Go raibh maith agat as cuairt a thabhairt ar Nature.com.Tá tacaíocht teoranta ag an leagan brabhsálaí atá in úsáid agat do CSS. Chun an taithí is fearr a fháil, molaimid duit brabhsálaí nuashonraithe a úsáid (nó modh comhoiriúnachta a mhúchadh in Internet Explorer). Idir an dá linn, chun tacaíocht leanúnach a chinntiú, taispeánfaimid an suíomh gan stíleanna agus JavaScript.
Ullmhaíodh cáithníní shilice scagach trí mhodh sol-ghlóthach le roinnt modhnuithe chun cáithníní macraporous a fháil.Díorthaigh na cáithníní seo trí pholaiméiriú aistrithe slabhra ilroinnt inchúlaithe inchúlaithe (RAFT) le N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) agus stiréine a ullmhú N-phenylmaleimide intercalation of polaistiréin (PMPs) 1 céim-bore cruach dhosmálta. pacáilte ag sciodair pacáil.Evaluated PMP scaradh colún de mheascán peptide comhdhéanta de chúig peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) crómatagrafaíochta feidhmíochta) agus trypsin díleácha de peptide-táirgí comhrimh an t-albam eptidine is fearr is féidir é an t-albam eptide réiteach eptidine). chomh hard le 280,000 pláta / m². Ag comparáid idir feidhmíocht idirscartha an cholúin fhorbartha leis an gcolún tráchtála Ascentis Express RP-Amide, tugadh faoi deara go raibh feidhmíocht deighilte an cholúin PMP níos fearr ná an colún tráchtála i dtéarmaí éifeachtúlachta deighilte agus réitigh.
Le blianta beaga anuas, tá an tionscal bithchógaisíochta bheith ina mhargadh domhanda atá ag leathnú le méadú suntasach ar share.With an fás pléascach ar an tionscal bithchógaisíochta1,2,3, an anailís ar peptides agus próitéiní an-inmhianaithe. Chomh maith leis an sprioc peptide, eisíontais éagsúla a ghintear le linn sintéis peptide, rud a éilíonn íonú crómatagrafach a fháil íonú peptides comhlacht próitéiní agus cealla atá ag teastáil, an anailís peptides agus próitéiní. tasc dúshlánach mar gheall ar an líon mór de speicis inbhraite i sampla amháin.Although mais-speictriméadracht uirlis éifeachtach do seicheamhú peptide agus próitéin, má tá samplaí den sórt sin a instealladh isteach sa mais-speictriméadar i pas amháin, ní bheidh an scaradh ideal.Is féidir an fhadhb a mhaolú trí idirscarthaí crómatagrafaíocht leachtach (LC) a chur i bhfeidhm roimh anailís MS, a laghdóidh líon na n-anailís mhéadaithe, ag dul isteach i mais-speictriméadar, ag dul isteach sa leacht-ama, ag dul isteach i gcéim analytes.6. is féidir alytes a dhíriú ar réigiúin chúnga, ag díriú ar na hanailítí sin agus ag feabhsú íogaireacht braite MS.
Úsáidtear crómatagrafaíocht leachtach droim ar ais (RP-LC) go forleathan le haghaidh íonú agus scaradh meascáin pheptíde ag baint úsáide as shilice octadeicile-mhodhnaithe (ODS) mar an chéim stad11,12,13. Mar sin féin, ní sholáthraíonn céimeanna stad RP scaradh sásúil peiptídí agus próitéiní mar gheall ar a struchtúr casta agus nádúr amphiphilic 14,15 agus tá 14,15 peptide speisialta deartha le próisis anailíse agus próitéití polaiméire. Is féidir le crómatagrafaíocht mód measctha, a sholáthraíonn idirghníomhaíochtaí ilmhódacha, idirghníomhú leis na hanailítí seo agus iad a choinneáil, mar mhalairt ar RP-LC chun peiptídí, próitéiní, agus meascáin choimpléascacha eile a dheighilt. Ullmhaíodh roinnt céimeanna seasta de mhodh measctha, agus úsáideadh colúin atá pacáilte leis na céimeanna seo le haghaidh peptide, 197 Próitéin, agus le haghaidh peptide, stáisiún 197 céim-módúil agus deighilte. s (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, intercalation polar/RPLC) oiriúnach do dheighiltí peptide agus próitéine mar gheall ar láithreacht na ngrúpaí polacha agus neamhpholacha22,23,24,25,26,27,28. Mar an gcéanna, léiríonn céimeanna seasta idirghlúine polaraitheacha le grúpaí polaraithe nasctha go comhfhiúsach le haghaidh idirghníomhaithe cumhachta agus neamhpholacha mar idirghníomhú uathúil agus idirghníomhú polaraithe. céim aire.Idirghníomhaíochtaí ilmhódacha 29, 30, 31, 32. Le déanaí, Zhang et al.D'ullmhaigh 30 céim stad polyamine dodecyl-fhoirceannadh agus scartha go rathúil hidreacarbóin, frithdhúlagráin, flavonoids, nucleosides, estrogens, agus analytes go leor eile.Tá an intercalator Polar idir grúpaí polacha agus neamh-polar, ionas gur féidir é a úsáid chun peptides agus próitéiní a scaradh go bhfuil an dá hidreafóbach agus hydrophilic moieties (colúnaí-colún-1) amed tráchtála C. ar fáil go ly faoin ainm trádála colúin Ascentis Express RP-Amide, ach úsáidtear na colúin seo chun anailís a dhéanamh ar aimín 33 amháin.
Sa staidéar reatha, ullmhaíodh agus rinneadh measúnú ar chéim stad Polar-leabaithe (polaistiréin neadaithe N-phenylmaleimide) le haghaidh scaradh na peptides agus trypsin díleáite HSA.The céim stadach ag baint úsáide as an straitéis seo a leanas. Ullmhaíodh cáithníní shilice porous de réir an nós imeachta a tugadh inár bhfoilseachán roimhe seo le roinnt modhnuithe ar an bprótacal ullmhúcháin. An cóimheas idir aigéad úiréolach glycyol a ullmhú, aigéad úiréatól a ullmhú, aigéad úiré-sileacile a ullmhú. le méid pore mór.Second, ligand nua, isocyanate vinil phenylmaleimide-meitile, a shintéisiú agus a úsáid chun derivatize cáithníní shilice a ullmhú Polar leabaithe stáiseanóireacht phacáistíocht phase.The mar thoradh air a phacáil isteach i gcolún cruach dhosmálta (100 × 1.8 mm id) ag baint úsáide as an pacála optamaithe. Tá an pacáil colún comhdhéanta de creathadh colún meicniúil pacáiste comhdhéanta de chreathadh homopeptide E. áirítear cúig peptides;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) agus díleá Trypsin de serum albaimin daonna (HAS). Breathnaíodh an meascán peptide agus díolama trypsin HSA a scaradh le dea-taifeach agus éifeachtacht. Rinneadh comparáid idir an fheidhmíocht deighilte na peptides próitéine-am agus PMP.B. Chonacthas go raibh réiteach maith agus éifeachtúil ar an gcolún PMP, a bhí níos éifeachtaí ná an colún Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polaitiléin Glycol), Úiré, Aigéad Aicéiteach, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Séiream Daonna Albumin (HSA), Clóiríd Amóiniam, Úiré, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Clóiríd Methacryloyl (MC), Styrene, Peirocsaíd-Binsil-HP, Steréin, 4-Binsil-Binsile tonitrile (ACN), Meatánól, 2-Propanol, agus Aicéatón Ceannaithe ó Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAM).
Corraíodh meascán úiré (8 g), glycol poileitiléin (8 g), agus 8 ml d'aigéad aicéiteach 0.01 N ar feadh 10 nóiméad, agus ansin cuireadh 24 ml de TMOS leis faoi choinníollacha fuara oighir. ag 70°C ar feadh 12 uair an chloig.Ba é an mais bhog thriomaithe a bheith meilte in oigheann agus cailcínithe ag 550°C ar feadh 12 uair an chloig. Ullmhaíodh trí bhaisc agus saintréith iad chun in-atáirgtheacht a scrúdú i méid na gcáithníní, i méid pore agus i achar dromchla.
Trí mhodhnú dromchla na gcáithníní silica le ligand feinilmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) réamh-shintéisithe agus polaiméiriú gathacha le styrene, ullmhaíodh cumaisc ina bhfuil grúpa polar.Céim stáiseanóireachta le haghaidh comhiomláin agus slabhraí polaistiréin. Déantar cur síos ar an bpróiseas ullmhúcháin thíos.
Tuaslagadh N-feinilmaleimide (200 mg) agus isocyanáit vinil meitile (100 mg) i tolúéin tirim, agus cuireadh 0.1 ml de 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) leis an bhfleascán imoibriúcháin chun copolymer isocyanáit vinile meitile-meitile (100 mg) a ullmhú ar feadh 4 uair an chloig scagtha, agus 3 uair an chloig scagtha san oigheann C. °C ar feadh 3 huaire.
Scaipeadh cáithníní shilice triomaithe (2 g) i tolúéin thirim (100 mL), stir agus sonicated i bhfleascán bun cruinn 500 ml ar feadh 10 nóiméad. , tuaslagadh cáithníní PMCP-nasctha shilice (100 g) i tolúéin (200 ml) agus cuireadh 4-hiodrocsa-TEMPO (2 mL) i láthair 100 µL de dibutyltin dilaurate mar chatalaíoch. Corraíodh an meascán ag 50 ° C ar feadh 8 n-uaire, scagadh agus triomú ag 3 uair an chloig.
Scaipeadh Styrene (1 mL), sárocsaíd benzoile BPO (0.5 mL), agus cáithníní shilice ceangailte TEMPO-PMCP (1.5 g) i tolúéin agus glanadh iad le nítrigin.Rinneadh polaiméiriú stiréine ag 100 ° C ar feadh 12 uair an chloig. Nigh an táirge mar thoradh air sin le meatánól agus triomaíodh é i bhfigiúr .60 ° C san imoibriú iomlán thar oíche.
Rinneadh na samplaí a dhíspreagadh ag 393 K ar feadh 1 uair an chloig chun brú iarmharach de níos lú ná 10-3 TORR a fháil. Baineadh úsáid as méid N2 asaithe ag brú coibhneasta P/P0 = 0.99 chun an toirt iomlán pore a chinneadh. Cuireadh cáithníní shilice -shilice) ar cholún alúmanaim ag baint úsáide as téip charbóin ghreamaitheach. Plátáladh an t -iasc ar na samplaí ag baint úsáide as cóta sputter Q150T, agus cuireadh ciseal 5 nm AU ar fáil ar na samplaí. .A Malvern (Worcestershire, an Ríocht Aontaithe) Mastersizer 2000 Baineadh úsáid as anailíseoir méid na gcáithníní chun an dáileadh méid na gcáithníní a fháil. nóiméad thar raon teochta 30 go 800 ° C.
Pacáladh colúin caol-leamh de thoisí cruach dhosmálta le líneáil ghloine (100 × 1.8 mm id) ag baint úsáide as an modh pacála sciodair, ag cur an nós imeachta céanna i bhfeidhm in Tag.31.Ceangail colún cruach dhosmálta (línithe le gloine, 100 × 1.8 mm id) le feisteas asraonta ina raibh frit 1 µm le pacálaí sciodair (Alltech Deerfield, IL, USA). Ullmhaigh sciodar céim stadach trí 150 mg de phas fosaithe a chur ar fionraí i 1.2 mL de réir mar a úsáideadh an colún sciodair chun an stóráil go maith a réiteach agus mar a úsáideadh an sciodair chun an methanol a stóráil mar réiteach. nt.Fill an colún go seicheamhach trí bhrú de 100 MP a chur i bhfeidhm ar feadh 10 nóiméad, 80 MP ar feadh 15 nóiméad, agus 60 MP ar feadh 30 nóiméad.During pacála, cuireadh tonnchrith meicniúil i bhfeidhm le dhá chroiteoir colún GC (Alltech, Deerfield, IL, SAM) chun pacáil aonfhoirmeach an columnar a chinntiú. chuig an inlet agus chuig an gcóras LC chun a fheidhmíocht a sheiceáil.
Tógadh caidéal LC (10AD Shimadzu, an tSeapáin), injector (Valco (SAM) C14 W.05) le lúb instealladh 50nL, degasser membrane (Shimadzu DGU-14A), fuinneog ribeach UV-VIS brathadóir feiste µLC speisialta (UV-2075) agus micrea-cholúin le líneáil gloine le héifeacht an-chúngaithe a íoslaghdú ar phacáistíocht. Suiteáladh aries (50 μm id 365 agus ribeadáin aontas laghdaithe (50 μm) ag asraon 1/16″ den aontas laghdaitheach. Rinneadh bailiú sonraí agus próiseáil crómatagrafach ag baint úsáide as bogearraí Multichro 2000. Monatóireacht ag 254 nm Rinneadh anailís ar ionsú UV. Rinne OramptonPro, MA anailísiú ar shonraí crómatagrafaíochta).
Albumin ó serum daonna, púdar lyophilized, ≥ 96% (leictreafóiréis glóthach agarose) 3 mg measctha le trypsin (1.5 mg), 4.0 M úiré (1 mL), agus 0.2 M décharbónáit amóiniam (1 mL). Tosaíodh an tuaslagán ar feadh 10 nóiméad agus coinníodh i ndabhach uisce ar 67 ° C ar 37,0m ar 37%, 0.1% ar 37% ± 1 ± uair an chloig T. Scag an tuaslagán agus stóráil faoi bhun 4 °C.
Rinneadh measúnú ar leithligh ar mheascáin peptide agus díleáiteanna trypsin HSA ar cholúin PMP. Seiceáil scaradh an mheascáin peptide agus díleá trypsin HSA ag an gcolún PMP agus cuir na torthaí i gcomparáid le colún Ascentis Express RP-Amide column.Tá an uimhir pláta teoiriciúil a ríomh mar seo a leanas:
Taispeántar íomhánna SEM de cháithníní shilice lom agus de cháithníní silica nasctha le ligand i bhFíor.Léiríonn íomhánna 2 .SEM de cháithníní shilice lom (A, B) go bhfuil na cáithníní seo, i gcodarsnacht lenár staidéir roimhe seo, sféarúil ina bhfuil na cáithníní fadaithe nó ina bhfuil siméadracht neamhrialta.
Scanadh íomhánna micreascóp leictreon de cháithníní shilice lom (A, B) agus de cháithníní shilice ligand-nasctha (C, D).
Léirítear i bhFíor 3(A) dáiltí méid na gcáithníní de cháithníní shilice lom agus de cháithníní shilice ligand-nasctha. Léirigh cuair dáileadh méid na gcáithníní toirt-bhunaithe gur mhéadaigh méid na gcáithníní silica tar éis modhnú ceimiceach a dhéanamh (Fíor 3A). Déantar comparáid idir sonraí dáilte mhéid na gcáithníní de na cáithníní silica ón staidéar reatha agus ón staidéar roimhe seo i dTábla 1(A). Is é an méid (0.3 atá bunaithe ar mhéid na gcáithníní), P.3 i gcomparáid le méid na gcáithníní atá bunaithe ar an toirt, P.3, P. luach ad(0.5) de 3.05 μm (cáithníní shilice faoi cheangal polaistiréin)34.Bhí dáileadh méid na gcáithníní níos cúinge ag an mbaisc seo i gcomparáid leis an staidéar a rinneamar roimhe seo mar gheall ar na cóimheasa éagsúla PEG, úiré, TMOS, agus aigéad aicéiteach sa mheascán imoibriúcháin. ciseal polaistiréin (0.97 µm) ar an dromchla shilice, ach sa chéim PMP bhí tiús na sraithe 1.38 µm.
Dáileadh méid na gcáithníní (A) agus dáileadh méid pore (B) de cháithníní shilice lom agus de cháithníní shilice faoi cheangal ligand.
Tá méid pore, toirt pore agus achar dromchla na gcáithníní silica den staidéar reatha tugtha i dTábla 1(B).Tá próifílí PSD na gcáithníní silica lom agus na gcáithníní silica nasctha le ligand le feiceáil i bhFíor 3(B).Tá na torthaí inchomparáide lenár staidéar roimhe seo. (B), agus taispeántar an t-athrú cuar i bhFíor 3(B). Mar an gcéanna, tháinig laghdú ar líon pore na gcáithníní silica ó 0.67 go 0.58 cm3/g tar éis modhnú ceimiceach. d ó 116 m2/g go 105 m2/g tar éis modhnú ceimiceach.
Taispeántar torthaí na hanailíse eiliminteach ar an gcéim sheasta i dTábla 2.Is é 6.35% an luchtú carbóin den chéim stadach atá ann faoi láthair, atá níos ísle ná an luchtú carbóin ar ár staidéar roimhe seo (cáithníní shilice atá nasctha le polaistiréin, 7.93%35 agus 10.21%, faoi seach) 42. Tá luchtú carbóin na céime stáiseanóireachta atá ann faoi láthair 6.35%, mar gheall ar ullmhúcháin reatha polaireatán agus polaireatán íseal, mar gheall ar ullmhúcháin polaireatán agus polaireatán íseal. ide-methylvinylisocyanate (PCMP) agus 4-hiodrocsa-TEMPO were used.The meáchan nítrigine faoin gcéad den chéim reatha stad 2.21%, i gcomparáid le 0.1735 agus 0.85% de réir meáchain de nítrigine i staidéir roimhe seo, faoi seach. Ciallaíonn sé seo go bhfuil an wt % de nítrigin níos airde sa chéim reatha stad mar gheall ar tháirgí phenylmaleimide agus 2. .9%, faoi seach, cé go raibh an luchtú carbóin ar an táirge deiridh (6) 6.35%, mar a thaispeántar i dTábla 2.The meáchain caillteanas a sheiceáil le PMP stáiseanóireachta céim, agus tá an cuar TGA léirithe i bhFíor 4. Léiríonn an cuar TGA meáchain caillteanas de 8.6%, a chomhaontaíonn go maith leis an luchtú carbóin (6.35, ní hamháin) toisc go bhfuil an ligand N agus H.
Roghnaíodh an ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate le haghaidh modhnú dromchla na gcáithníní shilice toisc go bhfuil sé grúpaí feinilmaleimide Polar agus grúpaí vinylisocyanate.Is féidir le grúpaí isocianáit Vinyl imoibriú a thuilleadh le styrene trí pholaiméiriú radacach beo. Is féidir ity an chéim stad a rialú ag an méid is fearr is féidir de styrene agus an t-am imoibriú polymerization radacach saor in aisce.Is é an chéim dheireanach den imoibriú (polaiméiriú saor-radacach) criticiúil agus is féidir a athrú ar an polaraíocht na n-anailís phas.Elemental Stationary chun seiceáil an luchtú carbóin de na céimeanna Stationary. lódálacha carbóin. Arís, luchtaigh na céimeanna seasta seo isteach i gcolúin chruach dhosmálta agus seiceáil a gcuid feidhmíochta crómatagrafaíochta (roghnacht, taifeach, luach N, etc.). Bunaithe ar na turgnaimh seo, roghnaíodh foirmliú optamaithe chun an chéim stad PMP a ullmhú chun polaraíocht rialaithe agus coinneáil anailíte maith a chinntiú.
Rinneadh measúnú freisin ar chúig mheascán peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ag baint úsáide as colún PMP ag baint úsáide as céim shoghluaiste;60/40 (v/v) acetonitrile/uisce (0.1% TFA) ag ráta sreafa de 80 μl/min.ner coinníollacha elution is fearr is féidir, is é an uimhir phláta teoiriciúil (n) in aghaidh an cholúin (100 × 1.8 mm ID) ná 20,000 ± 100 (200,000 pláta/m². Ráta sreafa (700 μl/min), rinneadh cúig peiptídí a ídiú laistigh de nóiméad amháin, bhí luachanna N an -mhaith, comhfhreagraíonn 13,500 ± 330 in aghaidh an cholúin (100 × 1.8 mm ID), le 135,000 pláta/m (Figiúr 5B). Coinníollacha truaillithe agus líon na bplátaí teoiriciúla n agus an t -am coinneála chun an meascán tástála céanna a dheighilt ar gach colún. Taispeántar na sonraí in -atáirgtheachta do na colúin PMP i dTábla 4. Tá in -atáirgtheacht an cholúin PMP comhghaolmhar go maith le luachanna an -íseal RSD, mar a thaispeántar i dTábla 3.
Scaradh meascán peptide ar cholún PMP (B) agus colún Ascentis Express RP-Amide (A);céim shoghluaiste 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), toisí colún PMP (100 × 1.8 mm id);Anailíseach Ord elution na gcomhdhúile: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) agus 5 (leucine) aigéad enkephalin)).
Rinneadh colún PMP (100 × 1.8 mm id) a mheas maidir le deighilt achoimrí tryptic de serum albaimin daonna i crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta. Léiríonn an crómatagram i bhFíor 6 go bhfuil an sampla scartha go maith agus go bhfuil an taifeach go han-mhaith. Rinneadh anailís ar achoimrí HSA ag baint úsáide as ráta sreafa de 100 µL/nóim, céim shoghluaiste 70/30 ace chromatagrafaíochta (táispeántar céim 70/30 ace) sa chromatagrafaíocht leacht. igure 6), tá an díleá HSA roinnte ina 17 buaic a fhreagraíonn do 17 peptides.Ríomhadh éifeachtacht deighilte gach buaic sa díolama HSA agus tugtar na luachanna i dTábla 5.
Scaradh díolama tryptic de HSA (100 × 1.8 mm id) ar cholún PMP;ráta sreafa (100 µL/nóim), céim shoghluaiste 60/40 aicéataitrile/uisce le 0.1% TFA.
nuair is é L fad an cholúin, is é η slaodacht na céime soghluaiste, is é ΔP an brú ar ais colún, agus u is é an treoluas líneach den chéim shoghluaiste. Ba é 2.5 × 10-14 m2 tréscaoilteacht an cholúin PMP, ba é an ráta sreafa ná 25 μL/min, agus baineadh úsáid as 60/40 v/v an tréscaoilteacht PMP.0 mm.0. d) a bhí cosúil leis an staidéar a rinneamar roimhe seo Ref.34.Is é tréscaoilteacht an cholúin atá pacáilte le cáithníní póiriúla superficial ná: 1.7 × 10-15 do cháithníní 1.3 μm, 3.1 × 10-15 do cháithníní 1.7 μm, 5.2 × 10-15 agus 2.5 × 15 m cáithníní le haghaidh-2.5 m. 43.Mar sin, tá tréscaoilteacht na céime PMP cosúil le cáithníní croí-bhlaosc 5 μm.
áit arb é Wx meáchan an cholúin atá pacáilte le clóraform, is é Wy meáchan an cholúin atá pacáilte le meatánól, agus is é ρ dlús an tuaslagóra.Dlúis meatánóil (ρ = 0.7866) agus clóraform (ρ = 1.484).Paireasacht iomlán na gcolún SILICA PARTICLES-C18 (1.3U × 1 agus colún C18) (1.3U × 1-C18) staidéar roimhe seo bhí 0.63 agus 0.55, faoi seach.Ciallaíonn sé seo go laghdaíonn an láithreacht ligands úiré an tréscaoilteacht an phas stáiseanóireachta.Ar an láimh eile, is é an porosity iomlán an cholúin PMP (100 × 1.8 mm id) 0.60.Tá tréscaoilteacht na colúin PMP níos ísle ná sin de na colúin-pacáilte le C18 cáithníní shilice-cineál C18-céime pacáilte le C18-cáithníní C18 céim-stáisiún ceangailte leis na cáithníní shilice mar slabhraí líneacha, agus i gcéimeanna seasta de chineál polaistiréin, tá an ciseal polaiméir sách tiubh déanta timpeall air.I dturgnamh tipiciúil, déantar an porosity colún a ríomh mar:
Taispeánann Fíor 7A,B an colún PMP (100 × 1.8 mm id) agus an colún Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ag baint úsáide as na coinníollacha elution céanna (ie, 60/40 ACN/H2O agus 0.1% TFA).) de phlota van Deemter.Ullmhaíodh meascáin pheptíde roghnaithe (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) i 20 µL/ Is é an ráta sreafa íosta don dá cholún ná 800 µL/min.Is é 800 µL/min an ráta sreafa íosta is fearr le haghaidh colún 800 µL/min. Is é an t-íosráta sreafa HETP / 8 MP an ráta sreafa íosta is fearr don cholún Colún Express RP-Amide bhí 2.6 µm agus 3.9 µm, faoi seach. Léiríonn na luachanna HETP go bhfuil an éifeachtacht deighilte an colún PMP (100 × 1.8 mm id) i bhfad níos fearr ná an cholún Ascentis Express RP-Amide atá ar fáil ar bhonn tráchtála (100 × 1.8 mm id).Léiríonn an van Deemter laghdú suntasach ar ár n-sreabhadh plota i F. Tá éifeachtacht scaradh níos airde de cholún PMP (100 × 1.8 mm id) i gcomparáid leis an gcolún Ascentis Express RP-Amide bunaithe ar fheabhsuithe ar chruth na gcáithníní, méid, agus nósanna imeachta pacála colún casta a úsáidtear san obair reatha34.
(A) plota van Deemter (treoluas líneach HETP versus céim shoghluaiste) faighte ag baint úsáide as colún PMP (100 × 1.8 mm id) i 60/40 ACN/H2O le 0.1% TFA.(B) ceap veain Deemter (HETP versus soghluaiste treoluas líneach) a fuarthas ag baint úsáide as colún Ascentis Express RP-0.0 mmd RP-0.1/4 i RP-0. /H2O le 0.1% TFA.
Ullmhaíodh céim polaistiréin leabaithe polaistiréin agus a mheas le haghaidh scaradh na meascáin peptide sintéiseacha agus trypsin albaimin serum daonna (HAS) i ardfheidhmíocht chromatography.The leacht crómatagrafaíochta ardfheidhmíochta colúin PMP do mheascáin peptide den scoth i éifeachtúlacht scaradh agus resolution.The feidhmíocht scaradh feabhsaithe na colúin PMP mar gheall ar chúiseanna éagsúla, mar shampla an méid na gcáithníní sileacain, stáisiún phacáil agus na cáithníní piorra rialaithe. Chomh maith le héifeachtacht scaradh ard, tá brú ar ais colún íseal ag rátaí sreafa arda buntáiste eile de seo stage.PMP Stationary colúin thaispeáint inatáirgtheacht maith agus is féidir a úsáid chun anailís a dhéanamh ar mheascáin peptide agus díleá trypsin próitéiní éagsúla.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Taighde ar Chórais Scartha Peiptíde trí Chrómatagrafaíocht Céim Aisiompaithe Cuid I: Prótacal Tréithrithe Colún a Fhorbairt.J.Crómatagrafaíocht.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. Peptídí gníomhacha feabhsaithe atá deartha le haghaidh cóireáil galair thógálacha.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptides teiripeacha sintéiseacha: eolaíocht agus an fhionnachtain market.drug.15 (1-2) inniu, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.09 (10.09).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ardchrómatagrafaíocht Leachtach Proteomic.J.Crómatagrafaíocht.A 1261, 78–90 (2012).
Cumasaíonn Liu, W. et al.Ardspeictriméadracht crómatagrafaíocht-mhaise leachta meitibilít agus próitéamaíocht atá spriocdhírithe go forleathan a ionchorprú.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ról UHPLC i bhforbairt drugaí.J.Meán Fómhair Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Gnéithe bunúsacha agus praiticiúla de chromatagrafaíocht leacht brú ultrahigh le haghaidh scaradh tapa.J.Meán Fómhair Sci.30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Dreoilín, SA & Tchelitcheff, P. Cur i bhfeidhm crómatagrafaíocht leachta ultra-ardfheidhmíochta i bhforbairt drugaí.J.Crómatagrafaíocht.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic hidrigéil macraporous ullmhaithe ó ola-in-uisce eibleachtaí ardchéim inmheánach chun íonú éifeachtach enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ról na crómatagrafaíochta leachta i bpróitéamaíocht.J.Crómatagrafaíocht.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Treochtaí atá ag teacht chun cinn i idirscarthaí crómatagrafaíochta leachtacha céime droim ar ais de pheptídí agus próitéiní teiripeacha: teoiric agus feidhmchláir.J.Cógaisíocht.Eolaíocht Bhithleighis.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Scaradh déthoiseach peptides ag baint úsáide as córas RP-RP-HPLC ag baint úsáide as luachanna pH éagsúla sa chéad agus sa dara toisí deighilte.J.Meán Fómhair Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Rinneadh imscrúdú ar shaintréithe aistrithe mais agus ar fheidhmíocht cinéiteach na gcolún crómatagrafaíochta ard-éifeachtúlachta atá pacáilte le C18 fo-2 μm go hiomlán agus cáithníní scagach superficial.J.Meán Fómhair Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Treochtaí le déanaí agus dúshláin anailíseacha maidir le haonrú, aithint agus bailíochtú peptides bithghníomhacha plandaí.
Mueller, JB et al.Tírdhreach próitéamaíoch ríocht na beatha.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Próiseáil iartheachtach ar pheptídí teiripeacha trí chrómatagrafaíocht leachta ullmhúcháin.Móilín (Basel, An Eilvéis) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Crómatagrafaíocht mód measctha agus a chur i bhfeidhm ar bhithpholaiméirí.J.Crómatagrafaíocht.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands do chromatagrafaíocht próitéine mód measctha: prionsabal, tréithriú, agus dearadh.J.Biteicneolaíocht.144(1), 3-11 (2009).