Tapadh leibh airson tadhal air Nature.com. Tha thu a’ cleachdadh dreach den bhrobhsair agad le taic CSS cuibhrichte. Airson an eòlas as fheàrr, tha sinn a’ moladh gun cleachd thu brabhsair ùraichte (no gun cuir thu dheth Modh Co-chòrdalachd ann an Internet Explorer). A bharrachd air an sin, gus dèanamh cinnteach à taic leantainneach, tha sinn a’ sealltainn an làraich gun stoidhlichean agus JavaScript.
A’ taisbeanadh carousel de thrì sleamhnagan aig an aon àm. Cleachd na putanan Roimhe agus Air adhart gus gluasad tro thrì sleamhnagan aig an aon àm, no cleachd na putanan sleamhnag aig a’ cheann thall gus gluasad tro thrì sleamhnagan aig an aon àm.
Chaidh mìrean silica porous ullachadh leis an dòigh sol-gel le beagan atharrachaidhean gus mìrean farsaing-phorach fhaighinn. Chaidh na mìrean seo a thoirt a-mach le N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) agus styrene tro phoilimearachadh gluasad-bloighdeadh slabhraidh cùil (RAFT) gus polyamides eadar-fhighte N-phenylmaleimide a thoirt gu buil. Ìre statach styrene (PMP). Chaidh colbhan stàilinn gun smal le toll cumhang (trast-thomhas a-staigh 100 × 1.8 mm) a phacadh le pacadh slurry. Chaidh coileanadh cromagrafach colbh PMP a mheasadh gus measgachadh de pheptides synthetigeach a sgaradh anns a bheil còig peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) agus hydrolyzate tryptic de albumin serum daonna (HAS). Fo chumhachan elution as fheàrr, ràinig an àireamh teòiridheach de phlàtaichean le measgachadh de pheptides 280,000 plàta / meatair ceàrnagach. A’ dèanamh coimeas eadar coileanadh dealachaidh a’ cholbh a chaidh a leasachadh agus colbh malairteach Ascentis Express RP-Amide, chaidh fhaicinn gu robh èifeachdas dealachaidh colbh PMP nas fheàrr na a’ cholbh mhalairteach a thaobh èifeachdas dealachaidh agus rùn.
Tha gnìomhachas nam bith-chungaidhean air fàs gu bhith na mhargaidh chruinneil a tha a’ leudachadh le àrdachadh mòr ann an roinn a’ mhargaidh anns na bliadhnachan mu dheireadh. Leis an fhàs spreadhaidh ann an gnìomhachas nam bith-chungaidhean1,2,3 tha feum mòr air mion-sgrùdadh peptide agus pròtain. A bharrachd air a’ pheaptaid targaid, bidh diofar neo-chunbhalachdan air an cruthachadh rè co-chur peptide, agus mar sin tha feum air glanadh cromagrafach gus an ìre de ghlanachd a tha thu ag iarraidh fhaighinn bhon pheaptaid. Tha mion-sgrùdadh agus comharrachadh phròtainean ann an lionntan bodhaig, figheagan agus ceallan na obair air leth dùbhlanach air sgàth an àireamh mhòr de ghnèithean a dh’ fhaodadh a bhith air an lorg ann an aon sampall. Ged a tha speactramaitreachd mais na inneal èifeachdach airson peptidean agus pròtainean a shreathachadh, ma thèid sampallan mar sin a thoirt a-steach don speactramaitreadair mais gu dìreach, bidh an dealachadh mì-riarachail. Faodar an duilgheadas seo fhuasgladh le bhith a’ dèanamh cromagrafaidheachd leaghaidh (LC) mus tèid mion-sgrùdadh MS a dhèanamh, a lughdaicheas an ìre de anailitichean a tha a’ dol a-steach don speactramaitreadair mais aig àm sònraichte4,5,6. A bharrachd air an sin, faodaidh anailitichean dùmhlachadh ann an sgìre chumhang rè dealachadh ìre leaghaidh, agus mar sin a’ dùmhlachadh nan anailitichean sin agus a’ meudachadh cugallachd lorg MS. Tha cròmatagrafaidheachd leaghaidh (LC) air a dhol air adhart gu mòr thar nan deich bliadhna a dh’ fhalbh agus tha e air a bhith na dhòigh a thathas a’ cleachdadh gu farsaing airson mion-sgrùdadh proteomic7,8,9,10.
Tha cromatagrafaidheachd leaghaidh ìre-aiseig (RP-LC) air a chleachdadh gu farsaing gus measgachaidhean de pheptidean a ghlanadh agus a sgaradh a’ cleachdadh silica octadecyl-modified (ODS) mar an ìre stèidhearach11,12,13. Ach, air sgàth an structair iom-fhillte agus an nàdar amphoteric,14,15 chan urrainn dha ìrean stèidhearach RP dealachadh riarachail de pheptidean agus phròtainean a thoirt seachad. Mar sin, feumaidh mion-sgrùdadh pheptidean agus phròtainean le mìrean pòla agus neo-phòla ìrean stèidhearach a chaidh a dhealbhadh gu sònraichte gus eadar-obrachadh agus na anailitichean sin a chumail16. Faodaidh cromatagrafaidheachd measgaichte, a tha a’ tabhann eadar-obrachaidhean ioma-mhodhail, a bhith na roghainn eile an àite RP-LC airson peptidean, pròtainean agus measgachaidhean iom-fhillte eile a sgaradh. Chaidh grunn ìrean stèidhearach de sheòrsa measgaichte ullachadh agus chaidh colbhan làn de na h-ìrean stèidhearach seo a chleachdadh gus peptidean agus pròtainean a sgaradh17,18,19,20,21. Air sgàth làthaireachd bhuidhnean pòla is neo-phòla, tha ìrean statach measgaichte modh (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, eadar-chur pòla/RPLC) freagarrach airson dealachadh peptides agus phròtainean22,23,24,25,26,27,28. , tha ìrean statach eadar-cheangailte pòla le buidhnean pòla ceangailte gu covalent a’ sealltainn comasan dealachaidh math agus roghnachd gun samhail airson anailitichean pòla is neo-phòla leis gu bheil an dealachadh an urra ris an eadar-obrachadh eadar an anailit agus an ìre statach Eadar-obrachaidhean ioma-mhodhail29,30,31,32. O chionn ghoirid, fhuair Zhang et al.30 ìrean statach crìochnaichte le behenyl de polyamines agus sgar iad gu soirbheachail hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, agus cuid de anailitichean eile. Tha buidhnean pòla is neo-phòla aig an stuth statach leabaithe pòla, agus mar sin faodar a chleachdadh gus peptides agus pròtainean a sgaradh ann am pàirtean hydrophobic agus hydrophilic. Tha colbhan pòlar in-loidhne (me, colbhan C18 le amide in-loidhne) rim faighinn fon ainm malairt colbhan Ascentis Express RP-Amide, ach cha deach na colbhan seo a chleachdadh ach airson mion-sgrùdadh amine 33.
Anns an sgrùdadh làithreach, chaidh ìre statach leabaithe pòlar (N-phenylmaleimide, polystyrene leabaithe) ullachadh agus a mheasadh airson dealachadh peptide agus sgoltadh HSA tryptic. Chaidh an ro-innleachd a leanas a chleachdadh gus an ìre statach ullachadh. Chaidh mìrean silica porous ullachadh a rèir nam modhan-obrach a chaidh a mhìneachadh anns na foillseachaidhean roimhe againn, le beagan atharrachaidhean ann an sgeamaichean ullachaidh 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Chaidh na co-mheasan de urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS agus searbhag uisgeach-acetic atharrachadh gus mìrean silica fhaighinn le meudan pore mòra. San dàrna àite, chaidh ligand ùr phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate a cho-chur agus chaidh na mìrean silica derivatichte aige a chleachdadh gus ìrean statach leabaithe pòlar ullachadh. Chaidh an ìre statach a fhuaireadh a phacadh a-steach do cholbh stàilinn gun smal (trast-thomhas a-staigh 100 × 1.8 mm) a rèir sgeama pacaidh leasaichte. Tha pacadh a’ cholbh air a chuideachadh le crith meacanaigeach gus dèanamh cinnteach à sreath èideadh taobh a-staigh a’ cholbh. Chaidh measadh a dhèanamh air a’ cholbh phacaichte airson dealachadh measgachadh de pheaptidean anns a bheil còig pheaptidean (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, peptide leucine-enkephalin). agus hydrolysates tryptic de albumin serum daonna (HSA). Chaidh fhaicinn gun robh am measgachadh peptide agus an cnàmhadh tryptic HSA a’ sgaradh le deagh rùn-sgaradh agus èifeachdas. Chaidh èifeachdas dealachaidh colbh PMP a choimeas ri èifeachdas dealachaidh colbh Ascentis Express RP-Amide. Chaidh fhaicinn gu bheil deagh rùn-sgaradh agus èifeachdas dealachaidh àrd aig peptides agus pròtainean air colbh PMP, agus tha èifeachdas dealachaidh colbh PMP nas àirde na èifeachdas colbh Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylene glycol), urea, searbhag aiseatach, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, albumin serum daonna (HSA), clòraid ammonium, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), clòraid methacryloyl (MC), styrene, 4-hydroxy-TEMPO, benzoyl peroxide (BPO), acetonitrile (ACN) airson HPLC, methanol, 2-propanol agus acetone. Companaidh Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Na Stàitean Aonaichte).
Chaidh measgachadh de urea (8 g), polyethylene glycol (8 g) agus 8 ml de 0.01 N searbhag aiseatach a mheasgachadh airson 10 mionaidean, agus chaidh 24 ml de TMOS a chur ris fo fhuarachadh deighe. Chaidh am measgachadh ath-bhualadh a theasachadh aig 40 ° C airson 6 uairean a thìde agus an uairsin aig 120 ° C airson 8 uairean a thìde ann an autoclave stàilinn gun smal. Chaidh an t-uisge a dhòrtadh a-mach agus chaidh an còrr a thiormachadh aig 70 ° C airson 12 uairean a thìde. Chaidh na blocaichean bog tioram a bleith gu rèidh agus an losgadh ann an àmhainn aig 550 ° C airson 12 uairean a thìde. Chaidh trì baidsean ullachadh agus a chomharrachadh gus ath-riochdachadh meudan gràinean, meud pore agus farsaingeachd uachdar a dhearbhadh.
Buidheann pòlar agus ìre statach airson slabhraidhean polystyrene. Tha am modh-obrach ullachaidh air a mhìneachadh gu h-ìosal.
Chaidh N-phenylmaleimide (200 mg) agus methyl vinyl isocyanate (100 mg) a sgaoileadh ann an toluene gun uisge, agus an uairsin chaidh 0.1 ml de 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) a chur ris a’ fhlasg ath-bhualaidh gus co-phoilimear de phenylmaleimide agus methyl vinyl isocyanate (PMCP) fhaighinn. ) Chaidh am measgachadh a theasachadh aig 60°C airson 3 uairean a thìde, a shìoladh agus a thiormachadh ann an àmhainn aig 40°C airson 3 uairean a thìde.
Chaidh mìrean silica tioram (2 g) a sgaoileadh ann an toluene tioram (100 ml), a mheasgachadh agus a shònachadh airson 10 mionaidean ann am flasg bonn cruinn 500 ml. Chaidh PMCP (10 mg) a sgaoileadh ann an toluene agus a chur ris a’ fhlasg ath-bhualaidh boinneagan tro thunail cur-ris. Chaidh am measgachadh a theasachadh aig 100 ° C airson 8 uairean a thìde, a shìoladh, a nighe le acetone agus a thiormachadh aig 60 ° C airson 3 uairean a thìde. An uairsin, chaidh na mìrean silica co-cheangailte ri PMCP (100 g) a sgaoileadh ann an toluene (200 ml), agus chaidh 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) a chur ris an sin an làthair 100 μl de dibutyltin dilaurate mar chatalaiche. Chaidh am measgachadh a mheasgachadh aig 50 ° C airson 8 uairean a thìde, a shìoladh agus a thiormachadh aig 50 ° C airson 3 uairean a thìde.
Chaidh stìorain (1 ml), beinsoile piorocsaid BPO (0.5 ml) agus mìrean silica ceangailte ri TEMPO-PMCP (1.5 g) a sgaoileadh ann an toluene agus an glanadh le naitridean. Chaidh poileimearachadh stìorain a dhèanamh aig 100°C airson 12 uair a thìde. Chaidh an toradh a thig às a nighe le methanol agus a thiormachadh thar oidhche aig 60°C. Tha sgeama coitcheann an ath-bhualaidh air a shealltainn ann am figear a h-aon.
Chaidh na sampallan a dhì-ghasadh aig 393 K airson 1 uair a thìde gus an d’ fhuaireadh cuideam fuigheallach nas lugha na 10–3 Torr. Chaidh an ìre de N2 a chaidh a ghlacadh aig cuideam coimeasach P/P0 = 0.99 a chleachdadh gus meud iomlan nam pores a dhearbhadh. Chaidh morf-eòlas mìrean silica fìor-ghlan agus ceangailte ri ligand a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh miocroscop sganaidh dealanach (Hitachi High Technologies, Tokyo, Iapan). Chaidh sampallan tioram (silica fìor-ghlan agus mìrean silica ceangailte ri ligand) a chur air slataichean alùmanaim a’ cleachdadh teip gualain. Chaidh òr a thasgadh air an sampall le bhith a’ cleachdadh inneal sputtering Q150T, agus chaidh sreath Au 5 nm de thighead a thasgadh air an sampall. Bidh seo a’ leasachadh èifeachdas a’ phròiseis bholtaids ìosal agus a’ toirt seachad frasadh fuar mìn. Chaidh mion-sgrùdadh eileamaideach a dhèanamh le bhith a’ cleachdadh anailisiche co-dhèanamh eileamaideach Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112. Chaidh anailisiche meud mìrean Malvern (Worcestershire, RA) Mastersizer 2000 a chleachdadh gus an sgaoileadh meud mìrean fhaighinn. Chaidh mìrean silica gun chòmhdach agus mìrean silica ceangailte ri ligand (5 mg gach fear) a sgaoileadh ann an 5 ml de isopropanol, an sonicachadh airson 10 mionaidean, an gluasad airson 5 mionaidean, agus an cur air beingidh optigeach Mastersizer. Tha mion-sgrùdadh teirmeagrafaimeatrach air a dhèanamh aig ìre 5 °C gach mionaid anns an raon teòthachd bho 30 gu 800 °C.
Chaidh colbhan stàilinn gun smal le lìnigeadh snàithleach-glainne agus tomhasan (ID 100 × 1.8 mm) a phacadh leis an dòigh lìonadh slurry a’ leantainn an aon mhodh-obrach ri iomradh 31. Chaidh colbh stàilinn gun smal (le lìnigeadh glainne, ID 100 × 1.8 mm) agus beul-doras anns an robh frit 1 µm a cheangal ri inneal pacaidh slurry (Alltech Deerfield, IL, USA). Ullaich crochadh den ìre statach le bhith a’ crochadh 150 mg den ìre statach ann an 1.2 ml de methanol agus ga bhiadhadh a-steach do cholbh stòr-tasgaidh. Chaidh methanol a chleachdadh mar an fhuasglaiche slurry agus an fhuasglaiche smachd. Pacaich an colbh le bhith a’ cur sreath cuideam de 100 MP an sàs airson 10 mionaidean, 80 MP airson 15 mionaidean, agus 60 MP airson 30 mionaidean. Chleachd am pròiseas pacaidh dà chreathadh colbh cromagrafaidheachd gas (Alltech, Deerfield, IL, USA) airson crith meacanaigeach gus dèanamh cinnteach à pacadh colbh cunbhalach. Dùin am pacaiche slurry agus leig às an cuideam gu slaodach gus casg a chuir air milleadh air an t-sreang. Chaidh an colbh a dhì-cheangal bhon t-sròin-uisge agus chaidh uidheamachadh eile a cheangal ris an in-ghabhail agus a cheangal ris an t-siostam LC gus a obrachadh a dhearbhadh.
Chaidh MLC gnàthaichte a thogail le bhith a’ cleachdadh pumpa LC (10AD Shimadzu, Iapan), samplair le lùb stealladh 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), inneal-dì-ghasaidh membran (Shimadzu DGU-14A), agus uinneag capillary UV-VIS. Inneal lorgaire (UV-2075) agus meanbh-cholbh cruanta. Cleachd tiùban ceangail glè chumhang is goirid gus buaidh leudachadh colbh a lughdachadh. Às deidh dhut an colbh a lìonadh, stàlaich capillary (50 µm id 365) aig beul an snaim lughdachadh 1/16″ agus stàlaich capillary (50 µm) den snaim lughdachadh. Tha cruinneachadh dàta agus giullachd cromatagram air an dèanamh le bhith a’ cleachdadh bathar-bog Multichro 2000. Aig 254 nm, chaidh gabhail UV nan anailitichean cuspaireil a sgrùdadh aig 0. Chaidh dàta cromatagrafach a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin serum daonna, pùdar liofilichte, ≥ 96% (electrophoresis gel agarose) 3 mg measgaichte le trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) agus 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml). Chaidh am fuasgladh a mheasgachadh airson 10 mionaidean agus a chumail ann an amar-uisge aig 37°C airson 6 uairean a thìde, agus an uairsin a mhùchadh le 1 ml de 0.1% TFA. Criathraich am fuasgladh agus stòraich fo 4°C.
Chaidh measadh air leth a dhèanamh air sgaradh measgachadh de pheptidean agus HSA cnàmhaidh tryptic air colbh PMP. Thoir sùil air hydrolysis tryptic measgachadh de pheptidean agus HSA air an sgaradh le colbh PMP agus dèan coimeas eadar na toraidhean agus colbh Ascentis Express RP-Amide. Tha an àireamh de phlàtaichean teòiridheach air a thomhas a’ cleachdadh na co-aontar a leanas:
Tha ìomhaighean SEM de ghràineanan silica fìor-ghlan agus gràinean silica ceangailte ri ligand air an sealltainn ann am Figear 2. Tha ìomhaighean SEM de ghràineanan silica fìor-ghlan (A, B) a’ sealltainn cumadh cruinn anns a bheil na gràinean air an sìneadh no le co-chothromachd neo-riaghailteach an taca ris na sgrùdaidhean a bh’ againn roimhe. Tha uachdar nam gràinean silica ceangailte ris an ligand (C, D) nas socair na uachdar nam gràinean silica fìor-ghlan, agus is dòcha gur ann air sgàth nan slabhraidhean polystyrene a tha a’ còmhdach uachdar nam gràinean silica a tha seo.
Micreagrafan dealanach sganaidh de ghràineanan silica fìor-ghlan (A, B) agus gràinean silica ceangailte ri ligand (C, D).
Tha sgaoileadh meud nam mìrean de ghràinean silica fìor-ghlan agus mìrean silica ceangailte ri ligand air a shealltainn ann am Figear 2.3(A). Sheall lùban sgaoileadh meud nam mìrean toirteil gun do dh’àrdaich meud nam mìrean silica às dèidh atharrachadh ceimigeach (Figear 3A). Tha dàta sgaoileadh meud nam mìrean silica bhon sgrùdadh làithreach agus an sgrùdadh roimhe air an coimeas ann an Clàr 1(A). B’ e meud toirteil nam mìrean d(0.5) de PMP 3.36 µm, an taca ri luach ad(0.5) de 3.05 µm san sgrùdadh roimhe againn (mìrean silica ceangailte ri polystyrene)34. Air sgàth an atharrachaidh ann an co-mheas PEG, urea, TMOS agus searbhag aiseatach anns a’ mheasgachadh ath-bhualadh, bha sgaoileadh meud nam mìrean den bhaidse seo nas cumhainge an taca ris an sgrùdadh roimhe againn. Tha meud nam mìrean den ìre PMP beagan nas motha na meud na h-ìre mìrean silica ceangailte ri polystyrene a rinn sinn sgrùdadh air na bu thràithe. Tha seo a’ ciallachadh nach do chuir gnìomhachadh uachdar mìrean silica le styrene ach sreath polystyrene (0.97 µm) air uachdar an t-silica, agus anns an ìre PMP b’ e 1.38 µm tighead an t-sreath.
Sgaoileadh meud mìrean (A) agus sgaoileadh meud nan pores (B) de mhìrean silica fìor-ghlan agus mìrean silica ceangailte ri ligand.
Tha meud nam pores, meud nam pores, agus farsaingeachd uachdar nam mìrean silica a chaidh a chleachdadh san sgrùdadh seo air an sealltainn ann an Clàr 1 (B). Tha pròifilean PSD nam mìrean silica fìor-ghlan agus nam mìrean silica ceangailte ri ligand air an sealltainn ann am Figearan 3 (B). Bha na toraidhean co-chosmhail ris an sgrùdadh roimhe againn34. Bha meudan nam pores de na mìrean silica fìor-ghlan agus ceangailte ri ligand 310 Å agus 241 Å, fa leth, a’ nochdadh às dèidh atharrachadh ceimigeach, gun do lùghdaich meud nam pores le 69 Å, mar a chithear ann an Clàr 1 (B), agus tha an lùb gluasaid air a shealltainn ann am Figear. Tha farsaingeachd uachdar sònraichte nam mìrean silica san sgrùdadh làithreach 116 m2/g, a tha co-chosmhail ris an sgrùdadh roimhe againn (124 m2/g). Mar a chithear ann an Clàr 1 (B), lùghdaich farsaingeachd uachdar (m2/g) nam mìrean silica às dèidh atharrachadh ceimigeach cuideachd bho 116 m2/g gu 105 m2/g.
Tha toraidhean mion-sgrùdadh eileamaideach na h-ìre statach air an taisbeanadh ann an Clàr 2. Tha susbaint gualain na h-ìre statach làithreach 6.35%, a tha nas ìsle na anns an sgrùdadh roimhe againn (mìrean silica co-cheangailte ri polystyrene, 7.93%35 agus 10.21%, fa leth)42. Tha susbaint gualain na h-ìre statach làithreach gu h-ìosal, leis gu bheil cuid de ligands pòlar leithid phenylmaleimide methyl vinyl isocyanate (PCMP) agus 4-hydroxy-TEMPO air an cleachdadh a bharrachd air styrene ann an ullachadh SP. Tha ceudad cuideam naitridein anns an ìre statach làithreach 2.21% an taca ri 0.1735 agus 0.85% ann an sgrùdaidhean roimhe42. Tha seo a’ ciallachadh gu bheil ceudad cuideam àrd de naitridein anns an ìre statach làithreach air sgàth a’ phenylmaleimide. San aon dòigh, tha susbaint gualain de 2.7% agus 2.9%, fa leth, anns na toraidhean (4) agus (5), agus tha susbaint gualain de 6.35% anns an toradh deireannach (6), mar a chithear ann an Clàr 2. Chaidh mion-sgrùdadh teirmeagrafaimeatrach (TGA) a chleachdadh air ìre statach PMP gus call cuideim a dhearbhadh, agus chithear lùb an TGA ann am Figear 4. Tha lùb an TGA a’ sealltainn call cuideim de 8.6%, a tha a rèir an t-susbaint gualain (6.35%), leis gu bheil chan e a-mhàin C anns na ligands, ach cuideachd N, O agus H.
Chaidh an ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate a thaghadh gus uachdar nam mìrean silica atharrachadh air sgàth a bhuidhnean polar phenylmaleimide agus vinylisocyanate. Faodaidh buidhnean vinyl isocyanate ath-bhualadh a bharrachd le styrene le bhith a’ poileimearachadh radaigeach beò. Is e an dàrna adhbhar buidheann a chuir a-steach aig a bheil eadar-obrachaidhean meadhanach leis an anailit agus gun eadar-obrachaidhean electrostatach làidir eadar an anailit agus an ìre statach, leis nach eil cosgais fhìor-dhealbhach aig a’ phàirt phenylmaleimide aig pH àbhaisteach. Faodar smachd a chumail air polarity na h-ìre statach leis an ìre as fheàrr de styrene agus an ùine ath-bhualadh den phoileimearachadh radaigeach saor. Tha an ceum mu dheireadh den ath-bhualadh (poileimearachadh radaigeach saor) deatamach oir tha e ag atharrachadh polarity na h-ìre statach. Chaidh mion-sgrùdadh eileamaideach a dhèanamh gus sgrùdadh a dhèanamh air susbaint gualain anns na h-ìrean statach seo. Chaidh fhaicinn gu bheil àrdachadh na tha de styrene agus an ùine ath-bhualadh ag àrdachadh susbaint gualain na h-ìre statach agus a chaochladh. Tha luchdan gualain eadar-dhealaichte aig SPan a chaidh ullachadh le diofar dùmhlachdan de styrene. San aon dòigh, chaidh na h-ìrean statach seo a chur air colbhan stàilinn gun smal agus chaidh na feartan cromagrafach aca (roghnachd, rùn, luach N, msaa.) a sgrùdadh. Stèidhichte air na deuchainnean seo, chaidh co-dhèanamh leasaichte airson ullachadh ìre statach PMP a thaghadh gus polarity fo smachd agus deagh chumail an anailit a thoirt seachad.
Chaidh colbh PMP a mheasadh cuideachd airson mion-sgrùdadh còig measgachaidhean de pheptidean (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) a’ cleachdadh comas na h-ìre gluasadach. 60/40 (v/v) ACN/uisge (0.1% TFA) aig ìre sruthadh de 80 µl/min. Fo chumhachan elution as fheàrr (200,000 truinnsear/m²), tha an àireamh de phlàtaichean teòiridheach (N) gach colbh (100 × 1.8 mm) 20,000 ± 100. Tha na luachan N airson nan trì colbhan PMP air an sealltainn ann an Clàr 3 agus tha na cromatograman air an sealltainn ann am Figear 5A. Mion-sgrùdadh luath aig ìre sruthadh àrd (700 µl/min) air colbh PMP, còig peptidean air an sgaoileadh taobh a-staigh aon mhionaid, luach N sàr-mhath de 13,500 ± 330 gach colbh (trast-thomhas 100 x 1.8 mm), co-ionann ri 135,000 truinnsear/m (Figear 5B). Chaidh trì colbhan den aon mheud (trast-thomhas a-staigh 100 x 1.8 mm) a lìonadh le trì baidsean eadar-dhealaichte de ìre statach PMP gus ath-riochdachadh a dhearbhadh. Chaidh anailisichean a chlàradh airson gach colbh le bhith a’ sgaradh an aon mheasgachadh deuchainn air gach colbh a’ cleachdadh suidheachaidhean sgaoilidh as fheàrr, àireamh de phlàtaichean teòiridheach N, agus ùine gleidhidh. Tha an dàta ath-riochdachadh airson colbhan PMP air a shealltainn ann an Clàr 4. Bha ath-riochdachadh colbh PMP co-cheangailte gu math ri luachan %RSD glè ìosal mar a chithear ann an Clàr 3.
Sgaradh mheasgachaidhean peptide air colbh PMP (B) agus colbh Ascentis Express RP-Amide (A), ìre gluasadach 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), tomhasan colbh PMP (100 x 1.8 mm id), òrdugh elution nan todhar: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) agus 5 (enkephalin searbhag leucic).
Chaidh colbh PMP (trast-thomhas a-staigh 100 x 1.8 mm) a mheasadh airson dealachadh hydrolyzate tryptic de albumin serum daonna le HPLC. Tha an cromatogram ann am Figear 6 a’ sealltainn gu bheil na sampallan air an sgaradh gu math le rùn glè mhath. Chaidh fuasglaidhean HSA a sgrùdadh a’ cleachdadh ìre sruthadh de 100 μl / min, ìre gluasadach de 70/30 acetonitrile / uisge agus 0.1% TFA. Chaidh sgoltadh HSA a roinn ann an 17 stùcan, mar a chithear anns a’ chromatogram (Figear 6), a tha a’ freagairt ri 17 peptides. Chaidh èifeachdas dealachaidh stùcan fa leth bhon hydrolyzate HSA obrachadh a-mach agus tha na luachan air an sealltainn ann an Clàr 5.
Chaidh hydrolysates tryptic HSA a sgaradh air colbh PMP (trast-thomhas a-staigh 100 x 1.8 mm), ìre sruthadh (100 μl/min), ìre gluasadach 60/40 acetonitrile/uisge, agus 0.1% TFA.
far a bheil L fad a’ cholbh, η slaodachd na h-ìre gluasadach, ΔP cuideam cùil a’ cholbh, agus u astar loidhneach na h-ìre gluasadach. B’ e 2.5 × 10–14 m2 treòiteachd colbh PMP, b’ e 25 µl/min an ìre sruth, chaidh 60/40 v/v a chleachdadh. ACN/uisge. Bha treòiteachd colbh PMP (ID 100 × 1.8 mm) coltach ris an fhear san sgrùdadh Ref.34 againn roimhe. Tha treòiteachd colbh làn de ghràineanan uachdarach porous 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 airson gràineanan 5 µm43. Mar sin, tha treòiteachd ìre PMP coltach ri treòiteachd gràineanan cridhe-shlige le meud 5 μm.
far a bheil Wx na mhais den cholbh air a lìonadh le clòroform, Wy na mhais den cholbh air a lìonadh le methanol, agus ρ na dùmhlachd den fhuasglaiche. Dùmhlachd methanol (ρ = 0.7866) agus clòroform (ρ = 1.484). B’ e 0.63 agus 0.55, fa leth, truailleachd iomlan colbh gràinean silica-C18 (100 × 1.8 mm ID)34 agus an colbh C18-urea31 a chaidh a sgrùdadh roimhe. Tha seo a’ ciallachadh gu bheil làthaireachd ligands urea a’ lughdachadh treòiteachd na h-ìre statach. Air an làimh eile, tha truailleachd iomlan colbh PMP (trast-thomhas a-staigh 100 × 1.8 mm) 0.60. Tha colbhan PMP nas lugha treòiteachd na colbhan air am pacadh le gràinean silica ceangailte ri C18 oir ann an ìrean statach de sheòrsa C18 tha na ligands C18 ceangailte ris na gràinean silica ann an slabhraidhean loidhneach, agus ann an ìrean statach de sheòrsa polystyrene tha polymer an ìre mhath tiugh air a chruthachadh timcheall air na gràinean. sreath A. Ann an deuchainn àbhaisteach, thèid porosity colbh obrachadh a-mach mar a leanas:
Air fig. 7A, B, tha plotaichean Van Deemter a’ sealltainn airson colbh PMP (inn. trast-thomhas 100 x 1.8 mm) agus colbh Ascentis Express RP-Amide (inn. trast-thomhas 100 x 1.8 mm) fo na h-aon chumhachan elution, 60/40 ACN/H2O agus 0.1% TFA 20 µl/min gu 800 µl/min air an dà cholbh. B’ e na luachan HETP as ìsle aig an ìre sruthadh as fheàrr (80 µl/min) 2.6 µm agus 3.9 µm airson colbh PMP agus colbh Ascentis Express RP-Amide, fa leth. Tha na luachan HETP a’ sealltainn gu bheil èifeachdas dealachaidh colbh PMP (inn. trast-thomhas 100 x 1.8 mm) mòran nas àirde na èifeachdas dealachaidh colbh Ascentis Express RP-Amide a tha ri fhaighinn gu malairteach (inn. trast-thomhas 100 x 1.8 mm). Tha graf van Deemter ann am Figear 7(A) a’ sealltainn nach eil an lùghdachadh ann an luach N gu math nas àirde le sruthadh a’ sìor fhàs an taca ris an sgrùdadh roimhe againn. Tha èifeachdas dealachaidh nas àirde colbh PMP (id 100 × 1.8 mm) an taca ri colbh Ascentis Express RP-Amide stèidhichte air cumadh is meud mìrean nas fheàrr agus an dòigh-obrach pacaidh colbh iom-fhillte a thathas a’ cleachdadh san obair làithreach34.
(A) Plot Van Deemter (HETP an aghaidh astar loidhneach ìre gluasadach) a fhuaireadh air colbh PMP (eadar-mheud 100 x 1.8 mm) ann an 60/40 ACN/H2O le 0.1% TFA. (B) Plot Van Deemter (HETP an aghaidh astar loidhneach ìre gluasadach) a fhuaireadh air colbh Ascentis Express RP-Amide (eadar-mheud 100 x 1.8 mm) ann an 60/40 ACN/H2O le 0.1% TFA.
Chaidh ìre statach pòlar de phoileistiréin eadar-fhighte ullachadh agus a mheasadh airson sgaradh measgachadh de pheptidean synthetigeach agus hydrolyzate tryptic de albumin serum daonna (HSA) ann an cromagrafaidheachd leaghaidh àrd-choileanaidh. Tha coileanadh cromagrafaidheachd cholbhan PMP airson measgachaidhean peptide sàr-mhath a thaobh èifeachdas dealachaidh agus rùn. Tha an èifeachdas dealachaidh nas fheàrr de cholbhan PMP mar thoradh air grunn adhbharan leithid meud gràinean silica agus meud pore, co-chur fo smachd de ìrean statach, agus stuthan pacaidh colbh iom-fhillte. A bharrachd air an èifeachdas dealachaidh àrd, is e buannachd eile den ìre statach seo an cuideam cùil ìosal colbh aig ìrean sruthadh àrd. Tha colbhan PMP gu math ath-riochdachadh agus faodar an cleachdadh gus measgachadh de pheptidean agus cnàmhadh tryptic diofar phròtainean a sgrùdadh. Tha sinn an dùil an colbh seo a chleachdadh airson sgaradh choimeasgaidhean bith-ghnìomhach bho thoraidhean nàdarra, earrannan de lusan cungaidh-leighis agus balgan-buachair ann an cromagrafaidheachd leaghaidh. San àm ri teachd, thèid colbhan PMP a mheasadh cuideachd airson sgaradh phròtainean agus antibodies monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Rannsachadh air siostaman dealachaidh peptide cromatagrafaidheachd ìre-aiseig pàirt I: Leasachadh pròtacal airson caractarachadh colbh. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Rannsachadh air siostaman dealachaidh peptide cromatagrafaidheachd ìre-aiseig pàirt I: Leasachadh protocol airson comharrachadh colbh.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., agus Petersson, P. Rannsachadh air Siostaman Dealachaidh Peptide le Cromatagrafaidheachd Ìre-Thilleadh, Pàirt I: A’ Leasachadh Pròtacal airson Comharrachadh Colbh. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Rannsachadh air siostaman dealachaidh peptide cromatagrafaidheachd ìre-aiseig pàirt I: Leasachadh protocol airson feartan colbh. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Rannsachadh air siostaman dealachaidh peptide cromatagrafaidheachd ìre-aiseig pàirt I: Leasachadh protocol airson feartan colbh.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., agus Petersson, P. Rannsachadh air Siostaman Dealachaidh Peptide le Cromatagrafaidheachd Ìre-Thilleadh, Pàirt I: A’ Leasachadh Pròtacal airson Comharrachadh Colbh.J.色谱法, 1603, 113-129 。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Modhan airson peptidean gnìomhach leasaichte a chruthachadh airson làimhseachadh ghalaran gabhaltach. Bith-theicneòlas. Achievements 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptidean leigheasach sintéiseach: Saidheans agus margaidh. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptidean leigheasach sintéiseach: Saidheans agus margaidh.Vliege P, Lisowski V, Martinez J agus Chreschatyski M. Peptidean leigheasach sintéiseach: saidheans agus margaidh.Vliege P, Lisowski V, Martinez J agus Khreschatsky M. Peptidean leigheasach sintéiseach: saidheans agus margaidh. lorg dhrogaichean. An-diugh 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Cromatagrafaidheachd leaghaidh proteomic adhartach. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Cromatagrafaidheachd leaghaidh proteomic adhartach.Faic F., Smith RD agus Shen Yu. Cromatagrafaidheachd leachtach proteomic adhartach. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Co-dhèanamh pròtain adhartach 液相色谱.Faic F., Smith RD agus Shen Yu. Cromatagrafaidheachd leachtach proteomic adhartach.J. Cromatagrafaidheachd. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Tha cromatagrafaidheachd leaghaidh adhartach-speictreamachd mais comasach air metabolomics farsaing agus proteomics a chur còmhla. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Dreuchd UHPLC ann an leasachadh cungaidhean-leigheis. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Dreuchd UHPLC ann an leasachadh cungaidhean-leigheis.Chesnut, SM agus Salisbury, JJ Dreuchd UHPLC ann an leasachadh cungaidhean-leigheis.Chesnut, SM agus Salisbury, JJ Dreuchd UHPLC ann an leasachadh dhrogaichean. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Taobhan bunaiteach is practaigeach de chromatagrafaidheachd leaghaidh bruthadh-fala àrd airson dealachaidhean luath. Wu, N. & Clausen, AM Taobhan bunaiteach is practaigeach de chromatagrafaidheachd leaghaidh bruthadh-fala àrd airson dealachaidhean luath.Wu, N. agus Clausen, AM. Taobhan bunaiteach is practaigeach de chromatagrafaidheachd lionn àrd-bhruthadh airson dealachadh luath. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面. Wu, N. & Clausen, AM Taobhan bunaiteach is practaigeach de chromatagrafaidheachd leaghaidh fo chuideam fìor àrd airson dealachadh luath.Wu, N. agus Clausen, AM. Taobhan bunaiteach is practaigeach de chromatagrafaidheachd lionn àrd-bhruthadh airson dealachadh luath.Iris Saidheans an t-Sultain. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Cleachdadh cròmatagrafaidheachd leaghaidh ultra-choileanaidh ann an leasachadh cungaidhean-leigheis. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Cleachdadh cròmatagrafaidheachd leaghaidh ultra-choileanaidh ann an leasachadh cungaidhean-leigheis.Ren, SA agus Chelischeff, P. Cleachdadh cròmatagrafaidheachd leaghaidh fìor àrd-choileanaidh ann an leasachadh cungaidhean-leigheis. Dreothaich, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA agus Chelischeff, P. Cleachdadh cròmatagrafaidheachd leaghaidh ultra-choileanaidh ann an leasachadh dhrogaichean.J. Cromatagrafaidheachd. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hydrogel macroporous monolithic air a thoirt bho emulsion ola-ann-uisge le ìre àrd a-staigh airson glanadh èifeachdach enterovirus 71. Ceimigeach. pròiseact. Iris 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Dreuchd cròmatagrafaidheachd leaghaidh ann am pròtain-eòlas. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Dreuchd cròmatagrafaidheachd leaghaidh ann am pròtain-eòlas.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. agus Wilkins, JA Dreuchd cròmatagrafaidheachd leaghaidh ann am pròtain-eòlas. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. agus Wilkins, JA Dreuchd cròmatagrafaidheachd leaghaidh ann am pròtain-eòlas.J. Cromatagrafaidheachd. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Gluasadan ùra ann an dealachaidhean cròmagrafaigeach leaghaidh ìre-aiseig de pheptidean agus phròtainean leigheasach: Teòiridh agus tagraidhean. & Guillarme, D. Gluasadan ùra ann an dealachaidhean cròmagrafaigeach leaghaidh ìre-aiseig de pheptidean agus phròtainean leigheasach: Teòiridh agus tagraidhean. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов agus белков с помощью жидкостной хгомио ìomhaigh: теория и priложения . & Guillarme, D. Gluasadan ùra ann an dealachadh peptidean leigheasach agus pròtainean le cromagrafaidheachd leaghaidh ìre cùil: teòiridh agus tagraidhean. & Guillerme, D. & Guillarme, D.agus Guillarmé, D. Gluasadan ùra ann an dealachadh peptidean leigheasach agus pròtainean le cromagrafaidheachd leaghaidh ìre cùil: teòiridh agus tagraidhean.J. Pharm. Saidheans Bith-mheidigeach. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Sgaradh dà-thaobhach de pheaptaidean a’ cleachdadh siostam RP-RP-HPLC le pH eadar-dhealaichte anns a’ chiad agus an dàrna tomhas dealachaidh. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Sgaradh dà-thaobhach de pheaptaidean a’ cleachdadh siostam RP-RP-HPLC le pH eadar-dhealaichte anns a’ chiad agus an dàrna tomhas dealachaidh.Gilar M., Olivova P., Dali AE agus Gebler JK Sgaradh dà-thaobhach de pheaptaidean a’ cleachdadh an t-siostam RP-RP-HPLC le pH eadar-dhealaichte anns a’ chiad agus an dàrna tomhas dealachaidh.Gilar M., Olivova P., Dali AE agus Gebler JK Sgaradh dà-thaobhach de pheiptidean a’ cleachdadh diofar luachan pH anns a’ chiad agus an dàrna tomhas dealachaidh a’ cleachdadh siostam RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Rannsachadh air feartan gluasad mais agus cineatach cholbhan cromatagrafaidheachd àrd-choileanaidh air am pacadh le mìrean C18 làn-shùghach agus uachdarach-shùghach nas lugha na 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Gluasadan o chionn ghoirid agus dùbhlain anailis ann an aonaranachd, comharrachadh agus dearbhadh peptidean bith-ghnìomhach planntrais. anus. Creature anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Cruth-tìre pròtaineach rìoghachd na beatha. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Làimhseachadh às dèidh peptidean leigheasach le cromatagrafaidheachd leaghaidh ullachaidh. Molecules (Basel, an Eilbheis) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Cromatagrafaidheachd measgaichte-mhodh agus a cleachdaidhean ann am bith-phoilimearan. Yang, Y. & Geng, X. Cromatagrafaidheachd measgaichte-mhodh agus a cleachdaidhean ann am bith-phoilimearan.Yang, Yu. agus Geng, X. Cromatagrafaidheachd measgaichte agus a chur an sàs ann am biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Yang, Y. & Geng, X. Cromatagrafaidheachd measgaichte agus a cleachdadh ann am bith-phoileimeirean.Yang, Yu. agus Gene, X. Cromatagrafaidheachd measgaichte agus a chur an sàs ann am biopolymers.J. Cromatagrafaidheachd. A 1218(49), 8813–8825 (2011).