Nature.com ની મુલાકાત લેવા બદલ આભાર. તમે મર્યાદિત CSS સપોર્ટ સાથે બ્રાઉઝર વર્ઝનનો ઉપયોગ કરી રહ્યા છો. શ્રેષ્ઠ અનુભવ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે અપડેટેડ બ્રાઉઝરનો ઉપયોગ કરો (અથવા ઇન્ટરનેટ એક્સપ્લોરરમાં સુસંગતતા મોડને અક્ષમ કરો). વધુમાં, ચાલુ સપોર્ટ સુનિશ્ચિત કરવા માટે, અમે શૈલીઓ અને JavaScript વિના સાઇટ બતાવીએ છીએ.
એકસાથે ત્રણ સ્લાઇડ્સનું કેરોયુઝલ દર્શાવે છે. એક સમયે ત્રણ સ્લાઇડ્સમાંથી આગળ વધવા માટે પહેલાના અને આગળના બટનોનો ઉપયોગ કરો, અથવા એક સમયે ત્રણ સ્લાઇડ્સમાંથી આગળ વધવા માટે અંતે સ્લાઇડર બટનોનો ઉપયોગ કરો.
છિદ્રાળુ સિલિકા કણો સોલ-જેલ પદ્ધતિ દ્વારા કેટલાક ફેરફારો દ્વારા તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા જેથી પહોળા છિદ્રવાળા કણો મેળવી શકાય. આ કણોને N-ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ-મિથાઇલવિનાઇલ આઇસોસાયનેટ (PMI) અને સ્ટાયરીન સાથે રિવર્સ ચેઇન ટ્રાન્સફર-ફ્રેગમેન્ટેશન (RAFT) પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા ડેરિવેટાઇઝ કરવામાં આવ્યા હતા જેથી N-ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ ઇન્ટરકેલેટેડ પોલિમાઇડ્સ ઉત્પન્ન થાય. સ્ટાયરીન (PMP) સ્થિર તબક્કો. સાંકડા બોર સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સ્તંભો (100 × 1.8 મીમી આંતરિક વ્યાસ) સ્લરી પેકિંગથી પેક કરવામાં આવ્યા હતા. PMP સ્તંભના ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રદર્શનનું મૂલ્યાંકન પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ (ગ્લાય-ટાયર, ગ્લાય-લ્યુ-ટાયર, ગ્લાય-ગ્લાય-ટાયર-આર્ગ, ટાયર-ઇલ-ગ્લાય-સેર-આર્ગ, લ્યુ એમિનો એસિડ એન્કેફાલિન) અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) ના ટ્રિપ્ટિક હાઇડ્રોલાઇઝેટ ધરાવતા કૃત્રિમ પેપ્ટાઇડ્સના મિશ્રણને અલગ કરવા માટે કરવામાં આવ્યું હતું. શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન પરિસ્થિતિઓમાં, પેપ્ટાઇડ્સના મિશ્રણ સાથે પ્લેટોની સૈદ્ધાંતિક સંખ્યા 280,000 પ્લેટો/ચો.મી. સુધી પહોંચી. વિકસિત સ્તંભના વિભાજન પ્રદર્શનની સરખામણી કોમર્શિયલ એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઇડ સ્તંભ સાથે કરતા, એવું જોવા મળ્યું કે PMP સ્તંભની વિભાજન કાર્યક્ષમતા વિભાજન કાર્યક્ષમતા અને રિઝોલ્યુશનની દ્રષ્ટિએ કોમર્શિયલ સ્તંભ કરતાં શ્રેષ્ઠ હતી.
બાયોફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ તાજેતરના વર્ષોમાં બજાર હિસ્સામાં નોંધપાત્ર વધારો સાથે વિસ્તરતું વૈશ્વિક બજાર બની ગયું છે. બાયોફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ 1,2,3 ના વિસ્ફોટક વિકાસ સાથે, પેપ્ટાઇડ અને પ્રોટીન વિશ્લેષણની ખૂબ જ જરૂર છે. લક્ષ્ય પેપ્ટાઇડ ઉપરાંત, પેપ્ટાઇડ સંશ્લેષણ દરમિયાન વિવિધ અશુદ્ધિઓ રચાય છે, તેથી પેપ્ટાઇડની ઇચ્છિત શુદ્ધતા મેળવવા માટે ક્રોમેટોગ્રાફિક શુદ્ધિકરણ જરૂરી છે. એક જ નમૂનામાં મોટી સંખ્યામાં સંભવિત રીતે શોધી શકાય તેવી પ્રજાતિઓ હાજર હોવાને કારણે શરીરના પ્રવાહી, પેશીઓ અને કોષોમાં પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ અને લાક્ષણિકતા એક અત્યંત પડકારજનક કાર્ય છે. જોકે માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનને ક્રમ આપવા માટે એક અસરકારક સાધન છે, જો આવા નમૂનાઓ સીધા માસ સ્પેક્ટ્રોમીટરમાં દાખલ કરવામાં આવે, તો વિભાજન અસંતોષકારક રહેશે. MS વિશ્લેષણ પહેલાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (LC) કરીને આ સમસ્યા ઉકેલી શકાય છે, જે આપેલ સમયે માસ સ્પેક્ટ્રોમીટરમાં પ્રવેશતા વિશ્લેષકોની સંખ્યા ઘટાડશે4,5,6. વધુમાં, વિશ્લેષકો પ્રવાહી તબક્કાના વિભાજન દરમિયાન સાંકડા પ્રદેશમાં ધ્યાન કેન્દ્રિત કરી શકે છે, જેનાથી આ વિશ્લેષણોને કેન્દ્રિત કરી શકાય છે અને MS શોધની સંવેદનશીલતામાં વધારો થાય છે. છેલ્લા દાયકામાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (LC) નોંધપાત્ર રીતે આગળ વધી છે અને પ્રોટીઓમિક વિશ્લેષણ માટે વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાતી પદ્ધતિ બની ગઈ છે7,8,9,10.
રિવર્સ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (RP-LC) નો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ્સના મિશ્રણને શુદ્ધ કરવા અને અલગ કરવા માટે વ્યાપકપણે થાય છે, જે ઓક્ટાડેસિલ-મોડિફાઇડ સિલિકા (ODS) ને સ્થિર તબક્કા તરીકે ઉપયોગ કરે છે11,12,13. જો કે, તેમની જટિલ રચના અને એમ્ફોટેરિક પ્રકૃતિને કારણે,14,15 RP સ્થિર તબક્કાઓ પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનનું સંતોષકારક વિભાજન પ્રદાન કરી શકતા નથી. તેથી, ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય ટુકડાઓવાળા પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના વિશ્લેષણ માટે આ વિશ્લેષણોને ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરવા અને જાળવી રાખવા માટે ખાસ રચાયેલ સ્થિર તબક્કાઓની જરૂર પડે છે16. મિશ્ર ક્રોમેટોગ્રાફી, જે મલ્ટિમોડલ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ પ્રદાન કરે છે, પેપ્ટાઇડ્સ, પ્રોટીન અને અન્ય જટિલ મિશ્રણોને અલગ કરવા માટે RP-LC નો વિકલ્પ બની શકે છે. ઘણા મિશ્ર-પ્રકારના સ્થિર તબક્કાઓ તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા અને પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનને અલગ કરવા માટે આ સ્થિર તબક્કાઓથી ભરેલા સ્તંભોનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો17,18,19,20,21. ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય જૂથોની હાજરીને કારણે, મિશ્ર મોડ સ્થિર તબક્કાઓ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેશન/RPLC) પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીન 22,23,24,25,26,27,28 ના વિભાજન માટે યોગ્ય છે. , સહસંયોજક રીતે બંધાયેલા ધ્રુવીય જૂથો સાથે ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેટેડ સ્થિર તબક્કાઓ ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય વિશ્લેષકો માટે સારી વિભાજન ક્ષમતાઓ અને અનન્ય પસંદગી દર્શાવે છે કારણ કે વિભાજન વિશ્લેષક અને સ્થિર તબક્કા વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા પર આધાર રાખે છે. મલ્ટિમોડલ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ 29,30,31,32. તાજેતરમાં, ઝાંગ એટ અલ. 30 એ પોલિમાઇન્સના બેહેનાઇલ-ટર્મિનેટેડ સ્થિર તબક્કાઓ મેળવ્યા અને હાઇડ્રોકાર્બન, એન્ટીડિપ્રેસન્ટ્સ, ફ્લેવોનોઇડ્સ, ન્યુક્લિયોસાઇડ્સ, એસ્ટ્રોજેન્સ અને કેટલાક અન્ય વિશ્લેષકોને સફળતાપૂર્વક અલગ કર્યા. ધ્રુવીય એમ્બેડેડ સ્થિર સામગ્રીમાં ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય બંને જૂથો હોય છે, તેથી તેનો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનને હાઇડ્રોફોબિક અને હાઇડ્રોફિલિક ભાગોમાં અલગ કરવા માટે થઈ શકે છે. ધ્રુવીય ઇનલાઇન કૉલમ (દા.ત., એમાઇડ ઇનલાઇન સાથે C18 કૉલમ) એસેંટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઇડ કૉલમના ટ્રેડ નામ હેઠળ ઉપલબ્ધ છે, પરંતુ આ કૉલમનો ઉપયોગ ફક્ત એમાઇન 33 ના વિશ્લેષણ માટે જ કરવામાં આવ્યો છે.
વર્તમાન અભ્યાસમાં, પેપ્ટાઇડ અલગતા અને ટ્રિપ્ટિક HSA ક્લીવેજ માટે ધ્રુવીય એમ્બેડિંગ સ્ટેશનરી ફેઝ (N-ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ, એમ્બેડિંગ પોલિસ્ટરીન) તૈયાર કરવામાં આવ્યું હતું અને તેનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. સ્થિર ફેઝ તૈયાર કરવા માટે નીચેની વ્યૂહરચનાનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. છિદ્રાળુ સિલિકા કણો અમારા અગાઉના પ્રકાશનોમાં વર્ણવેલ પ્રક્રિયાઓ અનુસાર તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા, તૈયારી યોજનાઓ 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 માં કેટલાક ફેરફારો સાથે. મોટા છિદ્ર કદવાળા સિલિકા કણો મેળવવા માટે યુરિયા, પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ (PEG), TMOS અને જલીય-એસિટિક એસિડના ગુણોત્તરને સમાયોજિત કરવામાં આવ્યા હતા. બીજું, એક નવું ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ-મિથાઇલવિનાઇલ આઇસોસાયનેટ લિગાન્ડ સંશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું અને તેના વ્યુત્પન્ન સિલિકા કણોનો ઉપયોગ ધ્રુવીય એમ્બેડેડ સ્ટેશનરી ફેઝ તૈયાર કરવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. પ્રાપ્ત સ્થિર ફેઝને ઑપ્ટિમાઇઝ્ડ પેકિંગ સ્કીમ અનુસાર સ્ટેનલેસ સ્ટીલ કોલમ (આંતરિક વ્યાસ 100 × 1.8 મીમી) માં પેક કરવામાં આવ્યો હતો. કોલમની પેકિંગ યાંત્રિક કંપન દ્વારા સહાયિત થાય છે જેથી કોલમની અંદર એક સમાન સ્તર સુનિશ્ચિત થાય. પેક્ડ કોલમનું મૂલ્યાંકન પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ (ગ્લાય-ટાયર, ગ્લાય-લ્યુ-ટાયર, ગ્લાય-ગ્લાય-ટાયર-આર્ગ, ટાયર-ઇલ-ગ્લાય-સેર-આર્ગ, લ્યુસીન-એન્કેફાલિન પેપ્ટાઇડ) અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HSA) ના ટ્રિપ્ટિક હાઇડ્રોલિસેટ્સ ધરાવતા પેપ્ટાઇડ્સના મિશ્રણને અલગ કરવા માટે કરવામાં આવ્યું હતું. એવું જોવા મળ્યું હતું કે પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ અને HSA ટ્રિપ્ટિક ડાયજેસ્ટ સારા રિઝોલ્યુશન અને કાર્યક્ષમતા સાથે અલગ થયા હતા. PMP કોલમની અલગ કરવાની કાર્યક્ષમતાની સરખામણી એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ સાથે કરવામાં આવી હતી. એવું જોવા મળ્યું હતું કે પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનમાં PMP કોલમ પર સારું રિઝોલ્યુશન અને ઉચ્ચ અલગ કરવાની કાર્યક્ષમતા હોય છે, અને PMP કોલમની અલગ કરવાની કાર્યક્ષમતા એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ કરતા વધારે છે.
PEG (પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ), યુરિયા, એસિટિક એસિડ, ટ્રાઇમેથોક્સીઓર્થોસિલિકેટ (TMOS), ટ્રાઇમેથાઇલક્લોરોસિલેન (TMCS), ટ્રિપ્સિન, હ્યુમન સીરમ આલ્બ્યુમિન (HSA), એમોનિયમ ક્લોરાઇડ, યુરિયા, હેક્સામેથાઇલમેથાએક્રાયલોયલ્ડિસિલાઝેન (HMDS), મેથાએક્રાયલોયલ્ડ ક્લોરાઇડ (MC), સ્ટાયરીન, 4-હાઇડ્રોક્સી- ટેમ્પો, બેન્ઝોયલ પેરોક્સાઇડ (BPO), HPLC માટે એસેટોનિટ્રાઇલ (ACN), મિથેનોલ, 2-પ્રોપેનોલ અને એસીટોન. સિગ્મા-એલ્ડ્રિચ કંપની (સેન્ટ લૂઇસ, મિઝોરી, યુએસએ).
યુરિયા (8 ગ્રામ), પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ (8 ગ્રામ) અને 0.01 N. એસિટિક એસિડના 8 મિલી મિશ્રણને 10 મિનિટ સુધી હલાવવામાં આવ્યું, અને તેમાં 24 મિલી TMOS બરફ-ઠંડક હેઠળ ઉમેરવામાં આવ્યું. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણને 40°C પર 6 કલાક માટે અને પછી 120°C પર 8 કલાક માટે સ્ટેનલેસ સ્ટીલ ઓટોક્લેવમાં ગરમ ​​કરવામાં આવ્યું. પાણીને ડીકેન્ટ કરવામાં આવ્યું અને અવશેષોને 70°C પર 12 કલાક માટે સૂકવવામાં આવ્યા. સૂકા સોફ્ટ બ્લોક્સને સરળતાથી પીસીને 550°C પર 12 કલાક માટે ઓવનમાં કેલ્સાઈન કરવામાં આવ્યા. કણોના કદ, છિદ્ર કદ અને સપાટી વિસ્તારની પ્રજનનક્ષમતા ચકાસવા માટે ત્રણ બેચ તૈયાર કરવામાં આવ્યા અને લાક્ષણિકતા આપવામાં આવી.
પોલિસ્ટરીન સાંકળો માટે ધ્રુવીય જૂથ અને સ્થિર તબક્કો. તૈયારી પ્રક્રિયા નીચે વર્ણવેલ છે.
એન-ફિનાઇલમેલેમાઇડ (200 મિલિગ્રામ) અને મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ (100 મિલિગ્રામ) ને નિર્જળ ટોલ્યુએનમાં ઓગાળવામાં આવ્યા હતા, અને પછી ફિનાઇલમેલેમાઇડ અને મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ (PMPC) નું કોપોલિમર મેળવવા માટે પ્રતિક્રિયા ફ્લાસ્કમાં 0.1 મિલી 2,2′-એઝોઇસોબ્યુટીરોનિટ્રાઇલ (AIBN) ઉમેરવામાં આવ્યું હતું. ) મિશ્રણને 60°C પર 3 કલાક માટે ગરમ કરવામાં આવ્યું હતું, ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યું હતું અને 40°C પર 3 કલાક માટે ઓવનમાં સૂકવવામાં આવ્યું હતું.
સૂકા સિલિકા કણો (2 ગ્રામ) ને સૂકા ટોલ્યુએન (100 મિલી) માં વિખેરવામાં આવ્યા, 500 મિલી ગોળાકાર તળિયાવાળા ફ્લાસ્કમાં 10 મિનિટ માટે હલાવવામાં આવ્યા અને સોનિકેટેડ કરવામાં આવ્યા. PMCP (10 મિલીગ્રામ) ને ટોલ્યુએનમાં ઓગાળીને એક વધારાનો ફનલ દ્વારા પ્રતિક્રિયા ફ્લાસ્કમાં ડ્રોપવાઇઝ ઉમેરવામાં આવ્યું. મિશ્રણને 8 કલાક માટે 100°C પર રિફ્લક્સ કરવામાં આવ્યું, ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યું, એસીટોનથી ધોવામાં આવ્યું અને 60°C પર 3 કલાક માટે સૂકવવામાં આવ્યું. પછી, PMCP (100 ગ્રામ) સાથે સંકળાયેલા સિલિકા કણોને ટોલ્યુએન (200 મિલી) માં ઓગાળવામાં આવ્યા, અને ઉત્પ્રેરક તરીકે 100 μl ડિબ્યુટિલ્ટિન ડાયલોરેટની હાજરીમાં 4-હાઇડ્રોક્સી-ટેમ્પો (2 મિલી) ઉમેરવામાં આવ્યું. મિશ્રણને 8 કલાક માટે 50°C પર હલાવવામાં આવ્યું, ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યું અને 3 કલાક માટે 50°C પર સૂકવવામાં આવ્યું.
સ્ટાયરીન (1 મિલી), બેન્ઝોયલ પેરોક્સાઇડ BPO (0.5 મિલી) અને TEMPO-PMPC (1.5 ગ્રામ) સાથે જોડાયેલા સિલિકા કણોને ટોલ્યુએનમાં વિખેરી નાખવામાં આવ્યા હતા અને નાઇટ્રોજનથી શુદ્ધ કરવામાં આવ્યા હતા. સ્ટાયરીનનું પોલિમરાઇઝેશન 100°C પર 12 કલાક માટે કરવામાં આવ્યું હતું. પરિણામી ઉત્પાદનને મિથેનોલથી ધોવામાં આવ્યું હતું અને 60°C પર રાતોરાત સૂકવવામાં આવ્યું હતું. પ્રતિક્રિયાની સામાન્ય યોજના આકૃતિ 1 માં બતાવવામાં આવી છે.
નમૂનાઓને 1 કલાક માટે 393 K પર ગેસ મુક્ત કરવામાં આવ્યા જ્યાં સુધી 10-3 Torr કરતા ઓછા શેષ દબાણ પ્રાપ્ત ન થાય. કુલ છિદ્ર વોલ્યુમ નક્કી કરવા માટે સંબંધિત દબાણ P/P0 = 0.99 પર શોષિત N2 ની માત્રાનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો. શુદ્ધ અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોનું મોર્ફોલોજી સ્કેનિંગ ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોસ્કોપ (હિટાચી હાઇ ટેક્નોલોજીસ, ટોક્યો, જાપાન) નો ઉપયોગ કરીને તપાસવામાં આવ્યું. કાર્બન ટેપનો ઉપયોગ કરીને એલ્યુમિનિયમ સળિયા પર સૂકા નમૂનાઓ (શુદ્ધ સિલિકા અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણો) મૂકવામાં આવ્યા. Q150T સ્પટરિંગ ડિવાઇસનો ઉપયોગ કરીને નમૂના પર સોનું જમા કરવામાં આવ્યું, અને નમૂના પર 5 nm જાડા Au સ્તર જમા કરવામાં આવ્યું. આ ઓછા વોલ્ટેજ પ્રક્રિયાની કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરે છે અને બારીક ઠંડા છંટકાવ પ્રદાન કરે છે. થર્મો ઇલેક્ટ્રોન (વોલ્થમ, MA, USA) ફ્લેશ EA1112 એલિમેન્ટલ કમ્પોઝિશન વિશ્લેષકનો ઉપયોગ કરીને એલિમેન્ટલ વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું. કણ કદ વિતરણ મેળવવા માટે માલવર્ન કણ કદ વિશ્લેષક (વોર્સેસ્ટરશાયર, UK) માસ્ટરસાઇઝર 2000 નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો. કોટેડ ન હોય તેવા સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણો (દરેક 5 મિલિગ્રામ) 5 મિલી આઇસોપ્રોપેનોલમાં વિખેરાઈ ગયા, 10 મિનિટ માટે સોનિકેટેડ, 5 મિનિટ માટે હલાવવામાં આવ્યા, અને માસ્ટરસાઈઝર ઓપ્ટિકલ બેન્ચ પર મૂકવામાં આવ્યા. થર્મોગ્રેવિમેટ્રિક વિશ્લેષણ 30 થી 800 °C તાપમાન શ્રેણીમાં પ્રતિ મિનિટ 5 °C ના દરે હાથ ધરવામાં આવે છે.
ગ્લાસ ફાઇબર લાઇનવાળા સાંકડા બોર સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સ્તંભોને સંદર્ભ 31 માં આપેલી પ્રક્રિયા મુજબ સ્લરી ફિલિંગ પદ્ધતિ દ્વારા પેક કરવામાં આવ્યા હતા. સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સ્તંભ (ગ્લાસ લાઇનવાળા, ID 100 × 1 .8 મીમી) અને 1 µm ફ્રિટ ધરાવતું આઉટલેટ સ્લરી પેકેજિંગ મશીન (ઓલટેક ડીયરફિલ્ડ, IL, USA) સાથે જોડાયેલ હતું. 1.2 મિલી મિથેનોલમાં 150 મિલિગ્રામ સ્થિર તબક્કાને સસ્પેન્ડ કરીને અને તેને જળાશય સ્તંભમાં ખવડાવીને સ્થિર તબક્કાનું સસ્પેન્શન તૈયાર કરો. સ્લરી દ્રાવક અને નિયંત્રણ દ્રાવક તરીકે મિથેનોલનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. 10 મિનિટ માટે 100 MP, 15 મિનિટ માટે 80 MP અને 30 મિનિટ માટે 60 MP ના દબાણ ક્રમ લાગુ કરીને સ્તંભને પેક કરો. પેકિંગ પ્રક્રિયામાં એકસમાન કોલમ પેકિંગ સુનિશ્ચિત કરવા માટે યાંત્રિક કંપન માટે બે ગેસ ક્રોમેટોગ્રાફી કોલમ વાઇબ્રેટર (ઓલટેક, ડીયરફિલ્ડ, IL, USA) નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. સ્લરી પેકર બંધ કરો અને સ્ટ્રિંગને નુકસાન થતું અટકાવવા માટે ધીમે ધીમે દબાણ છોડો. સ્લરી નોઝલથી કોલમ ડિસ્કનેક્ટ કરવામાં આવ્યો હતો અને તેની કામગીરી ચકાસવા માટે ઇનલેટ સાથે બીજું ફિટિંગ જોડવામાં આવ્યું હતું અને LC સિસ્ટમ સાથે જોડવામાં આવ્યું હતું.
LC પંપ (10AD Shimadzu, જાપાન), 50 nL ઇન્જેક્શન લૂપ (Valco (USA) C14 W.05) સાથેના સેમ્પલર, મેમ્બ્રેન ડિગેસર (Shimadzu DGU-14A), અને UV-VIS કેશિલરી વિન્ડો. ડિટેક્ટર ડિવાઇસ (UV-2075) અને દંતવલ્ક માઇક્રોકોલમનો ઉપયોગ કરીને કસ્ટમ MLC બનાવવામાં આવ્યું હતું. વધારાના સ્તંભ વિસ્તરણની અસરને ઘટાડવા માટે ખૂબ જ સાંકડી અને ટૂંકી કનેક્ટિંગ ટ્યુબનો ઉપયોગ કરો. સ્તંભ ભર્યા પછી, 1/16″ રિડ્યુસિંગ જંકશનના આઉટલેટ પર કેશિલરી (50 µm id 365) ઇન્સ્ટોલ કરો અને રિડ્યુસિંગ જંકશનનો કેશિલરી (50 µm) ઇન્સ્ટોલ કરો. ડેટા કલેક્શન અને ક્રોમેટોગ્રામ પ્રોસેસિંગ મલ્ટિક્રો 2000 સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવે છે. 254 nm પર, વિષયોના વિશ્લેષકોના UV શોષણનું 0 પર નિરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. OriginPro8 (Northampton, MA) નો ઉપયોગ કરીને ક્રોમેટોગ્રાફિક ડેટાનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.
હ્યુમન સીરમ આલ્બ્યુમિન, લિયોફિલાઈઝ્ડ પાવડર, ≥ 96% (એગારોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ) 3 મિલિગ્રામ ટ્રિપ્સિન (1.5 મિલિગ્રામ), 4.0 મિલિગ્રામ યુરિયા (1 મિલિગ્રામ) અને 0.2 મિલિગ્રામ એમોનિયમ બાયકાર્બોનેટ (1 મિલિગ્રામ) સાથે મિશ્રિત. દ્રાવણને 10 મિનિટ સુધી હલાવવામાં આવ્યું અને 37°C પર 6 કલાક માટે પાણીના સ્નાનમાં રાખવામાં આવ્યું, પછી 0.1% TFA ના 1 મિલિગ્રામથી શાંત કરવામાં આવ્યું. દ્રાવણને ફિલ્ટર કરો અને 4°C થી નીચે સ્ટોર કરો.
PMP કોલમ પર પેપ્ટાઇડ્સ અને ટ્રિપ્ટિક ડાયજેસ્ટ HSA ના મિશ્રણનું અલગથી મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. PMP કોલમ દ્વારા અલગ કરાયેલ પેપ્ટાઇડ્સ અને HSA ના મિશ્રણનું ટ્રિપ્ટિક હાઇડ્રોલિસિસ તપાસો અને પરિણામોની તુલના એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ સાથે કરો. સૈદ્ધાંતિક પ્લેટોની સંખ્યા નીચેના સમીકરણનો ઉપયોગ કરીને ગણવામાં આવે છે:
શુદ્ધ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ બાઉન્ડ સિલિકા કણોની SEM છબીઓ આકૃતિ 2 માં બતાવવામાં આવી છે. શુદ્ધ સિલિકા કણો (A, B) ની SEM છબીઓ ગોળાકાર આકાર દર્શાવે છે જેમાં કણો વિસ્તરેલ હોય છે અથવા અમારા અગાઉના અભ્યાસોની તુલનામાં અનિયમિત સમપ્રમાણતા ધરાવે છે. લિગાન્ડ (C, D) દ્વારા બંધાયેલા સિલિકા કણોની સપાટી શુદ્ધ સિલિકા કણો કરતાં સરળ હોય છે, જે સિલિકા કણોની સપાટીને આવરી લેતી પોલિસ્ટરીન સાંકળોને કારણે હોઈ શકે છે.
શુદ્ધ સિલિકા કણો (A, B) અને લિગાન્ડ બાઉન્ડ સિલિકા કણો (C, D) ના ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોગ્રાફ્સ સ્કેન કરી રહ્યા છીએ.
શુદ્ધ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોનું કણ કદ વિતરણ આકૃતિ 2. 3(A) માં બતાવવામાં આવ્યું છે. વોલ્યુમેટ્રિક કણ કદ વિતરણ વક્ર દર્શાવે છે કે રાસાયણિક ફેરફાર પછી સિલિકા કણ કદમાં વધારો થયો છે (આકૃતિ 3A). વર્તમાન અભ્યાસ અને અગાઉના અભ્યાસમાંથી સિલિકા કણ કદ વિતરણ ડેટાની તુલના કોષ્ટક 1(A) માં કરવામાં આવી છે. PMP નું વોલ્યુમેટ્રિક કણ કદ d(0.5) 3.36 µm હતું, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસ (પોલિસ્ટરીન બોન્ડેડ સિલિકા કણો)34 માં ad(0.5) મૂલ્ય 3.05 µm ની સરખામણીમાં હતું. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણમાં PEG, યુરિયા, TMOS અને એસિટિક એસિડના ગુણોત્તરમાં ફેરફારને કારણે, આ બેચનું કણ કદ વિતરણ અમારા અગાઉના અભ્યાસની તુલનામાં સાંકડું હતું. PMP તબક્કાનું કણ કદ પોલિસ્ટરીન બાઉન્ડ સિલિકા કણ તબક્કા કરતા થોડું મોટું છે જેનો અમે અગાઉ અભ્યાસ કર્યો હતો. આનો અર્થ એ થયો કે સ્ટાયરીન સાથે સિલિકા કણોના સપાટીના કાર્યાત્મકકરણથી સિલિકા સપાટી પર ફક્ત પોલિસ્ટરીન સ્તર (0.97 µm) જમા થયું, જ્યારે PMP તબક્કામાં સ્તરની જાડાઈ 1.38 µm હતી.
શુદ્ધ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ બાઉન્ડ સિલિકા કણોનું કણ કદ વિતરણ (A) અને છિદ્ર કદ વિતરણ (B).
આ અભ્યાસમાં ઉપયોગમાં લેવાતા સિલિકા કણોનું છિદ્ર કદ, છિદ્રનું પ્રમાણ અને સપાટી ક્ષેત્રફળ કોષ્ટક 1 (B) માં દર્શાવવામાં આવ્યું છે. શુદ્ધ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોની PSD પ્રોફાઇલ્સ આકૃતિ 3 (B) માં દર્શાવવામાં આવી છે. પરિણામો અમારા અગાઉના અભ્યાસ 34 સાથે તુલનાત્મક હતા. શુદ્ધ અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોના છિદ્ર કદ અનુક્રમે 310 Å અને 241 Å હતા, જે દર્શાવે છે કે રાસાયણિક ફેરફાર પછી, છિદ્ર કદમાં 69 Å ઘટાડો થયો છે, જેમ કે કોષ્ટક 1 (B) માં દર્શાવવામાં આવ્યું છે, અને શિફ્ટ કર્વ આકૃતિમાં દર્શાવવામાં આવ્યું છે. વર્તમાન અભ્યાસમાં સિલિકા કણોનો ચોક્કસ સપાટી ક્ષેત્રફળ 116 m2/g છે, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસ (124 m2/g) સાથે તુલનાત્મક છે. કોષ્ટક 1 (B) માં દર્શાવ્યા મુજબ, રાસાયણિક ફેરફાર પછી સિલિકા કણોનો સપાટી ક્ષેત્રફળ (m2/g) પણ 116 m2/g થી ઘટીને 105 m2/g થયો છે.
સ્થિર તબક્કાના તત્વ વિશ્લેષણના પરિણામો કોષ્ટક 2 માં રજૂ કરવામાં આવ્યા છે. વર્તમાન સ્થિર તબક્કામાં કાર્બનનું પ્રમાણ 6.35% છે, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસ કરતા ઓછું છે (પોલિસ્ટાયરીન સાથે સંકળાયેલ સિલિકા કણો, અનુક્રમે 7.93%35 અને 10.21%) 42. નીચે વર્તમાન સ્થિર તબક્કામાં કાર્બનનું પ્રમાણ, કારણ કે SP ની તૈયારીમાં સ્ટાયરીન ઉપરાંત ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ (PCMP) અને 4-હાઇડ્રોક્સી-ટેમ્પો જેવા કેટલાક ધ્રુવીય લિગાન્ડનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો છે. વર્તમાન સ્થિર તબક્કામાં નાઇટ્રોજનનું વજન ટકાવારી 2.21% છે, જે અગાઉના અભ્યાસોમાં 0.1735 અને 0.85% હતી. આનો અર્થ એ છે કે ફિનાઇલમેલેઇમાઇડને કારણે વર્તમાન સ્થિર તબક્કામાં નાઇટ્રોજનનું વજન ટકાવારી વધારે છે. તેવી જ રીતે, ઉત્પાદનો (4) અને (5) માં અનુક્રમે 2.7% અને 2.9% કાર્બનનું પ્રમાણ છે, જ્યારે અંતિમ ઉત્પાદન (6) માં 6.35% કાર્બનનું પ્રમાણ છે, જેમ કે કોષ્ટક 2 માં દર્શાવવામાં આવ્યું છે. વજન ઘટાડવા માટે પરીક્ષણ કરવા માટે PMP ના સ્થિર તબક્કા પર થર્મોગ્રેવિમેટ્રિક વિશ્લેષણ (TGA) નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો, અને TGA વળાંક આકૃતિ 4 માં દર્શાવવામાં આવ્યો છે. TGA વળાંક 8.6% વજન ઘટાડા દર્શાવે છે, જે કાર્બન સામગ્રી (6.35%) સાથે સારી રીતે સુસંગત છે, કારણ કે લિગાન્ડમાં માત્ર C જ નહીં, પણ N, O અને H પણ હોય છે.
સિલિકા કણોની સપાટીને સુધારવા માટે લિગાન્ડ ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ-મિથાઇલવિનાઇલ આઇસોસાયનેટ પસંદ કરવામાં આવ્યું હતું કારણ કે તેના ધ્રુવીય ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ અને વિનીલિસોસાયનેટ જૂથો છે. વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ જૂથો જીવંત રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા સ્ટાયરીન સાથે વધુ પ્રતિક્રિયા આપી શકે છે. બીજું કારણ એ છે કે એવા જૂથને દાખલ કરવું જે વિશ્લેષક સાથે મધ્યમ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ ધરાવે છે અને વિશ્લેષક અને સ્થિર તબક્કા વચ્ચે કોઈ મજબૂત ઇલેક્ટ્રોસ્ટેટિક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ નથી, કારણ કે ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ ટુકડામાં સામાન્ય pH પર કોઈ વર્ચ્યુઅલ ચાર્જ નથી. સ્થિર તબક્કાની ધ્રુવીયતાને સ્ટાયરીનની શ્રેષ્ઠ માત્રા અને મુક્ત રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશનના પ્રતિક્રિયા સમય દ્વારા નિયંત્રિત કરી શકાય છે. પ્રતિક્રિયાનું અંતિમ પગલું (મુક્ત રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશન) મહત્વપૂર્ણ છે કારણ કે તે સ્થિર તબક્કાની ધ્રુવીયતાને બદલે છે. આ સ્થિર તબક્કાઓમાં કાર્બન સામગ્રી તપાસવા માટે તત્વ વિશ્લેષણ હાથ ધરવામાં આવ્યું હતું. એવું જોવા મળ્યું છે કે સ્ટાયરીનનું પ્રમાણ અને પ્રતિક્રિયા સમય વધારવાથી સ્થિર તબક્કાની કાર્બન સામગ્રી વધે છે અને ઊલટું. સ્ટાયરીનની વિવિધ સાંદ્રતા સાથે તૈયાર કરાયેલા SP માં વિવિધ કાર્બન લોડ હોય છે. એ જ રીતે, આ સ્થિર તબક્કાઓ સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સ્તંભો પર મૂકવામાં આવ્યા હતા અને તેમની ક્રોમેટોગ્રાફિક લાક્ષણિકતાઓ (પસંદગી, રીઝોલ્યુશન, N મૂલ્ય, વગેરે) તપાસવામાં આવી હતી. આ પ્રયોગોના આધારે, નિયંત્રિત ધ્રુવીયતા અને વિશ્લેષકની સારી રીટેન્શન પ્રદાન કરવા માટે PMP સ્થિર તબક્કાની તૈયારી માટે એક ઑપ્ટિમાઇઝ રચના પસંદ કરવામાં આવી હતી.
મોબાઇલ ફેઝની ક્ષમતાનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ્સના પાંચ મિશ્રણો (ગ્લાય-ટાયર, ગ્લાય-લ્યુ-ટાયર, ગ્લાય-ગ્લાય-ટાયર-આર્ગ, ટાયર-ઇલ-ગ્લાય-સેર-આર્ગ, લ્યુસીન-એન્કેફાલિન) ના વિશ્લેષણ માટે PMP કોલમનું મૂલ્યાંકન પણ કરવામાં આવ્યું હતું. 80 µl/મિનિટના પ્રવાહ દરે 60/40 (v/v) ACN/પાણી (0.1% TFA). શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન પરિસ્થિતિઓ (200,000 પ્લેટો/મી), પ્રતિ કોલમ (100 × 1.8 મીમી) સૈદ્ધાંતિક પ્લેટો (N) ની સંખ્યા 20,000 ± 100 છે. ત્રણ PMP કોલમ માટે N મૂલ્યો કોષ્ટક 3 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે અને ક્રોમેટોગ્રામ આકૃતિ 5A માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. PMP કોલમ પર ઉચ્ચ પ્રવાહ દર (700 µl/મિનિટ) પર ઝડપી વિશ્લેષણ, એક મિનિટમાં પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ બહાર કાઢવામાં આવ્યા, 13,500 ± 330 પ્રતિ કોલમ (100 x 1.8 મીમી વ્યાસ) નું ઉત્તમ N મૂલ્ય, 135,000 પ્લેટ/મીટર (આકૃતિ 5B) ની સમકક્ષ. પ્રજનનક્ષમતા ચકાસવા માટે સમાન કદના ત્રણ સ્તંભો (આંતરિક વ્યાસ 100 x 1.8 મીમી) PMP સ્થિર તબક્કાના ત્રણ અલગ અલગ બેચથી ભરવામાં આવ્યા હતા. શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન પરિસ્થિતિઓ, સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ N ની સંખ્યા અને રીટેન્શન સમયનો ઉપયોગ કરીને દરેક કોલમ પર સમાન પરીક્ષણ મિશ્રણને અલગ કરીને દરેક કોલમ માટે વિશ્લેષણ રેકોર્ડ કરવામાં આવ્યા હતા. PMP કોલમ માટે પ્રજનનક્ષમતા ડેટા કોષ્ટક 4 માં દર્શાવવામાં આવ્યો છે. કોષ્ટક 3 માં દર્શાવ્યા મુજબ PMP કોલમની પ્રજનનક્ષમતા ખૂબ જ ઓછા %RSD મૂલ્યો સાથે સારી રીતે સંકળાયેલી છે.
PMP કોલમ (B) અને એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ (A), મોબાઇલ ફેઝ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP કોલમ પરિમાણો (100 x 1.8 mm id), વિશ્લેષણ પર પેપ્ટાઇડ મિશ્રણનું વિભાજન સંયોજનોનો એલ્યુશન ક્રમ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) અને 5 (leucic acid enkephalin).
HPLC દ્વારા માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિનના ટ્રિપ્ટિક હાઇડ્રોલાઇઝેટને અલગ કરવા માટે PMP કોલમ (આંતરિક વ્યાસ 100 x 1.8 મીમી) નું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. આકૃતિ 6 માં ક્રોમેટોગ્રામ દર્શાવે છે કે નમૂનાઓ ખૂબ જ સારા રિઝોલ્યુશન સાથે સારી રીતે અલગ કરવામાં આવ્યા છે. HSA સોલ્યુશન્સનું વિશ્લેષણ 100 μl/મિનિટના પ્રવાહ દર, 70/30 એસિટોનિટ્રાઇલ/પાણીનો મોબાઇલ તબક્કો અને 0.1% TFA નો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવ્યું હતું. HSA ના ક્લીવેજને 17 શિખરોમાં વિભાજિત કરવામાં આવ્યું હતું, જેમ કે ક્રોમેટોગ્રામ (આકૃતિ 6) માં બતાવ્યા પ્રમાણે, 17 પેપ્ટાઇડ્સને અનુરૂપ. HSA હાઇડ્રોલાઇઝેટથી વ્યક્તિગત શિખરોની અલગ કાર્યક્ષમતાની ગણતરી કરવામાં આવી હતી અને મૂલ્યો કોષ્ટક 5 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે.
HSA ટ્રિપ્ટિક હાઇડ્રોલિસેટ્સને PMP કોલમ (આંતરિક વ્યાસ 100 x 1.8 mm), પ્રવાહ દર (100 μl/મિનિટ), મોબાઇલ ફેઝ 60/40 એસિટોનિટ્રાઇલ/પાણી અને 0.1% TFA પર અલગ કરવામાં આવ્યા હતા.
જ્યાં L એ સ્તંભની લંબાઈ છે, η એ મોબાઇલ તબક્કાની સ્નિગ્ધતા છે, ΔP એ સ્તંભનો પાછળનો દબાણ છે, અને u એ મોબાઇલ તબક્કાનો રેખીય વેગ છે. PMP સ્તંભની અભેદ્યતા 2.5 × 10–14 m2 હતી, પ્રવાહ દર 25 µl/મિનિટ હતો, 60/40 v/v નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. ACN/પાણી. PMP સ્તંભની અભેદ્યતા (ID 100 × 1.8 mm) અમારા અગાઉના Ref.34 અભ્યાસ જેવી જ હતી. સુપરફિસિયલ છિદ્રાળુ કણોથી ભરેલા સ્તંભની અભેદ્યતા 1.7×10 .6 µm છે, 5 µm કણો માટે 2.5×10-14 m2 છે43. તેથી, PMP તબક્કાની અભેદ્યતા 5 μm કદવાળા કોર-શેલ કણોની અભેદ્યતા જેવી જ છે.
જ્યાં Wx એ ક્લોરોફોર્મથી ભરેલા સ્તંભનો દળ છે, Wy એ મિથેનોલથી ભરેલા સ્તંભનો દળ છે, અને ρ એ દ્રાવકની ઘનતા છે. મિથેનોલની ઘનતા (ρ = 0.7866) અને ક્લોરોફોર્મ (ρ = 1.484). સિલિકા-C18 કણ સ્તંભ (100 × 1.8 mm ID)34 અને અમારા અગાઉ અભ્યાસ કરાયેલ C18-urea31 સ્તંભની કુલ છિદ્રાળુતા અનુક્રમે 0.63 અને 0.55 હતી. આનો અર્થ એ છે કે યુરિયા લિગાન્ડ્સની હાજરી સ્થિર તબક્કાની અભેદ્યતા ઘટાડે છે. બીજી બાજુ, PMP સ્તંભ (આંતરિક વ્યાસ 100 × 1.8 mm) ની કુલ છિદ્રાળુતા 0.60 છે. PMP સ્તંભો C18 બાઉન્ડ સિલિકા કણોથી ભરેલા સ્તંભો કરતાં ઓછા અભેદ્ય છે કારણ કે C18 પ્રકારના સ્થિર તબક્કાઓમાં C18 લિગાન્ડ્સ રેખીય સાંકળોમાં સિલિકા કણો સાથે જોડાયેલા હોય છે, જ્યારે પોલિસ્ટરીન પ્રકારના સ્થિર તબક્કાઓમાં કણોની આસપાસ પ્રમાણમાં જાડા પોલિમર રચાય છે. સ્તર A. એક લાક્ષણિક પ્રયોગમાં, સ્તંભ છિદ્રાળુતાની ગણતરી નીચે મુજબ કરવામાં આવે છે:
આકૃતિ 7A, B માં, PMP કોલમ (id 100 x 1.8 mm) અને Ascentis Express RP-Amide કોલમ (id 100 x 1.8 mm) માટે વેન ડીમીટર પ્લોટ્સ સમાન એલ્યુશન પરિસ્થિતિઓ હેઠળ, 60/40 ACN/H2O અને 0 .1% TFA 20 µl/min થી 800 µl/min બંને કોલમ પર દર્શાવે છે. શ્રેષ્ઠ પ્રવાહ દર (80 µl/min) પર લઘુત્તમ HETP મૂલ્યો PMP કોલમ અને Ascentis Express RP-Amide કોલમ માટે અનુક્રમે 2.6 µm અને 3.9 µm હતા. HETP મૂલ્યો દર્શાવે છે કે PMP કોલમ (100 x 1.8 mm id) ની વિભાજન કાર્યક્ષમતા વ્યાપારી રીતે ઉપલબ્ધ Ascentis Express RP-Amide કોલમ (100 x 1.8 mm id) કરતા ઘણી વધારે છે. આકૃતિ 7(A) માં વાન ડીમ્ટર ગ્રાફ દર્શાવે છે કે અમારા અગાઉના અભ્યાસની તુલનામાં વધતા પ્રવાહ સાથે N મૂલ્યમાં ઘટાડો નોંધપાત્ર રીતે વધારે નથી. એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide સ્તંભની તુલનામાં PMP સ્તંભ (id 100 × 1.8 mm) ની ઉચ્ચ વિભાજન કાર્યક્ષમતા સુધારેલા કણ આકાર અને કદ અને વર્તમાન કાર્ય34 માં ઉપયોગમાં લેવાતી અત્યાધુનિક સ્તંભ પેકિંગ પ્રક્રિયા પર આધારિત છે.
(A) 0.1% TFA સાથે 60/40 ACN/H2O માં PMP કોલમ (id 100 x 1.8 mm) પર મેળવેલ વેન ડીમ્ટર પ્લોટ (HETP વિરુદ્ધ મોબાઇલ ફેઝ રેખીય વેગ). (B) 0.1% TFA સાથે 60/40 ACN/H2O માં એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ (id 100 x 1.8 mm) પર મેળવેલ વેન ડીમ્ટર પ્લોટ (HETP વિરુદ્ધ મોબાઇલ ફેઝ રેખીય વેગ).
ઉચ્ચ પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં કૃત્રિમ પેપ્ટાઇડ્સ અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HSA) ના ટ્રિપ્ટિક હાઇડ્રોલાઇઝેટના મિશ્રણને અલગ કરવા માટે ઇન્ટરકેલેટેડ પોલિસ્ટરીનનો ધ્રુવીય સ્થિર તબક્કો તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો અને તેનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ માટે PMP સ્તંભોનું ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રદર્શન વિભાજન કાર્યક્ષમતા અને રિઝોલ્યુશનની દ્રષ્ટિએ ઉત્તમ છે. PMP સ્તંભોની સુધારેલી વિભાજન કાર્યક્ષમતા સિલિકા કણ કદ અને છિદ્ર કદ, સ્થિર તબક્કાઓનું નિયંત્રિત સંશ્લેષણ અને જટિલ સ્તંભ પેકિંગ સામગ્રી જેવા ઘણા કારણોસર છે. ઉચ્ચ વિભાજન કાર્યક્ષમતા ઉપરાંત, આ સ્થિર તબક્કાનો બીજો ફાયદો ઉચ્ચ પ્રવાહ દરે નીચા સ્તંભ બેક દબાણ છે. PMP સ્તંભો ખૂબ પ્રજનનક્ષમ છે અને તેનો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ્સના મિશ્રણ અને વિવિધ પ્રોટીનના ટ્રિપ્ટિક પાચનનું વિશ્લેષણ કરવા માટે થઈ શકે છે. અમે પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં કુદરતી ઉત્પાદનો, ઔષધીય છોડના અર્ક અને મશરૂમમાંથી બાયોએક્ટિવ સંયોજનોને અલગ કરવા માટે આ સ્તંભનો ઉપયોગ કરવાનો ઇરાદો રાખીએ છીએ. ભવિષ્યમાં, પ્રોટીન અને મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝના અલગ કરવા માટે PMP સ્તંભોનું પણ મૂલ્યાંકન કરવામાં આવશે.
ફીલ્ડ, જેકે, યુર્બી, એમઆર, લાઉ, જે., થોગરસન, એચ. અને પીટરસન, પી. રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સ ભાગ I માં તપાસ: કોલમ લાક્ષણિકતા માટે પ્રોટોકોલનો વિકાસ. ફીલ્ડ, જેકે, યુર્બી, એમઆર, લાઉ, જે., થોગરસન, એચ. અને પીટરસન, પી. રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સ ભાગ I માં તપાસ: કોલમ કેરેક્ટરાઇઝેશન માટે પ્રોટોકોલનો વિકાસ.ફીલ્ડ, જેકે, ઓવરબી, એમઆર, લાઉ, જે., ટોગરસન, એચ., અને પીટરસન, પી. રિવર્સ-ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સની તપાસ, ભાગ I: કોલમ કેરેક્ટરાઇઝેશન માટે પ્રોટોકોલ વિકસાવવો. ફીલ્ડ, જેકે, યુર્બી, એમઆર, લાઉ, જે., થોગરસન, એચ. અને પીટરસન, પી. રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સ ભાગ I માં તપાસ: કોલમ લાક્ષણિકતાઓ માટે પ્રોટોકોલનો વિકાસ. ફીલ્ડ, જેકે, યુર્બી, એમઆર, લાઉ, જે., થોગરસન, એચ. અને પીટરસન, પી. રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સ ભાગ I માં તપાસ: કોલમ લાક્ષણિકતાઓ માટે પ્રોટોકોલનો વિકાસ.ફીલ્ડ, જેકે, ઓવરબી, એમઆર, લાઉ, જે., ટોગરસન, એચ., અને પીટરસન, પી. રિવર્સ-ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સની તપાસ, ભાગ I: કોલમ કેરેક્ટરાઇઝેશન માટે પ્રોટોકોલ વિકસાવવો.J.色谱法. 1603,113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
ગોમેઝ, બી. એટ અલ. ચેપી રોગોની સારવાર માટે સુધારેલ સક્રિય પેપ્ટાઇડ્સ બનાવવાની પદ્ધતિઓ. બાયોટેકનોલોજી. સિદ્ધિઓ 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
વ્લીઘે, પી., લિસોવસ્કી, વી., માર્ટિનેઝ, જે. અને ખ્રેસ્ટચેટિસ્કી, એમ. સિન્થેટિક થેરાપ્યુટિક પેપ્ટાઇડ્સ: વિજ્ઞાન અને બજાર. વ્લીઘે, પી., લિસોવસ્કી, વી., માર્ટિનેઝ, જે. અને ખ્રેસ્ટચેટિસ્કી, એમ. સિન્થેટિક થેરાપ્યુટિક પેપ્ટાઇડ્સ: વિજ્ઞાન અને બજાર.વ્લીજ પી, લિસોવસ્કી વી, માર્ટિનેઝ જે અને ક્રેસ્ચેટીસ્કી એમ. સિન્થેટિક થેરાપ્યુટિક પેપ્ટાઇડ્સ: વિજ્ઞાન અને બજાર.વ્લીજ પી, લિસોવસ્કી વી, માર્ટિનેઝ જે અને ખ્રેશ્ચાત્સ્કી એમ. સિન્થેટિક થેરાપ્યુટિક પેપ્ટાઇડ્સ: વિજ્ઞાન અને બજાર. દવા શોધ. આજે 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ઝી, એફ., સ્મિથ, આરડી અને શેન, વાય. એડવાન્સ્ડ પ્રોટીઓમિક લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી. ઝી, એફ., સ્મિથ, આરડી અને શેન, વાય. એડવાન્સ્ડ પ્રોટીઓમિક લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી.એફ., સ્મિથ આરડી અને શેન યુ. જુઓ. એડવાન્સ્ડ પ્રોટીઓમિક લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. એડવાન્સ્ડ પ્રોટીન કમ્પોઝિશન 液相色谱.એફ., સ્મિથ આરડી અને શેન યુ. જુઓ. એડવાન્સ્ડ પ્રોટીઓમિક લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી.જે. ક્રોમેટોગ્રાફી. એ 1261, 78–90 (2012).
લિયુ, ડબલ્યુ. એટ અલ. એડવાન્સ્ડ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી બ્રોડ-બેઝ્ડ મેટાબોલોમિક્સ અને પ્રોટીઓમિક્સનું સંયોજન કરવામાં સક્ષમ છે. ગુદા. ચિમ. એક્ટા 1069, 89–97 (2019).
ચેસ્નટ, એસએમ અને સેલિસ્બરી, જેજે ફાર્માસ્યુટિકલ વિકાસમાં યુએચપીએલસીની ભૂમિકા. ચેસ્નટ, એસએમ અને સેલિસ્બરી, જેજે ફાર્માસ્યુટિકલ વિકાસમાં યુએચપીએલસીની ભૂમિકા.ચેસ્નટ, એસએમ અને સેલિસ્બરી, જેજે ફાર્માસ્યુટિકલ વિકાસમાં યુએચપીએલસીની ભૂમિકા.ચેસ્નટ, એસએમ અને સેલિસ્બરી, જેજે દવાના વિકાસમાં યુએચપીએલસીની ભૂમિકા. જે. સેપ્ટ સાયન્સ. 30(8), 1183–1190 (2007).
વુ, એન. અને ક્લોસેન, એએમ ઝડપી વિભાજન માટે અલ્ટ્રાહાઇ પ્રેશર લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાઓ. વુ, એન. અને ક્લોસેન, એએમ ઝડપી વિભાજન માટે અલ્ટ્રાહાઇ પ્રેશર લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાઓ.વુ, એન. અને ક્લોસેન, એએમ ઝડપી વિભાજન માટે ઉચ્ચ દબાણ પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાઓ. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面. વુ, એન. અને ક્લોસેન, એએમ ઝડપી વિભાજન માટે અલ્ટ્રા-હાઇ પ્રેશર લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાઓ.વુ, એન. અને ક્લોસેન, એએમ ઝડપી વિભાજન માટે ઉચ્ચ દબાણ પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાઓ.જે. સપ્ટેમ્બર. સાયન્સ. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
રેન, એસએ અને ચેલિટેચેફ, પી. ફાર્માસ્યુટિકલ વિકાસમાં અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીનો ઉપયોગ. રેન, એસએ અને ચેલિટેચેફ, પી. ફાર્માસ્યુટિકલ વિકાસમાં અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીનો ઉપયોગ.રેન, એસએ અને ચેલિશેફ, પી. ફાર્માસ્યુટિકલ વિકાસમાં અલ્ટ્રા હાઇ પરફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીનો ઉપયોગ. Wren, SA અને Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. રેન, એસએ અને ચેલિચેફ, પી.રેન, એસએ અને ચેલિશેફ, પી. દવા વિકાસમાં અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીનો ઉપયોગ.જે. ક્રોમેટોગ્રાફી. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ગુ, એચ. એટ અલ. એન્ટરોવાયરસના કાર્યક્ષમ શુદ્ધિકરણ માટે ઉચ્ચ આંતરિક તબક્કાવાળા તેલ-ઇન-વોટર ઇમલ્શનમાંથી મેળવેલ મોનોલિથિક મેક્રોપોરસ હાઇડ્રોજેલ 71. કેમિકલ. પ્રોજેક્ટ. જર્નલ 401, 126051 (2020).
શી, વાય., ઝિયાંગ, આર., હોર્વાથ, સી. અને વિલ્કિન્સ, જેએ પ્રોટીઓમિક્સમાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીની ભૂમિકા. શી, વાય., ઝિયાંગ, આર., હોર્વાથ, સી. અને વિલ્કિન્સ, જેએ પ્રોટીઓમિક્સમાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીની ભૂમિકા.શી, વાય., ઝિયાંગ, આર., હોર્વાથ, સી. અને વિલ્કિન્સ, જેએ પ્રોટીઓમિક્સમાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીની ભૂમિકા. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAશી, વાય., ઝિયાંગ, આર., હોર્વાથ, સી. અને વિલ્કિન્સ, જેએ પ્રોટીઓમિક્સમાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીની ભૂમિકા.જે. ક્રોમેટોગ્રાફી. એ 1053 (1-2), 27-36 (2004).
ફેકેટે, એસ., વુટે, જે.-એલ. અને ગિલાર્મ, ડી. ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના રિવર્સ્ડ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફિક વિભાજનમાં નવા વલણો: સિદ્ધાંત અને એપ્લિકેશનો. અને ગિલાર્મ, ડી. ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના રિવર્સ્ડ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફિક વિભાજનમાં નવા વલણો: સિદ્ધાંત અને એપ્લિકેશનો. અને ગ્યુલાર્મે, ડી. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографии соматографи: ટિઓરિયા અને પ્રિલોજેનિયા. અને ગિલાર્મ, ડી. રિવર્સ ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના વિભાજનમાં નવા વલણો: સિદ્ધાંત અને એપ્લિકેશનો. અને ગ્યુલાર્મ, ડી. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. અને ગિલાર્મ, ડી.અને ગિલાર્મે, ડી. રિવર્સ ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના વિભાજનમાં નવા વલણો: સિદ્ધાંત અને એપ્લિકેશનો.જે. ફાર્મ. બાયોમેડિકલ સાયન્સ. ગુદા. 69, 9–27 (2012).
ગિલર, એમ., ઓલિવોવા, પી., ડેલી, એઇ અને ગેબલર, જેસી. પ્રથમ અને બીજા વિભાજન પરિમાણોમાં અલગ pH સાથે RP-RP-HPLC સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ્સનું દ્વિ-પરિમાણીય વિભાજન. ગિલર, એમ., ઓલિવોવા, પી., ડેલી, એઇ અને ગેબલર, જેસી. પ્રથમ અને બીજા વિભાજન પરિમાણોમાં અલગ pH સાથે RP-RP-HPLC સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ્સનું દ્વિ-પરિમાણીય વિભાજન.ગિલર એમ., ઓલિવોવા પી., ડાલી એઇ અને ગેબલર જેકે પ્રથમ અને બીજા વિભાજન પરિમાણોમાં અલગ અલગ pH સાથે RP-RP-HPLC સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ્સનું દ્વિ-પરિમાણીય વિભાજન.ગિલર એમ., ઓલિવોવા પી., ડાલી એઇ અને ગેબલર જેકે RP-RP-HPLC સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને પ્રથમ અને બીજા વિભાજન પરિમાણોમાં વિવિધ pH મૂલ્યોનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ્સનું દ્વિ-પરિમાણીય વિભાજન. જે. સેપ્ટ સાયન્સ. 28 (14), 1694–1703 (2005).
ફેલીટ્ટી, એસ. એટ અલ. 2 µm કરતા નાના સંપૂર્ણપણે છિદ્રાળુ અને સુપરફિસિયલ છિદ્રાળુ C18 કણોથી ભરેલા ઉચ્ચ-પ્રદર્શન ક્રોમેટોગ્રાફી સ્તંભોના સમૂહ સ્થાનાંતરણ અને ગતિ લાક્ષણિકતાઓની તપાસ. જે. સપ્ટેમ્બર સાયન્સ. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
પીઓવેસાના, એસ. એટ અલ. છોડના બાયોએક્ટિવ પેપ્ટાઇડ્સના અલગતા, ઓળખ અને માન્યતામાં તાજેતરના વલણો અને વિશ્લેષણાત્મક પડકારો. ગુદા. પ્રાણી ગુદા. રાસાયણિક. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
મુલર, જેબી અને અન્ય. જીવનના રાજ્યનું પ્રોટીઓમિક લેન્ડસ્કેપ. કુદરત 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ડી લુકા, કે. એટ અલ. પ્રિપેરેટિવ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સની પોસ્ટ-ટ્રીટમેન્ટ. મોલેક્યુલ્સ (બેઝલ, સ્વિટ્ઝર્લૅન્ડ) 26(15), 4688 (2021).
યાંગ, વાય. અને ગેંગ, એક્સ. મિશ્ર-મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને બાયોપોલિમર્સમાં તેનો ઉપયોગ. યાંગ, વાય. અને ગેંગ, એક્સ. મિશ્ર-મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને બાયોપોલિમર્સમાં તેનો ઉપયોગ.યાંગ, યુ. અને ગેંગ, એક્સ. મિશ્રિત મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને બાયોપોલિમર્સમાં તેનો ઉપયોગ. યાંગ, વાય. અને ગેંગ, એક્સ. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. યાંગ, વાય. અને ગેંગ, એક્સ. મિશ્રિત મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને બાયોપોલિમર્સમાં તેનો ઉપયોગ.યાંગ, યુ. અને જીન, એક્સ. મિશ્રિત મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને બાયોપોલિમર્સમાં તેનો ઉપયોગ.જે. ક્રોમેટોગ્રાફી. એ 1218(49), 8813–8825 (2011).