"Nunca dubides de que un pequeno grupo de cidadáns reflexivos e dedicados pode cambiar o mundo. De feito, é o único que existe."
A misión de Cureus é cambiar o modelo de publicación médica de longa data, no que a presentación de investigacións pode ser cara, complexa e levar moito tempo.
Plasma rico en plaquetas/prp, rexeneración tisular, activación plaquetaria, terapia proliferativa da glicosa, plaquetas, terapia proliferativa
Citar este artigo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 de maio de 2022) O efecto da glicosa na conta e volume de plaquetas: implicacións para a medicina rexenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
O plasma rico en plaquetas (PRP) e as solucións de glicosa hipertónica úsanse habitualmente para a inxección en medicina rexenerativa, ás veces conxuntamente. O efecto da glicosa hipertónica sobre a lise e a activación das plaquetas non se informou previamente. Probamos o efecto das concentracións elevadas de glicosa nas contagens de plaquetas e eritrocitos, así como nos volumes celulares en PRP e sangue enteiro (WB). Produciuse unha rápida redución parcial na contagens de plaquetas con todas as mesturas de glicosa mesturadas con PRP ou sangue enteiro, o que é consistente coa lise parcial. Despois do primeiro minuto, as contagens plaquetarias permaneceron estables, o que suxire unha rápida acomodación das plaquetas residuais a unha hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). Despois do primeiro minuto, as contagens plaquetarias permaneceron estables, o que suxire unha rápida acomodación das plaquetas residuais a unha hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на ставалось стабильным остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Despois do primeiro minuto, a conta de plaquetas mantívose estable, o que indica unha rápida acomodación das plaquetas residuais a unha hipertonicidade extrema (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на зывает на боцитов оставалось стабильным остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Despois do primeiro minuto, a conta de plaquetas permaneceu estable, o que indica unha rápida adaptación das plaquetas residuais ao estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).As concentracións de glicosa do 25 % ou superiores provocaron un aumento significativo do volume plaquetario medio (VPM), o que indica unha fase temperá da activación plaquetaria. Necesítanse máis estudos para determinar se se produce a lise ou a activación plaquetaria e se a inxección hipertónica de glicosa, soa ou en combinación con PRP, pode proporcionar un beneficio clínico adicional.
Na década de 1950, o cirurxián estadounidense George Hackett descubriu que podía aliviar permanentemente a dor nas articulacións e nas costas en moitos pacientes inxectando unha solución proliferativa nos tendóns e ligamentos. Os seus experimentos con coellos demostraron que o tratamento, ao que chamou terapia proliferativa, provocaba que os tendóns se agrandasen e fortalecesen. Os estudos histolóxicos confirmaron que se produce novo coláxeno durante este proceso [1].
Durante as primeiras décadas, probáronse moitas solucións de distribución diferentes. Na década de 1990, a maioría dos profesionais consideraban que as concentracións elevadas de glicosa eran o método máis seguro e eficaz. Non obstante, o mecanismo de acción segue sen estar claro.
Realizáronse poucos estudos clínicos no século XX despois do traballo de Hackett. Non obstante, na década de 2000 houbo un renovado interese e completáronse varios ensaios clínicos exitosos de terapia proliferativa para o tratamento da dor lumbar [2], a osteoartrite de xeonllo [3] e a epicondilite lateral [4].
A rexeneración de tecidos require a participación de células nai. Polo tanto, as altas concentracións de glicosa deben inducir dalgún xeito a migración, a replicación e a diferenciación das células nai. A nosa hipótese é que as plaquetas poden actuar como mensaxeiras e que as altas concentracións de glicosa poden facer que as plaquetas liberen citocinas e factores de crecemento, promovendo así os procesos rexenerativos, especialmente a migración de células nai a zonas con altas concentracións de glicosa.
A activación plaquetaria sempre precede a un aumento do calcio intracelular [5]. Liu et al. demostraron en 2008 que os niveis altos de glicosa aumentan a actividade dos canais de potencial receptor transitorio de tipo canónico 6 (TRPC6) na membrana plasmática, o que leva a un influxo de ións de calcio nas plaquetas [6]. Outro estudo mostrou que a exposición da zona marxinal dos microtúbulos aos ións de calcio provoca relaxación, expansión e deformación da zona marxinal, o que á súa vez provoca un cambio de forma de disco a esférica, o que resulta no volume plaquetario medio (VPM) [7].
A nosa hipótese neste estudo é que a exposición das plaquetas a altas concentracións de glicosa afecta a zona marxinal dos microtúbulos e o ambiente intracelular, o que leva a un aumento do MPV.
Todos os participantes asinaron un formulario de consentimento informado despois de que se lles explicasen os detalles do estudo e antes de recibir as mostras. Neste estudo, só se empregaron mostras de PRP cun hematocrito superior ao 2 % para poder incluír a conta de eritrocitos e o volume corpuscular medio de glóbulos vermellos (VCM) para a súa comparación.
O estudo realizouse en catro fases, a primeira fase foi PRP e as fases restantes foron sangue enteiro (Táboa 1). Como se describiu anteriormente [8], todas as forzas centrífugas relativas (RCF, forza g) calculáronse a partir do punto medio (Rmid, en cm) da columna de sangue na xiringa centrífuga. Escollemos usar o MPV como marcador de sensibilización plaquetaria e a conta de plaquetas como indicador de posible lise plaquetaria, ambos os cales se poden medir facilmente en analizadores hematolóxicos estándar.
Na primeira fase, 47 voluntarios doaron mostras de sangue: un tubo de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) e unha mostra de sangue completo con PRP (anticoagulado con citrato de sodio (NaCl, 3 %)) (Táboa 1). Coloque o balancín no tubo inmediatamente. Realizouse un hemograma completo (CBC) en mostras de EDTA por triplicado e as mostras de NaCl analizáronse por triplicado para a análise de CBC, e despois preparouse PRP mediante varios métodos descritos anteriormente [8]. Todas as mostras de PRP preparáronse por centrifugación a 900–1000 g. Mesture cada mostra de PRP nun mesturador vortex durante 5–10 segundos e despois divida cinco alícuotas de 0,5 ml en tubos.
Para avaliar o efecto da exposición ás plaquetas nas concentracións elevadas de glicosa, mesturáronse cantidades iguais (0,5 ml) de glicosa ao 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % e 50 % en auga con mostras de plaquetas para obter concentracións do 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % e 25 % da mestura de glicosa e mesturáronse os tubos nun axitador de tubos de ensaio durante 15 minutos. O TAC de cada mestura analizouse por triplicado despois de 15 minutos. Calculouse a media da conta de plaquetas (PLT), a conta de eritrocitos, o VCM e o VPM para cada tubo, e calculáronse as medias da conta de plaquetas, a conta de eritrocitos, o VCM e o VPM para todas as mostras de PRP.
Despois de completar a primeira fase de recollida de datos, observamos un aumento significativo no volume plaquetario nas plaquetas de PRP despois de engadir D50W. As plaquetas de PRP non representan necesariamente todas as plaquetas do sangue e o medio PRP difire do medio WB. Polo tanto, decidimos realizar unha segunda fase de ensaio para ver o efecto de engadir D50W a sangue enteiro.
Para a segunda rolda, escollemos un tamaño de mostra de 30 baseándonos nos resultados da primeira serie, como se describe na sección Análise. Nesta serie, 20 voluntarios doaron mostras de sangue (Táboa 1). Extraeuse sangue enteiro (1,8 ml) nunha xiringa de 3 ml e anticoagulouse con 0,2 ml de NaCl ao 40 %. A xiringa de sangue enteiro mesturouse durante cinco segundos cun mesturador vortex e analizouse o hemograma completo por triplicado. Despois da análise, engadiuse sangue anticoagulado a 2 ml de glicosa ao 50 % nunha xiringa de 5 ml (a concentración final de glicosa foi de aproximadamente o 25 % (D25)) e colocouse nun tubo de axitación durante 30 minutos. Despois de 30 minutos, analizáronse por triplicado o D25/hemograma completo en xeringas de sangue de vaca. Calculouse a media da conta de plaquetas, a conta de eritrocitos, o VCM e o VPM por xiringa, e calculáronse as medias de plasma plaquetario (PLT), conta de eritrocitos, VCM e VPM para cada mostra antes e despois de engadir glicosa.
Dado que as plaquetas do sangue enteiro adoitan estar expostas á glicosa hipertónica durante a terapia proliferativa con glicosa debido á inxección minimamente invasiva, e non é común combinar PRP con glicosa hipertónica xusto antes da inxección, decidimos estudar a glicosa hipertónica en combinación con WB na Sección 1, Pasos tres e catro. En cada etapa, 20 voluntarios doaron de 7 a 8 ml de ACD-A (ácido que contén citrato trisódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) e glicosa (24,5 g/l), solución de citrato de dextrosa) para anticoagulantes sanguíneos (Táboa 1). Só se utilizaron mesturas de glicosa superiores ao 12,5 % para determinar a porcentaxe limiar asociada a un aumento do MPV. Na terceira etapa, colócase 1 ml de sangue nun tubo de ensaio. A continuación, mesture o sangue nun mesturador vortex durante 10 segundos engadindo 1 ml de glicosa ao 30 %, glicosa ao 40 % ou glicosa ao 50 % ao tubo para obter unha concentración final de glicosa do 15 %, 20 % e 25 %, respectivamente. As mostras de sangue con glicosa analizáronse para detectar hemograma completo inmediatamente despois da mestura e repetiuse cada dous minutos durante 30 minutos.
Durante a mestura inicial, a adición de glicosa hipertónica 1:1 e WB ou PRP expón as plaquetas a concentracións superiores ao 25 ​​% durante varios segundos. No cuarto paso, para avaliar o efecto da glicosa hipertónica con concentracións máximas iniciais mínimas e probar o límite superior do efecto da glicosa, engadimos só unha pequena cantidade de sangue a D25W ou D50W. Coloque 1 ml de D25W ou D50W nun tubo e engada 0,2 ml de WB mentres axita a mostra en vórtice durante 10 segundos. Nestes casos, o sangue expúxose á glicosa a unha concentración aproximadamente un 20 % por riba da concentración final, en lugar dun 50 % por riba da concentración final como na Fase 3, o que resultou en concentracións finais de glicosa do 20,8 % e o 41,6 %. As mostras mesturadas analizáronse no mesmo intervalo de tempo que no paso 3.
No primeiro paso de cada serie de dilución de glicosa, tomáronse 30 mostras, xa que este era o tamaño de mostra axeitado para o estudo piloto [9]. Ao final de cada fase (incluída a primeira fase), avaliar a idoneidade do tamaño da mostra usando a fórmula utilizada para determinar o tamaño da mostra necesario para estimar a media da variable de resultado continua nunha poboación. Fórmula n = Z2 x SD2 /E2. Nesta ecuación, Z é a puntuación Z, a SD é a desviación estándar e E é o erro desexado [10]. O noso alfa é 0,05, o que corresponde a un valor Z de 1,96, e esperamos un erro de 5 (en porcentaxe). Polo tanto, resolvemos para n = (1,962 x SD2)/52. Os resultados mostraron que o tamaño da mostra necesario para cada etapa era menor que o número real recollido.
Durante os períodos 1, 3 e 4 empregando máis dunha concentración de glicosa, analizouse o efecto das diferentes concentracións de glicosa comparando o cambio fraccionario entre o tempo 0 e cada tempo posterior (fase 1 aos 15 minutos, período 3 aos 15 minutos) e catro aos 15 segundos, e despois cada dous minutos). As taxas de cambio para cada período de tempo comparáronse mediante a proba U de Mann-Whitney porque os datos non seguían unha distribución normal segundo a determinación da proba de normalidade de Shapiro-Wilk. Dado que se realizou unha análise 1 a 1 de varios grupos (cinco) no primeiro, terceiro e cuarto pasos (cinco en total), realizouse unha corrección de Bonferroni para axustar o valor alfa desexado a ≤0,01 pero non ≤0,05.
Redución da conta de plaquetas con todas as concentracións de dextrosa hipertónica e un aumento do MPV nas plaquetas de PRP a unha concentración de dextrosa >12,5 %: a conta de plaquetas de PRP aumentou de unha a cinco veces a concentración en comparación co sangue enteiro basal, variando segundo o método (non representado). Redución da conta de plaquetas con todas as concentracións de dextrosa hipertónica e un aumento do MPV nas plaquetas de PRP a unha concentración de dextrosa >12,5 %: a conta de plaquetas de PRP aumentou de unha a cinco veces a concentración en comparación co sangue enteiro basal, variando segundo o método (non representado). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов MP3 тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличитов строзы 12,5% сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Diminución da conta de plaquetas a todas as concentracións hipertónicas de dextrosa e aumento do MPV nas plaquetas de PRP a unha concentración de dextrosa >12,5 %: a conta de plaquetas de PRP aumentou de 1 a 5 veces en comparación co sangue completo basal, dependendo do método (non se mostra). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 数，丰度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血孏板增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法，张方法／而氏浓度的1 Cunha concentración de glicosa >12,5 %, a alta concentración de glicosa reduce o recuento sanguíneo, o MPV sanguíneo de PRP aumenta: en comparación co tratamento con bacterias Xeroglíficas, o recuento sanguíneo de PRP aumenta de 1 a 5 veces superior á concentración (non descrito). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижтали ксолиции тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от51--рах от51 концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от мето (sen descrición). Con concentracións de glicosa >12,5 %, todas as concentracións de glicosa hipertensiva diminuíron as contas de plaquetas e aumentaron o MPV nas plaquetas de PRP: as contas de plaquetas de PRP aumentaron de 1 a 5 veces en comparación coas concentracións basais en sangue completo, dependendo do método (como se describe).A figura 1 mostra que o número de plaquetas diminuíu case un 75 % despois da dilución en auga e entre un 20 e un 30 % despois de 15 minutos de dilución con diferentes concentracións de glicosa en comparación co PRP basal e unha dilución 1:1 axustada por volume (1-k1 con corrección de volume). k -1 reprodución).1 reprodución).
O número de células en cada dilución exprésase como unha fracción do número orixinal antes da dilución.
O MPV diminuíu minimamente durante a produción de PRP, sen máis cambios nas concentracións de dilución até o 12,5 % en auga ou glicosa (incluíndo mesturas de glicosa con PRP ao 25 %) e aumentou en máis dun 20 % despois da dilución en solución de glicosa ao 50 % (Fig. 2). En contraste, os eritrocitos non mostraron cambios significativos no volume en ningunha dilución que non fose a H2O.
O volume medio de células en cada dilución exprésase como unha porcentaxe do volume orixinal antes da dilución.
Observouse unha redución similar, pero menos pronunciada, na conta de plaquetas e un aumento da RCV en sangue total exposto a glicosa ao 50 % (para formular con glicosa ao 25 ​​%). A táboa 2 compara o número e os volumes celulares en sangue enteiro diluído en dextrosa ao 50 % cos datos de PRP de fase 1 diluídos en dextrosa ao 50 %. Os cambios na conta de eritrocitos e no volumen medio dos eritrocitos non foron evidentes e non foron o foco da nosa atención.
DE = desviación estándar, DM = diferenza de medias entre grupos, EE = desviación estándar da diferenza de medias, RBC = eritrocitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico en plaquetas, WB = sangue enteiro
Despois de engadir D50W a WB, a porcentaxe de perda de plaquetas axustada por dilución foi do 7,7 % (310 ± 73 fronte a 286 ± 96) en comparación co 17,8 % para a dilución de PRP en D50W (664 ± 348 fronte a 544 ± 277). O MPV de WB aumentou un 16,8 % (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mentres que o MPV de PRP aumentou un 26 % (9,2 ± 0,8 fronte a 11,6 ± 0,7). Aínda que as diferenzas medias tanto na redución da conta de plaquetas como no aumento do VPM foron significativamente maiores co PRP, os cambios na redución da conta de plaquetas dentro do grupo de sangue foron case significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento do VPM foi significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Aínda que as diferenzas medias tanto na redución da conta de plaquetas como no aumento do VPM foron significativamente maiores co PRP, os cambios na redución da conta de plaquetas dentro do grupo de sangue foron case significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento do VPM foi significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Aínda que as diferenzas medias tanto na redución da conta de plaquetas como no aumento da RVC foron significativamente maiores con PRP, os cambios no declive da conta de plaquetas dentro do grupo de sangue foron case significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 ata 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). o aumento no MPV foi significativo (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = ,06）MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 但 但 冡 敏 轆 氡板减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = ,06）和MPV 的增昊＄增昊＄增昊＄增昊＄ 96 (-7,7%) ± 0,5 到 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).A variación na redución da conta de plaquetas dentro da área de sangue foi case significativa (de 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), aínda que o PRP presentou diferenzas medias significativamente maiores no descenso da conta de plaquetas e no aumento do VPM, e o aumento do VPM foi significativo.(de 10,1 ± 0,5 ata 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Necesitábase unha concentración final de glicosa ao 20 % para observar un cambio significativo no VPM, pero o cambio no VPM foi máis pronunciado na concentración final do 25 %. A perda de plaquetas estabilizouse despois do descenso inicial. Observamos unha forte diminución inicial da CVR; con todo, a CVR restableceuse rapidamente na concentración final de glicosa do 25 %, que foi significativamente maior que os niveis de CVR observados nas concentracións finais de glicosa do 20 % e do 15 % (Fig. 3 e á esquerda da Táboa 3; caixas sombreadas). indican valores p ≤ alfa cunha corrección de Bonferroni de 0,01). Tamén houbo unha forte caída inicial no número de PLT, observada na fase inicial de 0-15 s, e despois permaneceu estable (de 15 s a 30 min; á esquerda da táboa 4).
A adición de diversas concentracións de glicosa ao sangue enteiro provocou unha rápida diminución inicial do MPV seguida dunha recuperación dependente da concentración de máis do 20 %. A lenda mostra a concentración de glicosa despois da dilución. D15, D20 e D25 leváronse a cabo nunha dilución 1:1. D21 e D41 leváronse a cabo nunha dilución 1:5.
A táboa 4 mostra o cambio na conta de plaquetas cando se diluíu en glicosa hipertónica. Observamos unha relación dependente da dose entre a diminución inmediata nos números de PLT na dilución 1:1 e na dilución 1:5. Comparando as dilucións 1:1 como un só grupo coas dilucións 1:5, o grupo 1:1 tivo unha diminución inmediata na conta de plaquetas menor que o grupo 1:5 66 ± 48.000 (23 %) fronte a 99 ± 69.000 (37 %, p = 0,014) no grupo 1:5. Despois dunha diminución inicial no primeiro punto de medición, a conta de plaquetas como porcentaxe de glicosa estabilizouse (Fig. 4).
Cando se engade sangue enteiro á glicosa nunha proporción de 1:1, a conta de plaquetas redúcese aproximadamente nun 25 %. Non obstante, cando se engadiu sangue enteiro nunha proporción de 1:5, a redución foi moito maior, aproximadamente nun 50 %.
A glicosa ao 41 % aumentou o VPM máis rápido e de forma máis drastica que a do 25 % ou do 21 %. Os resultados do VPM móstranse na Figura 3. En todas as outras dilucións, non se observou ningunha diminución inicial inmediata do VPM despois de engadir glicosa ao 50 %. Ao usar glicosa ao 25 ​​% (concentración de glicosa do 20,8 % na dilución final), o cambio no VPM foi comparable ao cambio na glicosa ao 20 % nunha dilución 1:1 (Fig. 3). Aínda que os cambios no VPM foron inicialmente maiores na concentración mixta ao 41 % que na do 25 %, a diferenza no VPM entre o 41 % e o 25 % despois de 16 minutos xa non foi significativa (Táboa 3, dereita). Tamén é interesante que a glicosa ao 25 ​​% aumentou o VPM de forma máis eficaz que o 20,8 %.
Este estudo in vitro confirmou parcialmente a nosa hipótese. Mostrou unha posible lise parcial das plaquetas pola mestura de dextrosa, unha rápida acomodación das plaquetas a unha hipertonicidade extrema e un aumento significativo do volume máximo de plasma en resposta a concentracións > 25 % de dextrosa hipertónica. Mostrou unha posible lise parcial das plaquetas pola mestura de dextrosa, unha rápida acomodación das plaquetas a unha hipertonicidade extrema e un aumento significativo do volume máximo de plasma en resposta a concentracións > 25 % de dextrosa hipertónica. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю дакцитов тромбоцитов до экстремального гипертонуса e значительное повышение MPV en ответ на гипючерток концентрацию декстрозы > 25%. Mostrou unha posible lise plaquetaria parcial con dextrosa, unha acomodación plaquetaria rápida a hipertonicidade extrema e un aumento significativo no MPV en resposta a niveis de dextrosa hipertónicos >25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 适庯 垫 枫 枫板响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, бтастрауюп тромбоцитов к экстремальному гипертонусу e значительное увеличение MPV en ответ на контраценце гипертонической глюкозы > 25%. Mostra unha posible lise parcial das plaquetas por mesturas de glicosa, unha rápida adaptación plaquetaria a unha hipertonicidade extrema e un aumento significativo do MPV en resposta a unha glicosa hipertónica >25 %.O aumento inicial foi máximo cunha exposición á glicosa do 41,6 %, pero o aumento no MPV achegouse á exposición á glicosa do 25 % aproximadamente 20 minutos despois da exposición.
A concentración de plaquetas vese afectada pola glicosa. Observamos que a cantidade de PLT diminuíu en todas as dilucións de glicosa. Unha forte caída no número de plaquetas nas dilucións de H2O (0 %) da serie PRP pode estar asociada á lise osmótica. Alternativamente, isto podería ser un artefacto causado pola aglomeración plaquetaria, pero isto contrasta coa falta de cambio no MPV nesta dilución. Este achado significa que algunhas plaquetas son moi sensibles á hipoosmolaridade.
En todas as dilucións 1:1 de glicosa, a cantidade de PLT diminuíu entre un 20 e un 30 %, mesmo con D5W (hipotónica a 252 mOsm), o que pode indicar un efecto non osmótico específico da glicosa, xa que tanto a PLT como o MPV permaneceron sen cambios cun aumento do triplo da concentración de glicosa de D5W a D25W. De feito, as concentracións de PLT tenderon a aumentar lixeiramente co aumento da osmolaridade.
A diminución da PLT entre as dilucións 1:1 e 1:5 significa que o efecto de disolución depende da concentración inicial e final de glicosa. Se dependese só da concentración inicial, entón esperaríase ver unha diferenza na redución da PLT entre as concentracións 1:1. Pero non a facemos. Se o efecto de lise depende só da concentración final de glicosa, entón non esperamos moita diferenza entre unha dilución 1:1 do 20 % e unha dilución 1:5 do 20,8 %. E aínda así o conseguimos.
Se se produce perda de plaquetas debido á lise plaquetaria, fórmase un lisado parcial, tras o cal as citocinas e os factores de crecemento libéranse no ambiente extracelular. Varios estudos demostraron que o lisado plaquetario é case tan eficaz como o PRP como solución de proliferación [11]. Demostrouse que o propio PRP é unha solución eficaz para o tratamento da proliferación [12-14].
As plaquetas inactivas circulan en forma de disco reforzado con varias estruturas internas. Durante a activación, adoptan unha forma máis esférica ou de ameba, o que resulta nun aumento de volume. O aumento de volume require un aumento da superficie, que é o resultado da extrusión do sistema tubular aberto (SCO) e da adición de gránulos exocíticos á membrana. Resta por determinar se o aumento do MPV inducido pola glicosa hipertónica implica un ou ambos destes mecanismos, pero se é o último, entón un aumento do MPV indicaría desgranulación.
Este estudo demostrou que a exposición a altas concentracións de glicosa en PRP ou plaquetas de sangue completo provocou un aumento do MPV en 15 minutos cunha concentración de glicosa do 25 % e o 41,6 %, respectivamente.
O aumento do MPV plaquetario pode deberse á dilatación dos ovillos de microtúbulos circundantes en resposta ao influxo de calcio. Liu et al. Demostrouse que a glicosa media o influxo de calcio a través do canal TRPC6 plaquetario [6]. A nosa hipótese é que a glicosa induce a relaxación dos ovillos de microtúbulos, o que leva a un aumento do MPV e á sensibilización e/ou activación plaquetaria. Non obstante, a xulgar polos nosos resultados, isto é só unha parte da historia. Nas nosas probas, ningunha concentración por debaixo de D25W resultou nun aumento do MPV. Dado que non probamos a exposición a concentracións de glicosa entre o 12,5 % e o 25 %, os nosos resultados da fase 1 suxiren que pode haber un limiar neste rango de concentracións de glicosa que leve a un aumento do MPV. Probas adicionais nas etapas 3 e 4 mostraron que o 20-25 % de glicosa parece ser o limiar para isto, pero non está claro por que.
Tamén observamos unha diminución de ~9 % no volume máximo de plasma despois da centrifugación. Non está claro se esta diminución do volume máximo de plasma se debe a plaquetas máis grandes e densas atrapadas na capa de eritrocitos da centrífuga. Esta observación pode ser importante para os médicos, xa que pode implicar que as plaquetas de PRP son un subconxunto máis pequeno e menos denso das plaquetas de sangue branco.
Nun estudo anterior, demostramos que a preparación de PRP por métodos manuais é barata [8]. Se a glicosa sensibiliza as plaquetas dos tecidos ou o PRP, facéndoos máis susceptibles á activación, ou se o PRP se produce con propiedades de lisado parcial, isto pode mellorar a rexeneración e reducir a necesidade de terapia. Polo tanto, a combinación de PRP e glicosa altamente concentrada pode ser máis rendible que o PRP ou a glicosa por si soas.
O noso estudo ten varias deficiencias. En primeiro lugar, empregamos PRP obtido a través de varios métodos diferentes. Isto pode levar a resultados contraditorios. En segundo lugar, non puidemos realizar unha análise bioquímica de ningunha das nosas mostras para determinar con maior precisión se se produciu a activación plaquetaria. Gustaríanos medir a P-selectina, o factor plaquetario 4, os agregados plaquetarios monocíticos ou outros marcadores de activación plaquetaria para comprender mellor o grao ou a presenza de desgranulación dos gránulos alfa, pero isto está fóra do alcance deste estudo. En terceiro lugar, non puidemos confirmar mediante microscopía electrónica ou outros métodos que o aumento do MPV nas plaquetas expostas á glicosa se debese ao efecto sobre os ovillos de microtúbulos.
As mesturas de WB ou PRP cun 25 % de glicosa aumentaron o MPV, o que sinala o inicio da activación plaquetaria, aínda que este estudo non demostrou a progresión da agregación ou desgranulación. A mestura de glicosa hipertónica provocou a perda de plaquetas, o que posiblemente represente un efecto lítico. A activación parcial ou lise das plaquetas pode causar a rexeneración dos tecidos despois da inxección de plaquetas. Non está claro que consecuencias clínicas poden levar estes cambios. Estudos posteriores demostraron medicións máis precisas da activación ou lise e avaliaron os diferentes efectos clínicos das mesturas de glicosa hipertónica con WB ou PRP.
A terapia proliferativa con glicosa é unha terapia rexenerativa sinxela e barata que se está a expandir rapidamente e que apoia a investigación clínica. Este estudo suxire un mecanismo fisiolóxico que, de confirmarse, podería axudarnos a comprender parte do mecanismo rexenerativo da terapia proliferativa.
Informática Biomédica e da Saúde na Facultade de Medicina da Universidade de Missouri, Kansas City, Kansas City, EUA
Suxeitos humanos: Todos os participantes neste estudo deron ou non o seu consentimento. A Sociedade Internacional de Medicina Celular emitiu a aprobación ICMS-2017-003. O seguinte protocolo foi aprobado para o seu uso posterior polo Consello de Revisión Institucional da Sociedade Internacional de Medicina Celular: Título: Cálculo do rendemento de fármacos no plasma rico en plaquetas baseado na conta plaquetaria do hemograma completo basal. Suxeitos animais: Todos os autores confirmaron que non participaron animais nin tecidos neste estudo. Conflitos de intereses: De acordo co Formulario Uniforme de Divulgación do ICMJE, todos os autores declaran o seguinte: Información de pagamento/servizo: Todos os autores declaran que non recibiron apoio financeiro de ningunha organización para o traballo presentado. Relacións financeiras: Todos os autores declaran que non teñen actualmente nin nos últimos tres anos relacións financeiras con ningunha organización que poida estar interesada no traballo presentado. Outras relacións: Todos os autores declaran que non hai outras relacións ou actividades que poidan afectar o traballo presentado.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 de maio de 2022) O efecto da glicosa na conta e volume de plaquetas: implicacións para a medicina rexenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Este é un artigo de acceso aberto distribuído segundo os termos da licenza Creative Commons Attribution CC-BY 4.0. Permítese o uso, a distribución e a reprodución ilimitados en calquera medio, sempre que se recoñeza o autor e a fonte orixinais.