"Älä koskaan epäile, etteikö pieni joukko ajattelevia ja omistautuneita kansalaisia ​​voi muuttaa maailmaa. Itse asiassa se on ainoa sellainen."
Cureuksen tehtävänä on muuttaa lääketieteellisen julkaisemisen pitkäaikaista mallia, jossa tutkimusten lähettäminen voi olla kallista, monimutkaista ja aikaa vievää.
Verihiutalerikas plasma/prp, kudosregeneraatio, verihiutaleiden aktivaatio, glukoosiproliferatiivinen hoito, verihiutaleet, proliferatiivinen hoito
Viittaa tähän artikkeliin seuraavasti: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17. toukokuuta 2022) Glukoosin vaikutus verihiutaleiden määrään ja tilavuuteen: vaikutukset regeneratiiviseen lääketieteeseen. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Verihiutalerikastettua plasmaa (PRP) ja hypertonisia glukoosiliuoksia käytetään yleisesti injektioina regeneratiivisessa lääketieteessä, joskus yhdessä. Hypertonisen glukoosin vaikutusta verihiutaleiden hajoamiseen ja aktivaatioon ei ole aiemmin raportoitu. Testasimme kohonneiden glukoosipitoisuuksien vaikutusta verihiutaleiden ja punasolujen määrään sekä solumääriin PRP:ssä ja kokoveressä. Kaikissa glukoosi-seoksissa, joihin sekoitettiin PRP:tä tai kokoverta, havaittiin nopea osittainen verihiutaleiden määrän lasku, mikä on yhdenmukaista osittaisen hajoamisen kanssa. Ensimmäisen minuutin jälkeen verihiutaleiden määrä pysyi vakaana, mikä viittaa jäännösverihiutaleiden nopeaan sopeutumiseen äärimmäiseen (> 2000 mOsm) hypertonisuuteen. Ensimmäisen minuutin jälkeen verihiutaleiden määrä pysyi vakaana, mikä viittaa jäännösverihiutaleiden nopeaan sopeutumiseen äärimmäiseen (> 2000 mOsm) hypertonisuuteen. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомоданыстацитою тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Ensimmäisen minuutin jälkeen verihiutaleiden määrä pysyi vakaana, mikä viittaa jäännösverihiutaleiden nopeaan sopeutumiseen äärimmäiseen (> 2000 mOsm) hypertonisuuteen.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацитромостостацитою к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Ensimmäisen minuutin jälkeen verihiutaleiden määrä pysyi vakaana, mikä viittaa jäännösverihiutaleiden nopeaan sopeutumiseen äärimmäiseen (> 2000 mOsm) hyperosmolaariseen tilaan.25 %:n ja sitä suuremmat glukoosipitoisuudet johtivat verihiutaleiden keskimääräisen tilavuuden (MPV) merkittävään kasvuun, mikä viittaa verihiutaleiden aktivaation varhaiseen vaiheeseen. Lisätutkimuksia tarvitaan sen selvittämiseksi, tapahtuuko verihiutaleiden hajoamista vai aktivoitumista ja voiko hypertoninen glukoosi-injektio yksinään tai yhdessä PRP:n kanssa tarjota lisäkliinistä hyötyä.
1950-luvulla yhdysvaltalainen kirurgi George Hackett huomasi, että hän pystyi pysyvästi lievittämään nivel- ja selkäkipuja monilla potilailla injisoimalla proliferatiivista liuosta jänteisiin ja nivelsiteisiin. Hänen kaneilla tekemänsä kokeet osoittivat, että hoito, jota hän kutsui proliferatiiviseksi terapiaksi, aiheutti jänteiden suurenemista ja vahvistumista. Histologiset tutkimukset ovat vahvistaneet, että tämän prosessin aikana tuotetaan uutta kollageenia [1].
Ensimmäisten vuosikymmenten aikana kokeiltiin monia erilaisia ​​jakeluratkaisuja. 1990-luvulle tultaessa useimmat ammattilaiset pitivät korkeita glukoosipitoisuuksia turvallisimpana ja tehokkaimpana menetelmänä. Vaikutusmekanismi on kuitenkin edelleen epäselvä.
Hackettin työn jälkeen 1900-luvulla tehtiin vain vähän kliinisiä tutkimuksia. 2000-luvulla kiinnostus kuitenkin heräsi uudelleen, ja useita onnistuneita kliinisiä proliferatiivisen terapian tutkimuksia tehtiin alaselkäkivun [2], polven nivelrikon [3] ja lateraalisen epikondyliitin [4] hoidossa.
Kudosten uudistuminen vaatii kantasolujen osallistumista. Siksi korkeat glukoosipitoisuudet indusoivat jotenkin kantasolujen migraatiota, replikaatiota ja erilaistumista. Oletamme, että verihiutaleet voivat toimia viestinviejinä ja että korkeat glukoosipitoisuudet voivat saada verihiutaleet vapauttamaan sytokiineja ja kasvutekijöitä, mikä edistää uudistumisprosesseja, erityisesti kantasolujen migraatiota alueille, joilla on korkeat glukoosipitoisuudet.
Verihiutaleiden aktivaatio edeltää aina solunsisäisen kalsiumin lisääntymistä [5]. Liu ym. osoittivat vuonna 2008, että korkeat glukoosipitoisuudet lisäävät transienttipotentiaalisten kanonisten tyyppi 6 -kanavien (TRPC6) aktiivisuutta plasmakalvossa, mikä johtaa kalsiumionien virtaukseen verihiutaleisiin [6]. Toinen tutkimus osoitti, että mikrotubulusten marginaalivyöhykkeen altistuminen kalsiumioneille aiheuttaa marginaalivyöhykkeen relaksaatiota, laajenemista ja muodonmuutosta, mikä puolestaan ​​aiheuttaa muodonmuutoksen kiekosta pallomaiseksi, mikä johtaa verihiutaleiden keskimääräiseen tilavuuteen (MPV) [7].
Tässä tutkimuksessa hypoteesimme on, että verihiutaleiden altistuminen korkeille glukoosipitoisuuksille vaikuttaa mikrotubulusten marginaalivyöhykkeeseen ja solunsisäiseen ympäristöön, mikä johtaa MPV:n kasvuun.
Kaikki osallistujat allekirjoittivat tietoisen suostumuslomakkeen sen jälkeen, kun tutkimuksen yksityiskohdat oli selitetty ja ennen näytteiden vastaanottamista. Tässä tutkimuksessa käytettiin vain PRP-näytteitä, joiden hematokriitti oli yli 2 %, jotta punasolujen (erytrosyyttien) määrä ja punasolujen keskimääräinen corpuscular -tilavuus (MCV) voitiin ottaa mukaan vertailua varten.
Tutkimus tehtiin neljässä vaiheessa: ensimmäinen vaihe oli PRP ja loput vaiheet kokoverta (taulukko 1). Kuten aiemmin on kuvattu [8], kaikki suhteelliset keskipakoisvoimat (RCF, g-voima) laskettiin veripatsaan keskipisteestä (Rmid, cm) keskipakoruiskussa. Valitsimme käyttää MPV:tä verihiutaleiden herkistymisen markkerina ja verihiutaleiden määrää mahdollisen verihiutaleiden hajoamisen indikaattorina, jotka molemmat voidaan helposti mitata tavallisilla hematologisilla analysaattoreilla.
Ensimmäisessä vaiheessa 47 vapaaehtoista luovutti verinäytteitä – yhden putken etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) ja yhden PRP-kokoverinäytteen (antikoaguloitu natriumsitraatilla (NaCl, 3 %)) (taulukko 1). Aseta rokkari välittömästi putkeen. Täydellinen verenkuva (CBC) määritettiin EDTA-näytteistä kolmessa toistossa, ja NaCl-näytteet analysoitiin kolmessa toistossa CBC-analyysiä varten, minkä jälkeen PRP valmistettiin edellä kuvatuilla menetelmillä [8]. Kaikki PRP-näytteet valmistettiin sentrifugoimalla 900–1000 g:n voimalla. Sekoita kutakin PRP-näytettä vortex-sekoittimessa 5–10 sekuntia ja jaa sitten viisi 0,5 ml:n alikvoottia putkiin.
Verihiutalealtistuksen vaikutuksen arvioimiseksi kohonneisiin glukoosipitoisuuksiin sekoitettiin verihiutalenäytteisiin yhtä suuret määrät (0,5 ml) 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % ja 50 % glukoosiliuosta vedessä, jotta saatiin 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % ja 25 % glukoosiliuosta. Putkia sekoitettiin koeputkiravistimessa 15 minuutin ajan. Kunkin seoksen TAC analysoitiin kolmeen kertaan 15 minuutin kuluttua. Verihiutaleiden määrä (PLT), punasolujen määrä, MCV ja MPV laskettiin keskiarvoina kullekin putkelle, ja keskimääräinen trombosyyttien määrä, punasolujen määrä, MCV ja MPV laskettiin kaikille PRP-näytteille.
Tiedonkeruun ensimmäisen vaiheen päätyttyä havaitsimme merkittävää verihiutaleiden määrän kasvua PRP-verihiutaleissa D50W:n lisäämisen jälkeen. PRP-verihiutaleet eivät välttämättä edusta kaikkia veren verihiutaleita, ja PRP-elatusaine eroaa WB-elatusaineesta. Siksi päätimme suorittaa toisen vaiheen tutkimuksen D50W:n lisäämisen vaikutuksesta kokovereen.
Toiselle kierrokselle valitsimme otoskoon 30 ensimmäisen sarjan tulosten perusteella, kuten Analyysi-osiossa on kuvattu. Tässä sarjassa 20 vapaaehtoista luovutti verinäytteitä (taulukko 1). Kokoveri (1,8 ml) otettiin 3 ml:n ruiskuun ja antikoaguloitiin 0,2 ml:lla 40-prosenttista NaCl:a. Kokoveriruiskua sekoitettiin viiden sekunnin ajan vortex-sekoittajalla ja veren kokonaismäärä analysoitiin kolmessa rinnakkaisnäytteessä. Analyysin jälkeen antikoaguloitu veri lisättiin 2 ml:aan 50-prosenttista glukoosia 5 ml:n ruiskussa (loppuglukoosipitoisuus oli noin 25 % (D25)) ja asetettiin ravisteluputkeen 30 minuutiksi. 30 minuutin kuluttua D25/veren kokonaismäärä WB-ruiskuissa analysoitiin kolmessa rinnakkaisnäytteessä. Verihiutaleiden määrä, punasolujen määrä, MCV ja MPV ruiskua kohden laskettiin keskiarvot, ja keskimääräinen PLT, punasolujen määrä, MCV ja MPV laskettiin jokaiselle näytteelle ennen glukoosin lisäämistä ja sen jälkeen.
Koska kokoveren verihiutaleet altistuvat usein hypertoniselle glukoosille proliferatiivisen glukoosihoidon aikana minimaalisesti invasiivisen injektion vuoksi, eikä PRP:n ja hypertonisen glukoosin yhdistäminen juuri ennen injektiota ole yleistä, päätimme tutkia hypertonisen glukoosin ja valkosipulin yhdistelmää osiossa 1, vaiheet kolme ja neljä. Kummassakin vaiheessa 20 vapaaehtoista luovutti 7–8 ml ACD-A:ta (trinatriumsitraattia (22,0 g/l), sitruunahappoa (8,0 g/l) ja glukoosia (24,5 g/l) sisältävä happo, dekstroosisitraattiliuos) veren antikoagulantteiksi (taulukko 1). Vain yli 12,5 %:n glukoosipitoisia seoksia käytettiin MPV:n nousuun liittyvän kynnysprosentin määrittämiseen. Kolmannessa vaiheessa koeputkeen laitettiin 1 ml verta. Sekoita sitten verta vortex-sekoittimessa 10 sekunnin ajan lisäämällä putkeen 1 ml 30 % glukoosia, 40 % glukoosia tai 50 % glukoosia, jotta lopullinen glukoosipitoisuus on vastaavasti 15 %, 20 % ja 25 %. Glukoosiverinäytteistä analysoitiin verenkuva heti sekoittamisen jälkeen ja toistettiin kahden minuutin välein 30 minuutin ajan.
Alkusekoituksen aikana 1:1 hypertonisen glukoosin ja WB:n tai PRP:n lisääminen altistaa verihiutaleet yli 25 %:n pitoisuuksille useiden sekuntien ajan. Neljännessä vaiheessa arvioidaksemme hypertonisen glukoosin vaikutusta minimaalisilla alkupitoisuuksilla ja testataksemme glukoosin vaikutuksen ylärajaa, lisäsimme vain pienen määrän verta D25W:hen tai D50W:hen. Laita 1 ml D25W:tä tai D50W:tä putkeen ja lisää 0,2 ml WB:tä samalla vorteksoimalla näytettä 10 sekunnin ajan. Näissä tapauksissa veri altistettiin glukoosille pitoisuudella, joka oli noin 20 % lopullista pitoisuutta korkeampi, eikä 50 % lopullista pitoisuutta korkeampi kuten vaiheessa 3, jolloin lopullisiksi glukoosipitoisuuksiksi tulivat 20,8 % ja 41,6 %. Sekoitetut näytteet analysoitiin samalla aikavälillä kuin vaiheessa 3.
Kunkin glukoosilaamennussarjan ensimmäisessä vaiheessa otettiin 30 näytettä, koska tämä oli sopiva otoskoko pilottitutkimukseen [9]. Kunkin vaiheen (mukaan lukien ensimmäisen vaiheen) lopussa arvioi otoskoon riittävyys käyttämällä kaavaa, jota käytettiin määrittämään otoskoko, joka tarvitaan jatkuvan tulosmuuttujan keskiarvon arvioimiseksi yhdessä populaatiossa. Kaava n = Z2 x SD2 /E2. Tässä yhtälössä Z on Z-pistemäärä, SD on keskihajonta ja E on haluttu virhe [10]. Alfamme on 0,05, mikä vastaa Z-arvoa 1,96, ja odotamme virhettä 5 (prosentteina). Näin ollen ratkaisemme n:n = (1,962 x SD2)/52. Tulokset osoittivat, että kullekin vaiheelle vaadittu otoskoko oli pienempi kuin todellinen kerätty lukumäärä.
Jaksoilla 1, 3 ja 4, joissa käytettiin useampaa kuin yhtä glukoosipitoisuutta, eri glukoosipitoisuuksien vaikutusta analysoitiin vertaamalla osittaista muutosta ajan 0 ja kunkin seuraavan ajan välillä (vaihe 1 15 minuutin kohdalla, jakso 3 15 minuutin kohdalla ja neljä 15 sekunnin kohdalla, sitten kahden minuutin välein). Kunkin aikavälin muutosnopeuksia verrattiin Mann-Whitney U-testillä, koska tiedot eivät noudattaneet normaalijakaumaa Shapiro-Wilk-normaaliustestin perusteella. Koska ensimmäisessä, kolmannessa ja neljännessä vaiheessa (yhteensä viisi) suoritettiin useiden ryhmien (viiden) 1:1-analyysi, suoritettiin Bonferroni-korjaus halutun alfa-arvon säätämiseksi arvoon ≤0,01, mutta ei arvoon ≤0,05.
Verihiutaleiden määrän lasku kaikilla hypertonisen dekstroosin pitoisuuksilla ja MPV-arvon nousu PRP-verihiutaleissa yli 12,5 %:n dekstroosipitoisuudella: PRP-verihiutaleiden määrä nousi yhdestä viisinkertaiseksi lähtötason kokoveren pitoisuuteen verrattuna, vaihdellen menetelmän mukaan (ei esitetty). Verihiutaleiden määrän lasku kaikilla hypertonisen dekstroosin pitoisuuksilla ja MPV-arvon nousu PRP-verihiutaleissa yli 12,5 %:n dekstroosipitoisuudella: PRP-verihiutaleiden määrä nousi yhdestä viisinkertaiseksi lähtötason kokoveren pitoisuuteen verrattuna, vaihdellen menetelmän mukaan (ei esitetty). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV вхпримцитов концентрации декстрозы > 12,5 %: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исхольной кровью, в зависимости от метода (не показано). Verihiutaleiden määrän lasku kaikilla hypertonisilla dekstroosipitoisuuksilla ja MPV:n nousu PRP-verihiutaleissa yli 12,5 % ​​dekstroosipitoisuudella: PRP-verihiutaleiden määrä kasvoi 1–5-kertaisesti lähtötilanteen kokovereen verrattuna menetelmästä riippuen (ei esitetty). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，䰏VMP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5倍，因方法而异（未描述）. Yli 12,5 %:n glukoosipitoisuudella korkea glukoosipitoisuus laskee verisolujen määrää, PRP-veren MPV kasvaa: verrattuna 与基线全血-hoitoon, PRP-veren määrä kasvaa 1–5-kertaiseksi pitoisuuteen nähden (ei kuvattu). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тромбо, MPV в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравенцихо сравне концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (nе описано ). Yli 12,5 %:n glukoosipitoisuuksilla kaikki hypertensiiviset glukoosipitoisuudet pienensivät verihiutaleiden määrää ja lisäsivät MPV-arvoa PRP-verihiutaleissa: PRP-verihiutaleiden määrä kasvoi 1–5-kertaisesti lähtötilanteen kokoveren pitoisuuksiin verrattuna menetelmästä riippuen (kuten on kuvattu).Kuvio 1 osoittaa, että verihiutaleiden määrä väheni lähes 75 % vedellä laimentamisen jälkeen ja 20–30 % 15 minuutin laimennuksen jälkeen eri glukoosipitoisuuksilla verrattuna lähtötilanteen PRP:hen ja tilavuudella korjattuun 1:1 laimennukseen (1-k1 tilavuuskorjauksella). k -1 jalostus).1 jalostus).
Kunkin laimennoksen solujen lukumäärä ilmaistaan ​​murto-osana alkuperäisestä lukumäärästä ennen laimennusta.
MPV laski minimaalisesti PRP-tuotannon aikana ilman, että laimennuskonsentraatiot muuttuivat enää 12,5 %:iin vedessä tai glukoosissa (mukaan lukien 25 % PRP-glukoosiseokset), ja kasvoi yli 20 % laimennuksen jälkeen 50 %:n glukoosiliuoksella (kuva .2). Sitä vastoin punasolut eivät osoittaneet merkittävää tilavuuden muutosta missään muussa laimennuksessa kuin H2O:ssa.
Kunkin laimennoksen solujen keskimääräinen tilavuus ilmaistaan ​​prosentteina alkuperäisestä tilavuudesta ennen laimennusta.
Samankaltainen, mutta vähemmän selvä trombosyyttimäärän lasku ja CVR:n nousu havaittiin 50-prosenttiselle glukoosille altistetuissa rintasyövissä (formulaatio, jossa on 25 % glukoosia). Taulukossa 2 verrataan solujen lukumäärää ja solutilavuuksia 50-prosenttisella dekstroosilla laimennetussa kokoveressä faasi 1 PRP-tietoihin, jotka on laimennettu 50-prosenttisella dekstroosilla. Punasolumäärän ja punasolujen MCV:n muutokset eivät olleet ilmeisiä, eivätkä ne olleet huomiomme kohteena.
SD = keskihajonta, MD = ryhmien välinen keskimääräinen ero, SE = keskiarvon erotuksen standardipoikkeama, RBC = punasolut, PLT = verihiutaleet, PRP = verihiutalerikas plasma, WB = kokoveri
Kun D50W lisättiin valko-valkoiseen liuokseen, laimennuskorjattu verihiutaleiden menetys oli 7,7 % (310 ± 73 vs. 286 ± 96) verrattuna 17,8 %:iin PRP-laimennoksen yhteydessä D50W:ssä (664 ± 348 vs. 544 ± 277). MPV valko-valkoinen liuos nousi 16,8 % (10,1 ± 0,5:stä 11,8 ± 0,6:een), kun taas MPV PRP nousi 26 % (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Vaikka sekä trombosyyttien määrän vähenemisen että MPV-nousun keskimääräiset erot olivat merkitsevästi suurempia PRP-ryhmässä, trombosyyttien määrän vähenemisen muutokset valko-aktiivisuudessa olivat lähes merkitseviä (310 ± 73 - 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) ja MPV-nousu oli merkitsevä (10,1 ± 0,5 - 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Vaikka sekä trombosyyttien määrän vähenemisen että MPV-nousun keskimääräiset erot olivat merkitsevästi suurempia PRP-ryhmässä, trombosyyttien määrän vähenemisen muutokset valko-aktiivisuudessa olivat lähes merkitseviä (310 ± 73 - 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) ja MPV-nousu oli merkitsevä (10,1 ± 0,5 - 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Vaikka sekä trombosyyttimäärän laskun että CVR:n nousun keskimääräiset erot olivat merkitsevästi suurempia PRP-ryhmässä, trombosyyttimäärän laskun muutokset valko-aktiivisuudessa olivat lähes merkitseviä (310 ± 73 - 286 ± 96 (-7,7 %; p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). MPV-arvon nousu oli merkitsevä (10,1 ± 0,5:stä 11,8 ± 0,6:een (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7 %)；p = .06）和MP的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 尡 膅 冏减少 的 几乎 是 显着 的 （（(310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = .06）和MPV 的增劊± 0,5 到 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.Verihiutaleiden määrän lasku valko-ortodonitisella alueella oli lähes merkitsevä (310 ± 73:sta 286 ± 96:een (-7,7 %); p = 0,06), vaikka PRP-ryhmässä oli merkitsevästi suurempia keskimääräisiä eroja trombosyyttien määrän laskussa ja MPV-arvon nousussa, ja MPV-arvon nousu oli merkitsevä.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (10,1 ± 0,5:stä 11,8 ± 0,6:een (+16,8) p < 0,001).
Merkittävän MPV-muutoksen havaitsemiseksi vaadittiin 20 %:n lopullinen glukoosipitoisuus, mutta MPV:n muutos oli selvempi 25 %:n loppupitoisuudella. Verihiutaleiden hävikki vakiintui alkulaskun jälkeen. Havaitsimme aluksi jyrkän CVR:n laskun, mutta CVR palautui nopeasti 25 %:n lopullisessa glukoosipitoisuudessa, joka oli merkittävästi korkeampi kuin 20 %:n ja 15 %:n lopullisilla glukoosipitoisuuksilla havaitut CVR-tasot (kuva 3 ja taulukon 3 vasemmalla puolella; varjostetut laatikot). osoittavat p-arvoja ≤ alfa ja Bonferroni-korjaus on 0,01). Myös PLT-määrässä havaittiin aluksi jyrkkä lasku alkuvaiheessa 0–15 s, ja se pysyi sitten vakaana (15 sekunnista 30 min; taulukon 4 vasemmalla puolella).
Erilaisten glukoosipitoisuuksien lisääminen kokovereen johti MPV:n aluksi nopeaan laskuun, jota seurasi pitoisuudesta riippuva yli 20 %:n toipuminen. Selite osoittaa glukoosipitoisuuden laimennuksen jälkeen. Päivät 15, 20 ja 25 tehtiin laimennoksena suhteessa 1:1. Päivät 21 ja 41 tehtiin laimennoksena suhteessa 1:5.
Taulukko 4 esittää trombosyyttimäärän muutoksen hypertonisella glukoosilla laimennettuna. Havaitsimme annoksesta riippuvan suhteen PLT-arvojen välittömän laskun välillä 1:1-laimennoksella ja 1:5-laimennoksella. Verrattuna 1:1-laimennoksiin yhtenä ryhmänä 1:5-laimennoksiin, 1:1-ryhmässä trombosyyttimäärän välitön lasku oli pienempi kuin 1:5-ryhmässä, 66 ± 48 000 (23 %) verrattuna 99 ± 69 000:een (37 %). , p = 0,014) 1:5-ryhmässä. Ensimmäisen mittauspisteen alustavan laskun jälkeen trombosyyttimäärä glukoosin prosentuaalisena osuutena vakiintui (kuva 4).
Kun kokoverta lisätään glukoosiin suhteessa 1:1, verihiutaleiden määrä vähenee noin 25 %. Kun kokoverta lisättiin suhteessa 1:5, väheneminen oli kuitenkin paljon suurempi – noin 50 %.
41 % glukoosi nosti MPV:tä nopeammin ja dramaattisemmin kuin 25 % tai 21 %. MPV-tulokset on esitetty kuvassa 3. Millään muilla laimennoksilla ei havaittu välitöntä MPV:n laskua aluksi 50 % glukoosin lisäämisen jälkeen. Käytettäessä 25 % glukoosia (glukoosipitoisuus 20,8 % lopullisessa laimennuksessa) MPV:n muutos oli verrattavissa 20 % glukoosin muutokseen 1:1-laimennoksessa (kuva 3). Vaikka MPV:n muutokset olivat aluksi suurempia 41 %:n seospitoisuudella kuin 25 %:lla, MPV:n ero 41 %:n ja 25 %:n välillä ei ollut enää merkitsevä 16 minuutin kuluttua (taulukko 3, oikea). On myös mielenkiintoista, että 25 % glukoosi nosti MPV:tä tehokkaammin kuin 20,8 %.
Tämä in vitro -tutkimus vahvisti osittain hypoteesiamme. Se osoitti dekstroosin lisäämisen mahdollisesti aiheuttavan osittaisen verihiutaleiden hajoamisen, verihiutaleiden nopean sopeutumisen äärimmäiseen hypertonisuuteen ja merkittävän MPV-arvon nousun vasteena yli 25 %:n hypertoniseen dekstroosipitoisuuteen. Se osoitti dekstroosin lisäämisen mahdollisesti aiheuttavan osittaisen verihiutaleiden hajoamisen, verihiutaleiden nopean sopeutumisen äärimmäiseen hypertonisuuteen ja merkittävän MPV-arvon nousun vasteena yli 25 %:n hypertoniseen dekstroosipitoisuuteen. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный аккомодациальный тромбоцитов примесью декстрозы гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Se osoitti mahdollista osittaista verihiutaleiden hajoamista dekstroosin kanssa, nopeaa verihiutaleiden akkommodaatiota äärimmäiseen hypertonisuuteen ja merkittävää MPV:n nousua vasteena yli 25 %:n hypertonisiin dekstroosipitoisuuksiin.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 忼速 适应 极 速 适应 枏响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。. Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию адаптацию экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Se osoittaa glukoosi-seosten mahdollisesti aiheuttamaa verihiutaleiden osittaista hajoamista, verihiutaleiden nopeaa sopeutumista äärimmäiseen hypertonisuuteen ja merkittävää MPV:n nousua vasteena yli 25 %:n hypertoniseen glukoosiin.Alkuperäinen nousu oli maksimaalinen 41,6 %:n glukoosialtistuksessa, mutta MPV:n nousu lähestyi 25 %:n glukoosialtistusta noin 20 minuuttia altistuksen jälkeen.
Verihiutaleiden pitoisuuteen vaikuttaa glukoosi. Havaitsimme, että PLT:n määrä laski kaikilla glukoosilaimennoksilla. Verihiutaleiden määrän jyrkkä lasku PRP-sarjan H2O (0 %) -laimennoksissa voi liittyä osmoottiseen hajoamiseen. Vaihtoehtoisesti tämä voi olla verihiutaleiden aggregaation aiheuttama artefakti, mutta tämä on ristiriidassa MPV-muutoksen puuttumisen kanssa tässä laimennoksessa. Tämä havainto tarkoittaa, että jotkut verihiutaleet ovat hyvin herkkiä hypo-osmolaarisuudelle.
Kaikissa glukoosiliuosten 1:1-laimennoksissa PLT:n määrä väheni 20–30 %, jopa D5W:llä (hypotoninen 252 mOsm:ssa), mikä voi viitata glukoosin erityiseen ei-osmoottiseen vaikutukseen, koska sekä PLT että MPV pysyivät muuttumattomina glukoosipitoisuuden kolminkertaistuessa D5W:stä D25W:hen. Itse asiassa PLT-pitoisuudet pyrkivät nousemaan hieman osmolaarisuuden kasvaessa.
PLT:n lasku 1:1- ja 1:5-laimennosten välillä tarkoittaa, että liukenemisvaikutus riippuu glukoosin alkuperäisestä ja lopullisesta pitoisuudesta. Jos se riippuisi vain alkuperäisestä pitoisuudesta, voisi odottaa PLT:n vähenemisen olevan erilaista 1:1-pitoisuuksien välillä. Mutta emme odota eroa. Jos lyysivaikutus riippuu vain lopullisesta glukoosipitoisuudesta, emme odota suurta eroa 20 %:n 1:1-laimennoksen ja 20,8 %:n 1:5-laimennoksen välillä. Ja silti teimme sen.
Jos verihiutaleiden hajoaminen aiheuttaa verihiutaleiden häviämistä, muodostuu osittainen lysaatti, jonka jälkeen sytokiinit ja kasvutekijät vapautuvat solunulkoiseen ympäristöön. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että verihiutalelysaatti on lähes yhtä tehokas proliferaatioliuoksena kuin PRP [11]. PRP:n itsensä on osoitettu olevan tehokas ratkaisu proliferaation hoitoon [12–14].
Inaktiiviset verihiutaleet kiertävät kiekon muodossa, jota vahvistaa useat sisäiset rakenteet. Aktivoitumisen aikana ne saavat pallomaisemman tai ameebamaisen muodon, mikä johtaa tilavuuden kasvuun. Tilavuuden kasvu vaatii pinta-alan kasvua, joka on seurausta avoimen tubulusjärjestelmän (OCS) puristumisesta ja eksosyyttisten jyvästen lisääntymisestä kalvoon. On vielä selvitettävä, liittyykö hypertonisen glukoosin aiheuttamaan MPV:n kasvuun jompikumpi vai molemmat näistä mekanismeista, mutta jos kyseessä on jälkimmäinen, MPV:n kasvu viittaisi degranulaatioon.
Tämä tutkimus osoitti, että altistuminen korkeille glukoosipitoisuuksille PRP:ssä tai kokoverihiutaleissa johti MPV:n nousuun 15 minuutissa, jolloin glukoosipitoisuus oli vastaavasti 25 % ja 41,6 %.
Verihiutaleiden MPV:n nousu voi johtua ympäröivien mikrotubulussolmujen laajenemisesta vasteena kalsiumin sisäänvirtaukseen. Liu ym. Glukoosin on osoitettu välittävän kalsiumin sisäänvirtausta verihiutaleiden TRPC6-kanavan kautta [6]. Hypoteesimme on, että glukoosi indusoi mikrotubulussolmujen rentoutumista, mikä johtaa MPV:n lisääntymiseen ja verihiutaleiden herkistymiseen ja/tai aktivoitumiseen. Tulostemme perusteella tämä on kuitenkin vain osa totuutta. Testeissämme mikään alle D25W:n pitoisuus ei johtanut MPV:n nousuun. Koska emme ole testanneet altistusta 12,5 %:n ja 25 %:n glukoosipitoisuuksille, vaiheen 1 tuloksemme viittaavat siihen, että tällä glukoosipitoisuusalueella saattaa olla kynnys, joka johtaa MPV:n nousuun. Lisätestit vaiheissa 3 ja 4 osoittivat, että 20–25 % glukoosia näyttää olevan tämän kynnys, mutta miksi se johtuu, ei ole selvää.
Havaitsimme myös MPV:n noin 9 %:n laskun sentrifugoinnin jälkeen. Ei ole selvää, johtuuko tämä MPV:n lasku suuremmista ja tiheämmistä verihiutaleista, jotka ovat jääneet loukkuun sentrifugin punasolukerrokseen. Tämä havainto voi olla tärkeä lääkäreille, sillä se voi viitata siihen, että PRP-verihiutaleet ovat pienempi ja harvempi osa valkosolujen verihiutaleita.
Aiemmassa tutkimuksessamme osoitimme, että PRP:n valmistus manuaalisilla menetelmillä on edullista [8]. Jos glukoosi herkistää kudosverihiutaleita tai PRP:tä, jolloin ne ovat alttiimpia aktivoitumiselle, tai jos PRP:tä tuotetaan osittaisilla lysaattiominaisuuksilla, tämä voi tehostaa regeneraatiota ja vähentää hoidon tarvetta. Siksi PRP:n ja erittäin väkevän glukoosin yhdistelmä voi olla kustannustehokkaampaa kuin PRP tai glukoosi yksinään.
Tutkimuksessamme on useita puutteita. Ensinnäkin käytämme useilla eri menetelmillä saatua PRP:tä. Tämä voi johtaa ristiriitaisiin tuloksiin. Toiseksi emme pystyneet suorittamaan biokemiallista analyysia mistään näytteistämme määrittääksemme tarkemmin, oliko verihiutaleiden aktivaatiota tapahtunut. Haluaisimme mitata P-selektiiniä, verihiutaletekijä 4:ää, monosyyttisiä verihiutaleaggregaatteja tai muita verihiutaleiden aktivaation markkereita ymmärtääksemme paremmin alfa-jyvästen degranulaation astetta tai esiintymistä, mutta tämä ei kuulu tämän tutkimuksen piiriin. Kolmanneksi emme pystyneet elektronimikroskopialla tai muilla menetelmillä vahvistamaan, että MPV:n nousu glukoosille altistuneissa verihiutaleissa johtui vaikutuksesta mikrotubulussolmuihin.
WB:n tai PRP:n seokset 25 % glukoosin kanssa nostivat MPV:tä, mikä viestii verihiutaleiden aktivaation alkamisesta, vaikka tässä tutkimuksessa ei osoitettu aggregaation tai degranulaation etenemistä. Hypertoninen glukoosi-seos johti verihiutaleiden menetykseen, mikä mahdollisesti edustaa lyyttistä vaikutusta. Verihiutaleiden osittainen aktivaatio tai lyysi voi aiheuttaa kudosten uudistumista verihiutaleiden injektion jälkeen. Ei ole selvää, mihin kliinisiin seurauksiin nämä muutokset voivat johtaa. Lisätutkimukset ovat osoittaneet tarkempia aktivaation tai lyysin mittauksia ja arvioineet hypertonisten glukoosi- ja WB- tai PRP-seosten erilaisia ​​kliinisiä vaikutuksia.
Glukoosiproliferatiivinen hoito on yksinkertainen ja edullinen regeneratiivinen hoito, joka laajenee nopeasti ja tukee kliinistä tutkimusta. Tämä tutkimus viittaa fysiologiseen mekanismiin, joka vahvistuessaan voisi auttaa meitä ymmärtämään osaa proliferatiivisen hoidon regeneratiivisesta mekanismista.
Biolääketieteen ja terveydenhuollon informatiikka Missourin yliopiston Kansas Cityn lääketieteellisessä tiedekunnassa, Kansas City, Yhdysvallat
Ihmiset: Kaikki tutkimukseen osallistuneet antoivat tai eivät antaneet suostumustaan. International Society for Cellular Medicine on myöntänyt ICMS-2017-003-hyväksynnän. Seuraava protokolla on hyväksytty jatkokäyttöön International Society for Cellular Medicinen institutionaalisen arviointilautakunnan toimesta: Otsikko: Verihiutalerikkaan plasman lääkeaineen saannon laskeminen lähtötason CBC-verihiutaleiden määrän perusteella. Eläinkoehenkilöt: Kaikki kirjoittajat vahvistivat, ettei tässä tutkimuksessa ollut mukana eläimiä tai kudoksia. Eturistiriidat: ICMJE:n yhtenäisen tiedonantolomakkeen mukaisesti kaikki kirjoittajat vakuuttavat seuraavat tiedot: Maksu-/palvelutiedot: Kaikki kirjoittajat vakuuttavat, etteivät he ole saaneet taloudellista tukea miltään organisaatiolta lähetettyyn työhön. Taloudelliset suhteet: Kaikki kirjoittajat vakuuttavat, etteivät heillä ole tällä hetkellä eivätkä viimeisen kolmen vuoden aikana ollut taloudellisia suhteita mihinkään organisaatioon, joka saattaisi olla kiinnostunut lähetetystä työstä. Muut suhteet: Kaikki kirjoittajat vakuuttavat, ettei heillä ole muita suhteita tai toimintoja, jotka saattaisivat vaikuttaa lähetettyyn työhön.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K ym. (17. toukokuuta 2022) Glukoosin vaikutus verihiutaleiden määrään ja tilavuuteen: vaikutukset regeneratiiviseen lääketieteeseen. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Tämä on avoimen saatavuuden artikkeli, joka on jaettu Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0 -lisenssin ehtojen mukaisesti. Rajoittamaton käyttö, jakelu ja kopiointi missä tahansa mediassa on sallittua, kunhan alkuperäinen tekijä ja lähde mainitaan.