Nature.com ની મુલાકાત લેવા બદલ આભાર. તમે જે બ્રાઉઝર સંસ્કરણનો ઉપયોગ કરી રહ્યાં છો તેમાં CSS માટે મર્યાદિત સમર્થન છે. શ્રેષ્ઠ અનુભવ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે અપડેટેડ બ્રાઉઝરનો ઉપયોગ કરો (અથવા Internet Explorer માં સુસંગતતા મોડ બંધ કરો). તે દરમિયાન, સતત સમર્થનની ખાતરી કરવા માટે, અમે શૈલીઓ અને JavaScript વિના સાઇટ પ્રદર્શિત કરીશું.
છિદ્રાળુ સિલિકા કણોને મેક્રોપોરસ કણો મેળવવા માટે કેટલાક ફેરફારો સાથે સોલ-જેલ પદ્ધતિ દ્વારા તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા. આ કણોને એન-ફેનાઇલમેલેઇમાઇઇડ-મેથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ (PMI) અને સ્ટાયરીન સાથે રિવર્સિબલ એડિશન ફ્રેગમેન્ટેશન ચેઇન ટ્રાન્સફર (RAFT) પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા વ્યુત્પન્ન કરવામાં આવ્યા હતા. પુનઃ સ્ટેનલેસ સ્ટીલના સ્તંભો (100 × 1.8 mm id) સ્લરી પેકિંગ દ્વારા પેક કરવામાં આવ્યા હતા. પાંચ પેપ્ટાઈડ્સ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, enGly-Tyr-Arg-Arg, ગ્લાય-ગ્લાય-ટાયર-આર્ગ, એન-જી-રોગ્રાફી) ધરાવતા પેપ્ટાઈડ મિશ્રણનું મૂલ્યાંકન કરેલ પીએમપી કૉલમ વિભાજન. ic કામગીરી) અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) નું ટ્રિપ્સિન પાચન. શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન પરિસ્થિતિઓ હેઠળ, પેપ્ટાઈડ મિશ્રણની સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ ગણતરી 280,000 પ્લેટ/m² જેટલી ઊંચી છે. વિકસિત સ્તંભના વિભાજન પ્રદર્શનની કોમર્શિયલ એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમમાં જોવામાં આવે છે કે તે સુપરએમપી કોલમમાં સુપરપરફોર્મન્સ હતું. વિભાજન કાર્યક્ષમતા અને ઠરાવની શરતો.
તાજેતરના વર્ષોમાં, બાયોફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ બજારહિસ્સામાં નોંધપાત્ર વધારો સાથે વિસ્તરતું વૈશ્વિક બજાર બની ગયું છે. બાયોફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ 1,2,3ની વિસ્ફોટક વૃદ્ધિ સાથે, પેપ્ટાઈડ્સ અને પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ ખૂબ જ ઈચ્છિત છે. લક્ષ્ય પેપ્ટાઈડ ઉપરાંત, ઘણી અશુદ્ધિઓ ઉત્પન્ન થાય છે, પેપ્ટાઈડના સંશ્લેષણ માટે પેપ્ટાઈડ રિપ્લેસમેન્ટ પ્રક્રિયાઓ દરમિયાન. ઇચ્છિત શુદ્ધતા. શરીરના પ્રવાહી, પેશીઓ અને કોશિકાઓમાં પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ અને લાક્ષણિકતા એ એક જ નમૂનામાં મોટી સંખ્યામાં સંભવિત રૂપે શોધી શકાય તેવી પ્રજાતિઓને કારણે અત્યંત પડકારજનક કાર્ય છે. જો કે માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી એ પેપ્ટાઇડ અને પ્રોટીન સિક્વન્સિંગ માટે અસરકારક સાધન છે, જો આવા નમૂનાઓને એક સામૂહિક તપાસમાં અમલમાં મૂકવામાં આવે તો, આ સમસ્યાનો અમલ કરી શકાશે નહીં. એમએસ પૃથ્થકરણ પહેલા લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (એલસી) વિભાજન, જે આપેલ સમયે માસ સ્પેક્ટ્રોમીટરમાં દાખલ થતા વિશ્લેષકોની સંખ્યામાં ઘટાડો કરશે. વધુમાં, પ્રવાહી તબક્કાના વિભાજન દરમિયાન, વિશ્લેષકોને સાંકડા પ્રદેશોમાં કેન્દ્રિત કરી શકાય છે, ત્યાંથી આ વિશ્લેષકોને કેન્દ્રિત કરી શકાય છે અને એલસીએમએસની તપાસમાં નોંધપાત્ર સુધારો થાય છે. છેલ્લા એક દાયકામાં અને પ્રોટીઓમિક વિશ્લેષણ 7,8,9,10 માં લોકપ્રિય તકનીક બની ગઈ છે.
રિવર્સ્ડ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (RP-LC) નો ઉપયોગ સ્થિર તબક્કા11,12,13 તરીકે ઓક્ટાડેસીલ-મોડિફાઈડ સિલિકા (ODS) નો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઈડ મિશ્રણના શુદ્ધિકરણ અને વિભાજન માટે વ્યાપકપણે થાય છે. જો કે, RP સ્થિર તબક્કાઓ સંતોષકારક રીતે અલગ પાડતા નથી. આ વિશ્લેષકો સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરવા અને જાળવી રાખવા માટે ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય ભાગો સાથે પેપ્ટાઈડ્સ અને પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ કરવા માટે ખાસ રચાયેલ સ્થિર તબક્કાઓ જરૂરી છે. આ તબક્કાઓથી ભરપૂર પેપ્ટાઈડ અને પ્રોટીન વિભાજન માટે ઉપયોગમાં લેવાય છે17,18,19,20,21. મિશ્ર-મોડ સ્થિર તબક્કાઓ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેશન/RPLC) બંને ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય જૂથોની હાજરીને કારણે પેપ્ટાઈડ અને પ્રોટીન વિભાજન માટે યોગ્ય છે. સહસંયોજક રીતે બંધાયેલા ધ્રુવીય જૂથો સાથે કેલેટીંગ સ્થિર તબક્કાઓ ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય વિશ્લેષકો માટે સારી અલગતા શક્તિ અને અનન્ય પસંદગી દર્શાવે છે, કારણ કે વિભાજન વિશ્લેષક અને સ્થિર તબક્કા વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા પર આધાર રાખે છે.મલ્ટિમોડલ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ 29, 30, 31, 32. તાજેતરમાં, ઝાંગ એટ અલ.30 એ ડોડેસીલ-ટર્મિનેટેડ પોલિમાઇન સ્થિર તબક્કો તૈયાર કર્યો અને હાઇડ્રોકાર્બન, એન્ટીડિપ્રેસન્ટ્સ, ફ્લેવોનોઇડ્સ, ન્યુક્લિયોસાઇડ્સ, એસ્ટ્રોજેન્સ અને અન્ય ઘણા વિશ્લેષકોને સફળતાપૂર્વક અલગ કર્યા. ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેટરમાં ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય બંને જૂથો છે, તેથી તેનો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનને અલગ કરવા માટે કરી શકાય છે કે જેઓ હાઇડ્રોકાર્બન અને હાઇડ્રોકાર્બન બંને ધરાવે છે. દા.ત., એમાઈડ-એમ્બેડેડ C18 કૉલમ) વેપારી ધોરણે એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ આરપી-એમાઈડ કૉલમ્સ નામ હેઠળ ઉપલબ્ધ છે, પરંતુ આ કૉલમનો ઉપયોગ માત્ર એમાઈન 33ના વિશ્લેષણ માટે થાય છે.
વર્તમાન અભ્યાસમાં, HSA ના પેપ્ટાઈડ્સ અને ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટને અલગ કરવા માટે ધ્રુવીય-જડિત સ્થિર તબક્કો (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો અને તેનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. સ્થિર તબક્કો નીચેની વ્યૂહરચનાનો ઉપયોગ કરીને તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો. છિદ્રાળુ સિલિકા કણો અમારા અગાઉના પ્રકાશનમાં આપેલ પ્રક્રિયા અનુસાર તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા. (PEG), TMOS, પાણીના એસિટિક એસિડને મોટા છિદ્રના કદ સાથે સિલિકા કણો તૈયાર કરવા માટે સમાયોજિત કરવામાં આવ્યા હતા. બીજું, એક નવું લિગાન્ડ, ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ-મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટનું સંશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું અને ધ્રુવીય એમ્બેડેડ સ્થિર તબક્કાને તૈયાર કરવા માટે સિલિકા કણોને વ્યુત્પન્ન કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાય છે. પરિણામી સ્થિર તબક્કાને 1mm0 10mm નો ઉપયોગ કરીને પેક કરવામાં આવ્યો હતો. ઑપ્ટિમાઇઝ્ડ પેકિંગ સ્કીમ. કૉલમ પેકિંગને મિકેનિકલ વાઇબ્રેશન સાથે મદદ કરવામાં આવે છે તેની ખાતરી કરવા માટે કે કૉલમની અંદર સજાતીય બેડ રચાય છે. પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ ધરાવતા પેપ્ટાઇડ મિશ્રણના પેક્ડ કૉલમના વિભાજનનું મૂલ્યાંકન કરો;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) નું ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટ. HSA નું પેપ્ટાઈડ મિશ્રણ અને ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટ સારા રિઝોલ્યુશન સાથે અલગ જોવામાં આવ્યું હતું. પીઆરપીલમના પ્રભાવની તુલનામાં સહ-પ્રદર્શન અને કાર્યક્ષમતા સ્પષ્ટતા સાથે સહ-પ્રદર્શન હતી. -એમાઈડ કોલમ. બંને પેપ્ટાઈડ્સ અને પ્રોટીન પીએમપી કોલમ પર સારી રીતે ઉકેલાયેલા અને કાર્યક્ષમ હોવાનું જણાયું હતું, જે એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઈડ કૉલમ કરતાં વધુ કાર્યક્ષમ હતું.
પીઇજી (પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ), યુરિયા, એસિટિક એસિડ, ટ્રાઇમેથોક્સી ઓર્થોસિલિકેટ (ટીએમઓએસ), ટ્રાઇમેથાઇલ ક્લોરોસીલેન (ટીએમસીએસ), ટ્રિપ્સિન, હ્યુમન સીરમ આલ્બ્યુમિન (એચએસએ), એમોનિયમ ક્લોરાઇડ, યુરિયા, હેક્સેન મેથિલ્ડિસિલાઝેન (એચએમડીએસ), મેથાક્રાયલોયલ ક્લોરાઇડ, બેનિયમ ક્લોરાઇડ, બેનિયમ ક્લોરાઇડ (ટીએમસીએસ) (બીપીઓ), એચપીએલસી ગ્રેડ એસેટોનિટ્રિલ (એસીએન), મિથેનોલ, 2-પ્રોપાનોલ, અને એસીટોન સિગ્મા-આલ્ડ્રીચ (સેન્ટ લુઇસ, એમઓ, યુએસએ) પાસેથી ખરીદેલ છે.
યુરિયા (8 ગ્રામ), પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ (8 ગ્રામ), અને 8 એમએલ 0.01 એન એસિટિક એસિડનું મિશ્રણ 10 મિનિટ માટે હલાવવામાં આવ્યું હતું, અને પછી બરફ-ઠંડી સ્થિતિમાં તેમાં 24 એમએલ ટીએમઓએસ ઉમેરવામાં આવ્યું હતું. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણને 40 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 6 કલાક માટે ગરમ કરવામાં આવ્યું હતું અને પછી 120 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પાણીમાં 120 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પાણીમાં ઓટો-ઓફ કરવામાં આવ્યું હતું. શેષ સામગ્રીને 12 કલાક માટે 70 ° સે પર સૂકવવામાં આવી હતી. સૂકવેલા સોફ્ટ માસને પકાવવાની નાની ભઠ્ઠીમાં સુંવાળી જમીન હતી અને 12 કલાક માટે 550 ° સે પર કેલ્સાઈન કરવામાં આવી હતી. કણોના કદ, છિદ્રના કદ અને સપાટીના વિસ્તારમાં પ્રજનનક્ષમતા ચકાસવા માટે ત્રણ બેચ તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા અને લાક્ષણિકતા આપવામાં આવી હતી.
પ્રી-સિન્થેસાઇઝ્ડ લિગાન્ડ ફિનાઇલમેલીમાઇડ-મેથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ (PCMP) સાથે સિલિકા કણોની સપાટીમાં ફેરફાર કરીને અને સ્ટાયરીન સાથે રેડિયલ પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા, એક ધ્રુવીય જૂથ ધરાવતું સંયોજન તૈયાર કરવામાં આવ્યું હતું.એગ્રીગેટ્સ અને પોલિસ્ટરીન સાંકળો માટે સ્થિર તબક્કો. તૈયારીની પ્રક્રિયા નીચે વર્ણવેલ છે.
N-phenylmaleimide (200 mg) અને મિથાઈલ વિનાઈલ આઈસોસાયનેટ (100 mg) શુષ્ક ટોલ્યુઈનમાં ઓગળવામાં આવ્યા હતા, અને 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) નું 0.1 એમએલ ફિનાઈલમેલેઈમાઈડ-મિથાઈલ કોમ્પ્યુલેટેડ હીટ મેથાઈલ કોમ્પ્યુટર એટ થેઈલ્મેલેઈમાઈડ તૈયાર કરવા માટે પ્રતિક્રિયા ફ્લાસ્કમાં ઉમેરવામાં આવ્યું હતું. 3 કલાક માટે 0°C, 3 કલાક માટે 40°C પર પકાવવાની નાની ભઠ્ઠીમાં ફિલ્ટર અને સૂકવી.
સૂકા સિલિકા કણો (2 ગ્રામ) ડ્રાય ટોલ્યુએન (100 એમએલ) માં વિખરાયેલા હતા, 10 મિનિટ માટે 500 એમએલ રાઉન્ડ બોટમ ફ્લાસ્કમાં હલાવવામાં આવ્યા હતા અને સોનિકેટ કરવામાં આવ્યા હતા. પીએમસીપી (10 એમજી) ટોલ્યુએનમાં ઓગળવામાં આવી હતી અને ડ્રોપિંગ ફનલ દ્વારા પ્રતિક્રિયા ફ્લાસ્કમાં ડ્રોપવાઇઝ ઉમેરવામાં આવી હતી. મિશ્રણને 80 ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને 80 કલાક માટે રિફ્લેક્સ કરવામાં આવ્યું હતું. એસીટોન અને 3 કલાક માટે 60°C પર સૂકવવામાં આવે છે. ત્યારબાદ, PMCP-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (100 ગ્રામ) ટોલ્યુએન (200 ml) માં ઓગળવામાં આવ્યા હતા અને 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) 100 µL dibutyltin dilaurate ની હાજરીમાં ઉમેરવામાં આવ્યા હતા. 3 કલાક માટે 50 ° સે પર સૂકવવામાં આવે છે.
સ્ટાયરીન (1 એમએલ), બેન્ઝોયલ પેરોક્સાઇડ BPO (0.5 એમએલ), અને TEMPO-PMCP-સંલગ્ન સિલિકા કણો (1.5 ગ્રામ) ટોલ્યુએનમાં વિખેરવામાં આવ્યા હતા અને નાઇટ્રોજનથી શુદ્ધ કરવામાં આવ્યા હતા. સ્ટાયરિનનું પોલિમરાઇઝેશન 100 °C તાપમાને 12 કલાક માટે કરવામાં આવ્યું હતું. આખી રાતમાં 600 ડિગ્રી સેલ્સિયસના ઉત્પાદન સાથે પરિણામી પ્રક્રિયા કરવામાં આવી હતી. આકૃતિ 1 માં બતાવેલ છે.
10-3 ટોર કરતા ઓછા શેષ દબાણ મેળવવા માટે નમૂનાઓને 1 કલાક માટે 393 K પર ડીગાસ કરવામાં આવ્યા હતા. P/P0 = 0.99 ના સાપેક્ષ દબાણે શોષાયેલ N2 ની માત્રાનો ઉપયોગ કુલ છિદ્રનું પ્રમાણ નક્કી કરવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. એકદમ અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોની મોર્ફોલોજી, ઇલેક્ટ્રોનિકો, હાઇસ્કિન્સ, ઇલેક્ટ્રોનિકો સાથે તપાસ કરવામાં આવી હતી. જાપાન). સૂકા નમૂનાઓ (બેર સિલિકા અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો) એડહેસિવ કાર્બન ટેપનો ઉપયોગ કરીને એલ્યુમિનિયમના સ્તંભ પર મૂકવામાં આવ્યા હતા. Q150T સ્પુટર કોટરનો ઉપયોગ કરીને નમૂનાઓ પર સોનું ચડાવવામાં આવ્યું હતું, અને નમૂનાઓ પર 5 nm Au સ્તર જમા કરવામાં આવ્યું હતું. આનાથી પ્રક્રિયામાં સુધારો થાય છે. રોન (વોલ્થમ, એમએ, યુએસએ) ફ્લેશ EA1112 એલિમેન્ટલ વિશ્લેષકનો ઉપયોગ એલિમેન્ટલ વિશ્લેષણ માટે કરવામાં આવ્યો હતો. A Malvern (Worcestershire, UK) માસ્ટરસાઈઝર 2000 કણ કદના વિશ્લેષકનો ઉપયોગ કણોના કદનું વિતરણ મેળવવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. નેકેડ સિલિકા કણો અને m5 ના સિલિકા કણો (m5 અને m5) ના ડિસ્પ્લેડ પાર્ટિકલ્સ (m5) માં હતા. આઇસોપ્રોપેનોલ, 10 મિનિટ માટે સોનિકેટેડ, 5 મિનિટ માટે વમળમાં, અને માસ્ટરસાઈઝરની ઓપ્ટિકલ બેન્ચ પર મૂકવામાં આવ્યું. થર્મોગ્રેવિમેટ્રિક વિશ્લેષણ 30 થી 800 °C ની તાપમાન શ્રેણીમાં 5 °C પ્રતિ મિનિટના દરે કરવામાં આવ્યું હતું.
રેફમાં વપરાયેલી સમાન પ્રક્રિયાને લાગુ કરીને, સ્લરી પેકિંગ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને પરિમાણો (100 × 1.8 mm id) ના કાચ-લાઇનવાળા સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સાંકડા-બોર કૉલમ પેક કરવામાં આવ્યા હતા.31.એક સ્ટેઈનલેસ સ્ટીલ કોલમ (ગ્લાસ-લાઈન, 100 × 1.8 મીમી આઈડી) 1 µm ફ્રિટ ધરાવતી આઉટલેટ ફીટીંગ સાથે સ્લરી પેકર (ઓલટેક ડીયરફીલ્ડ, IL, યુએસએ) સાથે જોડાયેલ હતી. સ્ટેશનરી ફેઝ સ્લરી તૈયાર કરો અને તેને 150 મીટર ફેઝ 150 મીટર સ્ટોરેજ કોમ્પલમ 2 લીટર સ્ટોરેજમાં મોકલો. .મેથેનોલનો ઉપયોગ સ્લરી દ્રાવક તેમજ પ્રોપેલિંગ દ્રાવક તરીકે થતો હતો. 10 મિનિટ માટે 100 MP, 15 મિનિટ માટે 80 MP અને 30 મિનિટ માટે 60 MPનું દબાણ લાગુ કરીને ક્રમિક રીતે કૉલમ ભરો. પેકિંગ દરમિયાન, મિકેનિકલ વાઇબ્રેશન લાગુ કરવામાં આવ્યું હતું. કૉલમ. સ્લરી પેકરને બંધ કરો અને કૉલમની અંદર કોઈપણ નુકસાનને રોકવા માટે ધીમે ધીમે દબાણ છોડો. સ્લરી પેકિંગ યુનિટમાંથી કૉલમને ડિસ્કનેક્ટ કરો અને તેની કામગીરી તપાસવા માટે અન્ય ફિટિંગને ઇનલેટ અને એલસી સિસ્ટમ સાથે કનેક્ટ કરો.
50nL ઇન્જેક્શન લૂપ સાથે LC પંપ (10AD Shimadzu, Japan), ઇન્જેક્ટર (Valco (USA) C14 W.05), મેમ્બ્રેન ડિગાસર (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS કેશિલરી વિન્ડો ખાસ µLC ડિવાઇસ ડિટેક્ટર (UV-2075 અને માઇક્રોકોલ્યુમિન સાથે ખૂબ જ ટૂંકા ગાળાના કાચ સાથે કનેક્ટિંગ) બનાવવામાં આવી હતી. વધારાના કૉલમ બેન્ડના વિસ્તૃતીકરણની અસરને પ્રભાવિત કરો. પેકેજિંગ પછી, રુધિરકેશિકાઓ (50 μm id 365 અને રિડ્યુસિંગ યુનિયન રુધિરકેશિકાઓ (50 μm) રિડ્યુસિંગ યુનિયનના 1/16″ આઉટલેટ પર ઇન્સ્ટોલ કરવામાં આવી હતી. ડેટા સંગ્રહ અને ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રોસેસિંગ મલ્ટિક્રો 2000 2000 એબી 2000 સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવી હતી. ઓરિજિનપ્રો8 (નોર્થેમ્પ્ટન, એમએ) દ્વારા ક્રોમેટોગ્રાફિક ડેટાનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.
માનવ સીરમમાંથી આલ્બ્યુમિન, લાયોફિલાઇઝ્ડ પાવડર, ≥ 96% (એગેરોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ) 3 મિલિગ્રામ ટ્રિપ્સિન (1.5 મિલિગ્રામ), 4.0 એમ યુરિયા (1 એમએલ), અને 0.2 એમ એમોનિયમ બાયકાર્બોનેટ (1 એમએલ) સાથે મિશ્રિત. આ દ્રાવણને 10 મિનિટ માટે હલાવવામાં આવ્યું, અને પછી 3 મીમી કલાક સુધી 1 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પાણીમાં રાખો. 0.1% TFA. સોલ્યુશનને ફિલ્ટર કરો અને 4 °C થી નીચે સ્ટોર કરો.
પેપ્ટાઈડ મિશ્રણ અને એચએસએ ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટનું વિભાજન PMP કૉલમ પર અલગથી મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. PMP કૉલમ દ્વારા HSAના પેપ્ટાઈડ મિશ્રણ અને ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટનું વિભાજન તપાસો અને પરિણામોની તુલના એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઈડ કૉલમ સાથે કરો. સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ નંબર નીચે પ્રમાણે છે:
એકદમ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોની SEM છબીઓ FIG માં બતાવવામાં આવી છે.2 .બેર સિલિકા કણો (A, B) ની SEM છબીઓ દર્શાવે છે કે, અમારા અગાઉના અભ્યાસોથી વિપરીત, આ કણો ગોળાકાર છે જેમાં કણો વિસ્તરેલ હોય છે અથવા અનિયમિત સપ્રમાણતા ધરાવે છે. લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (C, D) ની સપાટી સિલિસની સપાટી કરતાં વધુ સરળ છે, જેના કારણે સિલિનની સપાટી પરના સિલિનના ભાગને કારણે પોલીસ્ટીકની સપાટી પર સિલિકાની સાંદ્રતા હોઈ શકે છે. ica કણો.
એકદમ સિલિકા કણો (A, B) અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (C, D) ની ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોસ્કોપ છબીઓનું સ્કેનિંગ.
એકદમ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોના કણોના કદનું વિતરણ આકૃતિ 3(A) માં બતાવવામાં આવ્યું છે. વોલ્યુમ-આધારિત કણોના કદના વિતરણ વણાંકો દર્શાવે છે કે રાસાયણિક ફેરફાર પછી સિલિકા કણોનું કદ વધ્યું છે (ફિગ. 3A). સિલિકા કણોના કણોના કદના વિતરણ ડેટા અગાઉના અભ્યાસમાં સિલિકા કણોની તુલના કરી શકાય છે. 3.05 μm (પોલીસ્ટીરીન-બાઉન્ડ સિલિકા કણો) 34 ના એડ(0.5) મૂલ્ય સાથેના અમારા અગાઉના અભ્યાસની તુલનામાં PMP નું le કદ, d(0.5), 3.36 μm છે. આ બેચમાં અમારા અગાઉના અભ્યાસની તુલનામાં સાંકડી કણોનું કદ વિતરણ હતું. MP તબક્કો પોલિસ્ટરીન-બાઉન્ડ સિલિકા કણોના તબક્કા કરતા થોડો મોટો છે જેનો અમે અગાઉ અભ્યાસ કર્યો હતો. આનો અર્થ એ છે કે સ્ટાયરીન સાથે સિલિકા કણોની સપાટીના કાર્યક્ષમતાથી સિલિકા સપાટી પર માત્ર પોલિસ્ટરીન સ્તર (0.97 µm) જમા થાય છે, જ્યારે PMP તબક્કામાં સ્તરની જાડાઈ 1.38 µm હતી.
એકદમ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોનું કણોનું કદ વિતરણ (A) અને છિદ્ર કદનું વિતરણ (B).
વર્તમાન અભ્યાસના સિલિકા કણોનું છિદ્રનું કદ, છિદ્રનું પ્રમાણ અને સપાટીનું ક્ષેત્રફળ કોષ્ટક 1(B) માં આપવામાં આવ્યું છે. એકદમ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોની PSD પ્રોફાઇલ આકૃતિ 3(B) માં બતાવવામાં આવી છે. પરિણામો અમારા અગાઉના અભ્યાસ સાથે સરખાવી શકાય તેવા છે. એકદમ અને લિગાન્ડ-બંધિત સિલિકા કણોના છિદ્રના કદ સૂચવે છે કે જે pore 10,40 છે. કોષ્ટક 1(B) માં બતાવ્યા પ્રમાણે રાસાયણિક ફેરફાર પછી re કદ 69 થી ઘટે છે, અને વળાંકમાં ફેરફાર ફિગ. 3(B) માં દર્શાવવામાં આવ્યો છે. તેવી જ રીતે, રાસાયણિક ફેરફાર પછી સિલિકા કણોનું છિદ્રનું પ્રમાણ 0.67 થી 0.58 cm3/g સુધી ઘટ્યું છે. સિલિકાનો ચોક્કસ સપાટી વિસ્તાર જે હાલમાં અભ્યાસ કરી શકાય છે તે અગાઉના ભાગ 1/1/g (1/g1/g) નો અભ્યાસ કરી શકાય છે. 24 m2/g). કોષ્ટક 1(B) માં બતાવ્યા પ્રમાણે, સિલિકા કણોનો સપાટી વિસ્તાર (m2/g) પણ રાસાયણિક ફેરફાર પછી 116 m2/g થી ઘટીને 105 m2/g થયો છે.
સ્થિર તબક્કાના પ્રાથમિક વિશ્લેષણના પરિણામો કોષ્ટક 2 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. વર્તમાન સ્થિર તબક્કાનું કાર્બન લોડિંગ 6.35% છે, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસના કાર્બન લોડિંગ કરતા ઓછું છે (પોલીસ્ટીરીન બોન્ડેડ સિલિકા કણો, અનુક્રમે 7.93%35 અને 10.21%) 42 વર્તમાન સ્ટેશનની તૈયારીમાં કાર્બન લોડિંગ 42, કાર્બન લોડિંગ નીચા છે. સ્ટાયરીન ઉપરાંત, કેટલાક ધ્રુવીય લિગાન્ડ્સ જેમ કે ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ-મેથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ (PCMP) અને 4-હાઇડ્રોક્સી-TEMPO નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. વર્તમાન સ્થિર તબક્કાના નાઇટ્રોજન વજનની ટકાવારી 2.21% છે, 0.1735 અને 0.85% ની સરખામણીમાં, અગાઉના અભ્યાસોમાં આ નાઇટ્રોજનનું વજન અનુક્રમે % વધુ છે. ફેનીલમાલેઇમાઈડના કારણે તબક્કો.તેમજ રીતે, ઉત્પાદનો (4) અને (5)નું કાર્બન લોડિંગ અનુક્રમે 2.7% અને 2.9% હતું, જ્યારે અંતિમ ઉત્પાદન (6)નું કાર્બન લોડિંગ 6.35% હતું, જેમ કે કોષ્ટક 2 માં દર્શાવવામાં આવ્યું છે. PMP સ્થિર તબક્કા સાથે વજન ઘટાડાની તપાસ કરવામાં આવી હતી, અને TGA કર્વ 4% વજનમાં ઘટાડો દર્શાવે છે. , જે કાર્બન લોડિંગ (6.35%) સાથે સારા કરારમાં છે કારણ કે લિગાન્ડ્સમાં માત્ર C જ નહીં પણ N, O અને H પણ હોય છે.
સિલિકા કણોની સપાટીમાં ફેરફાર કરવા માટે ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ-મેથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ લિગાન્ડ પસંદ કરવામાં આવ્યું હતું કારણ કે તેમાં ધ્રુવીય ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ જૂથો અને વિનાઇલિસોસાઇનેટ જૂથો છે. વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ જૂથો જીવંત આમૂલ પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા સ્ટાયરીન સાથે વધુ પ્રતિક્રિયા કરી શકે છે. બીજું કારણ એ છે કે જૂથ દાખલ કરવું કે જે મધ્યસ્થી અને ઇલેક્ટ્રોનિક સ્ટેશન વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા ધરાવે છે. ary તબક્કો, કારણ કે phenylmaleimide moiety નો સામાન્ય pH પર કોઈ વર્ચ્યુઅલ ચાર્જ હોતો નથી. સ્થિર તબક્કાની ધ્રુવીયતાને સ્ટાયરીનની શ્રેષ્ઠ માત્રા અને ફ્રી રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશનના પ્રતિક્રિયા સમય દ્વારા નિયંત્રિત કરી શકાય છે. પ્રતિક્રિયાનું છેલ્લું પગલું (ફ્રી-રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશન) મહત્વપૂર્ણ છે અને આ સ્ટેશનરી સ્ટેશનરી સ્ટેજની ધ્રુવીયતાને બદલી શકે છે. ટી અવલોકન કરવામાં આવ્યું હતું કે સ્ટાયરીનની માત્રામાં વધારો અને પ્રતિક્રિયા સમય સ્થિર તબક્કાના કાર્બન લોડિંગમાં વધારો કરે છે અને ઊલટું. સ્ટાયરિનની વિવિધ સાંદ્રતા સાથે તૈયાર કરાયેલ એસપીમાં અલગ અલગ કાર્બન લોડિંગ હોય છે. ફરીથી, આ સ્થિર તબક્કાઓને સ્ટેનલેસ સ્ટીલના સ્તંભોમાં લોડ કરો અને તેમના ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રભાવને તપાસો (પસંદગી, રીઝોલ્યુશન વગેરે પર પસંદગી, રીઝોલ્યુશન તૈયાર કરવા માટે પસંદગી, મૂલ્યાંકન વગેરે). PMP સ્થિર તબક્કો નિયંત્રિત ધ્રુવીયતા અને સારા વિશ્લેષક રીટેન્શનની ખાતરી કરવા માટે.
મોબાઇલ તબક્કાનો ઉપયોગ કરીને PMP કૉલમનો ઉપયોગ કરીને પાંચ પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin)નું પણ મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું;80 μL/મિનિટના પ્રવાહ દરે 60/40 (v/v) acetonitrile/પાણી (0.1% TFA) PMP કૉલમ્સ અને ક્રોમેટોગ્રામ આકૃતિ 5A માં બતાવવામાં આવ્યા છે. PMP કૉલમ પર ઉચ્ચ પ્રવાહ દર (700 μL/મિનિટ) પર ઝડપી વિશ્લેષણ, એક મિનિટમાં પાંચ પેપ્ટાઈડ્સ દૂર કરવામાં આવ્યા હતા, N મૂલ્યો ખૂબ સારા હતા, 13,500 ± 330 પ્રતિ કૉલમ, 1080 × 1080mm, corpontes/100mm m (આકૃતિ 5B). ત્રણ સમાન કદના કૉલમ (100 × 1.8 mm id) પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા ચકાસવા માટે PMP સ્થિર તબક્કાના ત્રણ અલગ-અલગ લોટથી પેક કરવામાં આવ્યા હતા. દરેક કૉલમ માટે વિશ્લેષક સાંદ્રતા શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન સ્થિતિનો ઉપયોગ કરીને રેકોર્ડ કરવામાં આવી હતી અને સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ N ની સંખ્યા અને PMP કોલમને અલગ-અલગ ડેટાના કોમ્પ્યુલમ પર રીટેન્શનના સમયને અલગ પાડવા માટે. lumns કોષ્ટક 4 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. PMP કૉલમની પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા કોષ્ટક 3 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, ખૂબ જ ઓછા % RSD મૂલ્યો સાથે સારી રીતે સંબંધિત છે.
PMP કૉલમ (B) અને Ascentis Express RP-Amide કૉલમ (A) પર પેપ્ટાઈડ મિશ્રણનું વિભાજન;મોબાઇલ તબક્કો 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP કૉલમના પરિમાણો (100 × 1.8 mm id);વિશ્લેષણાત્મક સંયોજનોનો ઉત્સર્જન ક્રમ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) અને 5 (leucine) એસિડ એન્કેફાલિન)).
PMP કૉલમ (100 × 1.8 mm id) નું ઉચ્ચ પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિનના ટ્રિપ્ટિક ડાયજેસ્ટને અલગ કરવા માટે મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. આકૃતિ 6 માં ક્રોમેટોગ્રામ દર્શાવે છે કે નમૂના સારી રીતે અલગ થયેલ છે અને રિઝોલ્યુશન ખૂબ જ સારું છે. HSA ડાયજેસ્ટનું વિશ્લેષણ 1µt0/0t0/00/0/000 મિનિટના તબક્કો રેટ, મોબાઈલ રેટ 1L/0t. રાઇલ/પાણી અને 0.1% TFA. ક્રોમેટોગ્રામ (આકૃતિ 6) માં બતાવ્યા પ્રમાણે, HSA પાચનને 17 પેપ્ટાઇડ્સને અનુરૂપ 17 શિખરોમાં વિભાજિત કરવામાં આવ્યું છે. HSA ડાયજેસ્ટમાં દરેક શિખરની વિભાજન કાર્યક્ષમતાની ગણતરી કરવામાં આવી હતી અને મૂલ્યો T ટેબલ 5 માં આપવામાં આવ્યા છે.
PMP કૉલમ પર HSA (100 × 1.8 mm id) નું ટ્રિપ્ટિક ડાયજેસ્ટ અલગ કરવામાં આવ્યું હતું;પ્રવાહ દર (100 µL/મિનિટ), મોબાઈલ તબક્કો 60/40 એસેટોનાઈટ્રાઈલ/પાણી 0.1% TFA સાથે.
જ્યાં L એ કૉલમની લંબાઈ છે, η એ મોબાઈલ તબક્કાની સ્નિગ્ધતા છે, ΔP એ કૉલમ પાછળનું દબાણ છે, અને u એ મોબાઈલ તબક્કાનો રેખીય વેગ છે. PMP કૉલમની અભેદ્યતા 2.5 × 10-14 m2 હતી, પ્રવાહ દર 25 μL/min હતો, અને 60/40/AC/40MP AC/40/40m ની અભેદ્યતાનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. 0 × 1.8 mm id) અમારા અગાઉના અભ્યાસ Ref.34 જેવું જ હતું. ઉપરછલ્લી છિદ્રાળુ કણોથી ભરેલા સ્તંભની અભેદ્યતા છે: 1.3 μm કણો માટે 1.7 × 10-15, 1.7 μm કણો માટે 3.1 × 10-15 અને 1.7 μm કણો માટે 3.1 × 10-15 × 251 × 251. .6 μm કણો 5 μm કણો માટે 43. તેથી, PMP તબક્કાની અભેદ્યતા 5 μm કોર-શેલ કણોની સમાન છે.
જ્યાં Wx એ ક્લોરોફોર્મથી ભરેલા સ્તંભનું વજન છે, Wy એ મિથેનોલથી ભરેલા સ્તંભનું વજન છે, અને ρ એ દ્રાવકની ઘનતા છે. મિથેનોલ (ρ = 0.7866) અને ક્લોરોફોર્મ (ρ = 1.484) ની ઘનતા છે. SIIDC18mm × 101mm column ની કુલ છિદ્રાળુતા. ) 34 અને C18-યુરિયા કૉલમ 31 કે જેનો અમે અગાઉ અભ્યાસ કર્યો હતો તે અનુક્રમે 0.63 અને 0.55 હતા. આનો અર્થ એ થયો કે યુરિયા લિગાન્ડ્સની હાજરી સ્થિર તબક્કાની અભેદ્યતા ઘટાડે છે. બીજી તરફ, PMP કૉલમની કુલ છિદ્રાળુતા (100 × 1.8 mm. id mm ની નીચી છે. column ની p.6 mm ની ઓછી છે). C18-બોન્ડેડ સિલિકા કણોથી ભરપૂર કારણ કે C18-પ્રકારના સ્થિર તબક્કામાં C18 લિગાન્ડ્સ સિલિકા કણો સાથે રેખીય સાંકળો તરીકે જોડાયેલા હોય છે, જ્યારે પોલિસ્ટરીન-પ્રકારના સ્થિર તબક્કાઓમાં, તેની આસપાસ પ્રમાણમાં જાડું પોલિમર સ્તર રચાય છે. એક લાક્ષણિક પ્રયોગમાં, સ્તંભની છિદ્રાળુતાની ગણતરી કરવામાં આવે છે.
આકૃતિ 7A,B એ સમાન ઉત્સર્જન સ્થિતિ (એટલે ​​​​કે, 60/40 ACN/H2O અને 0.1% TFA) નો ઉપયોગ કરીને PMP કૉલમ (100 × 1.8 mm id) અને Ascentis Express RP-Amide કૉલમ (100 × 1.8 mm id) બતાવે છે.) વાન ડીમટર પ્લોટ.પસંદ કરેલ પેપ્ટાઈડ મિશ્રણ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL માં તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા/ બંને કૉલમ માટેનો લઘુત્તમ પ્રવાહ દર 800 µminL/મિનિટ છે. PMP કૉલમ અને Ascentis Express RP-Amide કૉલમ માટે L/min) અનુક્રમે 2.6 µm અને 3.9 µm હતા. HETP મૂલ્યો સૂચવે છે કે PMP કૉલમ (100 × 1.8 mm id) ની વિભાજન કાર્યક્ષમતા વ્યાપારી ધોરણે ઉપલબ્ધ RP-0 1mm RP-0centm કરતાં ઘણી સારી છે. .ફિગ. 7(A) માં વાન ડીમટર પ્લોટ દર્શાવે છે કે અમારા અગાઉના અભ્યાસની તુલનામાં વધતા પ્રવાહ સાથે N મૂલ્યમાં ઘટાડો નોંધપાત્ર નથી. Ascentis Express RP-Amide સ્તંભની સરખામણીમાં PMP કૉલમ (100 × 1.8 mm id) ની ઉચ્ચ વિભાજન કાર્યક્ષમતા કણોમાં સુધારણા પર આધારિત છે, કણોના કદમાં અને જટિલ કોમ્પ્લેક્સના આકાર, વર્તમાન કાર્યમાં સુધારણાઓ પર આધારિત છે.
(A) વાન ડીમટર પ્લોટ (HETP વિરુદ્ધ મોબાઈલ ફેઝ રેખીય વેગ) 0.1% TFA સાથે 60/40 ACN/H2O માં PMP કૉલમ (100 × 1.8 mm id) નો ઉપયોગ કરીને મેળવેલ છે. .8 mm id) 0.1% TFA સાથે 60/40 ACN/H2O માં.
હાઇ પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીમાં કૃત્રિમ પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) ના ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટને અલગ કરવા માટે એક ધ્રુવીય-એમ્બેડેડ પોલિસ્ટરીન સ્થિર તબક્કો તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો અને તેનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. પેપ્ટાઇડ મિશ્રણો માટે PMP કૉલમનું ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રદર્શન પીએમપી વેરાયટીના અલગીકરણ અને વિવિધતાના રિઝોલ્યુશનમાં સુધારો કરવા માટે ઉત્કૃષ્ટ છે. s, જેમ કે સિલિકા કણોના કણોનું કદ અને છિદ્રનું કદ, સ્થિર તબક્કાનું નિયંત્રિત સંશ્લેષણ, અને જટિલ કૉલમ પેકિંગ. ઉચ્ચ વિભાજન કાર્યક્ષમતા ઉપરાંત, ઉચ્ચ પ્રવાહ દરે નીચા કૉલમ બેક પ્રેશર આ સ્થિર તબક્કાનો બીજો ફાયદો છે. PMP કૉલમ સારી પ્રજનનક્ષમતા દર્શાવે છે અને વિવિધ પેપ્ટોસિસ અને પ્રોટીનના વિસ્તરણ માટે ઉપયોગ કરી શકાય છે. કુદરતી ઉત્પાદનો, ઔષધીય વનસ્પતિઓમાંથી બાયોએક્ટિવ સંયોજનો અને પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં ફૂગના અર્કને અલગ કરવા માટે આ કૉલમનો ઉપયોગ કરો. ભવિષ્યમાં, PMP કૉલમનું પણ પ્રોટીન અને મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝને અલગ કરવા માટે મૂલ્યાંકન કરવામાં આવશે.
ફિલ્ડ, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી ભાગ I દ્વારા પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સ પર સંશોધન: કૉલમ કેરેક્ટરાઇઝેશન પ્રોટોકોલનો વિકાસ.જે.ક્રોમેટોગ્રાફી.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
ગોમેઝ, બી. એટ અલ. ચેપી રોગોની સારવાર માટે રચાયેલ સુધારેલ સક્રિય પેપ્ટાઈડ્સ. બાયોટેકનોલોજી. એડવાન્સ્ડ.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. સિન્થેટિક થેરાપ્યુટિક પેપ્ટાઈડ્સ: સાયન્સ એન્ડ ધ માર્કેટ.ડ્રગ ડિસ્કવરી.15 (1-2) ટુડે, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009 (0.2009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.ક્રોમેટોગ્રાફી.એ 1261, 78–90 (2012).
લિયુ, ડબલ્યુ. એટ અલ. એડવાન્સ્ડ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી વ્યાપક રીતે લક્ષિત મેટાબોલોમિક્સ અને પ્રોટીઓમિક્સ.અનુસ.ચીમ.એક્ટા 1069, 89–97 (2019) ના સમાવેશને સક્ષમ કરે છે.
ચેસ્નટ, એસએમ અને સેલિસબરી, જેજે દવાના વિકાસમાં યુએચપીએલસીની ભૂમિકા.જે.સપ્ટે. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ઝડપી વિભાજન માટે અલ્ટ્રાહાઈ પ્રેશર લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાઓ.જે.સપ્ટે. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA અને Tchelitcheff, P. ડ્રગ ડેવલપમેન્ટમાં અલ્ટ્રા-હાઈ પરફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીની એપ્લિકેશન.જે.ક્રોમેટોગ્રાફી.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ગુ, એચ. એટ અલ. એન્ટરવાયરસ.કેમિકલ.બ્રિટન.જે.ના કાર્યક્ષમ શુદ્ધિકરણ માટે ઓઇલ-ઇન-વોટર હાઇ ઇન્ટરનલ ફેઝ ઇમલ્સન્સમાંથી તૈયાર કરાયેલ મોનોલિથિક મેક્રોપોરસ હાઇડ્રોજેલ્સ.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ધ રોલ ઓફ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી ઇન પ્રોટીઓમિક્સ.જે.ક્રોમેટોગ્રાફી.એ 1053(1-2), 27-36 (2004).
ફેકેટે, એસ., વેયુથે, જે.-એલ. અને ગુઇલારમે, ડી. ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના રિવર્સ્ડ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી વિભાજનમાં ઉભરતા વલણો: સિદ્ધાંત અને એપ્લિકેશન્સ.જે.ફાર્મસી.બાયોમેડિકલ સાયન્સ.એનસ.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC RP-RP-HPLC સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઈડ્સનું દ્વિ-પરિમાણીય વિભાજન પ્રથમ અને બીજા વિભાજનના પરિમાણોમાં વિવિધ pH મૂલ્યોનો ઉપયોગ કરીને.જે.સપ્ટે. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
ફેલેટી, એસ. એટ અલ. C18 સબ-2 μm સંપૂર્ણ અને ઉપરછલ્લી છિદ્રાળુ કણોથી ભરેલા ઉચ્ચ કાર્યક્ષમતાવાળા ક્રોમેટોગ્રાફિક સ્તંભોની સામૂહિક ટ્રાન્સફર લાક્ષણિકતાઓ અને ગતિશીલ કામગીરીની તપાસ કરવામાં આવી હતી.જે.સપ્ટે. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. પ્લાન્ટ બાયોએક્ટિવ peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s0182610.1007/s0182018ની અલગતા, ઓળખ અને માન્યતામાં તાજેતરના વલણો અને વિશ્લેષણાત્મક પડકારો.
મુલર, જેબી એટ અલ. જીવનના રાજ્યનો પ્રોટીઓમિક લેન્ડસ્કેપ. પ્રકૃતિ 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. પ્રિપેરેટિવ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઈડ્સની ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રોસેસિંગ. મોલેક્યુલ (બેઝલ, સ્વિટ્ઝર્લૅન્ડ) 26(15), 4688(2021).
યાંગ, વાય. અને ગેંગ, એક્સ. મિક્સ્ડ-મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને તેનો ઉપયોગ બાયોપોલિમર્સ.જે.ક્રોમેટોગ્રાફી.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
ઝાઓ, જી., ડોંગ, એક્સ.-વાય. એન્ડ સન, વાય. લિગાન્ડ્સ ફોર મિશ્ર-મોડ પ્રોટીન ક્રોમેટોગ્રાફી: સિદ્ધાંત, પાત્રાલેખન અને ડિઝાઇન.જે.બાયોટેકનોલોજી.144(1), 3-11 (2009).