturiko silize partikulen partikulen tamainaren banaketak 3 (A) irudian erakusten dira. Bolumenean oinarritutako partikulen tamainaren banaketa-kurbek erakutsi zuten silize partikulen tamaina aldaketa kimikoaren ondoren handitu zela (3A. Irudia). Oraingo ikerketako eta aurreko azterketako silize partikulen partikula-tamainaren banaketa datuak 1. Taulan konparatzen dira. , 3,05 μm (poliestirenoari loturiko silize partikulak) ad(0,5) balioarekin alderatuta, gure aurreko azterketarekin alderatuta.34. Sorte honek partikulen tamainaren banaketa estuagoa izan zuen gure aurreko ikerketarekin alderatuta, erreakzio-nahasketan PEG, urea, TMOS eta azido azetikoaren proportzio desberdinengatik. aldez aurretik aztertutakoa. Horrek esan nahi du estirenoarekin silize partikulen gainazaleko funtzionalizazioak poliestireno geruza bat (0,97 µm) soilik metatzen zuela silizearen gainazalean, PMP fasean, berriz, geruzaren lodiera 1,38 µm izan zen.
Partikulen tamainaren banaketa (A) eta poroen tamainaren banaketa (B) silize hutsezko partikulen eta ligandoei loturiko silize partikulen.
Oraingo ikerketako silize partikulen poro-tamaina, poro-bolumena eta azalera azalera 1 (B) taulan ematen dira. Silize-partikulen PSD profilak eta ligando-loturiko silize-partikulen PSD profilak 3 (B) irudian erakusten dira. Emaitzak gure aurreko ikerketaren parekoak dira. 1(B) taulan agertzen den bezala, eta kurbaren aldaketa 3(B) irudian ageri da. Era berean, silize partikulen poro-bolumena 0,67tik 0,58 cm3/g-ra jaitsi zen aldaketa kimikoaren ondoren. Gaur egun aztertzen diren silize partikulen azalera espezifikoa 116 m2/g da, gure aurreko azterketan (124 m2/g) azaleraren parekoa dena. silize partikulen /g) ere 116 m2/g-tik 105 m2/g-ra jaitsi zen aldaketa kimikoaren ondoren.
Fase geldikorraren oinarrizko analisiaren emaitzak 2. taulan agertzen dira. Egungo fase geldikorraren karbono-karga % 6,35 da, hau da, gure aurreko ikerketaren karbono-karga baino txikiagoa (poliestirenozko loturiko silize partikulak, % 7,93 eta % 10,21, hurrenez hurren) Fenilmaleimida-metilvinilisozianatoa (PCMP) eta 4-hidroxi-TEMPO bezalako nds erabili ziren. Egungo fase geldikorraren nitrogenoaren pisuaren ehunekoa % 2,21 da, aurreko ikerketetan nitrogenoaren pisuaren % 0,1735 eta % 0,85aren aldean, hurrenez hurren. 4) eta (5) % 2,7 eta % 2,9 ziren, hurrenez hurren, eta azken produktuaren (6) karbono-karga % 6,35ekoa izan zen, 2. taulan ikusten den bezala. Pisu-galera PMP geldialdiko fasearekin egiaztatu zen, eta TGA kurba 4. Irudian ageri da. TGA kurbak pisu galera erakusten du % 8.6ko pisu-galera, zeina % 8.6ko pisu galera erakusten du, eta karbonoaren % 8.6ko pisu galera erakusten du, % 8.6ko karbonoaren karga ere ez baitu adostasun ona duen karbonoarekin. , O eta H.
Fenilmaleimida-metilbinilisozianato-ligandoa silize partikulen gainazalean aldatzeko aukeratu zen, fenilmaleimida-talde polarrak eta binilisozianato-taldeak dituelako. Binilo-isozianato-taldeek estirenoarekin gehiago erreakziona dezakete polimerizazio erradikal biziaren bidez. Bigarren arrazoia da fase analytiko, estatiko eta analitiko indartsuen arteko interakzio moderatua duen talde bat sartzea. imida zatiak ez du karga birtualik pH normalean.Fase geldikorraren polaritatea estireno kantitate optimoaren eta erradikal askeen polimerizazioaren erreakzio-denboraren arabera kontrolatu daiteke. Erreakzioaren azken urratsa (erradikal askeen polimerizazioa) kritikoa da eta fase geldikorraren polaritatea alda dezake. Azterketa elementala egin zen. fase geldikorrean eta alderantziz.Estireno-kontzentrazio ezberdinekin prestatutako SPek karbono-karga desberdinak dituzte.Berriro, fase geldiko hauek altzairu herdoilgaitzezko zutabeetan kargatu eta haien errendimendu kromatografikoa egiaztatu (selektibitatea, bereizmena, N balioa, etab.).Esperientzia hauetan oinarrituta, formulazio optimizatu bat aukeratu zen PMP geldikorreko fasea prestatzeko eta kontrolatutako polaritate analitiko ona bermatzeko.
Bost peptido-nahasketa (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ere ebaluatu ziren PMP zutabe bat erabiliz fase mugikorra erabiliz;60/40 (v/v) azetonitrilo/ura (% 0,1 TFA) 80 μL/min-ko emari-abiaduran. Eluzio-baldintza optimoetan, zutabe bakoitzeko plaka-zenbaki teorikoa (N) (100 × 1,8 mm id) 20.000 ± 100 da (200.000 plaka P/m²-ko hiru zutabeak ematen ditu). 5A irudian gramoak erakusten dira.Analisi azkarra PMP zutabe batean fluxu-abiadura handian (700 μL/min), bost peptido eluitu ziren minutu batean, N balioak oso onak ziren, 13.500 ± 330 zutabe bakoitzeko (100 × 1.8 mm id), 135.000 plaka (Irudia 50000000000000000000000001) .8 mm id) PMP fase geldikorreko hiru lote ezberdinekin bildu ziren erreproduzigarritasuna egiaztatzeko. Zutabe bakoitzeko analito-kontzentrazioa eluzio-baldintza optimoak eta N plaka teoriko kopurua eta atxikipen-denbora erabiliz zutabe bakoitzean saiakuntza-nahasketa bera bereizteko.
Peptido-nahastearen bereizketa PMP zutabean (B) eta Ascentis Express RP-Amide zutabean (A);fase mugikorra 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP zutabeen dimentsioak (100 × 1,8 mm id);analitikoa Konposatuen eluzio-ordena: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) eta 5 (leuzina) azido-enkefalina)).
PMP zutabe bat (100 × 1,8 mm id) ebaluatu zen giza serum albuminaren digestio triptikoen bereizketa errendimendu handiko kromatografia likidoan. 6. Irudiko kromatogramak erakusten du lagina ondo bereizita dagoela eta bereizmena oso ona dela.HSA digestioak 100 µL/min-ko emari-abiadura erabiliz aztertu ziren, fase mugikorra eta %70FAitriloan eta %70FAitrilean. kromatograma (6. irudia), HSA digestioa 17 peptidori dagozkion 17 gailurtan banatu da. HSA digestioan gailur bakoitzaren bereizketa-eraginkortasuna kalkulatu da eta balioak 5. taulan ematen dira.
HSAren digestio triptiko bat (100 × 1,8 mm id) bereizi zen PMP zutabe batean;emaria (100 µL/min), fase mugikorra 60/40 azetonitrilo/ura %0,1 TFArekin.
non L zutabearen luzera den, η fase mugikorraren biskositatea, ΔP zutabearen atzera-presioa eta u fase mugikorren abiadura lineala den. PMP zutabearen iragazkortasuna 2,5 × 10-14 m2 zen, emaria 25 μL/min eta 60/40 v/v ACN/uraren 60/40 v/v ACN/uraren antzekoa zen PMP 8 mm-ko zutabearen iragazkortasuna. Gure aurreko azterketa Erref.34.Azaletik porotsuzko partikulaz jositako zutabearen iragazkortasuna hau da: 1,7 × 10-15 1,3 μm partikularentzat, 3,1 × 10-15 1,7 μm partikularentzat, 5,2 × 10-15 eta 2,5 × 10-14 m2 partikularentzat. PMP fasearen iragazkortasuna 5 μm-ko core-shell partikulen antzekoa da.
non Wx kloroformoz jositako zutabearen pisua den, Wy metanolez jositako zutabearen pisua den eta ρ disolbatzailearen dentsitatea den.Metanolaren (ρ = 0,7866) eta kloroformoaren dentsitateak (ρ = 1,484). Aurretik aztertu ditugun 31 0,63 eta 0,55 ziren, hurrenez hurren.Horrek esan nahi du urea-ligandoen presentziak fase geldikorraren iragazkortasuna murrizten duela.Bestalde, PMP zutabearen porositate osoa (100 × 1,8 mm id) 0,60 da. faseetan C18 ligandoak silize partikulei kate lineal gisa lotzen zaizkie, eta poliestireno motako fase geldietan, berriz, A polimero geruza lodi samarra sortzen da haren inguruan. Esperimentu tipiko batean, zutabearen porositatea honela kalkulatzen da:
7A,B irudiak PMP zutabea (100 × 1,8 mm id) eta Ascentis Express RP-Amide zutabea (100 × 1,8 mm id) erakusten ditu eluzio-baldintza berdinak erabiliz (hau da, 60/40 ACN/H2O eta % 0,1 TFA).) van Deemter lursailarena.Hautatutako peptido nahasketak (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL-tan prestatu ziren. Bi zutabeetarako gutxieneko emaria 800 µL/min da. s Express RP-Amide zutabea 2,6 µm eta 3,9 µm ziren, hurrenez hurren. HETP balioek PMP zutabearen bereizketa-eraginkortasuna (100 × 1,8 mm id) merkatuan eskuragarri dagoen Ascentis Express RP-Amide zutabea baino askoz hobea dela adierazten dute (100 × 1,8 mm id). azterketa.PMP zutabearen bereizketa-eraginkortasun handiagoa (100 × 1,8 mm id) Ascentis Express RP-Amide zutabearekin alderatuta, partikulen forman, tamainan eta egungo lanean erabilitako zutabeen paketatze prozeduren hobekuntzetan oinarritzen da34.
(A) van Deemter grafikoa (HETP versus fase mugikorren abiadura lineala) PMP zutabea (100 × 1,8 mm id) erabiliz lortutako 60/40 ACN/H2O % 0,1 TFA-n.(B) van Deemter grafikoa (HETP versus fase mugikorren abiadura lineala) Ascentis Express RP-Amide) × A201000000000000000000000000000000000000000000000000003 %0,1eko TFArekin.
Polar txertatutako poliestireno-fase geldikorrak prestatu eta ebaluatu ziren peptido-nahaste sintetikoen eta giza serum albuminaren (HAS) tripsina-digestioak bereizteko errendimendu handiko kromatografia likidoan. PMP zutabeen errendimendu kromatografikoa peptido-nahasteetarako bikaina da bereizketa-eraginkortasunean eta bereizmenean. , fase geldikorraren sintesia kontrolatua eta zutabeen paketatze konplexua. Bereizte-eraginkortasun handiaz gain, zutabe atzeko presio baxua fluxu-abiadura handietan fase geldialdi honen beste abantaila bat da. PMP zutabeek erreproduzigarritasun ona erakusten dute eta peptido-nahasteen analisirako eta tripsina-digestiorako erabil daitezke hainbat proteinen. Zutabe hau erabili nahi dugu. proteinak eta antigorputz monoklonalak bereizteko ere ebaluatuko da.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptido Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Kromatografia.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Gaixotasun infekziosoen tratamendurako diseinatutako peptido aktibo hobetuak.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Kromatografia.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Kromatografia likido-masa-espektrometria aurreratuak metabolomika eta proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019) modu zabalean sartzea ahalbidetzen du.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC-ren papera drogen garapenean.J.Ira. Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Bereizketa azkarretarako ultrapresio likidoaren kromatografiaren oinarrizko alderdi praktikoak eta praktikoak.J.Ira. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Errendimendu ultra-altuko kromatografia likidoaren aplikazioa drogen garapenean.J.Kromatografia.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Olio-ura-barne fase handiko emultsioetatik prestatutako hidrogel makroporoso monolitikoak enterobirusen arazketa eraginkorra lortzeko.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA The role of liquid chromatography in proteomics.J.Kromatografia.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Emerging trends in reverse-phase liquid chromatography separations of therapeutic peptides and proteins: theory and applications.J.Farmazia.Zientzia Biomedikoa.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Peptidoen bi dimentsioko bereizketa RP-RP-HPLC sistema erabiliz pH balio desberdinak erabiliz, lehen eta bigarren bereizketa dimentsioetan.J.Ira. Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.C18 sub-2 μm guztizko eta azaleko partikula porotsuekin jositako eraginkortasun handiko zutabe kromatografikoen masa-transferentziaren ezaugarriak eta errendimendu zinetikoa ikertu ziren.J.Ira. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Recent trends and analytical challenges in the isolation, identification and validation of plant bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-x (02018-x).
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Downstream processing of therapeutic peptides by preparative liquid chromatography by.Molecule (Basilea, Suitza) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Modu mistoko kromatografia eta bere aplikazioa biopolimeroetan.J.Kromatografia.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Proteinen kromatografia-modu mistorako ligandoak: printzipioa, karakterizazioa eta diseinua.J.Bioteknologia.144(1), 3-11 (2009).