Go raibh maith agat as cuairt a thabhairt ar Nature.com. Tá tacaíocht theoranta do CSS sa leagan brabhsálaí atá in úsáid agat. Chun an taithí is fearr a fháil, molaimid duit brabhsálaí nuashonraithe a úsáid (nó Mód Comhoiriúnachta a dhíchumasú in Internet Explorer). Idir an dá linn, chun tacaíocht leanúnach a chinntiú, déanfaimid an suíomh a rindreáil gan stíleanna ná JavaScript.
Is planda pischineálach é Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) a úsáidtear le haghaidh táirgeadh bia agus feabhsú ithreach. Tá go leor fungas pataigineach meallta ag leathnú domhanda NLL mar bharra, lena n-áirítear antraicíneas lupine, rud is cúis leis an ngalar tubaisteach antraicíneas. Baineadh úsáid as dhá ailléil, Lanr1 agus AnMan, a thugann friotaíocht mhéadaithe, i bpórú NLL, ach níl na meicníochtaí móilíneacha bunúsacha ar eolas fós. Sa staidéar seo, baineadh úsáid as na marcóirí Lanr1 agus AnMan chun samplaí Eorpacha NLL a scagadh. Dheimhnigh tástáil an vacsaín i dtimpeallacht rialaithe éifeachtúlacht an dá dheontóir frithsheasmhach. Rinneadh próifíliú difreálach géinléirithe ar línte ionadaíocha frithsheasmhacha agus so-ghabhálacha. Bhí friotaíocht antraicíneas bainteach le ró-léiriú na dtéarmaí ontolaíochta géine “GO:0006952 Defense Response”, “GO:0055114 Redox Process”, agus “GO:0015979 Photosynthesis”. Ina theannta sin, léirigh an líne Lanr1(83A:476) athchlárú suntasach trascríptóim go tapa tar éis ionaclú, agus léirigh na línte eile moill ar an bhfreagairt seo faoi thart ar 42 uair an chloig. Tá freagairtí cosanta bainteach leis na géinte TIR-NBS, CC-NBS-LRR agus NBS-LRR, 10 bpróitéin atá bainteach le pataiginéis, próitéiní aistrithe lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, próitéiní balla cealla saibhir i glicín, agus géinte ó chonair imoibríoch ocsaigine. Tharla freagairtí luatha ar 83A:476, lena n-áirítear cosc ​​cúramach ar ghéinte a bhaineann le fótaisintéis, ag an am céanna le cosaint rathúil le linn chéim fáis fásúil na bitheolaíochta fungais, rud a thugann le fios go spreagann éifeachtóir díolúine. Tá an t-imoibriú Mandeloop moillithe, mar atá an tarraingt chothrománach foriomlán.
Is gránach ardphróitéine é an lupine caolduilleach (NLL, Lupinus angustifolius L.) a thagann ó réigiún na Meánmhara thiar1,2. Saothraítear é faoi láthair mar bharra bia d'ainmhithe agus do dhaoine. Meastar gur aoileach glas é freisin i gcórais uainíochta barr mar gheall ar shocrú nítrigine ag baictéir shiombóiseacha a shocraíonn nítrigine agus feabhas foriomlán ar struchtúr na hithreach. Tá próiseas ceansaithe tapa tagtha ar NLL le céad bliain anuas agus tá sé fós faoi bhrú mór pórúcháin3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Le saothrú forleathan NLL, d'fhorbair comharbas fungas pataigineach nideoga talmhaíochta nua agus ba chúis le galair nua a scriosann barra. Ba é an rud ba shuntasaí d’fheirmeoirí agus do phóraitheoirí lupin ná teacht chun cinn antraicnóis, arb é an fungas pataigineach, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13, ba chúis leis. Ba é an rud ba shuntasaí d’fheirmeoirí agus do phóraitheoirí lupin ná teacht chun cinn antraicnóis, arb é an fungas pataigineach, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13, ba chúis leis. próitéamaí próitéamaighnéadacha do feirmeoir agus seilge an tseilbhe Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ba é teacht chun cinn antracnóis, de bharr an fhungais phataiginigh Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13, an rud ba shuntasaí d’fheirmeoirí agus do phóraitheoirí lupine.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由痮原Nirenberg, Feiler & Hagedorn 13 saor in aisce,.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现,它是由痏原(Bonndar) 嵵Haired。1 поразительным для фермеро agus селекционерол люпина является появление антракноза, вызывамыопы грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Is é teacht chun cinn antracnóis, de bharr an fhungais phataiginigh Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13, an rud is suntasaí do fheirmeoirí agus do phóraitheoirí lupine.Tháinig na chéad tuairiscí ar an ngalar ón mBrasaíl agus ó na Stáit Aontaithe, agus bhí comharthaí tipiciúla le feiceáil i 1912 agus 1929 faoi seach. Mar sin féin, tar éis thart ar 30 bliain, ainmníodh an pataigin mar Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teileamorfach Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teileamorfach Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teileamorf de Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld i Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld i Mórfeolaíocht Spriocdhírithe. & H. Schrenk,. & H. Schrenk, .agus H. Schrenk. & H.施伦克,. & H.施伦克,.agus H. Schlenk, .Léirigh feinitíopáil réamh-ghalair a rinneadh i lár an 20ú haois roinnt friotaíochta i ngabhálacha NLL agus lupine buí (L. luteus L.), ach bhí na gabhálacha lupine bán go léir (L. albus L.) a tástáladh an-leochaileach15,16. Léirigh staidéir go bhfuil forbairt antraicnóis bainteach le méadú ar dheascadh (taise an aeir) agus teocht (sa raon 12-28°C), rud a fhágann sárú ar fhriotaíocht ag teochtaí níos airde17, 18. Déanta na fírinne, bhí an t-am a thóg sé ar chonaidí péacadh agus ar an ngalar tosú ceithre huaire níos giorra ag 24°C (4 uair an chloig) ná ag 12°C (16 uair an chloig) faoi dhálaí ard-taise19. Dá bhrí sin, tá an téamh domhanda leanúnach tar éis scaipeadh antraicnóis a bheith mar thoradh air. Mar sin féin, breathnaíodh an galar sa Fhrainc (1982) agus san Úcráin (1983) mar réamhtheachtaí ar bhagairt atá ag bagairt, ach is cosúil gur thug tionscal na lupine neamhaird air ag an am20,21. Cúpla bliain ina dhiaidh sin, scaip an galar tubaisteach seo ar fud an domhain agus chuaigh sé i bhfeidhm ar thíortha móra táirgthe lupine ar nós na hAstráile, na Polainne agus na Gearmáine22,23,24. Tar éis ráig antraicnóis i lár na 1990idí, mar thoradh ar scagthástáil fhairsing, aithníodh roinnt deontóirí frithsheasmhacha i samplaí NLL19. Rialaítear friotaíocht NLL in aghaidh antraicnóis le dhá hailéil cheannasacha ar leithligh a fhaightear i bhfoinsí éagsúla geirmphlasma: Lanr1 i gcultúr Tanjil agus Wonga agus AnMan i gcultúr Mandalay25,26. Comhlánaíonn na hailéilí seo na marcóirí móilíneacha a thacaíonn le roghnú geirmphlasma frithsheasmhach i gcláir phórúcháin25,26,27,28,29,30. Rinneadh an líne pórúcháin frithsheasmhach 83A:476 a raibh an ailléil Lanr1 inti a thrasnú leis an líne fhiáin so-ghabhálach P27255 chun daonra RIL a fháil a dheighil le haghaidh friotaíochta antraicnóise, rud a chuir ar a gcumas an lócas Lanr1 a shannadh do chrómasóm NLL-1131, 32, 33. Trí mharcóirí mapa nasctha a ailíniú ó lócais friotaíochta cliathánacha go hantraicnóise le creat géanómach, nocht NLL suíomh na dtrí ailléil ar an gcrómasóm céanna (NLL-11), ach i suíomhanna difriúla29,34,35. Mar sin féin, mar gheall ar an líon beag RILanna agus an fad géiniteach mór idir marcóirí agus ailléilí comhfhreagracha, ní féidir aon chonclúidí iontaofa a bhaint amach faoina ngéinte bunúsacha. Ar an láimh eile, tá sé deacair géineolaíocht droim ar ais a úsáid i lupins mar gheall ar a gcumas athghiniúna an-íseal, rud a fhágann go bhfuil ionramháil ghéiniteach deacair37.
Tá forbairt geirmphlasma ceansaithe a iompraíonn an ailéil inmhianaithe sa stát homaisigeach, amhail 83A:476 (Lanr1) agus Mandelup (AnMan), tar éis an doras a oscailt chun friotaíocht antracnóise a staidéar i bhfianaise láithreacht teaglaim ailléilí contrártha i ndaonraí fiáine. Féidearthachtaí meicníochtaí móilíneacha. Déan comparáid idir freagairtí cosanta a ghintear ag géinitíopaí sonracha. Rinne an staidéar seo meastóireacht ar fhreagairt luath trascríbhinne NLL ar vacsaíniú C. lupini. Ar dtús, rinneadh scagadh ar phainéal geirmphlasma NLL Eorpach ina raibh 215 líne ag baint úsáide as marcóirí móilíneacha a mharcálann na hailéilí Lanr1 agus AnMan. Rinneadh feinitíopáil antracnóise ansin ar 50 líne NLL, a roghnaíodh roimhe seo le haghaidh marcóirí móilíneacha, faoi choinníollacha rialaithe. Bunaithe ar na turgnaimh seo, roghnaíodh ceithre líne a bhí difriúil i bhfriotaíocht antracnóise agus i gcomhdhéanamh ailléilí Lanr1/AnMan le haghaidh próifíliú difreálach géinléirithe cosanta ag baint úsáide as dhá chur chuige comhlántacha: seicheamhú RNA ard-tréchuir agus cainníochtú PCR fíor-ama.
Léirigh scagadh ar shraith de gheirmphlasma NLL (N = 215) le marcóirí Lanr1 (Anseq3 agus Anseq4) agus AnMan (Anseq4) agus AnMan (AnManM1) nach ndéanann ach líne amháin (95726, in aice le Salamanca-b) an ailéil “friotaíochta” a aimpliú do na marcóirí uile, agus fuarthas cion na marcóirí uile i 158 líne (~73.5%) i “Láithreacht ailéilí ‘so-ghabhálacha’”. Tháirg trí líne déag dhá ailéil “friotacha” den mharcóir Lanr1, agus tháirg 8 líne ailéilí “friotacha” den mharcóir Lanr1. An ailéil “friotaíochta” den mharcóir AnMan (Tábla Forlíontach S1). Bhí dhá líne heitrisigeach don mharcóir Anseq3 agus ceann heitrisigeach don mharcóir AnManM1. Iompar 42 líne (19.5%) céimeanna os coinne na n-ailéilí Anseq3 agus Anseq4, rud a léiríonn minicíocht ard athchomhcheangail idir an dá lócais seo. Léirigh feinitíopaí antraicnóis faoi choinníollacha rialaithe (Tábla Forlíontach S2) éagsúlacht i bhfriotaíocht na ngéinitíopaí tástála, rud a léiríodh i ndéine antraicnóis. Bhí na difríochtaí i meánscóir idir 1.8 (friotach go measartha) agus 6.9 (so-ghabhálach) agus bhí na difríochtaí i meáchan plandaí idir 0.62 (so-ghabhálach) agus 4.45 g (friotach). Bhí comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh i ndá mhacasamhlú den turgnamh (0.51 do scóir déine galair, P = 0.00017 agus 0.61 do mheáchan plandaí, P < 0.0001) chomh maith le idir an dá pharaiméadar seo (−0.59 agus −0.77, P < 0.0001). Bhí comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh i ndá mhacasamhlú den turgnamh (0.51 do scóir déine galair, P = 0.00017 agus 0.61 do mheáchan plandaí, P < 0.0001) chomh maith le idir an dá pharaiméadar seo (−0.59 agus −0.77, P < 0.0001). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми agus двух повторностях эксперименталов (0,51 блюдаемыми болезни, P = 0,00017 agus 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (- 0, Р77, -0,57) 0,0001) 0,0001). Fuarthas comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh i ndá athrá den turgnamh (0.51 do scóir déine galair, P = 0.00017 agus 0.61 do mheáchan plandaí, P < 0.0001), chomh maith le idir an dá pharaiméadar seo (- 0.59 agus -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之 在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评. 0.00017, 植物重量为0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P <0.0001)在两次 重复实验中观察的值之间存在相关性 (疾病为重程度在)分为 0.51 ， p = 0.00017 ， 植物为为 0.61 ， p <0.0001）以及两个参数之间（（（-5（和– 0.59 和– 0.59 和- 0.77, P < 0.0001). значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми agus двух повторностях (отценкаибия 0,51, P = 0,00017 agus масса растения 0,61, P <0,0001), agus между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001, 0,7070) P <0,7070) <0. Bhí comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh i ndúblach (scór déine galair 0.51, P = 0.00017 agus meáchan plandaí 0.61, P < 0.0001) agus idir an dá pharaiméadar seo (-0.59 agus -0.0001) 0.77, P<0.0001. ).I measc na ngnáth-airíonna a fheictear i bplandaí so-ghabhálacha tá lúbadh agus castacht an ghais atá cosúil le struchtúr “bogha aoire”, agus ina dhiaidh sin léasanna ubhchruthacha le sporozoites oráiste/bándearg (Fíor Fhorlíontach 1). Tá frithsheasmhacht mheasartha ag baint le haislingí Astrálacha a iompraíonn na géinte Lanr1 (83A:476 agus Tanjil) agus AnMan (Mandelup), 0.0331 agus 0.0036. Taispeánann roinnt línte a iompraíonn ailléilí “frithsheasmhacha” Lanr1 agus/nó AnMan freisin comharthaí den ghalar.
Is suimiúil gur léirigh roinnt línte NLL nach raibh aon ailéil marcóra “friotaigh” iontu ardleibhéal friotaíochta antracnóise (inchomparáide nó níos airde ná i gcás géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), amhail Boregine (luach P < 0.0001 don dá pharaiméadar), Bojar (luach P < 0.0001 don scór agus 0.001 do mheáchan plandaí) agus Daonra B-549/79b (luach P < 0.0001 don scór agus neamhshuntasach don mheáchan). Is suimiúil gur léirigh roinnt línte NLL nach raibh aon ailéil marcóra “friotaigh” iontu ardleibhéal friotaíochta antracnóise (inchomparáide nó níos airde ná i gcás géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), amhail Boregine (luach P < 0.0001 don dá pharaiméadar), Bojar (luach P < 0.0001 don scór agus 0.001 do mheáchan plandaí) agus Daonra B-549/79b (luach P < 0.0001 don scór agus neamhshuntasach don mheáchan). Интеесно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного алелеля, покиьыыь по устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или Anman), такихен, такихен, 01 Boregine, 001 для обоих параметров), Bojar (значение P < 0,0001 для оценки agus 0,001 для массы растения) agus популяции B-549е <0,0001 для оценки и незначимо для массы). Is suimiúil gur léirigh roinnt línte NLL nach raibh aon ailéil marcóra 'friotaigh' iontu ardleibhéal friotaíochta in aghaidh antracnós (inchomparáide le nó níos airde ná sin i gcás géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), amhail Boregine (luach P < 0.0001 don dá pharaiméadar), Bojar (luach P < 0.0001 le haghaidh meastóireachta agus 0.001 do mheáchan plandaí) agus daonra B-549/79b (luach P < 0.0001 le haghaidh meastóireachta agus gan a bheith suntasach maidir le meáchan).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽旎的炭疽旎的炭疽秀或AnMan 基因型相当或更高）,例如Boregine (两个参数的P值<0.0001）, Bojar) 值<得分为0.0001, 植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P值<0.0001,重量三怾杀杀杀杀杀杀杀杀杀杀 㝀 〉杀杀 㝀 㝀 Is suimiúil go léiríonn roinnt córas NLL nach bhfuil aon mharcóirí “antigineacha” acu friotaíocht chothrománach ard (comhionann le géinte Lanr1 nó AnMan nó níos airde), amhail Boregine (an dá pharaiméadar P < 0.0001), Bojar (luach P < 0.0001, meáchan plandaí 0.001) agus brú B-549/79b (luach P < 0.0001, meáchan gan suntas). Интеесно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных алелей «резистентности», покиниы по устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 agus AnMan), такие как Boregine (значение P длипе <0,0001), Bojar (значение P <0,0001, масса растения 0,001) agus популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). Is suimiúil gur léirigh roinnt línte NLL nach raibh aon ailléilí marcóra 'friotaíochta' iontu leibhéil arda friotaíochta antracnóise (inchomparáide le géinitíopaí Lanr1 nó AnMan nó níos airde ná iad), amhail Boregine (luach P don dá pharaiméadar <0.0001), Bojar (luach P < 0.0001, meáchan plandaí 0.001) agus daonra B-549/79b (luach P < 0.0001, meáchan gan suntas).Tugann an feiniméan seo le fios go bhféadfadh foinse ghéiniteach nua friotaíochta a bheith ann, rud a mhíníonn an easpa comhghaoil ​​a breathnaíodh idir géinitíopaí marcóirí agus feinitíopaí galair (luachanna P ó ~0.42 go ~0.98). Dá bhrí sin, léirigh tástáil Kolmogorov-Smirnov go raibh na sonraí ar fhriotaíocht antracnóise dáilte go garbh ar ghnáthbhealaí do scóir (luachanna P 0.25 agus 0.11) agus mais plandaí (luachanna P 0.47 agus 0.55), rud a thugann le fios go bhfuil hipitéis agam go bhfuil níos mó ailléilí ná Lanr1 agus AnMan i gceist.
Bunaithe ar thorthaí scagthástála frithsheasmhachta antraicnóis, roghnaíodh 4 líne le haghaidh anailíse trascríbhinní: 83A:476, Boregine, Mandelup, agus Daonra 22660. Rinneadh tástáil arís ar na línte seo le haghaidh friotaíochta antraics i dturgnaimh ionaclú trí sheicheamhú RNA, ar choinníoll go raibh siad mar an gcéanna leis an tástáil roimhe seo. Seo a leanas na luachanna scóir: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) agus daonra 22660 (6.11 ± 1.29).
Bhain prótacal Illumina NovaSeq 6000 meán de 40.5 péire Mread in aghaidh an tsampla amach (29.7 go 54.4 Mread) (Tábla Forlíontach S3). Bhí scóir ailínithe sa seicheamh tagartha idir 75.5% agus 88.6%. Bhí an meánchomhghaol idir sonraí comhaireamh léamha idir athróga turgnamhacha idir macasamhla bitheolaíocha idir 0.812 agus 0.997 (meán 0.959). As na 35,170 géin a ndearnadh anailís orthu, níor léirigh 2917 aon léiriú, agus bhí na 4785 géin eile léirithe ag leibhéal neamhshuntasach (meán bonn < 5). As na 35,170 géin a ndearnadh anailís orthu, níor léirigh 2917 aon léiriú, agus bhí na 4785 géin eile léirithe ag leibhéal neamhshuntasach (meán bonn < 5). Mar 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, аостальные 4785 генов экспресисыы незначительном уровне (базовое среднее <5). As na 35,170 géin a ndearnadh anailís orthu, níor léirigh 2917 aon léiriú, agus bhí na 4785 géin eile léirithe ag leibhéal neamhbhríoch (meán bonn <5).在分析的35,170, 2917个基因的表达可以忽略不计（基本平均值<5）。35,170 Mar 35 170 проанализированных генов 2917 неэкспрессировались, а остальные 4785 генов имели незелись экспрессию (базовое среднее значение <5). As na 35,170 géin a ndearnadh anailís orthu, níor léiríodh 2917 díobh agus bhí léiriú neamhbhríoch ag na 4785 géin eile (meán bonn <5).Dá bhrí sin, ba é 27,468 (78.1%) líon na ngéinte a measadh a bheith léirithe (meán bonn ≥ 5) le linn an turgnaimh (Tábla Forlíontach S4).
Ón gcéad phointe ama, d’fhreagair gach líne NLL d’ionaclú C. lupini (strain Col-08) tríd an transcriptome a athchlárú (Tábla 1), ach breathnaíodh difríochtaí suntasacha idir na línte. Dá bhrí sin, léirigh an líne friotaíochta 83A:476 (a bhfuil an géin Lanr1 inti) athchlárú suntasach transcriptome ag an gcéad phointe ama (6 hpi) le méadú 31-69 oiread ar líon na ngéinte suas agus síos scoite i gcomparáid le pointí ama eile ag an bpointe ama seo. Ina theannta sin, níor mhair an buaic seo go gairid, toisc nár fhan ach cúpla géinte athraithe go suntasach ag an dara pointe ama (12 hpi). Is suimiúil é, nár athchlárú transcripteáil chomh mór sin a rinneadh ar Boregine, a léirigh ardleibhéal friotaíochta sa tástáil grafta freisin, le linn an turgnaimh. Mar sin féin, bhí líon na ngéinte a léiríodh go difriúil (DEG) mar an gcéanna do Boregine agus 83A:476 ag 12 HPI. Léirigh Mandelup agus daonra 22660 buaicphointí DEG ag an bpointe ama deireanach (48 l/s), rud a léiríonn moill choibhneasta ar fhreagairtí cosanta.
Ós rud é gur athchlárú ollmhór transcriptome a rinneadh ar 83A:476 mar fhreagairt ar C. lupini ag 6 HPI i gcomparáid leis na línte eile go léir, bhí ~91% de na DEGanna a breathnaíodh ag an bpointe ama seo sainiúil don líneáil (Fíor 1). Mar sin féin, bhí roinnt forluí sna freagairtí luatha idir línte staidéir, toisc go raibh 68.5%, 50.9%, agus 52.6% DEG i Boregine, Mandelup, agus daonra 22660, faoi seach, ag forluí leis na cinn a fuarthas i 83A:476 ag pointí áirithe in am. Mar sin féin, ní raibh sna DEGanna seo ach cuid bheag (0.97–1.70%) de na DEGanna go léir a bhraitear faoi láthair ag baint úsáide as 83A:476. Ina theannta sin, bhí 11 DEG ó na línte uile comhtháite ag an am seo (Táblaí Forlíontacha S4-S6), lena n-áirítear comhpháirteanna coitianta de fhreagairtí cosanta plandaí: próitéin aistrithe lipid (TanjilG_32225), einsím endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), dhá phróitéin in-ionsúite struis cosúil le SAM22 (TanjilG_31528 agus TanjilG_31531), próitéin laitéis bhunúsach (TanjilG_32352), agus dhá phróitéin balla cealla struchtúracha saibhir i glicín (TanjilG_19701 agus TanjilG_19702). Bhí forluí réasúnta ard ann freisin i bhfreagairtí trascríbhinní idir 83A:476 agus Boregine ag 24 HPI (iomlán 16-38% DEG) agus idir Mandelup agus Daonra 22660 ag 48 HPI (iomlán 14-20% DEG).
Léaráid Venn a thaispeánann líon na ngéinte a léirítear go difriúil (DEG) i línte lupine caol-dhuilleogacha (NLL) a ionaclaíodh le Colletotrichum lupini (strain Col-08 a fuarthas ó pháirceanna lupine i Wierzhenice, an Pholainn, 1999). Ba iad na línte NLL a ndearnadh anailís orthu: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil Lanr1), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (frithsheasmhach go measartha, ag iompar an ailéil AnMan) agus daonra 22660 (an-so-ghabhálach). Seasann an giorrúchán hpi do uaireanta an chloig tar éis an vacsaínithe. Baineadh luachanna nialas chun an graf a shimpliú.
Rinneadh anailís ar an tsraith géinte ró-léirithe ag 6 hpi le haghaidh láithreacht fearainn chanónacha géine R (Tábla Forlíontach S7). Léirigh an staidéar seo ionduchtú trascríbhinne géinte friotaíochta clasaiceacha galair le fearainn NBS-LRR ag 83A:476 amháin. Bhí an tsraith seo comhdhéanta de ghéin TIR-NBS-LRR amháin (tanjilg_05042), cúig ghéin CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, agus tanjilg_16162), agus Ceithre ghéin NBS-LR, Tanjilg_16162), agus Ceithre NBS-LRRE (tanjilg_16162) chomh maith le Ceithre NBS-Lrr (tanjilg_16162) agus Ceithre NBS-LRR (TANJILG_16162). Tá fearainn chanónacha ag na géinte seo go léir atá eagraithe i seichimh chaomhnaithe. Chomh maith leis na géinte fearainn NBS-LRR, gníomhaíodh roinnt cínáisí RLL ag 6 hpi, eadhon ceann amháin i Boregine (TanjilG_19877), dhá cheann i Mandelup (TanjilG_07141 agus TanjilG_19877) agus i ndaonra 22660 (TanjilG_09014 agus TanjilG_10361) agus dhá cheann i 83A 27:476.
Rinneadh anailís saibhrithe Gene Ontology (GO) ar ghéinte a raibh athrú suntasach tagtha ar a léiriú mar fhreagairt ar ionaclú le C. lupini (strain Col-08) (Tábla Forlíontach S8). Ba é “freagairt chosanta GO:0006952” an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ró-léiríodh, a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líne) a raibh ard-suntasacht acu (luach P < 0.001) (Fíor 2). Ba é “freagairt chosanta GO:0006952” an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ró-léiríodh, a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líne) a raibh ard-suntasacht acu (luach P < 0.001) (Fíor 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 заыщети» который появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (2.). Ba é 'freagairt chosanta GO:0006952' an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ró-léiríodh, a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líneáil) a raibh ard-suntasacht acu (luach P < 0.001) (Fíor 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”,它出现在16个（时间×线）组合中的6个中，具有高显着性（P值<0.001）（图2）。 Is é “freagairt chosanta GO:0006952” an téarma próisis bhitheolaíoch is ionadaíche, a fheictear i 6 cinn de na 16 teaglaim (时间×线), le suntasacht ard (luach P < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Freagra Cosanta», колой 6 из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ba é 'GO:0006952 Defense Response' an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ró-léiríodh, a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líne) le suntasacht ard (luach P < 0.001) (Fíor 2).Bhí an téarma seo ró-ionadaithe ag dhá phointe ama in 83A: 476 agus Boregine (6 agus 24 hpi) agus ag pointe ama amháin i Mandelup agus Daonra 22660 (12 agus 6 hpi, faoi seach). Is toradh ionchais é seo, rud a aibhsíonn freagairt fhrithfhungach na línte frithsheasmhacha. Ina theannta sin, d’fhreagair 83A:476 do C. lupini trí ghéinte a bhaineann leis an bpléasc ocsaídiúcháin a léirítear leis an téarma “próiseas ocsaídiúcháin-laghdaithe GO:0055114” a ionduchtú go tapa, rud a léiríonn freagairt chosanta shonrach, agus léirigh Boregine freagairtí cosanta sonracha, a bhaineann leis an téarma 'GO'. :0006950 Freagairt struis”. Ghníomhaigh Daonra 22660 an freagairt friotaíochta cothrománach lena mbaineann meitibilítí tánaisteacha, rud a aibhsíonn an líon iomarcach téarmaí “GO:0016104 Próiseas bithshintéise tríteirpéine” agus “GO:0006722 Próiseas meitibileachta tríteirpéine” (baineann an dá théarma leis an tsraith chéanna géinte), agus torthaí anailíse saibhrithe téarma GO á gcur san áireamh, bhí cobhsaíocht imoibriúcháin Mandelup idir Boregine agus Daonra 22660. Ina theannta sin, áirítear an téarma GO:0015979 'fótaisintéis' agus próisis bhitheolaíocha gaolmhara eile in imoibriú luath 83A:476 (6 hpi) agus imoibriú moillithe Mandelup agus Daonra 22660.
Tá na téarmaí ointeolaíochta géine bithphróisis a roghnaíodh in anótáil géinte a léiríodh go difriúil le linn freagairtí trascríbhinne lupine caol-dhuilleogach (NLL) a ionaclaíodh le lupine antrax (strain Col-08 a fuarthas ó pháirceanna lupine i Wierzhenice, an Pholainn, i 1999) an-áibhéalacha. Seo a leanas na línte NLL a ndearnadh anailís orthu: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil homasaigeach Lanr1), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (meánfhriotaitheach, ag iompar an ailéil homasaigeach AnMan) agus daonra 22660 (so-ghabhálach).
Ós rud é gur aidhm leis an staidéar seo géinte a aithint a chuireann le friotaíocht antracnóise, rinneadh anailís ar na géinte a sannadh do na téarmaí GO “GO: 0006952 Defensive responses” agus “GO: 0055114 Redox processes” le scorphointí ós rud é go raibh meánbhunlíne ≥ 30 le líne amháin ar a laghad. × pointe in am ag comhcheangal luachanna suntasacha staitistiúla log2 (athrú fillte). Ba é 65 líon na ngéinte a chomhlíon na critéir seo do GO:0006952 agus 524 do GO:0055114.
Léirigh 83A:476 dhá bhuaic DEG a raibh an téarma GO:0006952 orthu, an chéad cheann ag 6 ghéin in aghaidh an orlaigh (64 ghéin, rialáil suas agus síos) agus an dara ceann ag 24 ghéin in aghaidh an orlaigh (15 ghéin, rialáil suas amháin). Léirigh Boregine freisin gur shroich GO:0006952 a bhuaic ag an bpointe ama céanna, ach le níos lú DEG (11 agus 8) agus gníomhachtú roghnach. Léirigh Mandeloop dhá bhuaic de GO:0006952 ag 12 agus 48 HPI, agus 12 ghéin ag an dá cheann (an chéad cheann le géinte gníomhachtaithe, agus an dara ceann le géinte coisctheacha amháin), agus bhí níos mó den bhuaicrialáil mhéadaithe ag an daonra 22660 ag 6 HPI (13 ghéin). Ba chóir a thabhairt faoi deara go raibh an cineál céanna freagartha (suas nó síos) ag 96.4% de GO:0006952 DEG sna buaicphointí seo, rud a léiríonn forluí suntasach i bhfreagairtí cosanta in ainneoin difríochtaí i líon na ngéinte atá i gceist. Is é an grúpa seichimh is mó a bhaineann leis an téarma GO:0006952 a ionchódaíonn an Próitéin Teachtaireachta a Bhaineann le Struis an Ocrais 22 (cosúil le SAM22), a bhaineann leis an gclade próitéine a bhaineann le pataiginéis (PR-10) rang 10 agus laitéis an phróitéine chroí. próitéin chosúil (cosúil le MLP) (Fíor 3). Bhí difríocht idir an dá ghrúpa i nádúr an léirithe agus i dtreo an fhreagartha. Léirigh na géinte a chódálann próitéiní cosúil le SAM22 ionduchtú comhsheasmhach agus suntasach ag pointí ama luatha (6 nó 12 hpi) agus ní raibh siad freagrach go ginearálta ag deireadh an turgnaimh (48 hpi), agus léirigh próitéiní cosúil le MLP comhordú ag 6 hpi. hpi. 83A:476 agus Mandelup ag 48 hp/in, ní raibh beagnach gach pointe sonraí eile freagrach. Ina theannta sin, lean difríochtaí i bpróifílí léirithe géinte próitéine cosúil le SAM22 athraitheacht breathnaithe i bhfriotaíocht antracnóise, toisc go raibh níos mó pointí ama ag línte níos frithsheasmhacha a spreag na géinte seo go suntasach ná géinte níos so-ghabhálaí. Léirigh géin PR-10 eile cosúil le LlR18A/B patrún léirithe an-chosúil leis an ngéin próitéine cosúil le SAM22.
Aithníodh príomhchodanna an téarma próisis bhitheolaíoch “GO:0006952 Defense Response” agus patrúin léirithe géinte iarrthóra na n-ailléilí Lanr1 agus AnMan. Léiríonn an scála Log2 luachanna log2 (athrú fillte) idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó pháirceanna lupine, Wizhenica, an Pholainn, 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le bréag) ag an bpointe ama céanna. Rinneadh anailís ar na línte lupine caoldhuilleacha seo a leanas: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil homasaigeach Lanr1), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (frithsheasmhach go measartha, ag iompar an ailéil homasaigeach AnMan), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).
Ina theannta sin, rinneadh meastóireacht ar phróifílí léirithe na ngéinte iarrthóra RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) agus AnMan (TanjilG_12861) (Fíor 3). Léirigh an ghéin TanjilG_05042 freagairt shuntasach (gníomhachtú) ag 83A:476 ag an gcéad phointe ama amháin (6 hpi), agus ní raibh TanjilG_12861 suntasach i Mandeloop ach ag dhá phointe ama: 6 hpi (síosrialáil) agus 24 hpi (6 hpi). Le.). inchoigeartaithe) ).
Ba iad na géinte ba mhó a ró-léiríodh sa téarma GO:0055114 “próiseas réadócs” ná géinte a ionchódaíonn próitéiní cíteacróim P450 agus peirocsaídáis (Fíor 4). I gcás samplaí a leithlisíodh ó 83A:476 ag 6 HPI, breathnaíodh luachanna log2 uasta nó íosta (athrú fillte) (do 86.6% de na géinte) idir plandaí ionacraithe agus rialaithe, rud a aibhsíonn an freagairt ard a bhí ag an ngéinitíopa seo ar ghnéas ionacraithe. Léirigh 83A:476 an GO: 0055114 DEG is suntasaí ag 6 hpi (503 géin), agus an chuid eile de na línte ag 48 hpi (Boregine, 31 géin; Mandelup, 85 géin; agus Daonra 22660, 78 géin)). I bhformhór na ngéinte den teaghlach GO:0055114, breathnaíodh dhá chineál freagairtí ar vacsaíniú (gníomhachtú agus cosc). Is suimiúil gur aithníodh suas le 97.6% de na DEGanna don téarma GO: 0055114 i Mandelupe ag 48 hp. Tugann na breathnuithe seo le fios, in ainneoin an scála i bhfad níos lú (i.e., líon na ngéinte réadócs sóchánaithe, 85 i gcoinne 503), go bhfuil patrún na bhfreagairtí trascríbhinne moillithe ó mandeloup ar anthracnós cosúil leis an bhfreagairt luath de 83A:476. I Boregine agus Daonra 22660, tá an cóineasú seo níos ísle ag 51.6% agus 75.6%, faoi seach.
Nochtadh patrúin léirithe phríomhchodanna théarma an phróisis bhitheolaíoch “Próiseas Redox GO:0055114”. Léiríonn an scála Log2 luachanna log2 (athrú fillte) idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó pháirceanna lupine, Wizhenica, an Pholainn, 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le bréag) ag an bpointe ama céanna. Rinneadh anailís ar na línte lupine caoldhuilleacha seo a leanas: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil homasaigeach Lanr1), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (frithsheasmhach measartha, ag iompar an ailéil homasaigeach AnMan), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).
83A:476 Áiríodh freisin i bhfreagairtí trascríbhinneamacha ar ionaclú le C. lupini (strain Col-08) tostú comhordaithe géinte a bhaineann leis an téarma GO:0015979 “fótaisintéis” agus próisis bhitheolaíocha gaolmhara eile (FIG. 5). Bhí 105 géin sa tacar GO:0015979 DEG seo a bhí faoi chois go suntasach ag 6 hpi ag 83A:476. Sa fho-thacar seo, bhí 37 géin síosrialaithe i Mandelup ag 48 HPI agus 35 ag an bpointe ama céanna sa daonra 22660, lena n-áirítear 19 DEG atá coitianta don dá ghéinitíop. Níor gníomhaíodh aon DEGanna a bhaineann leis an téarma GO: 0015979 go suntasach in aon teaglaim (líne x am).
Nochtadh patrúin léirithe phríomhchodanna téarma an phróisis bhitheolaíoch “GO:0015979 Fótaisintéis”. Léiríonn an scála Log2 luachanna log2 (athrú fillte) idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó pháirceanna lupine, Wizhenica, an Pholainn, 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le bréag) ag an bpointe ama céanna. Rinneadh anailís ar na línte lupine caoldhuilleacha seo a leanas: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil homasaigeach Lanr1), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (frithsheasmhach measartha, ag iompar an ailéil homasaigeach AnMan), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).
Bunaithe ar thorthaí anailíse difreálach ar léiriú agus is dócha go bhfuil baint aige le freagairtí cosanta i gcoinne fungas pataigineach, roghnaíodh an tacar seacht ngéin seo chun próifílí léirithe a chainníochtú trí PCR fíor-ama (Tábla Forlíontach S9).
Spreagadh an géin próitéine toimhdeach TanjilG_10657 go suntasach i ngach líne agus pointe ama a ndearnadh staidéar air i gcomparáid le plandaí rialaithe (aithrise) (Táblaí Forlíontacha S10, S11). Ina theannta sin, léirigh próifíl léirithe TanjilG_10657 treocht mhéadaitheach le linn an turgnaimh do gach líne. Léirigh daonra 22660 an íogaireacht is airde de TanjilG_10657 maidir le hionaclú le gníomhachtú 114-huaire agus an leibhéal léirithe coibhneasta is airde (4.4 ± 0.4) ag 24 HPI (Fíor 6a). Léirigh an géin próitéine PR10 LlR18A TanjilG_27015 gníomhachtú freisin ar fud gach líne agus pointe ama, le suntasacht staitistiúil ag formhór na bpointí sonraí (Fíor 6b). Cosúil le TanjilG_10657, breathnaíodh an leibhéal léirithe coibhneasta is airde de TanjilG_27015 sa daonra ionaclúite 22660 ag 24 HPI (19.5 ± 2.4). Bhí an géin endocitinase aigéad TanjilG_04706 suasrialaithe go suntasach i ngach líne agus ag gach pointe ama seachas i gcás Boregine 6 hpi (Fíor 6c). Spreagadh go láidir é ag an gcéad phointe ama (6 HPI) ag 83A:476 (faoi 10.5 uair) agus mhéadaigh sé go measartha i línte eile (faoi 6.6-7.5 uair). Le linn an turgnaimh, d'fhan léiriú TanjilG_04706 ag leibhéil chomhchosúla i 83A:476 agus Boregine, agus i Mandelup agus Daonra 22660 mhéadaigh sé go suntasach, ag baint amach luachanna réasúnta arda (5.9 ± 1.5 agus 6.2 ± 1.5, faoi seach). Léirigh an géin endoglucan-1,3-β-glucosidase-like TanjilG_23384 ardghníomhachtú ag an gcéad dá phointe ama (6 agus 12 hpi) i ngach líne seachas daonra 22660 (Fíor 6d). Breathnaíodh na leibhéil léirithe coibhneasta is airde de TanjilG_23384 ag an dara pointe ama (12 hpi) i Mandelup (2.7 ± 0.3) agus 83A:476 (1.5 ± 0.1). Ag 24 HPI, bhí léiriú TanjilG_23384 sách íseal sna línte uile a ndearnadh staidéar orthu (ó 0.04 ± 0.009 go 0.44 ± 0.12).
Próifílí léirithe géinte roghnaithe (ag) a nochtadh trí PCR cainníochtúil. Léiríonn na huimhreacha 6, 12 agus 24 uaireanta an chloig tar éis an vacsaínithe. Baineadh úsáid as na géinte LanDExH7 agus LanTUB6 le haghaidh normalúcháin agus baineadh úsáid as LanTUB6 le haghaidh calabrúcháin idirshraitheanna. Léiríonn barraí earráide an diall caighdeánach bunaithe ar thrí mhacasamhlú bitheolaíoch, agus is meán de thrí mhacasamhlú teicniúla gach ceann acu. Tá suntasacht staitistiúil na difríochtaí i leibhéil léirithe idir na plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas i 1999 ó pháirc lupin i Wierzenica, an Pholainn) agus na plandaí rialaithe (ionaclaithe bréige) marcáilte os cionn na bpointí sonraí (*luach P < 0.05, **luach P ≤ 0.01, ***luach P ≤ 0.001). Tá suntasacht staitistiúil na difríochtaí i leibhéil léirithe idir na plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas i 1999 ó pháirc lupin i Wierzenica, an Pholainn) agus na plandaí rialaithe (ionaclaithe bréige) marcáilte os cionn na bpointí sonraí (*luach P < 0.05, **luach P ≤ 0.01, ***luach P ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными ( Colletotrichum lupini, пло8 1999 г. данных (*значение P < 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). Tugtar faoi deara os cionn na bpointí sonraí (*luach P < 0.05, **luach P ≤ 0.01, ***luach P ≤ 0.001) difríochtaí suntasacha ó thaobh staitisticí de i leibhéil léirithe idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas i 1999 ó pháirc lupine i Wierzhenice, an Pholainn) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le bréag).接种（Colletotrichum Lúipín, Col-08株,1999年从波兰Wierzenica ）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数漊） 0.05, **P 值 ≤ 0.01, ***P 值 ≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini, dath-08 株, 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的羽扇获得） 和对照（秈波兰水平差异的统计学显着性标记数据点上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤) 0.001) Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамы, штамы полей люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) agus контрольными (ложно инокулированными) растенимеыми растенимеыми данных (* значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). Tugtar faoi deara os cionn na bpointí sonraí (*luach P < 0.05, **luach P ≤ 0.01, ***luach P ≤ 0.001) difríochtaí suntasacha ó thaobh staitisticí de i leibhéil léirithe idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó pháirceanna lupine i Verzhenice, an Pholainn, i 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le bréag).Seo a leanas na línte NLL a ndearnadh anailís orthu: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil homasaigeach Lanr1), Mandelup (frithsheasmhach go measartha, ag iompar an ailéil homasaigeach AnMan), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid) agus daonra 22660 (so-ghabhálach).
Léirigh an géin iarrthóra TanjilG_05042 ag an lócas Lanr1 patrún léirithe atá difriúil go mór ó na próifílí a fuarthas ó staidéir RNA-seq (Fíor 6e). Breathnaíodh gníomhachtú suntasach an ghéin seo i Mandelup agus sa daonra 22660 (suas le 39.7 agus 11.7 uair, faoi seach), rud a d’fhág go raibh leibhéil léirithe réasúnta arda ann (suas le 1.4 ± 0.14 agus 7.2 ± 1.3, faoi seach). Léirigh 83A:476 roinnt suasrialála ar an ngéin TanjilG_05042 freisin (suas le 3.8 oiread), áfach, bhí na leibhéil léirithe coibhneasta a baineadh amach (0.044 ± 0.002) níos mó ná 30 oiread níos ísle ná na leibhéil a breathnaíodh i Mandelup agus sa daonra 22660. Léirigh anailís le qPCR difríochtaí suntasacha i leibhéil léirithe idir géinitíopaí in athraithe vacsaínithe bréige (rialú), ag baint amach difríocht 58 oiread idir daonraí 22660 agus 83A:476, chomh maith le idir daonraí 22660 agus 22660. Baineadh amach difríocht dhúbailte idir Boregine agus Mandalup.
Gníomhaíodh an géin iarrthóra ag lócas AnMan, TanjilG_12861, mar fhreagairt ar an vacsaíniú i 83A:476 agus Mandelup, bhí sé neodrach sa daonra 22660, agus bhí sé síosrialaithe i Boregine (Fíor 6f). Ba é an léiriú coibhneasta den ghéin TanjilG_12861 an ceann is airde sa 83A:476 a ionacáladh (0.14±0.01). Léirigh an géin próitéine turraing teasa rang I 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 leibhéil léirithe coibhneasta níos ísle i ngach cineál agus pointe ama a ndearnadh staidéar orthu (Fíor 6g). Breathnaíodh an luach is airde ag 24 HPI sa daonra 22660 (0.14 ± 0.02, méadú ocht n-uaire mar fhreagairt ar an vacsaíniú).
Léirigh comparáid idir próifílí léirithe géine (Fíor 7) comhghaol ard idir TanjilG_10657 agus ceithre ghéin eile: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), agus TanjilG_04706 (r = 0.79). D’fhéadfadh torthaí den sórt sin comhrialáil na ngéinte seo a léiriú le linn freagairtí cosanta. Léirigh na géinte TanjilG_12861 agus TanjilG_23384 próifílí léirithe éagsúla le luachanna comhéifeacht comhghaolmhaireachta Pearson níos ísle (ó 0.08 go 0.43 agus -0.19 go 0.28, faoi seach) i gcomparáid le géinte eile.
Braitheadh ​​comhghaolta idir próifílí léirithe géine ag baint úsáide as PCR cainníochtúil. Rinneadh anailís ar na línte lupine caoldhuilleacha seo a leanas: 83A:476 (frithsheasmhach, ag iompar an ailéil homasaigeach Lanr1), Mandelup (frithsheasmhach go measartha, ag iompar an ailéil homasaigeach AnMan), Boregine (frithsheasmhach, cúlra géiniteach anaithnid), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach). Ríomhadh trí phointe ama (6, 12 agus 24 uair an chloig tar éis ionaclú), lena n-áirítear plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó pháirceanna lupine i Wierzhenice, an Pholainn, i 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le bréag). Taispeánann an scála luach chomhéifeacht comhghaolta Pearson.
Bunaithe ar shonraí a fuarthas ag 6 each-chumhacht in aghaidh an orlaigh, rinneadh WGCNA ar 9981 DEG a sainaithníodh trí phlandaí ionaclaithe agus rialaithe a chur i gcomparáid chun díriú ar fhreagairtí cosanta luatha (Tábla Forlíontach S12). Fuarthas fiche a dó mhodúl géine (braislí) le próifílí léirithe comhghaolmhara (dearfacha nó diúltacha) idir géinitíopaí agus athróga turgnamhacha. Ar an meán, bhí leibhéil léirithe géine ag dul i laghad in ord 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (sa dá athraitheach, áfach, bhí an treocht seo níos láidre i bplandaí rialaithe). Ar an meán, bhí leibhéil léirithe géine ag dul i laghad in ord 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (sa dá athraitheach, áfach, bhí an treocht seo níos láidre i bplandaí rialaithe). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22,660 (i обоих вариантаенх, антатих была сильнее у контрольных растений). Ar an meán, laghdaigh leibhéil léirithe géine san ord 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (sa dá athraitheach, áfach, bhí an treocht seo níos láidre i bplandaí rialaithe).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660的顺序下降（然而,在两种变体中,这种趋势在对照植物中更强）。平均而言，基因水平按按 83a: 476 > mandelup > boregine > daonra 22660 的顺序下降伈，在种在, 在种在（物中更）。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (однако в обоих вариантэа и обоих вариантэа сильнее у контрольных растений). Ar an meán, laghdaigh leibhéil léirithe géine sa tsraith 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (áfach, sa dá athraitheach, bhí an treocht seo níos láidre i bplandaí rialaithe).Mar thoradh ar an vacsaíniú, tháinig ardú ar léiriú géine, go háirithe i modúil 18, 19, 14, 6 agus 1 (in ord íslitheach éifeachta), rialáil dhiúltach (m.sh. modúil 9 agus 20) nó le héifeachtaí neodracha (m.sh. modúil 11, 22, 8 agus 13). Léirigh anailís saibhrithe téarmaí GO (Tábla Forlíontach S13) “Freagraí Cosanta GO: 0006952” don mhodúl ionacraithe (18) leis an ngníomhachtú uasta, lena n-áirítear géinte a ndearnadh anailís orthu le qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 agus TanjilG_27015), chomh maith le go leor modúl fótaisintéise is mó a chuir an Ionaculate faoi chois (9). Aithníodh comhchruinnitheoir Modúl 18 (Fíor 8) mar an ghéin TanjilG_26536 a ionchódaíonn an próitéin LlR18B cosúil le PR-10, agus aithníodh comhchruinnitheoir modúl 9 mar an ghéin TanjilG_28955 a ionchódaíonn an próitéin PsbQ fótachórais II. Fuarthas géin frithsheasmhachta antracnóise iarrthóra Lanr1, TanjilG_05042, i modúl 22 (Fíor 9) agus tá sé bainteach leis na téarmaí “GO:0044260 Cellular macromolecular metabolic processes” agus “GO:0006355 Transcriptional regulation, DNA templating” a iompraíonn mol TanjilG_01212. Códaíonn an ghéin fachtóir trascríobh struis teasa A-4a (HSFA4a).
Anailís líonra ualaithe ar chomhléiriú géine modúl le téarmaí próisis bhitheolaíocha ró-léirithe “GO: 0006952 Freagraí Cosanta”. Rinneadh an ceangal a shimpliú chun aird a tharraingt ar na ceithre ghéin a ndearnadh anailís orthu le qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 agus TanjilG_27015).
Anailís líonra ualaithe ar chomhléiriú géine modúil le téarma próisis bhitheolaíoch ró-léirithe “GO: 0006355: Rialáil trascríobh, teimpléadú DNA” agus géin frithsheasmhachta antracnóise iarrthóra Lanr1 TanjilG_05042 á iompar aige. Rinneadh an ceangal a shimpliú chun an ghéin TanjilG_05042 agus an ghéin lárnach TanjilG_01212 a leithlisiú.
Léirigh scagthástáil friotaíochta antraicnóis a bailíodh san Astráil go raibh formhór na gcineálacha luath-scaoilte so-ghabhálach; tá cur síos déanta ar Kalya, Coromup agus Mandelup mar chineálacha measartha frithsheasmhacha, agus tá cur síos déanta ar Wonga, Tanjil agus 83A:476 mar chineálacha an-fhriotacha26,27,31. Bhí an ailléil frithsheasmhachta céanna, ar a dtugtar Lanr1, ag Coromup agus Mandelup, ar a dtugtar AnMan10,26,39, agus thug Kalya ailléil dhifriúil, Lanr2, ar aghaidh. Mar thoradh ar scagthástáil le haghaidh friotaíochta antraicnóis sa Ghearmáin, aithníodh líne frithsheasmhach Bo7212 le hailéil iarrthóra seachas Lanr1, ar a dtugtar LanrBo36.
Léirigh ár staidéar minicíocht an-íseal (thart ar 6%) den ailéil Lanr1 sa gheirmphlasma tástála. Tá an breathnóireacht seo comhsheasmhach le torthaí scagthástála gheirmphlasma Oirthear na hEorpa ag baint úsáide as na marcóirí Anseq3 agus Anseq4, a léirigh nach bhfuil an ailéil Lanr1 i láthair ach i dhá líne Bealarúiseacha. Tugann sé seo le fios nach bhfuil an ailéil Lanr1 in úsáid go forleathan ag cláir phórúcháin áitiúla fós, murab ionann agus san Astráil, áit a bhfuil sé ar cheann de na hailéilí tábhachtacha le haghaidh pórú le cúnamh marcóra. D’fhéadfadh sé seo a bheith mar gheall ar an leibhéal níos ísle friotaíochta a sholáthraíonn an ailéil Lanr1 i ndálaí allamuigh Eorpacha i gcomparáid leis an tuarascáil Astrálach. Ina theannta sin, léirigh staidéir ar antraicnós i gceantair ardbháistí san Astráil nach mbeadh freagairtí friotaíochta arna n-idirghabháil ag an ailéil Lanr1 éifeachtach i ndálaí aimsire a fhabhraíonn fás agus forbairt thapa an phataigin19,42. Go deimhin, sa staidéar seo, breathnaíodh roinnt comharthaí antraicnós freisin i ngéinitíopaí a iompraíonn an ailéil Lanr1, rud a thugann le fios go bhféadfadh friotaíocht imeacht faoi dhálaí is fearr d’fhorbairt C. lupini. Ina theannta sin, is féidir léirmhínithe dearfacha bréagacha a fháil ar láithreacht marcóirí Anseq3 agus Anseq4, atá thart ar 1 cM ón lócas Lanr1 28,30,43.
Léirigh ár staidéar gur fhreagair 83A:476, a raibh an ailléil Lanr1 á iompar aige, d’ionaclú C. lupini le hathchlárú transcriptóim ar scála mór ag an gcéad phointe ama a ndearnadh anailís air (6 hpi), agus i Mandelup, a raibh an ailléil AnMan á iompar aige, breathnaíodh freagairtí transcriptóimeacha i bhfad níos déanaí (ó 24 go 48 hpi). Tá na hathruithe ama seo i bhfreagairtí cosanta bainteach le difríochtaí i gcomharthaí galair, rud a aibhsíonn an tábhacht a bhaineann le haitheantas luath pataiginí le haghaidh freagairt rathúil ar fhriotaíocht. Chun fíochán plandaí a ionfhabhtú, ní mór do spóir antrax dul trí roinnt céimeanna forbartha ar dhromchla an óstaigh, lena n-áirítear péacadh, deighilt cille, agus foirmiú appressorium. Is struchtúr ionfhabhtaíoch é aguisín a cheanglaíonn le dromchla an óstaigh agus a éascaíonn treá isteach i bhfíocháin an óstaigh. Dá bhrí sin, léirigh spóir C. gloeosporioides i sliocht piseanna an chéad deighilt den núicléas tar éis 75-90 nóiméad goradáin, foirmiú feadáin gheirm tar éis 90-120 nóiméad, agus cosc ​​tar éis 4 uair an chloig. Léirigh C. gloeosporioides níos mó ná 40% péacadh conidial tar éis 3 uair an chloig de ghoir agus thart ar 20% foirmiú pressors tar éis 4 uair an chloig. Léirigh an géin CAP20 de C. gloeosporioides a bhaineann le virúlacht gníomhaíocht thrascríobh i gcoinidí a fhoirmíonn eipifít tar éis 3.5 uair an chloig de ghoir i gcéir dhromchla avocado le tiúchain arda de phróitéin CAP20 tar éis 4 uair an chloig agus 46 nóiméad. Ar an gcaoi chéanna, spreagadh gníomhaíocht géinte bithshintéise melanin i C. trifolii le linn gorlainne 2 uair an chloig agus ina dhiaidh sin foirmiú appressorium tar éis 1 uair an chloig. Léirigh staidéir ar fhíocháin duille go mbíonn an chéad chosc ar sútha talún ar tugadh C. acutatum dóibh ag 8 uair an chloig in aghaidh an lae, agus go mbíonn an chéad chosc ar thrátaí ar tugadh C. coccodes dóibh ag 4 uair an chloig in aghaidh an lae48,49. Ag teacht den chuid is mó le scála ama phróiseas tógálach Colletotrichum spp. Tugann freagairtí cosanta tapa ar 83A:476 le fios go bhfuil géinte friotaíochta plandaí agus díolúine spreagtha ag éifeachtóirí (ETI) páirteach sa líne seo, agus tacaíonn freagairtí moillithe Mandelup leis an hipitéis díolúine spreagtha ag patrún móilíneach micrea-ghaolmhar (MTI) 50. Tacaíonn freagairtí luatha ar 83A: 476 agus Mandelup. Tacaíonn an forluí páirteach idir géinte suas- nó síosrialaithe i bhfreagairt mhoillithe leis an gcoincheap seo freisin, toisc go meastar go minic gur freagairt MTI luathaithe agus feabhsaithe é ETI a chríochnaíonn le bás cille cláraithe ag suíomh an ionfhabhtaithe, ar a dtugtar turraing anaifiolachtach 51,52.
Is iad formhór na ngéinte a chuirtear i leith an téarma ró-léirithe Gene Ontology GO:0006952 “Defense Response” na 11 homalóg den phróitéin teachtaireachta troscadh struis-spreagtha 22 (cosúil le SAM22) agus na seacht bpríomhphróitéin laitéis-mhaith (MLPanna). Léirigh próitéiní cosúil le 31, 34, 43 agus 423 cosúlacht seicheamhach. Léirigh géinte cosúil le SAM22 gníomhachtú suntasach a mhair níos faide, ag taispeáint leibhéil mhéadaithe friotaíochta antraicnóis (83A:476 agus Boregine). Mar sin féin, níor laghdaíodh géinte cosúil le MLP ach amháin i línte a raibh an ailéil friotaíochta iarrthóra iontu (83A:476/Lanr1 ag 6 hpi agus Mandelup/AnMan ag 24 hpi). Ba chóir a thabhairt faoi deara gur eascair na homalóga cosúil le SAM22 go léir a sainaithníodh ó chnuasach géine a shíneann thart ar 105 kb, agus gur eascair géinte cosúil le MLP ó réigiúin ar leithligh den ghéanóm. Fuarthas gníomhachtú comhordaithe géinte den sórt sin cosúil le SAM22 inár staidéar roimhe seo ar fhriotaíocht NLL in aghaidh ionaclú Diaporthetoxica, rud a thugann le fios go bhfuil baint acu le comhpháirteanna cothrománacha an fhreagartha cosanta. Tacaítear leis an gconclúid seo freisin le tuairiscí ar fhreagairt dhearfach géinte cosúil le SAM22 ar ghortú nó cóireáil le haigéad salaicileach, ionduchtóirí fungasacha, nó sárocsaíd hidrigine.
Tá sé léirithe go bhfreagraíonn géinte cosúil le MLP do strusanna éagsúla aibíteacha agus bitheacha, lena n-áirítear ionfhabhtuithe baictéaracha, víreasacha agus pataigineacha fungasacha i go leor speiceas plandaí55. Bhí treochtaí freagartha ar idirghníomhaíochtaí áirithe idir plandaí agus pataiginí idir méadú láidir (i.e., le linn ionfhabhtú cadáis le Verticillium dahliae) agus laghdú suntasach (i.e., tar éis ionfhabhtú crann úll le Alternaria spp.)56,57. Breathnaíodh síosrialáil shuntasach ar an ngéin 423 cosúil le MLP le linn cosaintí avocado ar ionfhabhtú F. niger agus le linn ionfhabhtú an chrainn úll. Is pataitíopaí úll iad Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola agus Alternaria alternata58,59. Ina theannta sin, bhí léiriú níos ísle ar ghéinte a bhaineann le friotaíocht ag calli úll a ró-léiríonn an géin 423 cosúil le MLP agus bhí siad níos so-ghabhálaí i leith ionfhabhtú fungasach59. Tar éis Fusarium oxysporum f, cuireadh cosc ​​​​ar an ngéin 423 cosúil le MLP i ngeirmplasma pónaire coitianta frithsheasmhach freisin. cn. Ionfhabhtú pónaire 60.
I measc na mbaill eile den teaghlach PR-10 a sainaithníodh inár staidéar RNA-seq bhí na géinte LlR18A agus LlR18B mar fhreagairt ar uasrialáil, chomh maith leis an ngéin uasrialaithe (1 ghéin) nó síosrialaithe (3 ghéin) don phróitéin aistrithe lipid DIR1. . Ina theannta sin, leagann WGCNA béim ar an ngéin LlR18B mar mhol sa mhodúl seo, atá an-so-ghabhálach i leith vacsaíniú agus a iompraíonn roinnt géinte freagartha cosanta. Spreagadh na géinte LlR18A agus LlR18B i nduilleoga buí lupine mar fhreagairt ar bhaictéir phataigineacha, chomh maith le gais NLL tar éis ionaclú D. toxica, agus spreag ionfhabhtú fungasach a bhfuil baint aige leis an gconair chomharthaíochta aigéad jasmonic go tapa homalóg ríse na ngéinte seo, RSOsPR10, go tapa53,61,62. Códaíonn an géin DIR1 próitéiní iompair lipid neamhshonracha atá riachtanach chun friotaíocht chórasach faighte (SAR) a thosú. Le forbairt imoibrithe cosanta, iompraítear an próitéin DIR1 ó fhócas an ionfhabhtaithe tríd an bhfleam chun SAR a spreagadh in orgáin i bhfad i gcéin. Is suimiúil gur spreagadh an géin TanjilG_02313 DIR1 go suntasach ag an gcéad phointe ama i línte 84A:476 agus Daonra 22660, ach níor fhorbair friotaíocht antracnóise go rathúil ach i líne 84A:476. D’fhéadfadh sé seo a léiriú go bhfuil roinnt fo-fheidhmiúlachtaithe ar an ngéin DIR1 in NLL, ós rud é nár fhreagair na trí homalóg eile d’ionaclú ach sa líne 83A:476 ag 6 hpi, agus gur dhírigh an freagairt seo anuas.
Inár staidéar, ba iad na comhpháirteanna is coitianta a fhreagraíonn don phróiseas bitheolaíoch ar a dtugtar “Próiseas Redox GO:0055114” ná próitéin cytochrome P450, peirocsaídáis, aigéad linólach 9S-/13S-lipoxygenase, agus 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase. Ina theannta sin, sainmhíníonn ár WGCNA an homalóg HSFA4a mar mhol a iompraíonn modúil amhail an t-iarrthóir géine friotaíochta Lanr1 TanjilG_05042. Is comhpháirt den rialáil atá ag brath ar réadox ar thrascríobh núicléach i bplandaí é HSFA4a.
Is ocsaídeoiríduchtáisí iad próitéiní cíteacróim P450 a chatalaíonn imoibrithe hiodrocsaileála atá ag brath ar NADPH agus/nó O2 i meitibileacht phríomhúil agus thánaisteach, lena n-áirítear meitibileacht xenóbhitheach, chomh maith le hormóin, aigéid shailleacha, stearóil, comhpháirteanna balla cealla, bithpholaiméirí, agus bithshintéis comhdhúile cosanta 69. Inár staidéar, laghdaíodh an athraitheacht i bhfeidhm cíteacróim P450 plandaí ó -10.6 log2 (athrú fillte) go 5.7 mar gheall ar líon mór homalóg athraithe (37) agus difríochtaí i bpatrúin freagartha idir géinte sonracha, rud a léiríonn athbhreithniú suas. . Bheadh ​​​​sé an-amhrasach sonraí RNA-seq amháin a úsáid chun feidhm bhitheolaíoch ionchasach na ngéinte NLL i sár-theaghlach próitéine chomh mór sin a shoiléiriú. Mar sin féin, is fiú a thabhairt faoi deara go bhfuil roinnt géinte cíteacróim P450 bainteach le friotaíocht mhéadaithe in aghaidh fungais nó baictéir phataigineacha, lena n-áirítear ranníocaíocht le himoibrithe ailléirgeacha 69,70,71.
Is einsímí plandaí ilfheidhmeacha iad peirocsaídáisí den Aicme III a bhfuil baint acu le raon leathan próiseas meitibileach le linn fáis agus forbartha plandaí, chomh maith le freagairt do strusanna comhshaoil ​​amhail salannacht, triomach, déine ard solais, agus ionsaí pataiginí72. Tá peirocsaídáisí páirteach in idirghníomhaíocht roinnt speiceas plandaí le Anthracis, lena n-áirítear Stylosanthes humilis agus C. gloeosporioides, Lens culinaris agus C. truncatum, Phaseolus vulgaris agus C. lindemuthianum, Cucumis sativus agus C. lagenarium73,74,75,76. Tá an freagairt an-tapa, uaireanta fiú ag 4 HPI, sula dtéann an fungas isteach i bhfíochán an phlanda73. D'fhreagair an ghéin peirocsaídáise freisin d'ionaclú D. toxica NLL. Chomh maith lena bhfeidhmeanna tipiciúla chun pléascadh ocsaídiúcháin a rialáil nó strus ocsaídiúcháin a dhíchur, is féidir le peirocsaídáisí cur isteach ar fhás pataiginí trí bhacainní fisiciúla a chruthú bunaithe ar athneartú balla cealla le linn lignúcháin, fo-aonaid nó trasnascadh comhdhúile sonracha. Is féidir an fheidhm seo a chur i leith in silico an ghéin TanjilG_03329 a ionchódaíonn peirocsaídáis anion foirmithe lignin ionchasach a bhí suasrialaithe go suntasach inár staidéar sa líne frithsheasmhach 83A:476 ag 6 HPI, ach ní i sraitheanna agus pointí ama eile nár fhreagair.
Is é 9S-/13S-lipoxygenase aigéad linólach an chéad chéim i gcosán ocsaídiúcháin bithshintéise lipidí78. Tá feidhmeanna iomadúla ag táirgí an chosáin seo i gcosaint plandaí, lena n-áirítear neartú bhalla cille trí thaiscí callóis agus peictin a fhoirmiú, agus rialáil struis ocsaídiúcháin trí speicis ocsaigine imoibríocha a tháirgeadh79,80,81,82,83. Sa staidéar seo, athraíodh léiriú aigéad linólach 9S-/13S-lipoxygenase i ngach cineál, ach sa daonra so-ghabhálach 22660, bhí uasrialáil i réim ag pointí ama éagsúla, agus i gcineálacha a bhfuil Lanr1 agus an ailéil AnMan frithsheasmhach iontu, leagann sé béim ar éagsúlú an tsraithe ocsailipin in imoibrithe antracs cosanta idir na géinitíopaí seo.
Bhí an homalóg 1-aimínicicliprópán-1-charbocsaileáit ocsaídáise (ACO) suasrialaithe go suntasach (9 ngéin) nó síosrialaithe (2 ghéin) nuair a ionaclaíodh le lupine é. Ach amháin i gcás dhá eisceacht, tharla na freagairtí seo go léir ag 6 hp. ag 83A:476. Is é an t-imoibriú einsímeach a mheánn próitéiní ACO an chéim a theorannaíonn an ráta i dtáirgeadh eitiléine agus dá bhrí sin tá sé rialaithe go mór84. Is hormón plandaí é eitiléin a bhfuil réimse rólanna aige i rialáil fhorbairt plandaí agus freagairt do dhálaí struis aibíotacha agus bitheacha. Tá ionduchtú trascríobh ACO agus gníomhachtú an chosáin chomharthaíochta eitiléine páirteach i méadú friotaíocht ríse don fhungas hemibithrófach oryzae oryzae trí tháirgeadh speiceas ocsaigine imoibríoch agus fítealexiní a rialáil. Athraíonn próiseas ionfhabhtaithe duille an-chosúil a fuarthas idir M. oryzae agus C. lupini88,89, i gcomhthéacs suasrialaithe shuntasaigh ar homalóga ACO sa líne 83A:476 a tuairiscíodh sa staidéar seo, an fhéidearthacht go mbronnfar friotaíocht in aghaidh antracnós NLL Eitiléin, céim lárnach comharthaíochta i gcosáin mhóilíneacha.
Sa staidéar seo, breathnaíodh cosc ​​mór ar go leor géinte a bhaineann le fótaisintéis ag 6 hpi i 83A:476 agus ag 48 hpi i Mandeloop agus sa daonra 22660. Tá méid agus dul chun cinn na n-athruithe seo comhréireach leis an leibhéal. Breathnaíodh friotaíocht antraicnóis sa turgnamh seo. Le déanaí, tuairiscíodh cosc ​​láidir agus luath ar thrascríbhinní a bhaineann le fótaisintéis i roinnt samhlacha d'idirghníomhaíochtaí plandaí-pataiginí, lena n-áirítear baictéir phataigineacha agus fungais. Is féidir le deifir (ó 2 HPI i roinnt idirghníomhaíochtaí) agus cosc ​​domhanda géinte a bhaineann le fótaisintéis mar fhreagairt ar ionfhabhtú díolúine plandaí a spreagadh bunaithe ar imscaradh speiceas ocsaigine imoibríoch agus a n-idirghníomhaíocht leis an gcosán aigéad salaicileach chun imoibrithe ailléirgeacha a idirghabháil 90,94.
Mar fhocal scoir, áirítear ar na meicníochtaí freagartha cosanta atá molta don líneáil is frithsheasmhaí (83A:476) aitheantas tapa pataigin ag an ngéin R (is dócha TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) agus comharthaíocht aigéad salaicileach agus eitiléine trí fhreagairt ailléirgeach, agus ansin bunú SAR fadraoin. Tacaíonn an próitéin DIR-1 le gníomh. Ba chóir a thabhairt faoi deara go bhfuil an tréimhse bithtrófach le haghaidh ionfhabhtú C. lupini an-ghearr (thart ar 2 lá), agus fás néacrótach ina dhiaidh sin95. D’fhéadfadh an t-aistriú idir na céimeanna seo a bheith bainteach le néacróis agus léiriú próitéiní in-ionduchtaithe eitiléine a fheidhmíonn mar spreagthóirí d’imoibrithe hipiríogaireachta i bplandaí óstacha. Dá bhrí sin, tá an fhuinneog ama le haghaidh gabháil rathúil C. lupini ag an gcéim bhithtrófach an-chúng. Tá athchlárú géinte a bhaineann le ocsaídiú lagaithe agus fótaisintéis a breathnaíodh i 83A:476 ag 6 hpi comhsheasmhach le dul chun cinn hífí fungasach agus fógraíonn sé forbairt freagartha cosanta rathúil ag an gcéim bhithtrófach. B’fhéidir go mbeadh moill rómhór ar fhreagairtí transcriptómach Mandelup agus dhaonra 22660 chun an fungas a ghabháil sula n-aistrítear go fás neacróiseach, áfach, b’fhéidir go bhfuil Mandelup níos éifeachtaí ná daonra 22660 toisc go gcuireann rialáil réasúnta tapa an phróitéine PR-10 friotaíocht chothrománach chun cinn.
Is cosúil gur meicníocht choitianta í ETI, arna tiomáint ag an ngéin chanónach R, le haghaidh friotaíocht pónairí in aghaidh antraicnóis. Dá bhrí sin, sa phischineálaigh mhúnla Medicago truncatula, is é an géin RCT1, ball den rang géine plandaí R TIR-NBS-LRR97, a thugann friotaíocht in aghaidh antraicnóis. Tugann an géin seo friotaíocht leathan-speictrim antraicnóis in alfalfa freisin nuair a aistrítear chuig plandaí so-ghabhálacha. Sa phónaire coiteann (P. vulgaris), tá níos mó ná dhá dhosaen géine friotaíochta antraicnóis aitheanta go dtí seo. Faightear cuid de na géinte seo i réigiúin nach bhfuil aon ghéinte canónacha R iontu, ach tá go leor eile suite ar imill na gcrómasóm a iompraíonn an braisle géine NBS-LRR, lena n-áirítear TIR-NBS-LRRs99. Dheimhnigh an staidéar SSR ar fud an ghéanóim freisin an bhaint atá ag an ngéin NBS-LRR le friotaíocht antraicnóis sa phónaire coiteann. Fuarthas an géin chanónach R freisin sa réigiún géanómach a iompraíonn an príomh-lócas friotaíochta antraicnóis i lupine bán 101.
Léiríonn ár gcuid oibre go gcosnaíonn imoibriú friotaíochta láithreach, a ghníomhaítear ag céim luath d'ionfhabhtú plandaí (tráth nach déanaí ná 12 hpi más féidir), lupine caol-dhuilleogach go héifeachtach ó antraicnós de bharr an fhungais phataiginigh Collelotrichum lupini. Ag baint úsáide as seicheamhú ard-táirgeachta, léiríomar próifílí léirithe difreálacha géinte friotaíochta antraicnóis i bplandaí NLL arna n-idirghabháil ag na géinte friotaíochta Lanr1 agus AnMan. Baineann cosaint rathúil le dearadh cúramach a dhéanamh ar na géinte do phróitéiní atá bainteach le ocsaídiúcháin-laghdaithe, fótaisintéis, agus pataiginéis laistigh d'uaireanta an chloig ó chéad teagmháil an phlanda le pataigin. Tá imoibrithe cosanta comhchosúla, ach moillithe in am, i bhfad níos lú éifeachtaí chun plandaí a chosaint ó ghalair. Tá friotaíocht antraicse arna idirghabháil ag an ngéin Lanr1 cosúil leis an ngnáthfhreagairt thapa den ghéin R (díolúine spreagtha ag éifeachtóir), agus is dóichí go soláthraíonn an géin AnMan freagairt chothrománach (díolúine spreagtha ag patrún móilíneach a bhaineann le miocróib), rud a sholáthraíonn leibhéal measartha inbhuanaitheachta.
Bhí 74 saothrán, 60 líne a fuarthas trí chrosáil nó pórú, 5 mhútan, agus 76 geirmphlasma fiáin nó bunaidh sna 215 líne NLL a úsáideadh chun scagadh a dhéanamh ar mharcóirí antraicnóis. Tháinig na línte ó 17 dtír, den chuid is mó ón bPolainn (58), ón Spáinn (47), ón nGearmáin (27), ón Astráil (26), ón Rúis (19), ón mBealarúis (7), ón Iodáil (5) agus ó línte eile ó 10 dtír. Áirítear leis an tsraith línte frithsheasmhacha tagartha freisin: 83A:476, Tanjil, Wonga a iompraíonn an ailéil Lanr1, agus Mandelup a iompraíonn an ailéil AnMan. Fuarthas na línte ó Bhonn Sonraí Acmhainní Géiniteacha Lupine na hEorpa atá á chothabháil ag Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, an Pholainn (Tábla Forlíontach S1).
Fásadh plandaí faoi choinníollacha rialaithe (tréimhse fóta 16 uair an chloig, teocht 25°C i rith an lae agus 18°C ​​san oíche). Rinneadh anailís ar dhá mhacasamhlú bitheolaíoch. Aonraíodh DNA ó dhuilleoga trí seachtaine d'aois ag baint úsáide as an DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, an Ghearmáin) de réir an phrótacail. Rinneadh measúnú ar cháilíocht agus ar thiúchan an DNA aonraithe trí mhodhanna speictreafótaiméadracha (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SAM). Rinneadh anailís ar an marcóir AnManM1 a mharcálann an géin frithsheasmhachta antracnóis AnMan (díorthaithe ó cv. Mandelup) agus na marcóirí Anseq3 agus Anseq4 a thalaíonn an géin Lanr1 (díorthaithe ó cv. Tanjil)11,26,28. Scóráladh homasigítigh don ailéil frithsheasmhach mar “1”, so-ghabhálach – mar “0”, agus heitrisigítigh – mar 0.5.
Bunaithe ar thorthaí scagthástála le haghaidh marcóirí AnManM1, AnSeq3 agus AnSeq4 agus infhaighteacht síolta le haghaidh turgnaimh leantacha deiridh, roghnaíodh 50 líne NLL le haghaidh feinitíopaíocht friotaíochta antracnóise. Rinneadh an anailís faoi dhúbailt i dteach gloine rialaithe ríomhaire le fóta-thréimhse 14 uair an chloig le raon teochta 22°C i rith an lae agus 19°C san oíche. Scríobtar na síolta (gearradh an chóta síl ar an taobh eile den suth le lann ghéar) roimh chur chun cosc ​​a chur ar shuan síolta mar gheall ar an gcóta síl a bheith ró-chrua agus chun péacadh aonfhoirmeach a chinntiú. Fásadh na plandaí i bpotaí (11 × 11 × 21 cm) le hithir steiriúil (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Vársá, an Pholainn). Rinneadh an ionaclú leis an strain Colletotrichum lupini Col-08, a fásadh i 1999 ó ghais phlandaí lupine caol-dhuilleogacha a fásadh i bpáirc i Verzhenitsa, sa Pholainn Mhór (52° 27′ 42″ T 17° 04′ 05″ O). Faigh limistéar. Saothraíodh na hiargúltaí i meán SNA ag 20° C. faoi sholas dubh ar feadh 21 lá chun spórúlú a spreagadh. Ceithre seachtaine tar éis cur, nuair a bhí na plandaí tar éis céim 4-6 dhuilleog a bhaint amach, rinneadh an ionaclú trí spraeáil le fionraí conidia ag tiúchan de 0.5 x 106 conidia in aghaidh an ml. Tar éis an ionaclú, coinníodh na plandaí sa dorchadas ar feadh 24 uair an chloig ag taise de thart ar 98% agus teocht de 25°C chun péacadh conidia agus an próiseas ionfhabhtaithe a éascú. Ansin, fásadh na plandaí faoi fhóta-thréimhse 14 uair an chloig ag 22°C i rith an lae/19°C san oíche agus 70% taise. Rinneadh an scór galair 22 lá tar éis an ionaclú agus bhí sé idir 0 (imdhíonachta) agus 9 (an-so-ghabhálach) ag brath ar láithreacht nó easpa léasanna néacrósacha ar gais agus duilleoga. Ina theannta sin, tar éis scórála, tomhaiseadh meáchan na bplandaí. Ríomhadh na caidrimh idir géinitíopaí marcóirí agus feinitíopaí galair mar chomhghaolta pointe a dó-sheicheamh (easpa marcóirí heitrisigeacha sa tsraith línte le haghaidh anailíse ar an feinitíop friotaíochta antraicnóis).