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Plasma riche en plaquettes/PRP, régénération tissulaire, activation plaquettaire, thérapie proliférative du glucose, plaquettes, thérapie proliférative
Citer cet article comme suit : Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 mai 2022) Effet du glucose sur la numération et le volume plaquettaires : implications pour la médecine régénérative. Cure 14(5) : e25081. doi : 10.7759/cureus.25081
Le plasma riche en plaquettes (PRP) et les solutions de glucose hypertonique sont couramment utilisés en injection en médecine régénérative, parfois conjointement. L'effet du glucose hypertonique sur la lyse et l'activation plaquettaires n'a jamais été rapporté auparavant. Nous avons testé l'effet de concentrations élevées de glucose sur la numération plaquettaire et érythrocytaire, ainsi que sur le volume cellulaire dans le PRP et le sang total (SLT). Une réduction partielle rapide de la numération plaquettaire a été observée avec tous les mélanges de glucose mélangés au PRP ou au sang total, ce qui correspond à une lyse partielle. Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, suggérant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à une hypertonie extrême (> 2 000 mOsm). Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, suggérant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à une hypertonie extrême (> 2 000 mOsm). Après la première minute, les thromboses sont stables, ce qui permet de s'adapter à l'état des trompes. экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, indiquant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à une hypertonie extrême (> 2 000 mOsm).> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Après la première minute, les trompettes sont stables, ce qui permet d'adapter l'état des trompettes. экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, indiquant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à l'état hyperosmolaire extrême (> 2 000 mOsm).Des concentrations de glucose de 25 % et plus ont entraîné une augmentation significative du volume plaquettaire moyen (VPM), indiquant un stade précoce d'activation plaquettaire. Des études complémentaires sont nécessaires pour déterminer si une lyse ou une activation plaquettaire se produit et si l'injection hypertonique de glucose, seule ou en association avec le PRP, peut apporter un bénéfice clinique supplémentaire.
Dans les années 1950, le chirurgien américain George Hackett a découvert qu'il pouvait soulager durablement les douleurs articulaires et dorsales de nombreux patients en injectant une solution proliférative dans les tendons et les ligaments. Ses expériences sur des lapins ont montré que ce traitement, qu'il a appelé thérapie proliférative, provoquait un élargissement et un renforcement des tendons. Des études histologiques ont confirmé la production de nouveau collagène au cours de ce processus [1].
Au cours des premières décennies, de nombreuses solutions de distribution ont été testées. Dans les années 1990, la plupart des praticiens considéraient que les concentrations élevées de glucose étaient la méthode la plus sûre et la plus efficace. Cependant, le mécanisme d'action reste flou.
Peu d'études cliniques ont été menées au XXe siècle suite aux travaux de Hackett. Cependant, dans les années 2000, on a assisté à un regain d'intérêt et plusieurs essais cliniques réussis sur la thérapie proliférative ont été menés pour le traitement des lombalgies [2], de l'arthrose du genou [3] et de l'épicondylite latérale [4].
La régénération tissulaire nécessite la participation des cellules souches. Par conséquent, de fortes concentrations de glucose doivent induire la migration, la réplication et la différenciation des cellules souches. Nous émettons l'hypothèse que les plaquettes pourraient agir comme des messagers et que de fortes concentrations de glucose pourraient les amener à libérer des cytokines et des facteurs de croissance, favorisant ainsi les processus de régénération, notamment la migration des cellules souches vers les zones à fortes concentrations de glucose.
Français L'activation plaquettaire précède toujours une augmentation du calcium intracellulaire [5]. Liu et al. en 2008 ont montré que des niveaux élevés de glucose augmentent l'activité des canaux TRPC6 (Transient Receiver Potential Canonical Type 6) dans la membrane plasmique, ce qui conduit à un afflux d'ions calcium dans les plaquettes [6]. Une autre étude a montré que l'exposition de la zone marginale des microtubules aux ions calcium provoque une relaxation, une expansion et une déformation de la zone marginale, ce qui à son tour provoque un changement de forme de disque à sphérique, ce qui entraîne un volume plaquettaire moyen (VPM) [7].
Notre hypothèse dans cette étude est que l'exposition des plaquettes à des concentrations élevées de glucose affecte la zone marginale des microtubules et l'environnement intracellulaire, entraînant une augmentation du MPV.
Tous les participants ont signé un formulaire de consentement éclairé après explication des détails de l'étude et avant de recevoir les échantillons. Dans cette étude, seuls les échantillons de PRP présentant un hématocrite supérieur à 2 % ont été utilisés afin de permettre la comparaison du nombre d'érythrocytes et du volume globulaire moyen des globules rouges (VGM).
L'étude a été menée en quatre phases : la première phase était consacrée au PRP et les phases suivantes au sang total (tableau 1). Comme décrit précédemment [8], toutes les forces centrifuges relatives (FCR, force g) ont été calculées à partir du point médian (Rmid, en cm) de la colonne sanguine dans la seringue centrifuge. Nous avons choisi d'utiliser le VPM comme marqueur de sensibilisation plaquettaire et la numération plaquettaire comme indicateur d'une éventuelle lyse plaquettaire, deux valeurs facilement mesurables sur des analyseurs d'hématologie standard.
Français Dans la première phase, 47 volontaires ont donné des échantillons de sang : un tube d'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) et un échantillon de sang total de PRP (anticoagulé avec du citrate de sodium (NaCl, 3 %)) (Tableau 1). Placer immédiatement le culbuteur dans le tube. Une numération globulaire complète (NFS) a été réalisée sur des échantillons d'EDTA en triple, et des échantillons de NaCl ont été analysés en triple pour l'analyse de la NFS, puis le PRP a été préparé par diverses méthodes décrites ci-dessus [8]. Tous les échantillons de PRP ont été préparés par centrifugation à 900-1000 g. Mélanger chaque échantillon de PRP sur un agitateur vortex pendant 5 à 10 secondes, puis diviser cinq aliquotes de 0,5 ml en tubes.
Français Pour évaluer l'effet de l'exposition plaquettaire sur les concentrations élevées de glucose, des quantités égales (0,5 ml) de 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % et 50 % de glucose dans l'eau ont été mélangées à des échantillons de plaquettes pour obtenir des concentrations de 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % et 25 % du mélange de glucose et mélanger les tubes sur un agitateur de tubes à essai pendant 15 minutes. Le TAC de chaque mélange a été analysé en triple après 15 min. La numération plaquettaire (PLT), la numération des globules rouges, le VGM et le VPM ont été moyennés pour chaque tube, et la numération plaquettaire moyenne, la numération des globules rouges, le VGM et le VPM ont été calculés pour tous les échantillons de PRP.
Après la première phase de collecte de données, nous avons constaté une augmentation significative du volume plaquettaire des plaquettes PRP après l'ajout de D50W. Les plaquettes PRP ne représentent pas nécessairement l'ensemble des plaquettes sanguines, et le milieu PRP diffère du milieu WB. Nous avons donc décidé de mener une deuxième phase d'essai pour évaluer l'effet de l'ajout de D50W au sang total.
Pour le deuxième tour, nous avons choisi un échantillon de 30 personnes en nous basant sur les résultats de la première série, comme décrit dans la section Analyse. Dans cette série, 20 volontaires ont donné des échantillons de sang (tableau 1). Du sang total (1,8 ml) a été prélevé dans une seringue de 3 ml et anticoagulé avec 0,2 ml de NaCl à 40 %. La seringue de sang total a été agitée pendant cinq secondes avec un agitateur vortex et la NFS a été analysée en triple. Après analyse, le sang anticoagulé a été ajouté à 2 ml de glucose à 50 % dans une seringue de 5 ml (la concentration finale en glucose était d'environ 25 % [D25]) et placé dans un tube à agitation pendant 30 minutes. Après 30 minutes, le D25/NFS dans les seringues de WB a été analysé en triple. La numération plaquettaire, la numération érythrocytaire, le VGM et le VPM par seringue ont été moyennés, et les moyennes PLT, numération érythrocytaire, VGM et VPM ont été calculées pour chaque échantillon avant et après l'ajout de glucose.
Étant donné que les plaquettes dans le sang total sont fréquemment exposées au glucose hypertonique pendant la thérapie proliférative du glucose en raison d'une injection mini-invasive, et qu'il n'est pas courant d'associer le PRP au glucose hypertonique juste avant l'injection, nous avons décidé d'étudier le glucose hypertonique en association avec le WB dans la section 1. Étapes trois et quatre. À chaque étape, 20 volontaires ont donné 7 à 8 ml d'ACD-A (acide contenant du citrate trisodique (22,0 g/l), de l'acide citrique (8,0 g/l) et du glucose (24,5 g/l), solution de citrate de dextrose) pour les anticoagulants sanguins (tableau 1). Seuls les mélanges de glucose supérieurs à 12,5 % ont été utilisés pour déterminer le pourcentage seuil associé à une augmentation du MPV. À la troisième étape, 1 ml de sang est placé dans un tube à essai. Mélanger ensuite le sang sur un agitateur vortex pendant 10 secondes en ajoutant 1 ml de glucose à 30 %, 40 % ou 50 % dans le tube pour obtenir une concentration finale en glucose de 15 %, 20 % et 25 %, respectivement. Les échantillons de sang glucidique ont été analysés pour la NFS immédiatement après le mélange, puis répétés toutes les deux minutes pendant 30 minutes.
Lors du mélange initial, l'ajout de glucose hypertonique 1:1 et de WB ou de PRP expose les plaquettes à des concentrations supérieures à 25 % pendant plusieurs secondes. Lors de la quatrième étape, afin d'évaluer l'effet du glucose hypertonique avec des concentrations initiales maximales minimales et de tester la limite supérieure de l'effet du glucose, nous avons ajouté une petite quantité de sang à D25W ou D50W. Placer 1 ml de D25W ou D50W dans un tube et ajouter 0,2 ml de WB tout en agitant l'échantillon au vortex pendant 10 secondes. Dans ces cas, le sang a été exposé au glucose à une concentration environ 20 % supérieure à la concentration finale, au lieu de 50 % comme lors de la phase 3, ce qui a donné des concentrations finales de glucose de 20,8 % et 41,6 %. Les échantillons mélangés ont été analysés au même intervalle de temps qu'à l'étape 3.
Français Dans la première étape de chaque série de dilutions de glucose, 30 échantillons ont été prélevés car c'était la taille d'échantillon appropriée pour l'étude pilote [9]. À la fin de chaque phase (y compris la première phase), évaluez l'adéquation de la taille de l'échantillon à l'aide de la formule utilisée pour déterminer la taille d'échantillon nécessaire pour estimer la moyenne de la variable de résultat continue dans une population. Formule n = Z2 x SD2 /E2. Dans cette équation, Z est le score Z, SD est l'écart type et E est l'erreur souhaitée [10]. Notre alpha est de 0,05, ce qui correspond à une valeur Z de 1,96, et nous nous attendons à une erreur de 5 (en pourcentage). Par conséquent, nous résolvons pour n = (1,962 x SD2)/52. Les résultats ont montré que la taille de l'échantillon requise pour chaque étape était inférieure au nombre réel collecté.
Français Au cours des périodes 1, 3 et 4 utilisant plus d'une concentration de glucose, l'effet des différentes concentrations de glucose a été analysé en comparant la variation fractionnelle entre le temps 0 et chaque temps suivant (phase 1 à 15 minutes, période 3 à 15 minutes et quatre à 15 secondes, puis toutes les deux minutes.) Les taux de variation pour chaque période ont été comparés à l'aide du test U de Mann-Whitney car les données ne suivaient pas une distribution normale telle que déterminée par le test de normalité de Shapiro-Wilk. Étant donné qu'une analyse 1 pour 1 de plusieurs groupes (cinq) a été effectuée dans les première, troisième et quatrième étapes (cinq au total), une correction de Bonferroni a été effectuée pour ajuster la valeur alpha souhaitée à ≤ 0,01 mais pas ≤ 0,05.
Réduction du nombre de plaquettes avec toutes les concentrations de dextrose hypertonique et augmentation du VPM dans les plaquettes PRP à une concentration de dextrose > 12,5 % : le nombre de plaquettes PRP est passé d'une à cinq fois la concentration par rapport au sang total de base, variant selon la méthode (non représentée). Réduction du nombre de plaquettes avec toutes les concentrations de dextrose hypertonique et augmentation du MPV dans les plaquettes PRP à une concentration de dextrose > 12,5 % : le nombre de plaquettes PRP est passé d'une à cinq fois la concentration par rapport au sang total de base, variant selon la méthode (non représentée). L'utilisation de collecteurs de trompes pour tous les centres de concentration hypertoniques et la mise en œuvre de MPV dans les trompes PRP concentration de concentration > 12,5% : le taux de concentration du PRP est appliqué en 1 à 5 minutes après le nettoyage de votre cycle de vie le plus élevé, dans les commentaires. от метода (не показано). Diminution du nombre de plaquettes à toutes les concentrations de dextrose hypertonique et augmentation du VPM dans les plaquettes PRP à une concentration de dextrose > 12,5 % : le nombre de plaquettes PRP a augmenté de 1 à 5 fois par rapport au sang total de base, selon la méthode (non illustrée). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 À une concentration de glucose > 12,5 %, la concentration élevée de glucose réduit la numération sanguine, le MPV sanguin du PRP augmente : par rapport à la numération sanguine du PRP, la numération sanguine du PRP augmente de 1 à 5 fois celle de la concentration (non décrite). Avec des concentrations de glucose >12,5% dans toutes les concentrations de glucose hypertoniques, le MPV est alimenté par un compresseur тромбоцитах PRP : le regroupement des trompettes PRP est appliqué à une concentration de 1 à 5 croisières en fonction de la concentration de chaque groupe, dans Consultez la méthode (non officielle). À des concentrations de glucose > 12,5 %, toutes les concentrations de glucose hypertensives ont diminué le nombre de plaquettes et augmenté le VPM dans les plaquettes PRP : le nombre de plaquettes PRP a augmenté de 1 à 5 fois par rapport aux concentrations initiales dans le sang total, selon la méthode (comme décrit).La figure 1 montre que le nombre de plaquettes a diminué de près de 75 % après dilution dans l'eau et de 20 à 30 % après 15 minutes de dilution avec différentes concentrations de glucose par rapport au PRP de base et à une dilution 1:1 ajustée au volume (1- k1 avec correction du volume). k -1 reproduction).1 reproduction).
Le nombre de cellules dans chaque dilution est exprimé sous forme de fraction du nombre d’origine avant dilution.
Le MPV a diminué de façon minimale pendant la production de PRP, sans autre changement dans les concentrations de dilution à 12,5 % dans l'eau ou le glucose (y compris les mélanges de glucose à 25 % de PRP) et a augmenté de plus de 20 % après dilution dans une solution de glucose à 50 % (Fig. .2). En revanche, les érythrocytes n'ont montré aucun changement significatif de volume à aucune dilution autre que H2O.
Le volume moyen de cellules dans chaque dilution est exprimé en pourcentage du volume d'origine avant dilution.
Une réduction similaire, mais moins prononcée, de la numération plaquettaire et une augmentation de la valeur de la variation cellulaire ont été observées chez les BC exposés à 50 % de glucose (pour formuler avec 25 % de glucose). Le tableau 2 compare le nombre et le volume de cellules dans le sang total dilué dans 50 % de dextrose avec les données de phase 1 du PRP dilué dans 50 % de dextrose. Les modifications de la numération et du volume global des globules rouges n'étaient pas évidentes et n'ont pas retenu notre attention.
SD = écart type, MD = différence moyenne entre les groupes, SE = écart type de la différence moyenne, RBC = érythrocytes, PLT = plaquettes, PRP = plasma riche en plaquettes, WB = sang total
Français Après avoir ajouté du D50W au WB, le pourcentage de perte plaquettaire ajusté en fonction de la dilution était de 7,7 % (310 ± 73 contre 286 ± 96) contre 17,8 % pour la dilution du PRP dans du D50W (664 ± 348 contre 544 ± 277). Le MPV WB a augmenté de 16,8 % (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6), tandis que le MPV PRP a augmenté de 26 % (9,2 ± 0,8 contre 11,6 ± 0,7). Bien que les différences moyennes dans la réduction du nombre de plaquettes et l'augmentation du MPV étaient significativement plus importantes avec le PRP, les changements dans la réduction du nombre de plaquettes dans le WB étaient presque significatifs (310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06) et l'augmentation du MPV était significative (10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Bien que les différences moyennes dans la réduction du nombre de plaquettes et l'augmentation du MPV étaient significativement plus importantes avec le PRP, les changements dans la réduction du nombre de plaquettes dans le WB étaient presque significatifs (310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06) et l'augmentation du MPV était significative (10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Bien que les différences moyennes dans la réduction du nombre de plaquettes et l'augmentation du CVR aient été significativement plus importantes avec le PRP, les changements dans la baisse du nombre de plaquettes au sein du WB étaient presque significatifs (310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). l'augmentation du MPV était significative (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Système PRP pour véhicules MPV et systèmes MPV, pour WB 310 ± 73 ± 286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06） et MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。Le changement dans la réduction du nombre de plaquettes dans le WB était presque significatif (de 310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06), bien que le PRP ait eu des différences moyennes significativement plus grandes dans la baisse du nombre de plaquettes et l'augmentation du MPV. et l'augmentation du MPV était significative.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Français Une concentration finale de 20 % de glucose était nécessaire pour observer un changement significatif du VPM, mais le changement du VPM était plus prononcé à la concentration finale de 25 %. La perte plaquettaire s'est stabilisée après la baisse initiale. Nous avons noté une forte diminution initiale du CVR, cependant, le CVR a été rapidement restauré à la concentration finale de glucose de 25 %, ce qui était significativement plus élevé que les niveaux de CVR observés aux concentrations finales de glucose de 20 % et 15 % (Fig. 3 et à gauche du Tableau 3 ; cases ombrées). indiquent des valeurs de p ≤ alpha avec une correction de Bonferroni de 0,01). Il y a également eu une forte baisse initiale du nombre de PLT, observée dans la phase initiale de 0 à 15 s, puis est restée stable (de 15 s à 30 min ; à gauche du Tableau 4).
L'ajout de diverses concentrations de glucose au sang total a entraîné une diminution initiale rapide du VPM, suivie d'une récupération concentration-dépendante de plus de 20 %. La légende indique la concentration de glucose après dilution. Les mesures D15, D20 et D25 ont été réalisées à une dilution 1:1. Les mesures D21 et D41 ont été réalisées à une dilution 1:5.
Le tableau 4 montre l'évolution de la numération plaquettaire après dilution dans du glucose hypertonique. Nous avons observé une relation dose-dépendante entre la baisse immédiate du nombre de PLT à la dilution 1:1 et à la dilution 1:5. En comparant les dilutions 1:1 en tant que groupe unique avec les dilutions 1:5, le groupe 1:1 a présenté une baisse immédiate de la numération plaquettaire inférieure à celle du groupe 1:5 (66 ± 48 000 (23 %) contre 99 ± 69 000 (37 %), p = 0,014) dans le groupe 1:5. Après une baisse initiale au premier point de mesure, la numération plaquettaire en pourcentage du glucose s'est stabilisée (Fig. 4).
Lorsque du sang total est ajouté au glucose dans un rapport de 1:1, la numération plaquettaire est réduite d'environ 25 %. En revanche, lorsque du sang total est ajouté dans un rapport de 1:5, la réduction est bien plus importante, environ 50 %.
Français Le glucose à 41 % a augmenté le VPM plus rapidement et plus fortement que 25 % ou 21 %. Les résultats du VPM sont présentés dans la Figure 3. À toutes les autres dilutions, aucune diminution initiale immédiate du VPM n'a été observée après l'ajout de glucose à 50 %. Avec le glucose à 25 % (concentration de glucose de 20,8 % à la dilution finale), la variation du VPM était comparable à celle du glucose à 20 % à une dilution 1:1 (Fig. 3). Bien que les variations du VPM aient été initialement plus importantes à la concentration mixte de 41 % qu'à 25 %, la différence de VPM entre 41 % et 25 % après 16 minutes n'était plus significative (Tableau 3, à droite). Il est également intéressant de noter que le glucose à 25 % a augmenté le VPM plus efficacement que le glucose à 20,8 %.
Cette étude in vitro a partiellement confirmé notre hypothèse. Il a montré une lyse plaquettaire partielle potentielle par mélange de dextrose, une adaptation rapide des plaquettes à une hypertonie extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à des concentrations > 25 % de dextrose hypertonique. Il a montré une lyse plaquettaire partielle potentielle par mélange de dextrose, une adaptation rapide des plaquettes à une hypertonie extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à des concentrations > 25 % de dextrose hypertonique. Lors de la recherche d'une lisienne de thrombose potentielle, elle s'adapte aux thromboses du corps sexuel L'hypertonie et la puissance maximale du MPV sont supérieures à 25 %. Il a montré une lyse plaquettaire partielle potentielle avec du dextrose, une accommodation plaquettaire rapide à une hypertonie extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à des niveaux de dextrose hypertonique > 25 %.以及响应> 25 % pour les véhicules MPV.以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。 。 。 。 。 En raison de la possibilité d'une élimination des thromboses avec du glucose, l'adaptation des trompes à l'extrémisme est possible. L'hypertonie et la production locale de MPV sont supérieures à 25 %. Il montre une lyse plaquettaire partielle potentielle par des mélanges de glucose, une adaptation plaquettaire rapide à une hypertonie extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à une glycémie hypertonique > 25 %.L'augmentation initiale était maximale à une exposition au glucose de 41,6 %, mais l'augmentation du MPV s'approchait d'une exposition au glucose de 25 % environ 20 minutes après l'exposition.
La concentration plaquettaire est affectée par le glucose. Nous avons constaté une diminution de la quantité de PLT à toutes les dilutions de glucose. Une chute brutale du nombre de plaquettes dans les dilutions H₂O (0 %) de la série PRP pourrait être associée à une lyse osmotique. Il pourrait également s'agir d'un artefact dû à l'agglutination plaquettaire, mais cela contraste avec l'absence de variation du VPM à cette dilution. Ce résultat signifie que certaines plaquettes sont très sensibles à l'hypoosmolarité.
Dans toutes les dilutions 1:1 de glucose, la quantité de PLT a diminué de 20 à 30 %, même à J5W (hypotonique à 252 mOsm), ce qui pourrait indiquer un effet non osmotique spécifique du glucose, puisque PLT et MPV sont restés inchangés à une concentration trois fois supérieure. glucose. de J5W à J25W. En fait, les concentrations de PLT ont eu tendance à augmenter légèrement avec l'osmolarité.
La diminution du volume de PLT entre les dilutions 1:1 et 1:5 signifie que l'effet de dissolution dépend de la concentration initiale et finale en glucose. Si cela ne dépendait que de la concentration initiale, on s'attendrait à observer une différence de réduction du volume de PLT entre les concentrations 1:1. Or, ce n'est pas le cas. Si l'effet de lyse ne dépend que de la concentration finale en glucose, on ne s'attend pas à une grande différence entre une dilution 1:1 à 20 % et une dilution 1:5 à 20,8 %. Et pourtant, nous l'avons fait.
En cas de perte plaquettaire due à la lyse plaquettaire, un lysat partiel se forme, après quoi des cytokines et des facteurs de croissance sont libérés dans le milieu extracellulaire. Plusieurs études ont montré que le lysat plaquettaire est presque aussi efficace que le PRP comme solution antiproliférative [11]. Le PRP lui-même s'est avéré efficace pour le traitement de la prolifération [12-14].
Les plaquettes inactives circulent sous la forme d'un disque renforcé par plusieurs structures internes. Lors de l'activation, elles prennent une forme plus sphérique ou amibienne, entraînant une augmentation de volume. Cette augmentation de volume nécessite une augmentation de la surface, résultant de l'extrusion du système tubulaire ouvert (SCO) et de l'ajout de granules exocytaires à la membrane. Il reste à déterminer si l'augmentation du VPM induite par le glucose hypertonique implique l'un ou les deux de ces mécanismes. Dans ce dernier cas, une augmentation du VPM indiquerait une dégranulation.
Cette étude a montré que l’exposition à des concentrations élevées de glucose sur le PRP ou les plaquettes sanguines totales entraînait une augmentation du MPV en 15 minutes avec une concentration de glucose de 25 % et 41,6 %, respectivement.
L'augmentation du MPV plaquettaire peut être due à la dilatation des enchevêtrements de microtubules environnants en réponse à l'afflux de calcium. Liu et al. Il a été démontré que le glucose médie l'afflux de calcium via le canal plaquettaire TRPC6 [6]. Notre hypothèse est que le glucose induit la relaxation des enchevêtrements de microtubules, entraînant une augmentation du MPV et une sensibilisation et/ou une activation plaquettaire. Cependant, à en juger par nos résultats, ce n'est qu'une partie de l'histoire. Dans nos tests, aucune concentration inférieure à D25W n'a entraîné d'augmentation du MPV. Étant donné que nous n'avons pas testé l'exposition à des concentrations de glucose comprises entre 12,5 % et 25 %, nos résultats de phase 1 suggèrent qu'il pourrait y avoir un seuil dans cette plage de concentrations de glucose qui conduit à une augmentation du MPV. Des tests supplémentaires aux stades 3 et 4 ont montré que 20 à 25 % de glucose semblent être le seuil pour cela, mais on ne sait pas encore pourquoi.
Nous avons également observé une diminution d'environ 9 % du VPM après centrifugation. Il n'est pas certain que cette diminution soit due à des plaquettes plus grosses et plus denses, piégées dans la couche de globules rouges de la centrifugeuse. Cette observation pourrait être importante pour les cliniciens, car elle pourrait impliquer que les plaquettes PRP constituent un sous-ensemble plus petit et moins dense des plaquettes WB.
Dans une étude précédente, nous avons montré que la préparation manuelle du PRP est peu coûteuse [8]. Si le glucose sensibilise les plaquettes tissulaires ou le PRP, les rendant plus sensibles à l'activation, ou si le PRP est produit avec des propriétés de lysat partiel, cela peut améliorer la régénération et réduire le recours au traitement. Par conséquent, l'association de PRP et de glucose hautement concentré pourrait être plus rentable que le PRP ou le glucose seuls.
Notre étude présente plusieurs lacunes. Premièrement, nous utilisons du PRP obtenu par différentes méthodes, ce qui peut conduire à des résultats contradictoires. Deuxièmement, nous n'avons pu réaliser d'analyse biochimique d'aucun de nos échantillons pour déterminer avec plus de précision si une activation plaquettaire avait eu lieu. Nous souhaiterions mesurer la P-sélectine, le facteur plaquettaire 4, les agrégats plaquettaires monocytaires ou d'autres marqueurs de l'activation plaquettaire afin de mieux comprendre le degré ou la présence de dégranulation des granules alpha, mais cela dépasse le cadre de cette étude. Troisièmement, nous n'avons pas pu confirmer, par microscopie électronique ou par d'autres méthodes, que l'augmentation du VPM dans les plaquettes exposées au glucose était due à l'effet sur les enchevêtrements de microtubules.
Les mélanges de WB ou de PRP avec 25 % de glucose ont augmenté la VPM, signalant le début de l'activation plaquettaire, bien que cette étude n'ait pas démontré de progression de l'agrégation ou de la dégranulation. Le mélange de glucose hypertonique a entraîné une perte plaquettaire, ce qui pourrait être dû à un effet lytique. L'activation partielle ou la lyse des plaquettes peut entraîner une régénération tissulaire après injection de plaquettes. Les conséquences cliniques de ces modifications ne sont pas clairement établies. D'autres études ont démontré des mesures plus précises de l'activation ou de la lyse et ont évalué les différents effets cliniques des mélanges de glucose hypertonique avec WB ou PRP.
La thérapie proliférative du glucose est une thérapie régénératrice simple et peu coûteuse qui connaît un essor rapide et alimente la recherche clinique. Cette étude suggère un mécanisme physiologique qui, s'il est confirmé, pourrait nous aider à comprendre une partie du mécanisme régénératif de la thérapie proliférative.
Informatique biomédicale et de santé à la faculté de médecine de l'Université du Missouri, Kansas City, Kansas City, États-Unis
Sujets humains : Tous les participants à cette étude ont donné ou non leur consentement. La Société internationale de médecine cellulaire a émis l'approbation ICMS-2017-003. Le protocole suivant a été approuvé pour une utilisation ultérieure par le comité d'examen institutionnel de la Société internationale de médecine cellulaire : Titre : Calcul du rendement en médicament du plasma riche en plaquettes basé sur la numération plaquettaire initiale de la NFS. Sujets animaux : Tous les auteurs ont confirmé qu'aucun animal ou tissu n'était impliqué dans cette étude. Conflits d'intérêts : Conformément au formulaire de divulgation uniforme de l'ICMJE, tous les auteurs déclarent ce qui suit : Informations sur le paiement/service : Tous les auteurs déclarent qu'ils n'ont reçu de soutien financier d'aucune organisation pour le travail soumis. Relations financières : Tous les auteurs déclarent qu'ils n'ont pas actuellement ou au cours des trois dernières années de relations financières avec une organisation qui pourrait être intéressée par le travail soumis. Autres relations : Tous les auteurs déclarent qu'il n'y a pas d'autres relations ou activités qui pourraient affecter le travail soumis.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 mai 2022) Effet du glucose sur la numération et le volume plaquettaires : implications pour la médecine régénérative. Cure 14(5) : e25081. doi:10.7759/cureus.25081
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