Javascript on tällä hetkellä poissa käytöstä selaimessasi. Jotkin tämän sivuston ominaisuudet eivät toimi, jos JavaScript on poistettu käytöstä.
Rekisteröidy tiedoillasi ja kiinnostavalla lääkkeellä, niin yhdistämme antamasi tiedot laajan tietokantamme artikkeleihin ja lähetämme sinulle viipymättä PDF-kopion.
Näyttelijät Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 6, 7 Catellalinian lääketieteen ja Catellalinian yliopiston Experimentin osasto, Livia21 Manz , 95123, Italia;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia;3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italia;6 Biolääketieteen ja bioteknologian tieteiden laitos, Catanian yliopisto, lääketieteellinen genetiikka, Catania, Italia, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italia Viestintä: Stefania Stella, puh. +39 095 378 1946, sähköposti [sähköposti suojattu];[sähköposti suojattu] Tarkoitus: BRCA1:n ja BRCA2:n sukusolujen mutaatiot ja todettu rintasyöpä (BC), munasarjasyöpä (OC) ja muu, joka liittyy elinikäiseen syöpäriskiin. BRCA-geenin testaus on avainasemassa yksilöllisen riskin arvioinnissa, samoin kuin ennaltaehkäisymenetelmien löytämisessä terveillä kantajilla ja syöpäpotilaiden hoitojen räätälöimisessä. BRCABR:n esiintyvyys on kuitenkin laajaa BRCABR:n levinneisyyttä kaikilla alueilla ja alueilla. patogeeniset variantit sisilialaisissa perheissä, erityisesti Itä-Sisilian populaatioihin kohdistettuja tutkimuksia ei ole. Tutkimuksemme tavoitteena oli tutkia BRCA:n patogeenisten ituradan muutosten esiintyvyyttä ja jakautumista Itä-Sisilian BC-potilaiden kohortissa ja arvioida niiden yhteyttä tiettyihin BC-piirteisiin käyttämällä seuraavan sukupolven kasvainsekvensointeja (ylikasvuindeksien esiintyminen:93ult-asteikko. %) oli BRCA-patogeeninen variantti, 17 (49 %) BRCA1:ssä ja 18 (51 %) BRCA2:ssa.BRCA1-muutokset ovat yleisiä kolminkertaisesti negatiivisilla BC-potilailla, kun taas BRCA2-mutaatiot ovat yleisempiä luminaalisilla BC-potilailla. Verrattuna ei-kantajiin, koehenkilöillämme oli merkittävästi korkeampi BRCA1-luokituksen tulos. Kansallinen tila Itä-Sisilian BC-potilailla ja vahvistaa NGS-analyysin roolin perinnöllistä BC-potilaiden tunnistamisessa. Kaiken kaikkiaan nämä tiedot ovat yhdenmukaisia ​​aiempien todisteiden kanssa, jotka tukevat BRCA-seulontaa mutaation kantajilla tapahtuvan syövän asianmukaista ehkäisyä ja hoitoa varten.
Rintasyöpä (BC) on yleisin pahanlaatuinen syöpä maailmanlaajuisesti ja tappavin naisten syöpä.1 Biologisia piirteitä, jotka määrittävät BC-ennusteen ja kliinisen käyttäytymisen, on tutkittu laajasti ja osittain selvitetty ajan mittaan. Itse asiassa tällä hetkellä käytetään useita korvikemarkkereita BC:n luokittelussa eri molekyylien alatyyppeihin. Ne ovat estrogeeni (ER) ja/tai progesteroniindeksin reseptori (epidermaalikasvu) (PHER) proliferaatioreseptori2 (PHER) -67 ja kasvainaste (G).2 Näiden muuttujien yhdistelmä identifioi seuraavat BC-luokat: 1) Luminaaliset kasvaimet, joissa oli ER- ja/tai PgR-ilmentymistä, vastasi 75 % BC:stä. Nämä kasvaimet jaettiin edelleen Luminaaliseen A:han, kun Ki-67 oli alle 20 % ja HER2 negatiivinen, ja Luminal B oli yhtä suuri kuin 0, kun Ki-6 tai yli 7:stä. leviämisindeksi;2) HER2+-kasvaimet, jotka ovat ER- ja PgR-negatiivisia, mutta osoittavat HER2-amplifikaatiota. Tämä ryhmä muodostaa 10 % kaikista rintakasvaimista;3) Triple-negatiivinen rintasyöpä (TNBC), joka ei osoita ER- ja PgR-ilmentymistä ja HER2-amplifikaatiota, muodostaa noin 15 % rintasyövistä.2-4
Näistä BC-alatyypeistä kasvainaste ja proliferaatioindeksi edustavat poikkileikkausbiomarkkereita, jotka liittyvät suoraan ja itsenäisesti kasvaimen aggressiivisuuteen ja ennusteeseen.5,6
Edellä mainittujen biologisten ominaisuuksien lisäksi BC:n kehittymiseen johtavien perinnöllisten geneettisten muutosten rooli on tullut yhä tärkeämmäksi viime vuosien aikana.7 Noin yksi kymmenestä rintakasvaimesta periytyy tiettyjen geenien ituradan muutoksista.8 Kaksi suurta epidemiologista tutkimusta, joihin osallistui yli 180 000 naista, on äskettäin tunnistanut BCAARD-geenin CHK2, PALB2, RAD51C ja RAD51D) ovat ensisijaisesti vastuussa perinnöllisestä BC:stä. Näistä geeneistä BRCA1 ja BRCA2 (jäljempänä BRCA1/2) osoittivat voimakkainta korrelaatiota rintakasvainten kehittymisen kanssa. haima, kolorektaali ja melanooma. 13–80-vuotiaiden BC:n kumulatiivinen ilmaantuvuus on 72 % naisilla, joilla on BRCA1-patogeeninen variantti (PV) ja 69 % naisilla, joilla on BRCA2-viruksen PV.14
Erityisesti äskettäin julkaistu julkaisu viittaa siihen, että BC-riski riippuu PV:n tyypistä. Itse asiassa, verrattuna patogeenisiin katkaisuvariantteihin, räikeät missense-variantit, erityisesti BRCA1-geenissä, liittyvät pienempään BC-riskiin, erityisesti vanhemmilla naisilla.15
BRCA1:n tai BRCA2:n PV:n esiintyminen liittyi erilaisiin biologisiin ja kliinisiin patologisiin piirteisiin.16,17 BRCA1:een liittyvät BC:t ovat yleensä kliinisesti aggressiivisia, heikosti erilaistuneita ja erittäin proliferatiivisia. Nämä kasvaimet ovat yleensä kolminkertaisesti negatiivisia ja alkavat kohtalaisen varhaisessa iässä. Kasvaimet, jotka esiintyvät tyypillisesti yksilöllisesti lisääntyneissä ja hyvin monimutkaisissa asteissa. Nämä kasvaimet ovat yleisempiä luumenissa B ja niitä esiintyy yleensä vanhemmilla aikuisilla.16-18 Erityisesti BRCA1:n ja BRCA2:n mutaatiot lisäävät herkkyyttä tietyille hoidoille, mukaan lukien platinasuolat ja kohdennetut lääkkeet, kuten poly(ADP-riboosi)polymeraasi-inhibiittorit (PARPi).19,20
Muutaman viime vuoden aikana seuraavan sukupolven sekvensoinnin (NGS) käyttöönotto kliinisessä käytännössä on mahdollistanut yhä useamman BC-potilaan molekyylitestauksen syöpäalttiusoireyhtymien, mukaan lukien BRCA1/2.21, varalta. Samanaikaisesti sukuhistoriaa, demografisia ja kliinisen patologisia ominaisuuksia koskevat määritelmät ovat yksilöiden tunnistamisen arvoisia. BRCA1/2-seulonnan kerääminen tietyissä populaatioissa ja korostaa eroja maantieteellisten alueiden välillä.24–27 Vaikka BC-kohortista on olemassa raportteja Länsi-Sisiliassa, BRCA1/2-seulonnasta on saatavilla vähemmän tietoa Itä-Sisilian väestöstä.28,29
Kuvaamme tässä ituradan BRCA1/2-seulonnan tulokset Itä-Sisilian BC-potilailla, mikä edelleen korreloi BRCA1- tai BRCA2-mutaatioiden esiintymisen näiden kasvainten pääasiallisiin kliiniset patologisiin piirteisiin.
Retrospektiivinen tutkimus tehtiin Policlinicon sairaalan "Center for Experimental Oncology and Hematology".Rodolico – San Marco Cataniassa. Tammikuusta 2017 maaliskuuhun 2021 yhteensä 455 potilasta, joilla oli rinta- ja munasarjasyöpä, melanooma, haima- tai eturauhassyöpä, lähetettiin geenidiagnostiseen CA/2-tutkimukseen geenidiagnostiikan CA/2 mukaisesti. Helsingin selvitys, ja kaikki osallistujat antoivat kirjallisen suostumuksen ennen molekyylianalyysiä.
BC:n histologiset ja biologiset ominaisuudet (ER, PgR, HER2-status, Ki-67 ja aste) arvioitiin ydinbiopsiasta tai kirurgisista näytteistä, ottaen huomioon vain aggressiiviset kasvainkomponentit. Näiden ominaisuuksien perusteella BC:t luokiteltiin seuraavasti: luminaalinen A (ER+ ja/tai PgR+, HER2-, B++ER,7/HER20 %) ja Ki-6/7/7. Ki-67≥20 %), luminaalinen B-HER2+ (ER ja/tai PgR+, HER2+), HER2+ (ER ja PgR-, HER2+) tai kolminkertaisesti negatiivinen (ER ja PgR-, HER2-).
Ennen BRCA1- ja BRCA2-mutaatioiden tilan arvioimista monitieteinen ryhmä, johon kuului onkologi, geneetikko ja psykologi, suoritti jokaiselle potilaalle kasvaimen geneettisen konsultaation määrittääkseen BRCA1:n ja/tai BRCA1:n esiintymisen.tai henkilöt, joilla on korkea riski saada PV BRCA2-geenissä. Potilaiden valinta suoritettiin Italian lääketieteellisen onkologian yhdistyksen (AIOM) ohjeiden ja paikallisten sisilialaisten suositusten mukaisesti.30,31 Näihin kriteereihin kuuluvat: (i) suvussa tunnettuja patogeenisiä variantteja herkkyysgeeneissä (esim. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) urokset, joilla on BC;(iii) ne, joilla on BC ja OC;(iv) naiset, joiden BC < 36 vuotta, TNBC < 60 vuotta tai molemminpuolinen BC < 50 vuotta;(v) henkilökohtainen sairaushistoria eKr. < 50 vuotta ja vähintään yksi ensimmäisen asteen sukulainen: (a) eKr. < 50 vuotta;(b) kaiken ikäiset ei-mukinoosit ja ei-rajasolut;(c) kahdenvälinen BC;(d) miespuolinen BC;(e) haimasyöpä;(f) eturauhassyöpä;(vi) kaksi tai useampi henkilöhistoria BC > 50 vuotta ja suvussa BC, OC tai haimasyöpä sukulaisilla, jotka ovat toistensa ensimmäisen asteen sukulaisia ​​(mukaan lukien sukulaiset, joiden kanssa hän on ensimmäisen asteen sukulaisia);(vii) OC:n henkilöhistoria ja vähintään yksi ensimmäisen asteen sukulainen: (a) eKr. <50 vuotta;(b) NOC;(c) kahdenvälinen BC;(d) miespuolinen BC;vii) naaras, jolla on korkea-asteinen seroosi.
Jokaiselta potilaalta otettiin 20 ml:n perifeerinen verinäyte ja kerättiin EDTA-putkiin (BD Biosciences). Genominen DNA eristettiin 0,7 ml:n kokoverinäytteistä käyttämällä QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit -eristyspakkausta (QIAGEN, Hilden, Italia) valmistajan ohjeiden mukaisesti ja kuljetettiin Qubitific®-, Shalometer-, Shificent®-, Fishometer-laitteen (The0ificent®, Fishometer) läpi. Suorita kvantifiointi.Kohteen rikastamisen ja kirjaston valmistuksen suorittaa Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, joka on valmis ladattavaksi Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 -kittiin automaattista kirjaston valmistusta varten valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kitti koostuu kahdesta moninkertaisesta PCR-alukepoolista, joita voidaan käyttää kaikkien BRCA1 (NM_0.00)N3BRCA1 (NM_0.00)N30BRCA.0.007 -geenien tutkimiseen. s. Lyhyesti sanottuna 15 µl kutakin laimennettua näyte-DNA:ta (10 ng) lisättiin viivakoodilevyille kirjaston valmistelua varten ja kaikki reagenssit ja kulutustarvikkeet ladattiin Ion Chef™ -instrumenttiin. Tämän jälkeen suoritettiin automaattinen kirjaston valmistelu ja viivakoodinäytekirjastojen yhdistäminen Ion Chef™ -laitteella. Waltham, MA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lopuksi kirjastot yhdistetään ekvimolaarisissa suhteissa Ion Chef™ -kirjaston näyteputkiin (viivakoodiputket) ja ladataan Ion Chef™ -instrumenttiin. Sekvensointi suoritettiin käyttämällä Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) -laitetta (Thermo FisherDaponific (Thermo FisherDaponific)1 Fisher Scientific -analyysiä käyttäen. Amplicon Suite (SmartSeq srl) ja Ion Reporter Software.
Kaikki varianttinimikkeistö noudatti Human Genome Variation Consortiumin nykyisiä ohjeita, jotka ovat saatavilla verkossa (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2-varianttien kliininen merkitys määriteltiin käyttämällä International Consortium ENIGMA:n (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant:UP) ja httpsAR-tietokannan https://www.consortiuming.org. , BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD ja UMD. Luokitus sisältää viisi erillistä riskiluokkaa: hyvänlaatuinen (luokka I), todennäköisesti hyvänlaatuinen (kategoria II), epävarman merkityksen variantti (VUS, luokka III), todennäköinen patogeeninen (kategoria IV) ja patogeeninen (mutaatioiden funktion proteiinien funktion funktio analysoi myös tietokannan muuttujan vaikutusta ja luokka V). .32
Potentiaalisen kliinisen merkityksen määrittämiseksi kullekin VUS:lle käytettiin seuraavia laskennallisia proteiinien ennustusalgoritmeja: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2://) ja Agdh.agh2/VGDh.aghci/. d_input.php). Luokkiin 1 ja 2 luokiteltuja muunnelmia pidettiin villityyppisinä.
Sanger-sekvensointi vahvisti kunkin patogeenisen variantin läsnäolon. Lyhyesti sanottuna kullekin havaitulle variantille suunniteltiin spesifisten alukkeiden pari käyttämällä BRCA1- ja BRCA2-geenin referenssisekvenssejä (NG_005905.2, NM_007294.3 ja NG_012772.3, NM_007294.3 ja NM_012772.3, NM_00005, jota seurasi CR-sekvensointi, vastaavasti, CR:n sekvensointi, ja vastaavasti9). .
Potilaat, joiden testi oli negatiivinen BRCA1/2-geenin suhteen, testattiin multipleksiligaatiosta riippuvaisella koetinamplifikaatiolla (MLPA) valmistajan ohjeiden mukaisesti suurten genomien uudelleenjärjestelyjen (LGR) esiintymisen arvioimiseksi. Lyhyesti sanottuna DNA-näytteet denaturoidaan ja käytetään jopa 60 BRCA1- ja BRCA2-geenispesifistä geenispesifistä DNA-pituutta osoittavaa koetinta. , jotka koostuivat ainutlaatuisesta sarjasta PCR-amplikoneja, analysoitiin sitten kapillaarielektroforeesilla ja Cofalyser.Net-ohjelmistolla yhdessä asianmukaisten eräkohtaisten Cofalyser-taulukoiden (www.mrcholland.com) kanssa.
Valitut kliiniset patologiset muuttujat (histologinen luokka ja Ki-67 % proliferaatioindeksi) liittyivät BRCA1/2 PV:n esiintymiseen, laskettuna Prism-ohjelmistolla v. 8.4 käyttäen Fisherin tarkkaa testiä olettaen, että p-arvo <0,05 on merkitsevä.
Tammikuun 2017 ja maaliskuun 2021 välisenä aikana 455 potilasta seulottiin ituradan BRCA1/2-mutaatioiden varalta. Mutaatiotestaus suoritettiin Policlinicon sairaalan kokeellisen onkologian ja hematologian keskuksessa. Sisilian ohjeiden mukaisesti (N/www.gurs.regione.0ì-Venerm.2enerm.2enerm.2enerm.2.0.0. sicilia. o 2020), Rodolico of Catania – San Marco” yhteensä 389 potilasta Rintasyöpää 37, haimasyöpää 16, eturauhassyöpää 8 ja melanoomaa 5.Potilaiden jakautuminen syöpätyypin ja analyysitulosten mukaan on esitetty kuvassa 1.
Kuvassa 1 on vuokaavio, joka esittää yleiskatsauksen tutkimuksesta. Potilailta, joilla oli rinta-, melanooma-, haima-, eturauhas- tai munasarjakasvaimet, testattiin BRCA1- ja BRCA2-geenien mutaatiot.
Lyhenteet: PVs, patogeeninen variantti;VUS, muunnelma, jolla on epävarma merkitys;WT, villityypin BRCA1/2-sekvenssi.
Keskitimme tutkimuksemme valikoivasti rintasyöpäkohortteihin. Potilaiden mediaani-ikä oli 49 vuotta (vaihteluväli 23-89) ja pääosin naisia ​​(n=376 eli 97 %).
Näistä koehenkilöistä 64:llä (17 %) oli BRCA1/2-mutaatioita ja kaikki olivat naisia. Kolmekymmentäviisi viidellä (9 %) oli PV ja 29:llä (7,5 %) VUS. Seitsemäntoista (48,6 %) 35 patogeenisestä variantista esiintyi BRCA1:ssä ja 18 (51,4 %) BRCA2:ssa ja 18 (51,4 %) BRCA2:ssa, kun taas 18:lla (51,4 %) BRCA2:ssa (2 %) (8 %). BRCA2 (kuvat 1 ja 2).LGR ei ollut läsnä MLPA-analyysissä.
Kuva 2. BRCA1- ja BRCA2-mutaatioiden analyysi 389 rintasyöpäpotilaalla.(A) Patogeenisten varianttien (PV) (punainen), epävarman merkityksen varianttien (VUS) (oranssi) ja WT (sininen) jakauma 389 rintasyöpäpotilaalla;(B) 389 rintasyöpäpotilaalla 35:llä (9 %) oli BRCA1/2-patogeenisiä variantteja (PV:t). Heistä 17 (48,6 %) oli BRCA1:n PV-kantajia (tummanpunainen) ja 18 (51,4 %) BRCA2-kantajia (vaaleanpunainen);(C) 29:llä (7,5 %) 389 koehenkilöstä oli VUS, 5 (17,2 %) BRCA1-geeniä (tumma oranssi) ja 24 (82,8 %) BRCA2-geeniä (vaaleanoranssi).
Lyhenteet: PVs, patogeeninen variantti;VUS, muunnelma, jolla on epävarma merkitys;WT, villityypin BRCA1/2-sekvenssi.
Seuraavaksi tutkimme BC-molekyylialatyyppien esiintyvyyttä potilailla, joilla oli BRCA1/2-PV. Jakauma sisälsi 2 (5,7 %) luminaalista A:ta (5,7 %), luminaalista B:tä 15 (42,9 %), 3:a (8,6 %) luminaalista B-HER2+:ta, 2 (5,7 %) HER2+-potilasta ja 13 (5,7 %) potilasta, joiden TNBC2+ positiivinen (37,1 %) 4,1 %) NBC2. oli luminaalinen B BC, 2 (11,8 %) oli HER2+-sairaus ja 10 (58,8 %) oli TNBC. Kasvaimet ilman BRCA1-mutaatioita olivat joko luminaalista A- tai luminaalista B-HER2+ (kuva 3). BRCA2-positiivisessa alaryhmässä 10 (55,6 %) B-kasvaimia oli -3 (.10) (55,6 %) B-tuumoria (.13 %) (. 6,7 %) TNBC ja 2 (11,1 %) olivat luminaalista A:ta (kuvio 3). Tässä ryhmässä ei ollut HER2+-kasvaimia. Siten BRCA1-mutaatiot ovat yleisiä TNBC-potilailla, kun taas BRCA2-muutokset ovat vallitsevia ontelo B -yksilöissä.
Kuva 3 Rintasyövän alatyyppien esiintyvyys potilailla, joilla on BRCA1- ja BRCA2-patogeenisiä muunnelmia. Histogrammit, jotka osoittavat BRCA1- (tummanpunainen) ja BRCA2- (vaaleanpunainen) PV-jakauman rintasyöpäpotilaiden molekyylialatyypeissä. Kussakin laatikossa ilmoitetut numerot edustavat kunkin rintasyövän BRCA1- ja BRCA2-alatyypin potilaiden prosenttiosuutta.
Lyhenteet: PVs, patogeeninen variantti;HER2+, ihmisen epidermaalisen kasvutekijän reseptori 2 positiivinen;TNBC, kolminkertaisesti negatiivinen rintasyöpä.
Myöhemmin arvioimme BRCA1- ja BRCA2-PV:iden tyypin ja geenin lokalisoinnin.BRCA1-PV:ssä havaitsimme 7 yhden nukleotidin varianttia (SNV), 6 deleetiota, 3 päällekkäisyyttä ja 1 insertion.Vain yksi mutaatio (c.5522delG) edustaa uutta löytöä.Yleisin havaittu c. Tämä muutos sisältää viiden nukleotidin (CTAAT) deleetion BRCA1:n eksonissa 15, mikä johtaa aminohapon leusiinin substituutioon tyrosiinilla kodonissa 1679, ja translaatiokehyssiirtymän vuoksi ennustetulla vaihtoehtoisella lopetuskodonilla johti ennenaikaiseen proteiinin katkaisuun. Kaikki muut muutokset eivät havaittu vain yksi tapaus. alue (n. 4357+1G>T) (taulukko 1).
BRCA2-PV:n osalta havaitsimme 6 deleetiota, 6 SNV:tä ​​ja 2 päällekkäisyyttä. Mikään löydetyistä muutoksista ei ole uusi. Kolme mutaatiota toistettiin populaatiossamme, c.428dup ja c.8487+1G>A havaittiin 3 koehenkilössä, mitä seurasi c.5851_5854del2-toistuva AGTT-tapaus8 uudelleen. 5 BRCA2:n ennustetaan koodaavan katkaistua, ei-toiminnallista proteiinia. C.8487+1G>A-mutaatio esiintyy BRCA2-intronin 19 intronialueella (± 1,2) ja se vaikuttaa silmukointikonsensussekvenssiin, mikä johtaa muuttuneeseen silmukoitumiseen, mikä johtaa epänormaaliin c.8487+1G>A -proteiiniin. johtuen 4 nukleotidin deleetiosta nukleotidiasemista 5851-5854 BRCA2-geenin koodaavassa eksonissa 10 ja johtaa translaation kehyksen siirtoon ennustetun vaihtoehtoisen lopetuskodonin kanssa (p.S1951WfsTer). Huomattavaa on, kuten aiemmin on raportoitu, molemmat muutokset potilaassa c.631A>0 havaittiin ensimmäisenä c.631A>0. ioni sisältää adenosiinin (A) korvaamisen BRCA2:n eksonissa 7 guaniinia (G) sisältävällä nukleotidilla, mikä johtaa valiinin muuttumiseen isoleusiiniksi kodonissa 211, isoleusiini Aminohappo on aminohappo, jolla on hyvin samankaltaiset ominaisuudet. Tämä muutos vaikuttaa normaaliin mRNA:n silmukoitumiseen. Toinen variantti sijaitsee ennen intronisen geenin1 substituutiota (kaksois-A-ala-3) BRCA2. Muutos c.7008-2A>T voi tuottaa useita eripituisia transkriptioita. Lisäksi BRCA2-PV:n ryhmässä 4 18 muutoksesta (22,2 %) oli sisäisiä.
Tämän jälkeen kartoitimme BRCA1/2:n haitalliset mutaatiot toiminnallisissa domeeneissa ja proteiineja sitovilla alueilla (kuva 4). BRCA1-geenissä 50 % PV:istä sijaitsi rintasyöpäklusterialueella (BCCR), kun taas 22 % mutaatioista sijaitsi munasarjasyöpäklusterialueella (OCCR) (kuva 4. 4A PV:n variantti 7, CRBC2:n alueella). ja 42,8 % mutaatioista sijaitsi OCCR:ssä (kuva 4B). Seuraavaksi arvioimme PV:n sijainnin BRCA1- ja BRCA2-proteiinidomeeneissa. BRCA1-proteiinin osalta löysimme kolme PV:tä silmukan ja kierteisen kierteen domeeneista ja kaksi PV-mutaatiota BRCT-domeenista, kun taas PV:n toistuvassa domeenissa BRC2-domeeni (kuvio 4 - BRRC2). intronisia ja 3 eksonista muutosta havaittiin oligo/oligosakkaridia sitovissa (OB) ja torni (T) -domeeneissa (kuvio 4B).
Kuva 4 Kaavamainen esitys BRCA1- ja BRCA2-proteiineista ja patogeenisten varianttien sijainti.Tässä kuvassa näkyy BRCA1 (A) ja BRCA2 (B) patogeenisten varianttien jakautuminen rintasyöpäpotilailla. Eksoniset mutaatiot näkyvät sinisellä, kun taas introniset variantit näkyvät oranssilla. Palkin korkeus edustaa niiden toiminnallista proteiinia ja BRCA1BR-proteiinia. sisältää silmukkadomeenin (RING) ja tuman lokalisointisekvenssin (NLS), coiled-coil-domeenin, SQ/TQ-klusteridomeenin (SCD) ja BRCA1:n C-terminaalisen domeenin (BRCT).(B) BRCA2-proteiini sisältää kahdeksan BRC-toistoa, DNA:ta sitovan domeenin helikaalisella domeenilla (Helical), kolme oligonukleotididomeenia, N-oligoakkaridi-/oligonukleotidia. C-puolella. Alueet, joita kutsutaan rintasyöpäklusterialueeksi (BCCR) ja munasarjasyöpäklusterialueeksi (OCCR), näkyvät alareunassa.*Esittää mutaatioita, jotka määrittävät lopetuskodonit.
Tämän jälkeen tutkimme BC:n kliinisopatologisia piirteitä, jotka saattoivat korreloida BRCA1/2 PV:n esiintymisen kanssa. Täydelliset kliiniset tiedot olivat saatavilla 181 BRCA1/2-negatiivisesta potilaasta (ei-kantajista) ja kaikista kantajista (n = 35). Kasvaimen proliferaationopeuden ja asteen välillä oli korrelaatio.
Laskimme Ki-67:n jakautumisen kohorttimme mediaanin perusteella (25 %, vaihteluväli < 10-90 %). Koehenkilöt, joiden Ki-67 < 25 % määriteltiin "matala Ki-67":ksi, kun taas henkilöt, joiden arvot olivat ≥ 25 %, katsottiin "korkeaksi Ki-67:ksi". (kuvio 5A).
Kuva 5 Ki-67:n korrelaatio asteikon jakaumaan rintasyöpää sairastavilla naisilla, joilla on BRCA1- ja BRCA2-PV:itä ja ilman niitä.(A) Boxplot, joka näyttää mediaanien Ki-67-arvot 181:llä ei-kantajia BC-potilaalla verrattuna BRCA1- (18) tai BRCA2-potilaaseen (17) PV-potilaaseen. Hänen syöpäsuorituksensa P-arvoja pidettiin tilastollisesti merkitsevinä 0,5 B:n alapuolella. biologisen asteen ryhmät (G2 ja G3) BRCA1- ja BRCA2-mutaatiostatuksen mukaan (WT-potilaat, BRCA1- ja BRCA2-PV:n kantajat).
Samoin tutkimme, korreloiko tuumoriaste BRCA1/2 PV:n esiintymisen kanssa. Koska G1 BC:tä ei esiintynyt populaatiossamme, jaoimme potilaat kahteen ryhmään (G2 tai G3). Ki-67-tulosten mukaisesti analyysi paljasti tilastollisesti merkitsevän korrelaation kasvaimen asteen ja BRCA1-mutaation välillä, ja suurempi osuus G3-kasvainten osuudesta (BRCA1-kantajista) 5B).
DNA-sekvensointitekniikan kehitys on mahdollistanut ennennäkemättömän edistyksen BRCA1/2-geenitestauksessa, millä on ratkaiseva merkitys potilaille, joiden suvussa on ollut syöpää. Tähän mennessä noin 20 000 BRCA1/2-varianttia on tunnistettu ja luokiteltu American Society of Medical Geneticsin 35 ja ENIGMA-järjestelmän mukaan. graafiset alueet.37 Italiassa BRCA1/2:n PV:iden osuus vaihteli 8 prosentista 37 prosenttiin, mikä osoittaa suurta maan sisäistä vaihtelua.38,39 Lähes 5 miljoonan asukkaan Sisilia on Italian viidenneksi suurin alue asukasmäärällä mitattuna. Vaikka BRCA1/2:n levinneisyydestä on olemassa laajaa näyttöä itäosan saaresta, Siilin itäosassa ei ole laajaa näyttöä.
Tutkimuksemme on yksi ensimmäisistä raporteista BRCA1/2 PV:n esiintyvyydestä BC-potilailla Itä-Sisiliassa.28 Keskitimme analyysimme BC:hen, koska tämä on ylivoimaisesti yleisin sairaus ryhmässämme.
Kun testattiin 389 eKr. potilasta, 9 %:lla oli BRCA1/2 PV:tä, jotka jakautuivat tasaisesti BRCA1:n ja BRCA2:n välillä. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​Italian väestössä aiemmin raportoitujen tulosten kanssa.28 Mielenkiintoista on, että 3 % (13/389) kohortistamme oli miehiä. Tämä osuus on odotettua suurempi miesten rintasyöpään perustuvan rintasyöpäriskin perusteella (140 % CA:sta 1 BR:stä). Kuitenkaan kenellekään näistä miehistä ei kehittynyt BRCA1/2 PV:tä, joten he olivat ehdokkaita lisämolekyylianalyysiin, jotta voitaisiin sulkea pois vähemmän yleisten mutaatioiden, kuten PALB2, RAD51C ja D, esiintyminen. Muunnelmia, joiden merkitys oli epävarma, löydettiin 7 %:lta henkilöistä, joilla BRCA2 VUS oli ilmeinen. Jopa tämä tulos on johdonmukainen224,24,24 kanssa.
Kun analysoimme BC-molekyylialatyyppien jakautumista BRCA1/2-mutanttinaisilla, vahvistimme tunnetut yhteydet TNBC:n ja BRCA1:n PV:n (58,8 %) sekä luminaalisen BBC:n ja BRCA2:n PV:n (55,6 %) välillä.16,43 BRCA1:n ja BRCA:n luminaaliset A- ja HER2+-kasvaimet ovat yhdenmukaisia ​​olemassa olevien PV-kantajien kanssa.
Keskitymme sitten BRCA1/2 PV:n tyyppiin ja sijaintiin.Kohortissamme yleisin BRCA1 PV oli c.5035_5039delCTAAT. Vaikka Incorvaia et al.eivät kuvanneet tätä varianttia Sisilian kohorttissaan, muut kirjoittajat ovat raportoineet sen ituradana BRCA1 PV.34 Kohortistamme löydettiin useita BRCA1 PV:itä – esim. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA ja c.5266dupC – jotka on havaittu näistä Sisiliassa löydetyistä c. .5266dupC) esiintyy yleisesti Itä- ja Keski-Euroopan (Puola, Tšekki), Slovenian, Itävallan, Unkarin, Valko-Venäjän ja Saksan ashkenazijuutalaisilla 44,45 ja Yhdysvalloissa ja Argentiinassa se määriteltiin äskettäin "toistuvaksi ituradan muunnelmaksi" italialaispotilailla, joilla oli BC ja OC. ina. Mielenkiintoista kyllä, jopa Incorvaia et al.löysi c.3253dupA-variantin joistakin perheistä Cataniassa.28 Edustavimmat BRCA2-PV:t ovat c.428dup, c.5851_5854delAGTT ja introninen variantti c.8487+1G>A, jotka on raportoitu tarkemmin 28 potilaalla Palermossa, jonka kotitaloudessa on c.4258dup-1TTs. Länsi-Sisiliassa, pääasiassa Trapanin ja Palermon alueilla, kun taas noin 5851_5854delAGTT PV havaittiin kotitalouksissa Luoteis-Sisiliassa. 8487+1G>A-variantti oli yleisempi koehenkilöillä Messinasta, Palermosta ja Caltanissettasta.28 Rebbeck et al.kuvaili aiemmin c.5851_5854delAGTT-muutoksen Kolumbiassa.37 Toinen BRCA2-PV, c.631+1G>A, on löydetty BC- ja OC-potilaista Sisiliassa (Agrigento, Siracusa ja Ragusa).28 Huomasimme erityisesti kahden BRCAG22-muunnelman rinnakkaiselon. sama potilas, jonka oletimme erottuvan cis-tilassa, kuten aiemmin on raportoitu.34,46 Näitä BRCA2-uble-mutaatioita havaitaan todella usein Italian alueella, ja niiden on havaittu tuovan ennenaikaisia ​​stop-kodoneja, jotka vaikuttavat lähetti-RNA:n silmukoitumiseen ja aiheuttavat BRCA2-proteiinin epäonnistumisen.47,48
Kartoimme myös BRCA1- ja BRCA2-PV:t oletetuissa proteiinidomeenien ja geenien OCCR- ja BCCR-alueilla. Nämä alueet ovat kuvanneet Rebbeck et al.munasarjasyövän ja rintasyövän kehittymisen riskialueina.49 Todisteet sukusolujen muunnelmien sijainnin ja rinta- tai munasarjasyövän riskin välisestä yhteydestä ovat kuitenkin edelleen kiistanalaisia.28,50-52 Populaatiossamme BRCA1-PV:t sijaitsivat pääasiassa BCCR-alueella, kun taas BRCA2-PV:t sijaitsivat enimmäkseen millään assosiaatiolla, jota emme löytäneetkään OCCR-alueen välillä. BCCR-alueet ja BC-ominaisuudet. Tämä saattaa johtua rajoitetusta määrästä potilaita, joilla on BRCA1/2-mutaatioita. Proteiinidomeenin näkökulmasta BRCA1-PV:t jakautuvat koko proteiiniin, ja BRCA2-muutokset löytyvät ensisijaisesti BRC-toistodomeenista.
Lopuksi korreloimme BC-klinikopatologiset piirteet BRCA1/2-PV:n kanssa. Mukana olevien potilaiden rajallisen määrän vuoksi havaitsimme vain merkittävän korrelaation Ki-67:n ja kasvaimen asteen välillä. Vaikka Ki-67:n arviointi ja tulkinta on edelleen jonkin verran kiistanalaista, on varmaa, että korkea proliferaatioaste liittyy lisääntyneeseen riskiin sairauden uusiutumisen ja pienentyneen "eloonjäämisen" välillä. -67 on 20%. Tämä kynnys ei kuitenkaan koske BRCA1/2-mutaatiopotilaspopulaatiota, jonka Ki-67-arvon mediaani on 25%. Tämä korkeiden Ki-67-lukujen trendi voidaan selittää luminaalisten B- ja TNBC-kohorttiemme esiintyvyydellä, joista harvat luminaaliset A-kasvaimet näyttävät olevan parempia (joissakin Ki-5 prosenteissa saattaa olla näyttöä siitä, että 7 %:a). 53,54 Analyysimme tulosten perusteella merkittävä korrelaatio ei ole yllättävä. Esiintyy korkean Ki-67:n ja asteiden ja BRCA1 PV:n esiintymisen välillä. Itse asiassa BRCA1:een liittyvät kasvaimet ovat tyypillisiä TNBC:lle ja niillä on aggressiivisempia piirteitä.16,17
Yhteenvetona voidaan todeta, että tämä tutkimus tarjoaa raportin BRCA1/2:n mutaatiosta BC-kohortissa Itä-Sisiliasta. Löydöksemme ovat kaiken kaikkiaan johdonmukaisia ​​olemassa olevan todisteen kanssa sekä mutaatioiden esiintyvyyden että kliiniset patologisten ominaisuuksien osalta BC:ssä. Lisää tutkimuksia suuremmilla BRCA1/2-mutanttien BC-potilaiden populaatioilla, kuten useammin monigeenisten mutanttien analyysien avulla. kuin BRCA1/2. Tämän avulla voidaan tunnistaa ja asianmukaisesti hoitaa yhä useampia potilaita, joilla on lisääntynyt syöpäriski geneettisten mutaatioiden vuoksi.
Vahvistimme, että potilaat allekirjoittivat tietoisen suostumuksensa luovuttaa kasvainnäytteitä nimettömästi tutkimustarkoituksiin.Kaikki potilaat allekirjoittivat kirjallisen tietoisen suostumuksen Helsingin julistuksen mukaisesti.AOU Policlinicon "G.Rodolico – S.Marco" politiikan mukaisesti tämä tutkimus vapautettiin eettisestä tarkastelusta, koska BRCA1/2-analyysi.
Kiitämme professori Paolo Vigneria hänen avusta rintasyöpäpotilaiden hoidossa eettisen toimikunnan pyynnöstä.
Federica Martorana raportoi Istituto Gentilin, Eli Lillyn, Novartisin ja Pfizerin palkkioista. Muut kirjoittajat eivät ilmoittaneet eturistiriitoja tässä työssä.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et ai.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN arvioi 36 syövän ilmaantuvuuden ja kuolleisuuden 185 maassa ympäri maailmaa. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10/60ac.321