از اینکه از Nature.com بازدید کردید متشکریم. نسخه مرورگری که استفاده می کنید پشتیبانی محدودی از CSS دارد. برای بهترین تجربه، توصیه می کنیم از یک مرورگر به روز شده استفاده کنید (یا حالت سازگاری را در اینترنت اکسپلورر خاموش کنید).
ذرات سیلیکا متخلخل با روش سل-ژل با برخی تغییرات برای به دست آوردن ذرات ماکرو متخلخل تهیه شدند. این ذرات با پلیمریزاسیون برگشت پذیر انتقال زنجیره تکه تکه شدن (RAFT) با N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) و استایرن مشتق شدند تا N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) و استایرن آماده شود تا N-phenylmale. ستون‌های فولادی کمتر (100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) با بسته‌بندی دوغابی بسته‌بندی شدند. جداسازی ستون PMP از یک مخلوط پپتیدی متشکل از پنج پپتید (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Tyr-Arg) و عملکرد سرمی-گلی-Gly-Serphalin، عملکرد ion-Ile-Gly-Serphalin انسانی ارزیابی شد. آلبومین (HAS). تحت شرایط شستشوی بهینه، تعداد صفحات نظری مخلوط پپتیدی به 280000 پلیت در متر مربع می رسد. با مقایسه عملکرد جداسازی ستون توسعه یافته با ستون تجاری Ascentis Express RP-Amide، مشاهده شد که عملکرد جداسازی ستون PMP از نظر کارایی تفکیک ستون تجاری و جداسازی ستون جداسازی برتر است.
در سال‌های اخیر، صنعت بیوداروسازی به یک بازار جهانی در حال گسترش با افزایش قابل توجهی در سهم بازار تبدیل شده است. با رشد انفجاری صنعت بیوداروسازی 1،2،3، تجزیه و تحلیل پپتیدها و پروتئین‌ها بسیار مورد نظر است. علاوه بر پپتید هدف، چندین ناخالصی در طول سنتز پپتید و تجزیه و تحلیل خالص‌سازی مورد نظر نیاز دارد. پروتئین‌ها در مایعات بدن، بافت‌ها و سلول‌ها به دلیل تعداد زیاد گونه‌های بالقوه قابل تشخیص در یک نمونه، یک کار بسیار چالش برانگیز است. اگرچه طیف‌سنجی جرمی ابزار مؤثری برای تعیین توالی پپتید و پروتئین است، اگر چنین نمونه‌هایی در یک مرحله به طیف‌سنج جرمی تزریق شوند، جداسازی ایده‌آل نخواهد بود. آنالیت هایی که در یک زمان معین وارد طیف سنج جرمی می شوند4،5،6. علاوه بر این، در طول جداسازی فاز مایع، آنالیت ها را می توان در مناطق باریک متمرکز کرد، در نتیجه این آنالیت ها را متمرکز کرده و حساسیت تشخیص MS را بهبود می بخشد. کروماتوگرافی مایع (LC) به طور قابل توجهی در دهه گذشته پیشرفت کرده است و به یک تکنیک آنالیز رایج در پروتئه تبدیل شده است.
کروماتوگرافی مایع فاز معکوس (RP-LC) به طور گسترده برای خالص سازی و جداسازی مخلوط های پپتیدی با استفاده از سیلیس اصلاح شده با اکتادسیل (ODS) به عنوان فاز ثابت 11، 12، 13 استفاده می شود. با این حال، فازهای ثابت RP، جداسازی رضایت بخشی پپتیدها، ساختار پیچیده 5 و پروتئین ها را فراهم نمی کند. فازهای ثابت طراحی شده برای تجزیه و تحلیل پپتیدها و پروتئین‌ها با نیمه‌های قطبی و غیرقطبی برای برهمکنش و حفظ این آنالیت‌ها مورد نیاز است. و جداسازی پروتئین 17،18،19،20،21. فازهای ثابت حالت مختلط (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، intercalation قطبی/RPLC) به دلیل وجود هر دو گروه قطبی و غیرقطبی 22،23،24،24،25،25،25،26،27 قطبی، دارای فازهای هم‌قدرت، هم‌قدرت‌های قطبی و هم‌اندازه‌ای. گروه های lar قدرت جداسازی خوب و گزینش منحصر به فرد را برای آنالیت های قطبی و غیر قطبی نشان می دهند، زیرا جداسازی به برهمکنش بین آنالیت و فاز ساکن بستگی دارد.تعاملات چندوجهی 29، 30، 31، 32. اخیرا، ژانگ و همکاران.30 یک فاز ثابت پلی آمین پایان یافته با دودسیل تهیه کرد و با موفقیت هیدروکربن ها، ضد افسردگی ها، فلاونوئیدها، نوکلئوزیدها، استروژن ها و چندین آنالیت دیگر را جدا کرد. اینترکالاتور قطبی دارای هر دو گروه قطبی و غیرقطبی است، بنابراین می توان از آن برای جدا کردن پپتیدها و پروتئین هایی استفاده کرد که دارای ستون های آبگریز و آبگریز هستند. ستون‌های ed C18) با نام تجاری ستون‌های Ascentis Express RP-Amide به صورت تجاری در دسترس هستند، اما این ستون‌ها فقط برای تجزیه و تحلیل آمین 33 استفاده می‌شوند.
در مطالعه حاضر، یک فاز ثابت قطبی (پلی استایرن تعبیه شده N-phenylmaleimide) تهیه و برای جداسازی پپتیدها و مواد هضم تریپسین HSA مورد ارزیابی قرار گرفت. G)، TMOS، اسید استیک آب برای تهیه ذرات سیلیس با اندازه منافذ بزرگ تنظیم شد. دوم، یک لیگاند جدید، phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate، سنتز شد و برای مشتق سازی ذرات سیلیس برای تهیه فاز ثابت قطبی تعبیه شده استفاده شد. طرح بسته بندی. بسته بندی ستون با ارتعاش مکانیکی کمک می کند تا اطمینان حاصل شود که بستری همگن در داخل ستون تشکیل شده است.(Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، Leucine Enkephalin) و تریپسین هضم آلبومین سرم انسانی (HAS). مشاهده شد که هر دو پپتید و پروتئین در ستون PMP که کارآمدتر از ستون Ascentis Express RP-Amide بود، به خوبی حل و فصل شده و کارآمد هستند.
PEG (پلی اتیلن گلیکول)، اوره، اسید استیک، تری متوکسی ارتوسیلیکات (TMOS)، تری متیل کلروسیلان (TMCS)، تریپسین، آلبومین سرم انسانی (HSA)، کلرید آمونیوم، اوره، هگزان متیل دیسیلازان (HMDS)، متاکریلویل استی اکسیدان، متاکریلویل پراکسیدروکسید (MCS) BPO)، استونیتریل درجه HPLC (ACN)، متانول، 2-پروپانول، و استون خریداری شده از Sigma-Aldrich (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده).
مخلوطی از اوره (8 گرم)، پلی اتیلن گلیکول (8 گرم) و 8 میلی لیتر اسید استیک 0.01 نیوتن به مدت 10 دقیقه به هم زده شد و سپس 24 میلی لیتر TMOS در شرایط سرد یخ به آن اضافه شد. توده نرم خشک شده به مدت 12 ساعت در دمای 70 درجه سانتی گراد خشک شد.
با اصلاح سطح ذرات سیلیس با لیگاند از پیش سنتز شده فنیلمالیمید-متیل وینیل ایزوسیانات (PCMP) و به دنبال آن پلیمریزاسیون شعاعی با استایرن، یک ترکیب حاوی گروه قطبی تهیه شد.فاز ثابت برای سنگدانه ها و زنجیره های پلی استایرن. فرآیند آماده سازی در زیر توضیح داده شده است.
N-phenylmaleimide (200 میلی گرم) و متیل وینیل ایزوسیانات (100 میلی گرم) در تولوئن خشک حل شدند و 0.1 میلی لیتر از 2,2'-azoisobutyronitrile (AIBN) به فلاسک واکنش اضافه شد تا فنیل مالئیمید-متیل وینیل (مخلوط وینیل متیل فیلتر شده در 6 ساعت PM هک شده و ایزوسیانات 6 ساعته فیلتر شد). در فر با دمای 40 درجه سانتی گراد به مدت 3 ساعت خشک کنید.
ذرات سیلیس خشک (2 گرم) در تولوئن خشک (100 میلی‌لیتر) پراکنده شدند، به مدت 10 دقیقه در یک فلاسک 500 میلی‌لیتری ته گرد و تحت فراصوت قرار گرفتند. 60 درجه سانتیگراد به مدت 3 ساعت. سپس ذرات سیلیس متصل به PMCP (100 گرم) در تولوئن (200 میلی لیتر) حل شد و 4-هیدروکسی-TEMPO (2 میلی لیتر) در حضور 100 میکرولیتر دی بوتیل قلع دیلاورات به عنوان کاتالیزور اضافه شد. مخلوط به مدت 8 درجه سانتیگراد در 50 درجه سانتیگراد صاف و به مدت 3 ساعت در دمای 50 درجه سانتیگراد هم زده شد. .
استایرن (1 میلی‌لیتر)، بنزوئیل پراکسید BPO (0.5 میلی‌لیتر)، و ذرات سیلیس متصل به TEMPO-PMCP (1.5 گرم) در تولوئن پراکنده شدند و با نیتروژن پاکسازی شدند. پلیمریزاسیون استایرن در دمای 100 درجه سانتیگراد به مدت 12 ساعت انجام شد. me در شکل 1 نشان داده شده است.
نمونه ها در دمای 393 کلوین به مدت 1 ساعت گاز زدایی شدند تا فشار باقیمانده کمتر از 10-3 Torr به دست آید. مقدار N2 جذب شده در فشار نسبی P/P0 = 0.99 برای تعیین حجم کل منافذ استفاده شد. نمونه‌های خشک شده (ذرات سیلیس لخت و سیلیس متصل به لیگاند) روی یک ستون آلومینیومی با استفاده از نوار کربنی چسبنده قرار گرفتند. طلا با استفاده از یک پوشش کندوپاش Q150T روی نمونه‌ها آبکاری شد و یک لایه طلای 5 نانومتری روی نمونه‌ها رسوب کرد. ham، MA، ایالات متحده) از آنالیز عنصری Flash EA1112 برای آنالیز عنصری استفاده شد. برای بدست آوردن توزیع اندازه ذرات از تحلیلگر اندازه ذرات Malvern (Worcestershire، UK) Mastersizer 2000 استفاده شد. دقیقه، و بر روی نیمکت نوری Mastersizer قرار گرفت. تجزیه و تحلیل حرارتی با سرعت 5 درجه سانتیگراد در دقیقه در محدوده دمایی 30 تا 800 درجه سانتیگراد انجام شد.
ستون‌های با سوراخ فولادی ضد زنگ با روکش شیشه‌ای با ابعاد (100 × 1.8 میلی‌متر id) با استفاده از روش بسته‌بندی دوغاب بسته‌بندی شدند، با استفاده از همان رویه مورد استفاده در Ref.31. یک ستون فولادی ضد زنگ (با روکش شیشه، 100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) با اتصالات خروجی حاوی فریت 1 میکرومتری به یک بسته‌بندی دوغاب (Alltech Deerfield، IL، ایالات متحده آمریکا) متصل شد. یک دوغاب فاز ثابت با تعلیق کردن 150 میلی‌گرم میلی‌اول میلی‌لیتر از ستون ذخیره‌سازی و ارسال 150 میلی‌گرم میلی‌اول در فاز ثابت آماده کنید. به عنوان حلال دوغاب و همچنین حلال پیشران استفاده می شود. با اعمال فشارهای 100 MP به مدت 10 دقیقه، 80 MP برای 15 دقیقه و 60 MP برای 30 دقیقه، ستون را به ترتیب پر کنید. بسته بندی کنید و فشار را به آرامی رها کنید تا از هر گونه آسیب در ستون جلوگیری شود. ستون را از واحد بسته بندی دوغاب جدا کنید و اتصالات دیگری را به ورودی و به سیستم LC وصل کنید تا عملکرد آن را بررسی کنید.
یک پمپ LC (10AD Shimadzu، ژاپن)، انژکتور (Valco (USA) C14 W.05) با حلقه تزریق 50nL، گاز زدا غشایی (Shimadzu DGU-14A)، پنجره مویرگی UV-VIS آشکارساز دستگاه میکروالسی ویژه (UV-2075) و با به حداقل رساندن اثر microcolum اضافی شیشه‌ای ساخته شد. پس از بسته‌بندی، مویرگ‌ها (50 میکرومتر id 365 و مویرگ‌های پیوند کاهنده (50 میکرومتر) در خروجی 1/16 اینچ اتحادیه کاهنده نصب شدند. جمع‌آوری داده‌ها و پردازش کروماتوگرافی با استفاده از Multichro 2000 انجام شد. inPro8 (Northampton، MA).
آلبومین سرم انسانی، پودر لیوفیلیزه، ≥ 96% (الکتروفورز ژل آگارز) 3 میلی گرم مخلوط با تریپسین (1.5 میلی گرم)، 4.0 مولار اوره (1 میلی لیتر)، و 0.2 مولار بی کربنات آمونیوم (1 میلی لیتر). 0.1% TFA. محلول را فیلتر کرده و در دمای زیر 4 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
جداسازی مخلوط‌های پپتید و هضم‌های تریپسین HSA به طور جداگانه بر روی ستون‌های PMP ارزیابی شد. جداسازی مخلوط پپتید و هضم تریپسین HSA توسط ستون PMP را بررسی کنید و نتایج را با ستون Ascentis Express RP-Amide مقایسه کنید. شماره صفحه نظری به شرح زیر محاسبه می‌شود:
تصاویر SEM از ذرات سیلیکا لخت و ذرات سیلیکا با پیوند لیگاند در شکل نشان داده شده است.2. تصاویر SEM از ذرات سیلیس لخت (A, B) نشان می دهد که بر خلاف مطالعات قبلی ما، این ذرات کروی هستند که در آنها ذرات دراز هستند یا تقارن نامنظم دارند. سطح ذرات سیلیسی متصل به لیگاند (C, D) صاف تر از سطح ذرات برهنه است که ممکن است به دلیل سطح سیلیسی ساده، سیلیس بر روی آن چند سطحی باشد. ذرات
تصاویر میکروسکوپ الکترونی روبشی از ذرات سیلیکا لخت (A, B) و ذرات سیلیس با پیوند لیگاند (C, D).
توزیع اندازه ذرات ذرات سیلیکا لخت و ذرات سیلیس با پیوند لیگاند در شکل 3(A) نشان داده شده است. منحنی های توزیع اندازه ذرات بر اساس حجم نشان داد که اندازه ذرات سیلیس پس از اصلاح شیمیایی افزایش یافته است (شکل 3A). (0.5)، از PMP 3.36 میکرومتر است، در مقایسه با مطالعه قبلی ما با مقدار ad(0.5) 3.05 میکرومتر (ذرات سیلیسی متصل به پلی استایرن)34. این دسته توزیع اندازه ذرات باریک‌تری نسبت به مطالعه قبلی ما داشت که دلیل آن نسبت‌های متفاوت PEG، اوره، اسید MP است که اندازه ذرات پلی‌استایرن نسبت به فاز پلی‌استیک بزرگ‌تر از مخلوط ac و ذرات ac بزرگ‌تر است. فاز ذرات سیلیس متصل به ne-bound که قبلاً مطالعه کردیم. این بدان معناست که عملکرد سطحی ذرات سیلیکا با استایرن تنها یک لایه پلی استایرن (0.97 میکرومتر) روی سطح سیلیس رسوب می‌کند، در حالی که در فاز PMP ضخامت لایه 1.38 میکرومتر بود.
توزیع اندازه ذرات (A) و توزیع اندازه منافذ (B) ذرات سیلیکا لخت و ذرات سیلیس متصل به لیگاند.
اندازه منافذ، حجم منافذ و مساحت سطح ذرات سیلیس مطالعه حاضر در جدول 1 (B) آورده شده است. پروفایل های PSD ذرات سیلیکا لخت و ذرات سیلیکا با پیوند لیگاند در شکل 3 (B) نشان داده شده است. نتایج با مطالعه قبلی ما قابل مقایسه است. نشان می دهد که اندازه منافذ پس از اصلاح شیمیایی 69 کاهش می یابد، همانطور که در جدول 1 (B) نشان داده شده است، و تغییر منحنی در شکل 3 (B) نشان داده شده است. به همین ترتیب، حجم منافذ ذرات سیلیس پس از اصلاح شیمیایی از 0.67 به 0.58 سانتی متر مکعب بر گرم کاهش یافت. همانطور که در جدول 1 (B) نشان داده شده است، سطح (m2/g) ذرات سیلیس نیز از 116 m2/g به 105 m2/g پس از اصلاح شیمیایی کاهش یافت.
نتایج آنالیز عنصری فاز ساکن در جدول 2 نشان داده شده است. بار کربن فاز ساکن فعلی 6.35 درصد است که کمتر از بارگذاری کربن مطالعه قبلی ما (ذرات سیلیسی با پیوند پلی استایرن، به ترتیب 7.93% و 10.21%) است. از لیگاندهای قطبی مانند فنیل مالئیمید- متیل وینیل ایزوسیانات (PCMP) و 4-هیدروکسی-TEMPO استفاده شد. درصد وزنی نیتروژن فاز ساکن فعلی به ترتیب 21/2 درصد است در مقایسه با 1735/0 و 85/0 درصد وزنی نیتروژن در مطالعات قبلی، این بدان معناست که درصد وزن نیتروژن فاز ثابت فعلی به ترتیب 21/2 درصد است. به طور مشابه، بارگذاری کربن محصولات (4) و (5) به ترتیب 2.7٪ و 2.9٪ بود، در حالی که بار کربن محصول نهایی (6) 6.35٪ بود، همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است. کاهش وزن با فاز ثابت PMP بررسی شد و منحنی TGA در شکل 4 نشان داده شده است. 35٪ زیرا لیگاندها نه تنها حاوی C بلکه N، O و H نیز هستند.
لیگاند فنیل مالئیمید-متیل وینیل ایزوسیانات برای اصلاح سطح ذرات سیلیس انتخاب شد زیرا دارای گروه های فنیل مالئیمید قطبی و گروه های وینیل ایزوسیانات است. گروه های ایزوسیانات وینیل می توانند با پلیمریزاسیون رادیکال زنده با استایرن واکنش دهند. دلیل دوم قرار دادن گروهی است که بین فاز آنالیز آنالیت متوسط ​​و بدون ایستگاه بین فاز آنالیتی قوی است. از آنجایی که بخش فنیل مالئیمید در pH معمولی بار مجازی ندارد. قطبیت فاز ساکن را می توان با مقدار بهینه استایرن و زمان واکنش پلیمریزاسیون رادیکال آزاد کنترل کرد. آخرین مرحله واکنش (پلیمریزاسیون رادیکال آزاد) حیاتی است و می تواند قطبیت فاز ثابت را تغییر دهد. ne و زمان واکنش باعث افزایش بار کربن فاز ساکن شد و بالعکس. SP های تهیه شده با غلظت های مختلف استایرن بارهای کربنی متفاوتی دارند. مجدداً، این فازهای ثابت را در ستون های فولادی زنگ نزن بارگذاری کرده و عملکرد کروماتوگرافی آنها را بررسی کنید (انتخاب، وضوح، مقدار N و غیره).
پنج مخلوط پپتیدی (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، انکفالین لوسین) نیز با استفاده از یک ستون PMP با استفاده از یک فاز متحرک مورد ارزیابی قرار گرفتند.60/40 (v/v) استونیتریل/آب (0.1% TFA) با سرعت جریان 80 میکرولیتر در دقیقه. تحت شرایط شستشوی بهینه، عدد صفحه نظری (N) در هر ستون (100 × 1.8 میلی‌متر ID) 100 ± 20000 P است (200،000 ± 100 (200،00 مگاپیکسل در ستون‌ها، مقدار قابل‌توجهی برای ستون‌ها 3000 مگاپیکسل). کروماتوگرام ها در شکل 5 الف نشان داده شده است. تجزیه و تحلیل سریع بر روی یک ستون PMP با سرعت جریان بالا (700 میکرولیتر در دقیقه)، پنج پپتید ظرف یک دقیقه شسته شدند، مقادیر N بسیار خوب بود، 13500 ± 330 در هر ستون (100 × 1.8 میلی متر شناسه)، (به طور کلی با 000h5 ستون، اندازه 135 صفحه) (100 × 1.8 میلی‌متر id) با سه لات مختلف فاز ثابت PMP برای بررسی تکرارپذیری بسته‌بندی شد. غلظت آنالیت برای هر ستون با استفاده از شرایط شستشوی بهینه و تعداد صفحات نظری N و زمان ماند برای جداسازی مخلوط آزمایشی یکسان در هر ستون ثبت شد. در جدول 3.
جداسازی مخلوط پپتید روی ستون PMP (B) و ستون Ascentis Express RP-Amide (A).فاز متحرک 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)، ابعاد ستون PMP (100 × 1.8 میلی متر شناسه)؛تحلیلی ترتیب شستشوی ترکیبات: 1 (Gly-Tyr)، 2 (Gly-Leu-Tyr)، 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)، 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) و 5 (لوسین) اسید انکفالین)).
یک ستون PMP (100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) برای جداسازی هضم‌های تریپتیک آلبومین سرم انسانی در کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا مورد ارزیابی قرار گرفت. کروماتوگرام در شکل 6 نشان می‌دهد که نمونه به خوبی از هم جدا شده است و وضوح بسیار خوبی دارد. همانطور که در کروماتوگرام نشان داده شده است (شکل 6)، هضم HSA به 17 پیک مربوط به 17 پپتید تقسیم شده است. راندمان جداسازی هر پیک در هضم HSA محاسبه شده و مقادیر در جدول 5 آورده شده است.
هضم tryptic از HSA (100 × 1.8 میلی متر ID) بر روی یک ستون PMP جدا شد.سرعت جریان (100 µL/min)، فاز متحرک 60/40 استونیتریل/آب با 0.1% TFA.
که در آن L طول ستون، η ویسکوزیته فاز متحرک، ΔP فشار برگشتی ستون، و u سرعت خطی فاز متحرک است. نفوذپذیری ستون PMP 2.5 × 10-14 متر مربع، سرعت جریان 25 میکرولیتر در دقیقه، و 60/40 v/v. نفوذپذیری ستون پر شده با ذرات متخلخل سطحی است: 1.7 × 10-15 برای ذرات 1.3 میکرومتر، 3.1 × 10-15 برای ذرات 1.7 میکرومتر، 5.2 × 10-5 × 15 میکرومتر، 5.2 × 10-5 × 15 میکرومتر و 2.2 × 10-5 × 15. ذرات متر 43. بنابراین، نفوذپذیری فاز PMP مشابه ذرات 5 میکرومتر هسته-پوسته است.
که در آن Wx وزن ستون مملو از کلروفرم، Wy وزن ستون مملو از متانول، و ρ چگالی حلال است. چگالی متانول (7866/0 = ρ) و کلروفرم (484/1 = ρ). ستون‌های C18-اوره 31 که قبلاً مطالعه کردیم به ترتیب 0.63 و 0.55 بودند. این بدان معناست که وجود لیگاندهای اوره نفوذپذیری فاز ساکن را کاهش می‌دهد. از طرف دیگر، تخلخل کل ستون PMP (100 × 1.8 میلی‌متر id) 0.60 از آن بسته‌بندی PMP ستون‌شده با ستون‌ها 0.60 کمتر است. یک ذره است زیرا در فازهای ثابت نوع C18 لیگاندهای C18 به عنوان زنجیره خطی به ذرات سیلیس متصل می شوند، در حالی که در فازهای ثابت از نوع پلی استایرن، یک لایه پلیمری نسبتاً ضخیم در اطراف آن تشکیل می شود. در یک آزمایش معمولی، تخلخل ستون به صورت زیر محاسبه می شود:
شکل 7A,B ستون PMP (100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) و ستون Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) را با استفاده از شرایط شستشوی یکسان (یعنی 60/40 ACN/H2O و 0.1 درصد TFA) نشان می‌دهد.) از طرح ون دیمتر.مخلوط‌های پپتیدی منتخب (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، Leucine Enkephalin) در 20 µL تهیه شدند. حداقل سرعت جریان برای هر دو ستون 800 µL/min است. حداقل مقادیر HETP به‌عنوان مقدار HETPTim برای سرعت جریان op/min است. ستون RP-Amide به ترتیب 2.6 میکرومتر و 3.9 میکرومتر بود. مقادیر HETP نشان می‌دهد که راندمان جداسازی ستون PMP (100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) بسیار بهتر از ستون Ascentis Express RP-Amide موجود در بازار است (شکل 100 × 1.8 دبی‌آمیز ستون RP-Amide را نشان می‌دهد که مقدار جریان وان با افزایش نمودار N7 میلی‌متر کاهش می‌یابد). در مقایسه با مطالعه قبلی ما قابل توجه نیست. راندمان جداسازی بالاتر ستون PMP (100 × 1.8 میلی متر id) در مقایسه با ستون Ascentis Express RP-Amide بر اساس بهبود شکل ذرات، اندازه، و روش های پیچیده بسته بندی ستون مورد استفاده در کار فعلی است.
(A) نمودار ون دیمتر (HETP در مقابل سرعت خطی فاز متحرک) با استفاده از یک ستون PMP (100 × 1.8 میلی‌متر شناسه) در 60/40 ACN/H2O با 0.1 درصد TFA. (B) نمودار ون دیمتر (HETP در برابر سرعت خطی فاز متحرک) با استفاده از ستون Ascentis 6 میلی‌متر 0 × 1.0 × 1.0 (RP-0) به دست آمد. ACN/H2O با 0.1% TFA.
یک فاز ثابت پلی استایرن تعبیه‌شده قطبی برای جداسازی مخلوط‌های پپتیدی مصنوعی و هضم‌های تریپسین آلبومین سرم انسانی (HAS) در کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تهیه و ارزیابی شد. از ذرات سیلیس، سنتز کنترل شده فاز ساکن و بسته بندی ستون پیچیده. علاوه بر راندمان جداسازی بالا، فشار برگشتی پایین ستون در نرخ جریان بالا یکی دیگر از مزایای این فاز ثابت است. ستون‌های PMP تکرارپذیری خوبی از خود نشان می‌دهند و می‌توانند برای تجزیه و تحلیل مخلوط‌های پپتیدی و هضم تریپسین از ترکیبات مختلف پروتئین‌های دوگانه‌فعال تا پروتئین‌های مختلف استفاده شود. گیاهان و عصاره های قارچی در کروماتوگرافی مایع. در آینده، ستون های PMP نیز برای جداسازی پروتئین ها و آنتی بادی های مونوکلونال ارزیابی خواهند شد.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. تحقیق در مورد سیستمهای جداسازی پپتید توسط کروماتوگرافی فاز معکوس قسمت اول: توسعه یک پروتکل مشخصه ستونی.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
گومز، بی و همکاران، پپتیدهای فعال بهبود یافته برای درمان بیماری‌های عفونی طراحی شده‌اند. Biotechnology.Advanced.36(2)، 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: Science and the market.drug discovery.15 (1-2) today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.2009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261، 78-90 (2012).
Liu, W. et al. کروماتوگرافی مایع پیشرفته طیف سنجی جرمی ترکیب متابولومیک های هدفمند گسترده و proteomics.anus.Chim.Acta 1069، 89-97 (2019) را امکان پذیر می کند.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ نقش UHPLC در توسعه دارو.Sep. Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM جنبه های اساسی و عملی کروماتوگرافی مایع با فشار فوق العاده بالا برای جداسازی سریع.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. کاربرد کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق العاده بالا در توسعه دارو.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. و همکاران. هیدروژل های ماکرو متخلخل یکپارچه تهیه شده از امولسیون های فاز داخلی روغن در آب برای خالص سازی موثر انتروویروس ها. Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA نقش کروماتوگرافی مایع در پروتئومیکس.Chromatography.A 1053(1-2)، 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. روندهای نوظهور در جداسازی کروماتوگرافی مایع فاز معکوس پپتیدها و پروتئین های درمانی: نظریه و کاربردها.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC جداسازی دو بعدی پپتیدها با استفاده از سیستم RP-RP-HPLC با استفاده از مقادیر مختلف pH در ابعاد جداسازی اول و دوم.Sep. Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti، S. و همکاران. ویژگی‌های انتقال جرم و عملکرد جنبشی ستون‌های کروماتوگرافی با راندمان بالا بسته‌بندی شده با ذرات C18 زیر 2 میکرومتر کاملاً و سطحی متخلخل مورد بررسی قرار گرفت.Sep. Sci.43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
Piovesana، S. و همکاران. روندهای اخیر و چالش های تحلیلی در جداسازی، شناسایی و اعتبار سنجی پپتیدهای فعال زیستی گیاهی. anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s018-1008.
مولر، جی بی و همکاران. منظره پروتئومی پادشاهی زندگی. طبیعت 582(7813)، 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca، C. و همکاران. پردازش پایین دستی پپتیدهای درمانی با کروماتوگرافی مایع آماده‌سازی. Molecule (بازل، سوئیس) 26 (15)، 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. کروماتوگرافی حالت مخلوط و کاربرد آن در پلیمرهای زیستی.Chromatography.A 1218(49)، 8813-8825 (2011).
Zhao، G.، Dong، X.-Y.& Sun، Y. لیگاندها برای کروماتوگرافی پروتئینی حالت مخلوط: اصل، خصوصیات، و طراحی.بیوتکنولوژی.144(1)، 3-11 (2009).