Tankewol foar it besykjen fan Nature.com.De browserferzje dy't jo brûke hat beheinde stipe foar CSS. Foar de bêste ûnderfining riede wy oan dat jo in aktualisearre blêder brûke (of kompatibiliteitsmodus yn Internet Explorer útsette). Yn 'e tuskentiid sille wy de side sjen litte sûnder stilen en JavaSkript.
Poreuze silika-dieltsjes waarden taret troch in sol-gel-metoade mei wat modifikaasjes om makroporeuze dieltsjes te krijen. 1,8 mm id) waarden ynpakt troch slurry packing. Evaluearre PMP kolom skieding fan in peptide mingsel besteande út fiif peptiden (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) chromatography fan 'e minsklike betingsten en chromatografyske kondysje fan' e minsklike chromatography (Serluïne enkephalin). teoretyske plaat tellen fan it peptide mingsel is sa heech as 280.000 platen / m². Fergelykjen fan de skieding prestaasjes fan de ûntwikkele kolom mei de kommersjele Ascentis Express RP-Amide kolom, waard waarnommen dat de skieding prestaasjes fan de PMP kolom wie superieur oan de kommersjele kolom yn termen fan skieding effisjinsje en resolúsje.
Yn de ôfrûne jierren, de biofarmaseutyske yndustry is wurden in útwreidzjen wrâldwide merk mei in substansjele tanimming fan merkoandiel. Mei de eksplosive groei fan de biofarmaceutical yndustry1,2,3, de analyze fan peptiden en aaiwiten is tige winske. Njonken de doelgroep peptide, ferskate ûnreinheden wurde generearre tidens peptide synteze, dus easkjen chromatography fan weefsels proteïne suvering fan chromatography fan weefsel en purulent proteïne. s en sellen is in ekstreem útdaagjende taak fanwege it grutte oantal potinsjeel detectable soarten yn ien stekproef.Alhoewol't massa spektrometrie is in effektyf ark foar peptide en aaiwyt sequencing, as sokke samples wurde spuite yn de massa spektrometer yn ien pass, de skieding sil net ideaal. op in opjûne tiid4,5,6.Dêrneist, by floeistof faze skieding, analyten kinne wurde rjochte yn smelle regio, dêrmei konsintrearje dizze analytes en ferbetterjen MS detection gefoelichheid.Floeistofchromatography (LC) hat advanced gâns oer de ôfrûne tsien jier en is wurden in populêre technyk yn proteomic analyze7,8,9,10.
Omkearde-fase floeistofchromatografy (RP-LC) wurdt in soad brûkt foar de suvering en skieding fan peptide mingselen mei help fan octadecyl-modified silica (ODS) as de stasjonêre phase11,12,13. RP stasjonêre fazen lykwols net foarsjen befredigjend skieding fan peptiden en aaiwiten fanwege harren komplekse natuer struktuer en amphire stasjons binne ûntwurpen foar 14,1re spesjale stasjons en 14,1re stasjon. om peptiden en aaiwiten te analysearjen mei polêre en net-polêre groepen om mei dizze analyten te ynteraksje en te behâlden16.Mixed-mode chromatography, dy't multimodale ynteraksjes leveret, kin in alternatyf wêze foar RP-LC foar de skieding fan peptiden, aaiwiten en oare komplekse mingden. 9,20,21.Mixed-mode stasjonêre fazen (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) binne geskikt foar peptide en protein skiedingen troch de oanwêzigens fan sawol polêre en net-polêre groepen22,23,24,25,26,27,28 .Similarly polêre en net-polêre analyten, as skieding hinget ôf fan de ynteraksje tusken analyte en stasjonêre faze.Multimodale ynteraksjes 29, 30, 31, 32. Recently, Zhang et al.30 taret in dodecyl-beëinige polyamine stasjonêre faze en mei súkses skieden koalwetterstoffen, antidepressants, flavonoïden, nucleosiden, estrogens, en ferskate oare analytes.The polar intercalator hat sawol polêre en net-polêre groepen, sadat it kin brûkt wurde om skieden peptiden en aaiwiten dy't hawwe sawol hydrofobe en hydrophilic-kolom-embeds, C1d-polêre-emibedden, C. ) binne kommersjeel beskikber ûnder de hannelsnamme Ascentis Express RP-Amide kolommen, mar dizze kolommen wurde brûkt foar de analyze fan amine 33 allinnich.
Yn de hjoeddeiske stúdzje, in polar-ynbêde stasjonêre faze (N-phenylmaleimide-ynbêde polystyrene) waard taret en evaluearre foar skieding fan peptiden en trypsin digests fan HSA. . meganyske trilling om te soargjen dat in homogeen bed wurdt foarme binnen de column.Evaluearje ynpakt kolom skieding fan peptide mingsels besteande út fiif peptiden;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) en Trypsin digest fan minsklik serum albumin (HAS). De peptide mingsel en trypsin digest fan HSA waarden waarnommen te skieden mei goede resolúsje en effisjinsje. en proteïnen waarden waarnommen om goed oplost en effisjint te wêzen op 'e PMP-kolom, dy't effisjinter wie as de Ascentis Express RP-Amide-kolom.
PEG (polyetyleenglycol), urea, acetic acid, trimethoxy orthosilicate (TMOS), trimethyl chlorosilane (TMCS), trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC, Hydroxyde, HPLC, Styreen, Styrene, 4-TEMPO), trile (ACN), methanol, 2-propanol en aceton kocht fan Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, FS).
In mingsel fan urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), en 8 mL fan 0,01 N acetic acid waard roer foar 10 minuten, en dan 24 mL fan TMOS waard tafoege dêrby ûnder iiskâlde omstannichheden. d by 70 ° C foar 12 oeren. De droege sêfte massa waard glêd grûn yn in oven en calcined by 550 ° C foar 12 hours.Three batches waarden taret en karakterisearre te ûndersykjen reproducibility yn dieltsje grutte, pore grutte en oerflak gebiet.
Troch oerflakmodifikaasje fan silika-dieltsjes mei pre-synthesized ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) folge troch radiale polymerisaasje mei styreen, waard in polêre groep-befette ferbining taret.Stationêre faze foar aggregaten en polystyrene chains.The tarieding proses wurdt beskreaun hjirûnder.
N-phenylmaleimide (200 mg) en methyl vinyl isocyanate (100 mg) waarden oplost yn droege toluene, en 0,1 mL fan 2,2'-azoisobutyronitrile (AIBN) waard tafoege oan de reaksje flesse te meitsjen phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer foar 30 oeren (C 30 oeren droech filter en PMCP). d yn in oven op 40 ° C foar 3 oeren.
Droege silika-dieltsjes (2 g) waarden ferspraat yn droege toluene (100 mL), roer en sonicated yn in 500 mL rûne boaiem kolf foar 10 min. PMCP (10 mg) waard oplost yn toluene en tafoege dropwise oan 'e reaksje kolf fia in dropping trechter. °C foar 3 oeren. Dêrnei waarden PMCP-bûnte silika-dieltsjes (100 g) oplost yn toluene (200 ml) en 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) waard tafoege yn 'e oanwêzigens fan 100 µL dibutyltin-dilaurate as katalysator.
Styreen (1 mL), benzoylperoxide BPO (0,5 mL), en TEMPO-PMCP-taheakke silika-dieltsjes (1,5 g) waarden ferspraat yn toluene en purged mei stikstof. De polymerisaasje fan styreen waard útfierd by 100 ° C foar 12 oeren.
De samples waarden ûntgast op 393 K foar 1 oere om in oerbliuwende druk fan minder as 10-3 Torr te krijen. De hoemannichte N2 adsorbearre by in relative druk fan P/P0 = 0,99 waard brûkt om it totale poarvolume te bepalen. ed silica dieltsjes) waarden pleatst op in aluminium kolom mei help fan adhesive koalstof tape. Goud waard plated op 'e monsters mei help fan in Q150T sputter coater, en in 5 nm Au laach waard dellein op de samples. Dit ferbetteret proses effisjinsje mei help fan lege spanningen en soarget foar fyn nôt, kâld sputtering. orcestershire, UK) Mastersizer 2000 dieltsje grutte analyzer waard brûkt om te krijen de dieltsje grutte distribution.Naked silika dieltsjes en ligand-bonded silica dieltsjes (5 mg elk) waarden ferspraat yn 5 mL fan isopropanol, sonicated foar 10 min, vortexed foar 5 min, en pleatst op 'e optyske bankje fan in 5 minút op' e optyske bank fan in 5 minút. in temperatuer berik fan 30 oant 800 °C.
Glês-lined roestfrij stiel smel-boarre kolommen fan ôfmjittings (100 × 1,8 mm id) waarden ynpakt mei de slurry packing metoade, tapassen fan deselde proseduere brûkt yn Ref.31.A stainless stiel kolom (glês-lined, 100 × 1,8 mm id) mei in outlet fitting befettet in 1 µm frit waard ferbûn oan in slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA). Prepare in stasjonêre faze slurry troch suspending 150 mg stasjonêre faze fan 'e kolom en slurry methanol wie goed brûkt yn' e opslach methanol en slurry methanol yn 1.2. as de propelling solvent.Folje de kolom sequentially troch it tapassen fan drukken fan 100 MP foar 10 minuten, 80 MP foar 15 minuten, en 60 MP foar 30 minuten. Under packing, meganyske trilling waard tapast mei twa GC kolom Shakers (Alltech, Deerfield, IL, USA) te garandearjen unifoarme ynpakken fan de kolom en slurry ferneatigje stadich yn 'e sleauwe kolom en slurry ferpakking fan de kolom. de slurry packing unit en ferbine in oare fitting oan de ynlaat en oan it LC systeem te kontrolearjen syn prestaasjes.
An LC pump (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (Feriene Steaten) C14 W.05) mei 50nL ynjeksje lus, membraan degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary finster waard konstruearre Spesjale µLC apparaat detektor (UV-2075) en ferbinen hiel koart microcolumns-kolom effekt fan de buis en minus microcolumns-lined effekt. band ferbreding. Nei ferpakking, capillaries (50 μm id 365 en ferminderjen union capillaries (50 μm) waarden ynstallearre by de 1/16" outlet fan it ferminderjen union. Datasammeling en chromatography ferwurking waarden dien mei help fan Multichro 2000 software. (Northampton, MA).
Albumine út minsklik serum, lyophilized poeder, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg mingd mei trypsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 mL), en 0,2 M ammonium bicarbonate (1 mL). TFA.Filterje de oplossing en bewarje ûnder 4 °C.
Skieding fan peptide mingsels en HSA trypsin digests waarden apart evaluearre op PMP columns.Check de skieding fan it peptide mingsel en trypsin digest fan HSA troch de PMP kolom en fergelykje de resultaten mei de Ascentis Express RP-Amide column.The teoretyske plaat nûmer wurdt berekkene as folget:
SEM-ôfbyldings fan bleate silika-dieltsjes en ligand-bûne silika-dieltsjes wurde werjûn yn Fig.2 .SEM-ôfbyldings fan bleate silika-dieltsjes (A, B) litte sjen dat, yn tsjinstelling ta ús eardere stúdzjes, dizze dieltsjes bolfoarmich binne wêrby't de dieltsjes langwerpich binne of unregelmjittige symmetry hawwe.
Scannen fan elektroanenmikroskoopôfbyldings fan bleate silika-dieltsjes (A, B) en ligand-bûne silika-dieltsjes (C, D).
De dieltsje grutte distribúsjes fan bleate silika dieltsjes en ligand-bonded silica dieltsjes wurde werjûn yn figuer 3 (A). Folume-basearre dieltsje grutte distribúsje curves lieten sjen dat de grutte fan de silica dieltsjes tanommen nei gemyske modifikaasje (Fig. 3A). 3.36 μm, yn ferliking mei ús foarige stúdzje mei ad (0.5) wearde fan 3.05 μm (polystyrene-bound silica dieltsjes) 34. Dizze batch hie in smellere dieltsje grutte distribúsje yn ferliking mei ús foarige stúdzje fanwegen de wikseljende ferhâldingen fan PEG, urea, TMOS, en acetic acid yn 'e reaksje grutte fan' e polystyrene faze yn 'e reaksje fan' e sily-silica in bytsje grutter. Dit betsjut dat oerflakfunksjonalisaasje fan silika-dieltsjes mei styreen allinich in polystyrene-laach (0,97 µm) op it silika-oerflak dellein hat, wylst yn de PMP-faze de laachdikte 1,38 µm wie.
Particle grutte ferdieling (A) en pore grutte distribúsje (B) fan bleate silika dieltsjes en ligand-bound silica dieltsjes.
De poargrutte, poarvolumint en oerflak fan 'e silika-dieltsjes fan' e hjoeddeistige stúdzje wurde jûn yn tabel 1(B). De PSD-profilen fan bleate silika-dieltsjes en ligand-bûnte silika-dieltsjes wurde werjûn yn figuer 3(B). De resultaten binne te fergelykjen mei ús foarige stúdzje. 69 nei gemyske modifikaasje, lykas werjûn yn Tabel 1 (B), en de feroaring fan 'e kromme wurdt werjûn yn Fig. 3 (B). Likemin is it poarvolume fan 'e silika-dieltsjes ôfnommen fan 0,67 nei 0,58 cm3 / g nei gemyske modifikaasje. steat 1 (B), it oerflak (m2 / g) fan de silica dieltsjes ek ôfnommen út 116 m2 / g oan 105 m2 / g nei gemyske modifikaasje.
De resultaten fan elemintêre analyze fan de stasjonêre faze wurde werjûn yn Tabel 2. De koalstof laden fan de hjoeddeiske stasjonêre faze is 6,35%, dat is leger as de koalstof lading fan ús foarige stúdzje (polystyrene bonded silica dieltsjes, respektivelik 7,93% 35 en 10,21%, respektivelik) 42. De koalstof laden fan de hjoeddeiske stasjonêre faze, Om't SP is leech yn 'e aktuele stasjonêre faze, om't de tarieding fan' e aktuele stasjonêre faze. phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) en 4-hydroxy-TEMPO waarden brûkt.It stikstofgewicht persintaazje fan de hjoeddeiske stasjonêre faze is 2,21%, yn ferliking mei 0,1735 en 0,85% oan gewicht stikstof yn eardere ûndersiken, respektivelik. s fan produkten (4) en (5) wiene respektivelik 2,7% en 2,9%, wylst de koalstof laden fan it definitive produkt (6) wie 6,35%, lykas werjûn yn Tabel 2. It gewicht ferlies waard kontrolearre mei PMP stasjonêre faze, en de TGA kromme wurdt werjûn yn figuer 4. De TGA kromme toant in gewicht ferlies fan 8 yn 6%, om't allinnich it laden fan 8% en 5% befetsje karbon. mar ek N, O en H.
De phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand waard keazen foar oerflak modifikaasje fan silica dieltsjes omdat it hat polêre phenylmaleimide groepen en vinylisocyanate groepen. Vinyl isocyanate groepen kinne fierder reagearje mei styreen troch libbene radikale polymerization. ylmaleimide-groep hat gjin firtuele lading by normale pH. De polariteit fan 'e stasjonêre faze kin wurde regele troch de optimale hoemannichte styreen en de reaksjetiid fan frije radikale polymerisaasje. De lêste stap fan 'e reaksje (frije radikale polymerisaasje) is kritysk en kin de polariteit fan 'e stasjonêre faze feroarje. Elemintêre analyze waard útfierd om de koalbelading fan dizze stasjonêre faze te kontrolearjen en de tanimmende koalstofreaksje fan dizze stasjonêre faze en de tanimmende koalstofreaksje fan dizze stasjonêre faze en vize wie it ferheegjen fan 'e koalstofreaksje fan' e stasjonêre faze. versa.SPs taret mei ferskillende konsintraasjes fan styreen hawwe ferskillende koalstof ladingen. Wer, laden dizze stasjonêre fazen yn RVS kolommen en kontrolearje harren chromatography prestaasjes (selektiviteit, resolúsje, N wearde, ensfh). Op grûn fan dizze eksperiminten, in optimalisearre formulearring waard selektearre foar it tarieden fan de PMP stasjonêre faze te garandearjen kontrolearre polariteit en goede analyte fêsthâlden.
Fiif peptidemengsels (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) waarden ek evaluearre mei in PMP-kolom mei in mobile faze;60/40 (v/v) acetonitril/wetter (0,1% TFA) by in trochstreaming fan 80 μL/min. Under optimale elueringsbetingsten is it teoretyske plaatnûmer (N) per kolom (100 × 1,8 mm id) 20.000 ± 100 (200.000 ± 100 (200.000 m² T-wearde foar de P-platen) en N-platen de trije MP's. chromatograms wurde werjûn yn figuer 5A. Fast analyze op in PMP kolom by hege trochstreaming rate (700 μL / min), fiif peptiden waarden eluted binnen ien minút, N wearden wiene hiel goed, 13.500 ± 330 per kolom (100 × 1.8 mm id), komt oerien mei 5 platen 03d identyk, 0/15 platen. (100 × 1,8 mm id) waarden ynpakt mei trije ferskillende lotten fan PMP stasjonêre faze te kontrolearjen reproducibility.The analyt konsintraasje foar eltse kolom waard opnommen mei help fan de optimale elution betingsten en it oantal teoretyske platen N en retinsje tiid te skieden deselde test mingsel op eltse kolom. .
Skieding fan peptide mingsel op PMP kolom (B) en Ascentis Express RP-Amide kolom (A);mobile faze 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), PMP kolom ôfmjittings (100 × 1,8 mm id);analytysk De eluaasje folchoarder fan de ferbiningen: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) en 5 (leucine) acid enkephalin)).
In PMP kolom (100 × 1.8 mm id) waard evaluearre foar skieding fan tryptic digests fan minsklik serum albumine yn hege prestaasjes floeistof chromatography.The chromatogram yn figuer 6 lit sjen dat de stekproef is goed skieden en de resolúsje is hiel goed. Lykas werjûn yn it chromatogram (figuer 6), is de HSA-fersmoarging opdield yn 17 peaks dy't oerienkomme mei 17 peptiden.
In tryptyske digest fan HSA (100 × 1.8 mm id) waard skieden op in PMP-kolom;flow rate (100 µL / min), mobile faze 60/40 acetonitril / wetter mei 0,1% TFA.
dêr't L is de kolom lingte, η is de viscosity fan 'e mobile faze, ΔP is de kolom werom druk, en u is de lineêre snelheid fan' e mobile faze. De permeability fan 'e PMP kolom wie 2,5 × 10-14 m2, de trochstreaming wie 25 μL / min, en 60/40 v / v ACN / wetter waard brûkt 60/40 v / v ACN / wetter. wie fergelykber mei dy fan ús foarige stúdzje Ref.34.De permeabiliteit fan 'e kolom fol mei oerflakkich poreuze dieltsjes is: 1,7 × 10-15 foar 1,3 μm dieltsjes, 3,1 × 10-15 foar 1,7 μm dieltsjes, 5,2 × 10-15 en 102 m foar 5,2 × 10-15 en 102 m foar μ 5-5 m. μm dieltsjes 43.Dêrom is de permeabiliteit fan 'e PMP faze fergelykber mei dy fan 5 μm kearn-shell dieltsjes.
dêr't Wx is it gewicht fan 'e kolom ynpakt mei chloroform, Wy is it gewicht fan' e kolom ynpakt mei methanol, en ρ is de tichtheid fan it oplosmiddel. Tichtheden fan methanol (ρ = 0,7866) en chloroform (ρ = 1,484). s 31 dat wy earder studearre wiene 0,63 en 0,55, respektivelik. Dit betsjut dat de oanwêzigens fan urea ligands ferminderet de permeability fan de stasjonêre faze. Oan 'e oare kant, de totale porosity fan' e PMP kolom (100 × 1,8 mm id) is 0,60. De permeabiliteit fan PMP kolommen-type is leger as dat C1-kolommen stasjon is ferpakt mei C8-kolommen. ary fazen de C18 liganden binne hechte oan de silika dieltsjes as lineêre keatlingen, wylst yn polystyrene-type stasjonêre fazen, de A relatyf dikke polymeer laach wurdt foarme om it.Yn in typysk eksperimint, de kolom porosity wurdt berekkene as:
Figure 7A,B toant de PMP-kolom (100 × 1.8 mm id) en Ascentis Express RP-Amide-kolom (100 × 1.8 mm id) mei deselde elueringsbetingsten (dus 60/40 ACN / H2O en 0.1% TFA).) fan it perseel van Deemter.Selekteare peptidemengsels (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) waarden taret yn 20 µL/ De minimale streamsnelheid foar beide kolommen is 800 µL/min. is Express RP-Amide kolom wiene 2,6 µm en 3,9 µm, respektivelik. nei ús foarige stúdzje.De hegere skiedingseffisjinsje fan 'e PMP-kolom (100 × 1.8 mm id) yn ferliking mei de Ascentis Express RP-Amide-kolom is basearre op ferbetteringen yn partikelfoarm, grutte en komplekse kolompakketprosedueres dy't brûkt wurde yn it hjoeddeiske wurk34.
(A) van Deemter plot (HETP fersus mobile faze lineêre snelheid) krigen mei help fan in PMP kolom (100 × 1,8 mm id) yn 60/40 ACN / H2O mei 0,1% TFA. (B) van Deemter plot (HETP fersus mobile faze lineêre snelheid) krigen mei help fan in Ascentis Express RP-00 amid 4 yn / 000 mm / CN kolom (A100 mm 4 yn / CN / 2 yn. mei 0,1% TFA.
In polar-ynbêde polystyrene stasjonêre faze waard taret en evaluearre foar skieding fan syntetyske peptide mingsels en trypsin digests fan minsklik serum albumine (HAS) yn hege prestaasjes floeistof chromatography. dieltsjes, kontrolearre synteze fan de stasjonêre faze, en komplekse kolom packing. Neist hege skieding effisjinsje, lege kolom werom druk by hege trochstreaming tariven is in oar foardiel fan dizze stasjonêre phase.PMP kolommen fertoane goede reproducibility en kin brûkt wurde foar de analyze fan peptide mingselen en trypsin spiisfertarring fan ferskate aaiwiten. , PMP-kolommen sille ek wurde evaluearre foar de skieding fan aaiwiten en monoklonale antykladen.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Undersyk nei Peptide Separation Systems troch Reversed Phase Chromatography Diel I: Untwikkeling fan in Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Ferbettere aktive peptiden ûntworpen foar de behanneling fan ynfeksjesykten.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) hjoed, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.120.09 (120.09).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
Liu, W. et al. Avansearre floeibere chromatografy-massaspektrometry makket it opnimmen fan breed rjochte metabolomics en proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ De rol fan UHPLC yn drug ûntwikkeling.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamental en praktyske aspekten fan ultrahege druk floeistof chromatography foar flugge ôfskieding.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Applikaasje fan ultra-hege prestaasjes floeistofchromatografy yn medisynûntwikkeling.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolithic macroporous hydrogels taret út oalje-yn-wetter hege ynterne faze emulsjes foar effisjinte suvering fan enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA De rol fan floeibere chromatografy yn proteomics.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Emerging trends in reversed-phase liquid chromatography separations of therapeutic peptides and proteins: theory and applications.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Twadimensjonale skieding fan peptiden mei in RP-RP-HPLC-systeem mei ferskate pH-wearden yn 'e earste en twadde skiedingsdimensjes.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.De massa oerdracht skaaimerken en kinetic prestaasjes fan hege-effisjinsje chromatography kolommen ynpakt mei C18 sub-2 μm folslein en oerflakkich poreuze dieltsjes waarden ûndersocht.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Resinte trends en analytyske útdagings yn it isolemint, identifikaasje en falidaasje fan plant bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-x018-28).
Mueller, JB et al. It proteomyske lânskip fan it keninkryk fan it libben. Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Downstream ferwurking fan therapeutyske peptiden troch preparative floeistofchromatografy. Molecule (Basel, Switserlân) 26 (15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography en syn tapassing oan biopolymers.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Liganden foar mingd-modus protein chromatography: prinsipe, karakterisaasje, en design.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).