Ravinteiden hankinnassa ja jakautumisessa yhdistyvät hyönteisten ravinnonhaku ja elämänhistorian ominaisuudet. Tiettyjen ravinteiden puutteiden kompensoimiseksi eri elämänvaiheissa hyönteiset voivat saada näitä ravinteita lisäruokinnolla, esimerkiksi ruokkimalla selkärankaisten eritteitä lätäkkönä tunnetussa prosessissa. Anopheles arabiani -hyttysen aineenvaihdunta näyttää olevan aineenvaihdunnan aineenvaihdunta. An.arabiensis-ravinto lehmän virtsaan ravinteiden hankkimiseksi parantaa elämänhistorian ominaisuuksia.
Varmista, että se on turvallista.arabiensis veti puoleensa tuoreen, 24 tuntia, 72 tuntia ja 168 tuntia vanhan lehmän virtsan tuoksu, ja isäntähaku- ja verisuoritettuja (48 tunnin veriaterian jälkeisiä) naaraita mitattiin Y-putken olfaktometrillä, ja sitten tiineille naaraille käytettiin yhdistettyä kemiallista yhdistettä ja arvioitiin. lehmän virtsa kaikissa neljässä ikäluokassa. Bioaktiivisten yhdisteiden synteettiset seokset arvioitiin Y-putkessa ja kenttäkokeissa. Lehmän virtsan ja sen pääasiallisen typpipitoisen ureayhdisteen selvittämiseksi mahdollisina lisäravintoina malarialevittäjille mitattiin ruokintaparametreja ja elämänhistorian ominaisuuksia. Naaraspuolisten hyttysten ja urean imeytyneiden naarashyttysten osuus mitattiin. arvioitu selviytymisen, sidotun lennon ja lisääntymisen suhteen.
Etsi isännän verta ja ravintoa. Laboratorio- ja kenttätutkimuksissa arabeja veti puoleensa tuoreen ja vanhentuneen lehmän virtsan luonnollinen ja synteettinen tuoksu. Raskaana olevat naaraat suhtautuivat välinpitämättömästi lehmän virtsareaktioihin kutupaikoilla. Isäntähakuiset ja verta imevät naaraat imevät aktiivisesti lehmän virtsan ja fysiologisen toiminnan fysikaaliset resurssit. lento, selviytyminen tai lisääntyminen.
Anopheles arabinis lehmän virtsan hankinta ja jakelu parantaa elämänhistorian ominaisuuksia.Lehmän virtsan lisäruokinta vaikuttaa vektorin kapasiteettiin suoraan lisäämällä päivittäistä eloonjäämistä ja vektoritiheyttä sekä epäsuorasti muuttamalla lentoaktiivisuutta, joten se tulisi ottaa huomioon tulevissa malleissa.
Ravinteiden hankinta ja jakautuminen integroi hyönteisten ravinnonhaun ja elämänhistorian ominaisuudet [1,2,3].Hyönteiset pystyvät valitsemaan ja hankkimaan ruokaa sekä suorittamaan kompensoivaa ruokintaa ruoan saatavuuden ja ravintotarpeiden perusteella [1, 3]. Ravinteiden jakautuminen riippuu elinkaariprosessista ja voi johtaa erilaisiin ravintoainevaatimuksiin eri elämänvaiheissa hyönteisten eri vaiheissa. saada näitä ravintoaineita lisäravinnolla, kuten mudasta, selkärankaisten erilaisista ulosteista ja eritteistä sekä raadosta, joka tunnetaan lätäkönä [2]. Vaikka kuvataankin pääasiassa erilaisia ​​perhos- ja koilajeja, juoma-aukkoja esiintyy myös muissa hyönteislajeissa, ja tämäntyyppisten luonnonvarojen vetovoimalla ja niiden ruokkimisella voi olla merkittäviä vaikutuksia terveyteen, ominaisuuksiin ja muihin ominaisuuksiin [2]. malariahyttynen Anopheles gambiae sensu lato (sl) ilmestyy "aliravitelluksi" aikuiseksi [8], joten kastelulla voi olla tärkeä rooli sen elämänhistorian ominaisuuksissa, mutta tämä käyttäytyminen on toistaiseksi jätetty huomiotta. Agitoinnin käyttö keinona lisätä ravinteiden saantia tässä tärkeässä ajoneuvossa vaatii huomiota, koska sillä voi olla merkittäviä epidemiologisia seurauksia.
Aikuisten Anopheles-naarashyttysten typen saanti on rajoitettu toukkavaiheesta peräisin olevien alhaisten kalorivarantojen ja verijauhon tehottoman käytön vuoksi [9]. Naaras Ann.gambiae sl tyypillisesti kompensoi tämän täydentämällä sitä täydentävillä veri-aterioilla [10, 11], mikä lisää riskiä sairastua hyttyssairauteen ja altistua hyttyssairaudelle. Käytä selkärankaisten eritteiden lisäravintoa hankkiaksesi typpiyhdisteitä, jotka parantavat sopeutumista ja lentokelpoisuutta, kuten muut hyönteiset ovat osoittaneet [2]. Tältä osin yhden An.The Gambian sl-lajikompleksin, Anopheles arabinis, tuoreen ja vanhentuneen lehmän isäntävirtsa on mielenkiintoinen ja erityinen vetovoima [12],13, An. ophelesunes. s ja sen tiedetään liittyvän nautakarjaan ja ruokkivan niitä.Lehmän virtsa on resurssi, jossa on runsaasti typpipitoisia yhdisteitä, ja urean osuus tuoreen virtsan kokonaistypestä on 50-95 % [15, 16]. Lehmän virtsan ikääntyessä mikro-organismit käyttävät näitä resursseja vähentääkseen nitrogeenisen yhdisteen monimutkaisuutta 5 tunnin kuluessa. orgaanisen typen väheneminen, alkalofiiliset mikro-organismit (joista monet tuottavat hyttysille myrkyllisiä yhdisteitä) viihtyvät [15], joka voi olla naaras Ann.arabiensis houkuttelee ensisijaisesti 24 tunnin ikäistä tai sitä nuorempaa virtsaa [13, 14].
Tässä tutkimuksessa etsittiin isäntää ja veriruokittua Ans:a. Ensimmäisen gonadotropiinisyklin aikana arabiensis arvioitiin typpipitoisten yhdisteiden, mukaan lukien urean, hankinnan suhteen virtsan sekoituksesta. Seuraavaksi suoritettiin sarja kokeita sen arvioimiseksi, kuinka naarashyttyset kohdistavat tämän mahdollisen tuoreen ravintoaineresurssin, parantaakseen eloonjäämistä, lisääntymistä ja lisääntymistä yhdessä virtsan kanssa. selvittääkseen, tarjosivatko nämä luotettavia vihjeitä isännälle ja veriruokitulle An. Etsiessään tätä mahdollista ravintoresurssia arabiensis löysi kemiallisia korrelaatioita havaitun erilaisen houkuttelevuuden takana. 24 tuntia vanhentuneesta virtsasta tunnistettuja haihtuvien orgaanisten yhdisteiden (VOC) synteettisiä hajusekoituksia arvioitiin edelleen kenttäolosuhteissa, laajentaen laboratorioiden tuloksia ja osoittamalla erilaisten virtsan tilan vaikutusta.Hyttysten vetovoima. Saadut tulokset vahvistavat, että An.arabiensis hankkii ja levittää selkärankaisten virtsasta löytyviä typpiyhdisteitä vaikuttamaan elämänhistorian ominaisuuksiin. Näistä tuloksista keskustellaan mahdollisten epidemiologisten seurausten ja niiden käyttö vektoreiden seurantaan ja torjuntaan yhteydessä.
Anopheles arabicans (Dongola-kanta) pidettiin 25 ± 2 °C:ssa, 65 ± 5 % RH:ssa ja 12:12 h valo:pimeä-syklissä. Toukat kasvatettiin muoviastioissa (20 cm × 18 cm × 7 cm), jotka oli täytetty tislatulla vedellä, ja niille syötettiin Metramin Werke, Tetramin Werke P -ruokaa. s (Nolato Hertila, Åstorp, SE) ja siirrettiin sitten Bugdorm-häkkeihin (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) aikuisten ilmaantumisen mahdollistamiseksi. Aikuisille annettiin 10-prosenttista sakkaroosiliuosta ad libitum, kunnes 4 päivää itämisen jälkeen tarjottiin ruokavaliota, jonka jälkeen koe tähdettiin yöllä (dpe) ennen koetta, kuten alla on kuvattu. Naaraat, joita käytettiin lentoputkikokeisiin, nälkäistettiin vain 4-6 tuntia vedellä ad libitum.Verta imevien hyttysten valmistelemiseksi myöhempiä biotestejä varten 4 dpe:n naaraspuolisille annettiin defibroottista lampaan verta (Håtunalab, Bro, SE) käyttämällä kalvoruokintajärjestelmää (Hemotek Acculringtonges, UK Cacculringtonges, UK-cacculges, contemporarys, contemporary naaras). suoraan, kuten alla on kuvattu, tai 10 % sakkaroosia ad libitum 3 päivän ajan ennen alla kuvattuja kokeita. Jälkimmäisiä naaraita käytettiin lentoputken biotesteihin ja siirrettiin laboratorioon, ja sitten niillä oli tislattua vettä ad libitum 4-6 tuntia ennen koetta.
Ruokintamäärityksiä käytettiin virtsan ja urean kulutuksen määrittämiseen aikuisilla arabinaarailla. Isäntää etsiville ja veriruokituille naaraille annettiin ruokavalio, joka sisälsi 1 % laimennettua tuoretta ja vanhentunutta lehmän virtsaa, eri pitoisuuksia ureaa ja kahta kontrollia (10 % sakkaroosia ja vettä) 48 tunnin ajan. 7-1; Sigma-Aldrich, Tukholma, SE) lisättiin ruokavalioon ja toimitettiin 4 × 4 -matriisina 250 µl:n mikrosentrifugiputkissa (Axygen Scientific, Union City, CA, USA; kuva 1A) Täytä reunaan asti (n. 300 µl). Välttääkseen kilpailun hyttysten ja hyttysten välillä (1 cm2) (hyttysten ja mahdollisten värivaikutusten välttämiseksi 1 cm2) 6 ​​cm korkea; Semadeni, Ostermundigen, CH; kuva 1A) täydellisessä pimeydessä 25 ± 2 cm °C:ssa ja 65 ± 5 % suhteellisessa kosteudessa. Nämä kokeet toistettiin 5-10 kertaa. Ruokavaliolle altistumisen jälkeen hyttyset sijoitettiin -20 °C:seen lisäanalyysiin asti.
Etsi isännän ja verta imevän naaraan Anopheles arabianuksen absorboima naudan virtsa ja urea.Ruokintakokeessa (A) naarashyttysten ruokavalio koostui tuoreesta ja vanhentuneesta lehmän virtsasta, erilaisista ureapitoisuuksista, sakkaroosista (10 %) ja tislatusta vedestä (H2O). .Huomaa, että isäntää etsivät naaraat absorboivat 72 tunnin lehmän virtsaa alle 168 tunnin lehmän virtsaa (B). Virtsan keskimääräinen typen kokonaispitoisuus (± keskihajonna) on esitetty upotuksessa. Isäntää etsivät (D, F) ja verta imevät (E, G) naaraat ottavat merkitsevästi eri annoksen tilavuudella (e, G) naaraat ottavat urean eri tavalla. toisistaan ​​(yksisuuntainen ANOVA käyttäen Tukeyn post hoc -analyysiä; p < 0,05). Virhepalkit edustavat keskiarvon standardivirhettä (BE). Suora katkoviiva edustaa log-lineaarista regressioviivaa (F, G)
Imeytyneen ruoan vapauttamiseksi hyttyset asetettiin yksittäin 1,5 ml:n mikrosentrifugiputkiin, jotka sisälsivät 230 µl tislattua vettä, ja kudos hajotettiin käyttämällä kertakäyttöistä survinta ja johdotonta moottoria (VWR International, Lund, SE), mitä seurasi sentrifugointi 10 krpm:ssä 10 minuutin ajan. Aldrich) ja absorbanssi (λ620) määritettiin käyttämällä spektrofotometripohjaista mikrolevylukijaa (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Vaihtoehtoisesti hyttyset jauhettiin 1 ml:aan tislattua vettä, josta 900 µl siirrettiin kyvettiin shiftometristä analyysiä varten (900 µl shiftometric, 0,0,0m2; spektrohomometrinen analyysi Kista, SE). Ruoan kautta saannin kvantifioimiseksi valmistettiin standardikäyrä sarjalaimennuksella, jolloin saatiin 0,2 µl - 2,4 µl 1 mg ml-1 ksyleenisyanidia. Sitten tunnettujen väriainepitoisuuksien optista tiheyttä käytettiin määrittämään kunkin hyttysen nauttiman ruoan määrä.
Tilavuustiedot analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA) ja sen jälkeen Tukeyn post hoc -parivertailuja (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA, 1989–2007). Lineaariset regressioanalyysit kuvasivat pitoisuudesta riippuvaista urean saantia ja verrattiin v. .0 Macille, GraphPad Software, San Diego, CA, USA).
Noin 20 µl virtsanäytteitä kustakin ikäryhmästä sidottiin Chromosorb® W/AW:hen (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) ja kapseloitiin tinakapseleihin (8 mm × 5 mm). , US) tuoreen ja vanhentuneen virtsan typpipitoisuuden määrittämiseksi valmistajan protokollan mukaisesti. Kokonaistyppi (g N l-1) kvantifioitiin perustuen tunnettuihin standardina käytettyihin ureapitoisuuksiin.
Arvioidakseen ruokavalion vaikutusta isäntää etsivien ja verta imevien naisten selviytymiseen hyttyset asetettiin yksitellen suuriin petrimaljoihin (halkaisijaltaan 12 cm ja korkeudeltaan 6 cm; Semadeni), joiden kannessa oli verkolla peitetty reikä (halkaisija 3 cm) ilmanvaihtoa ja ravintoa varten. Ruokavaliot annettiin heti 4 dpe:n jälkeen, ja siihen sisältyi 1,4 % virtsaa ja 2,4 kertaa virtsaa. , 10 % sakkaroosia ja vettä. Jokainen ruokavalio pipetoitiin hammastamponiin (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE), joka työnnettiin 5 ml:n ruiskuun (Thermo Fisher Scientific, Göteborg, SE), mäntä poistettiin ja asetettiin petrimaljan päälle (kuva 1).1A) laskettiin kahdesti yllä kuvatulla tavalla.1A. päivässä, kun taas kuolleet hyttyset heitettiin pois, kunnes viimeinen hyttynen kuoli (n = 40 per hoito). Eri ruokavalioilla ruokittujen hyttysten eloonjääminen analysoitiin tilastollisesti käyttämällä Kaplan-Meyerin eloonjäämiskäyriä ja log-rank-testejä eloonjäämisjakauman vertailujen vertaamiseksi ruokavalioiden välillä (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Räätälöity hyttyslentomylly perustuu Attisano et al.[17], valmistettu 5 mm paksuisista kirkkaista akryylipaneeleista (10 cm leveä x 10 cm pitkä x 10 cm korkea) ilman etu- ja takapaneeleja (kuva 3: ylhäällä). Kääntöyksikkö, jossa on pystyputki, joka on valmistettu kaasukromatografiakolonnista (0,25 mm L) ripustettuna päiden väliin 5 cm id; neodyymimagneeteista 9 cm:n etäisyydellä toisistaan. Samasta materiaalista valmistettu vaakasuora putki (6,5 cm L) jakoi pystyputken ja muodosti sidotun varren ja varren, jossa oli pieni pala alumiinifoliota valoa katkaisevana signaalina.
24 tuntia nälkäisille naaraille annettiin yllä olevaa ruokavaliota 30 minuuttia ennen pidättämistä. Täysin ruokittuja naarashyttysiä nukutettiin sitten yksittäin jäillä 2-3 minuutin ajan ja kiinnitettiin mehiläisvahalla hyönteisneuloihin (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) ja sitten sidottiin vaakasuoralla lennon tiedoilla käsivarsiin. loggeri, sitten tallennettu ja esitetty PC-Lab 2000™ -ohjelmistolla (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Lentomylly sijoitettiin ilmastosäädeltyyn huoneeseen (12 h:12 h, valo: pimeä, 25 ± 2 °C, 65 ± 5 % RH).
Lentoaktiivisuuden mallin visualisoimiseksi laskettiin kokonaislentomatka (m) ja peräkkäisten lentotoimintojen kokonaismäärä per tunti 24 tunnin aikana. Lisäksi yksittäisten naisten keskimääräisiä lentämiä etäisyyksiä verrattiin eri hoitojen välillä ja analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVA:ta ja Tukeyn post hoc -analyysiä (JMP Pro, v14.0.0), kun taas SAS-instituuttia pidettiin riippumattomana tekijänä, Inc. Keskimääräinen kierrosten lukumäärä lasketaan 10 minuutin välein.
Arvioidakseen ruokavalion vaikutusta An. arabiensis -bakteerin lisääntymiskykyyn kuusi naaraspuolta (4 dpe) siirrettiin suoraan Bugdormin häkkeihin (30 cm × 30 cm × 30 cm) verenoton jälkeen, minkä jälkeen heille annettiin kokeellinen ravinto 48 tunnin ajan edellä kuvatulla tavalla. Ruokavaliot poistettiin ja kutukupit (30 ml; Nolato 20 ml:lla vaihtovettä joka kolmas päivä) täytettiin 4 tunnin ajan. 24 tuntia. Toista kukin ruokavalio 20-50 kertaa. Munat laskettiin ja kirjattiin kustakin koehäkistä. Munien osanäytteitä käytettiin arvioimaan yksittäisten munien keskimääräistä kokoa ja pituusvaihtelua (n ≥ 200 per ruokavalio) Dialux-20-mikroskoopilla (DM1000; Ernst Leitzlar, FC Leiter) a3D a3D, jossa oli 0 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). Jäljellä olevia munia pidettiin ilmastoiduissa tiloissa normaaleissa kasvatusolosuhteissa 24 tuntia, ja osanäyte äskettäin syntyneistä 1. vaiheen toukista (n ≥ 200 ruokavaliota kohden) mitattiin edellä kuvatulla tavalla. Munien lukumäärää ja munien ja toukkien kokoa verrattiin käyttämällä yksisuuntaista Pro-J- ja Tuhokey-analyysien välillä. 4.0.0, SAS Institute Inc.).
Tuoreesta (1 h näytteenoton jälkeen), 24 h, 72 h ja 168 h ikääntyneestä virtsasta kerättiin haihtuvat aineet Zebu-nautakarjasta, Arsi-roduista. Virtsanäytteet otettiin mukavuuden vuoksi varhain aamulla lehmien ollessa vielä navetassa. Virtsanäytteet siirrettiin 10 ml:sta 10 am-idea. s (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) 3 l:n polyamidissa kannellisissa vinyylikloridi-muovitynnyreissä. Jokaisesta naudan virtsanäytteestä kerättiin joko suoraan (tuore) tai huoneenlämmössä 24 h, 72 h ja 168 h:n ikäryhmässä, eli kukin oli edustava virtsanäyte.
Virtatilan haihtuvien aineiden keräämiseen käytettiin suljetun silmukan järjestelmää, jolla kierrätettiin aktiivihiilellä suodatettua kaasuvirtaa (100 ml min-1) polyamidipussin läpi adsorptiokolonniin 2,5 tunnin ajan käyttämällä kalvotyhjiöpumppua (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Kontrollina tehtiin tyhjän polyameenin keruu. 5 cm x 3 mm id), joka sisälsi 35 mg Porapak Q:ta (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, USA) lasivillatulppien välissä. Ennen käyttöä kolonni huuhdeltiin 1 ml:lla uudelleen tislattua n-heksaania (Merck, G. Darmstadt, DE) ja 1 ml:lla bbntma-rikastettua pentaania (99 volyymi-% purettua). 400 μl:lla pentaania eluoitiin. Headspace-kokoelmat yhdistettiin ja säilytettiin sitten -20 °C:ssa, kunnes niitä käytettiin jatkoanalyysiin.
Isäntää etsivien ja verta syövien An.Headspace haihtuvien uutteiden, jotka oli kerätty tuoreesta, 24 tuntia, 72 tuntia ja 168 tuntia vanhasta virtsasta, haihtuvien uutteiden varalta analysoitiin Arabidopsis-hyttysten haihtuvien uutteiden varalta käyttämällä suoraa lasiputkia hajumittaria [18]. Kokeet suoritettiin. 19].Lasiputkiolfaktometri (80 cm × 9,5 cm id) valaistiin 3 ± 1 lx punaisella valolla ylhäältä.Chiilisuodatettu ja kostutettu ilmavirta (25 ± 2 °C, 65 ± 2 % suhteellinen kosteus) läpäisi biomäärityksen 30 cm:n seulan läpi, ja seulan läpi kulkee sarja 30 cm A:n läpi. pilkun rakenne. Hammastamponiannostelija (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), ripustettu 5 cm:n kelaan hajumittarin tuulen puoleisessa päässä, stimulaattorin vaihdolla 5 minuutin välein. Analyysissä käytettiin 10 μl kutakin headspace-uutetta, laimennettuna 1:10, kontrollistimuleena. quitos sijoitettiin yksittäisiin vapautushäkkeihin 2-3 tuntia ennen kokeen alkua. Vapautushäkki asetettiin hajumittarin myötätuulen puolelle, ja hyttysten annettiin sopeutua 1 minuutti, minkä jälkeen häkin läppäventtiili avattiin vapautumaan. Hoitoon tai kontrolliin kohdistuvaa vetovoimaa analysoitiin siten, että hyttysten vapautumisen lähde 5 minuutin sisällä osui kosketukseen hyttysten kanssa. söi vähintään 30 kertaa ja yhden päivän vaikutusten välttämiseksi sama määrä hoitoja ja kontrolleja testattiin jokaisena koepäivänä. Etsi vastauksia isännältä ja veriruokitusta Ans.Arabian vs. headspace -joukot analysoitiin käyttämällä nimellistä logistista regressiota, mitä seurasi parivertailu parittomille suhteille (JMP Pro, v14.0.0, 0.0).
Anin kutuvaste. Tuoreesta ja vanhentuneesta lehmän virtsasta saadut pään tilauutteet analysoitiin Bugdorm-häkeissä (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Muovikupit (30 ml; Nolato Hertila), jotka oli täytetty 20 ml:lla tislattua vettä cm, tarjosivat kutualustan ja asetettiin kupin vastakkaisiin kulmiin ja asetettiin vastakkaisiin kulmiin. μl kutakin headspace-uutetta laimennoksessa 1:10. Kontrollikupin säätämiseen käytettiin yhtä suurella määrällä pentaania. Hoito- ja kontrollikupit vaihdettiin jokaisen kokeen välillä asennon vaikutusten tarkastamiseksi. Kymmenen veriruokittua naaraspuolista vapautettiin koehäkkeihin klo ZT 9-11 ja kupeissa olevat munat laskettiin 24 tuntia myöhemmin. kontrollikuppiin munitut munat)/(munittujen munien kokonaismäärä). Jokainen käsittely toistettiin 8 kertaa.
Kaasukromatografinen ja elektroniantennikuvion ilmaisu (GC-EAD) -analyysi naaraspuoliselle An.arabiensis'lle suoritettiin aiemmin kuvatulla tavalla [20]. Lyhyesti sanottuna tuoreet headspace-haihtuvat uutteet erotettiin käyttämällä Agilent Technologies 6890 GC:tä (Santa Clara, CA, US), joka oli varustettu HP-5-kolonnilla, paksuus 30 mm, gid 0,5 mm2,5 mm. noologiat).ja vanheneva virtsa. Liikkuvana faasina käytettiin vetyä keskimääräisellä lineaarisella virtausnopeudella 45 cm s-1. Jokaista näytettä (2 μl) injektoitiin 30 sekuntia splitless-tilassa tulolämpötilalla 225 °C. GC-uunin lämpötila ohjelmoitiin 35 °C:sta (3 minuutin pito) GC:sta 30 minuutin pitoon (30 minuutin pito) 30 ef. Fluent Splitter, 4 psi typpeä lisättiin ja jaettiin 1:1 Gerstel 3D/2 matalan kuolleen tilavuuden ristissä (Gerstel, Mülheim, DE) liekki-ionisaatioilmaisimen ja EAD:n välillä. EAD:n GC-poistokapillaari johdettiin Gerstel ODP-2 -siirtouunin läpi, 0 cm, jossa se oli x 8 mm, jossa se oli x 8 mm, joka seuraa lasiin plus 5 mm. hiilisuodatettua, kostutettua ilmaa (1,5 l min-1). Antenni sijoitettiin 0,5 cm:n päähän putken ulostuloaukosta. Jokaisen yksittäisen hyttysen osuus oli yksi kopio, ja isäntähyttysten osalta suoritettiin vähintään kolme toistoa kunkin ikäisistä virtsanäytteistä.
Bioaktiivisten yhdisteiden tunnistaminen tuoreen ja vanhentuneen naudan virtsan headspace-kokoelmissa käyttämällä yhdistettyä GC:tä ja massaspektrometriä (GC-MS; 6890 GC ja 5975 MS; Agilent Technologies) antennivasteiden aikaansaamiseksi GC-EAD-analyysissä, joka toimii elektroniiskuionisaatiotilassa 70 C-MSV:lla. (60 m × 0,25 mm sisähalkaisija, 0,25 μm kalvon paksuus) käyttämällä heliumia liikkuvana faasina keskimääräisellä lineaarisella virtausnopeudella 35 cm s-1. 2 μl:n näyte injektoitiin käyttäen samoja injektoriasetuksia ja uunin lämpötilaa kuin GC-EAD-analyysissä. Yhdisteet identifioitiin niiden N-kirjaston retentioaikaan ja mukautetun Kovátralent-indeksin1 perusteella (4IST). Tunnistetut yhdisteet varmistettiin injektoimalla autenttisia standardeja (Lisätiedosto 1: Taulukko S2). Kvantitointia varten injektoitiin heptyyliasetaattia (10 ng, kemiallinen puhtaus 99,8 %, Aldrich) ulkoisena standardina.
Arvioidaan tuoreesta ja vanhentuneesta virtsasta tunnistetuista bioaktiivisista yhdisteistä koostuvan synteettisen hajuseoksen tehokkuutta houkutella isäntää etsivää ja verta imevää Ans.arabiensis, käyttäen samaa hajumittaria ja protokollaa kuin edellä.Synteettiset seokset jäljittelivät yhdisteiden koostumusta ja osuuksia sekahaihtuvissa uutteissa 24 tunnin, 24 tunnin, 24 tunnin, 24 tunnin ja 7 tunnin ajan. 68 tuntia vanhentunut virtsa (Kuva 5D-G; Lisätiedosto 1: Taulukko S2). Käytä analysointiin 10 μl 1:100 laimennusta täysin synteettistä seosta, jonka yleinen vapautumisnopeus on noin 140-2400 ng h-1. Suoritetun seoksen houkuttelevuuden arvioimiseksi hyttynen ja veri tekee siitä täydellisen. Täydellisen seoksen yksittäisten yhdisteiden seokset poistetaan. Etsi vastauksia isännältä ja veriruokitusta Ans.Arabit vs. synteettiset ja vähennettävät seokset analysoitiin käyttäen nimellistä logistista regressiota, mitä seurasi parivertailu parittomille suhteille (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Sen arvioimiseksi, voisiko lehmän virtsa toimia isäntäelinympäristönä malariahyttysille, tuoretta ja vanhentunutta lehmän virtsaa, joka kerättiin edellä kuvatulla tavalla, ja vettä laitettiin 3 litran ämpäriin (100 ml) ja asetettiin isännän syöttiloukkuihin.(BG-HDT-versio; BioGents, Regensburg, DE). Kymmenen ansaa sijoitettuna 50 metrin etäisyydelle toisistaan ​​laitumelle, 400 metrin päässä kyläyhteisöstä (Silay, Etiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´E) eikä karjaa, pysyville pesimäalueille ja kyliin. pyörii öisin yhteensä viiden yön ajan. Eri-ikäisten virtsaan syötettyjen ansojen hyttysten lukumäärää verrattiin käyttämällä logistista regressiota beeta-binomiaalisen jakauman kanssa (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Malariaa sairastavassa kylässä lähellä Makin kaupunkia Oromian alueella Etiopiassa (8° 11′ 08″ pohjoista leveyttä, 38° 81′ 70″ itäistä pituutta; kuva 6A). Tutkimus tehtiin elokuun puolivälin ja syyskuun puolivälin välisenä aikana ennen vuotuista sisätilojen jäännösruiskutusta, sekä 5 m2:n jaksoa. tutkimukseen valittiin kylän esikaupunkialueet (kuva 6A). Talojen valintakriteerit olivat: taloon ei saa tuoda eläimiä, sisätiloissa ei ollut ruuanlaittoa (takkapuiden tai puuhiilen vetämistä) (ainakin koeaikana) ja talot, joissa on enintään kaksi asukasta, jotka nukkuvat hyönteismyrkkyissä.Käsitellyn hyttysverkon alla.Eettisen hyväksynnän on myöntänyt Addis Abeban yliopiston luonnontieteiden tiedekunnan (CNS-IRB) Institutional Research Ethics Review Board (IRB/022/2016) Maailman lääketieteellisen liiton Helsingin julistuksessa vahvistettujen ohjeiden mukaisesti. Suostumus jokaiselta perheenpäältä saatiin paikallisen prosessihallinnon päättäjien avustuksella. .Kokeellinen suunnittelu noudatti 2 × 2 latinalaisen neliön mallia, jossa synteettiset seokset ja kontrollit määritettiin parillisiin taloihin ensimmäisenä yönä ja vaihdettiin talojen välillä seuraavana koeyönä. Tämä prosessi toistettiin kymmenen kertaa. Lisäksi hyttysten toiminnan arvioimiseksi valituissa taloissa CDC-ansat asetettiin pyörimään viitenä peräkkäisenä päivänä kolmen kentän alussa, keskiyöllä ja lopussa.
Synteettinen seos, joka sisälsi kuusi bioaktiivista yhdistettä, liuotettiin heptaaniin (97,0 % liuottimen GC-laatu, Sigma Aldrich) ja vapautettiin nopeudella 140 ng h-1 käyttämällä puuvillasydänannostelijaa [20]. Sydänannostelija antoi kaikkien yhdisteiden vapautua vakiosuhteissa seuraavan 12 tunnin kokeen ajan. Kontrolli Heptaania käytettiin suspensoimisen pisteessä ja annostelukeskuksena. (CDC) valoloukku (John W. Hock Company, Gainesville, FL, USA; kuva 6A). Ansoja ripustettiin 0,8–1 m maanpinnan yläpuolelle, lähellä sängyn jalkaa, ja vapaaehtoinen nukkui käsittelemättömän hyttysverkon alla ja toimi klo 18.00 - 06.30 välillä. 1] seulottiin sen jälkeen polymeraasiketjureaktio (PCR) -analyysillä lajien tunnistamiseksi, jotka morfologisesti tunnistettiin A. gambiae sl. Kompleksin jäsenet [23]. Kenttätutkimuksessa parillisten talojen pyydystämistä analysoitiin käyttäen nimellistä logistista sovitusmallia, jossa vetovoima oli riippuvainen muuttuja ja hoito (synteettinen seos vs. JMP-vaikutus (J.0.0).0. SAS Institute Inc.).Tässä raportoimme χ2- ja p-arvot todennäköisyyssuhdetestistä.
Arvioi, onko se turvallista.arabiensis pystyi saamaan virtsan, päätyppilähteensä, urean, suoraan ruokkimalla 48 tunnin kuluessa antamisesta 4 päivän ajan (dpe) isäntäetsintä- ja veriruokittujen naarasruokintakokeiden jälkeen (kuva 1A). Sekä isäntää etsivät että verta imevät naaraat imesivät merkittävästi enemmän kuin mikään muu ruokavalio (2) (5,4) eli sakkaroosivettä (2) p < 0,0001 ja F(5,299) = 56,00, p < 0,0001; kuva 1B, C). Lisäksi isäntähakuiset naaraat söivät vähemmän virtsaa 72 tunnin kohdalla verrattuna virtsaan 168 tunnin kohdalla (kuva 1B). mM verrattuna kaikkiin muihin pitoisuuksiin ja veteen, vaikka se ei eroa 10 % sakkaroosista (F(10 813) = 15,72, p < 0,0001; kuva 1D). Tämä oli päinvastoin kuin veriruokittujen naaraiden vaste, jotka tyypillisesti absorboivat merkittävästi enemmän ureaa sisältäviä ruokavalioita kuin vettä, vaikkakin 10 % (5 %) sakkaroosia (5,5 %)1,5,5. p < 0,0001; kuva 1).1E). Lisäksi, kun verrataan kahta fysiologista tilaa, flebotomisoidut naaraat absorboivat enemmän ureaa kuin isäntähakuiset naaraat pienimmillä pitoisuuksilla, ja nämä naaraat absorboivat samanlaisia ​​määriä ureaa korkeammilla pitoisuuksilla (F(1,953) = p < 701;8.8.Kuva 1F, G). Vaikka ureapitoisesta ruokavaliosta saaduilla arvoilla näytti olevan optimaaliset arvot (kuvat 1D, E), naaraat molemmissa fysiologisissa tiloissa pystyivät moduloimaan absorboituneen urean määrää koko ureapitoisuuksien alueella log-lineaarisesti (kuvat 1F, G).).Samalla tavalla hyttyset näyttävät säätelevän typenottoaan säätelemällä imeytyneen virtsan määrää, koska virtsan typen määrä heijastuu imeytyneeseen määrään (kuva 1B, C ja B upotukset).
Virtsan ja urean vaikutusten arvioimiseksi isäntää etsivien ja verta imevien hyttysten selviytymiseen naaraille syötettiin kaikkien neljän ikäisten virtsaa (tuore, 24 h, 72 h ja 168 h laskeuman jälkeen) ja erilaisia ​​ureapitoisuuksia sekä tislattua vettä ja 10 %:n kokonaissakkaroosin analyysi (tämä ruokavalion sakkaroosin vertailu osoitti, että2). eloonjääminen isäntää etsivillä naarailla (virtsa: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; urea: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; kuva 2B, C) ja veriruokituilla naarailla (virtsa: fχ2 = 0,0,0,0,0 . urea: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; Kuva 2D,E).Kaikissa kokeissa virtsaa, ureaa ja vettä sisältävällä ruokavaliolla ruokittujen naaraiden eloonjäämisluvut olivat merkittävästi alhaisemmat kuin naarailla, jotka ruokittiin sakkaroosiruokavaliolla (kuva 2B-E). d 72 tunnin vanhentunut virtsa (p = 0,016), jolla oli pienin eloonjäämistodennäköisyys (kuvio 2B). Lisäksi isäntähakuiset naaraat, joille oli ruokittu 135 mM ureaa, selvisivät pidempään kuin vesikontrollit (p < 0,04) (kuvio 2B).2C). Verrattuna veteen naiset, joille ruokittiin tuoretta virtsaa ja 24 tunnin virtsaa, selviytyivät pidempään (p = 0,001 ja p = 0,012, vastaavasti; kuva 2D), kun taas naiset, joille ruokittiin 72 tunnin virtsaa, selvisivät pidempään kuin naiset, joille annettiin lyhyttä tuoretta virtsaa ja 24 tunnin ikäinen 0,0 = 0. 2D). Kun niitä ruokittiin 135 mM urealla, veriruokitut naaraat selvisivät pidempään kuin kaikki muut urea- ja vesipitoisuudet (p < 0,013; kuvio 2E).
Lehmän virtsaa ja ureaa syövän isännän ja verta imevän Anopheles arabiniksen eloonjääminen.Biologisessa määrityksessä (A) naarashyttysille tarjottiin ravintoa, joka sisälsi tuoretta ja vanhentunutta lehmän virtsaa, erilaisia ​​pitoisuuksia ureaa, sakkaroosia (10 %) ja tislattua vettä (H2O). 2 tuntia, kunnes kaikki virtsalla (B, D) ja urealla (C, E) ja kontrollit, sakkaroosilla ja vedellä ruokitut naaraat ovat kuolleet
Lentomyllytestissä 24 tunnin aikana määritetty kokonaisetäisyys ja kierrosten määrä erosi isäntähakuisten ja verta imevien hyttysten välillä, mikä osoitti vähemmän lentoaktiivisuutta (kuva 3). Isäntähyttyset, jotka tarjosivat tuoretta ja ikääntynyttä virtsaa tai sakkaroosia ja vettä, osoittivat selkeät lentomallit (kuva 3), kun taas naaraat ruokkivat enemmän naaraat, 2 ja 4. 168 tunnin ikäiset Virtsaa ruokkivat hyttyset esittivät erilaisia ​​lentokuvioita ja olivat pääasiassa vuorokausia. Sakkaroosia tai 72 tunnin virtsaa antaneet naarashyttyset osoittivat aktiivisuutta koko 24 tunnin ajan, kun taas vettä tarjonneet naaraat olivat aktiivisempia keskijakson aikana. Hyttyset ruokkivat eniten myöhään aamulla ja varhain yöllä. 72 tunnin ikäisen virtsan aktiivisuus väheni tasaisesti 24 tunnin aikana (kuva 3).
Lehmän virtsaa ja ureaa ruokkivan metsästäjää etsivän verta imevän naaraan Anopheles arabiniksen lentosuoritus. Lentomyllykokeessa naarashyttyset, jotka ruokkivat tuoretta ja vanhentunutta lehmän virtsaa, eri pitoisuuksia ureaa, sakkaroosia (10 %) ja tislattua vettä (H2O) sidottiin vaakasuoraan (pyörivään (verenkiertoon) isäntään (vapaasti veteen). ) naaraat, kunkin ruokavalion kokonaisetäisyys ja lentojen lukumäärä tunnissa kirjattiin 24 tunnin aikana (tumma: harmaa; vaalea: valkoinen).Keskimääräinen etäisyys ja keskimääräinen otteluiden lukumäärä näkyvät vuorokausiaktiivisuuskaavion oikealla puolella. Virhepalkit edustavat keskiarvon standardivirhettä. Tilastollinen analyysi, katso teksti
Yleisesti ottaen isäntiä etsivien naisten lentoaktiivisuus noudatti samanlaista kaavaa kuin lentomatka 24 tunnin aikana. Keskimääräiseen lentomatkaan vaikutti merkittävästi nautittu ruokavalio (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), ja isäntää etsivät naaraat söivät 72 tuntia virtsaa verrattuna kaikkiin muihin merkittävästi pidempiin laihdutusmatkoihin (0.0). ed hyttyset lensivät pidempään kuin tuoreet (p = 0,022) ja 24 tunnin ikäiset virtsassa (p = 0,022) ruokitut hyttyset. Toisin kuin virtsan ruokavalion kuvaamassa lentoaktiivisuuskuviossa, urealla ruokitut isäntähakuiset naaraat osoittivat jatkuvaa lentoaktiivisuutta 24 tunnin toisen vaiheen aikana (pimeä aktiivisuus 24 tunnin aikana). urealla ruokitut etsivät naaraat lisäsivät merkittävästi keskimääräistä lentomatkaa absorboituneesta pitoisuudesta riippuen (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Isäntää etsivät naaraat, joille oli ruokittu mitä tahansa ureapitoisuutta, lensivät pidempään kuin naaraat, joille ruokittiin joko vettä tai sakkaroosia (p < 0,03).
Verta imevien hyttysten kokonaislentoaktiivisuus oli vakaa ja säilynyt yli 24 tunnin ajan kaikissa ruokavalioissa, ja virtsan aktiivisuus lisääntyi pimeän jakson jälkipuoliskolla vedellä ruokittujen naaraiden sekä tuoreena ja 24 tunnin ikäisinä ruokittujen naaraiden (kuva 3). ruokavalio ei (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .muulla virtsalla ja kontrolliruokavaliolla (tuore, p = 0,0091; 72 tuntia, p = 0,0022; 168 tuntia, p = 0,001; sakkaroosi, p = 0,0017, 6 = 0,0017, 3).
Virtsan ja urean ruokinnan vaikutukset lisääntymisparametreihin arvioitiin munimisen biotesteissä (Kuva 4A) ja niitä tutkittiin kunkin naaraan munimien munien lukumäärän, munan koon ja vasta kuoriutuneiden ensimmäisen kasvuvaiheen toukkien mukaan. Munittujen munien määrä. Virtsalla ruokitut arabinaaraat vaihtelivat ruokavalion mukaan (F,40,30) (F,40,30) ).Naaraat, joille ruokittiin 24 tunnin virtsaa, verijauhoa munivat merkittävästi enemmän munia kuin naaraat, joita ruokittiin muulla virtsaruokavaliolla, ja ne olivat samanlaisia ​​kuin sakkaroosilla ruokitut naaraat (kuvio 4B). Samoin virtsaan syötettyjen naaraiden munien munien koko vaihteli ruokavalion mukaan (F(5, 209) = 12.85, .20ed-4housseurseurse 109). munivat merkittävästi suurempia munia kuin vedellä ruokitut naaraat, kun taas 168 tuntia virtsaa syötetyt naaraat olivat merkittävästi pienempiä (kuva 4C). Lisäksi virtsan ruokavalio vaikutti merkittävästi toukkien kokoon (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), ja huomattavasti suurempia toukkia syntyi 7-24 virtsan-24 ponnetuista munasta. kuin munien toukista munituista munista.Vedellä ruokitut ja 168 tunnin virtsaruokitut naaraat (kuva 4D).
Lehmän virtsaa ja ureaa ruokkivien naaraspuolisten Anopheles arabinis -hyttysten lisääntymiskyky. Veriruokittuja naarashyttysiä ruokittiin ruokavaliolla, joka sisälsi tuoretta ja vanhentunutta lehmän virtsaa, erilaisia ​​pitoisuuksia ureaa, sakkaroosia (10 %) ja tislattua vettä (H2O) 48 tunnin ajan, ennen kuin ne asetettiin munasoluihin (Egg-alustat (Egg 8 tuntia), munan kokoa 8 tuntia ja Egg-alustat 4 tuntia). , F) ja toukkien kokoon (D, G) vaikutti merkittävästi tarjottu ruokavalio (lehmän virtsa: BD; urea: EG). Kunkin parametrin keskiarvot, jotka mitattiin käyttämällä eri kirjainnimiä, erosivat merkittävästi toisistaan ​​(yksisuuntainen ANOVA käyttäen Tukeyn post hoc -analyysiä; p < 0,05). Virhepalkit edustavat keskiarvon standardivirhettä.
Virtsan pääasiallisena typpipitoisena komponenttina urea vaikutti merkittävästi lisääntymisparametreihin kaikissa tutkimuksissa, kun sitä annettiin veriruokittujen naaraiden ruokavaliona. Urealla ruokittujen naaraiden munien munien määrä veriaterian jälkeen riippuen ureapitoisuudesta (F(11, 360) = 4,69; p < 0,000,0,00001 m3 m3-1 urea naaraspuolet). M munii enemmän (kuva 4E). Naaraat, joita ruokittiin ureapitoisuuksilla 134 µM tai enemmän, munivat suurempia munia kuin vedellä ruokitut naaraat (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; kuva 4F) ja toukkien koko, vaikka niihin vaikuttivat samanlaiset ureapitoisuudet (3 0,0 0,0 emoissa). 001) oli vaihtelevampi (kuvio 4G).
Yleinen houkuttelevuus isäntää etsiville naudan virtsan haihtuville uutteille. Lasiputkiolfaktometrillä arvioituun arabiensiin (kuva 5A) vaikutti merkittävästi virtsan ikä (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; kuva 5B). kaikki muut hoidot (72 tuntia: p = 0,0060, 168 tuntia: p = 0,012, pentaani: p = 0,00070), Lukuun ottamatta tuoreen virtsan hajua (p = 0,13; kuva 5B). Vaikka verta imevien hyttysten yleinen vetovoima virtsan suhteen ei ollut merkitsevästi eroavaa (χ = 8, χ = 8, p.7 =8 d.8, 067; kuva 5C), näiden naaraiden havaittiin olevan merkittävästi houkuttelevampia headspace-haihtuville uutteille verrattuna 72 tuntia vanhentuneeseen virtsaan verrattuna kontrolleihin (p = 0,0066; kuvio 5C).
Käyttäytymisreaktiot luonnollisiin ja synteettisiin lehmän virtsan hajuihin isäntä- ja veriruokitun Anopheles arabianuksen etsinnässä. Lasiputken olfaktometrin kaavio (A). Tuoreen ja ikääntyneen lehmän virtsasta peräisin olevien haihtuvien uutteiden houkutteleminen isäntään (B) ja verta imevä (C) herrauutte. Tunti (E), 72 tuntia (F) ja 168 tuntia (G) ikääntynyt lehmän virtsa näytetään. Elektroniantennin havaitsemisjäljet ​​(EAD) osoittavat jännitteen muutoksia vasteena bioaktiivisille yhdisteille kaasukromatografista eluoituneessa ylätilassa ja havaitaan liekki-ionisaatiodetektorilla (FID). Asteikopalkki edustaa vapautumisnopeutta (retentioaika ja amplitudi) (retentioaika) ss. g h-1) biologisesti aktiivisista yhdisteistä on esitetty.Yksi tähti (*) osoittaa johdonmukaista matalan amplitudin vastetta.Kaksoistähti (**) ilmaisee toistumattomia vasteita.Etsi isäntä (H) ja verta imevä (I) An.arabiensis vetoaa merkittävästi synteettisiin tuoreiden ja ikääntyneiden hyttysten sekoituksiin. muu (yksisuuntainen ANOVA käyttäen Tukeyn post hoc -analyysiä;p < 0,05). Virhepalkit edustavat asteikon standardivirhettä
Naaras Ann.arabiensis, 72 h ja 120 h verijauhon jälkeen, kutuaikana, ei suositeltu headspace-haihtuvia uutteita tuoreesta ja ikääntyneestä lehmän virtsasta verrattuna pentaanikontrolliin (χ2 = 3,07, p > 0,05; lisätiedosto 1: kuva S1).
GC-EAD- ja GC-MS-analyysit tunnistivat naaraspuolisille Ann.arabiensis-naaraille kahdeksan, kuusi, kolme ja kolme bioaktiivista yhdistettä (kuva 5D-G). Vaikka sähköfysiologisia vasteita saaneiden yhdisteiden lukumäärässä havaittiin eroja, suurin osa näistä yhdisteistä oli läsnä jokaisessa tuoreesta ja vanhentuneesta virtsasta kerätyssä haihtuvassa antenniuutteessa. Siksi kustakin yllä olevasta uutteesta tuotettiin vain yhdisteitä. pitoon sisällytettiin lisäanalyyseihin.
Bioaktiivisten yhdisteiden haihtuvien yhdisteiden vapautumisnopeus headspace-kokoelmassa nousi 29 µg:sta h-1 tuoreessa virtsassa 242 µg h-1:een 168 tuntia vanhentuneessa virtsassa pääasiassa p-kresolin ja m-formaldehydin ansiosta. Fenoli lisääntyy sekä fenoli. virtsan ikä, joka korreloi havaitun signaalin intensiteetin (runsauden) vähenemisen kanssa kromatogrammissa (kuvio 5D) - G vasen paneeli) ja fysiologisiin vasteisiin näille yhdisteille (kuvio 5D - G oikea paneeli).
Kaiken kaikkiaan synteettisessä seoksessa oli samanlainen luonnollinen suhde bioaktiivisia yhdisteitä, jotka tunnistettiin tuoreen ja vanhentuneen virtsan haihtuvissa uutteissa (kuvat 5D–G), eikä se näyttänyt herättävän merkittävää vetovoimaa isännän etsinnässä (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; kuva 5, χ = 9 mosktsd (2.1H) 4, p = 0,30; kuva 5I). Hoitojen väliset post hoc -parivertailut osoittivat kuitenkin, että isäntää etsivät hyttyset houkuttelivat merkittävästi 24 tuntia vanhentuneen virtsan synteettistä seosta verrattuna pentaanikontrolleihin (p = 0,0086; kuva 5H).
Yksittäisten komponenttien roolin arvioimiseksi synteettisissä 24 tuntia ikääntyneen virtsan seoksissa arvioitiin kuusi vähentävää seosta verrattuna täydellisiin seoksiin Y-putkimäärityksessä, jossa yksittäiset yhdisteet poistettiin. Isäntähakuisten hyttysten kohdalla yksittäisten yhdisteiden vähentämisellä kokonaisesta seoksesta oli merkittävä vaikutus käyttäytymisvasteisiin (χ2 = 19,06, 19,06, 1 df .63). 2A), kaikki vähentävät seokset olivat houkuttelevampia kuin Pienempi kuin täysin sekoitettu. Sitä vastoin yksittäisten yhdisteiden poistaminen täyssynteettisestä seoksesta ei vaikuttanut verta imevien hyttysten käyttäytymisvasteisiin (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), lukuun ottamatta dekanaalia, joka johti pienempään seoksen vetoon verrattuna S (Kuva 2 = 2) Seoksen vetokyky oli pienempi kuin S:2.
Malaria-endeemisessä kylässä Etiopiassa 24 tunnin lehmän virtsan synteettisen seoksen tehokkuutta hyttysten houkuttelemisessa kenttäolosuhteissa arvioitiin kymmenen yön ajan (kuva 6A). Yhteensä 4 861 hyttystä pyydettiin ja tunnistettiin, joista 45,7 % oli Anthropus.g,slambiess. 35,4 % oli Culex spp. (Lisätiedosto 1: Taulukko S1). Anopheles arabinis on ainoa PCR-analyysillä tunnistettu An.Gambian-lajikompleksin jäsen. Keskimäärin 320 hyttystä pyydettiin yössä, jona aikana synteettisten seossyöttien ansoja sai kiinni enemmän hyttysiä kuin parillisia ansoja ilman seosta, 0,0 . 01) .Syöttittömät pyydykset asetettiin joka viidestä kontrolliyöstä kokeen alussa, keskellä ja lopussa. Samanlainen määrä hyttysiä pyydettiin jokaisessa ansiparissa, mikä osoitti, että talojen välillä ei ollut poikkeavaa (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, 9 × 10-13, p > 0 pyydystettyjen hyttysten lukumäärä tutkimusjakson aikana, p > 0. synteettistä seosta sisältävissä ansoissa lisääntyi merkittävästi: isännän etsintä (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), äskettäinen veriruokinta (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) ja raskaus (χ2(0, 228) = 3,0; p = 60.0Lisätiedosto 1: Taulukko S1). Tämä näkyy myös pyydystettyjen hyttysten kokonaismäärässä: isäntä etsii > verta imevä > raskaana > puoliraskaana > uros.
Kenttäarviointi 24 tunnin synteettisen lehmän virtsan hajuseoksen tehokkuudesta. Kenttäkokeet suoritettiin Etelä-Keski-Etiopiassa (kartta), lähellä Makin kaupunkia (lisää), käyttäen Centers for Disease Control (CDC) -valoloukkua (oikealla) paritaloissa, ja naaraskuvan sieppaus (CD) ja naaraskuva (Sbaynitthe-kuvankaappaus) CA (-Sbaynitthe-kuvankaappausCA). opheles arabesques (B), mutta ei Anopheles farroes (C), eri tavalla, fysiologinen tilariippuvainen vaikutus.Lisäksi nämä pyydykset saivat kiinni huomattavasti enemmän isäntä-Culex-hyttysiä.(D) Verrattuna kontrolliin. Vasemmanpuoleiset palkit edustavat hajusteiden pareina pyydettyjen hyttysten keskimääräistä valintaindeksiä. edustavat keskimääräistä valintaindeksiä ohjausloukkujen pareissa (avoin; N = 5).).Tähdet osoittavat tilastollisia merkitsevyystasoja (*p = 0,01 ja ***p < 0,0001)
Nämä kolme lajia vangittiin eri tavalla synteettisiä seoksia sisältäviin ansoihin. Etsitään isäntä (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), verensyöttö (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) ja raskaus (χ2(1, 517) sis jäi loukkuun, joka vapauttaa synteettisen seoksen (kuva 6B), kun taas An:n määrä ei eronnut. Pharoensisiä havaittiin erilaisissa fysiologisissa tiloissa (kuva 6C). Culexille havaittiin vain merkittävä kasvu isäntiä etsivien hyttysten määrässä synteettisellä seoksella syötetyissä ansoissa, (1χ120, =1χ20, (1χ20) Kuva 6D) verrattuna kontrolliloukkuihin.
Etiopian pesimäpaikkojen ja maaseutuyhteisöjen välissä potentiaalisten isäntien ulkopuolella sijaitsevia syöttiloukkuja käytettiin arvioimaan, käyttävätkö malariahyttyset lehmän virtsan hajua isäntäympäristön ilmaisimena. Jos isäntävihjeitä, lämpöä ja lehmän virtsan hajua tai ilman lehmän virtsan hajua ei ollut, hyttysiä ei saatu talteen (Lisäkuva 3-tiedostosta 1:ow, cow urea). naarasmalariahyttysiä houkuteltiin ja pyydettiin, vaikkakin pieninä määrinä, virtsan iästä riippumatta (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; Lisätiedosto 1: Kuva S3 ). Sitä vastoin vesikontrollit eivät sieppaneet malariahyttysiä korkeissa lämpötiloissa (Lisätiedosto 1: Kuva S3).
Malariahyttyset hankkivat ja levittävät typpeä sisältäviä yhdisteitä kompensoivan ruokinnan kautta lehmän virtsaan (eli lätäköihin) elämänhistorian ominaisuuksien parantamiseksi muiden hyönteisten tapaan [2, 4, 24, 25, 26]. Lehmän virtsa on helposti saatavilla oleva uusiutuva luonnonvara sellaisille maaseudun kasvupaikoille, jotka liittyvät läheisesti maaseudun lepopaikkoihin, kuten talliin ja vektoreihin. s ja kutupaikat.Naarashyttyset paikantavat tämän resurssin hajun perusteella ja pystyvät säätelemään virtsan typpiyhdisteiden, mukaan lukien virtsan pääasiallisen typpikomponentin, urean, ottoa [15, 16]. Naarashyttysen fysiologisesta tilasta riippuen ravinteet tehostavat naarashyttysen fysiologista tilaa, sekä virtsan eloonjäämistä. veriruokittujen yksilöiden eloonjäämis- ja lisääntymisominaisuudet ensimmäisen gonadotrooppisen syklin aikana. Siksi virtsan sekoittuminen on tärkeä ravitsemusrooli malarian vektoreille, jotka ovat suljettuja kuten aliravitut aikuiset [8], koska se tarjoaa naarashyttysille kyvyn hankkia tärkeitä typpiyhdisteitä osallistumalla vähäriskiseen lisääntymiskykyyn, lisääntymiskykyyn ja lisääntymiskykyyn, kaikki riskit lisääntyvät merkittävästi. jotka vaikuttavat vektorin kapasiteettiin.Lisäksi tämä käyttäytyminen voi olla tulevien vektorinhallintaohjelmien kohteena.