Go raibh maith agat as cuairt a thabhairt ar Nature.com.Tá tacaíocht teoranta CSS ag an leagan brabhsálaí atá in úsáid agat.Chun an taithí is fearr a fháil, molaimid duit brabhsálaí nuashonraithe a úsáid (nó Mód Comhoiriúnachta a dhíchumasú in Internet Explorer).Idir an dá linn, chun tacaíocht leanúnach a chinntiú, cuirfimid an suíomh gan stíleanna agus JavaScript.
Is planda léagúmach é Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) a úsáidtear le haghaidh táirgeadh bia agus feabhsú ithreach.Mheall leathnú domhanda NLL mar bharr go leor fungais phataigineacha, lena n-áirítear anthracnose lúipín, rud is cúis leis an ngalar tubaisteach anthracnose.Baineadh úsáid as dhá ailléil, Lanr1 agus AnMan, a thugann friotaíocht méadaithe, i pórú NLL, ach ní fios cad iad na meicníochtaí móilíneacha bunúsacha.Sa staidéar seo, úsáideadh na marcóirí Lanr1 agus AnMan chun samplaí NLL Eorpacha a scagadh.Dhearbhaigh tástáil na vacsaíne i dtimpeallacht rialaithe éifeachtúlacht an dá dheontóir frithsheasmhach.Rinneadh próifíliú difreálach ar léiriú géine ar línte ionadaíocha frithsheasmhacha agus so-ghabhálacha.Bhí baint ag friotaíocht anthracnose le ró-léiriú ar na téarmaí ontology géine “GO: 0006952 Freagra Cosanta”, “GO: 0055114 Redox Process”, agus “GO: 0015979 Photosynthesis”.Ina theannta sin, léirigh an líne Lanr1(83A:476) athchlárú suntasach trascríobh go tapa tar éis ionaclaithe, agus léirigh na línte eile moill thart ar 42 uair an chloig ar an bhfreagra seo.Tá baint ag freagairtí cosanta leis na géinte TIR-NBS, CC-NBS-LRR agus NBS-LRR, 10 próitéin a bhfuil baint acu le pathogenesis, próitéiní aistrithe lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, próitéiní balla cille saibhir i glicín, agus géinte ó chonair imoibríoch ocsaigin.Bhí freagairtí luatha ar 83A:476, lena n-áirítear géinte a bhaineann le fótaisintéis faoi chois go cúramach, ag an am céanna le cosaint rathúil le linn na céime fáis fásúla de bhitheolaíocht fhungach, rud a thugann le tuiscint go spreagann éifeachtóir imdhíonacht.Moillítear imoibriú Mandeloop, mar atá an tarraingt cothrománach foriomlán.
Is gránach ardphróitéine é an lúipín caoldhuilleogach (NLL, Lupinus angustifolius L.) de thionscnamh réigiún na Meánmhara thiar1,2.Fástar é faoi láthair mar bharr bia d’ainmhithe agus do dhaoine.Meastar freisin gur aoileach glas é i gcórais rothlaithe barr de bharr fosúchán nítrigine ag baictéir a shocraíonn nítrigine siombóiseach agus feabhas iomlán ar struchtúr na hithreach.Tá NLL tar éis dul faoi phróiseas gasta ceansaithe le céad bliain anuas agus tá sé fós faoi ardbhrú pórúcháin3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.Le saothrú forleathan NLL, d'fhorbair comharbas fungais phataigineacha nideoga nua talmhaíochta agus ba chúis le galair nua a scrios na barraí. Ba é an ceann is suntasaí d'fheirmeoirí agus póraitheoirí lúipíní cuma anthracnose, ba chúis leis an bhfungas pataigineach, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ba é an ceann is suntasaí d'fheirmeoirí agus póraitheoirí lúipíní cuma anthracnose, ba chúis leis an bhfungas pataigineach, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеро agus селекционерол люпина было появление антракноза, вызпаногения pini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ba é an rud ba shuntasaí d’fheirmeoirí agus póraitheoirí lúipíní ná teacht chun cinn antracnóis a tharla de bharr an fhungas pataigineach Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者来说, 最引人注目的是炭疽病的出现, 它是由痮的, Nikola, Co. & Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是統病原。1 поразительным для фермеро agus селекционерол люпина является появление антракноза, вызывагриононе totrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Is é an rud is suntasaí d’fheirmeoirí agus póraitheoirí lúipíní ná teacht chun cinn anthracnose de bharr an fhungas pataigineach Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Tháinig na tuairiscí is luaithe ar an ngalar ón mBrasaíl agus ó na Stáit Aontaithe, le hairíonna tipiciúla le feiceáil i 1912 agus 1929 faoi seach.Mar sin féin, tar éis thart ar 30 bliain, ainmníodh an pataigin mar Colletotrichum gloeosprioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld i Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld sa Mhoirfeolaíocht Spriocdhírithe. & H. Schrenk, . & H. Schrenk, .agus H. Schrenk. & H.施伦克,. & H.施伦克,.agus H. Schlenk, .Léirigh feinitíopáil réamh-ghalar a rinneadh i lár an 20ú haois roinnt friotaíochta in aontachais NLL agus lúipín buí (L. luteus L.), ach bhí gach aontachas bán lúipín (L. albus L.) a tástáladh an-so-ghabhálach15,16.Tá sé léirithe ag staidéir go bhfuil baint ag forbairt anthracnose le deascadh méadaithe (taise aeir) agus teocht (sa raon 12-28 ° C), rud a fhágann sárú friotaíochta ag teochtaí níos airde17, 18. Go deimhin, ba é an t-am a theastaíonn chun conidia phéacadh agus tús a chur leis an ngalar, ceithre huaire níos giorra ag 24 ° C (14 uair an chloig) ag teocht ard 24 ° C (14 uair an chloig) ná 6 uair an chloig ag 24 ° C.Dá bhrí sin, tá an téamh domhanda leanúnach mar thoradh ar scaipeadh anthracnose.Mar sin féin, breathnaíodh an galar sa Fhrainc (1982) agus san Úcráin (1983) mar rian ar bhagairt a bhí le teacht, ach de réir dealraimh níor thug tionscal lúipíní aird air ag an am20,21.Cúpla bliain ina dhiaidh sin, leathnaigh an galar millteach seo ar fud an domhain agus chuir sé isteach freisin ar mhórthíortha a tháirgeann lúipíní mar an Astráil, an Pholainn agus an Ghearmáin22,23,24.Tar éis ráig anthracnose i lár na 1990idí, aithníodh roinnt deontóirí frithsheasmhacha i samplaí NLL19 mar thoradh ar scagadh fairsing.Tá friotaíocht NLL in aghaidh anthracnose á rialú ag dhá ailléil cheannasacha ar leith a fhaightear i bhfoinsí éagsúla germplasma: Lanr1 sa shaothrachán Tanjil agus Wonga agus AnMan sa shaothrachán.Mandalay 25, 26. Comhlánaíonn na hailéil seo na marcóirí móilíneacha a thacaíonn le roghnú germplasma frithsheasmhach i gcláir phóraithe25,26,27,28,29,30.Trasnaíodh an líne póraithe frithsheasmhach 83A:476 a iompraíonn an ailléil Lanr1 leis an líne fhiáin so-ghabhálach P27255 chun daonra RIL a dheighilt don fhriotaíocht anthracnose, rud a d’fhág gur féidir lócas Lanr1 a shannadh do chrómasóim NLL-1131, 32, 33. Ailíniú an fhriotaíocht nascálaigh ar an bhfriotaíocht limfeach agus an fhriotaíocht lóchnós NLL, léirigh an creatlach nascála NLL go dtí an fhriotaíocht lóchnós. de na trí ailléilí go léir ar an gcrómasóim céanna (NLL-11), ach i suímh éagsúla29,34,35.Mar sin féin, mar gheall ar an líon beag RILanna agus an t-achar mór géiniteach idir marcóirí agus ailléilí comhfhreagracha, ní féidir aon chonclúidí iontaofa a dhéanamh maidir lena ngéinte bunúsacha.Ar an láimh eile, tá sé deacair géineolaíocht droim ar ais a úsáid i lúipíní mar gheall ar a gcumas athghiniúna an-íseal, rud a fhágann go bhfuil ionramháil ghéiniteach níos deacra37.
D'oscail forbairt germplasma ceansaithe a iompraíonn an ailléil atá ag teastáil sa stát homozygous, mar shampla 83A:476 (Lanr1) agus Mandelup (AnMan), an doras chun staidéar a dhéanamh ar fhriotaíocht anthracnose i bhfianaise na gcomhcheangail fhreasúracha d'ailéilí i ndaonraí fiáine.Féidearthachtaí meicníochtaí móilíneacha.Déan comparáid idir freagraí cosanta arna nginiúint ag géinitíopaí sonracha.Rinne an staidéar seo measúnú ar fhreagairt thrascríobhach luath NLL ar an vacsaíniú C. lupini.Ar dtús, rinneadh scagadh ar phainéal germplasma NLL Eorpach ina raibh 215 líne agus úsáid á baint as marcóirí móilíneacha a mharcálann ailléilí Lanr1 agus AnMan.Rinneadh feinitíopáil anthracnose ansin ar 50 líne NLL, a roghnaíodh roimhe seo le haghaidh marcóirí móilíneacha, faoi choinníollacha rialaithe.Bunaithe ar na turgnaimh seo, roghnaíodh ceithre líne dhifriúla i bhfriotaíocht anthracnose agus comhdhéanamh aillile Lanr1/AnMan le haghaidh próifíliú difreálach slonn cosanta ag baint úsáide as dhá chur chuige chomhlántacha: seicheamhú RNA ard-tréchur agus cainníochtú PCR fíor-ama.
Léirigh scagadh ar thacar de ghéamaplasma NLL (N = 215) le marcóirí Lanr1 (Anseq3 agus Anseq4) agus AnMan (Anseq4) agus AnMan (AnManM1) nach méadaíonn ach líne amháin (95726, in aice le Salamanca-b) an “friotaíocht” ailléil do na marcóirí go léir, agus “Láithreacht na n-eilíle go léir a aimsítear” 8 ~ 3 ~ . 5%) línte.Tháirg trí líne dhéag dhá ailléil “resistant” de mharcóir Lanr1, agus tháirg 8 líne ailléil “resistant” de Lanr1.marcóir.Ailléil “friotaíocht” mharcóir AnMan (Tábla Forlíontach S1).Bhí dhá líne heitrisigeach don mharcóir Anseq3 agus ceann heitrisigeach don mharcóir AnManM1.D'iompair 42 líne (19.5%) céimeanna urchomhaireacha na n-ailéilí Anseq3 agus Anseq4, rud a léirigh minicíocht ard athcheangail idir an dá lóic seo.Léirigh feinitíopaí anthracnose faoi choinníollacha rialaithe (Tábla Forlíontach S2) éagsúlacht i friotaíocht na géinitíopaí a ndearnadh tástáil orthu, rud a léiríodh i ndéine anthracnose.Bhí difríochtaí sna meánscóir sa raon ó 1.8 (meánfhrithsheasmhach) go 6.9 (so-ghabhálach) agus bhí difríochtaí meáchain plandaí sa raon ó 0.62 (so-ghabhálach) go 4.45 g (resistant). Bhí comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh in dhá mhacasamhlú den turgnamh (0.51 i gcás scóir déine galair, P = 0.00017 agus 0.61 maidir le meáchan plandaí, P <0.0001) agus idir an dá pharaiméadar seo (− 0.59 agus − 0.77, P <0.0001). Bhí comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh in dhá mhacasamhlú den turgnamh (0.51 i gcás scóir déine galair, P = 0.00017 agus 0.61 maidir le meáchan plandaí, P <0.0001) agus idir an dá pharaiméadar seo (− 0.59 agus − 0.77, P < 0). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми agus двух повторностях эксперименталов (0,51 бименталелова ни, P = 0,00017 agus 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,50, 0, 0, 0, 0, 7, 0, 79, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,00, -0,00, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,70, -0,00, -0. Fuarthas comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh i dhá athrá den turgnamh (0.51 le haghaidh scóir déine galair, P = 0.00017 agus 0.61 le haghaidh meáchan plandaí, P <0.0001), chomh maith le idir an dá pharaiméadar seo (- 0.59 agus -0.77, P <0.0001)1).在两次重复实验中观察到的值之 在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重疾病严重程度评.5，P10;量为0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77, P < 0.0001).在两次重复实验中观察的值之间存在相关性（疾病为重程度值在相关性疾病为重程度倈0. 1 ， p = 0.00017 ， 植物为为 0.61 ， p <0.0001） 以及两个参数之间（（（（，（（– 9–0.5咈 – 9.5–0. .59 和- 0.77，P < 0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми agus двух повторностях (отценке иценке 1 , P = 0,00017 и масса растения 0,61, P <0,0001), agus между этими двумя параметрами (-0,59 agus -0,0001) 0,707, P <0,700, P <0. Bhí comhghaol suntasach idir na luachanna a breathnaíodh i ndúblach (scór déine galair 0.51, P = 0.00017 agus meáchan plandaí 0.61, P < 0.0001) agus idir an dá pharaiméadar seo (-0.59 agus -0 .0001) 0.77, P <0.0001 ).I measc na n-airíonna tipiciúla a fheictear i bplandaí so-ghabhálacha tá feannadh agus casadh an ghais atá cosúil le struchtúr “bogha aoire”, agus loit ubhchruthacha ina dhiaidh sin le sporozoites oráiste/bándearg (Fíor Forlíontach 1).Tá aontachais na hAstráile a iompraíonn na géinte Lanr1 (83A:476 agus Tanjil) agus AnMan (Mandelup) measartha frithsheasmhach, 0.0331 agus 0.0036).Léiríonn línte áirithe a iompraíonn ailléilí “resistant” Lanr1 agus/nó AnMan freisin comharthaí an ghalair.
Is díol spéise é gur léirigh cúpla líne NLL nach raibh aon ailléil mharcála “resistant” ardleibhéal friotaíochta anthracnose acu (inchomparáide nó níos airde ná géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), mar Boregine (luach P < 0.0001 don dá pharaiméadar), Bojar (Luach P < 0.0001 don scór agus 0.001 do mheáchan an phlanda) agus scór Pob.09 < 4001 (luach Pb-5) agus scór B-401 (Pob-9) agus scór Pob. neamhshuntasach le haghaidh meáchain). Is díol spéise é gur léirigh cúpla líne NLL nach raibh aon ailléil mharcála “resistant” ardleibhéal friotaíochta anthracnose acu (inchomparáide nó níos airde ná géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), mar Boregine (luach P < 0.0001 don dá pharaiméadar), Bojar (Luach P < 0.0001 don scór agus 0.001 do mheáchan an phlanda) agus scór Pob.09 < 4001 (luach Pb-5) agus scór B-401 (Pob-9) agus scór Pob. neamhshuntasach le haghaidh meáchain). Интеесно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного алелеля, покизиы чивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine ( 0 0 чео компания параметров), Bojar (значение P < 0,0001 для оценки agus 0,001 для массы растения) agus популяции B-549/79b (значение зна 0,001 для массы растения) agus популяции B-549/79b (значение значимо для массы). Is díol suntais é gur léirigh roinnt línte NLL nach raibh aon ailléil marcóra 'resistant' ardleibhéal friotaíochta acu in aghaidh anthracnose (inchomparáide le nó níos airde ná géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), mar Boregine (luach P < 0.0001 don dá pharaiméadar ), Bojar (luach P < 0.0001 le haghaidh meastóireachta agus 0.0019 le haghaidh meastóireachta agus daonra 0.001-4) agus luach B.009 <B.4-5 do mheáchan plandaí. agus ní suntasach le haghaidh meáchain).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽秀基因型相当或更高）,例如 Boregine（两个参数的P值<0.0001）、Bojar (P 值<得备不 0), 0, 0, 0, 10和种群B-549/79b（得分P值<0.0001,重量不显着）。 Tá sé suimiúil go léiríonn roinnt córais NLL nach bhfuil aon mharcóirí “antaigineacha” acu friotaíocht ard cothrománach (comhionann le géinte Lanr1 nó AnMan nó níos airde), mar Boregine (an dá pharaiméadar P < 0.0001), Bojar (luach P < 0.0001, meáchan planda 0.001) agus brú B-549/79b, ní luach suntasach P (00). Интеесно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных алелей «резистентности», покизичи ивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 agus AnMan), такие как Boregine (значение или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обо00, зачение P для обо000, Boregine ение P <0,0001, масса растения 0,001) agus популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незнаьител). Suimiúil go leor, léirigh roinnt línte NLL easpa aon ailléilí marcála 'friotaíocht' leibhéil arda friotaíochta anthracnose (inchomparáide le nó níos airde ná géinitíopaí Lanr1 nó AnMan), mar Boregine (luach P don dá paraiméadair <0.0001), Bojar (P-luach <0.0001, meáchan plandaí 0.09,004-1,004) agus daonra <0-7,004-P. meáchan nach bhfuil suntasach).Tugann an feiniméan seo le fios go bhféadfadh foinse fhriotaíochta ghéiniteach úrscéal a bheith ann, rud a mhíníonn an easpa comhghaolmhaireachta a breathnaíodh idir géinitíopaí marcóra agus feinitíopaí galair (luachanna P ó ~0.42 go ~0.98).Mar sin, léirigh tástáil Kolmogorov-Smirnov go raibh na sonraí ar fhriotaíocht anthracnose thart ar ghnáthdháileadh le haghaidh scóir (luachanna P 0.25 agus 0.11) agus mais plandaí (P-luachanna 0.47 agus 0.55), rud a thugann le tuiscint go bhfuil hipitéis agam go bhfuil níos mó ailléilí ná Lanr1 agus AnMan i gceist.
Bunaithe ar thorthaí scagthástála friotaíochta anthracnose, roghnaíodh 4 líne le haghaidh anailís trascríobh: 83A: 476, Boregine, Mandelup, agus Daonra 22660. Rinneadh na línte seo a atriail le haghaidh friotaíochta anthracs i dturgnaimh ionaclaithe trí sheicheamh RNA, ar choinníoll go raibh siad mar an gcéanna leis an tástáil roimhe seo.Ba iad seo a leanas na scórluachanna: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) agus daonra 22660 (6.11 ± 1.29).
Bhain prótacal Illumina NovaSeq 6000 amach ar an meán de 40.5 péirí Mread in aghaidh an tsampla (29.7 go 54.4 Mreads) (Tábla Forlíontach S3).Bhí na scóir ailínithe sa seicheamh tagartha idir 75.5% agus 88.6%.Bhí raon idir 0.812 agus 0.997 (meán 0.959). As na 35,170 géin a ndearnadh anailís orthu, níor léirigh 2917 aon slonn, agus léiríodh na 4785 géin eile ag leibhéal diomaibhseach (meán meán < 5). As na 35,170 géin a ndearnadh anailís orthu, níor léirigh 2917 aon slonn, agus léiríodh na 4785 géin eile ag leibhéal diomaibhseach (meán meán < 5). Faoi 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, аостальные 4785 генов экспресниьничельныые ом уровне (базовое среднее <5). As na 35,170 géinte a ndearnadh anailís orthu, níor léirigh 2917 aon slonn, agus cuireadh na 4785 géin eile in iúl ag leibhéal diomaibhseach (meán meán <5).在分析的35,170 个基因中, 2917 个没有表达,其他4785 ）.35,170 Le 35 170 bliain d'aois базовое среднее значение <5). As na 35,170 géinte a ndearnadh anailís orthu, níor cuireadh 2917 in iúl agus bhí slonn diomaibhseach ag na 4785 géin eile (bunmheán <5).Mar sin, ba é 27,468 (78.1%) líon na ngéinte a measadh a cuireadh in iúl (bun meán ≥ 5) le linn an turgnaimh (Tábla Forlíontach S4).
Ón gcéad phointe ama, d'fhreagair gach líne NLL d'ionaclú C. lupini (strain Col-08) tríd an transcriptome (Tábla 1) a athchlárú, áfach, tugadh faoi deara difríochtaí suntasacha idir na línte.Mar sin, léirigh an líne friotaíochta 83A:476 (ag iompar géine Lanr1) athchlárú tras-chlárú suntasach ag an gcéad phointe ama (6 hpi) le méadú 31-69 huaire ar líon na ngéinte aonair suas agus síos i gcomparáid le pointí ama eile ag an bpointe ama seo.Ina theannta sin, bhí an bhuaic seo gearr-chónaí, mar níor tháinig athrú suntasach ar léiriú ach cúpla géinte ag an dara pointe ama (12 hpi).Suimiúil go leor, ní raibh Boregine, a léirigh ardleibhéal friotaíochta sa tástáil graft, faoi athchlárú tras-scríofa ollmhór den sórt sin le linn an turgnaimh.Mar sin féin, bhí líon na ngéinte arna léiriú go difreálach (DEG) mar an gcéanna do Boregine agus 83A:476 ag 12 HPI.Thaispeáin Mandelup agus daonra 22660 buaiceanna DEG ag an bpointe ama deiridh (48 l/s), rud a léiríonn go raibh moill choibhneasta ar fhreagraí cosanta.
Toisc go ndearnadh athchlárú tras-scríofa ollmhór ar 83A:476 mar fhreagra ar C. lupini ag 6 HPI i gcomparáid le gach líne eile, bhí ~91% de na DEGanna a breathnaíodh ag an bpointe ama seo sainiúil don líne (Fíor 1).Mar sin féin, bhí roinnt forluí i bhfreagraí luatha idir línte staidéir, mar a bhí forluí idir 68.5%, 50.9%, agus 52.6% DEG i Boregine, Mandelup, agus daonra 22660, faoi seach, leo siúd a fuarthas in 83A:476 i bpointe ama áirithe.Mar sin féin, ní raibh sna DEGanna seo ach codán beag (0.97–1.70%) de na DEGanna go léir a bhraitear faoi láthair ag baint úsáide as 83A:476.Ina theannta sin, bhí 11 DEG ó na línte go léir comhleanúnach ag an am seo (Táblaí Forlíontacha S4-S6), lena n-áirítear comhpháirteanna coitianta d'fhreagairtí cosanta plandaí: próitéin aistrithe lipid (TanjilG_32225), einsím endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), dhá phróitéin in-indóite le strus cosúil le SAM2Gil_13 agus SAM ), próitéin laitéis bhunúsach (TanjilG_32352), agus dhá phróitéin balla cille struchtúracha atá saibhir i glicín (TanjilG_19701 agus TanjilG_19702).Bhí forluí measartha ard i bhfreagraí tras-scríbhinne idir 83A:476 agus Boregine ag 24 HPI (16-38% DEG san iomlán) agus idir Mandelup agus Daonra 22660 ag 48 HPI (14-20% DEG san iomlán).
Léaráid Venn a thaispeánann líon na ngéinte arna gcur in iúl go difreálach (DEG) i línte lúipín caolduilleogach (NLL) arna ionaclú le Colletotrichum lupini (srian Col-08 a fuarthas ó réimsí lúipíní in Wierzhenice, an Pholainn, 1999).Ba iad na línte NLL a ndearnadh anailís orthu ná: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil Lanr1), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (measartha frithsheasmhach, ag iompar ailléil AnMan) agus daonra 22660 (an-so-ghabhálach).Seasann an giorrúchán hpi uaireanta tar éis an vacsaínithe.Baineadh luachanna nialais chun an graf a shimpliú.
Rinneadh anailís ar an tacar géinte ró-bhrúite ag 6 hpi le haghaidh láithreacht fearainn ghéinte R canónacha (Tábla Forlíontach S7).Nocht an staidéar seo ionduchtú tras-scríbhinne de ghéinte frithsheasmhachta galar clasaiceach le fearainn NBS-LRR amháin ag 83A:476.Bhí géine amháin TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), cúig ghéine CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, and tanjilg_16162), agus Four NBS_16162), agus Four NBS_16162), agus Four NBS_16162), agus Four NBS_16162), agus Four NBS_16162), agus Ceithre NBS_16162 (tanjilg_06165) ) chomh maith le Ceithre NBS-Lrr (tanjilg_16162) agus Ceithre NBS-LRR (TANJILG_16162).Tá fearainn chanónacha ag na géinte seo go léir eagraithe i seichimh chaomhnaithe.Chomh maith leis na géinte fearainn NBS-LRR, cuireadh roinnt kinases RLL i ngníomh ag 6 hpi, is é sin ceann amháin i Boregine (TanjilG_19877), dhá cheann i Mandelup (TanjilG_07141 agus TanjilG_19877) agus i ndaonra 22660 (TanjilG_03014 agus 2: 2 in 2: 3014) 76.
Rinneadh anailís shaibhrithe Géin-Ointeolaíochta (GO) ar ghéinte a raibh athrú suntasach tagtha orthu mar fhreagra ar ionaclú le C. lupini (strain Col-08) (Tábla Forlíontach S8). Ba é an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ndearnadh ró-ionadaíocht air ná “GO: 0006952 freagartha cosanta” a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líne) le suntas ard (luach P < 0.001) (Fig. 2). Ba é an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ndearnadh ró-ionadaíocht air ná “GO: 0006952 freagartha cosanta” a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líne) le suntas ard (luach P < 0.001) (Fig. 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 заый затыыщищищищищищического являлся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ba é an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ndearnadh ró-ionadaíocht air ná 'GO:0006952 freagartha cosanta', a bhí le feiceáil i 6 as 16 teaglaim (am × líneacht) le suntas ard (luach P < 0.001) (Fig. 2).最常被过度代表的生物过 程术语是“GO:0006952 防御反应”, 它出现在16个（线（线）中,具有高显着性（P值<0.001）（图2）. Is é an téarma próiseas bitheolaíoch is ionadaí ná “GO:0006952 freagartha cosanta”, atá le feiceáil i 6 cinn de na 16 teaglaim (时间×线), le suntas ard (luach P < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Defense Freagra», лызя биологического процесса был «GO: 0006952» комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ba é an téarma próisis bhitheolaíoch is minice a ndearnadh ró-ionadaíocht air ná 'GO:0006952 Defense Response', a bhí le feiceáil i 6 theaglaim as 16 (am × líne) le suntas ard (luach P < 0.001) (Fig. 2).Rinneadh ró-ionadaíocht ar an téarma seo ag dhá phointe ama i 83A: 476 agus Boregine (6 agus 24 hpi) agus ag pointe ama amháin i Mandelup agus Daonra 22660 (12 agus 6 hpi, faoi seach).Is toradh ionchais é seo, ag cur béime ar fhreagra antifungal na línte frithsheasmhacha.Ina theannta sin, d'fhreagair 83A:476 do C. lupini trí ghéinte a aslú go tapa a bhain leis an bpléasc ocsaídiúcháin arna léiriú ag an téarma “próiseas redox GO:0055114”, rud a léirigh freagra cosanta ar leith, agus nocht Boregine freagraí cosanta sonracha, a bhain leis an téarma ‘GO’.:0006950 Freagairt ar strus”.Chuir Daonra 22660 an freagra friotaíochta cothrománach a bhaineann le meitibilítí tánaisteacha i ngníomh, ag cur béime ar an líon iomarcach téarmaí “GO:0016104 Próiseas bithshintéise triterpene” agus “GO:0006722 Próiseas meitibileachta triterpene” (baineann an dá théarma leis an sraith chéanna géinte ), ag cur san áireamh torthaí an téarma GO: 0016104 Próiseas bithshintéise triterpene" agus "GO:0006722 Próiseas meitibileachta triterpene" (baineann an dá théarma leis an sraith chéanna de ghéinte ), ag cur san áireamh torthaí an téarma GO: anailís saibhrithe Bordel 2, saibhriú Daonra agus Mandel20. 83A:476 (6 hpi) agus imoibriú moillithe Áirítear Mandelup agus Daonra 22660 an téarma GO:0015979 'fótaisintéis' agus próisis bhitheolaíocha eile a bhaineann leo.
Is mór áibhéil iad na téarmaí ontology géine bithphróisis a roghnaíodh sa nótáil ar ghéinte a chuirtear in iúl go difreálach le linn freagairtí tras-scríofa de lúipín caolduilleogach (NLL) ionaclaithe le lúipín anthracs (préine Col-08 a fuarthas ó réimsí lúipíní i Wierzhenice, an Pholainn, i 1999).Ba iad na línte NLL a ndearnadh anailís orthu ná: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil homaisigeach Lanr1), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (measartha frithsheasmhach, ag iompar an ailléil homaisigeach AnMan) agus daonra 22660 (so-ghabhálach).
Toisc go raibh sé mar aidhm ag an staidéar seo géinte a chuireann le friotaíocht anthracnose a aithint, rinneadh anailís ar na géinte a shanntar do na téarmaí GO “GO: 0006952 Freagraí cosanta” agus “GO: 0055114 próisis Redox” le scoite ó ciallaíonn bonnlíne ≥ 30 le líne amháin ar a laghad.× pointe ama ag comhcheangal luachanna atá suntasach go staitistiúil de log2 (athrú huaire).Ba é líon na ngéinte a chomhlíon na critéir seo ná 65 do GO:0006952 agus 524 do GO:0055114.
Nocht 83A:476 dhá bhuaic DEG anótáilte leis an téarma GO:0006952, an chéad cheann ag 6 ghéin in aghaidh an orlach (64 ghéin, rialachán suas agus síos) agus an dara ceann ag 24 ghéin in aghaidh an orlach (15 ghéin, rialachán suas amháin).Léirigh Boregine freisin gur bhain GO:0006952 buaicphointe ag an bpointe ama céanna, ach le níos lú DEG (11 agus 8) agus gníomhachtú tosaíochta.Léirigh Mandeloop dhá bhuaic de GO: 0006952 ag 12 agus 48 HPI, an dá cheann ag iompar 12 ghéin (an chéad cheann le géinte gníomhacha, agus an dara ceann le géinte suppressive amháin), agus bhí an buaic mhéadaithe níos mó ag daonra 22660 ag 6 HPI (13 ghéin).rialachán.Ba chóir a thabhairt faoi deara go raibh an cineál céanna freagartha (suas nó síos) ag 96.4% de GO:0006952 DEG sna buaiceanna seo, rud a léiríonn forluí suntasach i bhfreagraí cosanta in ainneoin difríochtaí i líon na ngéinte a bhí i gceist.Déanann an grúpa seichimh is mó a bhaineann leis an téarma GO: 0006952 ionchódú an Próitéin Teachtaireachta a Bhaineann le Strus Starvation 22 (SAM22-mhaith), a bhaineann leis an rang 10 clade próitéine a bhaineann le pathogenesis-associated (PR-10) agus an croí-latex próitéin.próitéin den chineál céanna (MLP-mhaith) próitéin) (Fig. 3).Bhí difríocht idir an dá ghrúpa i nádúr na cainte agus i dtreo na freagartha.Léirigh na géinte a ionchódaíonn próitéiní cosúil le SAM22 ionduchtú comhsheasmhach agus suntasach ag pointí ama luatha (6 nó 12 hpi) agus ní raibh siad freagrach go ginearálta ag deireadh an turgnaimh (48 hpi), agus léirigh próitéiní cosúil le MLP comhordú ag 6 hpi.hpi.83A:476 agus Mandelup ag 48 hp/isteach, ní raibh beagnach gach pointe sonraí eile ag freagairt.Ina theannta sin, lean difríochtaí i bpróifílí slonn na ngéinte próitéine atá cosúil le SAM22 le héagsúlacht breathnaithe i bhfriotaíocht anthracnose, toisc go raibh níos mó pointí ama ag línte níos frithsheasmhacha ag spreagadh na géinte seo go suntasach ná ag géinte níos so-ghabhálaí.Léirigh géine PR-10 eile cosúil le LlR18A/B patrún slonn an-chosúil leis an géine próitéine cosúil le SAM22.
Aithníodh príomhchodanna an téarma próiseas bitheolaíoch “GO: 0006952 Defense Response” agus patrúin slonn na ngéinte iarrthóra ailléilí Lanr1 agus AnMan.Léiríonn scála Log2 luachanna log2 (athrú huaire) idir ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fhaightear ó réimsí lúipín, Wizhenica, an Pholainn, 1999) agus plandaí rialaithe (sham-ionaclaithe) ag an bpointe ama céanna.Rinneadh anailís ar na línte lúipíní caolduilleacha seo a leanas: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil homaisigeach Lanr1), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (measartha frithsheasmhach, ag iompar ailléil homaisigeach AnMan), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).
Ina theannta sin, rinneadh measúnú ar phróifílí slonn na ngéinte iarrthóra RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) agus AnMan (TanjilG_12861) (Fíor 3).Níor léirigh géine TanjilG_05042 freagairt shuntasach (gníomhachtú) ag 83A:476 ach ag an gcéad phointe ama (6 hpi), agus ní raibh TanjilG_12861 suntasach i Mandeloop ach ag dhá phointe ama: 6 hpi (síos-rialú) agus 24 hpi (6 hpi).Le.).inchoigeartaithe)).
Ba iad na géinte is ró-bhrúite sa téarma GO:0055114 “próiseas redox” ná géinte a ionchódaíonn próitéiní cytochrome P450 agus sárocsaídeas (Fíor 4).I gcás samplaí scoite ó 83A:476 ag 6 HPI, breathnaíodh luachanna uasta nó íosta log2 (athrú huaire) ​​(le haghaidh 86.6% de ghéinte) go ginearálta idir gléasraí ionaclaithe agus rialaithe, rud a chuir béim ar ardfhreagairt an ghéinitíopa seo ar ghnéas ionaclaithe.Léirigh 83A:476 an GO is suntasaí: 0055114 DEG ag 6 hpi (503 géinte), agus an chuid eile de na línte ag 48 hpi (Boregine, 31 géinte; Mandelup, 85 géinte; agus Daonra 22660, 78 géinte)).I bhformhór na ngéinte den teaghlach GO:0055114, breathnaíodh dhá chineál freagairtí ar vacsaíniú (gníomhachtú agus cosc).Díol spéise é go bhfuil suas le 97.6% de na DEGanna a aithníodh don téarma GO: 0055114 in Mandelupe ag 48 hp Tugann na breathnuithe seo le tuiscint, in ainneoin an scála i bhfad níos lú (.i. líon na ngéinte ocsaí sócháin, 85 in aghaidh 503), go bhfuil patrún na bhfreagraí trascríbhinne moillithe ó mandeloup go antracnós cosúil le freagra luath-8376.I Boregine agus Daonra 22660, tá an chóineasú seo níos ísle ag 51.6% agus 75.6%, faoi seach.
Nochtadh patrúin léirithe na bpríomhchodanna den téarma den phróiseas bitheolaíoch “GO:0055114 Redox process”.Léiríonn scála Log2 luachanna log2 (athrú huaire) idir ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fhaightear ó réimsí lúipín, Wizhenica, an Pholainn, 1999) agus plandaí rialaithe (sham-ionaclaithe) ag an bpointe ama céanna.Rinneadh anailís ar na línte lúipíní caolduilleacha seo a leanas: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil homaisigeach Lanr1), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (measartha frithsheasmhach, ag iompar ailléil homaisigeach AnMan), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).
83A:476 Áiríodh freisin ar fhreagairtí trascriptómacha ar ionaclú le C. lupini (strain Col-08) tost comhordaithe géinte a chuirtear i leith an téarma GO:0015979 “fótaisintéis” agus próisis bhitheolaíocha gaolmhara eile (FIG. 5).Bhí 105 ghéinte sa tacar GO:0015979 DEG seo a bhí faoi chois go suntasach ag 6 hpi ag 83A:476.Sa fho-thacar seo, rinneadh íosrialáil ar 37 géin i Mandelup ag 48 HPI agus 35 ag an bpointe ama céanna sa daonra 22660, lena n-áirítear 19 DEG atá comónta don dá ghéinitíopa.Níor cuireadh aon DEGanna a bhain leis an téarma GO: 0015979 i ngníomh go suntasach in aon teaglaim (líne x am).
Nochtadh patrúin léirithe na bpríomhchodanna den téarma den phróiseas bitheolaíoch “GO: 0015979 Photosynthesis”.Léiríonn scála Log2 luachanna log2 (athrú huaire) idir ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fhaightear ó réimsí lúipín, Wizhenica, an Pholainn, 1999) agus plandaí rialaithe (sham-ionaclaithe) ag an bpointe ama céanna.Rinneadh anailís ar na línte lúipíní caolduilleacha seo a leanas: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil homaisigeach Lanr1), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid), Mandelup (measartha frithsheasmhach, ag iompar ailléil homaisigeach AnMan), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).
Bunaithe ar thorthaí anailíse difreálach ar chainníocht agus ar dócha go raibh baint aige le freagraí cosanta i gcoinne fungais phataigineacha, roghnaíodh an tsraith seo de sheacht ngéinte chun próifílí slonn a chainníochtú trí PCR fíor-ama (Tábla Forlíontach S9).
Cothaíodh géine toimhdeach próitéine TanjilG_10657 go suntasach i ngach líne agus pointe ama a ndearnadh staidéar orthu i gcomparáid le gléasraí rialaithe (mímiciúla) (Táblaí Forlíontacha S10, S11).Ina theannta sin, léirigh próifíl slonn TanjilG_10657 treocht mhéadaitheach le linn an turgnaimh do gach líne.Léirigh daonra 22660 an íogaireacht is airde de TanjilG_10657 d'ionaclú le gníomhachtú 114-huaire agus an leibhéal slonn coibhneasta is airde (4.4 ± 0.4) ag 24 HPI (Fíor 6a).Léirigh géine próitéin PR10 LlR18A TanjilG_27015 freisin gníomhachtú thar na línte agus na pointí ama go léir, le tábhacht staitistiúil ag an gcuid is mó de na pointí sonraí (Fíor 6b).Cosúil le TanjilG_10657, breathnaíodh an leibhéal slonn choibhneasta is airde de TanjilG_27015 i ndaonra ionaclaithe 22660 ag 24 HPI (19.5 ± 2.4).Rinneadh an ghéin aigéad endochitinase TanjilG_04706 a uasrialáil go suntasach i ngach líne agus ag gach pointe ama ach amháin i gcás Boregine 6 hpi (Fíor 6c).Spreagadh go láidir é ag an gcéad phointe ama (6 HPI) ag 83A:476 (de 10.5 uair) agus méadú measartha i línte eile (6.6-7.5 uair).Le linn an turgnaimh, d'fhan léiriú TanjilG_04706 ag leibhéil chomhchosúla i 83A:476 agus Boregine, agus i Mandelup agus Daonra 22660 mhéadaigh sé go suntasach, ag baint amach luachanna sách ard (5.9 ± 1.5 agus 6.2 ± 1.5, faoi seach).Léirigh an géine endoglucan-1,3-β-glucosidase-mhaith TanjilG_23384 gníomhachtú ard ag an gcéad dá phointe ama (6 agus 12 hpi) i ngach líne ach amháin daonra 22660 (Fíor 6d).Breathnaíodh na leibhéil léirithe coibhneasta is airde de TanjilG_23384 ag an dara pointe ama (12 hpi) i Mandelup (2.7 ± 0.3) agus 83A:476 (1.5 ± 0.1).Ag 24 HPI, bhí abairt TanjilG_23384 sách íseal i ngach líne staidéar (ó 0.04 ± 0.009 go 0.44 ± 0.12).
Próifílí slonn na ngéinte roghnaithe (ag) arna nochtadh ag PCR cainníochtúil.Léiríonn na huimhreacha 6, 12 agus 24 uaireanta tar éis an vacsaínithe.Baineadh úsáid as na géinte LanDExH7 agus LanTUB6 le haghaidh normalú agus úsáideadh LanTUB6 le haghaidh calabrú idirshraitheanna.Léiríonn barraí earráide an diall caighdeánach bunaithe ar thrí mhacasamhlú bhitheolaíocha, agus is trí mhacasamhlú theicniúla gach ceann acu. Tá tábhacht staitistiúil na ndifríochtaí sna leibhéil slonn idir na plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas i 1999 ó réimse lúipín i Wierzenica, an Pholainn) agus plandaí rialaithe (bréag-ionaclaithe) marcáilte thuas pointí sonraí (*luach P < 0.05, ** luach P ≤ 0.01, *** P luach ≤ 0.01). Tá tábhacht staitistiúil na ndifríochtaí sna leibhéil slonn idir na plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas i 1999 ó réimse lúipín i Wierzenica, an Pholainn) agus plandaí rialaithe (bréag-ionaclaithe) marcáilte thuas pointí sonraí (*luach P < 0.05, ** luach P ≤ 0.01, *** P luach ≤ 0.01). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными ( Colletotrichum lupini, пло9, штх1. споля люпина в Верженице, Польша) agus контрольными (ложно инокулированными) растениями отмеченадоными P < 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). Tugtar faoi deara difríochtaí suntasacha staitistiúla sna leibhéil slonn idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas i 1999 ó réimse lúipín i Wierzhenice, an Pholainn) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le seab) thuas ar na pointí sonraí (*Luach P < 0.05, **P-luach ≤ 0.01, ≤ 0.00).Colletotrichum lupini, Col-08, 1999, Wierzenica de réir meáchain平差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值<0.05, **P 值≤ 0.01, ***P值≤) 0.接种 （colletotrichum lupini, dath-08 株, 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照（鍰波兰差异的统计学显着性标记数据点上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными ( Colletotrichum lupini , шлтамы по, coletotrichum lupini , шлипамы й люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) agus контрольными (ложно инокулированными) растениями ентмыми значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). Tugtar faoi deara difríochtaí suntasacha staitistiúla sna leibhéil slonn idir plandaí ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó réimsí lúipíní i Verzhenice, an Pholainn, i 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le seab) os cionn na bpointí sonraí (*luach P < 0.05 , **P-value ≤ 0.01, ***P-value).Ba iad na línte NLL a ndearnadh anailís orthu ná: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil homaisigeach Lanr1), Mandelup (meánfhrithsheasmhach, ag iompar an ailléil AnMan homozygous), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid) agus daonra 22660 (so-ghabhálach).
Léirigh an ghéin iarrthóra TanjilG_05042 ag lócas Lanr1 patrún slonn thar a bheith difriúil ó na próifílí a fuarthas ó staidéir RNA-seq (Fíor 6e).Breathnaíodh gníomhachtú suntasach ar an géine seo i Mandelup agus i ndaonra 22660 (suas le 39.7 agus 11.7 uair, faoi seach), rud a d'eascair leibhéil léirithe sách ard (suas le 1.4 ± 0.14 agus 7.2 ± 1.3, faoi seach).Nocht 83A:476 freisin roinnt upregulation géine TanjilG_05042 (suas go dtí 3.8-huaire), áfach, bhí na leibhéil choibhneasta slonn a baineadh amach (0.044 ± 0.002) níos mó ná 30-huaire níos ísle ná iad siúd a breathnaíodh i Mandelup agus an daonra 22660.léirigh anailís qPCR difríochtaí suntasacha i leibhéil slonn idir géinitíopaí i malairtí bréige-vacsaínithe (rialaithe), ag baint amach difríocht 58-huaire idir daonraí 22660 agus 83A:476, chomh maith le idir daonraí 22660 agus 22660. Baineadh difríocht dhá oiread amach idir Boregine agus Mandalup.
Gníomhachtaíodh an ghéin iarrthóra ag lócas AnMan, TanjilG_12861, mar fhreagra ar vacsaíniú in 83A:476 agus Mandelup, neodrach i ndaonra 22660, agus rinneadh ísrialú i Boregine (Fíor 6f).Ba é slonn coibhneasta na géine TanjilG_12861 an ceann ab airde in 83A ionaclaithe: 476 (0.14±0.01).Léirigh géine próitéin turraing teasa rang I 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 leibhéil níos ísle léirithe coibhneasta i ngach tréithchineál agus pointe ama a ndearnadh staidéar orthu (Fíor 6g).Breathnaíodh an luach is airde ag 24 HPI sa daonra 22660 (0.14 ± 0.02, méadú ocht n-uaire mar fhreagra ar vacsaíniú).
Léirigh comparáid idir phróifílí slonn géine (Fíor 7) comhghaol ard idir TanjilG_10657 agus ceithre ghéinte eile: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80_).Féadfaidh torthaí den sórt sin comhrialáil na ngéinte seo a léiriú le linn freagairtí cosanta.Léirigh na géinte TanjilG_12861 agus TanjilG_23384 próifílí léirithe éagsúla le luachanna comhéifeacht comhghaolú Pearson níos ísle (ó 0.08 go 0.43 agus -0.19 go 0.28, faoi seach) i gcomparáid le géinte eile.
Braitheadh ​​comhghaolta idir próifílí slonn géine ag baint úsáide as PCR cainníochtúil.Rinneadh anailís ar na línte lúipíní caolduilleacha seo a leanas: 83A:476 (resistant, ag iompar an ailléil Lanr1 homozygous), Mandelup (measartha frithsheasmhach, ag iompar an ailléil AnMan homozygous), Boregine (resistant, cúlra géiniteach anaithnid), agus Daonra 22660 (so-ghabhálach).Ríomhadh trí phointe ama (6, 12 agus 24 uair tar éis ionaclaithe), lena n-áirítear ionaclaithe (Colletotrichum lupini, strain Col-08, a fuarthas ó réimsí lúipíní i Wierzhenice na Polainne, i 1999) agus plandaí rialaithe (ionaclaithe le seab).Léiríonn an scála luach chomhéifeacht chomhghaolaithe Pearson.
Bunaithe ar shonraí a fuarthas ag 6 horsepower in aghaidh an orlach, rinneadh WGCNA ar 9981 DEG a aithníodh trí ghléasraí ionaclaithe agus rialaithe a chur i gcomparáid le díriú ar fhreagairtí cosanta luatha (Tábla Forlíontach S12).Fuarthas dhá mhodúl géine is fiche (cnuasaigh) le próifílí slonn comhghaolmhara (dearfach nó diúltach) idir géinitíopaí agus leagan trialacha. Ar an meán, bhí leibhéil slonn géine ag ísliú thart ar 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (sa dá leagan, áfach, bhí an treocht seo níos láidre i monarchana rialaithe). Ar an meán, bhí leibhéil slonn géine ag ísliú thart ar 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (sa dá leagan, áfach, bhí an treocht seo níos láidre i monarchana rialaithe). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22,660 (i обоих вариантах, анграфия сильнее у контрольных растений). Ar an meán, tháinig laghdú ar leibhéil slonn géine san ord 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (sa dá leagan, áfach, bhí an treocht seo níos láidre i monarchana rialaithe).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660照植物中更强）.平均而言，基因水平按按 83a: 476 > mandelup > boregine > daonra 22660 的 顺序下降 （，在种在, 在种在物中更）。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (однако в обоих варианты и обоих вариантыаих ьнее у контрольных растений). Ar an meán, tháinig laghdú ar leibhéil slonn géine sa tsraith 83A:476 > Mandelup > Boregine > Daonra 22660 (áfach, sa dá leagan, bhí an treocht seo níos láidre i monarchana rialaithe).Mar thoradh ar vacsaíniú rinneadh upregulation de léiriú géine, go háirithe i modúil 18, 19, 14, 6 agus 1 (in ord íslitheach éifeacht), rialáil diúltach (m.sh. modúil 9 agus 20) nó le héifeachtaí neodrach (m.sh. modúil 11, 22, 8 agus 13).Nocht anailís saibhrithe téarma GO (Tábla Forlíontach S13) “GO: 0006952 Freagraí cosanta” don mhodúl ionaclaithe (18) le huasghníomhachtú, lena n-áirítear géinte a ndearnadh anailís orthu ag qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 agus TanjilG_27 agus an chuid is mó de ghrianghraif ionaclaithe).Aithníodh concentrator Modúl 18 (Fíor 8) mar an géine TanjilG_26536 a ionchódú an próitéin PR-10-mhaith LlR18B, agus aithníodh concentrator modúl 9 mar an géine TanjilG_28955 ionchódú an photosystem II próitéin PsbQ.Fuarthas géine friotaíochta antracnóise Lanr1, TanjilG_05042, i modúl 22 (Fíor 9) agus baineann sé leis na téarmaí “GO:0044260 Próisis mheitibileach mhacramóilíní cheallacha” agus “GO:0006355 Rialachán trascríobh, templating DNA” a iompraíonn an TanjilG_01.ionchódaíonn an ghéin fachtóir trascríobh strus teasa A-4a (HSFA4a).
Anailís líonra ualaithe ar chomhléiriú géine modúil le téarmaí próisis bhitheolaíochta ró-ionadaithe “GO: 0006952 Freagraí cosanta”.Simplíodh ligation chun aird a tharraingt ar na ceithre ghéinte a ndearna qPCR anailís orthu (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 agus TanjilG_27015).
Anailís líonra ualaithe ar chomhléiriú géine de mhodúl le téarma próisis bhitheolaíoch ró-léirithe “GO: 0006355: Rialachán tras-scríofa, templáil DNA” agus géine friotaíochta antracnóis iarrthóra á iompar aige Lanr1 TanjilG_05042.Simplíodh ligation chun an ghéin TanjilG_05042 agus an ghéin lárnach TanjilG_01212 a aonrú.
Léirigh scagadh friotaíochta anthracnose a bailíodh san Astráil go raibh an chuid is mó de na cultivars a scaoileadh go luath so-ghabhálach;Tá cur síos déanta ar Kalya, Coromup agus Mandelup mar bheith measartha frithsheasmhach, agus tá cur síos déanta ar Wonga, Tanjil agus 83A:476 mar ardfhrithsheasmhach26,27,31.bhí an ailléil friotaíochta céanna aige, Lanr1 ainmnithe, agus bhí ailléil eile ag Coromup agus Mandelup, ainmnithe AnMan10, 26, 39, agus chuir Kalya ailléil eile ar aghaidh., Lanr2.Mar thoradh ar scagadh le haghaidh friotaíochta anthracnose sa Ghearmáin sainaithníodh líne frithsheasmhach Bo7212 le ailléil iarrthóra seachas Lanr1, ainmnithe LanrBo36.
Nocht ár staidéar minicíocht an-íseal (thart ar 6%) den ailléil Lanr1 sa germplasma tástáladh.Tá an breathnóireacht seo comhsheasmhach le torthaí scagadh germplasma Oirthear na hEorpa ag baint úsáide as na marcóirí Anseq3 agus Anseq4, a léirigh nach bhfuil an ailléil Lanr1 i láthair ach i dhá líne Bealarúisis.Tugann sé seo le tuiscint nach bhfuil an ailléil Lanr1 á n-úsáid go forleathan fós ag cláir pórúcháin áitiúla, murab ionann agus san Astráil, áit a bhfuil sé ar cheann de na hailéilí tábhachtacha le haghaidh pórú marcóir-chúnamh.D'fhéadfadh sé seo a bheith mar gheall ar an leibhéal friotaíochta níos ísle a sholáthraíonn an ailléil Lanr1 i gcoinníollacha réimse na hEorpa i gcomparáid le tuarascáil na hAstráile.Ina theannta sin, léirigh staidéir ar anthracnose i limistéir ardbháistí san Astráil go bhféadfadh sé nach mbeadh freagairtí friotaíochta arna n-idirghabháil ag ailléil Lanr1 éifeachtach i gcoinníollacha aimsire atá i bhfabhar fás agus forbairt tapa na pataigin19,42.Go deimhin, sa staidéar seo, breathnaíodh roinnt comharthaí anthracnose freisin i géinitíopaí a iompraíonn an ailléil Lanr1, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh friotaíocht imithe i léig faoi na coinníollacha is fearr chun C. lupini a fhorbairt.Ina theannta sin, is féidir le léirmhínithe dearfacha bréagacha ar láithreacht marcóirí Anseq3 agus Anseq4, atá thart ar 1 cM ó lócas Lanr1, 28,30,43 .
Léirigh ár staidéar gur fhreagair 83A:476, agus an ailléil Lanr1 á iompar aige, d’ionaclú C. lupini le hathchlárú tras-scála ar mhórscála ag an gcéad phointe ama anailísithe (6 hpi), agus i Mandelup, ag iompar ailléil AnMan, breathnaíodh freagairtí trascríobh i bhfad níos déanaí.(ó 24 go 48 hp).Tá baint ag na héagsúlachtaí ama seo i bhfreagraí cosanta le difríochtaí i n-airíonna galair, rud a léiríonn an tábhacht a bhaineann le haithint luath pataigin le haghaidh freagra rathúil ar fhrithsheasmhacht.Chun fíochán plandaí a ionfhabhtú, caithfidh spóir anthrax dul trí roinnt céimeanna forbartha ar dhromchla an óstaigh, lena n-áirítear péacadh, roinnt cille, agus foirmiú appressorium.Is struchtúr ionfhabhtaíoch é aguisín a cheanglaíonn dromchla an óstaigh agus a éascaíonn dul i bhfód isteach sna fíocháin óstaigh.Mar sin, léirigh spóir C. gloeosporioides i sliocht pea an chéad roinn den núicléas tar éis 75-90 nóiméad goir, foirmiú feadáin ghaiméite tar éis 90-120 nóiméad, agus faoi chois tar éis 4 uair an chloig 45 .Léirigh Mango C. gloeosporioides níos mó ná 40% de phéacadh coindial tar éis 3 uair an chloig goir agus foirmiú apppressors thart ar 20% tar éis 4 uair an chloig.Léirigh géine CAP20 a bhaineann le virulence de C. gloeosporioides gníomhaíocht tras-scríobhach i conidia a fhoirmíonn epiphyte tar éis gor 3.5 h i céir dromchla avocado le tiúchan ard de phróitéin CAP20 tar éis 4 h 46 min.Mar an gcéanna, spreag gníomhaíocht na ngéinte biosintéise melanin i C. trifolii le linn gor 2 uair an chloig agus foirmíodh appressorium tar éis 1 uair an chloig ina dhiaidh sin.Tá sé léirithe ag staidéir ar fhíocháin dhuille go bhfuil sútha talún ionaclaithe le C. acutatum faoi chois den chéad uair ag 8 hpi, agus go bhfuil an chéad chosc ar 4 hpi48,49 ag trátaí atá ionaclaithe le cocóid C..comhsheasmhach den chuid is mó le scála ama Colletotrichum spp.próiseas tógálach.Tugann freagairtí tapa cosanta ar 83A:476 le fios go bhfuil baint ag géinte frithsheasmhachta plandaí agus imdhíonacht spreagtha le héifeachtaí (ETI) sa líne seo, agus tacaíonn freagairtí moillithe Mandelup leis an hipitéis imdhíonachta patrún móilíneach micrea-ghaolmhar (MTI) 50. Freagraí luatha ar 83A: 476 agus Mandelup.Tacaíonn an forluí páirteach idir géinte suas nó síos-rialaithe sa fhreagairt mhoillithe leis an gcoincheap seo freisin, mar is minic a mheastar ETI a bheith ina fhreagairt MTI luathaithe agus feabhsaithe a chríochnaíonn bás cille cláraithe ag láthair an ionfhabhtaithe, ar a dtugtar turraing anaifiolachtach 51,52 .
Is iad an chuid is mó de na géinte a chuirtear i leith an téarma ró-ionadaithe Gene Ontology GO: 0006952 “Freagra Cosanta” na 11 homalóg den phróitéin 22 teachtaireachta troscadh strus-spreagtha (cosúil le SAM22) agus na seacht mór-mhaith laitéis próitéine (MLPanna).-like próitéiní 31, 34, 43 agus 423 léirigh cosúlacht seicheamh.Léirigh géinte cosúil le SAM22 gníomhachtú suntasach a mhair níos faide, rud a léirigh leibhéil mhéadaithe friotaíochta anthracnose (83A: 476 agus Boregine).Mar sin féin, níor íosrialáil géinte cosúil le MLP ach amháin i línte a iompraíonn an ailléil friotaíochta iarrthóra (83A:476/Lanr1 ag 6 hpi agus Mandelup/AnMan ag 24 hpi).Ba chóir a thabhairt faoi deara go dtagann na homalóga uile atá cosúil le SAM22 ó bhraisle géine a chuimsíonn thart ar 105 kb, agus go dtagann géinte cosúil le MLP ó réigiúin ar leith den ghéanóm.Fuarthas gníomhachtú comhordaithe ar ghéinte cosúil le SAM22 freisin inár staidéar roimhe seo ar fhriotaíocht NLL in aghaidh ionaclaithe Diaporthetoxica, rud a thugann le tuiscint go bhfuil baint acu le comhpháirteanna cothrománacha na freagartha cosanta.Tacaítear leis an gconclúid seo freisin le tuairiscí ar fhreagairt dhearfach ó ghéinte cosúil le SAM22 ar ghortú nó ar chóireáil le haigéad salaicileach, ionduchtóirí fungacha, nó sárocsaíd hidrigine.
Léiríodh go bhfreagraíonn géinte cosúil le MLP do strusanna aibitheacha agus bitheacha éagsúla, lena n-áirítear ionfhabhtuithe fungacha baictéaracha, víreasacha agus pataigineacha i go leor speiceas plandaí55.Mhéadaigh na treoracha freagartha ar idirghníomhaíochtaí áirithe idir plandaí agus pataiginí ó mhéadú go láidir (.i. le linn inmhíolú cadáis le Verticillium dahliae) go laghdú suntasach (ie, tar éis ionfhabhtú crann úll le Alternaria spp.)56,57.Breathnaíodh íosrialú suntasach ar ghéin MLP-mhaith 423 le linn cosaintí avocado ar ionfhabhtú F. Nígir agus le linn ionfhabhtú an chrainn úll Botryosphaeria berengeriana f.cn.Is pathotypes úll iad piricola agus Alternaria alternata58,59.Ina theannta sin, bhí léiriú níos ísle ar ghéinte a bhaineann le frithsheasmhacht ag Apple Calli agus iad ag cur an iomarca géine MLP 423 in iúl agus bhí siad níos so-ghabhálaí i leith ionfhabhtú fungasach59.Tar éis Fusarium oxysporum f, cuireadh géine MLP-mhaith 423 faoi chois freisin i ngéamaplasma pónaire coitianta frithsheasmhach.cn.Ionfhabhtú Bean 60.
Ba iad baill eile den teaghlach PR-10 a aithníodh inár staidéar RNA-seq na géinte LlR18A agus LlR18B mar fhreagra ar upregulation, chomh maith leis an géine upregulated (1 géine) nó downregulated (3 genes) don próitéin aistrithe lipid DIR1..Ina theannta sin, leagann WGCNA béim ar ghéin LlR18B mar mhol sa mhodúl seo, atá an-so-ghabhálach do vacsaíniú agus a iompraíonn roinnt géinte freagartha cosanta.Cothaíodh na géinte LlR18A agus LlR18B i nduilleoga lúipín buí mar fhreagra ar bhaictéir phataigineacha, chomh maith le heascanna NLL tar éis ionaclaithe D. toxica, cé go raibh homalóg ríse na ngéinte seo, RSOsPR10, tar éis ionfhabhtú fungasach a bhfuil baint aige, is dócha, leis an gcosán comharthaíochta aigéid jasmonaigh a bhfuil gá le hiompar lipidí 162,61. friotaíocht faighte sistéamach (SAR).Le forbairt imoibrithe cosanta, iompraítear an próitéin DIR1 ó fhócas an ionfhabhtaithe tríd an phloem chun SAR a aslú in orgáin i bhfad i gcéin.Is díol spéise é go raibh an ghéin TanjilG_02313 DIR1 ionduchtaithe go suntasach ag an gcéad phointe ama i línte 84A:476 agus Daonra 22660, ach níor éirigh go maith le frithsheasmhacht in aghaidh anthracnóis ach amháin i líne 84A:476.D’fhéadfadh sé seo léiriú a thabhairt ar roinnt fofheidhmithe den ghéin DIR1 in NLL, mar níor fhreagair na trí homalóg eile ach amháin d’ionaclú sa líne 83A:476 ag 6 hpi, agus díríodh an freagra seo anuas.
In ár staidéar, ba iad na comhpháirteanna is coitianta a fhreagraíonn don phróiseas bitheolaíoch ar a dtugtar “Próiseas GO: 0055114 Redox” próitéin cytochrome P450, sárocsaídase, aigéad linóleic 9S-/13S-lipoxygenase, agus 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase.Ina theannta sin, sainmhíníonn ár WGCNA homalóg HSFA4a mar mhol a iompraíonn modúil mar iarrthóir géine friotaíochta Lanr1 TanjilG_05042.Is comhpháirt é HSFA4a den rialachán redox-spleách ar thrascríobh núicléach i ngléasraí.
Is ocsaíd-dhuchtanna iad próitéiní Cytochrome P450 a chatalaíonn imoibrithe hiodrocsamhaltaithe NADPH agus/nó O2-spleách i meitibileacht bunscoile agus tánaisteach, lena n-áirítear meitibileacht xenóbiotics, chomh maith le hormóin, aigéid shailleacha, stéaróil, comhpháirteanna balla cille, bithpholaiméirí, agus bithshintéis na gcomhdhúile cosanta 69, staidéar ar fheidhm inathraitheacht Plandóm - P in 69. 6 log2 (athrú huaire) go 5.7 mar gheall ar líon mór homologues athraithe (37) agus difríochtaí i bpatrúin freagartha idir ghéinte sonracha, rud a léiríonn athbhreithniú aníos..Bheadh ​​sé an-amhantrach úsáid a bhaint as sonraí RNA-seq amháin chun feidhm bhitheolaíoch thuartha na ngéinte NLL a shoiléiriú i superteaghlach próitéine chomh mór sin.Mar sin féin, is fiú a thabhairt faoi deara go bhfuil baint ag roinnt géinte cytochrome P450 le friotaíocht méadaithe le fungais nó baictéir phataigineacha, lena n-áirítear rannchuidiú le frithghníomhartha ailléirgeacha69,70,71.
Is einsímí ilfheidhmeacha plandaí iad sárocsaídí Aicme III a bhfuil baint acu le raon leathan próiseas meitibileach le linn fás agus forbairt plandaí, agus mar fhreagra ar strusanna comhshaoil ​​amhail salandacht, triomach, déine solais ard, agus ionsaí pataigin72.Tá baint ag peroxidases in idirghníomhú roinnt speiceas plandaí le Anthracis, lena n-áirítear Stylosanthes humilis agus C. gloeosporioides, Lionsa culinaris agus C. truncatum, Phaseolus vulgaris agus C. lindemuthianum, Cucumis sativus agus C. lagenarium73,74,75,76.Bíonn an freagra an-tapa, uaireanta fiú ag 4 HPI, sula dtéann an fungas isteach i bhfíochán an phlanda73.D'fhreagair an ghéin peroxidase freisin d'ionaclú D. toxica NLL.Chomh maith lena bhfeidhmeanna tipiciúla chun pléasctha ocsaídiúcháin a rialáil nó deireadh a chur le strus ocsaídiúcháin, is féidir le sárocsaídí cur isteach ar fhás pataigin trí bhacainní fisiceacha a chruthú bunaithe ar atreisiú balla cille le linn lignification, subunit nó tras-nascadh comhdhúile sonracha.Is féidir an fheidhm seo a chur i silico leis an géine TanjilG_03329 a ionchódaíonn anion peroxidase anion tuartha lignin-fhoirmithe a bhí uasrialaithe go suntasach inár staidéar sa líne frithsheasmhach 83A:476 ag 6 HPI, ach ní i tréithchineálacha agus pointí ama eile nár fhreagair.
Is é 9S-/13S-lipoxygenase d’aigéad linóleic an chéad chéim i gcosán ocsaídiúcháin bithsintéise lipid78.Tá feidhmeanna iomadúla ag táirgí an chosáin seo i gcosaint plandaí, lena n-áirítear neartú na mballaí cille trí thaiscí callóis agus peictin a fhoirmiú, agus strus ocsaídiúcháin a rialáil trí speicis imoibríocha ocsaigine79,80,81,82,83 a tháirgeadh.Sa staidéar reatha, athraíodh an léiriú ar aigéad linoleic 9S-/13S-lipoxygenase i ngach tréithchineál, ach sa daonra so-ghabhálach 22660, bhí an t-uasrialú i réim ag pointí ama éagsúla, agus i dtréithchineálacha a iompraíonn Lanr1 frithsheasmhach agus an ailléil AnMan, leagann sé béim ar éagsúlú na sraitheanna ocsaílipín i bhfrithghníomhartha den chineál géiniteacha seo.
Rinneadh an homalóg 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) a uasrialú go suntasach (9 géinte) nó dírialaithe (2 ghéinte) nuair a ionaclaithe le lúipín.Seachas dhá eisceacht, tharla na freagraí seo go léir ag 6 hp.ag 83A:476.Is é an t-imoibriú einsímeach arna idirghabháil ag próitéiní ACO an chéim teorannaithe ráta i dtáirgeadh eitiléine agus mar sin tá sé an-rialaithe84.Is hormón plandaí é eitile a imríonn róil éagsúla maidir le forbairt plandaí a rialáil agus freagairt ar choinníollacha strus aibitheacha agus bitheacha.Tá baint ag ionduchtú trascríobh ACO agus gníomhachtú an chosáin chomharthaíochta eitiléine le méadú ar fhriotaíocht ríse chuig an bhfungas hemibiotrófach oryzae oryzae trí tháirgeadh speiceas ocsaigin imoibríoch agus fíteaalexins a rialáil.Mar thoradh ar phróiseas ionfhabhtaithe duille an-chosúil a fuarthas idir M. oryzae agus C. lupini88,89, i gcomhthéacs uasrialaithe suntasach homologues ACO sa líne 83A:476 a tuairiscíodh sa staidéar seo, aistrítear an fhéidearthacht friotaíocht a bhronnadh ar anthracnose NLL Eitiléine mar chéim lárnach chomharthaíochta ar bhealaí móilíneacha .
Sa staidéar reatha, breathnaíodh cosc ​​ar mhórscála ar go leor géinte a bhaineann le fótaisintéis ag 6 hpi in 83A:476 agus ag 48 hpi i Mandeloop agus sa daonra 22660.Tá méid agus dul chun cinn na n-athruithe seo i gcomhréir leis an leibhéal.Breathnaíodh friotaíocht anthracnose sa turgnamh seo.Le déanaí, tuairiscíodh go raibh athscríbhinní a bhaineann le fótaisintéis láidir agus luath faoi chois i roinnt samhlacha d’idirghníomhaíochtaí pataiginí plandaí, lena n-áirítear baictéir phataigineacha agus fungais.Is féidir le haste (ó 2 HPI i roinnt idirghníomhaíochtaí) agus faoi chois domhanda géinte a bhaineann le fótaisintéis mar fhreagra ar ionfhabhtú díolúine plandaí a spreagadh bunaithe ar imscaradh speiceas ocsaigine imoibríoch agus a n-idirghníomhaíocht le cosán an aigéid salaicileach chun frithghníomhartha ailléirgeacha 90,94 a idirghabháil.
Mar fhocal scoir, cuimsíonn meicníochtaí freagartha cosanta atá molta don líneáil is frithsheasmhacha (83A:476) aitheantas tapa pataigin ag an ngéin R (TIR-NBS-LRR TanjilG_05042 is dócha) agus aigéad salaicileach-idirghabhálaithe ailléirgeach agus comharthaíocht eitiléine, agus bunú SAR fadraoin ina dhiaidh sin.tacaíonn an próitéin DIR-1 le gníomh.Ba chóir a thabhairt faoi deara go bhfuil an tréimhse bithtrófach le haghaidh ionfhabhtú C. lupini an-ghearr (thart ar 2 lá), agus fás necrotic ina dhiaidh sin95.D’fhéadfadh an t-aistriú idir na céimeanna seo a bheith bainteach le neacróis agus léiriú próitéiní inducite eitiléine a ghníomhaíonn mar spreagthaí d’imoibrithe hipiríogaireachta i bplandaí óstacha.Dá bhrí sin, tá an fhuinneog ama chun C. lupini a ghabháil go rathúil ag an gcéim bithtrófach an-chúng.Tá athchlárú na ngéinte a bhaineann le redox agus fótaisintéis a breathnaíodh in 83A:476 ag 6 hpi comhsheasmhach le dul chun cinn hífí fungais agus fógraíonn sé go bhforbrófar freagairt chosanta rathúil ag an gcéim bhithotrófach.D'fhéadfadh go mbeadh ró-mhoill ar fhreagraí tras-rapomic Mandelup agus daonra 22660 chun an fungas a ghabháil sula n-aistrítear go fás necrotic, áfach, d'fhéadfadh Mandelup a bheith níos éifeachtaí ná an daonra 22660 toisc go gcuireann rialáil réasúnta tapa an phróitéin PR-10 friotaíocht cothrománach chun cinn.
Is cosúil gur meicníocht choitianta é ETI, arna thiomáint ag an ngéin chanónach R, le haghaidh frithsheasmhacht in aghaidh pónaire in aghaidh anthracnose.Mar sin, sa léagúm múnla Medicago truncatula, tugann an ghéin RCT1, comhalta den rang géine R plandaí TIR-NBS-LRR97, friotaíocht in aghaidh anthracnose.Tugann an ghéin seo freisin friotaíocht anthracnose leathan-speictrim in alfalfa nuair a aistrítear go plandaí so-ghabhálacha.Sa bhean coitianta (P. vulgaris), tá níos mó ná dhá dhosaen géinte friotaíochta anthracnose aitheanta go dtí seo.Faightear cuid de na géinte seo i réigiúin nach bhfuil aon ghéinte R canónacha iontu, ach tá go leor eile suite ar imill na gcromosóim a iompraíonn braisle géine NBS-LRR, lena n-áirítear TIR-NBS-LRRs99.Dhearbhaigh an staidéar SSR genome-leathan freisin go bhfuil baint ag géine NBS-LRR le friotaíocht anthracnose sa bhean coitianta.Fuarthas an ghéin chanónach R freisin sa réigiún genomic a iompraíonn an mór-lócas friotaíochta anthracnose i lúipín bán 101.
Léiríonn ár gcuid oibre go gcosnaíonn imoibriú láithreach friotaíochta, a ghníomhaítear ag céim luath d'ionfhabhtú plandaí (b'fhearr tráth nach déanaí ná 12 hpi), lúipín caol-leaved ó anthracnose de bharr fungas pataigineach Collelotrichum lupini.Ag baint úsáide as seicheamhú tréchur ard, léirigh muid próifílí léirithe difreálach de ghéinte friotaíochta anthracnose i ngléasraí NLL arna idirghabháil ag géinte friotaíochta Lanr1 agus AnMan.Is éard atá i gceist le cosaint rathúil ná géinte a dhearadh go cúramach do phróitéiní a bhfuil baint acu le redox, fótaisintéis, agus pataigineas laistigh de uaireanta tar éis don phlanda teagmháil a dhéanamh le pataigin.Tá imoibrithe cosanta den chineál céanna, ach moill ama, i bhfad níos lú éifeachtach chun plandaí a chosaint ó ghalair.Tá an fhriotaíocht anthrax arna idirghabháil ag géine Lanr1 cosúil le freagairt tapa tipiciúil na géine R (díolúine a spreagtar le héifeachtaí), agus is dóichí go soláthraíonn géine AnMan freagra cothrománach (díolúine arna spreagadh ag patrún móilíneach a bhaineann le miocróib), ag soláthar leibhéal measartha inbhuanaitheachta.
Is éard a bhí sna 215 línte NLL a úsáideadh chun scagadh le haghaidh marcóirí anthracnose ná 74 shaothrán, 60 líne a fuarthas trí thrasnú nó pórú, 5 mutants, agus 76 germplasma fiáine nó bunaidh.Tháinig na línte ó 17 dtír, go príomha ón bPolainn (58), an Spáinn (47), an Ghearmáin (27), an Astráil (26), an Rúis (19), an Bhealarúis (7), an Iodáil (5) agus línte eile.ó 10 dtír.Áiríonn an tacar línte frithsheasmhacha tagartha freisin: 83A:476, Tanjil, Wonga ag iompar an ailléil Lanr1, agus Mandelup ag iompar ailléil AnMan.Fuarthas na línte ó Bhunachar Sonraí Acmhainní Géiniteacha Lúipín na hEorpa arna chothabháil ag Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, an Pholainn (Tábla Forlíontach S1).
Fásadh plandaí faoi choinníollacha rialaithe (photoperiod 16 uair an chloig, teocht 25 ° C i rith an lae agus 18 ° C san oíche).Rinneadh anailís ar dhá mhacasamhlú bhitheolaíocha.Rinneadh DNA a leithlisiú ó dhuilleoga trí seachtaine d'aois ag baint úsáide as an DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, an Ghearmáin) de réir an phrótacail.Rinneadh measúnú ar cháilíocht agus ar thiúchan an DNA scoite trí mhodhanna speictreafótaiméadracha (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).Rinneadh anailís ar 11,26,28 ar an marcóir AnManM1 a mharcálann an ghéin friotaíochta anthracnose AnMan (díorthaithe ó cv. Mandelup) agus na marcóirí Anseq3 agus Anseq4 taobh leis an géine Lanr1 (díorthaithe ó cv. Tanjil).Scóráladh homozygotes don ailléil frithsheasmhach mar “1″, so-ghabhálach – mar “0”, agus heitrisiogótaí – mar 0.5.
Bunaithe ar thorthaí an scagtha le haghaidh marcóirí AnManM1, AnSeq3 agus AnSeq4 agus infhaighteacht síolta le haghaidh turgnaimh leantacha deiridh, roghnaíodh 50 líne NLL le haghaidh feinitíopáil friotaíochta anthracnose.Rinneadh an anailís i ndúblach i dtithe gloine ríomhrialaithe le fótatréimhse 14 uair an chloig le raon teochta 22°C i rith an lae agus 19°C san oíche.Scríobtar na síolta (gearradh amach an cóta síl ar an taobh eile den suth le lann géar) sula gcuirtear sí chun suanacht an tsíl a chosc toisc go bhfuil an cóta síl ró-chrua agus chun péacadh aonfhoirmeach a chinntiú.Fásadh plandaí i bpotaí (11 × 11 × 21 cm) le ithir steiriúil (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Vársá, an Pholainn).Rinneadh ionaclú le brú Colletotrichum lupini Col-08, a fhástar i 1999 ó na gais de phlandaí lúipín caol-leaved a fhástar i bpáirc i Verzhenitsa, Mórcheantar na Polainne (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E ).Faigh limistéar.Saothraíodh na haonracháin i meán CRS ag 20° C. faoi sholas dubh ar feadh 21 lá chun spóiriú a spreagadh.Ceithre seachtaine tar éis cur, nuair a shroich na plandaí an chéim 4-6 duille, rinneadh ionaclú trí spraeáil le fionraí conidia ag tiúchan 0.5 x 106 conidia in aghaidh an ml.Tar éis ionaclaithe, coinníodh na plandaí sa dorchadas ar feadh 24 uair an chloig ag taise de thart ar 98% agus teocht 25 ° C chun péacadh conidia agus an próiseas ionfhabhtaithe a éascú.Fásadh na plandaí ansin faoi fhótatréimhse 14 uair an chloig ag 22°C lá/19°C oíche agus 70% de thaise.Rinneadh an scór galair 22 lá tar éis ionaclaithe agus bhí sé sa raon ó 0 (imdhíonachta) go 9 (an-so-ghabhálach) ag brath ar láithreacht nó easpa loit necrotic ar gais agus duilleoga.Ina theannta sin, tar éis scórála, rinneadh meáchan na bplandaí a thomhas.Ríomhadh an gaol idir géinitíopaí marcóra agus feinitíopaí galair mar chomhghaolta pointe dhá sheicheamh (neamhláithreacht marcóirí heitrisigeacha sa tsraith línte le haghaidh anailíse ar an bhfeinitíopa friotaíochta anthracnose).