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अनियंत्रित रक्तस्राव मृत्यु के प्रमुख कारणों में से एक है।तेजी से हेमोस्टेसिस प्राप्त करने से युद्ध, यातायात दुर्घटनाओं और मृत्यु में कमी के संचालन के दौरान प्राथमिक उपचार के रूप में विषय का अस्तित्व सुनिश्चित होता है।एक सतत चरण के रूप में एक सरल हेमोस्टैटिक फिल्म-बनाने वाली संरचना (एचएफएफसी) से प्राप्त नैनोपोरस फाइबर-प्रबलित मिश्रित मचान (एनएफआरसीएस) हेमोस्टेसिस को ट्रिगर और बढ़ा सकता है।एनएफआरसीएस का विकास ड्रैगनफ्लाई के पंख के डिजाइन पर आधारित है।ड्रैगनफ़्लाई पंख संरचना में अनुप्रस्थ और अनुदैर्ध्य पंख होते हैं, और पंख झिल्ली सूक्ष्म संरचना की अखंडता को बनाए रखने के लिए एक दूसरे से जुड़े होते हैं।एचएफएफसी नैनोमीटर मोटाई की एक फिल्म के साथ फाइबर की सतह को समान रूप से कोट करता है और एक नैनोपोरस संरचना बनाने के लिए यादृच्छिक रूप से वितरित कपास मोटाई (सीटी) (फैला हुआ चरण) को जोड़ता है।निरंतर और बिखरे हुए चरणों का संयोजन व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उत्पादों की तुलना में उत्पाद की लागत को दस गुना कम कर देता है।संशोधित एनएफआरसीएस (टैम्पोन या रिस्टबैंड) का उपयोग विभिन्न प्रकार के बायोमेडिकल अनुप्रयोगों में किया जा सकता है।इन विवो अध्ययनों ने निष्कर्ष निकाला है कि विकसित सीपी एनएफआरसीएस अनुप्रयोग स्थल पर जमावट प्रक्रिया को ट्रिगर और बढ़ाता है।एनएफआरसीएस सूक्ष्म वातावरण को नियंत्रित कर सकता है और अपनी नैनोपोरस संरचना के कारण सेलुलर स्तर पर कार्य कर सकता है जिसके परिणामस्वरूप एक्सिशन घाव मॉडल में घाव का उपचार बेहतर हो सकता है।
युद्ध, अंतःक्रियात्मक और आपातकालीन स्थितियों के दौरान अनियंत्रित रक्तस्राव घायलों के जीवन के लिए गंभीर खतरा पैदा कर सकता है1।ये स्थितियाँ परिधीय संवहनी प्रतिरोध में समग्र वृद्धि का कारण बनती हैं, जिससे रक्तस्रावी आघात होता है।सर्जरी के दौरान और बाद में रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए उचित उपाय संभावित रूप से जीवन के लिए खतरा माने जाते हैं।बड़ी वाहिकाओं के क्षतिग्रस्त होने से बड़े पैमाने पर रक्त की हानि होती है, जिसके परिणामस्वरूप युद्ध में मृत्यु दर ≤ 50% और सर्जरी के दौरान 31% होती है।भारी रक्त हानि से शरीर की मात्रा में कमी आती है, जिससे कार्डियक आउटपुट कम हो जाता है।कुल परिधीय संवहनी प्रतिरोध में वृद्धि और माइक्रोसिरिक्युलेशन की प्रगतिशील हानि से जीवन-समर्थन अंगों में हाइपोक्सिया हो जाता है।यदि प्रभावी हस्तक्षेप1,4,5 के बिना स्थिति जारी रहती है तो रक्तस्रावी सदमा हो सकता है।अन्य जटिलताओं में हाइपोथर्मिया और मेटाबोलिक एसिडोसिस की प्रगति, साथ ही एक जमावट विकार शामिल है जो जमावट प्रक्रिया को बाधित करता है।गंभीर रक्तस्रावी सदमा मृत्यु के उच्च जोखिम6,7,8 से जुड़ा है।ग्रेड III (प्रगतिशील) सदमे में, इंट्राऑपरेटिव और पोस्टऑपरेटिव रुग्णता और मृत्यु दर के दौरान रोगी के जीवित रहने के लिए रक्त आधान आवश्यक है।उपरोक्त सभी जीवन-घातक स्थितियों पर काबू पाने के लिए, हमने एक नैनोपोरस फाइबर-प्रबलित मिश्रित मचान (एनएफआरसीएस) विकसित किया है जो पानी में घुलनशील हेमोस्टैटिक पॉलिमर के संयोजन का उपयोग करके न्यूनतम पॉलिमर एकाग्रता (0.5%) का उपयोग करता है।
फाइबर सुदृढीकरण के उपयोग से, लागत प्रभावी उत्पाद विकसित किए जा सकते हैं।बेतरतीब ढंग से व्यवस्थित रेशे ड्रैगनफ्लाई के पंख की संरचना से मिलते जुलते हैं, जो पंखों पर क्षैतिज और ऊर्ध्वाधर धारियों द्वारा संतुलित होते हैं।पंख की अनुप्रस्थ और अनुदैर्ध्य नसें पंख की झिल्ली से संचार करती हैं (चित्र 1)।एनएफआरसीएस में बेहतर भौतिक और यांत्रिक शक्ति (चित्र 1) के साथ एक मचान प्रणाली के रूप में प्रबलित सीटी शामिल है।सामर्थ्य और शिल्प कौशल के कारण, सर्जन ऑपरेशन और ड्रेसिंग के दौरान सूती धागे के गेज (सीटी) का उपयोग करना पसंद करते हैं। इसलिए, >90% क्रिस्टलीय सेलूलोज़ (हेमोस्टैटिक गतिविधि को बढ़ाने में शामिल) सहित इसके कई लाभों को ध्यान में रखते हुए, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस9,10 की कंकाल प्रणाली के रूप में किया गया था। इसलिए, >90% क्रिस्टलीय सेलूलोज़ (हेमोस्टैटिक गतिविधि को बढ़ाने में शामिल) सहित इसके कई लाभों को ध्यान में रखते हुए, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस9,10 की कंकाल प्रणाली के रूप में किया गया था। Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 9 0% кристалической целлюлозы (участвует в повышении гемостатической акт ивности), सीटी использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. इसलिए, इसके कई लाभों को देखते हुए, जिसमें >90% क्रिस्टलीय सेलूलोज़ (बढ़ी हुई हेमोस्टैटिक गतिविधि में शामिल) शामिल है, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस कंकाल प्रणाली9,10 के रूप में किया गया था।因此, 考虑到它的多重益处, 包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血活性）, Ct 被用作NFRCS9 ,10 的骨架系统。अधिकतम लाभ, ऋण भुगतान, मूल्य निर्धारण > 90%इसलिए, 90% से अधिक क्रिस्टलीय सेलूलोज़ (हेमोस्टैटिक गतिविधि को बढ़ाने में मदद करता है) सहित इसके कई लाभों को देखते हुए, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस9,10 के लिए एक मचान के रूप में किया गया था।सीटी को सतही रूप से लेपित किया गया था (नैनो-मोटी फिल्म निर्माण देखा गया था) और एक हेमोस्टैटिक फिल्म-गठन संरचना (एचएफएफसी) के साथ जुड़ा हुआ था।एचएफएफसी एक मैट्रीगेल की तरह काम करता है, जो बेतरतीब ढंग से रखे गए सीटी को एक साथ रखता है।विकसित डिज़ाइन बिखरे हुए चरण (मजबूत फाइबर) के भीतर तनाव संचारित करता है।न्यूनतम पॉलिमर सांद्रता का उपयोग करके अच्छी यांत्रिक शक्ति के साथ नैनोपोरस संरचनाएं प्राप्त करना मुश्किल है।इसके अलावा, विभिन्न बायोमेडिकल अनुप्रयोगों के लिए अलग-अलग सांचों को अनुकूलित करना आसान नहीं है।
यह चित्र ड्रैगनफ्लाई विंग संरचना (ए) के आधार पर एनएफआरसीएस डिजाइन का एक आरेख दिखाता है।यह छवि ड्रैगनफ्लाई के पंख की संरचना का तुलनात्मक सादृश्य दिखाती है (पंख की प्रतिच्छेदी और अनुदैर्ध्य नसें आपस में जुड़ी हुई हैं) और सीपी एनएफआरसीएस (बी) का एक क्रॉस-सेक्शनल फोटोमाइक्रोग्राफ।एनएफआरसीएस का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व।
उपरोक्त सीमाओं को संबोधित करने के लिए एनएफआरसी को एक सतत चरण के रूप में एचएफएफसी का उपयोग करके विकसित किया गया था।एचएफएफसी विभिन्न फिल्म बनाने वाले हेमोस्टैटिक पॉलिमर से बना है जिसमें चिटोसन (मुख्य हेमोस्टैटिक पॉलिमर के रूप में) मिथाइलसेलुलोज (एमसी), हाइड्रॉक्सीप्रोपाइल मिथाइलसेलुलोज (एचपीएमसी 50 सीपी) और पॉलीविनाइल अल्कोहल (पीवीए)) (125 केडीए) एक सहायक पॉलिमर के रूप में शामिल है जो थ्रोम्बस गठन को बढ़ावा देता है।गठन।पॉलीविनाइलपाइरोलिडीन K30 (PVP K30) को शामिल करने से NFRCS की नमी अवशोषण क्षमता में सुधार हुआ।बंधुआ पॉलिमर मिश्रणों में पॉलिमर क्रॉसलिंकिंग को बेहतर बनाने के लिए पॉलीइथाइलीन ग्लाइकॉल 400 (पीईजी 400) जोड़ा गया था।तीन अलग-अलग एचएफएफसी हेमोस्टैटिक रचनाएं (सीएम एचएफएफसी, सीएच एचएफएफसी और सीपी एचएफएफसी), अर्थात् एमसी (सीएम) के साथ चिटोसन, एचपीएमसी (सीएच) के साथ चिटोसन, और पीवीए (सीपी) के साथ चिटोसन, को सीटी पर लागू किया गया था।विभिन्न इन विट्रो और इन विवो लक्षण वर्णन अध्ययनों ने एनएफआरसीएस की हेमोस्टैटिक और घाव भरने की गतिविधि की पुष्टि की है।एनएफआरसीएस द्वारा प्रदान की गई समग्र सामग्रियों का उपयोग विशिष्ट आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए मचान के विभिन्न रूपों को अनुकूलित करने के लिए किया जा सकता है।
इसके अलावा, एनएफआरसीएस को निचले छोरों और शरीर के अन्य हिस्सों के पूरे चोट क्षेत्र को कवर करने के लिए एक पट्टी या रोल के रूप में संशोधित किया जा सकता है।विशेष रूप से लड़ाकू अंगों की चोटों के लिए, डिज़ाइन किए गए एनएफआरसीएस डिज़ाइन को आधे हाथ या पूरे पैर में बदला जा सकता है (पूरक चित्र S11)।एनएफआरसीएस को ऊतक गोंद के साथ एक कलाईबैंड में बनाया जा सकता है, जिसका उपयोग गंभीर आत्मघाती कलाई की चोटों से रक्तस्राव को रोकने के लिए किया जा सकता है।हमारा मुख्य लक्ष्य यथासंभव कम पॉलिमर के साथ एक एनएफआरसीएस विकसित करना है जिसे बड़ी आबादी (गरीबी रेखा से नीचे) तक पहुंचाया जा सके और जिसे प्राथमिक चिकित्सा किट में रखा जा सके।डिज़ाइन में सरल, कुशल और किफायती, एनएफआरसीएस स्थानीय समुदायों को लाभ पहुंचाता है और वैश्विक प्रभाव डाल सकता है।
चिटोसन (आणविक भार 80 केडीए) और ऐमारैंथ मर्क, भारत से खरीदे गए थे।हाइड्रोक्सीप्रोपाइल मिथाइलसेलुलोज 50 सीपी, पॉलीइथाइलीन ग्लाइकोल 400 और मिथाइलसेलुलोज को लोबा केमी प्राइवेट लिमिटेड से खरीदा गया था।एलएलसी, मुंबई।पॉलीविनाइल अल्कोहल (आणविक भार 125 केडीए) (87-90% हाइड्रोलाइज्ड) नेशनल केमिकल्स, गुजरात से खरीदा गया था।पॉलीविनाइलपाइरोलिडाइन K30 को मोलीकेम, मुंबई से खरीदा गया था, बाँझ स्वैब को रामाराजू सर्जरी कॉटन मिल्स लिमिटेड, तमिलनाडु से खरीदा गया था, जिसमें वाहक के रूप में मिल्ली क्यू पानी (डायरेक्ट-क्यू 3 जल शोधन प्रणाली, मर्क, भारत) था।
एनएफआरसीएस को लियोफिलाइजेशन विधि11,12 का उपयोग करके विकसित किया गया था।सभी एचएफएफसी रचनाएँ (तालिका 1) एक यांत्रिक स्टिरर का उपयोग करके तैयार की गईं।एक यांत्रिक स्टिरर पर 800 आरपीएम पर लगातार हिलाते हुए पानी में 1% एसिटिक एसिड का उपयोग करके चिटोसन का 0.5% घोल तैयार करें।तालिका 1 में दर्शाए गए लोड किए गए पॉलिमर का सटीक वजन चिटोसन समाधान में जोड़ा गया था और एक स्पष्ट पॉलिमर समाधान प्राप्त होने तक हिलाया गया था।पीवीपी के30 और पीईजी 400 को परिणामी मिश्रण में तालिका 1 में बताई गई मात्रा में मिलाया गया था, और एक स्पष्ट चिपचिपा बहुलक समाधान प्राप्त होने तक सरगर्मी जारी रखी गई थी।पॉलिमर मिश्रण में फंसे हवा के बुलबुले को हटाने के लिए पॉलिमर घोल के परिणामी स्नान को 60 मिनट के लिए सोनिकेट किया गया।जैसा कि पूरक चित्र एस1(बी) में दिखाया गया है, सीटी को 5 मिलीलीटर एचएफएफसी के साथ पूरक 6-वेल प्लेट (मोल्ड) के प्रत्येक कुएं में समान रूप से वितरित किया गया था।
सीटी नेटवर्क में एचएफएफसी के समान गीलापन और वितरण को प्राप्त करने के लिए छह-वेल प्लेट को 60 मिनट के लिए सोनिकेट किया गया था।फिर छह-वेल प्लेट को -20 डिग्री सेल्सियस पर 8-12 घंटे के लिए फ्रीज करें।एनएफआरसीएस के विभिन्न फॉर्मूलेशन प्राप्त करने के लिए फ़्रीज़ प्लेटों को 48 घंटों के लिए लिओफ़िलाइज़ किया गया था।एक ही प्रक्रिया का उपयोग विभिन्न आकृतियों और संरचनाओं, जैसे टैम्पोन या बेलनाकार टैम्पोन, या विभिन्न अनुप्रयोगों के लिए किसी अन्य आकार को बनाने के लिए किया जाता है।
सटीक रूप से तौले गए चिटोसन (80 केडीए) (3%) को चुंबकीय स्टिरर का उपयोग करके 1% एसिटिक एसिड में घोल दिया जाता है।चिटोसन के परिणामी घोल में 1% पीईजी 400 मिलाया गया और 30 मिनट तक हिलाया गया।परिणामी घोल को एक चौकोर या आयताकार कंटेनर में डालें और 12 घंटे के लिए -80°C पर जमा दें।झरझरा Cs13 प्राप्त करने के लिए जमे हुए नमूनों को 48 घंटों के लिए लियोफिलाइज़ किया गया।
विकसित एनएफआरसीएस को अन्य पॉलिमर14,15 के साथ चिटोसन की रासायनिक अनुकूलता की पुष्टि करने के लिए फूरियर ट्रांसफॉर्म इंफ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफटीआईआर) (शिमदज़ु 8400 एस एफटीआईआर, टोक्यो, जापान) का उपयोग करके प्रयोगों के अधीन किया गया था।सभी परीक्षण किए गए नमूनों का एफटीआईआर स्पेक्ट्रा (वर्णक्रमीय सीमा की चौड़ाई 400 से 4000 सेमी-1 तक) 32 स्कैन करके प्राप्त किए गए थे।
चेन एट अल द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके सभी फॉर्मूलेशन के लिए रक्त अवशोषण दर (बीएआर) का मूल्यांकन किया गया था।16 थोड़े से संशोधन के साथ।अवशिष्ट विलायक को हटाने के लिए सभी रचनाओं के विकसित एनएफआरके को रात भर 105 डिग्री सेल्सियस पर वैक्यूम ओवन में सुखाया गया।30 मिलीग्राम एनएफआरसीएस (प्रारंभिक नमूना वजन - डब्ल्यू0) और 30 मिलीग्राम सीटी (सकारात्मक नियंत्रण) को 3.8% सोडियम साइट्रेट के प्रीमिक्स वाले अलग-अलग व्यंजनों में रखा गया था।पूर्व निर्धारित समय अंतराल पर, यानी 5, 10, 20, 30, 40 और 60 सेकंड पर, एनएफआरसीएस को हटा दिया गया और नमूनों को 30 सेकंड के लिए सीटी पर रखकर उनकी सतहों को अनअवशोषित रक्त से साफ किया गया।प्रत्येक समय बिंदु पर एनएफआरसीएस 16 द्वारा अवशोषित रक्त का अंतिम वजन (डब्ल्यू1) माना जाता था।निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके BAR प्रतिशत की गणना करें:
जैसा कि वांग एट अल द्वारा रिपोर्ट किया गया था, रक्त का थक्का जमने का समय (बीसीटी) निर्धारित किया गया था।17 .एनएफआरसीएस की उपस्थिति में संपूर्ण रक्त (3.8% सोडियम साइट्रेट के साथ मिश्रित चूहे का रक्त) को जमने में लगने वाले समय की गणना परीक्षण नमूने के बीसीटी के रूप में की गई थी।विभिन्न एनएफआरसीएस घटकों (30 मिलीग्राम) को 10 मिलीलीटर स्क्रू कैप शीशियों में रखा गया और 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया।रक्त जमावट को सक्रिय करने के लिए शीशी में रक्त (0.5 मिली) डाला गया और 0.2 एम CaCl2 का 0.3 मिली जोड़ा गया।अंत में, शीशी को हर 15 सेकंड में (180° तक) पलटें जब तक कि एक ठोस थक्का न बन जाए।नमूने की बीसीटी का अनुमान फ़्लिप वेल्स17,18 की संख्या से लगाया जाता है।बीसीटी के आधार पर, एनएफआरसीएस सीएम, सीएच और सीपी से दो इष्टतम रचनाओं को आगे के लक्षण वर्णन अध्ययन के लिए चुना गया था।
Ch NFRCS और Cp NFRCS रचनाओं का BCT ली एट अल द्वारा वर्णित विधि को लागू करके निर्धारित किया गया था।19 .15 x 15 मिमी2 Ch एनएफआरसीएस, सीपी एनएफआरसीएस, और सीएस (सकारात्मक नियंत्रण) को अलग पेट्री डिश (37 डिग्री सेल्सियस) में रखें।रक्त के थक्के बनने की प्रक्रिया शुरू करने के लिए 3.8% सोडियम साइट्रेट युक्त रक्त को 10:1 मात्रा अनुपात में 0.2 M CaCl2 के साथ मिलाया गया था।0.2 एम CaCl2 चूहे के रक्त मिश्रण के 20 μl को नमूना सतह पर लगाया गया और एक खाली पेट्री डिश में रखा गया।नियंत्रण बिना सीटी के खाली पेट्री डिश में डाला गया रक्त था।0, 3 और 5 मिनट के निश्चित अंतराल पर, थक्के को परेशान किए बिना डिश वाले नमूने में 10 मिलीलीटर विआयनीकृत (डीआई) पानी मिलाकर थक्का जमना बंद करें।अनकोएग्युलेटेड एरिथ्रोसाइट्स (एरिथ्रोसाइट्स) विआयनीकृत पानी की उपस्थिति में हेमोलिसिस से गुजरते हैं और हीमोग्लोबिन छोड़ते हैं।विभिन्न समय बिंदुओं पर हीमोग्लोबिन (HA(t)) को यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके 540 एनएम (λmax हीमोग्लोबिन) पर मापा गया था।10 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में 20 μl रक्त के 0 मिनट में हीमोग्लोबिन (एएच (0)) का पूर्ण अवशोषण एक संदर्भ मानक के रूप में लिया गया था।जमा हुए रक्त के सापेक्ष हीमोग्लोबिन ग्रहण (आरएचए) की गणना रक्त के उसी बैच का उपयोग करके एचए(टी)/एचए(0) अनुपात से की गई थी।
एक बनावट विश्लेषक (टेक्सचर प्रो सीटी वी1.3 बिल्ड 15, ब्रुकफील्ड, यूएसए) का उपयोग करके, क्षतिग्रस्त ऊतक के लिए एनएफआरके के चिपकने वाले गुण निर्धारित किए गए थे।एक खुले तले वाले बेलनाकार बर्तन को सूअर की त्वचा के अंदर (वसा की परत के बिना) दबाएं।सुअर की त्वचा पर आसंजन बनाने के लिए नमूने (Ch NFRCS और Cp NFRCS) को कैनुला के माध्यम से बेलनाकार सांचों में लगाया गया।कमरे के तापमान (आरटी) (25 डिग्री सेल्सियस) पर 3 मिनट के ऊष्मायन के बाद, एनएफआरसीएस चिपकने वाली ताकत 0.5 मिमी/सेकंड की स्थिर दर पर दर्ज की गई।
सर्जिकल सीलेंट की मुख्य विशेषता रक्त की हानि को कम करते हुए रक्त के थक्के को बढ़ाना है।एनएफआरसीएस में दोषरहित जमावट का मूल्यांकन मामूली संशोधनों 19 के साथ पहले प्रकाशित विधि का उपयोग करके किया गया था।सेंट्रीफ्यूज ट्यूब (एक खुले घाव का प्रतिनिधित्व) के एक तरफ 8 × 5 मिमी2 छेद के साथ एक माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब (2 मिली) (आंतरिक व्यास 10 मिमी) बनाएं।एनएफआरसीएस का उपयोग उद्घाटन को बंद करने के लिए किया जाता है और टेप का उपयोग बाहरी किनारों को सील करने के लिए किया जाता है।3.8% सोडियम साइट्रेट प्रीमिक्स युक्त माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 0.2 एम CaCl2 के 20 μl जोड़ें।10 मिनट के बाद, माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूबों को व्यंजनों से हटा दिया गया और एनएफआरके (एन = 3) से रक्त के बहिर्वाह के कारण व्यंजनों के द्रव्यमान में वृद्धि निर्धारित की गई।रक्त हानि Ch NFRCS और Cp NFRCS की तुलना Cs से की गई।
एनएफआरसीएस की गीली अखंडता को मामूली संशोधनों के साथ मिश्रा और चौधरी21 द्वारा वर्णित विधि के आधार पर निर्धारित किया गया था।एनएफआरसीएस को 100 मिली एर्लेनमेयर फ्लास्क में 50 मिली पानी के साथ रखें और बिना शीर्ष बनाए 60 सेकंड तक घुमाएँ।संग्रह के आधार पर भौतिक अखंडता के लिए नमूनों का दृश्य निरीक्षण और प्राथमिकता।
मामूली संशोधनों के साथ पहले प्रकाशित तरीकों का उपयोग करके एचएफएफसी से सीटी की बंधन शक्ति का अध्ययन किया गया था।मिलीक्यू पानी (सीटी) की उपस्थिति में एनएफआरके को ध्वनिक तरंगों (बाहरी उत्तेजना) के संपर्क में लाकर सतह कोटिंग अखंडता का आकलन किया गया था।विकसित एनएफआरसीएस सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस को पानी से भरे बीकर में रखा गया और क्रमशः 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 और 30 मिनट के लिए सोनिकेट किया गया।सुखाने के बाद, एनएफआरसीएस के प्रारंभिक और अंतिम वजन के बीच प्रतिशत अंतर का उपयोग सामग्री के प्रतिशत नुकसान (एचएफएफसी) की गणना के लिए किया गया था।इन विट्रो बीसीटी ने सतह सामग्री की बंधन शक्ति या हानि का समर्थन किया।सीटी से एचएफएफसी बाइंडिंग की दक्षता रक्त जमावट और सीटी 22 की सतह पर एक लोचदार कोटिंग प्रदान करती है।
विकसित एनएफआरसीएस की एकरूपता एनएफआरसीएस के यादृच्छिक रूप से चयनित सामान्य स्थानों से लिए गए नमूनों (30 मिलीग्राम) के बीसीटी द्वारा निर्धारित की गई थी।एनएफआरसीएस अनुपालन निर्धारित करने के लिए पहले उल्लिखित बीसीटी प्रक्रिया का पालन करें।सभी पांच नमूनों के बीच निकटता सीटी जाल में समान सतह कवरेज और एचएफएफसी जमाव सुनिश्चित करती है।
नाममात्र रक्त संपर्क क्षेत्र (एनबीसीए) कुछ संशोधनों के साथ पहले बताए अनुसार निर्धारित किया गया था।सीटी, सीएच एनएफआरसीएस, सीपी एनएफआरसीएस और सीएस की दो सतहों के बीच 20 μl रक्त को क्लैंप करके रक्त को जमा दें।1 घंटे के बाद, स्टेंट के दोनों हिस्सों को अलग किया गया और थक्के के क्षेत्र को मैन्युअल रूप से मापा गया।तीन पुनरावृत्तियों का औसत मान NBCA NFRCS19 माना गया।
बाहरी वातावरण से या जमावट शुरू करने के लिए जिम्मेदार चोट वाली जगह से पानी को अवशोषित करने के लिए एनएफआरसीएस की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए डायनेमिक वेपर सोरेशन (डीवीएस) विश्लेषण का उपयोग किया गया था।डीवीएस ±0.1 माइक्रोग्राम के द्रव्यमान रिज़ॉल्यूशन के साथ एक अति-संवेदनशील संतुलन का उपयोग करके गुरुत्वाकर्षण रूप से नमूने में वाष्प ग्रहण और हानि का मूल्यांकन या रिकॉर्ड करता है।संतृप्त और शुष्क वाहक गैसों को मिलाकर नमूने के चारों ओर एक इलेक्ट्रॉनिक द्रव्यमान प्रवाह नियंत्रक द्वारा आंशिक वाष्प दबाव (सापेक्षिक आर्द्रता) उत्पन्न किया जाता है। यूरोपीय फार्माकोपिया दिशानिर्देशों के अनुसार, नमूनों द्वारा नमी ग्रहण करने के प्रतिशत के आधार पर, नमूनों को 4 श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया था (0-0.012% w/w- गैर-हीड्रोस्कोपिक, 0.2-2% w/w थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, 2-15% मध्यम हीड्रोस्कोपिक, और > 15% बहुत हीड्रोस्कोपिक)23। यूरोपीय फार्माकोपिया दिशानिर्देशों के अनुसार, नमूनों द्वारा ग्रहण की गई नमी के प्रतिशत के आधार पर, नमूनों को 4 श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया था (0-0.012% w/w- गैर-हीड्रोस्कोपिक, 0.2-2% w/w थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, 2-15% मध्यम हीड्रोस्कोपिक, और > 15% बहुत हीड्रोस्कोपिक)23।यूरोपीय फार्माकोपिया की सिफारिशों के अनुसार, नमूनों द्वारा नमी अवशोषण के प्रतिशत के आधार पर, नमूनों को 4 श्रेणियों में विभाजित किया गया था (0-0.012% w/w - गैर-हीड्रोस्कोपिक, 0.2-2% w/w थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, 2- पंद्रह%)।% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % मध्यम रूप से हीड्रोस्कोपिक और > 15% बहुत ही हीड्रोस्कोपिक)23.अधिकतम मूल्य निर्धारण, अधिकतम मूल्य निर्धारण, 4 प्रतिशत (0-0.012% w/w- 0.2-2% w /w भुगतान शुल्क, 2-15 % प्रतिशत शुल्क,> 15% प्रतिशत शुल्क）23。，（（0-0.012% W/w- 吸湿 性 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 % 非常吸湿）23。यूरोपीय फार्माकोपिया की सिफारिशों के अनुसार, नमूनों को नमूने द्वारा अवशोषित नमी के प्रतिशत के आधार पर 4 वर्गों में विभाजित किया जाता है (वजन के अनुसार 0-0.012% - गैर-हीड्रोस्कोपिक, वजन के अनुसार 0.2-2% थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, वजन के अनुसार 2-15%)।% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % मध्यम हीड्रोस्कोपिक, > 15% बहुत हीड्रोस्कोपिक) 23.एनएफसीएस एक्स एनएफसीएस और टीएसएन एनएफसीएस की हीड्रोस्कोपिक दक्षता एक विश्लेषक डीवीएस टीए टीजीए क्यू5000 एसए पर निर्धारित की गई थी।इस प्रक्रिया के दौरान, रन टाइम, सापेक्ष आर्द्रता (आरएच), और 25°C24 पर वास्तविक समय नमूना वजन प्राप्त किया गया था।नमी की मात्रा की गणना निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके सटीक एनएफआरसीएस द्रव्यमान विश्लेषण द्वारा की जाती है:
एमसी एनएफआरसीएस आर्द्रता है।एम1 - एनएसएआईडी का शुष्क भार।एम2 किसी दिए गए आरएच पर वास्तविक समय एनएफआरसीएस द्रव्यमान है।
10 घंटे (<7 × 10-3 टोर) के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर नमूनों को खाली करने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखना प्रयोग का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया था। 10 घंटे (<7 × 10-3 टोर) के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर नमूनों को खाली करने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखना प्रयोग का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया था। Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбц ии азота жидким азотом после опорожнения при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10 –3 Торр). कुल सतह क्षेत्र का अनुमान तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखने के प्रयोग का उपयोग करके लगाया गया था, जब नमूनों को 10 घंटे (<7 × 10-3 टोर) के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर खाली कर दिया गया था।25°C तापमान 10 डिग्री सेल्सियस (<7 × 10-3 Torr），使用液氮的氮吸附实验估计总表面积。)25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов п о адсорбции азота жидким азотом опорожнения образцов в течение 10 часов तापमान 25°C (<7 × 10-3 торр). 25°C (<7 x 10-3 torr) पर 10 घंटे के लिए नमूनों को खाली करने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखना प्रयोगों का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया था।कुल सतह क्षेत्र, छिद्र की मात्रा और एनएफआरसीएस छिद्र का आकार आरएस 232 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके नोवा 1000e, ऑस्ट्रिया से क्वांटाक्रोम के साथ निर्धारित किया गया था।
पूरे रक्त से 5% आरबीसी (पतला के रूप में खारा) तैयार करें।फिर एचएफएफसी (0.25 मिली) के एक अंश को 96-वेल प्लेट और 5% आरबीसी द्रव्यमान (0.1 मिली) में स्थानांतरित करें।मिश्रण को 37°C पर 40 मिनट तक सेते रहें।लाल रक्त कोशिकाओं और सीरम के मिश्रण को सकारात्मक नियंत्रण माना जाता था, और खारा और लाल रक्त कोशिकाओं के मिश्रण को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में माना जाता था।हेमाग्लगुटिनेशन का निर्धारण स्टैजिट्ज़की पैमाने के अनुसार किया गया था।प्रस्तावित पैमाने इस प्रकार हैं: + + + + घने दानेदार समुच्चय;+ + + घुमावदार किनारों के साथ चिकने तली पैड;+ + फटे किनारों के साथ चिकने तली पैड;+ चिकने पैड के किनारों के चारों ओर संकीर्ण लाल छल्ले;- (नकारात्मक) निचले कुएं के केंद्र में अलग लाल बटन 12।
एनएफआरसीएस की हेमोकम्पैटिबिलिटी का अध्ययन अंतर्राष्ट्रीय मानकीकरण संगठन (आईएसओ) (आईएसओ10993-4, 1999)26,27 की विधि के अनुसार किया गया था।सिंह एट अल द्वारा वर्णित ग्रेविमेट्रिक विधि।एनएफआरसीएस की उपस्थिति में या उसकी सतह पर थ्रोम्बस गठन का आकलन करने के लिए मामूली संशोधन किए गए थे।500 मिलीग्राम सीएस, सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस को फॉस्फेट बफर्ड सेलाइन (पीबीएस) में 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था।24 घंटों के बाद, पीबीएस को हटा दिया गया और एनएफआरसीएस को 3.8% सोडियम साइट्रेट युक्त 2 मिलीलीटर रक्त के साथ इलाज किया गया।एनएफआरसीएस की सतह पर, इनक्यूबेटेड नमूनों में 0.1 एम CaCl2 का 0.04 मिलीलीटर जोड़ें।45 मिनट के बाद, जमावट को रोकने के लिए 5 मिलीलीटर आसुत जल मिलाया गया।एनएफआरके की सतह पर जमा हुए रक्त को 36-38% फॉर्मेल्डिहाइड घोल से उपचारित किया गया।फॉर्मेल्डिहाइड से तय किए गए थक्कों को सुखाया गया और तौला गया।रक्त और नमूने के बिना गिलास (नकारात्मक नियंत्रण) और रक्त वाले गिलास (सकारात्मक नियंत्रण) के वजन की गणना करके घनास्त्रता के प्रतिशत का अनुमान लगाया गया था।
प्रारंभिक पुष्टि के रूप में, एचएफएफसी सतह कोटिंग, सीटी इंटरकनेक्टेड और सीटी नेटवर्क की छिद्र बनाने की क्षमता को समझने के लिए नमूनों को एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया था।एनएफआरसीएस से Ch और Cp के पतले खंडों को स्केलपेल ब्लेड से काटा गया था।परिणामी अनुभाग को एक ग्लास स्लाइड पर रखा गया था, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया गया था, और किनारों को गोंद के साथ तय किया गया था।तैयार स्लाइडों को एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के नीचे देखा गया और विभिन्न आवर्धन पर तस्वीरें ली गईं।
राइस एट अल.29 द्वारा वर्णित विधि के आधार पर प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके सीटी नेटवर्क में पॉलिमर जमाव की कल्पना की गई थी। फॉर्मूलेशन के लिए उपयोग की जाने वाली एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिलाया गया था, और एनएफआरसीएस (सीएच एंड सीपी) पहले उल्लिखित विधि के अनुसार तैयार किया गया था। फॉर्मूलेशन के लिए उपयोग की जाने वाली एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिलाया गया था, और एनएफआरसीएस (सीएच एंड सीपी) पहले उल्लिखित विधि के अनुसार तैयार किया गया था।फॉर्मूलेशन के लिए उपयोग की जाने वाली एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिलाया गया था और एनएफआरसीएस (सीएच और सीपी) पहले उल्लिखित विधि के अनुसार प्राप्त किया गया था।एचएफएफसी को एनएफआरसीएस (सीएच एंड सीपी) की जांच करने के लिए कहा जाता है।एचएफएफसी को एनएफआरसीएस (सीएच एंड सीपी) की जांच करने के लिए कहा जाता है।फॉर्मूलेशन में प्रयुक्त एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिलाया गया था और एनएफआरसीएस (सीएच और सीपी) प्राप्त किया गया था, जैसा कि पहले उल्लेख किया गया है।प्राप्त नमूनों से एनएफआरके के पतले खंड काटे गए, कांच की स्लाइडों पर रखे गए, और कवर स्लिप से ढक दिए गए।हरे फिल्टर (310-380 एनएम) का उपयोग करके फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत तैयार स्लाइडों का निरीक्षण करें।सीटी नेटवर्क में सीटी संबंधों और अतिरिक्त पॉलिमर जमाव को समझने के लिए छवियों को 4x आवर्धन पर लिया गया था।
एनएफआरसीएस सीएच और सीपी की सतह स्थलाकृति को टैपिंग मोड में एक अल्ट्रा-शार्प टीईएसपी ब्रैकट के साथ परमाणु बल माइक्रोस्कोप (एएफएम) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था: 42 एन/एम, 320 किलोहर्ट्ज़, आरओसी 2-5 एनएम, ब्रुकर, ताइवान।सतह का खुरदरापन सॉफ्टवेयर (स्कैनिंग प्रोब इमेज प्रोसेसर) का उपयोग करके रूट माध्य वर्ग (आरएमएस) द्वारा निर्धारित किया गया था।सतह की एकरूपता की जांच के लिए विभिन्न एनएफआरसीएस स्थानों को 3डी छवियों पर प्रस्तुत किया गया।किसी दिए गए क्षेत्र के लिए स्कोर के मानक विचलन को सतह खुरदरापन के रूप में परिभाषित किया गया है।RMS समीकरण का उपयोग NFRCS31 की सतह खुरदरापन को मापने के लिए किया गया था।
Ch NFRCS और Cp NFRCS की सतह आकृति विज्ञान को समझने के लिए FESEM, SU8000, HI-0876-0003, हिताची, टोक्यो का उपयोग करके FESEM-आधारित अध्ययन किए गए, जिसमें Cm NFRCS की तुलना में बेहतर BCT दिखाया गया।FESEM अध्ययन झाओ एट अल द्वारा वर्णित विधि के अनुसार किया गया था।32 मामूली संशोधनों के साथ।एनएफआरसीएस 20 से 30 मिलीग्राम सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस को चूहे के खून के साथ 3.8% सोडियम साइट्रेट के 20 μl के साथ प्रीमिक्स किया गया था।जमावट शुरू करने के लिए रक्त-उपचारित नमूनों में 0.2 एम CaCl2 का 20 μl जोड़ा गया था और नमूनों को 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रखा गया था।इसके अलावा, अतिरिक्त एरिथ्रोसाइट्स को खारे पानी से धोकर एनएफआरसीएस सतह से हटा दिया गया था।
बाद के नमूनों को 0.1% ग्लूटाराल्डिहाइड के साथ उपचारित किया गया और फिर नमी को हटाने के लिए 37°C पर गर्म हवा वाले ओवन में सुखाया गया।सूखे नमूनों को लेपित किया गया और 32 का विश्लेषण किया गया।विश्लेषण के दौरान प्राप्त अन्य छवियां व्यक्तिगत कपास फाइबर की सतह पर क्लॉट गठन, सीटी, एरिथ्रोसाइट मॉर्फोलॉजी (आकार), क्लॉट अखंडता, और एनएफआरसीएस की उपस्थिति में एरिथ्रोसाइट मॉर्फोलॉजी के बीच पॉलिमर जमाव थीं।अनुपचारित एनएफआरसीएस क्षेत्रों और सीएच और सीपी उपचारित एनएफआरसीएस क्षेत्रों को रक्त से ऊष्मायन करके मौलिक आयनों (सोडियम, पोटेशियम, नाइट्रोजन, कैल्शियम, मैग्नीशियम, जस्ता, तांबा और सेलेनियम)33 के लिए स्कैन किया गया था।थक्का निर्माण और थक्का समरूपता के दौरान मौलिक आयन संचय को समझने के लिए उपचारित और अनुपचारित नमूनों के बीच मौलिक आयन प्रतिशत की तुलना करें।
सीटी सतह पर सीपी एचएफएफसी सतह कोटिंग की मोटाई FESEM का उपयोग करके निर्धारित की गई थी।सीपी एनएफआरसीएस के क्रॉस सेक्शन को ढांचे से काट दिया गया और स्पटर लेपित किया गया।परिणामी स्पटर कोटिंग नमूनों को FESEM द्वारा देखा गया और सतह कोटिंग की मोटाई 34, 35, 36 मापी गई।
एक्स-रे माइक्रो-सीटी उच्च-रिज़ॉल्यूशन 3डी गैर-विनाशकारी इमेजिंग प्रदान करता है और आपको एनएफआरके की आंतरिक संरचनात्मक व्यवस्था का अध्ययन करने की अनुमति देता है।माइक्रो-सीटी नमूने में एक्स-रे के स्थानीय रैखिक क्षीणन गुणांक को रिकॉर्ड करने के लिए नमूने से गुजरने वाले एक्स-रे बीम का उपयोग करता है, जो रूपात्मक जानकारी प्राप्त करने में मदद करता है।सीपी एनएफआरसीएस और रक्त-उपचारित सीपी एनएफआरसीएस में सीटी के आंतरिक स्थान की जांच एनएफआरसीएस37,38,39 की उपस्थिति में अवशोषण दक्षता और रक्त के थक्के को समझने के लिए माइक्रो-सीटी द्वारा की गई थी।रक्त-उपचारित और अनुपचारित सीपी एनएफआरसीएस नमूनों की 3डी संरचनाओं को माइक्रो-सीटी (वी|टोम|एक्स एस240, फीनिक्स, जर्मनी) का उपयोग करके पुनर्निर्मित किया गया था।वीजी स्टूडियो-मैक्स सॉफ्टवेयर संस्करण 2.2 का उपयोग करते हुए, एनएफआरसीएस के लिए 3डी छवियां विकसित करने के लिए विभिन्न कोणों (आदर्श रूप से 360° कवरेज) से कई एक्स-रे छवियां ली गईं।एकत्रित प्रक्षेपण डेटा को संबंधित सरल 3डी स्कैनआईपी अकादमिक सॉफ्टवेयर का उपयोग करके 3डी वॉल्यूमेट्रिक छवियों में पुनर्निर्मित किया गया था।
इसके अलावा, थक्के के वितरण को समझने के लिए, रक्त का थक्का जमने के लिए एनएफआरसीएस में प्रीमिक्स्ड साइट्रेटेड रक्त के 20 μl और 0.2 M CaCl2 के 20 μl को जोड़ा गया था।तैयार नमूनों को सख्त होने के लिए छोड़ दिया जाता है।एनएफआरके सतह को 0.5% ग्लूटाराल्डिहाइड से उपचारित किया गया और 30 मिनट के लिए 30-40 डिग्री सेल्सियस पर गर्म हवा वाले ओवन में सुखाया गया।एनएफआरसीएस पर बने रक्त के थक्के को स्कैन किया गया, पुनर्निर्माण किया गया और रक्त के थक्के की एक 3डी छवि देखी गई।
मामूली संशोधनों के साथ पहले वर्णित विधि का उपयोग करके सीपी एनएफआरसीएस (सीएच एनएफआरसीएस की तुलना में सबसे अच्छा) पर जीवाणुरोधी परीक्षण किए गए थे।सीपी एनएफआरसीएस और सीपी एचएफएफसी की जीवाणुरोधी गतिविधि एक इनक्यूबेटर में पेट्री डिश में अगर पर उगने वाले तीन अलग-अलग परीक्षण सूक्ष्मजीवों [एस.ऑरियस (ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया), ई.कोली (ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया) और सफेद कैंडिडा (सी.एल्बिकन्स)] का उपयोग करके निर्धारित की गई थी।अगर माध्यम पर 105-106 सीएफयू एमएल-1 की सांद्रता पर पतला बैक्टीरियल कल्चर सस्पेंशन के 50 मिलीलीटर को समान रूप से टीका लगाएं।मीडियम को पेट्री डिश में डालें और जमने दें।एचएफएफसी (एचएफएफसी के लिए 3 कुएं और नकारात्मक नियंत्रण के लिए 1) से भरने के लिए अगर प्लेट की सतह पर कुएं बनाए गए थे।3 कुओं में 200 μl एचएफएफसी और चौथे कुएं में 200 μl पीएच 7.4 पीबीएस जोड़ें।पेट्री डिश के दूसरी तरफ, ठोस एगर पर 12 मिमी सीपी एनएफआरसीएस डिस्क रखें और पीबीएस (पीएच 7.4) से गीला करें।सिप्रोफ्लोक्सासिन, एम्पीसिलीन और फ्लुकोनाज़ोल गोलियों को स्टैफिलोकोकस ऑरियस, एस्चेरिचिया कोली और कैंडिडा अल्बिकन्स के लिए संदर्भ मानक माना जाता है।अवरोध क्षेत्र को मैन्युअल रूप से मापें और अवरोध क्षेत्र की एक डिजिटल छवि लें।
संस्थागत नैतिक अनुमोदन के बाद, अध्ययन दक्षिण भारत में कर्नाटक के मणिपाल में कस्तूरबा मेडिकल कॉलेज ऑफ एजुकेशन एंड रिसर्च में आयोजित किया गया था।इन विट्रो टीईजी प्रायोगिक प्रोटोकॉल की समीक्षा और अनुमोदन कस्तूरबा मेडिकल कॉलेज, मणिपाल, कर्नाटक की संस्थागत आचार समिति (आईईसी: 674/2020) द्वारा किया गया है।अस्पताल के ब्लड बैंक से स्वयंसेवक रक्त दाताओं (18 से 55 वर्ष की आयु) में से विषयों को भर्ती किया गया था।इसके अलावा, रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए स्वयंसेवकों से एक सूचित सहमति प्रपत्र प्राप्त किया गया था।सोडियम साइट्रेट के साथ मिश्रित संपूर्ण रक्त पर सीपी एचएफएफसी फॉर्मूलेशन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए नेटिव टीईजी (एन-टीईजी) का उपयोग किया गया था।एन-टीईजी को प्वाइंट-ऑफ-केयर पुनर्जीवन में अपनी भूमिका के लिए व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त है, जो परिणामों (नियमित जमावट परीक्षण) में नैदानिक ​​​​रूप से महत्वपूर्ण देरी की संभावना के कारण चिकित्सकों के लिए समस्याएं पैदा करता है।संपूर्ण रक्त का उपयोग करके एन-टीईजी विश्लेषण किया गया।सभी प्रतिभागियों से सूचित सहमति और विस्तृत चिकित्सा इतिहास प्राप्त किया गया।अध्ययन में गर्भावस्था/प्रसवोत्तर या यकृत रोग जैसी हेमोस्टैटिक या थ्रोम्बोटिक जटिलताओं वाले प्रतिभागियों को शामिल नहीं किया गया।जमावट कैस्केड को प्रभावित करने वाली दवाएं लेने वाले विषयों को भी अध्ययन से बाहर रखा गया था।मानक प्रक्रियाओं के अनुसार सभी प्रतिभागियों पर बुनियादी प्रयोगशाला परीक्षण (हीमोग्लोबिन, प्रोथ्रोम्बिन समय, सक्रिय थ्रोम्बोप्लास्टिन और प्लेटलेट काउंट) किए गए।एन-टीईजी रक्त के थक्के की चिपचिपाहट, प्रारंभिक थक्के की संरचना, कणों की परस्पर क्रिया, थक्के को मजबूत करने और थक्के के लसीका को निर्धारित करता है।एन-टीईजी विश्लेषण कई सेलुलर तत्वों और प्लाज्मा के सामूहिक प्रभावों पर ग्राफिकल और संख्यात्मक डेटा प्रदान करता है।एन-टीईजी विश्लेषण सीपी एचएफएफसी (10 μl और 50 μl) के दो अलग-अलग संस्करणों पर किया गया था।परिणामस्वरूप, साइट्रिक एसिड के साथ संपूर्ण रक्त का 1 मिलीलीटर सीपी एचएफएफसी के 10 μl में जोड़ा गया था।20 μl 0.2 M CaCl2 युक्त TEG डिश में 1 मिली (सीपी एचएफएफसी + साइट्रेट रक्त), 340 μl मिश्रित रक्त मिलाएं।इसके बाद, Cp HFFC41 की उपस्थिति में R, K, अल्फा कोण, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% रक्त नमूनों को मापने के लिए TEG डिश को TEG® 5000, US में लोड किया गया।
इन विवो अध्ययन प्रोटोकॉल की समीक्षा और अनुमोदन संस्थागत पशु आचार समिति (IAEC), कस्तूरबा स्कूल ऑफ मेडिसिन, मणिपाल इंस्टीट्यूट ऑफ हायर एजुकेशन, मणिपाल (IAEC/KMC/69/2020) द्वारा किया गया था।सभी पशु प्रयोग पशु प्रयोग नियंत्रण और पर्यवेक्षण समिति (सीपीसीएसईए) की सिफारिशों के अनुसार किए गए थे।सभी विवो एनएफआरसीएस अध्ययन (2 × 2 सेमी 2) मादा विस्टार चूहों (200 से 250 ग्राम वजन) पर किए गए थे।सभी जानवरों को 24-26 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अनुकूलित किया गया था, जानवरों को मानक भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच थी।सभी जानवरों को यादृच्छिक रूप से अलग-अलग समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में तीन जानवर शामिल थे।सभी अध्ययन पशु अध्ययन के अनुसार किए गए: इन विवो प्रयोगों की रिपोर्ट 43।अध्ययन से पहले, जानवरों को 20-50 मिलीग्राम केटामाइन (शरीर के वजन के प्रति 1 किलो) और 2-10 मिलीग्राम जाइलाज़िन (शरीर के वजन के 1 किलो) के मिश्रण के इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) प्रशासन द्वारा संवेदनाहारी किया गया था।अध्ययन के बाद, नमूनों के प्रारंभिक और अंतिम वजन के बीच अंतर का मूल्यांकन करके रक्तस्राव की मात्रा की गणना की गई, तीन परीक्षणों से प्राप्त औसत मूल्य को नमूने की रक्तस्राव की मात्रा के रूप में लिया गया।
आघात, युद्ध या यातायात दुर्घटना (चोट मॉडल) में रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए एनएफआरसीएस की क्षमता को समझने के लिए चूहे की पूंछ विच्छेदन मॉडल लागू किया गया था।सामान्य रक्तस्राव सुनिश्चित करने के लिए स्केलपेल ब्लेड से पूंछ का 50% हिस्सा काट लें और 15 सेकंड के लिए हवा में रखें।इसके अलावा, दबाव (सीटी, सीएस, सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस) लगाकर चूहे की पूंछ पर परीक्षण नमूने रखे गए।परीक्षण नमूनों के लिए रक्तस्राव और पीसीटी की सूचना दी गई (एन = 3)17,45।
युद्ध में एनएफआरसीएस दबाव नियंत्रण की प्रभावशीलता की जांच सतही ऊरु धमनी के एक मॉडल पर की गई थी।ऊरु धमनी उजागर हो जाती है, 24G ट्रोकार से छेद हो जाती है, और 15 सेकंड के भीतर खून बह जाता है।अनियंत्रित रक्तस्राव देखे जाने के बाद, परीक्षण नमूने को दबाव डालकर पंचर स्थल पर रखा जाता है।परीक्षण नमूना लगाने के तुरंत बाद, थक्के बनने का समय दर्ज किया गया और अगले 5 मिनट तक हेमोस्टैटिक दक्षता देखी गई।Cs और Ct46 के साथ भी यही प्रक्रिया दोहराई गई।
डाउलिंग एट अल.47 ने इंट्राऑपरेटिव रक्तस्राव के संदर्भ में हेमोस्टैटिक सामग्री की हेमोस्टैटिक क्षमता का आकलन करने के लिए एक यकृत चोट मॉडल का प्रस्ताव दिया।बीसीटी को सीटी नमूनों (नकारात्मक नियंत्रण), सीएस फ्रेमवर्क (सकारात्मक नियंत्रण), सीएच एनएफआरसीएस नमूनों और सीपी एनएफआरसीएस नमूनों के लिए दर्ज किया गया था।मीडियन लैपरोटॉमी करके चूहे के सुप्राहेपेटिक वेना कावा को उजागर किया गया।उसके बाद, बाएं लोब के बाहर के हिस्से को कैंची से काट दिया गया।स्केलपेल ब्लेड से लीवर में चीरा लगाएं और कुछ सेकंड के लिए खून बहने दें।सटीक रूप से तौले गए Ch NFRCS और Cp NFRCS परीक्षण नमूनों को बिना किसी सकारात्मक दबाव के क्षतिग्रस्त सतह पर रखा गया और BCT दर्ज किया गया।इसके बाद नियंत्रण समूह (सीटी) ने बिना किसी चोट के सीएस 30 एस47 द्वारा दबाव डाला।
विकसित पॉलिमर-आधारित एनएफआरसीएस के घाव भरने वाले गुणों का मूल्यांकन करने के लिए विवो घाव भरने वाले परीक्षणों को एक एक्सिशनल घाव मॉडल का उपयोग करके किया गया था।मामूली संशोधनों 19,32,48 के साथ पहले प्रकाशित तरीकों के अनुसार बाहरी घावों के मॉडल का चयन और प्रदर्शन किया गया।जैसा कि पहले बताया गया है, सभी जानवरों को बेहोश किया गया।पीठ की त्वचा में गोलाकार गहरा चीरा लगाने के लिए बायोप्सी पंच (12 मिमी) का उपयोग करें।तैयार घाव स्थलों पर सीएस (सकारात्मक नियंत्रण), सीटी (यह पहचानते हुए कि कॉटन पैड उपचार में बाधा डालते हैं), सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस (प्रायोगिक समूह) और बिना किसी उपचार के एक नकारात्मक नियंत्रण लगाया गया था।अध्ययन के प्रत्येक दिन, सभी चूहों में घाव का क्षेत्र मापा गया।घाव वाले क्षेत्र की तस्वीर लेने और नई ड्रेसिंग लगाने के लिए डिजिटल कैमरे का उपयोग करें।घाव बंद होने का प्रतिशत निम्नलिखित सूत्र द्वारा मापा गया था:
अध्ययन के 12वें दिन घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर, सबसे अच्छे समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) की चूहे की त्वचा को निकाला गया और एच एंड ई स्टेनिंग और मैसन के ट्राइक्रोम स्टेनिंग द्वारा अध्ययन किया गया। अध्ययन के 12वें दिन घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर, सबसे अच्छे समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) की चूहे की त्वचा को निकाला गया और एच एंड ई स्टेनिंग और मैसन के ट्राइक्रोम स्टेनिंग द्वारा अध्ययन किया गया।अध्ययन के 12वें दिन घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर, सर्वश्रेष्ठ समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) के चूहों की त्वचा को हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन और मैसन ट्राइक्रोम से रंगकर जांचा गया।12 साल की उम्र में एक बार फिर से काम करना शुरू कर देता है, एक बार फिर से ((सीपी एनएफआरसीएस) और एक साल बाद) वापस आ जाता है, एच एंड ई के बारे में पता चलता है और मास बेटे का सपना पूरा हो गया है।12 साल की उम्र में एक बार फिर से काम करना शुरू कर देता है, एक बार फिर से काम करता है ((सीपी एनएफआरसीएस) और एक नया रिकॉर्ड) जो कि एच एंड ई के बारे में बताता है।眳组）अध्ययन के 12वें दिन प्रतिशत घाव बंद होने के आधार पर सर्वोत्तम समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) के चूहों को हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन धुंधलापन और मैसन ट्राइक्रोम धुंधलापन के लिए एक्साइज किया गया।कार्यान्वित धुंधला प्रक्रिया पहले वर्णित विधियों49,50 अनुसार की गई थी।संक्षेप में, 10% फॉर्मेलिन में निर्धारण के बाद, नमूनों को वर्गीकृत अल्कोहल की एक श्रृंखला का उपयोग करके निर्जलित किया गया था।एक्साइज टिश्यू के पतले खंड (5 माइक्रोन मोटे) प्राप्त करने के लिए माइक्रोटोम का उपयोग करें।हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए नियंत्रण और सीपी एनएफआरसीएस के पतले धारावाहिक खंडों को हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन के साथ इलाज किया गया था।कोलेजन फाइब्रिल के गठन का पता लगाने के लिए मैसन के ट्राइक्रोम दाग का उपयोग किया गया था।प्राप्त परिणामों का रोगविज्ञानियों द्वारा आँख बंद करके अध्ययन किया गया।
सीपी एनएफआरसीएस नमूनों की स्थिरता का अध्ययन 12 महीने51 तक कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस ± 2 डिग्री सेल्सियस/60% आरएच ± 5%) पर किया गया।सीपी एनएफआरसीएस (सतह मलिनकिरण और माइक्रोबियल विकास) का सामग्री और विधियों अनुभाग में उल्लिखित उपरोक्त तरीकों के अनुसार गुना पहनने के प्रतिरोध और बीसीटी के लिए दृश्य निरीक्षण और परीक्षण किया गया था।
15×15 सेमी2 के आकार के साथ सीपी एनएफआरसीएस तैयार करके सीपी एनएफआरसीएस की मापनीयता और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता की जांच की गई।इसके अलावा, 30 मिलीग्राम नमूने (एन = 5) विभिन्न सीपी एनएफआरसीएस अंशों से निकाले गए थे और अध्ययन किए गए नमूनों के बीसीटी का मूल्यांकन पहले तरीके अनुभाग में वर्णित किया गया था।
हमने विभिन्न बायोमेडिकल अनुप्रयोगों के लिए सीपी एनएफआरसीएस रचनाओं का उपयोग करके विभिन्न आकार और संरचनाएं विकसित करने का प्रयास किया है।इस तरह के आकार या विन्यास में नाक से खून बहने, दंत प्रक्रियाओं के लिए शंक्वाकार स्वैब और योनि से रक्तस्राव के लिए बेलनाकार स्वैब शामिल हैं।
सभी डेटा सेटों को माध्य ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किया गया है और एनोवा द्वारा प्रिज्म 5.03 (ग्राफपैड, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके विश्लेषण किया गया, जिसके बाद बोनफेरोनी के कई तुलना परीक्षण (* पी <0.05) किए गए।
मानव अध्ययन में निष्पादित सभी प्रक्रियाएं संस्थान और राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद के मानकों के साथ-साथ हेलसिंकी 1964 की घोषणा और उसके बाद के संशोधनों, या समान नैतिक मानकों के अनुसार थीं।सभी प्रतिभागियों को अध्ययन की विशेषताओं और इसकी स्वैच्छिक प्रकृति के बारे में सूचित किया गया।एक बार एकत्र किए जाने के बाद प्रतिभागी डेटा गोपनीय रहता है।इन विट्रो टीईजी प्रायोगिक प्रोटोकॉल की समीक्षा और अनुमोदन कस्तूरबा मेडिकल कॉलेज, मणिपाल, कर्नाटक की संस्थागत आचार समिति (आईईसी: 674/2020) द्वारा किया गया है।स्वयंसेवकों ने रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए सूचित सहमति पर हस्ताक्षर किए।
पशु अध्ययन में की गई सभी प्रक्रियाएं कस्तुबा मेडिसिन संकाय, मणिपाल इंस्टीट्यूट ऑफ हायर एजुकेशन, मणिपाल (IAEC/KMC/69/2020) के अनुसार की गईं।डिज़ाइन किए गए सभी पशु प्रयोग पशु प्रयोग नियंत्रण और पर्यवेक्षण समिति (सीपीसीएसईए) के दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित किए गए थे।सभी लेखक ARRIVE दिशानिर्देशों का पालन करते हैं।
सभी एनएफआरसीएस के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा का विश्लेषण किया गया और चित्र 2ए में दिखाए गए चिटोसन स्पेक्ट्रम के साथ तुलना की गई।3437 सेमी-1 (ओएच और एनएच स्ट्रेचिंग, ओवरलैप), 2945 और 2897 सेमी-1 (सीएच स्ट्रेचिंग), 1660 सेमी-1 (एनएच2 स्ट्रेन), 1589 सेमी-1 (एन-एच झुकना), 1157 सेमी-1 (ब्रिज स्ट्रेच ओ-), 1067 सेमी-1 (स्ट्रेच सी-ओ, सेकेंडरी हाइड्रॉक्सिल), 993 पर चिटोसन (दर्ज) की विशेषता वर्णक्रमीय चोटियाँ सेमी-1 (खिंचाव CO, Bo-OH) 52.53.54।अनुपूरक तालिका S1 चिटोसन (रिपोर्टर), शुद्ध चिटोसन, सीएम, सीएच और सीपी के लिए एफटीआईआर एनएफआरसीएस अवशोषण स्पेक्ट्रम मान दिखाती है।सभी एनएफआरसीएस (सीएम, सीएच और सीपी) के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा ने बिना किसी महत्वपूर्ण बदलाव के शुद्ध चिटोसन के समान विशेषता अवशोषण बैंड दिखाए (छवि 2 ए)।एफटीआईआर परिणामों ने एनएफआरसीएस को विकसित करने के लिए उपयोग किए गए पॉलिमर के बीच रासायनिक या भौतिक इंटरैक्शन की अनुपस्थिति की पुष्टि की, यह दर्शाता है कि उपयोग किए गए पॉलिमर निष्क्रिय हैं।
सीएम एनएफआरसीएस, सीएच एनएफआरसीएस, सीपी एनएफआरसीएस और सीएस का इन विट्रो लक्षण वर्णन।(ए) संपीड़न के तहत चिटोसन और सीएम एनएफआरसीएस, सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस की रचनाओं के संयुक्त एफटीआईआर स्पेक्ट्रा का प्रतिनिधित्व करता है।(बी) ए) एनएफआरसीएस सेमी, सीएच, सीपी, और सीजी (एन = 3) की संपूर्ण रक्त ग्रहण दर;सीटी नमूनों में उच्च बार दिखाया गया क्योंकि कपास झाड़ू में उच्च अवशोषण क्षमता होती है;ख) रक्त अवशोषण के बाद रक्त अवशोषित नमूने का चित्रण।परीक्षण नमूना सी के बीसीटी का चित्रमय प्रतिनिधित्व (सीपी एनएफआरसीएस में सबसे अच्छा बीसीटी (15 एस, एन = 3) था)। C, D, E, और G में डेटा को माध्य ± SD के रूप में दिखाया गया था, और त्रुटि पट्टियाँ SD, ***p < 0.0001 का प्रतिनिधित्व करती हैं। C, D, E, और G में डेटा को माध्य ± SD के रूप में दिखाया गया था, और त्रुटि पट्टियाँ SD, ***p < 0.0001 का प्रतिनिधित्व करती हैं। सी, डी, ई और जी पर क्लिक करें और पढ़ें ки погрешностей представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. C, D, E, और G में डेटा को माध्य ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत किया जाता है, और त्रुटि पट्टियाँ मानक विचलन, ***p<0.0001 का प्रतिनिधित्व करती हैं। C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD, 误差线代表SD,***p < 0.0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD, 误差线代表SD,***p < 0.0001。 सी, डी, ई और जी में शामिल होने के लिए आपको एक निश्चित राशि प्राप्त करने की आवश्यकता है। ланки погрешностей представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. C, D, E, और G में डेटा को माध्य ± मानक विचलन के रूप में दिखाया गया है, त्रुटि पट्टियाँ मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती हैं, ***p<0.0001।