Guon LC-troubleshooting-ûnderwerpen binne nea ferâldere, om't d'r problemen binne yn LC-praktyk, sels as ynstruminttechnology yn 'e rin fan' e tiid ferbettert. Der binne in protte manieren wêrop problemen kinne ûntstean yn in LC-systeem en einigje yn in minne pykfoarm.
It wie leuk om dizze kolom "LC Troubleshooting" te skriuwen en elke moanne oer ûnderwerpen te tinken, om't guon ûnderwerpen noait út 'e styl geane. Wylst op it mêd fan chromatografysk ûndersyk bepaalde ûnderwerpen of ideeën ferâldere wurde, om't se ferfongen wurde troch nijere en bettere ideeën, op it mêd fan probleemoplossing, sûnt it earste probleemoplossingstydskrift ferskynden sûnt it earste LC Journal yn dit tydskrift () 983(1).De ôfrûne jierren haw ik ferskate LC Troubleshooting-seksjes rjochte op hjoeddeistige trends dy't floeistofchromatografy (LC) beynfloedzje (bygelyks de relative fergeliking fan ús begryp fan it effekt fan druk op retinsje [2] Nije Advances) Us ynterpretaasje fan LC-resultaten en hoe't jo problemen oplosse mei dizze LC-ynstruminten1,'20, yn 'e searje fan' e LC20 begon yn dizze searje'20. , dy't rjochte op guon fan 'e "libben en dea" ûnderwerpen fan LC troubleshooting - eleminten dy't great foar eltse troubleshooter binne essinsjeel, nettsjinsteande de leeftyd fan it systeem dat wy brûke. It kearn ûnderwerp fan dizze rige is tige relevant foar de LCGC syn ferneamde "LC Troubleshooting Guide" muorre chart (4) hingjen yn in protte laboratoariums, yn ferbân mei peak fan dizze rige. bly, de muorre chart lists 44 ferskillende potinsjele oarsaken fan earme peak foarm! Wy kinne net beskôgje al dizze saken yn detail yn ien artikel, dus yn dizze earste ynstallaasje oer it ûnderwerp, Ik sil rjochtsje op guon fan dejingen dy't ik sjoch meast faak.
Ik fyn mysels hieltyd mear te beäntwurdzjen fan problemen foar it oplossen fan fragen mei "alles is mooglik". Dit antwurd kin maklik lykje by it beskôgjen fan observaasjes dy't lestich te ynterpretearjen binne, mar ik fyn it faak passend. Mei in protte mooglike oarsaken fan minne pykfoarm is it wichtich om in iepen geast te hâlden by it beskôgjen fan wat it probleem kin wêze, en om potinsjele oarsaken te prioritearjen om te begjinnen mei ús problemen foar it oplossen fan dy meast foarkommende ynspanningen, mooglikheden.
In wichtige stap yn elke oefening foar it oplossen fan problemen - mar ien dy't ik tink is ûnderskatte - is it erkennen dat d'r in probleem is dat oplost wurde moat. Erkennen dat d'r in probleem is, betsjut faaks erkenne dat wat bart mei it ark oars is fan ús ferwachtingen, dy't foarme wurde troch teory, empiryske kennis en ûnderfining (5). y, liedende râne, tailing, ensfh), mar ek nei de breedte. Us ferwachtings foar werklike pyk foarm binne simpel. Teory (6) goed stipet de learboek ferwachting dat, yn de measte gefallen, de chromatografyske toppen moatte wêze symmetrysk en oerienkomt mei de foarm fan in Gaussian ferdieling, lykas werjûn yn figuer 1a. s yn figuer 1 litte guon fan 'e oare mooglikheden sjen dy't kinne wurde waarnommen - mei oare wurden, guon fan' e wizen wêrop dingen ferkeard kinne gean.
Soms wurde peaks hielendal net beoardiele yn it chromatogram wêr't se wurde ferwachte dat se elutearre wurde. It boppesteande muorrekaart jout oan dat it ûntbrekken fan in pyk (oannommen dat it stekproef eins de doelanalyt befettet op in konsintraasje dy't de detektor-antwurd genôch meitsje moat om it boppe it lûd te sjen) is meastentiids relatearre oan guon ynstrumintkwestje of ferkearde mobile fazebetingsten (as waarnommen by alle betingsten fan 'e mobile faze).peaks, meastal te "swak"). In koarte list mei mooglike problemen en oplossings yn dizze kategory is te finen yn Tabel I.
Lykas hjirboppe neamde, is de fraach hoefolle peakferbreding tolerearre wurde moat foardat jo oandacht hawwe en besykje it te reparearjen, is in kompleks ûnderwerp dat ik yn in takomstich artikel sil besprekke. Myn ûnderfining is dat signifikante peak-ferbreding faak begelaat wurdt troch in signifikante feroaring yn peakfoarm, en peak-tailing is faker foar dan pre-peak of splitting.
Elk fan dizze problemen is yn detail besprutsen yn eardere problemen fan Troubleshooting LC, en lêzers dy't ynteressearre binne yn dizze ûnderwerpen kinne ferwize nei dizze eardere artikels foar ynformaasje oer de woartel oarsaken en potinsjele oplossings foar dizze problemen.Mear details.
Peak tailing, peak fronting, en splitting kin allegear wurde feroarsake troch gemyske of fysike ferskynsels, en de list fan mooglike oplossings foar dizze problemen fariearret, ôfhinklik fan oft wy te krijen hawwe mei in gemysk of fysyk probleem. fysike.As mar ien of in pear pieken wurde beynfloede, mar de rest sjocht der goed út, de oarsaak is nei alle gedachten gemysk.
De gemyske oarsaken fan peak tailing binne te kompleks om hjir koart te besprekken. De ynteressearre lêzer wurdt ferwiisd nei it resinte nûmer fan "LC Troubleshooting" foar in mear yngeande diskusje (10). In maklik ding om te besykjen is lykwols om de massa fan 'e ynjeksjede analyt te ferminderjen en te sjen oft de peakfoarm ferbetteret. , of de chromatografyske betingsten moatte feroare wurde sadat goede peakfoarmen kinne wurde krigen sels mei gruttere massa's ynjeksje.
Der binne ek in protte potinsjele fysike redenen foar peak tailing. Lêzers ynteressearre yn in detaillearre diskusje oer de mooglikheden wurde ferwiisd nei in oare resinte útjefte fan "LC Troubleshooting" (11). Ien fan de meast foarkommende fysike oarsaken fan peak tailing is in minne ferbining op in punt tusken de injector en detector (12). ve dat wy hiene net brûkt foar, en ynstallearre in lyts folume ynjeksje lus mei in ferrule dat wie getten op in roestvrij stiel capillary.Nei guon earste probleemoplossing eksperiminten, wy realisearre dat de haven djipte yn de ynjeksje fentyl stator wie folle djipper as wy wiene wend oan, resultearret yn in grut deade folume oan de ûnderkant fan 'e poarte ferje, dit probleem is maklik oplost mei in oare buis. nei de juste posysje om it deade folume oan 'e boaiem fan' e haven te eliminearjen.
Peak fronten lykas dy werjûn yn figuer 1e kin ek wurde feroarsake troch fysike of gemyske problemen. In mienskiplike fysike oarsaak fan 'e liedende râne is dat it dieltsje bêd fan' e kolom is net goed ynpakt, of dat de dieltsjes hawwe reorganisearre yn 'e rin fan' e tiid. Lykas mei peak tailing feroarsake troch dit fysike ferskynsel, de bêste manier om dit te reparearjen is te ferfangen de kolom en bliuwe geande fan 'e pykfoarm fan' e foaroansteande oarsprong faaks in foaroansteande oarsprong. Under ideale (lineêre) omstannichheden is de hoemannichte analyt dy't troch de stasjonêre faze (dus de retinsjefaktor) fêsthâlden lineêr besibbe oan de konsintraasje fan 'e analyt yn 'e kolom. Chromatografysk betsjut dit dat as de massa fan analyt dy't yn 'e kolom brocht wurdt, de peak heger wurdt, mar net breder. ed.Dêrneist bepale net-lineêre foarmen de foarm fan chromatografyske pieken, wat resulteart yn liedende of efterste rânen. Lykas by massa-oerlêst dy't peak tailing feroarsaket (10), kin peak-leading feroarsake troch net-lineêre retinsje ek wurde diagnostearre troch it ferminderjen fan de ynjeksjede analytmassa. imize dit gedrach.
Soms observearje wy wat liket te wêzen in "split" peak, lykas werjûn yn figuer 1f. De earste stap yn it oplossen fan dit probleem is om te bepalen oft de peak foarm is te tankjen oan in part co-elution (dat wol sizze, de oanwêzigens fan twa ûnderskate, mar nau eluting ferbiningen). en de skynbere "split" peaks binne besibbe oan fysike Performance hat neat te krijen mei de kolom sels. Faak is de wichtichste oanwizing foar dit beslút oft alle peaks yn it chromatogram spjalte foarmen sjen litte, of gewoan ien of twa. As it mar ien of twa is, is it wierskynlik in ko-eluaasjeprobleem;as alle toppen binne splitst, it is wierskynlik in fysyk probleem, nei alle gedachten relatearre oan de kolom sels.
Split peaks yn ferbân mei de fysike eigenskippen fan de kolom sels binne meastentiids troch foar in part blokkearre inlet of outlet frits, of reorganisaasje fan dieltsjes yn 'e kolom, sadat de mobile faze te streamen flugger as de mobile faze yn bepaalde gebieten fan' e kolom kanaal formaasje .in oare regio (11). Foar in part ferstoppe frit kin soms wurde wiske troch it omkearjen fan de stream troch de kolom;lykwols, yn myn ûnderfining, dit is meastal in koarte-termyn earder as in lange-termyn oplossing. Dit is faak fataal mei moderne kolommen as de dieltsjes recombine binnen de kolom. Op dit punt, it is it bêste om te ferfangen de kolom en trochgean.
De peak yn figuer 1g, ek fan in resinte eksimplaar yn myn eigen laboratoarium, jout meastentiids oan dat it sinjaal sa heech is dat it it hege ein fan it antwurdberik berikt hat. boarnen fan lûd, lykas strie ljocht en "tsjustere stroom", wêrtroch it sinjaal hiel "fuzzy" yn uterlik en ûnôfhinklik fan analyt konsintraasje.As dit bart, kin it probleem faak maklik wurde oplost troch it ynjeksjefolum fan 'e analyt te ferminderjen - it ynjeksjevolumint te ferminderjen, it stekproef te ferwiderjen, of beide.
Yn chromatografyskoalle brûke wy it detektoristyk yn it konsintraasje fan 'e analyte-konsintraasje, as de ienfâldige analyte-konsintraasje is, om't it is op' e hichte, wurdt it meast opwekke by it brûken fan optyske absorbanendetektoren (bgl. UV -Vis).
Yn dit gefal betsjut in negative peak gewoan dat de molekulen dy't út 'e kolom eluearje minder ljocht absorbearje as de mobile faze sels fuort foar en nei de peak. Dit kin bygelyks foarkomme by it brûken fan relatyf lege detectiegolflingten (<230 nm) en mobile faze additieven dy't it measte ljocht op dizze golflingten absorbearje. Sokke tafoegings kinne gebrûk meitsje fan mobyl faze solvent of eigentlik negative acetate komponinten lykas on piek acetate komponinten of eins negative komponinten fan methanol. s om in kalibraasjekromme te meitsjen en krekte kwantitative ynformaasje te krijen, dus d'r is gjin fûnemintele reden om se per se te foarkommen (dizze metoade wurdt soms oantsjutten as "yndirekte UV-deteksje") (13). As wy lykwols wirklik negative pieken hielendal foarkomme wolle, yn it gefal fan absorbearjende deteksje, is de bêste oplossing om in oare detectiegolflingte te brûken, sadat de analyte-faze minder absorbeart as de mobyl-faze fan 'e analyten absorbearret, sadat de mobyl-faze minder absorbearret as de mobyl .
Negative peaks kinne ek ferskine by it brûken fan brekingsyndeks (RI) deteksje as de brekingsyndeks fan komponinten oars as de analyt yn 'e stekproef, lykas de solventmatrix, oars is fan' e brekingsyndeks fan 'e mobile faze. mobile faze.
Yn diel trije oer de basis ûnderwerp fan LC troubleshooting, Ik besprutsen situaasjes dêr't de waarnommen pyk foarm ferskilt fan de ferwachte of normale pyk shape.Effektive troubleshooting fan sokke problemen begjint mei kennis fan ferwachte pyk foarmen (basearre op teory of foarôfgeande ûnderfining mei besteande metoaden), sadat ôfwikingen fan dizze ferwachtings binne fanselssprekkend.Peak oarsaak tailorings hawwe in protte ferskillende, etc. yn detail guon fan de redenen dy't ik sjoch meast faak. Kennis fan dizze details jout in goed plak om te begjinnen mei it oplossen fan problemen, mar fange net alle mooglikheden. Lêzers ynteressearre yn in mear yngeande list fan oarsaken en oplossings kinne ferwize nei de LCGC "LC Troubleshooting Guide" wall chart.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), s. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF, Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.